一种治疗蜜蜂真菌病的制剂组方及其制备方法、应用方法
阅读说明：本技术 一种治疗蜜蜂真菌病的制剂组方及其制备方法、应用方法 (Preparation formula for treating bee mycosis and preparation method and application method thereof ) 是由 张魁 侯丽娜 李大威 高见红 于 2021-10-15 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种治疗蜜蜂真菌病的制剂组方及其制备方法、应用方法,属于中药制剂技术领域,包括如下步骤：(1)低温真空干燥处理；(2)原料称取；(3)初步浸提；(4)电晕-火焰交替处理；(5)二次浸提；(6)成品制备。本申请将茯苓、苦参、金银花等按照合适的比例进行搭配,与现代生物、物理化学提取技术结合起来,以促进各原料中活性成分充分的溶出,并形成独特的配伍,最终制备的制剂绿色安全,对蜜蜂真菌病具有很好的治疗效果。(The invention discloses a preparation formula for treating bee mycosis, a preparation method and an application method thereof, belonging to the technical field of traditional Chinese medicine preparations and comprising the following steps: (1) carrying out low-temperature vacuum drying treatment; (2) weighing raw materials; (3) primary leaching; (4) performing corona-flame alternate treatment; (5) secondary leaching; (6) and (5) preparing a finished product. According to the application, the poria cocos, the radix sophorae flavescentis, the honeysuckle and the like are matched according to a proper proportion, and are combined with modern biological and physical-chemical extraction technologies, so that active ingredients in the raw materials are fully dissolved out, unique compatibility is formed, and the finally prepared preparation is green and safe and has a good treatment effect on bee mycosis.)
技术领域
本发明属于中药制剂技术领域，具体涉及一种治疗蜜蜂真菌病的制剂组方及其制备方法、应用方法。
背景技术
蜜蜂真菌病主要包括“白垩病”及真菌爬蜂病，其中，“白垩病”又称“石灰质”病，是由蜜蜂球囊菌引起，该菌属真菌子囊纲、不整子囊菌亚纲、球囊菌目、球囊菌科、球囊菌属。“白垩病”主要危害蜜蜂幼虫，是实际养蜂过程中一种比较常见、比较顽固的真菌传染病。
现今对于蜜蜂真菌病的防治方法主要有：(1)对原蜂具进行彻底消毒；(2)调换无病史和抗病力强的蜂种；(3)春繁期切忌过分保温和过度潮湿；(4)蜂巢必须彻底消毒；(5)药物治疗；其中药物治疗是一种最有效的治疗方法，但是现今对用于蜜蜂真菌病防治和治疗的制剂的研究非常有限，虽然使用了大量的中药制剂，但是治疗效果一般，造成了中药原料的极大浪费。
发明内容
本发明的目的是针对现有的问题，提供了一种治疗蜜蜂真菌病的制剂组方及其制备方法、应用方法。
本发明是通过以下技术方案实现的：
1、设计制剂组方
制剂组方为：茯苓、苦参、金银花、大青叶、红花、川芎、艾叶、黄连、黄柏、大黄、甘草。其中：
茯苓，性平，味甘、淡，常用于利水渗湿、健脾、安神；
苦参，性寒，味苦，常用于清热燥湿、杀虫止痒、利尿；
金银花，性甘、寒，常用于清热解毒、疏散风热；
大青叶，性寒，味苦，常用于清热解毒、凉血、利咽；
红花，性温，味辛，常用于活血通经、祛瘀止痛；
川芎，性温，味辛，常用于活血行气、祛风止痛；
艾叶，性温，味辛、苦，常用于温经止血、散寒止痛；
黄连，性寒，味苦，常用于清热燥湿、泻火解毒；
黄柏，性寒，味苦，常用于清热燥湿、泻火解毒、退虚热；
大黄，性寒，味苦，常用于泻下攻积、清热泻火、解毒止血、活血祛瘀；
甘草，性平，味甘，常用于益气补中、去痰止咳、解毒、缓急止痛、缓和药性。
2、确定制备方法
一种治疗蜜蜂真菌病的制剂的制备，包括如下步骤：
(1)低温真空干燥处理：
将茯苓、苦参、金银花、大青叶、红花、川芎、艾叶、黄连、黄柏、大黄、甘草分别置于真空干燥箱内进行真空干燥处理，完成后各自取出备用；
(2)原料称取：
称取相应重量份的步骤(1)中低温真空干燥处理后的将茯苓20～30份、苦参13～17份、金银花10～14份、大青叶7～9份、红花3～4份、川芎2～3份、艾叶1～3份、黄连3～5份、黄柏5～10份、大黄7～9份、甘草7～13份备用；
(3)初步浸提：
将步骤(2)中称取的原料进行混合粉碎后置于索氏提取装置中进行一次浸提，完成后收集第一提取液和滤渣备用；
(4)电晕-火焰交替处理：
对步骤(3)中收集的滤渣进行电晕-火焰交替处理，完成后取出备用；
(5)二次浸提：
将步骤(4)中处理后的滤渣置于索氏提取装置中进行二次浸提，完成后得第二提取液备用；
(6)成品制备：
将步骤(3)中所得的第一提取液和步骤(5)中所得的第二提取液混匀后进行浓缩即可。
进一步地，步骤(1)中所述的真空干燥处理时控制真空度为1.3～1.7Pa，温度为30～50℃，干燥至含水率为1～1.4％。
通过采用上述技术方案，将各原料分别单独置于真空干燥箱内进行真空干燥处理，在真空低温条件下进行干燥，一方面防止原料中的活性成分特别是挥发油成分丢失或者失活，另一方面能提高原料的细胞渗透性，为后续浸提奠定基础。
进一步地，步骤(3)中所述的一次浸提所使用的提取剂为乙醚，回流次数为20～30次。
通过采用上述技术方案，将干燥后的原料进行混合粉碎，利用索氏提取装置，以乙醚作为提取剂进行反复回流浸提，有效的提高浸提率。
进一步地，步骤(4)中所述的电晕-火焰交替处理的具体程序为：先电晕处理30～50s，然后再火焰处理3～5min，再电晕处理20～30s，最后火焰处理1～2min。
进一步地，所述电晕处理时的工作电压为10～12kV，火焰处理为火焰外焰处理。
进一步地，步骤(5)中所述的二次浸提所使用的提取剂为无水乙醇，回流次数为10～20次。
进一步地，步骤(6)中所述的浓缩采用的是旋转蒸发仪进行浓缩的。
通过采用上述技术方案，将步骤(3)中初步浸提收集的滤渣进行电晕-火焰交替处理，通过放电以及火焰的氧化作用，会对滤渣起到干燥的作用，同时提高滤渣的表面润湿性，在滤渣的表面形成无数的微凹的密集孔穴，提高浸提率，另外还能促进生成有助于治疗蜜蜂真菌病的化学物质。二次浸提采用的提取剂为无水乙醇，避免了单一提取剂，提取成分有限的问题，促进有效成分的充分溶出，提高原料的利用度。
一种治疗蜜蜂真菌病的制剂组方，按照权利要求1～7任意一项方法制备而成。
3、确定应用方法
一种治疗蜜蜂真菌病的制剂的应用，所述治疗蜜蜂真菌病的制剂具体在治疗蜜蜂真菌病中的应用，通过稀释不同倍数后，与等量糖浆进行1：1混合后饲喂，观察效果，确定应用方法。
本发明相比现有技术具有以下优点：
本申请将茯苓、苦参、金银花等按照合适的比例进行搭配，与现代生物、物理化学提取技术结合起来，以促进各原料中活性成分充分的溶出，并形成独特的配伍，最终制备的制剂绿色安全，对蜜蜂真菌病具有很好的治疗效果。
具体实施方式
一种治疗蜜蜂真菌病的制剂的制备，包括如下步骤：
(1)低温真空干燥处理：
将茯苓、苦参、金银花、大青叶、红花、川芎、艾叶、黄连、黄柏、大黄、甘草分别置于真空干燥箱内进行真空干燥处理，完成后各自取出备用，控制真空度为1.3～1.7Pa，温度为30～50℃，干燥至含水率为1～1.4％；
(2)原料称取：
称取相应重量份的步骤(1)中低温真空干燥处理后的将茯苓20～30份、苦参13～17份、金银花10～14份、大青叶7～9份、红花3～4份、川芎2～3份、艾叶1～3份、黄连3～5份、黄柏5～10份、大黄7～9份、甘草7～13份备用；
(3)初步浸提：
将步骤(2)中称取的原料进行混合粉碎后置于索氏提取装置中进行一次浸提，所使用的提取剂为乙醚，回流次数为20～30次，完成后收集第一提取液和滤渣备用；
(4)电晕-火焰交替处理：
对步骤(3)中收集的滤渣进行电晕-火焰交替处理，先电晕处理30～50s，然后再火焰处理3～5min，再电晕处理20～30s，最后火焰处理1～2min，完成后取出备用，电晕处理时的工作电压为10～12kV，火焰处理为火焰外焰处理；
(5)二次浸提：
将步骤(4)中处理后的滤渣置于索氏提取装置中进行二次浸提，所使用的提取剂为无水乙醇，回流次数为10～20次，完成后得第二提取液备用；
(6)成品制备：
将步骤(3)中所得的第一提取液和步骤(5)中所得的第二提取液混匀后，置于旋转蒸发仪内进行浓缩即可。
为了对本发明做更进一步的解释，下面结合下述具体实施例进行阐述。
实施例1
一种治疗蜜蜂真菌病的制剂的制备，包括如下步骤：
(1)低温真空干燥处理：
将茯苓、苦参、金银花、大青叶、红花、川芎、艾叶、黄连、黄柏、大黄、甘草分别置于真空干燥箱内进行真空干燥处理，完成后各自取出备用，控制真空度为1.3Pa，温度为30℃，干燥至含水率为1％；
(2)原料称取：
称取相应重量份的步骤(1)中低温真空干燥处理后的将茯苓20份、苦参13份、金银花10份、大青叶7份、红花3份、川芎2份、艾叶1份、黄连3份、黄柏5份、大黄7份、甘草7份备用；
(3)初步浸提：
将步骤(2)中称取的原料进行混合粉碎后置于索氏提取装置中进行一次浸提，所使用的提取剂为乙醚，回流次数为20次，完成后收集第一提取液和滤渣备用；
(4)电晕-火焰交替处理：
对步骤(3)中收集的滤渣进行电晕-火焰交替处理，先电晕处理30s，然后再火焰处理3min，再电晕处理20s，最后火焰处理1min，完成后取出备用，电晕处理时的工作电压为10kV，火焰处理为火焰外焰处理；
(5)二次浸提：
将步骤(4)中处理后的滤渣置于索氏提取装置中进行二次浸提，所使用的提取剂为无水乙醇，回流次数为10次，完成后得第二提取液备用；
(6)成品制备：
将步骤(3)中所得的第一提取液和步骤(5)中所得的第二提取液混匀后，置于旋转蒸发仪内进行浓缩即可。
实施例2
一种治疗蜜蜂真菌病的制剂的制备，包括如下步骤：
(1)低温真空干燥处理：
将茯苓、苦参、金银花、大青叶、红花、川芎、艾叶、黄连、黄柏、大黄、甘草分别置于真空干燥箱内进行真空干燥处理，完成后各自取出备用，控制真空度为1.5Pa，温度为40℃，干燥至含水率为1.2％；
(2)原料称取：
称取相应重量份的步骤(1)中低温真空干燥处理后的将茯苓25份、苦参15份、金银花12份、大青叶8份、红花3.5份、川芎2.5份、艾叶2份、黄连4份、黄柏7.5份、大黄8份、甘草10份备用；
(3)初步浸提：
将步骤(2)中称取的原料进行混合粉碎后置于索氏提取装置中进行一次浸提，所使用的提取剂为乙醚，回流次数为25次，完成后收集第一提取液和滤渣备用；
(4)电晕-火焰交替处理：
对步骤(3)中收集的滤渣进行电晕-火焰交替处理，先电晕处理40s，然后再火焰处理4min，再电晕处理25s，最后火焰处理1.5min，完成后取出备用，电晕处理时的工作电压为11kV，火焰处理为火焰外焰处理；
(5)二次浸提：
将步骤(4)中处理后的滤渣置于索氏提取装置中进行二次浸提，所使用的提取剂为无水乙醇，回流次数为15次，完成后得第二提取液备用；
(6)成品制备：
将步骤(3)中所得的第一提取液和步骤(5)中所得的第二提取液混匀后，置于旋转蒸发仪内进行浓缩即可。
实施例3
一种治疗蜜蜂真菌病的制剂的制备，包括如下步骤：
(1)低温真空干燥处理：
将茯苓、苦参、金银花、大青叶、红花、川芎、艾叶、黄连、黄柏、大黄、甘草分别置于真空干燥箱内进行真空干燥处理，完成后各自取出备用，控制真空度为1.7Pa，温度为50℃，干燥至含水率为1.4％；
(2)原料称取：
称取相应重量份的步骤(1)中低温真空干燥处理后的将茯苓30份、苦参17份、金银花14份、大青叶9份、红花4份、川芎3份、艾叶3份、黄连5份、黄柏10份、大黄9份、甘草13份备用；
(3)初步浸提：
将步骤(2)中称取的原料进行混合粉碎后置于索氏提取装置中进行一次浸提，所使用的提取剂为乙醚，回流次数为30次，完成后收集第一提取液和滤渣备用；
(4)电晕-火焰交替处理：
对步骤(3)中收集的滤渣进行电晕-火焰交替处理，先电晕处理50s，然后再火焰处理5min，再电晕处理30s，最后火焰处理2min，完成后取出备用，电晕处理时的工作电压为12kV，火焰处理为火焰外焰处理；
(5)二次浸提：
将步骤(4)中处理后的滤渣置于索氏提取装置中进行二次浸提，所使用的提取剂为无水乙醇，回流次数为20次，完成后得第二提取液备用；
(6)成品制备：
将步骤(3)中所得的第一提取液和步骤(5)中所得的第二提取液混匀后，置于旋转蒸发仪内进行浓缩即可。
实施例4
一种治疗蜜蜂真菌病的制剂的制备，包括如下步骤：
(1)低温真空干燥处理：
将茯苓、苦参、金银花、大青叶、红花、川芎、艾叶、黄连、黄柏、大黄、甘草分别置于真空干燥箱内进行真空干燥处理，完成后各自取出备用，控制真空度为1.5Pa，温度为40℃，干燥至含水率为1.2％；
(2)原料称取：
称取相应重量份的步骤(1)中低温真空干燥处理后的将茯苓25份、苦参15份、金银花12份、大青叶8份、红花3.5份、川芎2.5份、艾叶2份、黄连4份、黄柏7.5份、大黄8份、甘草10份备用；
(3)电晕-火焰交替处理：
对步骤(2)中称取的原料混合粉碎后进行电晕-火焰交替处理，先电晕处理40s，然后再火焰处理4min，再电晕处理25s，最后火焰处理1.5min，完成后取出备用，电晕处理时的工作电压为11kV，火焰处理为火焰外焰处理；
(4)浸提
将步骤(3)中处理后的原料置于索氏提取装置中进行浸提，所使用的提取剂为无水乙醇，回流次数为15次，完成后得提取液备用；
(5)成品制备：
将步骤(4)中所得的提取液混匀后，置于旋转蒸发仪内进行浓缩即可。
实施例5
一种治疗蜜蜂真菌病的制剂的制备，包括如下步骤：
(1)低温真空干燥处理：
将茯苓、苦参、金银花、大青叶、红花、川芎、艾叶、黄连、黄柏、大黄、甘草分别置于真空干燥箱内进行真空干燥处理，完成后各自取出备用，控制真空度为1.5Pa，温度为40℃，干燥至含水率为1.2％；
(2)原料称取：
称取相应重量份的步骤(1)中低温真空干燥处理后的将茯苓25份、苦参15份、金银花12份、大青叶8份、红花3.5份、川芎2.5份、艾叶2份、黄连4份、黄柏7.5份、大黄8份、甘草10份备用；
(3)初步浸提：
将步骤(2)中称取的原料进行混合粉碎后置于索氏提取装置中进行一次浸提，所使用的提取剂为乙醚，回流次数为25次，完成后收集第一提取液和滤渣备用；
(4)电晕处理：
对步骤(3)中收集的滤渣进行电晕处理，电晕处理40s，完成后取出备用，火焰处理为火焰外焰处理；
(5)二次浸提：
将步骤(4)中处理后的滤渣置于索氏提取装置中进行二次浸提，所使用的提取剂为无水乙醇，回流次数为15次，完成后得第二提取液备用；
(6)成品制备：
将步骤(3)中所得的第一提取液和步骤(5)中所得的第二提取液混匀后，置于旋转蒸发仪内进行浓缩即可。
实施例6
一种治疗蜜蜂真菌病的制剂的制备，包括如下步骤：
(1)低温真空干燥处理：
将茯苓、苦参、金银花、大青叶、红花、川芎、艾叶、黄连、黄柏、大黄、甘草分别置于真空干燥箱内进行真空干燥处理，完成后各自取出备用，控制真空度为1.5Pa，温度为40℃，干燥至含水率为1.2％；
(2)原料称取：
称取相应重量份的步骤(1)中低温真空干燥处理后的将茯苓25份、苦参15份、金银花12份、大青叶8份、红花3.5份、川芎2.5份、艾叶2份、黄连4份、黄柏7.5份、大黄8份、甘草10份备用；
(3)初步浸提：
将步骤(2)中称取的原料进行混合粉碎后置于索氏提取装置中进行一次浸提，所使用的提取剂为乙醚，回流次数为25次，完成后收集第一提取液和滤渣备用；
(4)火焰处理：
对步骤(3)中收集的滤渣进行火焰处理，火焰处理4min，火焰处理为火焰外焰处理；
(5)二次浸提：
将步骤(4)中处理后的滤渣置于索氏提取装置中进行二次浸提，所使用的提取剂为无水乙醇，回流次数为15次，完成后得第二提取液备用；
(6)成品制备：
将步骤(3)中所得的第一提取液和步骤(5)中所得的第二提取液混匀后，置于旋转蒸发仪内进行浓缩即可。
实施例7
一种治疗蜜蜂真菌病的制剂的制备，包括如下步骤：
(1)低温真空干燥处理：
将茯苓、苦参、金银花、大青叶、红花、川芎、艾叶、黄连、黄柏、大黄、甘草分别置于真空干燥箱内进行真空干燥处理，完成后各自取出备用，控制真空度为1.5Pa，温度为40℃，干燥至含水率为1.2％；
(2)原料称取：
称取相应重量份的步骤(1)中低温真空干燥处理后的将茯苓25份、苦参15份、金银花12份、大青叶8份、红花3.5份、川芎2.5份、艾叶2份、黄连4份、黄柏7.5份、大黄8份、甘草10份备用；
(3)初步浸提：
将步骤(2)中称取的原料进行混合粉碎后置于索氏提取装置中进行一次浸提，所使用的提取剂为乙醚，回流次数为25次，完成后收集第一提取液和滤渣备用；
(4)二次浸提
将步骤(3)中所得的滤渣置于索氏提取装置中进行二次浸提，所使用的提取剂为无水乙醇，回流次数为15次，完成后得第二提取液备用；
(5)成品制备：
将步骤(3)中所得的第一提取液和步骤(4)中所得的第二提取液混匀后，置于旋转蒸发仪内进行浓缩即可。
实施例8
一种治疗蜜蜂真菌病的制剂的制备，包括如下步骤：
(1)低温真空干燥处理：
将茯苓、苦参、金银花、大青叶、红花、川芎、艾叶、黄连、黄柏、大黄、甘草分别置于真空干燥箱内进行真空干燥处理，完成后各自取出备用，控制真空度为1.5Pa，温度为40℃，干燥至含水率为1.2％；
(2)原料称取：
称取相应重量份的步骤(1)中低温真空干燥处理后的将茯苓25份、苦参15份、金银花12份、大青叶8份、红花3.5份、川芎2.5份、艾叶2份、黄连4份、黄柏7.5份、大黄8份、甘草10份备用；
(3)初步浸提：
将步骤(2)中称取的原料进行混合粉碎后置于索氏提取装置中进行一次浸提，所使用的提取剂为乙醚，回流次数为25次，完成后收集第一提取液和滤渣备用；
(4)成品制备：
将步骤(3)中所得的第一提取液置于旋转蒸发仪内进行浓缩即可。
实施例9
一种治疗蜜蜂真菌病的制剂的制备，包括如下步骤：
(1)低温真空干燥处理：
将茯苓、苦参、金银花、大青叶、红花、川芎、艾叶、黄连、黄柏、大黄、甘草分别置于真空干燥箱内进行真空干燥处理，完成后各自取出备用，控制真空度为1.5Pa，温度为40℃，干燥至含水率为1.2％；
(2)原料称取：
称取相应重量份的步骤(1)中低温真空干燥处理后的将茯苓25份、苦参15份、金银花12份、大青叶8份、红花3.5份、川芎2.5份、艾叶2份、黄连4份、黄柏7.5份、大黄8份、甘草10份备用；
(3)初步浸提：
将步骤(2)中称取的原料进行混合粉碎后置于索氏提取装置中进行一次浸提，所使用的提取剂为无水乙醇，回流次数为25次，完成后收集第一提取液和滤渣备用；
(4)电晕-火焰交替处理：
对步骤(3)中收集的滤渣进行电晕-火焰交替处理，先电晕处理40s，然后再火焰处理4min，再电晕处理25s，最后火焰处理1.5min，完成后取出备用，电晕处理时的工作电压为11kV，火焰处理为火焰外焰处理；
(5)二次浸提：
将步骤(4)中处理后的滤渣置于索氏提取装置中进行二次浸提，所使用的提取剂为无水乙醇，回流次数为15次，完成后得第二提取液备用；
(6)成品制备：
将步骤(3)中所得的第一提取液和步骤(5)中所得的第二提取液混匀后，置于旋转蒸发仪内进行浓缩即可。
实施例10
一种治疗蜜蜂真菌病的制剂的制备，包括如下步骤：
(1)低温真空干燥处理：
将茯苓、苦参、金银花、大青叶、红花、川芎、艾叶、黄连、黄柏、大黄、甘草分别置于真空干燥箱内进行真空干燥处理，完成后各自取出备用，控制真空度为1.5Pa，温度为40℃，干燥至含水率为1.2％；
(2)原料称取：
称取相应重量份的步骤(1)中低温真空干燥处理后的将茯苓25份、苦参15份、金银花12份、大青叶8份、红花3.5份、川芎2.5份、艾叶2份、黄连4份、黄柏7.5份、大黄8份、甘草10份备用；
(3)初步浸提：
将步骤(2)中称取的原料进行混合粉碎后置于索氏提取装置中进行一次浸提，所使用的提取剂为乙醚，回流次数为25次，完成后收集第一提取液和滤渣备用；
(4)电晕-火焰交替处理：
对步骤(3)中收集的滤渣进行电晕-火焰交替处理，先电晕处理40s，然后再火焰处理4min，再电晕处理25s，最后火焰处理1.5min，完成后取出备用，电晕处理时的工作电压为11kV，火焰处理为火焰外焰处理；
(5)二次浸提：
将步骤(4)中处理后的滤渣置于索氏提取装置中进行二次浸提，所使用的提取剂为乙醚，回流次数为15次，完成后得第二提取液备用；
(6)成品制备：
将步骤(3)中所得的第一提取液和步骤(5)中所得的第二提取液混匀后，置于旋转蒸发仪内进行浓缩即可。
为了对比本申请技术效果，分别用上述实施例2、实施例4～10的方法对应制备制剂，然后进行进行功能动物试验，具体为：
1.安全性毒理学评价试验
1.1样品：
实施例2方法制备的制剂。试验时用蒸馏水作溶剂配制受试物，冷藏保存。
1.2实验动物：
来源于延边大学实验动物中心的KM小鼠20只，SD大鼠20只，雌雄各一半。
1.3急性经口毒性试验：
设15000mg/kg.BW一个剂量组，按20mL/kg.BW一次经口灌胃。灌胃前动物禁食16h，不限饮水，首次染毒后观察7天。
采用最大耐受剂量法，大、小鼠分别随机分成两组，共4组，每组同系同性10只动物。称受试物75g加蒸馏水至100mL混匀后备用。大、小鼠一次经口给予受试物。观察一周内动物的中毒表现及死亡情况，试验结束称体重后处死动物作大体解剖。根据LD50数值，判定受试物的毒性分级。
表1实施例2制剂对大小鼠急性经口毒性试验结果
急性经口毒性试验结果：给受试物后大、小鼠的一般表现和行为均未见异常，观察期内未见动物死亡(表1)，试验结束时处死动物，大体解剖肉眼未见异常。口服液对大、小鼠急性经口MTD值均大于15000mg/kg.BW，按急性毒性分级属无毒级。
也即通过本申请方法制备的制剂对动物无害。
2.治疗效果试验
2.1试验方法：于2021年8月，在吉林省延吉市取3个蜂场80箱蜜蜂进行试验，分对照组、试验组1-试验组8共8组，每组10箱蜂群，每箱蜂群有蜜蜂9000-10000只。分别用实施例2、实施例4～10方法对应制备的制剂进行治疗，即观察真菌感染后的自然消长。用法用量：取1份制剂加蒸馏水至1000ml后混均，加1000ml糖浆(白砂糖与水按100：60比例熬制)混均，每箱蜂群饲喂200ml，按照常规方法人工感染白垩病，至第5天局部感染明显形成，再进行制剂治疗。没感染处用药量10mL，每天用药两次，连续用药2周，观察皮损观察真菌感染后的自然消长；
2.2临床疗效评价标准：治愈标准：为皮损菌丝消退、无新感染幼虫，无临床症状，真菌镜检连续二次阴性，停药一周后无复发；有效标准：为菌丝消退、或无新感染幼虫、或无临床症状，停药一周后可能复发；无效标准：为皮损菌丝未消退，有新感染幼虫，有临床症状，停药一周后复发。或真菌镜检阳性，或复发为临床痊愈停药后一周后，再原处又出现皮损，真菌镜检阳性。
具体试验对比数据如下表2所示
表2制剂对蜜蜂白垩病的治疗效果
治愈(箱)
有效(箱)
无效(箱)
实施例2
9
1
0
实施例4
3
7
0
实施例5
7
3
0
实施例6
8
2
0
实施例7
4
6
0
实施例8
3
7
0
实施例9
7
3
0
实施例10
7
3
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由上表2可以看出，本申请将茯苓、苦参、金银花等按照合适的比例进行搭配，与现代生物、物理化学提取技术结合起来，最终制备的制剂对蜜蜂真菌病具有很好的治疗效果，也即本申请的制备方法，能有效的促进各原料中活性成分充分的溶出，并形成独特的配伍，从而达到显著的治疗效果。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，但本发明不以所示限定实施范围，凡是依照本发明的构想所作的改变，或修改为等同变化的等效实施例，仍未超出说明书所涵盖的精神时，均应在本发明的保护范围内。
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