用于预防或治疗幽门螺杆菌感染的包含忍冬花水提取物的药物组合物
阅读说明：本技术 用于预防或治疗幽门螺杆菌感染的包含忍冬花水提取物的药物组合物 (Pharmaceutical composition comprising aqueous extract of honeysuckle flower for preventing or treating helicobacter pylori infection ) 是由 金点溶 朴宣奎 张珉廷 李宗勋 林洙焕 于 2019-11-29 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一种用于预防或治疗幽门螺杆菌感染的忍冬花水提取物组合物,该组合物包含断氧化马钱子苷作为活性成分。所述提取物包含特定量的断氧化马钱子苷,由此,当用于幽门螺杆菌时表现出优异的抗菌效果,并且当用于感染幽门螺杆菌的小鼠时,在降低血液中幽门螺杆菌IgG抗体的表达、减轻组织病理学病变和减少细胞因子表达方面表现出优异的效果。因此,本发明的忍冬花水提取物可以有效地用作用于预防或治疗幽门螺杆菌感染的组合物。(The invention relates to a honeysuckle flower water extract composition for preventing or treating helicobacter pylori infection, which comprises secologanin oxide as an active ingredient. The extract contains a specific amount of secologlycoside, thereby exhibiting excellent antibacterial effects when used for helicobacter pylori, and excellent effects in reducing the expression of helicobacter pylori IgG antibody in blood, alleviating histopathological changes, and reducing cytokine expression when used for helicobacter pylori-infected mice. Therefore, the aqueous extract of honeysuckle flower of the present invention can be effectively used as a composition for preventing or treating helicobacter pylori infection.)
技术领域
本发明涉及一种包含忍冬花水提取物的用于预防或治疗幽门螺杆菌感染的药物组合物。
背景技术
幽门螺杆菌(H.Pylori)于1983年由澳大利亚的Marshall和Warren首先发现。据报道，幽门螺杆菌是一种具有4至6根鞭毛的螺旋状微需氧革兰氏阴性菌，并且感染了大于全世界人口的一半，并且在韩国，已经报道40岁以上的成年人的感染率为70％以上。幽门螺杆菌主要已知是与上消化道疾病密切相关的致病微生物，引起慢性胃炎、胃十二指肠溃疡、胃癌等。特别地，国际癌症研究所(IARC)和世界卫生组织将幽门螺杆菌定义为I类致癌物。在胃癌的预防和诊断方面，幽门螺杆菌的感染被认为是非常重要的问题，并且鉴定幽门螺杆菌的感染因素正在被认为是关乎国民健康的重要问题。
幽门螺杆菌具有5至6根类似动物尾巴的鞭毛作为运动器官，并且利用鞭毛直接穿过胃壁上的粘性黏液而附着在胃黏膜的表面上。尿素酶在个体之间在遗传上保存完好，这是在大多数幽门螺杆菌菌株中发现的共同特征。尿素酶将尿素水解为氨(NH3)和二氧化碳(CO2)，使得细菌在具有细菌无法存活的低pH的胃黏膜中存活，以提高周围的pH并且中和胃酸，从而细菌存活。由产生的氨的影响引起胃黏膜中的细胞损坏和突变，从而失去胃酸防御作用，并且产生胃酸攻击胃黏膜的恶性循环，引起胃组织病变和炎症反应。因此，由幽门螺杆菌分泌的各种细胞毒素因子引起的胃黏膜炎症诱导各种炎症细胞如淋巴细胞和巨噬细胞的活化。据报道，炎症细胞在体内具有诸如组织损伤、细胞毒性等的不利影响，并且诱导炎症性诱导介质以使炎症恶化。
幽门螺杆菌是胃肠道疾病中非常危险的微生物，而缺少合适的抗菌物质的开发。目前，作为治疗幽门螺杆菌的方法，通常有联合治疗铋剂、甲硝唑和四环素或阿莫西林的三联疗法；和混合铋剂、奥美拉唑、四环素和甲硝唑的四联疗法等。据报道，这些治疗方法对治疗幽门螺杆菌有优异效果。然而，据报道，重复使用这些药物引起抗生素耐药性增加和各种副作用，目前，正在持续努力寻找能够使用各种天然物质抑制幽门螺杆菌的提取物和活性成分。
忍冬花(LoniceraeFlos)是忍冬科忍冬属花，在东方医学和非官方药物中已经用于利尿、强胃、关节炎、化脓性皮炎和支气管炎。
据报道，作为忍冬花的成分，有单宁酸、肌醇、甾醇、绿原酸、异绿原酸等，并且据报道，作为黄酮类成分，有木犀草素、芹黄素、木犀草素-7-鼠李葡糖苷、木犀草素-7-O-鼠李葡糖苷、槲皮苷等。已知忍冬花的黄酮类成分具有抗炎作用和抗诱变作用。
作为涉及包含忍冬花水提取物的用于预防或治疗幽门螺杆菌感染的组合物的现有技术，在先前文献[Ma,F.et al.,World J Gastroenterol.,16(44),5629-5634,2010],[Xiao,Z.P.et al.,J Agric Food Chem.,60(42),10572-10577,2012]和[Hyun-a,Lee,etc.,Korean J Vet Res.,53(2),117-123,2013]中，公开了包括忍冬花提取物在内的各种天然水提取物的抗幽门螺杆菌的作用。此外，在现有技术[Oku,H.et al.,Biol.Pharm.Bull.,34(8),1330-1333,2011]中，公开了一种包含断氧化马钱子苷(secoxyloganin)的来自忍冬花的化合物及其抗过敏作用，并且在现有技术[Xiong,J.etal.,Food Chemistry,138,327-333,2013]中，公开了断氧化马钱子苷对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抗菌作用。
在研究忍冬花水提取物时，本发明人发现，在忍冬花水提取物的活性成分中，特别地，在相同条件下，断氧化马钱子苷表现出对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抗菌作用的20倍以上的对幽门螺杆菌的选择性抗菌作用。此外，本发明人发现，包含预定含量以上的断氧化马钱子苷的忍冬花水提取物具有优异的抑制和治疗幽门螺杆菌感染的效果，从而完成本发明。
发明内容
技术问题
本发明的一个目的是提供一种用于预防或治疗幽门螺杆菌感染的包含忍冬花水提取物的药物组合物或保健功能食品。
技术方案
本发明涉及一种用于预防或治疗幽门螺杆菌感染的药物组合物，其包含以忍冬花水提取物的形式的断氧化马钱子苷作为活性成分。
所述忍冬花水提取物可以通过，相对于100重量份的忍冬花，将忍冬花与1500重量份至2500重量份的水混合，然后将混合物在90℃以上的温度条件下提取1小时以上来得到，并且作为提取装置，可以使用常规提取装置、超声提取器或分馏装置。优选地，将所述混合物在90℃以上的温度条件下提取1小时至5小时，以包含0.1重量％至10重量％的活性成分断氧化马钱子苷。
在忍冬花水提取物中包含的作为活性成分的断氧化马钱子苷在忍冬花水提取物中的含量为0.1重量％至10重量％。当含量小于0.1重量％或大于10重量％时，超出所述重量％的范围，由于抑制幽门螺杆菌感染的效果低而不优选，或者由于抑制幽门螺杆菌感染的效果增加不大并且不经济而不优选。最优选地，为了有效治疗幽门螺杆菌感染，在忍冬花水提取物中包含的作为活性成分的断氧化马钱子苷在忍冬花水提取物中的含量为0.5重量％至5重量％。
幽门螺杆菌感染是感染幽门螺杆菌的疾病，并且可以选自胃炎、胃溃疡、十二指肠溃疡、非溃疡性消化不良综合征、胃MALT淋巴瘤、胃增生息肉、胃癌、消化道癌、胰腺炎、炎症性肠病和功能性消化系统紊乱(腹部饱腹感、腹痛、打嗝、腹胀、初始饱腹感、恶心、呕吐、反流、胃灼热、食欲不振等)。与幽门螺杆菌非感染性疾病相比，本发明的忍冬花水提取物表现出对幽门螺杆菌感染性疾病的特别选择性治疗效果。
根据本发明的药物组合物可以与常用的药学上可接受的载体配制成适当的形式。“药学上可接受的”指当对人体给药时，在生理学上可接受并且不引起诸如胃肠道紊乱、头晕等的过敏反应或与其类似的反应的组合物。此外，所述组合物可以根据常规方法以诸如散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、混悬剂、乳剂、糖浆剂、气雾剂等的口服制剂；外用制剂；栓剂；和无菌注射液的形式配制和使用。
所述组合物中可以包含的载体、赋形剂和稀释剂可以包括乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、木糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖醇、淀粉、阿拉伯胶、海藻酸盐、明胶、磷酸钙、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、水、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁和矿物油，但是不限于此。制剂可以通过使用常用的稀释剂或赋形剂，如填料、稳定剂、粘合剂、崩解剂、表面活性剂等来制备。用于口服给药的固体制剂包括片剂、丸剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂等，这些固体制剂可以通过将一种或多种赋形剂，例如，淀粉、微晶纤维素、蔗糖或乳糖、低取代的羟丙基纤维素、羟丙甲纤维素等与本发明的提取物混合来制备。此外，除了简单的赋形剂之外，还可以使用润滑剂如硬脂酸镁和滑石。用于口服给药的液体制剂可以对应于混悬剂、口服液、乳剂、糖浆剂等，并且除了通常用作简单稀释剂的水和液体石蜡之外，可以包含各种赋形剂，例如，润湿剂、甜味剂、芳香剂、防腐剂等。用于肠胃外给药的制剂包括无菌水溶液、非水溶液、混悬剂、乳剂、冻干剂和栓剂。作为所述非水溶液和悬浮剂，可以使用丙二醇、聚乙二醇、诸如橄榄油的植物油、诸如油酸乙酯的注射用酯等。作为栓剂的基质，可以使用witepsol、聚乙二醇、Tween61、可可脂、月桂醇、甘油、明胶等。为了制备为用于肠胃外给药的制剂，将提取物或药学上可接受的盐灭菌和/或与防腐剂、稳定剂、可湿性粉剂或乳剂、诸如用于调节渗透压的盐和/或缓冲液的辅助剂、以及其它在治疗上有用的材料在水中混合，以制备为溶液或悬浮液，并且制备的溶液或悬浮液可以通过安瓿或小瓶单位剂量类型来制备。
本发明中公开的包含提取物作为活性成分的药物组合物可以以各种途径给药于哺乳动物如大鼠、家畜和人。可以预期所有给药方法，例如，所述药物组合物可以通过口服、直肠或静脉内、肌内、皮下、宫内硬脑膜(intrauterine dural)或脑血管注射来给药。剂量可以根据治疗对象的年龄、性别和体重、待治疗的具体疾病或病状、疾病或病状的严重程度、给药时间、给药途径、药物的吸收、分布和排泄率、使用的其它药物的种类、开处方者的判断等而变化。基于这些因素的剂量确定在本领域技术人员的能力范围内，并且通常，剂量在0.01mg/kg/天至约2000mg/kg/天的范围内。更优选的剂量是1mg/kg/天至500mg/kg/天。给药可以一天一次或一天数次。所述剂量在任何方面都不限制本发明的范围。
在另一方面，本发明涉及一种用于预防或改善幽门螺杆菌感染的保健功能食品，其包含以忍冬花水提取物的形式的断氧化马钱子苷作为活性成分。
保健功能食品指通过使用具有有效功能的原料或组分制备或加工而成的食品，并且可以包括，例如，保健品、功能性食品、营养素、辅料等所有。
相对于全部保健功能食品的总重量，提取物的加入量优选为0.001重量％至50重量％，更优选为0.001重量％至30重量％，并且最优选为0.001重量％至10重量％。本发明的保健功能食品包括诸如片剂、胶囊剂、丸剂或液体剂等的形式，并且可以添加本发明的提取物的食品包括，例如，各种食品、饮品、口香糖、茶、复合维生素等。
另外，本发明涉及一种用于预防或治疗幽门螺杆菌感染的药物组合物，其包含断氧化马钱子苷作为活性成分。
有益效果
本发明涉及一种包含断氧化马钱子苷作为活性成分的忍冬花水提取物的用于预防或治疗幽门螺杆菌感染的药物组合物。所述提取物包含特定含量的断氧化马钱子苷，由此，当治疗幽门螺杆菌治疗时表现出优异的抗菌效果，并且当治疗感染幽门螺杆菌的小鼠时，在降低血液中幽门螺杆菌IgG抗体的表达、减轻组织病理学病变和减少细胞因子表达方面表现出优异的效果。因此，本发明的忍冬花水提取物可以有效地用作用于预防或治疗幽门螺杆菌感染的组合物。
附图说明
图1示出了准备感染幽门螺杆菌的小鼠的过程；
图2示出了根据对感染幽门螺杆菌的小鼠给药忍冬花提取物，通过PCR确认胃黏膜组织中幽门螺杆菌的存在的结果；
图3示出了根据对感染幽门螺杆菌的小鼠给药忍冬花提取物，确认血液中幽门螺杆菌IgG抗体的表达的结果；
图4示出了根据对感染幽门螺杆菌的小鼠给药忍冬花提取物，对胃组织中的炎症细胞浸润和萎缩性变化进行评分的结果；
图5示出了根据对感染幽门螺杆菌的小鼠给药忍冬花提取物，快速尿素酶试验的结果；
图6示出了根据对感染幽门螺杆菌的小鼠给药忍冬花提取物，确认CLO评分的结果；
图7示出了根据对感染幽门螺杆菌的小鼠给药忍冬花提取物，测量胃黏膜组织中TNF-α和IL-1β的表达水平的结果。
具体实施方式
下文中，将详细描述本发明的优选实施例。然而，本发明不限于本文中描述的实施例并且还可以以其它形式实施。而是，本文中介绍的内容应当是透彻和完整的，并且被提供以向本领域技术人员充分传达本发明的构思。
<实施例1.忍冬花水提取物的制备①>
向100g的忍冬花中加入2000ml的水，并用90℃的热水提取3小时，以得到1400ml的忍冬花提取物。将提取物用5μm的滤纸过滤，然后在50℃和减压下浓缩3小时。之后，将浓缩物在50℃和减压下干燥过夜，以得到25g的本发明的实施例1中的忍冬花水提取物。
<实施例2.忍冬花水提取物的制备②>
向100g的忍冬花中加入2000ml的水，并用90℃的热水提取1小时，以得到1400ml的忍冬花提取物。将提取物用5μm的滤纸过滤，然后在50℃和减压下浓缩3小时。之后，将浓缩物在50℃和减压下干燥过夜，以得到25g的本发明的实施例2中的忍冬花水提取物。
<实施例3.忍冬花水提取物的制备③>
向100g的忍冬花中加入2000ml的水，并用90℃的热水提取5小时，以得到1400ml的忍冬花提取物。将提取物用5μm的滤纸过滤，然后在50℃和减压下浓缩3小时。之后，将浓缩物在50℃和减压下干燥过夜，以得到25g的本发明的实施例3中的忍冬花水提取物。
<比较例1.用来比较的忍冬花乙醇提取物的制备>
通过使用70％的乙醇水溶液代替水作为提取溶剂，以与实施例1中相同的方式制备比较例1的忍冬花乙醇提取物。
<比较例2.用来比较的忍冬花水提取物的制备①>
通过在60℃下提取3小时代替在90℃下热水提取3小时，以与实施例1中相同的方式制备比较例2的忍冬花水提取物。
<比较例3.用来比较的忍冬花水提取物的制备②>
通过在30℃下提取3小时代替在90℃下热水提取3小时，以与实施例1中相同的方式制备比较例3的忍冬花水提取物。
<比较例4.用来比较的忍冬花水提取物的制备③>
通过在90℃下提取30分钟代替在90℃下热水提取3小时，以与实施例1中相同的方式制备比较例4的忍冬花水提取物。
<实验例1.确认忍冬花提取物中包含的指标成分的含量>
首先制备标准溶液以确认忍冬花提取物中包含的指标成分的含量。在50ml的烧瓶中，向标准溶液中加入约5mg的断氧化马钱子苷标准品，加入水并且通过超声完全溶解，然后将烧瓶冷却，并且使用调节至标线的溶液作为高浓度(0.1mg/ml)的断氧化马钱子苷溶液。
接着，分别取约200mg的实施例和比较例，加入到50ml的烧瓶中，加入水并且通过超声完全溶解，将烧瓶冷却并且调节至标线，然后使用通过孔径为0.22μm的滤膜过滤的滤液作为实验溶液(4mg/ml)。
标准品、实施例和比较例的HPLC性能条件示于下面表1中，并且实施例和比较例中包含的指标成分中断氧化马钱子苷的含量示于下面表2中。
[表1]
[表2]
断氧化马钱子苷(mg/g)
实施例1
9.4
实施例2
8.7
实施例3
10.5
比较例1
4.4
比较例2
3.2
比较例3
2.1
比较例4
4.5
如表2中所示，可以看出，当提取温度为90℃以上时，本发明的实施例中的忍冬花水提取物具有高含量的断氧化马钱子苷。
<实验例2.确认对幽门螺杆菌的抗菌活性>
将幽门螺杆菌(ATCC43504)菌株涂抹在包含10％的马血清的布鲁氏菌琼脂培养基中，并在37℃和10％的CO2的条件的培养箱中培养3天。之后，收集培养的幽门螺杆菌细胞然后悬浮在灭菌的布鲁氏菌液体培养基中，并且制备在600nm处的吸光度为1.0的细胞悬液。
将14g的布鲁氏菌培养基溶解在450ml的纯净水中，加入6g的琼脂，悬浮并且在121℃下灭菌15分钟。在约40℃下将50ml的马血清混合在灭菌的培养基中，并且将25ml分散在直径90mm的平板上，使琼脂培养基变硬，然后将0.2ml的幽门螺杆菌细胞悬液涂抹在琼脂培养基上。
将实施例和比较例按浓度溶解在水中，灭菌并且以0.2μm过滤，然后分别以20μl处理灭菌纸盘(直径为6mm)，并且放置在涂抹有菌株的平板上。将实施例和比较例在37℃和10％的CO2的条件的培养箱中培养72小时，然后测量产生的透明区的直径，并且将去除了穿孔直径的纯抑菌圈的直径示于表3中。
[表3]
由上面表3可以看出，当用包含0.5重量％以上的断氧化马钱子苷作为指标成分的实施例1至实施例3中的忍冬花水提取物处理幽门螺杆菌时，表现出10mm以上的透明区，从而具有优异的抗菌活性。
具体地，本发明人通过分别根据断氧化马钱子苷的含量使用忍冬花水提取物，确认了口服给药100mg/kg对小鼠幽门螺杆菌感染的抑制效果。作为结果，与比较例1至比较例4不同，可以确认，仅在实施例1至实施例3中的包含0.5重量％以上的断氧化马钱子苷的忍冬花水提取物中表现出抑制幽门螺杆菌感染的效果。因此，之后，在动物实验中，可以确认，通过将实施例1的组合物以100mg/kg、200mg/kg和400mg/kg的剂量对感染幽门螺杆菌的小鼠进行口服给药，表现出抑制幽门螺杆菌感染的效果。
<实验例3.确认抑制幽门螺杆菌感染的效果>
实验例3-1.准备感染幽门螺杆菌的小鼠
首先，将幽门螺杆菌菌株(H.pylori SS1，Korea Helicobacter Bank)接种在加入有5％的羊血的胰蛋白酶解酪蛋白大豆琼脂培养基中，然后在10％的CO2、37℃和微需氧条件下培养2天至3天。
为了提高幽门螺杆菌的感染率，在幽门螺杆菌感染前2天和感染当天给小鼠给药抗酸剂，并且在所有组中，使用小鼠探头(zonde)对每只小鼠口服给药0.2ml的5％的碳酸氢钠(NaHCO3)一次，共3天。
感染幽门螺杆菌之前小鼠禁食12小时，并且在除了阴性对照组G1之外的所有组中，根据5.0×109/ml菌落形成单位(CFU)的细菌数，使用小鼠探头以2天的间隔口服给药0.2ml的幽门螺杆菌培养液并且感染。
为了确认诱导幽门螺杆菌感染之后的感染维持，在幽门螺杆菌感染1周之后，从所有小鼠的面静脉采血并且分离血浆。在幽门螺杆菌抗体测量中，仅通过MouseH.pyloriantibody(IgG)ELISA Kit(美国Cusabio Biotech Co.)选择鉴定出因感染而抗体增加的个体并用于实验中。
将所有实验组悬浮在蒸馏水中，并且每天同一时间口服给药每小鼠1kg为5ml，给药28天，每天1次(在阳性对照组1中，1周，3周，每天1次，14天)。
[表4]
实验例3-2.胃黏膜中的幽门螺杆菌的PCR实验
从灭菌提取的胃黏膜组织中收集基因组DNA，并且在下面表5的条件下进行幽门螺杆菌的PCR实验。实验中使用的目标基因是CagA，它是一种仅特别存在于幽门螺杆菌中的毒性基因，是在人体或小鼠中不存在的基因。因此，图2示出了在感染幽门螺杆菌的小鼠中，鉴定出通过处理各个实验组产生的特定条带并且确定阳性个体。
[表5]
图2示出，作为通过PCR测量胃黏膜组织中幽门螺杆菌的存在并且计算各个实验组的治疗率的结果，对个各个浓度，与感染组G2相比，本发明的实施例1中的忍冬花提取物G5至G7表现出40％至60％的治疗率。因此，可以看出，本发明的忍冬花提取物是一种减少因感染幽门螺杆菌而增加的胃黏膜中特定基因的表达的组合物。
实验例3-3.比较血液中的幽门螺杆菌抗体IgG滴度
在实验例3-1中，在诱导幽门螺杆菌感染1周后从小鼠面静脉中分离的血浆和在实验结束时从腹静脉采血后分离的血浆中，通过Mouse H.pylori antibody(IgG)ELISA Kit测量各个血浆中的幽门螺杆菌抗体滴度，并示于图3中。
在图3中，作为在尸体解剖过程中测量血液中的幽门螺杆菌抗体的结果，可以看出，与感染组G2相比，在本发明的实施例G5至G7中，幽门螺杆菌抗体以浓度依赖方式降低。
由此可以看出，包含断氧化马钱子苷作为有效成分的本发明的忍冬花水提取物是一种具有优异的抑制幽门螺杆菌感染的效果的组合物。
实验例3-4.胃组织中的可见病灶的观察和组织病理学分析的比较
将尸体解剖当天提取的胃组织从食管沿大弯向十二指肠在垂直方向上切开，观察内黏膜的特定病灶。观察可见病灶之后，将切开的胃组织固定在10％的中性福尔马林中，使用用于组织病理学检查的常规方法进行石蜡包埋，然后切片至4μm厚，并且用苏木精和曙红(H&E)染色，之后，进行组织病理学检查。观察每个个体在Corpus和Antrum整体区域中综合示出的炎症细胞(中性粒细胞&单核细胞)的浸润程度(用黄色箭头标出)和伴有萎缩性变化的萎缩性胃炎的程度之后，根据表6的标准，通过将各个组织的等级转换为评分而在图4中示出组织病理学评分。
[表6]
参照图4，根据现有技术[Lee,J.Y.et al.,J Cancer Prev.,19(2),144-151,2014]的标准，对于炎症细胞浸润和萎缩性变化，对作为组织病理学结果的在胃组织中观察到的结果进行评分。在感染组G2中，与正常组相比，由于幽门螺杆菌感染，胃组织中的炎症和萎缩性变化增加，但是在实施例G5至G7中，胃组织中的炎症和萎缩性变化以浓度依赖方式降低。
由此可以看出，本发明的忍冬花提取物减轻在幽门螺杆菌感染时由炎症细胞浸润和萎缩性变化引起的胃炎症状。
实验例3-5.快速尿素酶实验(CLO实验)
当胃黏膜中存在幽门螺杆菌时，当幽门螺杆菌在实验试剂培养基中增殖时，分泌尿素酶，并且实验试剂中的尿素被水解以产生氨。作为结果，实验试剂的总pH升高，并且由该pH指示剂的颜色变化(红色)进行快速尿素酶实验，实验结果由治疗率和CLO评分表示。
在快速尿素酶实验中，通过使用弯曲杆菌样微生物(CLO)(韩国Asan Pharm Co.,Ltd.)作为实验试剂，灭菌采集尸体解剖当天提取的胃黏膜并进行实验。将采集的胃黏膜在37℃的培养箱中培养2小时，然后当试剂颜色由黄色变为红色时确定为阳性。由百分比得到被确定为阳性的个体的数目以计算阳性率，并且通过下面等式计算通过样品处理对幽门螺杆菌灭菌的治疗率并示于图5中。
[等式]
{(样品的数目-阳性样品的数目)/样品的数目}×100
另外，在CLO实验之后，CLO评分示于图6中，在培养基的颜色没有变化的情况下测量为0分，在微红的情况下为1分，在浅紫色的情况下为2分，在深紫色的情况下为3分，计算各个组的平均值和标准偏差并且比较各组之间的差异。
当描述通过图5和图6的快速尿素酶实验得到的治疗率和CLO评分结果时，与感染组G2相比，本发明的实施例1中的忍冬花提取物G5至G7表现出40％至60％的治疗率，并且表现出降低CLO评分60％至90％的效果。
因此，可以看出，本发明的忍冬花提取物是一种用于降低因感染幽门螺杆菌而增加的胃黏膜中快速尿素酶的表达的组合物。
实验例3-6.胃黏膜组织中的细胞因子分析
为了测量胃黏膜组织中的促炎细胞因子，将灭菌收集的胃组织用液氮粉碎，并且使用细胞裂解缓冲液提取蛋白质以用于分析。在分离的蛋白质中，使用ELISA kit(R&Dsystem,Minneapolis,MN,USA)分析肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)，其结果示于图7中。
参照图7，本发明的实施例1的忍冬花提取物以浓度依赖方式降低因感染幽门螺杆菌而增加的胃黏膜组织中TNF-α和IL-1β的表达。
<制备实施例1.制备片剂>
将20g的本发明的实施例1中的忍冬花提取物与175.9g的乳糖、180g的马铃薯淀粉和32g的胶体硅酸盐混合。向混合物中加入10％的明胶溶液，然后粉碎并且通过14目筛体。将该混合物干燥并且加入160g的马铃薯淀粉、50g的滑石和5g的硬脂酸镁以制备片剂。
<制备实施例2.制备胶囊剂>
将100mg的本发明的实施例1中的忍冬花提取物、100mg的玉米淀粉、100mg的乳糖和2mg的硬脂酸镁混合，然后根据常规的胶囊剂的制备方法将成分混合并装入胶囊中以制备胶囊剂。
<制备实施例3.制备注射剂>
将1g的本发明的实施例1中的忍冬花提取物、0.6g的氯化钠和0.1g的抗坏血酸溶解在蒸馏水中以制成100ml。将该溶液放入瓶中，在20℃下加热和灭菌30分钟。
<制备实施例4.制备保健功能食品>
将20g的本发明的实施例1中的忍冬花提取物、适量的维生素混合物、70μg的醋酸维生素A、1.0mg的维生素E、0.13mg的维生素B1、0.15mg的维生素B2、0.5mg的维生素B6、0.2μg的维生素B12、10mg的维生素C、10μg的生物素、1.7mg的烟酰胺、50μg的叶酸、0.5mg的泛酸钙、适量的矿物质混合物、1.75mg的硫酸亚铁、0.82mg的氧化锌、25.3mg的碳酸镁、15mg的磷酸一钾、55mg的磷酸二钙、90mg的柠檬酸钾、100mg的碳酸钙和24.8mg的氯化镁混合以制备颗粒，但是可以根据用途进行各种改变并且制备成各种制剂。此外，维生素与矿物质混合物的组成比可以任意调节，并且可以根据保健功能食品的常规制备方法将上述成分混合来制备食品。
<制备实施例5.制备保健功能饮品>
将1g的本发明的实施例1中的忍冬花提取物、0.1g的柠檬酸、100g的低聚果糖和900g的纯净水混合并且搅拌，根据饮品的常规制备方法加热、过滤、灭菌和冷藏，以制备饮品。
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