一种蒙药肋柱花提取物的制备
阅读说明：本技术 一种蒙药肋柱花提取物的制备 (Preparation method of Mongolian medicine extract of costaria ) 是由 付明海 阿丽沙 于 2021-06-29 设计创作，主要内容包括：本发明提供了一种蒙药肋柱花提取物的制备；包括以下步骤：步骤1,取肋柱花,粉碎、过筛,加二氯甲烷,回流提取,滤过；步骤2,将滤液进行处理,回收二氯甲烷,滤渣中加入乙醇,回流提取,滤过,将滤液进行处理,回收乙醇至浸膏状；步骤3,将浸膏进行干燥,即可。本发明利用高灵敏的UPLC-MS技术对蒙药肋柱花提取物的化学成分进行鉴定分析,再用电子舌技术检测肋柱花提取物对碱基性苦味、酸性苦味回味、涩味回味、盐酸盐苦味、酸性苦味先味和涩味等六种味觉传感器的苦味强度,对本发明方法工艺参数进行调整,进而得到本发明方法。本发明所涉及方法制备得到的蒙药肋柱花提取物对小鼠胃排空和小肠运动研究有着指导性意义。(The invention provides a preparation method of a Mongolian medicine extract of lomatogonium carinthiacum; the method comprises the following steps: step 1, taking the lomatogonis, crushing, sieving, adding dichloromethane, performing reflux extraction, and filtering; step 2, treating the filtrate, recovering dichloromethane, adding ethanol into filter residue, performing reflux extraction, filtering, treating the filtrate, and recovering ethanol to obtain an extract; and 3, drying the extract to obtain the finished product. The invention utilizes a high-sensitivity UPLC-MS technology to identify and analyze the chemical components of the Mongolian medicine echeveria costata extract, and then uses an electronic tongue technology to detect the bitter intensity of the echeveria costata extract on six taste sensors of basic bitter taste, acidic bitter taste aftertaste, astringent aftertaste, hydrochloride bitter taste, acidic bitter taste first taste, astringent taste and the like, and adjusts the technological parameters of the method, thereby obtaining the method. The Mongolian medicine ribbonfil extract prepared by the method has guiding significance for the research of gastric emptying and small intestine movement of mice.)
技术领域
本发明属于蒙药肋柱花提取物的制备方法领域；尤其涉及一种蒙药肋柱花提取物的制备。
背景技术
肋柱花是一种蒙医特色药材。味极苦，具有平息“协日”、健胃、愈伤、清热的功效，常用于治疗“协日”热、伤寒、黄疸、流感、中暑发热、瘟疫、肝胆热、伤热、胃“协日”等病症。肋柱花也是蒙医治疗肝胆疾病的主要传统药物。曾研究表明，它对消化不良、胆囊肿胀、黄疸和肝胆炎症有治疗作用。随后又发现蒙药肋柱花的黄酮类化合物具有降低血脂和治疗肥胖的功能。此外，有研究报道，龙胆科植物獐牙菜是治疗恶心、胃轻瘫、胃迟缓等胃肠疾病的传统药物。然而，肋柱花作为蒙医特色药材对胃肠功能及机制方面的实验研究较少。
近年来，随着人们生活水平的改善，我国胃肠动力障碍性疾病的发病率越来越高，已经成为消化门诊的研究热点。胃肠动力是一种极其复杂的神经肌肉活动，它能够保证人的正常消化功能，其胃肠动力紊乱可能会导致多种胃肠动力障碍疾病。但随着现代医学的发展，越来越多的研究发现调节胃肠动力因素的多样性，主要包括胃肠激素、肠道菌群、神经递质、一些蛋白和离子通道，除此之外苦味及其受体也参与胃肠动力的调节。有研究报道，苦味物质苯甲地那胺可抑制胃排空，减少食物摄入量，奎宁可抑制胃肠运动功能，影响胃动素和胃饥饿素的释放。此外，许多研究报道，胃肠运动不仅受胃泌素，胃饥饿素和一氧化氮NO[134]调节，而且还受多巴胺(DA)和5-HT等神经递质的影响。DA是一种抑制性神经递质，具有舒张胃平滑肌，延缓胃排空的作用。而5-HT是一种兴奋性神经递质，由EC细胞合成并分泌，具有调节胃肠动力，收缩肠管，促进胃肠蠕动的作用。
为验证肋柱花提取物对胃肠功能的影响，根据肋柱花提取物化学成分检测结果，选择含獐牙菜苦苷较高的肋柱花，最终验证了肋柱花提取物对小鼠胃排空和小肠推进具有影响，再用DA和5-HT建立胃肠动力障碍模型，阐明蒙药肋柱花对神经递质紊乱性胃肠动力障碍疾病的影响。
发明内容
本发明的目的是提供了一种蒙药肋柱花提取物的制备。
本发明是通过以下技术方案实现的：
本发明涉及一种蒙药肋柱花提取物的制备，所述方法包括以下步骤：
步骤1，取肋柱花，粉碎、过筛，加二氯甲烷，回流提取，滤过；
步骤2，将滤液进行处理，回收二氯甲烷，滤渣中加入乙醇，回流提取，滤过，将滤液进行处理，回收乙醇至浸膏状；
步骤3，将浸膏进行干燥，即可。
优选地，步骤1中，所述肋柱花与所述二氯甲烷的用量比为1:10。
优选地，步骤1中，所述过筛的肋柱花粒径为80目。
优选地，步骤1中，所述回流提取的次数为2次，每次时间均为4小时。
优选地，步骤2中，所述回收的仪器为旋转蒸发仪RE-2010。
优选地，步骤2中，所述滤渣与所述乙醇的用量比为1:10。
优选地，步骤2中，所述回流提取的次数为2次，每次时间均为6小时。
优选地，步骤2中，所述乙醇的浓度为95wt％。
优选地，步骤3中，所述干燥的仪器为冷冻干燥机FD-1A-50。
优选地，步骤3中，所述干燥的时间为(3-5h)，干燥的温度为(-50℃)。
本发明具有以下优点：本发明利用高灵敏的UPLC-MS技术对蒙药肋柱花提取物的化学成分进行鉴定分析，再用电子舌技术检测肋柱花提取物对碱基性苦味、酸性苦味回味、涩味回味、盐酸盐苦味、酸性苦味先味和涩味等六种味觉传感器的苦味强度，对本发明方法工艺参数进行调整，进而得到本发明方法。
附图说明
图1是本发明所涉及的肋柱花提取物得苦度检测雷达图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。应当指出的是，以下的实施实例只是对本发明的进一步说明，但本发明的保护范围并不限于以下实施例。
实施例
本实施例涉及一种蒙药肋柱花提取物的制备，所述方法包括以下步骤：
步骤1，取肋柱花，粉碎、过筛，加二氯甲烷，回流提取，滤过；
步骤2，将滤液进行处理，回收二氯甲烷，滤渣中加入乙醇，回流提取，滤过，将滤液进行处理，回收乙醇至浸膏状；
步骤3，将浸膏进行干燥，即可。
进一步地，步骤1中，所述肋柱花与所述二氯甲烷的用量比为1:10。
进一步地，步骤1中，所述过筛的肋柱花粒径为80目。
进一步地，步骤1中，所述回流提取的次数为2次，每次时间均为4小时。
进一步地，步骤2中，所述回收的仪器为旋转蒸发仪RE-2010。
进一步地，步骤2中，所述滤渣与所述乙醇的用量比为1:10。
进一步地，步骤2中，所述回流提取的次数为2次，每次时间均为6小时。
进一步地，步骤2中，所述乙醇的浓度为95wt％。
进一步地，步骤3中，所述干燥的仪器为冷冻干燥机FD-1A-50。
进一步地，步骤3中，所述干燥的时间为(3-5h)，干燥的温度为(-50℃)。
对本实施例所涉及的方法得到的蒙药肋柱花提取物，进行化学成分分析，具体为以下步骤：
按照UPLC-MS条件检测正负离子模式下的肋柱花提取物，使用CompoundDiscoverer 3.0进行保留时间矫正、峰识别、峰提取等工作，再根据二级质谱信息利用Thermo mzCloud在线数据库和Thermo mzValut本地数据库进行物质鉴定后，共鉴定得到127种化学成分。
正离子模式下共鉴定得到80种化学成分，而含量大于1％的有18种，见表1所示。其中黄酮类、有机氮化合物、香豆素及其衍生物等化合物含量较多。
负离子模式下共鉴定得到47种化学成分，而含量大于1％的有12种(表2)。其中有机氧化合物、环烯醚萜类、苯及其衍生物、苷类等化合物含量较多。
表1
表2
对本实施例制备得到的蒙药肋柱花提取物进行苦度检测，具体步骤如下：
(1)电子舌检测不同浓度肋柱花提取物对六种苦味传感器应答结果表明，肋柱花提取物对酸性苦味先味传感器(C00)的灵敏度最高、苦度最高，并且随浓度的增加酸性苦味先味也增加，不同浓度肋柱花提取物苦味程度，见表3所示。
表3
由图1可见，肋柱花提取物0.4g·ml-1的各传感器响应值均高于0.1g·ml-1，其中酸性苦味先味传感器的应答最高。两个浓度下样品的的涩味在无味点以下，其中盐酸盐苦味接近于无味点，可见本次测试的该浓度下样品不能引起涩味传感器(AE1)和盐酸盐苦味(BT0)传感器的应答。
根据本实施例对肋柱花中含有多种化学成分，肋柱花主要含咕吨酮类、黄酮类及其苷类、三萜类及苷类、环烯醚萜和裂环烯醚萜，内酯类、有机酸及酚类化合物。其中环烯醚萜类具有抗氧化、保肝利胆、解痉、抗焦虑和降血脂，血糖等生物活性；黄酮类具有抗氧化、抗肿瘤、抗炎和改善胃肠动力作用。叶日贵等用水提取肋柱花后，经液质联用分析，共检测到12个化合物，包括獐牙菜苦苷、槲皮素、木犀草素-7-0-葡萄糖苷、6”-O-[(E)-cinnamoyl]gentiobiosylg enipin、(1S，4As，6S，7As)-1，4a，5，6，7，7a-hexahydro-6-hydroxy-7-methylene-1-(O-β-D-glucopylanosyl)-cyclopenta[c]pyran-4-carbaldehyde等，其余7个为未知化合物。陈玉兰等用肋柱花氯仿提取物进行分离纯化，共得到红白金花内酯，1-羟基-3,7,8-三甲氧基口山酮，1-羟基-3,5,8-三甲氧基口山酮，8-羟基-1,3,5-三甲基口山酮等4种化合物。贾凌云等报道，肋柱花75％乙醇提取物主要有呫吨酮类、黄酮类、三萜类、环烯醚萜及裂环烯醚萜，并且对其化学成分进行研究发现10种化合物，其中1,8-二羟基-3,4,5-三甲氧基呫吨酮、1-羟基-3,5,8-三甲氧基呫吨酮、1-羟基-3,7,8-三甲氧基呫吨酮、8-羟基-1,3,5-三甲氧基呫吨酮、槲皮素、5,7,3',4',5'-五羟基黄酮等6种为首次从肋柱花属种分离得到的化合物。此外，他们再以同样的方法对肋柱花化学成分进行分析后，发现8种化合物，分别鉴定为2a-羟基齐墩果酸、乌苏酸3β-羟基-乌索-11,12-烯-28,13β内脂、阿魏酸、山奈酚、胡萝卜苷、芹菜素-7-0-葡萄糖苷、木犀草素-7-0-葡萄糖苷、獐牙菜苦苷。其中前5个为新化合物。在本研究中，本发明所涉及的方法是：首先用10倍量的二氯甲烷，回流提取2次/4h，再用10倍量95％的乙醇，回流提取2次/6h，得到肋柱花提取物；本发明采用超高效液相色谱串联质谱色谱技术对肋柱花提取物的化学成分进行了定性、定量分析，发现127种化合物，其中含量大于1％的有30种化合物，主要包括黄酮类、环烯醚萜、香豆素及其衍生物、有机氧化合物、羧酸及其衍生物、脂质化合物、香豆素及其衍生物、肉桂酸及其衍生物和苯及其取代衍生物等，其中獐牙菜苦苷、獐牙菜苷、二氮杂苯、龙胆山酮酚、苦杏仁苷、橙皮素和香豆素等苦味成分含量占总体比例的66％。
由此可见，本发明提取方法是肋柱花苦味成分最佳提取工艺。电子舌是通过传感器阵列与样品直接接触，收集样品的特征电信号，把收到的信号数据化，获得样品的感官特性的一种新型技术。本发明利用电子舌对肋柱花提取物进行苦味强度检测后发现对酸性苦味先味传感器的灵敏度最高。肋柱花主要苦味成分来源是酸性成分，且UPLC-MS检测出的化学成分主要以酸性为主。
综合上述，肋柱花提取物主要包括獐牙菜苦苷、獐牙菜苷、二氮杂苯、龙胆山酮酚、苦杏仁苷、橙皮素和香豆素等苦味成分，且主要以酸性为主。本实验初步探讨了蒙药肋柱花的味觉表征，提供了一种新的肋柱花提取工艺，为今后更好的提取物肋柱花苦味成分提供基础。
本发明利用高灵敏的UPLC-MS技术对蒙药肋柱花提取物的化学成分进行鉴定分析，再用电子舌技术检测肋柱花提取物对碱基性苦味、酸性苦味回味、涩味回味、盐酸盐苦味、酸性苦味先味和涩味等六种味觉传感器的苦味强度，进而对本发明方法进行调整，得到本发明方法。本发明所涉及方法制备得到的蒙药肋柱花提取物对小鼠胃排空和小肠运动研究有着指导性意义。
以上对本发明的具体实施例进行了描述。需要理解的是，本发明并不局限于上述特定实施方式，本领域技术人员可以在权利要求的范围内做出各种变形或修改，这并不影响本发明的实质。
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