从艳山姜叶中提取二氢醉胡椒素的方法
阅读说明：本技术 从艳山姜叶中提取二氢醉胡椒素的方法 (Method for extracting dihydromethysticin from alpinia japonica leaves ) 是由 张嫩玲 游华林 沈祥春 于 2021-09-24 设计创作，主要内容包括：本发明公开了从艳山姜叶中提取二氢醉胡椒素的方法,属于天然产物提取技术领域。本发明所述二氢醉胡椒素的提取方法主要包括醇提、萃取、结晶以及重结晶等步骤。本发明的二氢醉胡椒素的提取方法,操作简便、快速,提取分离过程中主要采用重结晶法,工艺方法简单环保,且由该方法获得的二氢醉胡椒素,其纯度高于90％。此外,通过本发明所述的提取方法,可使二氢醉胡椒素的提取率达到0.88％,远高于现有技术中的其它各种提取方法。(The invention discloses a method for extracting dihydromethysticin from alpinia japonica leaves, belonging to the technical field of natural product extraction. The extraction method of the dihydromethysticin mainly comprises the steps of alcohol extraction, crystallization, recrystallization and the like. The extraction method of the dihydromethysticin is simple and rapid to operate, a recrystallization method is mainly adopted in the extraction and separation process, the process method is simple and environment-friendly, and the purity of the dihydromethysticin obtained by the method is higher than 90%. In addition, the extraction method of the invention can lead the extraction rate of the dihydromethysticin to reach 0.88 percent, which is much higher than other extraction methods in the prior art.)
技术领域
本发明属于天然产物提取技术领域，具体涉及从艳山姜叶中提取二氢醉胡椒素的方法。
背景技术
艳山姜(Alpinia zerumbet(Pers.)Burtt.et Smith)为姜科山姜属的多年生草本植物，资源分布广泛。艳山姜辛、涩、温，具有行气止痛，温中燥湿，健脾暖胃功效，用于脘腹冷痛，消化不良，胸腹胀痛，痰湿积滞，呕吐腹泻，咳嗽等症状。
现代药理研究表明艳山姜对心血管系统、消化系统、血液系统等均有较好的作用。艳山姜药材中含有的化学成分为其药理活性提供一定的药效物质基础，目前，研究者们集中于对艳山姜中的药用部位的化学成分和药理活性研究，研究表明，艳山姜药材中主要含挥发油类、黄酮类和二萜类、有机酸类等化合物，目前已确定化学成分100余种，其中包括二氢醉胡椒素。
二氢醉胡椒素(Dihydro-5,6-dehydrokavain，DDK)，分子式为C14H14O3，具有神经保护作用、抗肥胖、抗病毒，抗细胞增殖等活性。二氢醉胡椒素的结构式，如下：
目前，从艳山姜叶中分离二氢醉胡椒素的方法，都是基于二氢醉胡椒素的活性开发，获得量少，因此并没有合适的提取分离方法以获得大量的该化合物的提取分离方法。并且，目前分离二氢醉胡椒素的方法主要是柱层析法，该方法繁琐耗时耗材，不利于生产开发。因此，对于二氢醉胡椒素的提取方法的优化是亟待解决的问题。
发明内容
针对现有技术存在的不足，本发明提供一种从艳山姜叶中提取分离二氢醉胡椒素的方法，该方法简便、快速、环保，并且分离得到的化合物纯度高。
本发明的技术方案如下：
从艳山姜叶中提取二氢醉胡椒素的方法，步骤如下：
将艳山姜叶干燥、粉碎，对粉碎后的艳山姜叶进行回流提取，过滤除渣，获得提取液，将提取液减压浓缩至一定体积，去除色素，获得去除色素后的浓缩液，将浓缩液中的溶剂回收，获得浸膏A。向浸膏A中加入萃取剂进行萃取，收集萃取液，浓缩获得浸膏B。向浸膏B中加入乙酸乙酯和甲醇的混合溶液或氯仿和甲醇的混合溶液至浸膏B完全溶解，静置析晶，过滤，获得粗晶A，然后将滤液浓缩获得浸膏C。向浸膏C中加入二氯甲烷和甲醇的混合溶液至浸膏C完全溶解，静置析晶，过滤，获得粗晶B。将粗晶A和粗晶B合并，重结晶，获得二氢醉胡椒素。
上述提取方法中，回流提取所采用的溶剂选自乙醇、甲醇或氯仿中的一种或几种。优选地，回流提取溶剂选自乙醇，并进一步优选为95％乙醇。
上述提取方法中，艳山姜叶与回流提取溶剂的料液比(g/mL)为1:15～25。优选地，料液比为1:20。
上述提取方法中，回流提取的条件为：提取温度为76～85℃，提取时间110～150min。优选地，提取温度为80℃，提取时间为120min。
上述提取方法中，回流提取次数为1～3次。
上述提取方法中，在去除色素之前，将提取液减压浓缩至总体积的1/5。
上述提取方法中，采用活性炭去除色素。活性炭的添加量以能够充分去除提取液中的色素为标准；优选地，活性炭的添加量为1～3％。活性炭去除方法为：在加入活性炭充分吸附色素后，过滤即可除去活性炭渣。
上述提取方法中，萃取剂为乙酸乙酯或氯仿中的一种。
上述提取方法中，在浸膏A的萃取过程中，萃取剂的添加量以能够实现浸膏A的充分萃取为准，可选择为浸膏A体积的2倍。萃取次数的选择也以能够实现浸膏A的充分萃取为准，可选择为1～3次。
上述提取方法中，乙酸乙酯和甲醇的混合溶液中，乙酸乙酯和甲醇的体积比为9:1～1:1。优选地，乙酸乙酯和甲醇的体积比为7:3。
上述提取方法中，氯仿和甲醇的混合溶液中，氯仿和甲醇的体积比为1:1～7:3。优选地，氯仿和甲醇的体积比为6:4。
上述提取方法中，静置析晶可通过静置3～5天，或者混合溶液的体积挥发至混合溶液原体积的1/5时来实现。静置析晶的最终结果是析出大量无色针晶。
上述提取方法中，在获得粗晶A和粗晶B的过滤过程中，过滤选自减压抽滤，真空度为0.08MPa。优选地，在过滤时采用甲醇清洗结晶。
上述提取方法中，二氯甲烷和甲醇的混合溶液中，二氯甲烷和甲醇的体积比为6:4～9:1。优选地，二氯甲烷和甲醇的体积比为8:2。
上述提取方法中，在粗晶B析晶困难时，可加入少许粗晶A作为晶种。
上述提取方法中，采用氯仿进行重结晶。采用氯仿重结晶的条件为，向粗晶中加入氯仿放至40～50℃环境中至粗晶溶解，然后在室温下重结晶。在本发明中，采用甲醇也可实现重结晶的目的，但甲醇在室温下的挥发效果不如氯仿，因此，在具体的实施案例中，优选地采用氯仿进行重结晶。
本发明的有益效果为：
本发明的二氢醉胡椒素的提取方法，操作简便、快速，提取分离过程中主要采用重结晶法，工艺方法简单环保，且由该方法获得的二氢醉胡椒素，其纯度高于90％。此外，通过本发明所述的提取方法，可使二氢醉胡椒素的提取率达到0.88％，远高于现有技术中的其它各种提取方法。
附图说明
图1为二氢醉胡椒素的核磁共振氢谱谱图；
图2为二氢醉胡椒素的核磁共振碳谱谱图。
具体实施方式
在本发明中所使用的术语，除非有另外说明，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。下面结合具体实施例，并参照数据进一步详细的描述本发明。以下实施例只是为了举例说明本发明，而非以任何方式限制本发明的范围。
实施例1
从艳山姜叶中提取二氢醉胡椒素，如下：
将2kg艳山姜叶(取自贵州省贞丰县连环乡)干燥、粉碎，采用20L 95％乙醇(料液比1:20)对粉碎后的艳山姜叶进行回流提取(提取温度为80℃，提取时间为2h)，回流提取2次，回流提取结束后，过滤除去药渣，获得提取液，将提取液减压浓缩至总体积的1/5，加入20g活性炭去除色素，得到去除色素后的浓缩液，对浓缩液进行减压浓缩，回收乙醇，获得浸膏A84g。将浸膏A用乙酸乙酯萃取3次，乙酸乙酯在每次萃取中的用量均为5000mL，收集合并3次的萃取液，减压浓缩获得浸膏B 49g。向浸膏B中加入150mL乙酸乙酯和甲醇的混合溶液(乙酸乙酯和甲醇的体积比为7:3)，将浸膏B完全溶解，静置5天，析出针状结晶；对析晶后的溶液体系进行减压抽滤(真空度为0.08MPa)，抽滤过程中用少量甲醇清洗结晶，获得粗晶A13.7g，然后，将抽滤获得的滤液进行减压浓缩，获得浸膏C 34.3g。向浸膏C中加入100mL二氯甲烷和甲醇的混合溶液(二氯甲烷和甲醇的体积比为8:2)，静置5天，析出针状结晶，对析晶后的溶液体系进行减压抽滤(真空度为0.08MPa)，抽滤过程中用少量甲醇清洗结晶，获得粗晶B 6.3g。将粗晶A和粗晶B合并，用氯仿进行重结晶(重结晶的步骤为：将合并的粗晶储存于250mL锥形瓶中，在45℃水浴条件下，加入氯仿15mL至粗晶完全溶解，在室温25℃条件下静置挥干氯仿溶液，取锥形瓶壁上透明针晶)，获得二氢醉胡椒素17.6g，纯度为93％。
图1和图2分别展示了二氢醉胡椒素的核磁共振氢谱和碳谱，谱图数据如下：
1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ:7.32-7.10(5H,m,H-2',3',4',5',6'),5.93(1H,d,J＝2.2Hz,H-5),5.52(1H,d,J＝2.2Hz,H-3),3.82(3H,s,4-OCH3),2.97(2H,t,J＝7.6Hz,H-7),2.80(2H,t,J＝7.6Hz,H-8)；13C-NMR(100MHz,DMSO-d6)δ:164.8(C-2),86.9(C-3),172.5(C-4),100.6(C-5),166.4(C-6),34.8(C-7),32.4(C-8),139.9(C-1'),128.1(C-2'),128.2(C-3',5'),126.1(C-4'),55.5(4-OCH3)。
实施例2
将2kg艳山姜叶(取自贵州省贞丰县连环乡)干燥、粉碎，采用20L 95％乙醇(料液比1:20)对粉碎后的艳山姜叶进行回流提取(提取温度为80℃，提取时间为2h)，回流提取3次，回流提取结束后，过滤除去药渣，获得提取液，将提取液减压浓缩至总体积的1/5，加入20g活性炭去除色素，得到去除色素后的浓缩液，对浓缩液进行减压浓缩，回收乙醇，获得浸膏A 93g。将浸膏A用氯仿萃取3次，氯仿在每次萃取中的用量均为5000mL，收集合并3次的萃取液，减压浓缩获得浸膏B 45g。向浸膏B中加入150mL氯仿和甲醇的混合溶液(氯仿和甲醇的体积比为6:4)，将浸膏B完全溶解，静置5天，析出针状结晶；对析晶后的溶液体系进行减压抽滤(真空度为0.08MPa)，抽滤过程中用少量甲醇清洗结晶，获得粗晶A 10.4g，然后，将抽滤获得的滤液进行减压浓缩，获得浸膏C 32.3g。向浸膏C中加入100mL二氯甲烷和甲醇的混合溶液(二氯甲烷和甲醇的体积比为8:2)，静置5天，析出针状结晶，对析晶后的溶液体系进行减压抽滤(真空度为0.08MPa)，抽滤过程中用少量甲醇清洗结晶，获得粗晶B 2.9g。将粗晶A和粗晶B合并，用氯仿进行重结晶(重结晶的步骤为：将合并的粗晶储存于250mL锥形瓶中，在45℃水浴条件下，加入氯仿15mL至粗晶完全溶解，在室温25℃条件下静置挥干氯仿溶液，取锥形瓶壁上透明针晶)，获得二氢醉胡椒素11.4g，纯度为94％。
实施例3
将2kg艳山姜叶(取自贵州省贞丰县连环乡)干燥、粉碎，采用20L甲醇(料液比1:20)对粉碎后的艳山姜叶进行回流提取(提取温度为70℃，提取时间为2h)，回流提取3次，回流提取结束后，过滤除去药渣，获得提取液，将提取液减压浓缩至总体积的1/5，加入20g活性炭去除色素，得到去除色素后的浓缩液，对浓缩液进行减压浓缩，回收甲醇，获得浸膏A71g。将浸膏A用氯仿萃取3次，氯仿在每次萃取中的用量均为5000mL，收集合并3次的萃取液，减压浓缩获得浸膏B 36g。向浸膏B中加入150mL氯仿和甲醇的混合溶液(氯仿和甲醇的体积比为6:4)，静置5天，析出针状结晶；对析晶后的溶液体系进行减压抽滤(真空度为0.08MPa)，抽滤过程中用少量甲醇清洗结晶，获得粗晶A 7.9g，然后，将抽滤获得的滤液进行减压浓缩，获得浸膏C 27.1g。向浸膏C中加入100mL二氯甲烷和甲醇的混合溶液(二氯甲烷和甲醇的体积比为8:2)，静置5天，析出针状结晶，对析晶后的溶液体系进行减压抽滤(真空度为0.08MPa)，抽滤过程中用少量甲醇清洗结晶，获得粗晶B 1.1g。将粗晶A和粗晶B合并，用氯仿进行重结晶(重结晶的步骤为：将合并的粗晶储存于250mL锥形瓶中，在45℃水浴条件下，加入氯仿15mL至粗晶完全溶解，在室温25℃条件下静置挥干氯仿溶液，取锥形瓶壁上透明针晶，获得二氢醉胡椒素8.1g，纯度为94％。
实施例4
将2kg艳山姜叶(取自贵州省贞丰县连环乡)干燥、粉碎，采用20L氯仿(料液比1:20)对粉碎后的艳山姜叶进行回流提取(提取温度为60℃，提取时间为1h)，回流提取3次，回流提取结束后，过滤除去药渣，获得提取液，将提取液减压浓缩至总体积的1/5，加入20g活性炭去除色素，得到去除色素后的浓缩液，对浓缩液进行减压浓缩，回收氯仿，获得浸膏48g。
在本实施例中，采用氯仿对艳山姜叶进行回流提取，结果显示，总浸膏量远小于实施例1～3，因此难以获得较高提取率的二氢醉胡椒素。
实施例5
将2kg艳山姜叶(取自贵州省贞丰县连环乡)干燥、粉碎，采用20L 95％乙醇(料液比1:20)对粉碎后的艳山姜叶进行回流提取(提取温度为80℃，提取时间为2h)，回流提取2次，回流提取结束后，过滤除去药渣，获得提取液，将提取液减压浓缩，获得浸膏A 107g。将浸膏A用乙酸乙酯萃取3次，乙酸乙酯在每次萃取中的用量均为5000mL，收集合并3次的萃取液，减压浓缩获得浸膏B 61g。取浸膏B进行硅胶柱层析(硅胶粒径为200-300目)，洗脱液依次为石油醚:乙酸乙酯(95:5)2L、石油醚:乙酸乙酯(9:1)3L、石油醚:乙酸乙酯(8:2)4L、石油醚:乙酸乙酯(7:3)4L、石油醚:乙酸乙酯(6:4)2L、石油醚:乙酸乙酯(1:1)2L、石油醚:乙酸乙酯(2:3)2L以及甲醇3L，收集流出液，并在洗脱过程中，对流出液进行TLC薄层色谱检测，确定二氢醉胡椒素从石油醚:乙酸乙酯(8:2)的洗脱液中流出，持续进行TLC薄层色谱检测，收集含有二氢醉胡椒素的流出液，减压浓缩，得到含二氢醉胡椒素的粗流分13g。将该粗流分进行硅胶柱层析(硅胶粒径为200-300目)，以石油醚:乙酸乙酯(90:10)进行洗脱，经TLC检测合并得到二氢醉胡椒素8g，纯度85％。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。
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