一种三萜类化合物及其制备方法和应用
阅读说明：本技术 一种三萜类化合物及其制备方法和应用 (Triterpenoid compound and preparation method and application thereof ) 是由 魏文文 于 2021-07-15 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种三萜类化合物及其制备方法和应用。三萜类化合物,结构式如式I所示。本发明从多穗稠分离出一个具有抗肿瘤活性的三萜类化合物,能够用于制备抗肿瘤药物,尤其是抗肺癌、宫颈癌、肝癌的药物,具有较好的应用价值。(The invention discloses a triterpenoid compound and a preparation method and application thereof. The structural formula of the triterpenoid is shown as a formula I. The triterpenoid with the anti-tumor activity is separated from the thick panicle, can be used for preparing anti-tumor medicines, particularly medicines for resisting lung cancer, cervical cancer and liver cancer, and has a good application value.)
技术领域
：本发明属于天然产物领域，具体涉及一种三萜类化合物及其制备方法和应用。
背景技术
：多穗稠(Lithocarpus litseifolius(Hance)Chun)是一种具有很长食用历史的民间非糖甜味饮品，为壳斗科(Fagaceae)，柯属(Lithocarpus)常绿植物。多穗稠多以野生状态分布于长江以南各省区，而以湖南、福建、江西、广西、安徽等省资源丰富而集中。以叶入药，可用于防治温热痢疾、皮肤瘙痒、痈疽恶疮等症，还有“二抗一保”(抗氧化、保肝、抗癌变)，“双降”(降血糖、降血脂)的作用。根据文献报道多穗稠的黄酮类化合物是其主要成分和功能性物质，其它类化学成分报道比较少。
发明内容
：本发明的第一个目的是提供一种具有抗肿瘤活性的三萜类化合物lithocarpicacid O，其结构式如式I所示：
本发明的第二个目的是提供一种上述三萜类化合物的制备方法，其是从多穗稠植株中分离获得的。
具体包括以下步骤：
将多穗稠用体积分数95％乙醇溶液浸提，提取液浓缩得乙醇浸膏，乙醇浸膏用体积分数20％乙醇溶液沉淀，离心，得到沉淀部，沉淀部经正相硅胶柱层析，以三氯甲烷-甲醇10:0～70:30v/v梯度洗脱，收集经TLC检查，展开剂为氯仿-甲醇8:2v/v，硫酸香草醛显色，Rf值0.65的馏分St-10，再经反相胶柱层析，以甲醇-水40:60～80:20v/v梯度洗脱，收集经TLC检查，展开剂为氯仿-甲醇8:2v/v，硫酸香草醛显色，Rf值0.62的馏分St-10-p，再经Sephadex LH-20柱色谱以甲醇洗脱反复纯化得到lithocarpic acid O。
本发明的第三个目的是提供多穗稠在制备上述三萜类化合物中的应用。
本发明的第四个目的是提供上述三萜类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
本发明的第五个目的是提供一种抗肿瘤药物，其包括上述三萜类化合物作为活性成分。
所述的抗肿瘤药物是抗肺癌、宫颈癌或肝癌的药物。
本发明的第五个目的是提供多穗稠在制备上述三萜类化合物中的应用。
本发明从多穗稠分离出一个具有抗肿瘤活性的三萜类化合物，能够用于制备抗肿瘤药物，尤其是抗肺癌、宫颈癌、肝癌的药物，具有较好的应用价值。
附图说明
：图1是化合物1的主要1H-1H COSY(粗线)和HMBC(箭头)相关信号。
具体实施方式
：
以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。
实施例1：
1材料仪器
柱层析用硅胶(青岛海洋化工有限公司)；柱层析反相硅胶Develosil ODS(粒径75μm，日本富士化学公司)；Sephadex LH-20(瑞典Amersham Biosciences公司)；柱层析用MCI(德国Merck公司)；薄层层析板TLC(烟台江友硅胶开发有限公司)；反相(RP-18)TLC板(德国Merck公司)；ESI-MS(美国Applied Bio-systems公司)；1H NMR和13C NMR(Bruker DRX-500型，瑞士Bruker公司)；半制备HPLC(日本Shimadzu公司)；四种细胞株(中科院昆明动物研究所)；所用试剂为分析纯或色谱纯。
多穗稠于2013年3月采自广东省惠州市罗浮山，由中国科学院华南植物园刑福武研究员鉴定，全株多穗稠晾干后粉碎备用。
2提取分离
多穗稠干粉2.77kg，用体积分数95％乙醇溶液室温浸泡提取4次，每次48小时，合并提取液，减压浓缩得乙醇浸膏0.97kg，乙醇浸膏用体积分数20％乙醇溶液沉淀过夜，离心，得到沉淀部(259g)和上清液(463g)两部分。沉淀部经正相硅胶柱层析，以三氯甲烷-甲醇梯度(10:0～70:30v/v)洗脱，收集流份，经TLC检查后合并为15个组分(St-1～St-15)。St-10(8.2g)(展开剂为氯仿-甲醇8:2v/v，硫酸香草醛显色，Rf值0.65)经反相胶柱层析，以甲醇-水(40:60～80:20v/v)洗脱，经TLC检查合并相同组分，得到17个亚组分(St-10-a～St-10-q)。St-10-p(展开剂为氯仿-甲醇8:2v/v，硫酸香草醛显色，Rf值0.62)经SephadexLH-20柱色谱以甲醇洗脱反复纯化得到化合物1(6mg)。
3结构鉴定
化合物1，白色粉末，易溶于吡啶；HR-ESI-MS:m/z515.3707[M+Na]+(calcd for C30H52O5Na+,515.3693,error 2.7ppm)；1H-NMR(500Hz)and13C-NMR(125Hz)见下表1
表1氢谱和碳谱数据(pyridine-d5)
根据HR-ESI-MS分子离子峰，确定化合物1的分子量为492；由分子式计算该化合物不饱和度为5。1H-NMR谱的高场有7组甲基质子信号δH 1.05(3H,s),1.02(3H,s),1.58(3H,s),1.56(3H,s),0.94(3H,s),1.46(3H,s),1.48(3H,s)；一个特征的AB偶合的质子信号δH0.77(1H,d,J＝4.1Hz),0.44(1H,d,J＝4.1Hz)；低场区域信号δH 3.81(1H,d,J＝8.5Hz)为连羟基的碳上的质子信号；13C-NMR和DEPT谱给出7个甲基碳信号δC(19.3,19.0,26.4,26.6,20.3,27.4,32.4)，7个季碳信号δC(177.6,75.7,23.3,27.9,45.7,49.7,73.3)，和一个羰基碳δC(177.6)信号，综合以上信息可以推出该化合物是一个环菠萝烷型三萜，结合二维核磁共振谱(COSY和HSQC)，对氢谱和碳谱数据进行了归属(见表1)。HMBC远程相关数据δH 1.46(3H,s,H-29),1.48(3H,s,H-30)和δC 46.4(C-5)相关，δH 1.46(3H,s,H-29),1.48(3H,s,H-30)和δC 75.7(C-4)相关(图1)，可推出4位碳上连接这两个甲基，且4位碳是一个含氧季碳；δH 1.05(3H,s,H-18),1.02(3H,s,H-21)和δC 53.6(C-17)相关，可推出这两个甲基连在C-17侧链上；由δH 3.81(1H,d,J＝8.5Hz,H-24)与δC 26.4(C-26),26.6(C-27)相关，δH 1.58(3H,s,H-26),1.56(3H,s,H-27)与δC 73.3(C-25)相关，δH 1.58(3H,s,H-26),1.56(3H,s,H-27)与δC 79.6(C-24)相关，可推出一个链状二元醇片段；由δH 1.02(3H,s,H-21)和δC 53.6(C-17)相关，可推出链状二元醇片段连在C-17。化合物1结构鉴定为一个新化合物，命名为lithocarpic acid O，结构式如式I所示。
4活性测定
供试样品为新化合物1，阳性对照为阿霉素(ADM)，以DMSO溶解成10mmol/L备用。取对数生长的A549、HeLa、HepG2、MCF-7细胞加入96孔板中，每孔100μL中含有5000个细胞。再加入新化合物1，并以ADM做对照。每个样品设6个浓度梯度，分别为50、10、2、0.4、0.08、0.016μmol/L，每个处理3个重复，置二氧化碳培养箱中37℃培养72h，实验终止前4h前加入20μL MTT(5mg/mL)溶液，再培养4h，弃去培养液加入0.15mL DMSO，待结晶溶解后在酶联检测仪上检测570nm波长下每孔的OD值。按下列公式求出生长抑制率，再由SPSS(17.0)软件求出IC50值。
抑制率(IR)＝(1-用药组OD值/对照组OD值)×100％
实验结果如下表2：
表2新化合物1的细胞毒活性(IC50,μM)
IC50用Mean±SD表示。
结果显示新化合物1对肺癌细胞(A549)、宫颈癌细胞(HeLa)、肝癌细胞(HepG2)有抑制活性。