详细说明

本发明提供了包含异噁唑啉化合物和莫西菌素微球的可注射组合物，其具有针对寄生虫的长期功效、安全性、物理和化学稳定性以及降低的注射部位刺激风险。

可注射混悬剂的物理稳定性对于允许通过注射在一种常见制剂中包含正确量的异噁唑啉化合物和莫西菌素两者的均匀混悬剂来正确给药是特别重要的。本发明人必须克服两种不同固体组分，异噁唑啉(结晶)颗粒和莫西菌素微球，的密度不同的问题——难以提供均匀的混悬剂。制剂中的化学稳定性对于莫西菌素尤其具有挑战性。

应当形成稳定的混悬剂，其可以通过轻轻摇动容易地与水性载体重新悬浮，而不会引起悬浮颗粒的起泡或漂浮或沉降，这将影响给药的精度。

此外，重要的是待注射的最终组合物在再悬浮/重构后的整个使用期间保持物理(和化学)稳定。

另外，有利的是，在注射后该注射对动物是安全的，并且不会引起副作用，特别是没有不可接受的注射部位刺激。

更重要的是，组合物可以通过已知和可接受的程序灭菌，因为它将通过注射施用。

本发明提供了这种有利的组合物。

异噁唑啉化合物是本领域已知的，并且已知这类化合物具有优异的对抗寄生虫感染(例如蜱和跳蚤)的活性。下面提供了用于本发明的各种异噁唑啉化合物的实施方案。

注射部位刺激是当动物接受药物组合物的注射时在注射部位和周围组织处产生的损伤。这种损伤可以是肿胀、皮肤变色和组织坏死。尽管一些注射部位刺激在一些动物中是不可避免的，但兽医和动物主人通常认为持续超过2至3天的超过2×2cm的注射部位肿胀是不可接受的。最小注射部位刺激意指小于2×2cm的注射部位刺激，其持续小于2至3天。在动物接受注射如狂犬病疫苗的情况下，兽医及其客户通常接受该标准。

如本文所用，报告的粒度数据是通过本领域技术人员熟知的常规颗粒技术测量的体积加权，例如静态光散射(也称为激光衍射)、图像分析或筛分。下面提供了粒度测量的更多讨论。

可注射是指混悬剂可以容易地从安瓿/小瓶/容器中取出到具有针头的注射器中，随后从这样的注射器通过针头肌内(im)或皮下(sc)注射(例如18号针)。

混悬剂中活性成分的粒度可影响再悬浮性和可注射性，即它应足够小以防止压实或结块并促进再悬浮。

药学上可接受的赋形剂是形成药物产品的媒介物或介质的惰性物质。

寄生虫“侵染”是指存在对人或动物构成风险的数量的寄生虫。存在可以在环境中，例如在动物垫料中、在动物的皮肤或毛皮上等。当提及的侵染是在动物体内，例如在血液或其它内部组织中时，除非另有说明，否则术语侵染也旨在与术语“感染”同义，如该术语在本领域中通常理解的。

水性混悬剂意指包含与包含水或水混溶性液体的水性液体混合但不溶于其中的颗粒的组合物。

液体水性媒介物是用作溶剂(或稀释剂)的水性载体或惰性介质，其中活性剂被配制和/或施用。

可重构(或可再悬浮)制剂是一种制剂，其中液体媒介物是一个容器，一种或多种活性成分固体在另一个容器中，并且两个容器的内容物在施用于动物之前的某个时间点组合以形成液体溶液或混悬剂最终制剂。

重构是将液体/稀释剂添加到干成分中以制备溶液或混悬剂的过程。

水性液体媒介物含有用于制剂的一些赋形剂，例如一种或多种水性稀释剂、悬浮剂、一种或多种润湿剂、一种或多种防腐剂等。

本发明的药物组合物在控制外寄生虫，即对人和牲畜和伴侣动物有害或在人和牲畜和宠物中传播疾病或作为疾病载体的节肢动物中具有特别的价值。

重要的节肢动物寄生虫-外寄生虫(昆虫和螨虫害虫)在下文更详细地描述。

叮咬昆虫包括，例如，migrating diperous larvae，如皮蝇属(Hypoderma sp.)，马的胃蝇属(Gastrophilus sp.)和在啮齿动物中的黄蝇属(Cuterebra sp.)，以及各种类型的叮咬蝇和蚊子属(mosquitoes spp.)，例如，吸血成虫包括例如角蝇或西方角蝇(Haematobia irritans)、马蝇或虻属(Tabanus spp.)、厩蝇或厩螫蝇Stomoxyscalcitrans、黑蝇或蚋属(Simulium spp.)、斑虻或斑虻属(Chrysops spp).、虱蝇或羊蜱蝇(Melophagus ovinus)、舌蝇或舌蝇属(Glossina spp.)。寄生性蝇蛆包括例如肤蝇(羊狂蝇(Oestris ovis)和黄蝇属(Cuterebra spp.))、丽蝇(blow flies)或绿蝇属(Phaeniciaspp.)、旋蝇或嗜人蝇(Cochliomyia hominivorax)、牛蛴螬或皮蝇属(Hypoderma spp.)和羊毛虫(fleeceworm)。蚊子包括例如库蚊属(Culex spp.)、按蚊属(Anopheles spp.)和伊蚊属(Aedes spp.)。

螨包括鸡螨，鸡皮刺螨(Dermanyssus gallinae)；痒螨或痂螨或疥螨(Astigmata)，如疥螨科(Sarcoptidae spp.)，例如，Sarcoptes scabiei；疥螨，如虱科(Psoroptidae spp.)，包括牛蠕形螨(Chorioptes bovis)、绵羊蠕形螨(Psoroptes ovis)和犬蠕形螨(Demodex canis)；耳螨Otodectes cynotis；恙螨，例如长喙螨科(Trombiculidae spp.)，例如北美恙螨，Trombicula aifreddugesi。

蜱包括例如软体蜱，包括隐喙蜱属(Argasidae spp.)，例如锐缘蜱属(Argasspp.)和钝缘蜱属(Ornithodoros spp.)；硬体蜱，包括硬蜱属(Ixodidae spp.)，例如蓖麻硬蜱(Ixodes ricinus)、肩胛硬蜱(Ixodes scapularis)、血红扇头蜱(Rhipicephalussanguineus)、血蜱属(Haemaphysalis spp.)、矩头蝉属(Dermacentor reticulatus)；变异革蜱(Dermacentor variabilis)、美洲花蜱(Amblyomma americanum)和牛蜱属(Boophilusspp.)。

虱类包括例如吸虱，例如Menopon spp.和牛羽虱属(Bovicola spp.)；咬虱，例如，血虱属(Haematopinus spp.)、长颚虱属(Linognathus spp.)和牛羽虱属(Solenopotesspp.)。

蚤类包括例如栉首蚤属(Ctenocephalides spp.)，如犬蚤(Ctenocephalidescanis)和猫蚤(Ctenocephalides fells)；客蚤属(Xenopsylla spp.)如东方鼠蚤(印鼠客蚤(Xenopsylla cheopis))；和蚤属(Pulex spp.)，如人蚤(Pulex irritans)。

真臭虫包括例如臭虫科(Cimicidae)或例如普通床虱(温带臭虫Cimexlectularius)；椎猎蝽属(Triatominae spp.)包括锥蝽，也称为接吻蝽；例如，长红猎蝽(Rhodnius prolixus)和锥猎蝽属(Triatoma spp.)。

发明的组合物对于处理和控制寄生虫的各种生命周期阶段(包括卵、若虫和幼虫、幼年和成虫阶段)是有价值的。

为避免疑义，本文所用的“治疗”包括治疗性和姑息性治疗，“控制外寄生虫”包括杀死、驱避、驱逐、使之丧失能力、阻止、消除、减轻、最小化、根除动物上和动物环境中的害虫。

预防是阻止新的或进入的侵染或感染的建立。

“控制外寄生物侵染”意指全部或部分地预防侵染或减轻或减少动物体内和/或动物体上的寄生物数量，和/或抑制动物体内或动物体上寄生物侵染的发展。

“控制内寄生虫侵染”是指全部或部分地减轻或减少动物体内和/或动物体上的内寄生虫，例如线虫和绦虫寄生虫的数量，和/或抑制动物体内或动物体上寄生虫侵染的发展。

可以通过在宿主动物的尸检后直接计数内寄生物(特别是蠕虫)来评估对抗内寄生物的功效。

寄生虫数量，特别是胃肠蠕虫寄生虫的减少可以替代地通过粪便卵或差异幼虫计数间接测量。在这种情况下，组合物的有效量通过处理前后处理动物粪便中排泄的蠕虫卵或幼虫数量的减少来确定。

本发明的组合物通过非肠胃注射给药。组合物中活性成分的浓度需要足以提供所需的治疗或预防有效量，其体积取决于所治疗的动物对于可注射施用量是可接受的。

根据本发明的组合物用于治疗蠕虫感染，例如由选自以下的一种或多种蠕虫引起的感染：

钩口线虫属(Ancylostoma spp.)；Anecator spp.；鸡蛔虫属(Ascaridia spp.)；蛔虫属(Ascaris spp.)；布鲁丝虫属(Brugia spp.)；仰口线虫属(Bunostomum spp.)；毛细线虫属(Capillaria spp.)；夏氏线虫属(Chabertia spp.)；古柏线虫(Cooperia spp.)；杯口属(Cyathostomum spp.)；杯环属(Cylicocyclus spp.)；双冠属(Cylicodontophorusspp.)；杯冠线虫属(Cylicostephanus spp.)；喷口线虫属(Craterostomum spp.)；网尾线虫属(Dictyocaulus spp.)；棘唇线虫属(Dipetalonema spp.)；心丝虫属(Dirofilariaspp.)；龙线虫属(Dracunculus spp.)；蛲虫属(Enterobius spp.)；类丝虫属(Filaroidesspp.)；丽线虫属(Habronema spp.)；血矛线虫属(Haemonchus spp.)；异刺线虫属(Heterakis spp.)；猪圆形线虫属(Hyostrongylus spp.)；后圆线虫属(Metastrongylusspp.)；Meullerius spp.；板口线虫属(Necator spp.)；细颈线虫属(Nematodirus spp.)；一钩虫属(Nippostrongylus spp.)；结节线虫属(Oesophagostomum spp.)；盘尾属(Onchocerca spp.)；胃线虫属(Ostertagia spp.)；尖尾线虫属(Oxyuris spp.)；副蛔虫属(Parascaris spp.)；冠线虫属(Stephanurus spp.)；圆线虫属(Strongylus spp.)；比翼线虫属(Syngamus spp.)；弓蛔虫属(Toxocara spp.)；类圆线虫属(Strongyloides spp.)；背带线虫属(Teladorsagia spp.)；弓蛔线虫属(Toxascaris spp.)；毛线虫属(Trichinellaspp.)；鞭虫属(Trichuris spp.)；毛圆线虫属(Trichostrongylus spp.)；三齿线虫属(Triodontophorous spp.)；钩虫属(Uncinaria spp.)和吴策线虫属(Wuchereria spp.)。

另一种严重危害动物的内寄生虫是犬恶丝虫(Dirofilaria immitis)，也称为心丝虫。最常见的宿主是狗和猫，但其他动物如雪貂和浣熊也可能被感染。寄生虫通过蚊子叮咬传播，蚊子叮咬携带心丝虫幼虫。成虫生活在肺的主要血管中，引起血管炎症并可能导致心脏损伤和早期死亡。在晚期感染中，蠕虫也进入心脏。

在本发明的一个特别优选的实施方案中，本发明的组合物用于治疗或预防犬恶丝虫(Dirofilaria immitis)感染。在另一个实施方案中，本发明的化合物和组合物用于治疗或预防白斑恶丝虫感染(Dirofilaria repens)。

化合物的控制或“功效”是指在第一次施用后寄生虫计数减少5％至约100％的量。节肢动物(例如昆虫、螨虫)的控制可以是杀昆虫的和/或杀螨的。本发明化合物的作用可以是例如杀卵、杀幼虫、杀若虫和/或杀成虫或其组合。

该效果可以直接表现出来，即立即或经过一段时间后杀死寄生虫，例如当蜕皮发生时，或通过破坏它们的卵，或间接表现出来，例如减少产卵数和/或孵化率。

对于根据本发明的化合物的体内施用，有效量与“药学有效量”同义，“药学有效量”是全部或部分地治疗或改善受治疗动物的寄生虫感染或侵染的症状和/或体征或减少动物体内和/或动物体表的寄生虫数量和/或抑制动物体内或动物体表的寄生虫侵染发展的剂量或量。后一种量也可由本领域普通技术人员容易地确定，例如通过观察或检测治疗动物的临床状况或行为的变化，以及通过观察或检测这种治疗后寄生虫数量的相对变化。

药物的全身给药意味着通过血流到达靶标(器官或寄生虫)。

动物是指哺乳动物，包括伴侣动物。伴侣动物(或宠物)是指狗、猫或马，特别是狗或猫。

在一个实施方案中，用于本发明的异噁唑啉化合物还包括其药学上可接受的盐、酯和/或N-氧化物。此外，对异噁唑啉化合物的提及同样是指其多晶型形式或立体异构体中的任一种。

在一个实施方案中，根据本发明的药物组合物可以使用用于本发明的异噁唑啉的外消旋混合物，其含有等量的如上所述的这种异噁唑啉化合物的对映异构体。

或者，药物组合物可以使用与外消旋混合物相比含有富集的立体异构体的异噁唑啉化合物，所述外消旋混合物是如本文所定义的异噁唑啉的对映异构体之一。

此外，药物组合物可以使用这样的异噁唑啉化合物的基本上纯的立体异构体。用于本发明的异噁唑啉的这种富集或纯化的立体异构体制剂可以通过本领域已知的方法制备。

实施例是利用催化不对称合成的化学方法，或非对映异构体盐的分离(例如分别参见：WO 2009/063910和JP 2011/051977)。

特别优选的是S-对映异构体。

在用于本发明的异噁唑啉的一个实施方案中，T选自

其中在T-1、T-3和T-4中，基团Y＝氢、卤素、甲基、卤代甲基、乙基或卤代乙基。

在用于本发明的异噁唑啉的一个实施方案中，Q选自

其中R³、R⁴、X和Z^A如上所定义，并且

在一个实施方案中，用于本发明的异噁唑啉如表1中所示。

表1：

表1(续)：

在一个实施方案中，用于本发明的异噁唑啉如表2中所示。

表2：

在一个实施方案中，用于本发明的异噁唑啉是以下化合物：

其中R^1a、R^1b、R^1c彼此独立地为：氢、Cl或CF₃

优选地，R^1a和R^1c是Cl或CF₃，并且R^1b是氢，

T是

其中Y是甲基、溴、Cl、F、CN或C(S)NH₂；n＝1或2；且Q如上所述。

在如本文所定义的异噁唑啉的一个实施方案中，R³是H，且R⁴是：-CH₂-C(O)-NH-CH₂-CF₃，-CH₂-C(O)-NH-CH₂-CH₃，-CH₂-CH₂-CF₃或-CH₂-CF₃。

在根据本发明的药物组合物的一个实施方案中，异噁唑啉是选自氟雷拉纳(fluralaner)、阿福拉纳(afoxolaner)、洛替拉纳(lotilaner)或沙罗拉纳(sarolaner)的一种或多种。在根据本发明的药物组合物的另一个实施方案中，异噁唑啉化合物是选自氟雷拉纳(fluralaner)、阿福拉纳(afoxolaner)、替戈拉纳(tigolaner)、洛替拉纳(lotilaner)或沙罗拉纳(sarolaner)的一种或多种。

在一个实施方案中，式(I)化合物是4-[5-(3,5-二氯苯基)-5-三氟甲基-4,5-二氢异噁唑-3-基]-2-甲基-N-[(2,2,2-三氟-乙基氨基甲酰基)-甲基]-苯甲酰胺(CAS RN864731-61-3-USAN fluralaner)。

在另一个实施方案中，式(I)的化合物是在WO2007/079162中公开的4-[5-[3-氯-5-(三氟甲基)苯基]-4,5-二氢-5-(三氟甲基)-3-异噁唑基]-N-[2-氧代-2-[(2,2,2-三氟乙基)氨基]乙基]-1-萘甲酰胺(CAS RN 1093861-60-9,USAN-afoxolaner)。

在根据本发明的药物组合物的一个实施方案中，异噁唑啉是lotilaner(CAS RN:1369852-71-0；3-甲基-N-[2-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基氨基)乙基]-5-[(5S)-5-(3,4,5-三氯苯基)-5-(三氟甲基)-4H-1,2-噁唑-3-基]噻吩-2-甲酰胺)。

在根据本发明的药物组合物的一个实施方案中，异噁唑啉是sarolaner(CAS RN:1398609-39-6；1-(5'-((5S)-5-(3,5-二氯-4-氟苯基)-5-(三氟甲基)-4,5-二氢异噁唑-3-基)-3'-H-螺(氮杂环丁烷-3,1'-(2)苯并呋喃)-1-基)-2-(甲磺酰基)乙酮)。

在另一个实施方案中，式(I)化合物是(Z)-4-[5-(3,5-二氯苯基)-5-三氟甲基-4,5-二氢异噁唑-3-基]-N-[(甲氧基亚氨基)甲基]-2-甲基苯甲酰胺(CAS RN 928789-76-8)。

在另一个实施方案中，式(I)的化合物是在WO2009/0080250中公开的4-[5-(3,5-二氯苯基)-5-(三氟甲基)-4H-异噁唑-3-基]-2-甲基-N-(硫杂环丁烷-3-基)苯甲酰胺(CASRN 1164267-94-0)。

在另一个实施方案中，式(I)的化合物是在WO2007/079162中公开的4-[5-[3-氯-5-(三氟甲基)苯基]-4,5-二氢-5-(三氟甲基)-3-异噁唑基]-N-[2-氧代-2-[(2,2,2-三氟乙基)氨基]乙基]-1-萘甲酰胺(CAS RN 1093861-60-9,USAN-afoxolaner)。

在另一个实施方案中，式(I)化合物是公开于WO2010/070068中的5-[5-(3,5-二氯苯基)-4,5-二氢-5-(三氟甲基)-3-异噁唑基]-3-甲基-N-[2-氧代-2-[(2,2,2-三氟乙基)氨基]乙基]-2-噻吩甲酰胺(CAS RN 1231754-09-8)。

在替代实施方案中，异噁唑啉化合物是2-氯-N-(1-氰基环丙基)-5-[1'-甲基-3'-(1,1,2,2,2-五氟乙基)-4'-(三氟甲基)[1,5'-二-1H-吡唑]-4-基]苯甲酰胺；替戈拉纳Tigolaner(CAS RN 1621436-41-6)，其公开于WO 2019/012377中。

异噁唑啉化合物可以以各种异构形式存在。提及用于本发明的化合物总是包括这种化合物的所有可能的异构体形式。

在一个实施方式中，异噁唑啉化合物的外消旋形式存在于根据本发明的组合物中。在另一个实施方案中，存在S-对映异构体。

在一个具体的优选实施方案中，存在氟雷拉纳的S-对映异构体。

在另一个优选的实施方案中，根据式(I)的异噁唑啉化合物是阿福拉纳afoxolaner(也称为esafoxolaner)的(S)-对映异构体。

本发明的一个重要方面是异噁唑啉化合物颗粒与稳定微球的组合，所述稳定微球包含溶解在脂肪、蜡或其混合物中的莫西菌素，所述脂肪、蜡或其混合物在水性混悬剂中的熔点高于约40℃，优选高于约50℃。

这些莫西菌素微球可以通过伽马辐射或电子束灭菌而不会显著降解。

微球是直径为1-1000mm的小球形颗粒，由聚合蜡质或其他保护性材料组成。

用于根据本发明的可注射制剂的优选的稳定莫西菌素微球基于重量包含约75重量％至95重量％的脂肪、蜡或其混合物。优选地，微球包含约1-25％的莫西菌素和约0.01-1％的抗氧化剂。

在一个替代实施方案中，组合物包含如本文所述的不同大环内酯化合物的微球，所述大环内酯化合物包括但不限于阿维菌素或米尔倍霉素(milbemycins)。在一些实施方案中，此类阿维菌素或米尔倍霉素是依立诺克丁、阿维菌素、伊维菌素、司拉克丁、弥拜菌素、米尔倍霉素D或米尔倍霉素肟。

在一个实施方案中，所述组合物包含氟雷拉纳与依立诺克丁的组合，或氟雷拉纳与米尔倍霉素肟、司拉克丁或莫西菌素的组合。

在一个实施方案中，所述组合物包含afoxolaner与依立诺克丁的组合，或afoxolaner与米尔倍霉素肟、司拉克丁或莫西菌素的组合。

在一个实施方案中，所述组合物包含sarolaner与依立诺克丁的组合，或sarolaner与米尔倍霉素肟、司拉克丁或莫西菌素的组合。

在一个实施方案中，所述组合物包含lotilaner与依立诺克丁的组合，或lotilaner与米尔倍霉素肟、司拉克丁或米尔倍霉素肟、司拉克丁或莫西菌素的组合。

可注射组合物通常需要在施用于动物之前灭菌。伽马辐射或电子束辐射是用于消除微生物污染物的有效灭菌方法。

然而，莫西菌素在照射时容易降解并失去其大部分生物活性。这种对辐射的破坏性和降解性反应排除了使用伽马辐射或电子束作为对某些含莫西菌素的组合物进行灭菌的手段。

莫西菌素微球可以如实施例2中所示进行辐射灭菌用于注射，而不会负面影响活性成分的稳定性。莫西菌素微球包含以下物质或基本上由以下物质组成：按重量计约50％至99％的熔点高于约40℃的脂肪、蜡或其混合物，约1％至50％的莫西菌素，和约0.01-10％的抗氧化剂。

可注射药物组合物实现莫西菌素和异噁唑啉化合物的有效延长释放作用。

本发明还提供了一种用于在动物中引入莫西菌素和异噁唑啉化合物，尤其是莫西菌素和氟雷拉纳的血液水平并将其维持延长的时间段的方法；以及用于预防或治疗动物中由蠕虫、线虫、螨和内寄生和外寄生节肢动物引起的感染和侵染的方法。

在一个实施方案中，莫西菌素以约0.01重量％至约1.0重量％的量存在于可注射兽用组合物中。

在一个具体实施方案中，本发明的可注射组合物包含15％氟雷拉纳和0.17％莫西菌素。

适用于本发明成分的蜡和脂肪的熔点通常高于40℃，优选高于50℃。

如本文所用的术语“蜡”如Hawley's The Condensed Chemical Dictionary,第11版中所述定义为高分子量的低熔点有机混合物或化合物，在室温下为固体，并且除了其不含甘油酯之外通常在组成上类似于脂肪和油。

一些是烃；其它是脂肪酸和醇的酯。这些化合物包括饱和或不饱和的长链C₁₀-C₂₄脂肪酸、醇、酯、盐、醚或其混合物。它们被归类为脂质。蜡是热塑性的，但由于它们不是高聚物，因此它们不被认为是塑料家族。

这些蜡的共同性质包括防水性；质地光滑；无毒性；以及没有令人讨厌的气味和颜色。它们是可燃的并且具有良好的介电性能。它们可溶于大多数有机溶剂并且不溶于水。主要类型如下：

A.天然

1.动物蜡(蜂蜡、羊毛脂、虫胶蜡、中国昆虫蜡)

2.蔬菜(巴西棕榈、小烛树、杨梅、甘蔗)

B.矿物

1.化石蜡或土蜡(地蜡、纯地蜡、褐煤蜡)

2.石油蜡(石蜡，微晶)(疏松蜡或鳞片蜡)

D.合成的

1.烯属聚合物和多元醇醚-酯(“碳蜡”)

2.氯化萘(“光蜡”)。

如本文所用的术语“脂肪”被定义为高级脂肪酸如硬脂酸和棕榈酸的甘油酯。此类酯及其混合物在室温下为固体并表现出晶体结构。猪油和牛脂是实例。

术语“脂肪”通常具体指甘油三酯，而“脂质”是包括一切在内的。

脂肪优选地由长链C12-C22脂肪酸的甘油三酯组成，诸如硬脂酸酯、棕榈酸酯、月桂酸酯、肉豆蔻酸酯、花生酸酯和山嵛酸酯、以及它们的混合物；熔点大于50℃的那些是最优选的。

在本发明的实践中，三硬脂酸甘油酯是最优选的脂肪。

适用于本发明实践的抗氧化剂包括本领域已知的适用于稳定莫西菌素化合物的任何抗氧化剂。

本发明的抗氧化剂可以定义为添加到橡胶、天然脂肪和油、食品、汽油和润滑油中以分别延迟氧化、变质、酸败和胶形成的有机化合物。橡胶抗氧化剂通常是芳族胺类型，例如二-,8-萘基-对苯二胺和苯基-,8-萘胺。

许多抗氧化剂是取代的酚化合物(丁基化羟基苯甲醚、二叔丁基对甲酚和没食子酸丙酯)。食品抗氧化剂在非常低的浓度下是有效的，并且不仅延迟酸败，而且通过使维生素和必需脂肪酸的分解最小化来保护营养价值。

本发明的莫西菌素微球可以用伽马辐射或电子束灭菌，并保持保质期而不显著丧失生物活性。莫西菌素通常容易降解并失去其大部分生物活性，特别是当照射时。

适用于本发明微球组合物的抗氧化剂包括生育酚、抗坏血酸、抗坏血酸棕榈酸酯、富马酸、苹果酸、抗坏血酸钠、偏亚硫酸氢钠、没食子酸正丙酯、BHA(丁基化羟基苯甲醚)、BHT(丁基化羟基甲苯)单硫代甘油、叔丁基羟基醌、6-乙氧基-1,2-二氢-2,2,4-三甲基喹啉等，其中丁基化羟基甲苯是优选的抗氧化剂。

在某些实施方案中，基于制剂的总重量，抗氧化剂通常以约0.01至约2.0％的量加入制剂中，特别优选约0.05至约1.0％。

本发明的微球组合物可以用伽马辐射或电子束灭菌，并保持保质期而不显著损失生物活性。

用于本发明组合物的微球可以通过将莫西菌素、抗氧化剂和任选的其它赋形剂与熔融脂肪、蜡或其混合物掺入，然后通过各种技术(例如乳化或雾化混合物)形成所得混合物的微球，或者通过机械加工成分和熔融脂肪、蜡或其混合物并冷却(例如利用离心盘)来制备。

或者，可以将活性成分、抗氧化剂、赋形剂和脂肪、蜡及其混合物以及油的混合物冷却以得到固体，然后可以通过诸如碾磨、研磨等程序加工该固体。

本发明的稳定微球分散在药学上可接受的载体中，以获得用于非肠胃施用的缓释组合物。

赋形剂如表面活性剂、盐、缓冲剂或其混合物可包括在本发明的媒介物中。

适用于本发明的所述赋形剂的量在约0.1重量％至20重量％的范围内。

优选地，纤维素衍生物如羧甲基纤维素占载体重量的约1-5％，无机盐如NaCl占载体重量的约0.1-2％。

活性化合物的维持血液水平与保护或治疗温血动物免受蠕虫、线虫、螨和内寄生和外寄生节肢动物的感染和侵染有关。

维持血液水平是活性成分缓慢释放的指示。

本发明包括本文的组合物在动物血流中引入和维持莫西菌素和异噁唑啉化合物(尤其是氟雷拉纳)的水平的用途。

已经发现，包含异噁唑啉化合物的颗粒和具有确定粒度的莫西菌素微球的本发明的可注射组合物显示出期望的生物利用度和功效持续时间，同时在注射部位引起最小的刺激。

该组合物还为温血动物和鸟类动物受体提供了所需的安全性。

此外，已经发现，单次施用此类组合物通常提供针对一种或多种寄生虫(例如，外寄生虫，例如跳蚤、蜱或螨)的有效活性，同时还倾向于提供活性的快速起效、活性的长持续时间和/或期望的安全性特征。

本发明还提供了用于治疗或预防动物中的寄生虫感染和侵染的方法，所述方法包括施用有效量的可注射组合物，所述可注射组合物包含抗寄生虫有效量的至少一种异噁唑啉化合物和限定粒度的莫西菌素微球以及药学上可接受的赋形剂。

令人惊讶的是，已经发现，与本领域已知的其他可注射组合物相比，本文所述的本发明组合物更快速地且在长持续时间内表现出对有害寄生虫(例如外寄生虫，如跳蚤和蜱)的优异的广谱功效，同时在注射部位表现出最小的刺激。

本发明的药物组合物可以通过皮下或肌内注射施用。

本发明的长效可注射组合物包括药学上可接受的赋形剂。

药学上可接受的赋形剂包括但不限于表面活性剂、抗氧化剂、防腐剂、pH稳定剂(例如缓冲剂)和其他非活性赋形剂。

在另一个实施方案中，本发明的组合物可包含约0.01％至约20％(w/v)的药学上可接受的赋形剂。

在其他实施方案中，组合物可包含约0.01％至约5％(w/v)、约0.1％至约10％(w/v)或约0.1％至约5％(w/v)的药学上可接受的赋形剂。在其他实施方案中，组合物可包含约5至约15％(w/v)或约5至约10％(w/v)的药学上可接受的赋形剂。

在另一个实施方案中，组合物可包含约7至约10％的药学上可接受的赋形剂。

表面活性剂可以以约0.1％至约10％(w/w)、约1％至约10％(w/w)或约5％至约10％(w/w)的浓度存在于本发明组合物中。更典型地，表面活性剂可以以约0.1％至约5％(w/w)或约1至约5％(w/w)的浓度存在。

可用于组合物中的表面活性剂的实例包括但不限于单油酸甘油酯、聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯、脱水山梨糖醇酯(包括脱水山梨糖醇单油酸酯)、聚乙烯醇、聚山梨醇酯(包括聚山梨醇酯20和聚山梨醇酯80)、D-α-生育酚聚乙二醇1000琥珀酸酯(TPGS)、月桂基硫酸钠、环氧乙烷和环氧丙烷的共聚物(例如poloxamers，如F87等)、聚乙二醇蓖麻油衍生物(包括聚氧乙烯35蓖麻油聚氧乙烯40氢化蓖麻油(40)、聚氧乙烯60氢化蓖麻油)；丙二醇单十二酸酯甘油酯，包括甘油辛酸酯/癸酸酯聚乙二醇化甘油酯(PEG 300辛酸/癸酸甘油酯PEG 400辛酸/癸酸甘油酯PEG 300油酸甘油酯PEG 300亚油酸甘油酯聚乙二醇硬脂酸酯和聚乙二醇羟基硬脂酸酯，包括聚乙二醇8硬脂酸酯(PEG 400单硬脂酸酯)、聚乙二醇40硬脂酸酯(PEG 1750单硬脂酸酯等)。

聚乙二醇硬脂酸酯(Polyethylene glycol stearates)(同义词包括聚乙二醇硬脂酸酯(macrogol stearates)、聚氧乙烯硬脂酸酯、聚氧乙烯硬脂酸酯、乙氧基化硬脂酸酯；CAS No.9004-99-3、9005-08-7)是混合聚氧乙烯聚合物的单硬脂酸酯和二硬脂酸酯的混合物。聚乙二醇羟基硬脂酸酯是羟基硬脂酸与聚乙二醇的单酯和二酯的混合物。可用于组合物中的一种聚乙二醇羟基硬脂酸酯是聚乙二醇12-羟基硬脂酸酯。在另一个实施方案中，本发明的组合物可包含表面活性剂聚乙二醇15 12-羟基硬脂酸酯(来自BASF的15)，12-羟基硬脂酸与15摩尔环氧乙烷的单酯和二酯的混合物。

同样，这些化合物以及它们的量是本领域熟知的。

在本发明的另一个实施方案中，本发明的组合物可包含聚氧乙烯35蓖麻油作为表面活性剂。在其它实施方案中，本发明的组合物可包含聚氧乙烯40氢化蓖麻油(40)或聚氧乙烯60氢化蓖麻油作为表面活性剂。本发明的组合物还可以包括表面活性剂的组合。

本发明的组合物可含有其它惰性成分，例如抗氧化剂、防腐剂或pH稳定剂。这些化合物在组合物领域中是众所周知的。

抗氧化剂如维生素E、α-生育酚、抗坏血酸、抗坏血酸棕榈酸酯、柠檬酸、富马酸、苹果酸、抗坏血酸钠、偏亚硫酸氢钠、偏亚硫酸氢钠、没食子酸正丙酯、BHA(丁基化羟基茴香醚)、BHT(丁基化羟基甲苯)、BHA和柠檬酸、一硫代甘油、叔丁基氢醌(TBHQ)、苯甲醇等可加入到本发明的组合物中。

基于组合物的总重量(w/w)，抗氧化剂通常以约0.01％至约3％，或约0.01％至约2％(w/v)的量包含在本发明的组合物中。在另一个实施方案中，所述组合物包含约0.05％至约1.0％(w/w)的一种抗氧化剂或其混合物。

防腐剂如苯甲醇在组合物中的合适用量为约0.01-约10.0％，特别优选约0.05-约5.0％。其他防腐剂包括对羟基苯甲酸酯(对羟基苯甲酸甲酯和/或对羟基苯甲酸丙酯)、苯扎氯铵、苄索氯铵、苯甲酸、苯甲醇、溴硝丙二醇、对羟基苯甲酸丁酯、溴化十六烷基三甲铵、氯己定、氯丁醇、氯甲酚、甲酚、对羟基苯甲酸乙酯、咪脲、对羟基苯甲酸甲酯、苯酚、苯氧乙醇、苯乙醇、乙酸苯汞、硼酸苯汞、硝酸苯汞、山梨酸钾、苯甲酸钠、丙酸钠、山梨酸、硫柳汞等。

这些化合物的优选范围包括约0.01至约5％。

优选苯甲醇。

也可以存在稳定组合物pH的化合物。同样，这些化合物以及如何使用这些化合物是本领域技术人员熟知的。缓冲系统包括例如选自以下的系统：乙酸/乙酸盐、苹果酸/苹果酸盐、柠檬酸/柠檬酸盐、酒石酸/酒石酸盐、乳酸/乳酸盐、磷酸/磷酸盐、甘氨酸/缩水甘油酸盐、tris、谷氨酸/谷氨酸盐和碳酸钠，尤其是磷酸钠或柠檬酸钠。

水性混悬剂可以包含与适于制造水性混悬剂的赋形剂混合的如本文所述的异噁唑啉化合物颗粒和莫西菌素微球。

此类赋形剂包括悬浮剂，例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍胶和阿拉伯胶；分散剂或润湿剂包括天然存在的磷脂，例如卵磷脂，或环氧烷与脂肪酸的缩合产物，例如聚氧乙烯硬脂酸酯，或环氧乙烷与长链脂族醇的缩合产物，例如十七亚乙基氧基鲸蜡醇，或环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇的偏酯的缩合产物，例如聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯，或环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合产物，例如聚乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯。

水性混悬剂还可含有一种或多种防腐剂，例如对羟基苯甲酸乙酯或对羟基苯甲酸正丙酯。

适合于通过添加水制备水性混悬剂的可分散粉末和颗粒可以提供与分散剂或润湿剂、悬浮剂和一种或多种防腐剂混合的异噁唑啉化合物和莫西菌素微球。合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂由上面已经提到的那些示例。

在一个实施方案中，异噁唑啉化合物悬浮在水性混悬剂中，其中液体载体(稀释剂)是水。

在另一个实施方案中，水性混悬剂的液体载体(稀释剂)包含水和共溶剂。

可以在包含异噁唑啉化合物和莫西菌素微球的本发明可注射组合物中使用的共溶剂可以是单一共溶剂或共溶剂的共混物。

在一个实施方案中，本发明的水性可注射组合物中使用的共溶剂包括可与水混溶的极性溶剂。

这些共溶剂的非限制性实例包括乙醇、异丙醇、苯甲醇、二醇醚(例如，包括但不限于二乙二醇单乙醚(DGME、丁基二甘醇、二丙二醇正丁醚、乙二醇单乙醚、乙二醇单甲醚、二丙二醇单甲醚、丙二醇单甲醚、丙二醇单乙醚等)、液体聚乙二醇(PEGs)(例如PEG 400)、丙二醇、碳酸酯(例如碳酸亚丙酯)、2-吡咯烷酮、N-甲基吡咯烷酮、二甲基异山梨醇(DMI)、二甲基乙酰胺、二甲亚砜、甘油缩甲醛或这些溶剂中至少两种的混合物。

在一个实施方案中，本发明的组合物包含极性质子溶剂，包括但不限于醇如乙醇、异丙醇或二醇或二醇醚。在又一实施方式中，本发明的长效可注射组合物包含极性非质子溶剂，例如N-甲基吡咯烷酮、二甲基异山梨醇、二甲基乙酰胺、二甲亚砜或碳酸亚丙酯。

在一个实施方案中，异噁唑啉化合物可以以各种异构形式存在。对异噁唑啉化合物的提及总是包括这种化合物的所有可能的异构体形式。

除非另有说明，否则不指示特定构象的化合物结构旨在涵盖化合物的所有可能的构象异构体的组合物，以及包含少于所有可能的构象异构体的组合物。在一些实施方案中，化合物是手性化合物。

特别优选的是(S)对映异构体。在一些实施方案中，化合物是非手性化合物。

在一个实施方案中，式(I)的异噁唑啉化合物可以根据例如专利申请US 2007/0066617、WO 2007/079162、WO 2009/002809、WO 2009/080250、WO 2010/070068、WO 2010/079077、2011/075591和WO 2011/124998或在作为化学合成专家的本领域技术人员的能力范围内的任何其他方法制备。

对于本发明的产品的化学制备，本领域技术人员被认为尤其具有“化学文摘”和其中引用的文献的全部内容。

在一个实施方案中，异噁唑啉化合物在组合物中悬浮。在一个实施方案中，混悬剂是水性的。在一个替代实施方案中，混悬剂是非水性的。

在一个实施方案中，药物组合物基本上不含有机溶剂。

在一个实施方案中，药物组合物包含表面活性剂/润湿剂。在另一个实施方案中，表面活性剂/润湿剂是泊洛沙姆。

泊洛沙姆的替代物是其他水溶性/可混溶的非离子表面活性剂，包括脱水山梨糖醇脂肪酸酯(Spans)、聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯(polysorbates/Tweens)、聚氧乙烯聚氧乙烯蓖麻油衍生物(Cremaphors)、聚氧乙烯硬脂酸酯、卵磷脂和TPGS(d-α-生育酚聚乙二醇1000琥珀酸酯)。

表面活性剂/润湿剂以约0.01％w/v至约0.5％w/v或约0.05％w/v至约0.1％w/v的量存在于组合物中。

泊洛沙姆是由侧接两个亲水链的聚氧丙烯(聚环氧丙烷)的中心疏水链组成的非离子三嵌段共聚物聚氧乙烯(聚(环氧乙烷))(参见美国专利号3,740,421)。

泊洛沙姆124是聚(乙二醇)-嵌段-聚(丙二醇)-嵌段-聚(乙二醇)，CAS号9003-11-6，也称为Lutrol L44或Kollisolv P124。

Lutrol F68是另一种聚(乙二醇)-嵌段-聚(丙二醇)-嵌段-聚(乙二醇)，也称为泊洛沙姆188或Kolliphor P188。

在一个实施方案中，药物组合物包含悬浮剂。在一个实施方案中，悬浮剂是羧甲基纤维素，尤其是羧甲基纤维素钠(NaCMC)。

在一个替代实施方案中，悬浮剂是甲基纤维素或聚乙烯吡咯烷酮。

在一个实施方案中，药物组合物包含防腐剂。在一个实施方案中，防腐剂是苯甲醇。

在一个替代实施方案中，防腐剂是间甲酚、苯扎氯铵、尼泊金甲酯或尼泊金丙酯。

可注射药物组合物可以通过组合和混合固体组分，然后将固体混合物悬浮在稀释剂中来制备。

制备可注射药物组合物的方法包括将异噁唑啉颗粒与莫西菌素微球组合以形成固体混合物，其在随后的步骤中用水性液体载体重构以形成准备注射的水性混悬剂。

在一个实施方案中，水性液体载体是水。

在一个替代实施方案中，稀释剂是对异噁唑啉化合物和莫西菌素微球组分几乎没有或没有溶解度的油或溶剂。

药物组合物还包含表面活性剂/润湿剂。

在本说明书和实施例中讨论了特定的表面活性剂/润湿剂和表面活性剂/润湿剂的替代物。

药物组合物还包含另外的赋形剂，例如悬浮剂或防腐剂。

合适的赋形剂和替代试剂的具体实例在本申请下面讨论的说明书和实施例中。

异噁唑啉化合物颗粒和莫西菌素微球的粒度及测量

已经发现，包含具有限定粒度的异噁唑啉化合物的颗粒的本发明的可注射组合物具有特别有益的性质。

在一个实施方案中，莫西菌素微球和异噁唑啉化合物颗粒具有相同的粒度。

因此，在本说明书中，提及“异噁唑啉化合物粒度”包括提及其中莫西菌素微球具有相同粒度并通过相同方法测量的组合物。

在一个实施方案中，异噁唑啉化合物和/或莫西菌素微球具有通过静态光散射仪测量的约25微米至约250微米的D50粒度分布，约11微米至约250微米的粒度，约50微米至约150微米的粒度，约75微米至约130微米的粒度，约90微米至约110微米的粒度，约30微米至约100微米的粒度。

粒度分布描述了根据尺寸存在的颗粒的相对量。

D10是表示10％的颗粒所小于的尺寸的粒度分布。

D50是表示50％的颗粒所小于的尺寸的粒度测量分布。

D90是表示90％的颗粒所小于的尺寸的粒度测量分布。

在另一个实施方案中，粒度是不同的。

在一个实施方案中，异噁唑啉化合物和莫西菌素微球的粒度在相似的范围内。

在另一个实施方案中，粒度不在类似的范围内。

在一个具体实施方案中，异噁唑啉化合物粒度的D10大于10μm，粒度的D50为80-120μm，且粒度的D90小于210μm。

在一个具体实施方案中，对于莫西菌素微球，粒度的D10大于50μm，粒度的D50为100至150μm，并且粒度的D90小于200μm。

在一个具体实施方案中，粒度的D10为约10μm、约20μm、约30μm、约40μm、约50μm、约60μm或约80μm。

在一个具体实施方案中，莫西菌素微球的粒度的D10为约80μm。

在一个具体实施方案中，粒度的D50为约50μm、约75μm、约80μm、约90μm、约100μm、约110μm、约120μm、约130μm、约140μm或约150μm。

在一个具体实施方案中，莫西菌素微球的粒度的D50为约110μm。

在一个具体实施方案中，粒度的D90为约100μm、约130μm、约150μm、约175μm、约200μm或约250μm。

在一个

具体实施方式

中，异噁唑啉化合物粒度的D10是约20-35μm，粒度的D50是约90-105μm和粒度的D90是约155-175μm。

在一个具体实施方案中，对于莫西菌素微球，粒度的D10为约60至85μm，粒度的D50为约90至115μm，粒度的D90为约145至165μm。

在一个具体实施方案中，对于莫西菌素微球，粒度的D10为约80μm，粒度的D50为约110μm，粒度的D90为约150μm。

在一个具体实施方案中，粒度的D10为约25至30μm，粒度的D50为约95至100μm，并且粒度的D90为约160至170μm。

在一个具体实施方案中，粒度的D10为约10至20μm，粒度的D50为约85至110μm，并且粒度的D90为约170至185μm。

在一个具体实施方案中，粒度的D10为约10至15μm，粒度的D50为约95至105μm，并且粒度的D90为约175至180μm。

在一个具体实施方案中，粒度的D10为约10至25μm，粒度的D50为约40至60μm，并且粒度的D90为约95至100μm。

在一个具体实施方案中，粒度的D10为约15至20μm，粒度的D50为约45至55μm，并且粒度的D90为约90至95μm。

在一个具体实施方案中，粒度的D10为约30至50μm，并且粒度的D50为约70至130μm。

在一个具体实施方案中，粒度的D10为约35至45μm，粒度的D50为约90至110μm。

在一个具体实施方案中，粒度的D10为约40μm且粒度的D50为约100μm。

体积加权粒度可以通过筛分、显微镜或激光衍射(Malvern或Sympatec)来测量。

体积加权粒度测量可以用具有Hydro 2000G测量池的Malvern Mastersizer 2000或用Horiba LA-910激光散射粒度分布分析仪进行。体积加权粒度可以通过SympatecHelos仪器测量。

为了在本发明中使用，异噁唑啉化合物以根据本发明的最终药物组合物的约0.1至约50％w/v的量存在于根据本发明的药物组合物中。

异噁唑啉以约10至约45％w/v的量存在；约20和约45％w/v；约15和35％w/v或约25％w/v和约35％w/v或约1％w/v和约12％w/v或约3％w/v和约9％w/v的本发明的药物组合物。

在本发明和/或其实施方式的实施方式中，组合物包含依立诺克丁作为(a1)生理活性大环内酯和氟雷拉纳，优选(S)-氟雷拉纳，作为(b)式(I)的异噁唑啉化合物。

在本发明和/或其实施方式的实施方式中，组合物包含米尔倍霉素肟作为(a)生理活性大环内酯和氟雷拉纳，优选(S)-氟雷拉纳，作为(b)式(I)的异噁唑啉化合物。

在本发明和/或其实施方式的实施方式中，所述组合物包含塞拉菌素作为(a)生理活性大环内酯和氟雷拉纳，优选(S)-氟雷拉纳，作为(b)式(I)的异噁唑啉化合物。

在本发明和/或其实施方式的实施方式中，所述组合物包含莫西菌素作为(a)生理活性大环内酯和阿福拉纳，优选(S)-氟雷拉纳，作为(b)式(I)的异噁唑啉化合物。

在本发明和/或其实施方式的实施方式中，所述组合物包含依立诺克汀作为(a)生理活性大环内酯和阿福拉纳，优选(S)-阿福拉纳，作为(b)式(I)的异噁唑啉化合物。

在本发明和/或其实施方式的实施方式中，所述组合物包含米尔倍霉素肟作为(a)生理活性大环内酯和阿福拉纳，优选(S)-阿福拉纳，作为(b)式(I)的异噁唑啉化合物。

在本发明和/或其实施方式的实施方式中，所述组合物包含司拉菌素作为(a)生理活性大环内酯的和阿福拉纳，优选(S)-阿福拉纳，作为式(I)的(b)异噁唑啉化合物。

在本发明和/或其实施方式的实施方式中，所述组合物包含莫西菌素作为(a)生理活性大环内酯和阿福拉纳，优选(S)-阿福拉纳，作为式(I)的(b)异噁唑啉化合物。

在本发明和/或其实施方式的实施方式中，组合物包含依立诺克丁作为(a)生理活性大环内酯和沙罗拉纳作为(b)式(I)的异噁唑啉化合物。

在本发明和/或其实施方式的实施方式中，所述组合物包含米尔倍霉素肟作为生理活性大环内酯和沙罗拉纳作为(b)式(I)的异噁唑啉化合物。

在本发明和/或其实施方式的实施方式中，所述组合物包含作为生理活性大环内酯的司拉菌素和作为(b)式(I)的异噁唑啉化合物的沙罗拉纳。

在本发明和/或其实施方式的实施方式中，所述组合物包含作为生理活性大环内酯的莫西菌素和作为(b)式(I)的异噁唑啉化合物的沙罗拉纳。

在本发明和/或其实施方式的实施方式中，所述组合物包含作为生理活性大环内酯的依立诺克丁和作为(b)式(I)的异噁唑啉化合物的洛替拉纳。

在本发明和/或其实施方式的实施方式中，所述组合物包含作为生理活性大环内酯的米尔倍霉素肟和作为(b)式(I)的异噁唑啉化合物的洛替拉纳。

在本发明和/或其实施方式的实施方式中，所述组合物包含作为生理活性大环内酯的司拉菌素和作为(b)式(I)的异噁唑啉化合物的洛替拉纳。

在本发明和/或其实施方式的实施方式中，所述组合物包含作为生理活性大环内酯的莫西菌素和作为(b)式(I)的异噁唑啉化合物的洛替拉纳。

可注射组合物通常需要在施用于动物之前灭菌。在本发明和/或其实施方式的优选实施方式中，将微球灭菌，例如用伽马辐射或电子束照射。

尽管据报道，生理活性大环内酯在照射时降解并失去大部分生物活性，但微球(a)可以通过照射灭菌用于注射，而不会对活性成分的稳定性产生负面影响。

在一个实施方式中，根据本发明的药物组合物中异噁唑啉化合物的量为根据本发明的药物组合物的约30％w/v。

在一个实施方式中，根据本发明的药物组合物中异噁唑啉化合物的量为根据本发明的药物组合物的约7.5％w/v。

在一个实施方案中，药物组合物必须在注射前重构。例如，药物组合物在注射前在水性液体载体中重构。

在另一个实施方案中，药物组合物是准备注射的即用型组合物。

在一个实施方案中，药物组合物与另外的治疗剂组合施用。

另外的治疗剂的施用可以在相同的组合物中或在单独的组合物中。

另外的治疗剂可以是杀寄生虫剂或疫苗。

在另一个实施方案中，另外的治疗剂是另一种杀寄生虫剂。其他活性成分选自异噁唑啉化合物、大环内酯、阿维菌素(例如，伊维菌素、司拉菌素、多拉菌素、阿维菌素和依立诺菌素)；米尔倍霉素(米尔倍霉素肟)；苯并咪唑前体(pro-benzimidazoles)(例如非班太尔(febantel)、奈托比胺(netobimin)和托布津(thiophanate)；苯并咪唑衍生物，例如噻唑苯并咪唑衍生物(例如噻苯达唑和坎苯达唑)、氨基甲酸酯苯并咪唑衍生物(例如芬苯达唑、阿苯达唑(氧化物)、甲苯达唑、奥芬达唑、帕苯达唑、奥苯达唑、氟苯达唑和三氯苯达唑)；咪唑并噻唑(例如左旋咪唑和四咪唑)；四氢嘧啶(莫仑太尔和噻嘧啶)、水杨酰苯胺(例如氯氰碘柳胺、羟氯扎胺、雷复尼特和氯硝柳胺)；硝基酚类化合物(例如硝苯腈和硝硫氰)；苯二磺酰胺(例如氯舒隆)；吡嗪并异喹啉类(例如吡喹酮和依普太尔)；杂环化合物(例如哌嗪、乙胺嗪和吩噻嗪)；双氯酚、砷化物(例如硫乙酰酒石酸胺、美洛沙明和砷酰胺)；环八缩肽(cyclooctadepsipeptides)(例如艾莫德斯(emodepside))；对郝青酰胺paraherquamides(例如derquantel)；和氨基乙腈化合物(例如莫那太尔，AAD 1566)；脒化合物(例如，阿米太尔和三苯地脒)，包括所有药学上可接受的形式，例如盐、溶剂化物或N-氧化物。

本发明的一个实施方案是一种治疗或预防动物寄生虫感染的方法，其包括向有需要的动物施用有效量的上述可注射药物组合物。

在一个实施方案中，动物遭受最小的注射部位刺激。

如上所述，最小注射部位刺激意指小于2×2cm的注射部位刺激，其持续小于2至3天。

在一个实施方案中，动物是伴侣动物。在一个实施方案中，伴侣动物是狗或猫。

当然，为获得最佳结果而采用的最佳有效量将取决于所采用的特定异噁唑啉化合物、待治疗的动物的物种以及寄生虫感染或侵染的类型和严重程度。

当使用式(I)的异噁唑啉化合物时，通常获得良好的结果施用约0.01至200mg/kg动物体重，在一个实施方案中0.1至100mg/kg动物体重，或0.5至50mg/kg动物体重或1至30mg/kg动物体重，这样的总剂量一次或以分剂量给予。

当以约0.01至10mg/kg动物体重，在一个实施方案中0.1至5mg/kg动物体重施用莫西菌素时，通常获得良好的结果，这样的总剂量一次或以分剂量给予。

可注射药物组合物可以每天、每周、每月、半年或每年施用。

可注射药物组合物可以每月、每两个月、每三个月、每四个月、每五个月、每6个月、每七个月、每八个月、每九个月、每十个月、每十一个月、每十二个月、每13个月、每14个月、每15个月、每16个月、每17个月或每18个月施用。

特别优选的是每6个月施用一次。

还优选每12个月施用一次。这为动物提供了长期保护，使其免受外寄生虫(特别是跳蚤和蜱)和内寄生物(特别是心丝虫和/或胃肠蠕虫)的侵害。特别优选的是针对心丝虫侵染的长期保护。

有益的是可以将本发明的可注射组合物与针对感染性疾病如瘟热、流感、狂犬病和具有常规抗原的其他疫苗的年度疫苗接种一起应用。

在可注射药物组合物的一个实施方案中，异噁唑啉化合物和/或莫西菌素微球的粒度的D50为约75微米至约130微米，并且粒度的D10为约30微米至约100微米。

本发明的一个实施方案是用于治疗或预防动物中寄生虫侵染的试剂盒，所述试剂盒包含两个或更多个容器：

a)固体结晶异噁唑啉化合物和莫西菌素微球；

b)媒介物，其包含能够与a)的化合物形成混悬剂的药学上可接受的赋形剂；和

c)关于在注射前将固体结晶异噁唑啉化合物和莫西菌素微球与水性液体载体组合的说明书。

其中对于固体结晶异噁唑啉化合物和莫西菌素微球，粒度的D50为约75微米至约130微米，粒度的D10为约30微米至约50微米。

在另一个实施方案中，异噁唑啉化合物是氟雷拉纳。

本发明的一个实施方案是试剂盒，其中所述试剂盒包含：

a)第一容器，其包含如权利要求1、8、9、10、11、12、17和18中所述的式(I)的异噁唑啉化合物的颗粒和如权利要求1至12中所述的莫西菌素微球的固体混合物，和；

b)具有水性载体的第二容器，所述水性载体包含一种或多种悬浮剂、润湿剂和/或防腐剂和水；和

c)用于在皮下或肌内注射至动物之前用水性载体重构莫西菌素微球和异噁唑啉化合物颗粒的说明书。

在一个实施方案中，第一容器包含有效量的莫西菌素和如上所述的式(I)的异噁唑啉化合物，其足以治疗和/或预防动物的寄生虫侵染。

在一个实施方案中，试剂盒还包含用于重构和肠胃外(通过注射)将来自第一和第二容器的组合物的混合物施用于动物的装置，特别是使用注射器(例如18号)。

在一种实施方式中，在第一容器中，式(I)异噁唑啉化合物和莫西菌素微球具有通过静态光散射仪器测得的约25微米至约250微米的体积加权粒度分布D50。

在另一种实施方式中，在第一容器中，异噁唑啉化合物的粒度的D10是约20-35mm，粒度的D50是约90-105mm和粒度的D90是约155-175mm。

本发明的另一方面是一种治疗或预防动物寄生虫感染的方法，包括向有需要的动物施用可注射的兽用组合物。

本发明的另一方面是一种制备根据本发明的可注射兽用组合物的方法，其包括以下步骤：

a)通过结晶制备异噁唑啉化合物颗粒；

b)通过熔化脂肪、蜡或其混合物并加入莫西菌素和任选的抗氧化剂，并通过旋转盘雾化和筛分制备微球，来制备莫西菌素微球；

c)将通过步骤b)获得的莫西菌素微球与通过步骤a)获得的异噁唑啉颗粒一起填充到第一容器中；

d)通过将包括悬浮剂、润湿剂和/或防腐剂的赋形剂溶解在水中并填充到第二容器中来制备水性载体；

e)通过将水性载体从第二容器d)转移到第一容器c)来重构固体并摇动以形成a。

旋转圆盘被认为是通过控制关键工艺参数如熔体温度、流速和圆盘速度来产生具有低粒度分布跨度的均匀球形颗粒的生产技术。

转碟法是一种封装技术，其使用机械能对液体膜加压或增加其动能以可能以液滴形式崩解。

或者，可以使用其它方法如热熔挤出、热熔造粒、薄膜蒸发等将莫西菌素均匀地掺入脂肪、蜡或其混合物中。可以将所得混合物研磨或喷雾以达到所需的粒度。

如果需要，可以进行材料的筛分以制备具有限定粒度的批料。

换句话说，微球(a)可以被认为是通过以下步骤制备的微球：掺入生理活性大环内酯，然后通过各种如上述技术形成所得混合物的微球。

或者，可以将生理活性大环内酯和任选的其它赋形剂的混合物冷却以得到固体，然后可以通过诸如碾磨、研磨等程序加工该固体。

通常，溶剂蒸发、旋转盘雾化、喷雾干燥以及筛分是本领域技术人员已知的方法。

在本发明和/或其实施方式的一种实施方式中，第一容器中的混合物包含有效量的如权利要求1-14任一项所述的微球和如权利要求1-14任一项所述的式(I)异噁唑啉化合物和/或如权利要求1-14任一项所述的式(II)化合物的颗粒，其足以处理或预防动物的寄生虫侵染。

在本发明和/或其实施方式的一个实施方式中，试剂盒还包括用于重构和肠胃外施用来自第一和第二容器的组合物的混合物至动物的装置，特别是注射器。

另一个实施方案是一种在6个月或可替代地12个月的延长时间段内治疗和/或预防动物中的寄生虫侵染的方法，所述方法包括向有需要的动物施用当使用如上所述的试剂盒时制备的重构液体，并根据说明书通过注射将其施用于动物。

寄生虫是如前所述的外寄生虫和内寄生物。

优选的目标动物是伴侣动物，例如猫或狗，特别是狗。

当然，为获得最佳结果而采用的最佳有效量将取决于所用的特定异噁唑啉化合物以及生理活性大环内酯、待治疗的动物种类和寄生虫感染或侵染的类型和严重程度。

在本发明和/或其实施方式的优选实施方式中，式(I)的异噁唑啉化合物，优选氟雷拉纳，以约0.01至约200mg/kg动物体重，优选约0.1至约100mg/kg动物体重，更优选约0.5至约50mg/kg动物体重，特别是约1至约30mg/kg动物体重施用。总剂量可以一次给予或以分次剂量给予。

在本发明和/或其实施方式的优选实施方式中，生理活性大环内酯，优选莫西菌素以约0.01至约10mg/kg动物体重，优选约0.1至约5mg/kg动物体重施用。总剂量可以一次给予或以分次剂量给予。

结果表明，当本发明的可注射兽用组合物用于治疗和/或预防动物中的寄生虫侵染时，治疗的动物受到最小的注射部位刺激。

如上所述，最小注射部位刺激意指小于2×2cm的注射部位刺激，其持续小于2至3天。

本发明的另一方面是一种用于治疗和/或预防动物中的寄生虫感染的方法，包括向有需要的受试者施用治疗有效量的根据本发明的可注射兽用组合物或根据本发明的试剂盒。

同样，就可注射的兽用组合物和试剂盒而言，以上内容同样适用。这同样适用于寄生虫和寄生虫侵染。

已经在本申请的实施例中描述了本发明的特征；然而，为简洁起见，并非从字面上描述了特征的所有组合。

然而，如上所述的特征的组合被明确地认为是本发明的一部分。

实施例

实施例1：10％莫西菌素微球的制备

通过旋转圆盘制备10％莫西菌素的三硬脂酸甘油酯(GTS)微球，其配方如下：

表1：在三硬脂酸甘油酯微球中的10％莫西菌素的实施例制剂

简言之，将180g三硬脂酸甘油酯在容器中熔化并在搅拌下加热至180℃的温度。加入20g莫西菌素和0.06g丁基化羟基甲苯并搅拌直至溶解。将所得熔融溶液冷却至～80℃并泵送到以3000rpm加热至～90℃的4”盘上。将所得微球过筛，并收集小于150μm的材料用于进一步表征和研究。

实施例2

GTS微球中10％莫西菌素的灭菌-微球对辐照的稳定性

将以下列出的微球组合物置于20mL血清小瓶中，其中两个用干燥氮气冲洗以除去氧气。然后用弹性体隔膜和卷曲的铝盖封闭小瓶。接下来，通过伽马辐射和电子束两者对微球进行15、20和25kGy辐射以进行灭菌。将微球萃取到乙腈/水(1：1)中，并通过高效液相色谱分析23-(O-甲基肟)-F28249a。该实验的结果总结在下表2中。GTS微球在低温或室温下、有或没有氮气覆盖下灭菌。

评估样品的测定变化。％测定为未照射测定的％。

表2：灭菌期间照射类型、照射剂量、温度和氮气覆盖对莫西菌素测定的影响

实施例3：液体水性载体的制备

将约50％的注射用水装入容器中并加热至约70-80℃，并加入悬浮剂NaCMC、羟丙甲纤维素E50或PVP，均质化直至溶解。缓慢加入其他成分并在搅拌下混合以实现分散。移去加热，加入注射用冷水使体积达到10升。在实施例3B和3D中，通过加入HCl将pH调节至4.5-5.5。

将每种媒介物通过高压釜灭菌，并将媒介物溶液储存在无菌容器中。

即用型可注射混悬剂产品的剂量均匀性

虽然莫西菌素微球和氟雷拉纳颗粒显示出相似的粒度，但它们的密度不同。因此，测试了许多不同的媒介物，以找到适于均匀再悬浮和给药的媒介物。

用手摇动含有15％氟雷拉纳和1.7％莫西菌素GTS微球的样品，直至视觉上分散在每种媒介物中，～30秒。

研究了以下媒介物：

用于重构/再悬浮的粘性水性媒介物的实施例制剂：

实施例3A

实施例3B

实施例3C

实施例3D

实施例3E

然后抽取6个1mL样品并通过实验测定莫西菌素和氟雷拉纳，结果显示在下表4中：

表4

实施例4：制备和使用最终制剂

在使用时，将实施例3中制备的媒介物加入到实施例1中制备的莫西菌素微球和结晶氟雷拉纳颗粒中，并摇动容器以将微球和氟雷拉纳颗粒分散在液体媒介物中。然后将制剂以针对待治疗的狗的体重指定的剂量体积吸入注射器中并皮下注射。

实施例5

包含GTS莫西菌素微球和氟雷拉纳颗粒的可注射制剂的药代动力学评估

制剂：

A.15％氟雷拉纳+0.17％莫西菌素微球(未筛分，GTS，25kGy)

B.15％氟雷拉纳+0.17％莫西菌素微球(未筛分，GTS，15kGy)

C.15％氟雷拉纳+0.17％莫西菌素微球(D50＝75μm，GTS，25kGy)

D.15％氟雷拉纳+0.17％莫西菌素微球(D50＝150μm，GTS，25kGy)

使用如下方法制备制剂：

A.媒介物

1.注入总体积～80％的水。

2.加入悬浮剂(羧甲基纤维素钠(CMCNa))并用顶置式混合器混合约5分钟。

3.将混合物用均化器进一步混合直至不含附聚物。

4.加入润湿剂(泊洛沙姆124)并用顶置式混合器混合直至均匀。

5.加入防腐剂(苯甲醇(BA))并用顶置式混合器混合直至均匀。

6.加入磷酸钠并用顶置式混合器混合直至均匀。

7.用顶置式混合器轻轻混合消泡剂(二甲硅油)直至均匀(5分钟)。

8.通过加入HCl将混合物的pH调节至pH 7.0-7.4。用顶置式混合器轻轻混合直至均匀(5分钟)。

9.加入适量水至最终重量用于注射，然后用顶置式混合器轻轻混合直至均匀(5分钟)。

10.将所得制剂包装到可注射小瓶中并用塞子密封。

11.将小瓶在121℃下高压灭菌15分钟的循环。

B.活性成分

1.将固体氟雷拉纳和莫西菌素GTS微球(如上所述制备)加入小瓶中并密封。

2.将小瓶通过伽马辐射最终灭菌。

C.重构的可注射制剂的形成

1.将A的小瓶的媒介物加入到B的活性成分小瓶中并摇动。

2.所得混悬剂准备用于注射。

使用类似的程序制备实施例5B-H的制剂。批量大小范围为50ml至1000mL。

所有制剂的媒介物：

将制剂A、B、C或D的样品以0.1mL/kg BW(即15mg氟雷拉纳/kg BW、0.17mg莫西菌素/kg BW)单次皮下施用至每组八只比格犬的不同组。

在施用后评估制剂的局部耐受性至少21天。

在治疗前、治疗后8小时和1、3、5、7、10、14、21、28、35、42、49、56、70、84、98、112、126、140、154、168和182天收集用于测定莫西菌素和总氟雷拉纳血浆浓度的血液样品。

对于所有测试制剂，获得了显示sc施用后犬中莫西菌素和氟雷拉纳的延长血浆水平的有利药代动力学曲线。

在评估实施例5的制剂期间没有显著的注射反应。