具体实施方式

本文描述了包含化合物1或其药学上可接受的盐、环糊精和赋形剂的药物组合物，它们的使用和给药方法，它们的制备方法，以及包含溶液或混合物的容器。

定义

如本文所用，本文所述的术语“稳定化的”和“稳定的”溶液(例如，包含化合物1的水溶液)是指“化学稳定的”和“物理稳定的”溶液。例如，如果化合物1不经历化学转化(例如，水解)或降解(例如，外消旋化、差向异构化、氧化)，则包含化合物1的溶液是化学稳定的。

如本文所用，“测定”是指测定药物物质含量的特定的指示稳定性的过程。例如，测定可以是涉及使用参考标准的色谱方法(例如，HPLC)。

如本文所用，“纯净(Purity)”是指例如在溶液或组合物中相对于其母体(例如，在时间＝0)不存在杂质。

如本文所用，“灭菌”是指无菌填充(例如，无菌性灭菌)或最终灭菌。

如本文所用，“重构溶液”、“重构制剂”或“重构药物产品”是指通过将冻干药物产品溶解在稀释剂中制备的溶液，使得药物产品溶解在适于给药(例如，肠胃外给药)的水溶液中。

如本文所用，术语“稀释剂”是指可用于制备重构溶液的药学上可接受的(例如，对给药于人类安全且无毒)稀释物质。示例性稀释剂包括无菌注射用水(WFI)、pH缓冲溶液(例如磷酸盐缓冲盐水)、无菌盐水溶液或右旋糖溶液(例如，5％右旋糖)。

如本文所用，术语“容量渗透摩尔浓度(osmolarity)”是指每升溶解组分的总数。容量渗透摩尔浓度类似于摩尔浓度(molarity)，但包括溶液中溶解物质的总摩尔数。1Osm/L的容量渗透摩尔浓度意指每L溶液有1摩尔的溶解组分。一些溶质，诸如在溶液中解离的离子溶质，在溶液中每摩尔溶质将贡献超过1摩尔的溶解组分。例如，NaCl在溶液中解离成Na⁺和Cl^-，并因此每1摩尔溶解在溶液中的NaCl提供2摩尔的溶解组分。生理容量渗透摩尔浓度通常在约280mOsm/L至约310mOsm/L的范围内。

如本文所用，“浆化”是指其中使如本文所述的化合物悬浮在溶剂(例如，极性非质子溶剂或非极性溶剂)中并且在搅拌悬浮液之后再次收集(例如，通过过滤)的方法。

如本文所用，“晶体”是指具有高度规则化学结构的固体。分子在晶格的三维空间中以规则的周期性方式排列。

术语“基本上结晶的”是指可为至少特定重量百分比结晶的形式。特定重量百分比为70％、75％、80％、85％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％、99.9％、或70％至100％的任何百分比。在某些实施方案中，结晶度的特定重量百分比为至少90％。在某些其他实施方案中，结晶度的特定重量百分比为至少95％。在一些实施方案中，化合物1可为本文所述的任何结晶固体形式的基本上结晶的样品。

术语“基本上纯的”涉及可为不含杂质的至少特定重量百分比的化合物1的特定结晶固体形式和/或化合物1或其药学上可接受的盐的其他固体形式的组合物。特定重量百分比为70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％、或70％至100％的任何百分比。在一些实施方案中，如本文所述的化合物1或其药学上可接受的盐的结晶固体形式是基本上纯的，重量百分比为95％至100％，例如约95％、约96％、约97％、约98％、约99％、或约99.9％。

如本文所用，并且除非另外指明，否则术语“治疗(treat)”、“治疗(treating)”和“治疗(treatment)”预期了在受试者患有指定的疾病、障碍或病症时发生的作用，其降低疾病、障碍或病症的严重程度，或者延迟或减缓疾病、障碍或病症的进展(也为“治疗性治疗”)。

如本文所用，并且除非另外指明，否则组合物的“治疗有效量”是足以在疾病、障碍或病症的治疗中提供治疗有益效果，或者足以延迟或最小化与疾病、障碍或病症相关联的一种或多种症状的量。组合物的治疗有效量意指单独或与其他疗法组合的治疗剂的量，其在疾病、障碍或病症的治疗中提供治疗有益效果。术语“治疗有效量”可以涵盖改善总体疗法，减少或避免疾病或病症的症状或病因，或者增强另一种治疗剂的治疗功效的量。

如本文所用，并且除非另外指明，否则组合物的“预防有效量”是足以防止疾病、障碍或病症，或与疾病、障碍或病症相关联的一种或多种症状，或者防止其复发的量。组合物的预防有效量意指单独或与其他试剂组合的治疗剂的量，其在疾病、障碍或病症的防止中提供预防有益效果。术语“预防有效量”可以涵盖改善总体预防或增强另一种预防剂的预防功效的量。

疾病、障碍和病症在本文中可互换使用。

考虑给药的“受试者”包括但不限于人类(即，任何年龄段的男性或女性，例如儿童受试者(例如，婴儿、儿童、青少年)或成年受试者(例如，年轻人、中年人或老年人))和/或非人动物，例如哺乳动物诸如灵长类(例如，食蟹猴、恒河猴)、牛、猪、马、绵羊、山羊、啮齿动物、猫和/或狗。在某些实施方案中，受试者是人类。在某些实施方案中，受试者是非人动物。在一些实施方案中，儿童受试者在0至18岁的年龄之间。在一些实施方案中，成年受试者超过18岁。

如本文所用，术语“人造表面”是指例如在医疗程序期间与受试者的血液接触的任何非人或非动物表面。其可以是用于在受试者体外收集或循环受试者的血液的容器。其还可以是支架、瓣膜、腔内导管或用于泵送血液的系统。作为非限制性实例，此类人造表面可以是钢、任何类型的塑料、玻璃、硅树脂、橡胶等。在一些实施方案中，人造表面暴露于至少50％、60％、70％、80％、90％或100％的受试者的血液。

如本文所用，关于人造表面的术语“调节(conditioning)”或“经调节的”是指用本文所述的组合物灌注(priming)或冲洗人造表面(例如，体外表面)，该组合物已经处于灌注或冲洗溶液(例如，血液、盐水溶液、林格氏液)中或者在医疗程序之前、期间或之后单独地给药于人造表面。

填充剂

如本文所用，术语“填充剂”包括提供组合物的结构(例如，在冻干产品中)而不与医药产品(例如，药物产品)直接相互作用(例如，化学地)的试剂。除了提供药学上精致的饼状物之外，填充剂还可赋予关于改变坍塌温度，提供冻融保护，以及增强活性药物成分(API)长期储存稳定性的有用品质。填充剂的非限制性实例包括糖(例如糖类(例如单糖、二糖或多糖))或糖醇(例如蔗糖、乳糖、海藻糖、葡聚糖、赤藓糖醇、阿拉伯糖醇、木糖醇、山梨糖醇、或甘露糖醇、或它们的组合)。填充剂可以是结晶的(例如甘露糖醇、甘氨酸或氯化钠)或无定形的(例如葡聚糖、羟乙基淀粉)。

优选地，在药物制剂中应用的填充剂促进形成美学上可接受的均匀或机械坚固的饼状物。填充剂也可优选地促进重构的容易性和速度。填充剂也可优选地减少或防止饼状物坍塌、共晶熔化、或残留水分的保留。在一些实施方案中，填充剂是冻干保护剂。

缓冲剂

在一些实施方案中，本文所述的水性药物组合物还包含缓冲剂(例如，pH为约6至约8(例如约6.5至约7.0、或约6.8)的缓冲剂)。

如本文所用，术语“缓冲剂”、“缓冲剂体系”或“缓冲组分”是指通常与至少一种其他化合物组合的在溶液中提供化学体系的化合物，该化学体系表现出缓冲能力，即分别在一定限度内中和强酸或碱(bases)(碱(alkali))的pH降低或升高效应的能力，其中初始pH(例如，受例如强酸或碱影响之前的pH)的变化相对较小或没有变化。例如，本文所述的缓冲剂将溶液的pH维持或控制到特定的pH范围。例如，“缓冲能力”可以指当加入到一升(标准单位)缓冲溶液中时使pH改变一个单位所需的强酸或碱(或分别氢或氢氧根离子)的毫摩尔数(mM)。根据该定义，显而易见的是溶液中由指定量的酸或碱的加入引起的pH变化越小，溶液的缓冲能力就越大。参见例如Remington:The Science and Practice of Pharmacy,MackPublishing Co.,Easton,Pennsylvania(第19版,1995),第17章,第225-227页。缓冲能力将取决于缓冲组分的种类和浓度。

在一些实施方案中，缓冲剂包括一元酸。在一些实施方案中，缓冲剂包含多元酸(例如马来酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐)。在一些实施方案中，缓冲剂是一种或多种物质(例如，弱酸和弱碱的盐；弱酸以及弱酸与强碱的盐的混合物)的溶液。

在一些实施方案中，缓冲剂是马来酸盐缓冲剂。在一些实施方案中，缓冲剂是柠檬酸盐缓冲剂。在一些实施方案中，缓冲剂是磷酸盐缓冲剂。

冻干保护剂

如本文所用，术语“冻干保护剂”是指当与药物产品组合时降低药物产品在冻干和/或后续储存时的化学和/或物理不稳定性的物质。示例性冻干保护剂包括糖及其相应的糖醇，诸如蔗糖、乳糖、海藻糖、葡聚糖、赤藓糖醇、阿拉伯糖醇、木糖醇、山梨糖醇和甘露糖醇；氨基酸，诸如精氨酸或组氨酸；溶致性盐，诸如硫酸镁；多元醇，诸如丙二醇、甘油、聚(乙二醇)或聚(丙二醇)；以及它们的组合。额外的示例性冻干保护剂包括明胶、糊精、改性淀粉以及羧甲基纤维素。糖醇是通过使单糖和二糖诸如乳糖、海藻糖、麦芽糖、乳果糖和麦芽酮糖还原获得的那些化合物。

环糊精

环糊精是含有或包含六个(α-环糊精)、七个(β-环糊精)、八个(γ-环糊精)或更多个α-(1,4)-连接的葡萄糖残基的环状低聚糖。环糊精的羟基朝向环的外部，而糖苷氧和非交换性氢原子的两个环朝向腔体的内部。

环糊精可被化学改性成使得大环的一些或全部伯或仲羟基或两者均被侧基官能化。合适的侧基包括但不限于亚磺酰基、磺酰基、磷酸酯基、酰基，以及任选地被一个或多个(例如1、2、3或4个)羟基、羧基、羰基、酰基、氧基、氧代基取代的Cl-C12烷基；或它们的组合。改性这些醇残基的方法是本领域已知的，并且许多环糊精衍生物是可商购获得的，包括以商品名购自Ligand Pharmaceuticals(La Jolla,CA)的磺基丁基醚β-环糊精。

环糊精包括但不限于烷基环糊精、羟烷基环糊精诸如羟丙基β-环糊精、羧烷基环糊精以及磺基烷基醚环糊精诸如磺基丁基醚β-环糊精。

在具体实施方案中，环糊精是在表面上具有多个电荷(例如，负或正)的β环糊精。在更具体的实施方案中，环糊精是含有或包含多个在生理pH下带负电荷的官能团的β-环糊精。此类官能团的实例包括但不限于在生理pH下带负电荷的羧酸(羧酸酯)基团、磺酸酯(RSO^3-)、膦酸酯基团、次膦酸酯基团和氨基酸。带电官能团可直接结合至环糊精或者可通过间隔基诸如亚烷基链连接。亚烷基链中的碳原子数可以变化，但通常为约1至10个碳，优选地1-6个碳，更优选地1-4个碳。高度硫酸化环糊精描述于美国专利No.6,316,613中。

在一个实施方案中，环糊精是被多个磺基丁基醚基团官能化的β-环糊精。此类环糊精以商品名出售。

是聚阴离子β-环糊精衍生物，其具有由丁基醚间隔基或磺基丁基醚(SBE)与亲脂性腔体隔开的磺酸钠盐。不是单一化学物类，而是由多种不同取代度的聚合物结构以及位置/区域异构体组成，所述位置/区域异构体通过一致地实践和改进来控制杂质的专利制造方法而指定和控制成均一模式。

的每个环糊精分子含有六至七个磺基丁基醚基团。由于磺酸基团的极低pKa，在生理相容的pH值下携带多个负电荷。四碳丁基链与端基负电荷的排斥的结合允许了环糊精腔体的“延伸”。这通常导致与药物候选物的结合比使用其他改性环糊精可实现的更强。其还为环糊精与带正电荷的药物分子之间的离子电荷相互作用提供了可能性。此外，这些衍生物赋予分子特殊的溶解性和肠胃外安全性。相对于β-环糊精，提供了更高的相互作用特性和超过100克/100ml的优异水溶性，为50倍的改善。

增溶剂

如本文所用，术语“增溶剂”描述了能够促进不溶性或难溶性组分在包含其的溶液中溶解的物质。可用于本发明的上下文的增溶剂的代表性实例包括但不限于并且跨越例如80和20。可用于本发明的实施方案的上下文中的其他增溶剂包括例如聚氧乙烯脱水山梨糖醇酯、聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯、聚氧乙烯正烷基醚、聚乙二醇(例如，PEG200、PEG300、PEG400、PEG500、PEG600等)、正烷基胺N-氧化物、泊洛沙姆、有机溶剂、磷脂和环糊精。

容器

本文还描述了包括本文所述的水溶液或掺和物的容器。容器的实例包括袋(例如，塑料或聚合物袋诸如PVC)、小瓶(例如，玻璃小瓶)、瓶或注射器。在一个实施方案中，容器被配置成胃肠外(例如，肌内、皮下或静脉内)递送溶液或掺和物。

在一些实施方案中，旨在用于注射的产品被包装在适当尺寸的气密密封的玻璃容器中。在一些实施方案中，产品旨在在输注之前稀释，并且包装在药物小瓶或瓶(例如，适当尺寸的合适的玻璃或塑料小瓶或瓶)中。在一些实施方案中，产品可被制备成预备好用于注射，并且可以包装在旨在用于输注的预填充注射器或其他注射器装置(例如，适当尺寸的合适的玻璃或塑料包装)或大体积容器(例如，适当尺寸的合适的玻璃或塑料容器)中。在一些实施方案中，在不浸出(例如，不在溶液中引入污染物或杂质(或允许其生长))的容器中提供产品。

冻干

术语“冻干”是指冷冻干燥过程，其中通过冷冻产物并将其置于真空下来从产物中除去水，这允许冰直接从固相变成气相而不经过液相。该过程由三个独立的、独特的且彼此相关的过程组成：冷冻、初步干燥(升华)和二次干燥(解吸)。存在与冻干相关的若干优点，诸如：(i)易于处理液体，这简化了无菌处理；(ii)增强干粉的稳定性；(iii)在不过度加热产物的情况下除去水；(iv)增强干燥状态下的产物稳定性；以及(v)重构产物快速且易于溶解。

冻干过程通常包括以下步骤：

-将药物和赋形剂溶解在合适的溶剂(通常为注射用水(WFI))中。

-通过使本体溶液通过0.22微米细菌滞留过滤器来对其进行灭菌。

-填充到单独的无菌容器中并在无菌条件下部分塞住容器。

-将部分塞住的容器输送至冻干机并且在无菌条件下装入室中。

-通过将部分塞住的容器放置在冷冻干燥室中冷却的搁板上或者在另一室中预冷冻来冷冻溶液。

-对室施加真空并且加热搁板以便将水从冷冻状态蒸发。

-通常通过安装在冻干机中的液压或螺杆加塞机构来完成小瓶的堵塞。

化合物

本发明部分地涉及包含式(I-A)的化合物的药物组合物：

本文中也称为“化合物1”，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，化合物1的药学上可接受的盐是盐酸盐。

在一些实施方案中，本文所述的化合物形成为盐。本文所述的化合物可以作为游离酸、两性离子或作为盐给药。盐也可以在阳离子与本文所述的化合物(例如，化合物1的去质子化羧酸部分)上的带负电荷的取代基之间形成。合适的阳离子抗衡离子包括钠离子、钾离子、镁离子、钙离子和铵离子(例如，四烷基铵阳离子诸如四甲基铵离子)。在酸加成盐中，可以在阴离子与本文所述的化合物上的带正电荷的取代基(例如氨基)或碱性取代基(例如吡啶基)之间形成盐。合适的阴离子包括氯离子、溴离子、碘离子、硫酸根、硝酸根、磷酸根、柠檬酸根、甲磺酸根、三氟乙酸根和乙酸根。

本文所述的化合物的药学上可接受的盐(例如化合物1的药学上可接受的盐)还包括衍生自药学上可接受的无机和有机酸和碱的那些。合适的酸式盐的实例包括乙酸盐、4-乙酰胺基苯甲酸盐、己二酸盐、藻酸盐、4-氨基水杨酸盐、天冬氨酸盐、抗坏血酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、碳酸盐、肉桂酸盐、环己氨基磺酸盐、癸酸盐、癸二酸盐、2,2-二氯乙酸盐、二葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、乙烷-1,2-二磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、半乳糖二酸盐(galactarate)、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、葡萄糖酸盐、葡糖醛酸盐、谷氨酸盐、戊二酸盐、甘油磷酸盐、乙醇酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、马尿酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、1-羟基-2-萘甲酸盐、2-羟乙基磺酸盐、异丁酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、月桂酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、萘-1,5-二磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、辛酸盐、油酸盐、草酸盐、2-氧戊二酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐(palmoate)、果胶酸盐、3-苯丙酸盐、磷酸盐、膦酸盐、苦味酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、焦谷氨酸盐、水杨酸盐、癸二酸盐、琥珀酸盐、硬脂酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐和十一酸盐。

衍生自适当碱的盐包括碱金属(例如钠)、碱土金属(例如镁)、铵和(烷基)₄N⁺盐。本发明还设想了本文所公开的化合物的任何碱性含氮基团的季铵化。水或油可溶或可分散性产物可以通过此类季铵化获得。

如本文所用，本发明的化合物(包括化合物1)定义为包括其药学上可接受的衍生物或前药。“药学上可接受的衍生物或前药”意指本发明的化合物的任何药学上可接受的盐、酯、酯的盐、或其他衍生物，其在给药于接受者后能够提供(直接或间接地)本发明的化合物。特别有利的衍生物和前药是当将此类化合物给药于哺乳动物时增加本发明的化合物的生物利用度(例如，通过允许口服给药的化合物更容易吸收到血液中)或者关于母体物类增强母体化合物向生物隔室(例如，脑或淋巴系统)的递送的那些。优选的前药包括其中增强水溶性或主动转运通过肠膜的基团附加到本文所述的式的结构上的衍生物。

本文所述的任何式或化合物还旨在表示化合物的未标记形式以及同位素标记形式，同位素标记的化合物具有由本文给出的式描绘的结构，不同之处在于一个或多个原子被具有选定原子质量或质量数的原子替代。可掺入到本发明的化合物中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，分别诸如²H、³H、¹¹C、¹³C、¹⁴C、¹⁵N、¹⁸F、⁵¹P、³²P、³⁵S、³⁶Cl、¹²⁵I。本发明包括如本文所定义的各种同位素标记的化合物，例如其中存在放射性同位素诸如³H、¹³C和¹⁴C的那些。此类同位素标记的化合物可用于代谢研究(采用¹⁴C)、反应动力学研究(采用例如'H或³H)、检测或成像技术，诸如正电子发射断层显像(PET)或单光子发射计算机断层显像(SPECT)，包括药物或底物组织分布测定，或用于患者的放射性治疗。特别地，¹⁸F或标记的化合物对于PET或SPECT研究可能是特别期望的，本发明的同位素标记的化合物及其前药通常可通过用易得同位素标记的试剂代替非同位素标记的试剂，实施以下所描述的方案或实施例和制备例中公开的过程来制备。

另外，用较重同位素，特别是氘(即²H或D)取代可提供由较大代谢稳定性产生的某些治疗优势，例如体内半衰期增加、或剂量需求降低或治疗指数改善。应当理解，在该语境中氘被认为是本文所述的式的化合物的取代基。此类较重同位素，特别是氘的浓度可以由同位素浓集系数来限定。如本文所用，术语“同位素富集因子”意指指定同位素的同位素丰度与天然丰度之间的比率。如果本发明的化合物中的取代基用氘表示，则对于每一指定氘原子而言此类化合物具有至少3500(每一指定氘原子处52.5％氘掺入)、至少4000(60％氘掺入)、至少4500(67.5％氘掺入)、至少5000(75％氘掺入)、至少5500(82.5％氘掺入)、至少6000(90％氘掺入)、至少6333.3(95％氘掺入)、至少6466.7(97％氘掺入)、至少6600(99％氘掺入)、或至少8633.3(99.5％氘掺入)的同位素富集因子。

本文所述的同位素标记的化合物通常可通过本领域的技术人员已知的常规技术或者通过与所附实施例和制备例中所述的那些类似的方法，使用适当的同位素标记的试剂取代先前采用的未标记的试剂来制备。根据本发明的药学上可接受的溶剂化物包括其中结晶的溶剂可以是同位素取代的那些，例如D₂O、D₆-丙酮、D₆-DMSO。

本发明的化合物的任何非对称原子(例如碳等)可以以外消旋或对映体富集的形式存在，例如(R)-(S)-或(RS)-构型，在某些实施方案中，每个非对称原子具有(R)-或(S)-构型的至少50％对映异构体过量、至少60％对映体过量、至少70％对映体过量、至少80％对映体过量、至少90％对映体过量、至少95％对映体过量、或至少99％对映体过量。如果可能，在具有不饱和键的原子上的取代基可以以顺式-(Z)-或反式-(E)-形式存在。

因此，如本文所用，本发明的化合物可以是可能的异构体、旋转异构体、阻转异构体、互变异构体或它们的混合物中的一种的形式，例如作为基本上纯的几何(顺式或反式)异构体、非对映体、光学异构体(镜像体)、外消旋体或它们的混合物。可基于组分的物理化学差异将任何所得的异构体混合物分离成纯的或基本上纯的几何或光学异构体、非对映体、外消旋体，例如通过色谱法或分级结晶。

最终产物或中间体的任何所得外消旋体可通过已知方法拆分成光学镜像体，例如通过分离用光学活性酸或碱获得的其非对映体盐，并释放光学活性酸性或碱性化合物。因此，酸性部分可用于将本发明的化合物拆分成其光学镜像体，例如，通过分级结晶与光学活性酸，例如酒石酸、二苯甲酰酒石酸、二乙酰基酒石酸、(+)-O,O′-二对甲苯酰-D-酒石酸、扁桃酸、苹果酸或樟脑-10-磺酸所形成的盐。外消旋产物还可以通过手性色谱法，例如使用手性吸附剂的高压液相色谱法(HPLC)来拆分。

本文所述的化合物(例如化合物1)也可以以多种互变异构形式表示。在此类情况下，本发明明确地包括本文所述的化合物的所有互变异构形式。本文所述的化合物的所有晶型明确地包括在本发明中。

合成化合物的方法

本文所述的化合物可以通过常规方法使用市售的起始材料和试剂进行合成。例如，可以利用美国专利No.7,501,404中所陈述的方法或者如本文所述的方法中描述的方法来合成化合物。

可以使用合成有机化学领域中的各种技术来纯化本文所述的化合物。可以使用一种或多种色谱方法，例如柱色谱法或HPLC来纯化本文所述的化合物。可以通过不是色谱法的纯化方法，例如重结晶或浆化来纯化本文所述的化合物。在一个实施方案中，可以使用重结晶来纯化本文所述的化合物。在另一个实施方案中，还可以通过浆化来纯化本文所述的化合物。

在一些实施方案中，还可以通过重结晶来纯化已经通过色谱法纯化的本文所述的化合物。还可以通过用一种或多种溶剂浆化(或再浆化)(例如，本文所述的浆化)化合物来纯化本文所述的化合物。还可以通过用一种或多种溶剂研磨(例如，本文所述的研磨)来纯化本文所述的化合物。例如，还可以通过研磨来纯化已经通过色谱法纯化的本文所述的化合物。在化学反应器中，可以通过在机械搅拌下将固体产物悬浮或再悬浮于溶剂或溶剂的混合物中来影响研磨过程。在一个实施方案中，还可以通过使用一种或多种反溶剂从溶液中沉淀来纯化本文所述的化合物。例如，还可以通过沉淀来纯化已经通过色谱法纯化的本文所述的化合物。在一个实施方案中，通过模拟移动床(SMB)色谱法来纯化本文所述的化合物。在一个实施方案中，通过超临界流体色谱法，例如采用液体二氧化碳的超临界流体色谱法来纯化本文所述的化合物。在一个实施方案中，通过手性色谱法，例如使用手性吸附剂的高压液相色谱法(HPLC)来纯化本文所述的化合物。

治疗、预防或降低风险的方法

本文所述的化合物(例如化合物1或其药学上可接受的盐)可以抑制因子XIa或激肽释放酶。在一些实施方案中，本文所述的化合物(例如化合物1或其药学上可接受的盐)可以抑制因子XIa和激肽释放酶两者。因此，这些化合物可用于治疗、预防本文所述的障碍，或者降低本文所述的障碍的风险。

示例性障碍包括与冠状动脉和脑血管疾病、静脉或动脉血栓形成、凝血综合征、缺血(例如冠状动脉缺血)和心绞痛(稳定型和不稳定型)、深静脉血栓形成(DVT)、肝静脉血栓形成、弥散性血管内凝血病、卡沙巴梅综合征、肺栓塞、心肌梗塞(例如ST段抬高心肌梗塞或非ST段抬高心肌梗塞(例如导管插入术前的非ST段抬高心肌梗塞)、脑梗死、脑血栓形成、短暂性缺血发作、心房纤颤(例如非瓣膜性房颤)、脑栓塞、手术(例如髋关节或膝关节置换、矫形手术、心脏手术、肺部手术、腹部外科、或动脉内膜切除术)的血栓栓塞并发症以及外周动脉闭塞相关的血栓性事件，并且还可用于治疗或防止心肌梗塞、中风(例如大血管急性缺血性中风)、心绞痛和动脉粥样斑块破裂的其他后果。具有因子XIa或激肽释放酶抑制活性的本发明的化合物还可用于在癌症患者(包括接受化学疗法的那些和/或具有升高的乳糖酶脱氢酶(LDH)水平的那些)中防止血栓栓塞性障碍，例如静脉血栓栓塞，并且在基于组织纤溶酶原激活剂的或机械的恢复血管通畅之时或之后防止血栓栓塞事件。具有因子XIa或激肽释放酶抑制活性的本发明的化合物还可用作诸如全血的制备、储存和分级期间的凝血抑制剂。另外，本文所述的化合物可用于急症医院环境或围手术期，其中患者处于血栓栓塞性障碍或并发症的风险，并且还可用于处于高度凝血状态的患者，例如癌症患者。

根据本发明，因子XIa抑制可以是与抑制其他凝结丝氨酸蛋白酶诸如凝血酶或因子Xa相比更有效且更安全的抑制血栓形成的方法。给药小分子因子XIa抑制剂应当具有抑制凝血酶生成和凝块形成的效应，而对出血时间没有或基本上没有效应，并且止血几乎没有或没受损。这些结果基本上不同于其他“直接作用的”凝结蛋白酶抑制剂(例如，凝血酶和因子Xa的活性部位抑制剂)的结果，其展示了出血时间的延长以及抗血栓形成功效与出血时间延长之间的较少分离。根据本发明的优选的方法包括向哺乳动物给药包含至少一种本发明的化合物的药物组合物。

本文所述的化合物(例如化合物1或其药学上可接受的盐)可以抑制激肽释放酶。因此，这些化合物可用于治疗、预防涉及炎症的疾病，诸如水肿(例如脑水肿、黄斑水肿和血管性水肿(例如遗传性血管性水肿))，或降低其风险。在一些实施方案中，本发明的化合物可用于治疗或防止遗传性血管性水肿。本文所述的化合物(例如化合物1)，例如化合物1或其药学上可接受的盐还可用于治疗、预防例如中风、缺血(例如冠状动脉缺血)和围手术期失血，或降低其风险。本发明的方法可用于治疗或防止涉及因子XIa或激肽释放酶的作用的那些病症。因此，本发明的方法可用于治疗动脉粥样斑块破裂的后果，包括与血栓形成或易栓性状态下凝血级联系统的激活相关联的心血管疾病。

更具体地，本发明的方法可用于治疗、预防急性冠脉综合征，诸如冠状动脉疾病、心肌梗塞、不稳定型心绞痛(包括递增型心绞痛)、缺血(例如由血管闭塞引起的缺血)和脑梗死，或降低其风险。本发明的方法还可用于治疗、预防中风(例如大血管急性缺血性中风)和相关脑血管病(包括脑血管意外、血管性痴呆和短暂性缺血发作)；静脉血栓形成和血栓栓塞，诸如深静脉血栓形成(DVT)和肺栓塞；与心房纤颤、心室扩大、扩张型心肌病或心力衰竭相关联的血栓形成；外周动脉疾病和间歇性跛行；动脉粥样硬化斑块的形成和移植动脉粥样硬化；内源性(通过动脉粥样硬化斑块破裂)或外源性(通过侵入性心脏病学程序，诸如血管成形术或颅后动脉支架术引起的血管壁损伤)诱导的动脉损伤后的再狭窄；弥散性血管内凝血病、卡沙巴梅综合征、脑血栓形成和脑栓塞，或降低其风险。

另外，本发明的方法可用于治疗、预防(例如防止)与癌症、血栓切除术、手术(例如髋关节置换、矫形手术)、动脉内膜切除术、引入人造心脏瓣膜、外周血管介入(例如肢体)、脑血管介入、用于治疗动脉瘤的大口径介入、血管移植物、机械性器官，以及植入(例如经导管主动脉瓣植入)或器官移植(例如肝脏、组织或细胞的移植)；经皮冠状动脉介入；导管消融；血友病疗法；血液透析；在患有心肌梗塞、中风(例如大血管急性缺血性中风)、肺栓塞和类似病症的患者中的药物(诸如组织纤溶酶原激活剂或类似试剂以及血管通畅的手术恢复)；药物(诸如口服避孕药、激素替代和肝素，例如用于治疗肝素-诱导的血小板减少症)；脓毒症(诸如与弥散性血管内凝血相关的脓毒症)；妊娠或分娩；以及另一种慢性医学病症相关联的血栓栓塞后果或并发症，或降低其风险。本发明的方法可用于治疗由于禁闭(例如，固定、住院治疗、卧床、或肢体固定，例如用固定石膏等)所致的血栓形成。在一些实施方案中，血栓栓塞后果或并发症与经皮冠状动脉介入相关联。

另外，本文所述的化合物(例如化合物1)或其药学上可接受的盐或其组合物可用于在受试者中治疗、预防血栓栓塞性障碍，例如静脉血栓栓塞、深静脉血栓形成或肺栓塞、或相关并发症或降低其风险，其中受试者暴露于人造表面。人造表面可以接触受试者的血液，例如，作为体外表面或可植入装置的表面。此类人造表面包括但不限于透析管、心肺转流环、人造心脏瓣膜，例如机械心脏瓣膜(MHV)、心室辅助装置、小口径移植物、中心静脉导管、体外膜肺氧合(ECMO)设备的那些。另外，血栓栓塞性障碍或相关的并发症可由人造表面引起或者与人造表面相关。例如，机械心脏瓣膜(MHV)的外来表面和各种部件是促血栓形成的，并且经由内源性凝血途径促进凝血酶生成。此外，凝血酶和FXa抑制剂禁用于由人造表面(例如那些MHV)引起的血栓栓塞性障碍或相关并发症，因为这些抑制剂在不会引起大出血的血浆水平下对阻断内源性途径是无效的。可用作例如因子XIa抑制剂的本发明化合物因此被设想作为用于这些目的的替代治疗剂。

本文所述的化合物(例如化合物1)或其药学上可接受的盐或其组合物还可用于在有此需要的受试者中治疗、预防心房纤颤、或降低心房纤颤的风险。例如，受试者可具有发展为心房纤颤的高风险。受试者还可需要透析，诸如肾透析。本文所述的化合物(例如化合物1)或其药学上可接受的盐或其组合物可在透析之前、期间或之后给药。目前市场上可用的直接口服抗凝血剂(DOAC)，例如某些FXa或凝血酶抑制剂在此类情况下禁用于心房纤颤。可用作例如因子XIa抑制剂的本发明化合物因此被设想作为用于这些目的的替代治疗剂。另外，受试者可处于出血的高风险。在一些实施方案中，受试者可患有终末期肾病。在其他情况下，受试者不需要透析，诸如肾透析。另外，心房纤颤可与另一种血栓栓塞性障碍诸如血块相关联。

此外，本文所述的化合物(例如化合物1)或其药学上可接受的盐或其组合物可用于在受试者中治疗、预防高血压(例如动脉高血压)、或降低其风险。在一些实施方案中，高血压(例如动脉高血压)可导致动脉粥样硬化。在一些实施方案中，高血压可为肺动脉高压。

此外，本文所述的化合物(例如化合物1)或其药学上可接受的盐或其组合物可用于治疗、预防障碍诸如肝素诱导的血小板减少症、肝素诱导的血小板减少性血栓形成、或血栓性微血管病，例如溶血性尿毒综合征(HUS)或血栓性血小板减少性紫癜或降低其风险。

在一些实施方案中，受试者对肝素敏感或者已经发展为对肝素敏感。肝素诱导的血小板减少症(HIT)是由于给药各种形式的肝素而发展的(低血小板计数)。HIT由激活血小板的异常抗体的形成引起。HIT可用特定血液测试加以确认。在一些实施方案中，受试者对肝素有耐药性或已经发展为对肝素有耐药性。例如，可以对受试者进行活化凝血时间(ACT)测试以测试对肝素的敏感性或耐药性。ACT测试是检测纤维蛋白形成物的存在的内源性凝血途径的量度。对标准剂量的肝素敏感和/或有耐药性的受试者通常不会达到目标抗凝时间。肝素耐药性的常见相关因素包括但不限于先前的肝素和/或硝酸甘油滴以及降低的抗凝血酶III水平。在一些实施方案中，受试者先前已经给药了抗凝血剂(例如比伐卢定/Angiomax)。

本文所述的化合物(例如化合物1)或其药学上可接受的盐或其组合物可用于在受试者中减少炎症。在一些实施方案中，炎症可为血管炎症。在一些实施方案中，血管炎症可伴有动脉粥样硬化。在一些实施方案中，血管炎症可伴有受试者中的血栓栓塞性疾病。在一些实施方案中，血管炎症可为血管紧张素II-诱导的血管炎症。

本文所述的化合物(例如化合物1)或其药学上可接受的盐或其组合物可用于治疗、预防肾障碍或肾功能障碍(包括受试者中的终末期肾病、高血压相关的肾功能障碍)、肾纤维化和肾损伤、或降低其风险。

本发明的方法还可用于维持血管通畅，例如，在进行血栓切除术、经管腔冠状动脉血管成形术的患者中，或者在血管手术诸如旁路移植术、动脉重建、粥样斑块切除术、血管移植物、支架通畅以及器官、组织或细胞植入和移植方面。本发明的方法可用于在全血的制备、储存、分级或使用方面抑制凝血。例如，本发明的方法可用于在流体相中维持全血和分级血液，诸如分析和生物测试所需的，例如用于离体血小板和其他细胞功能研究、生物分析程序和含有血液的组分的定量，或用于维持体外血液循环，如在肾脏替代溶液(例如，血液透析)或手术(例如，开心手术，例如冠状动脉搭桥术)中。在一些实施方案中，肾脏替代溶液可用于治疗患有急性肾损伤的患者。在一些实施方案中，肾脏替代溶液可以是连续性肾脏替代疗法。

此外，本发明的方法可用于治疗和防止癌症的促血栓形成并发症。该方法可用于作为化学疗法的辅助来治疗肿瘤生长，以用于防止血管生成，以及用于治疗癌症，更具体地肺癌、前列腺癌、结肠癌、乳腺癌、卵巢癌和骨癌。

体外膜肺氧合(ECMO)

如本文所用，“体外膜肺氧合”(或“ECMO”)是指具有血泵、人造肺和血管通路插管的体外生命支持，其能够提供循环支持或者生成适于支持血液氧合和任选地二氧化碳去除的血流速率。在静-静脉ECMO中，向已经从静脉系统抽出的血液提供体外气体交换；然后将血液重新输注到静脉系统中。在静-动脉ECMO中，向从静脉系统抽出的血液提供气体交换，然后直接输注到动脉系统中以提供部分或完全的循环或心脏支持。静-动脉ECMO允许各种程度的呼吸支持。

如本文所用，“体外膜肺氧合”或“ECMO”是指提供循环支持或生成足以支持血液氧合的血流速率的体外生命支持。在一些实施方案中，ECMO包括从受试者的血液中除去二氧化碳。在一些实施方案中，ECMO使用体外设备进行，该体外设备选自血泵、人造肺和血管通路插管。

如本文所用，“静-静脉ECMO”是指这样一类ECMO：其中将血液从受试者的静脉系统抽取到ECMO设备中并经受气体交换(包括血液氧合)，随后将抽取的血液重新输注到受试者的静脉系统中。如本文所用，“静-动脉ECMO”是指这样一类ECMO：其中将血液从受试者的静脉系统抽取到ECMO设备中并经受气体交换(包括血液氧合)，随后将抽取的血液直接输注到受试者的动脉系统中。在一些实施方案中，进行静-动脉ECMO以向有此需要的受试者提供部分循环或心脏支持。在一些实施方案中，进行静-动脉ECMO以向有此需要的受试者提供完全循环或心脏支持。

本发明的化合物可用于在有此需要的受试者中治疗、预防、或降低血栓栓塞性障碍的风险，其中受试者暴露于诸如体外膜肺氧合(ECMO)设备(参见上文)的人造表面，其可用作响应于心脏或肺衰竭的挽救疗法。直接接触受试者的ECMO设备的表面可以是可导致血栓栓塞性障碍诸如静脉血栓栓塞(例如深静脉血栓形成或肺栓塞)的促血栓形成表面，从而导致难以治疗需要ECMO的患者。循环中的凝块是最常见的机械并发症(19％)。大凝块可导致氧合器失败，以及肺或体循环栓塞。

ECMO通常被给予连续输注的肝素作为抗凝血剂以抵制凝块形成。然而，插管放置可引起对颈内静脉的损伤，这引起大量内出血。30-40％的接受ECMO的患者发生出血，并且可能危及生命。这种严重出血是由于必需的连续肝素输注和血小板功能障碍两者。大约50％的报告死亡数是由于严重的出血并发症。Aubron等人Critical Care,2013,17:R73着眼于与ECMO结果相关联的因素。

可用作例如因子XIa抑制剂的本发明的化合物因此被设想在ECMO疗法中作为肝素的替代性的替代。本发明的化合物被设想是在血浆水平上阻断内源性途径的有效试剂，其将提供有效的抗凝血/抗血栓形成而没有显著的出血倾向。在一些实施方案中，受试者对肝素敏感或者已经发展为对肝素敏感。在一些实施方案中，受试者对肝素有耐药性或已经发展为对肝素有耐药性。

缺血

“缺血”或“缺血事件”是通常涉及血管闭塞或对组织的血液供应有限制的血管疾病。缺血可导致细胞代谢所需的氧和葡萄糖缺乏。缺血通常由导致组织损伤或功能障碍的有问题的血管引起。缺血也可指由充血(例如血管收缩、血栓形成或栓塞)引起的身体的给定部位的局部失血或缺氧。病因包括栓塞、动脉粥样硬化动脉的血栓形成、创伤、静脉问题、动脉瘤、心脏病症(例如，心肌梗塞、二尖瓣疾病、慢性动脉纤颤、心肌病和假体)、创伤或创伤性损伤(例如，对于产生部分或完全血管阻塞的四肢)、胸廓出口综合征、动脉粥样硬化、低血糖症、心动过速、低血压、血管的外部压缩(例如，通过肿瘤)、镰状细胞病、局部极度寒冷(例如，通过冻伤)、止血带应用、谷氨酸受体刺激、动静脉畸形、供应组织或器官的重要血管破裂以及贫血。

短暂性缺血事件通常是指由血流损失(例如，局灶性脑、脊髓或视网膜中)引起而无急性梗死(例如，组织死亡)的神经功能障碍的短暂性(例如，短期的)发作。在一些实施方案中，短暂性缺血事件持续少于72小时、48小时、24小时、12小时、10小时、8小时、4小时、2小时、1小时、45分钟、30分钟、20分钟、15分钟、10分钟、5分钟、4分钟、3分钟、2分钟或1分钟。

血管性水肿

血管性水肿是真皮、皮下组织、粘膜和粘膜下层组织的快速肿胀。血管性水肿通常被归类为遗传性的或获得性的。

“获得性血管性水肿”可以是免疫性的、非免疫性的或特发性的；由例如变态反应引起，作为药物(例如ACE抑制剂药物)的副作用。

“遗传性血管性水肿”或“HAE”是指导致可在身体的几乎所有部位(包括面部、肢体、颈部、咽喉、喉、四肢、胃肠道和生殖器)中发生的急性期水肿(例如肿胀)的遗传性障碍。HAE的发作通常是危及生命的，严重程度取决于受影响的区域，例如，腹部发作可导致肠梗阻，而喉和上气道的肿胀可导致窒息。遗传性血管性水肿的发病机制可能与初始生成的激肽释放酶或凝血因子(例如，因子XII)对接触途径的非对抗性激活有关。

体征和症状包括例如面部的技能、口腔或咽喉粘膜以及舌头的肿胀。瘙痒、疼痛、受影响区域的感觉减退、荨麻疹(即假膜性喉头炎)或气道喘鸣也可为血管性水肿的体征。然而，例如在遗传性血管性水肿中，可以不存在相关的瘙痒或荨麻疹。HAE受试者可经历腹痛(例如，持续一至五天的腹痛、增加受试者的白细胞计数的腹部发作)、呕吐、虚弱、水泻或皮疹。

缓激肽在血管性水肿，特别是遗传性血管性水肿中发挥重要作用。缓激肽由各种细胞类型响应多种不同刺激而释放出，并且是疼痛介质。干扰缓激肽产生或降解可导致血管性水肿。在遗传性血管性水肿中，激肽释放酶的连续产生可促进缓激肽形成。激肽释放酶的抑制可干扰缓激肽产生；并且治疗或防止血管性水肿。

本文所述的方法可包括向有此需要的受试者给药有效量的本文所述的药物组合物。

在一个方面，本文所述的方法可包括其中受试者的血液与人造表面接触的那些。例如，本文提供了一种在有此需要的受试者中治疗血栓栓塞性障碍的方法，该方法包括向受试者给药有效量的本文所述的药物组合物，其中受试者的血液与人造表面接触。

在另一方面，本文提供了一种在有此需要的受试者中降低血栓栓塞性障碍的风险的方法，该方法包括向受试者给药有效量的本文所述的药物组合物，其中受试者的血液与人造表面接触。

本文还提供了一种在有此需要的受试者中预防血栓栓塞性障碍的方法，该方法包括向受试者给药有效量的本文所述的药物组合物，其中受试者的血液与人造表面接触。

在本文所述的方法的一些实施方案中，人造表面与受试者的循环系统中的血液接触。

在一些实施方案中，人造表面是可植入装置、透析管、心肺转流环、人造心脏瓣膜、心室辅助装置、小口径移植物、中心静脉导管或体外膜肺氧合(ECMO)设备。

在一些实施方案中，人造表面导致血栓栓塞性障碍或者与血栓栓塞性障碍相关联。

在一些实施方案中，血栓栓塞性障碍是静脉血栓栓塞、深静脉血栓形成或肺栓塞。

在一些实施方案中，血栓栓塞性障碍是血块。

在一些实施方案中，本文所述的方法还包括在人造表面与受试者的循环系统中的血液接触之前，用单独剂量的本文所述的药物组合物调节人造表面。

在一些实施方案中，本文所述的方法还包括在将药物组合物给药于受试者之前或期间，用单独剂量的本文所述的药物组合物调节人造表面。

在一些实施方案中，本文所述的方法还包括在将药物组合物给药于受试者之前和期间，用单独剂量的本文所述的药物组合物调节人造表面。

在本文所述的方法的一些实施方案中，人造表面是心肺转流环。

在本文所述的方法的一些实施方案中，人造表面是体外膜肺氧合(ECMO)设备。在一些实施方案中，ECMO设备是静-静脉ECMO设备或静-动脉ECMO设备。

在另一方面，本文公开了一种在医疗程序期间或之后在受试者中防止血栓栓塞性障碍或降低血栓栓塞性障碍的风险的方法，该方法包括：

(i)在医疗程序之前、期间或之后，向受试者给药有效量的本文所述的药物组合物；以及

(ii)使受试者的血液与人造表面接触；

从而在医疗程序期间或之后防止血栓栓塞性障碍或降低血栓栓塞性障碍的风险。

在一些实施方案中，在医疗程序之前、期间或之后，在将药物组合物给药于受试者之前，用本文所述的药物组合物调节人造表面。

在一些实施方案中，用于调节人造表面的药物组合物还包含溶液，其中溶液选自盐水溶液、林格氏液和血液。

在一些实施方案中，血栓栓塞性障碍是血块。

在一些实施方案中，医疗程序包括以下中的一者或多者：i)心肺转流术，ii)经由体外膜肺氧合来氧合和泵送血液，iii)辅助泵送血液(内部或外部)，iv)血液透析，v)体外过滤血液，vi)将所述受试者的血液采集在储存库中以供后续在动物或人类受试者中使用，vii)使用静脉或动脉管腔内导管，viii)使用用于诊断性或介入性心导管插入术的装置，ix)使用血管内装置，x)使用人造心脏瓣膜，以及xi)使用人造移植物。

在一些实施方案中，医疗程序包括心肺转流术。

在一些实施方案中，医疗程序包括经由体外膜肺氧合(ECMO)来氧合和泵送血液。在一些实施方案中，ECMO是静-静脉ECMO或静-动脉ECMO。

在本文所述的方法的一些实施方案中，受试者与人造表面接触至少1天(例如约2天、约3天、约4天、约5天、约6天、约1周、约10天、约2周、约3周、约4周、约2月、约3月、约6月、约9月、约1年)。

在另一方面，本文提供了一种治疗有此需要的受试者的血液的方法，该方法包括向受试者给药有效量的本文所述的药物组合物。

在本文所述的方法的一些实施方案中，将药物组合物静脉内给药于受试者。在本文所述的方法的其他实施方案中，将药物组合物皮下给药于受试者。在一些实施方案中，将药物组合物以连续静脉输注给药于受试者。在一些实施方案中，将药物组合物经推注给药于受试者。

在一些实施方案中，受试者是人类。在一些实施方案中，受试者具有血栓栓塞性障碍升高的风险。在一些实施方案中，血栓栓塞性障碍是手术并发症的结果。在一些实施方案中，受试者对肝素敏感或者已经发展为对肝素敏感。在一些实施方案中，受试者对肝素有耐药性或已经发展为对肝素有耐药性。

药物组合物

本文所述的组合物包含本文所述的化合物(例如化合物1或其药学上可接受的盐)以及额外的治疗剂(如果存在)，其量有效地实现疾病或疾病症状(例如，诸如与因子XIa或激肽释放酶相关联的疾病)的治疗。

可用于在此提供的药物组合物中的药学上可接受的载体、佐剂和媒介物包括但不限于离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、自乳化药物递送体系(SEDDS)诸如d-α-生育酚聚乙二醇1000琥珀酸酯、药物剂型中使用的表面活性剂诸如Tweens或其他类似的聚合物递送基质、血清蛋白诸如人血清白蛋白、缓冲物质诸如磷酸盐、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、盐或电解质诸如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、胶态二氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素基物质、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧化丙烯-嵌段聚合物、聚乙二醇和羊毛脂。环糊精诸如α-、β-和γ-环糊精，或化学改性衍生物诸如羟烷基环糊精(包括2-和3-羟丙基-β-环糊精)或其他增溶衍生物也可有利地用于增强本文所述的式的化合物的递送。

药物组合物可以是固体组合物(例如，冻干组合物)的形式，其可在肠胃外给药之前通过添加相容的重构稀释剂来重构；或者是冷冻组合物的形式，其适于解冻并且根据需要在肠胃外给药之前用相容的稀释剂稀释。在一些实施方案中，药物组合物包括在单位剂量IV袋或瓶中以适于静脉内给药于受试者的浓度溶解在水性介质(例如，盐水溶液、右旋糖溶液)中的颗粒或粉末(例如，冻干组合物)。在一些实施方案中，适于静脉内给药的药物组合物的成分在单个容器中彼此隔开，例如包含本文所述的化合物或其药学上可接受的盐的粉末与水性介质诸如盐水溶液隔开。在该后一实例中，各种组分由密封件隔开，该密封件能够破裂而使成分彼此接触以形成适于静脉内给药的药物组合物。

在一个方面，本文提供了一种包含式(I-A)的化合物的水性药物组合物，

或其药学上可接受的盐、环糊精和赋形剂。

在一些实施方案中，药物组合物包含式(I-A)的化合物、环糊精和赋形剂。在一些实施方案中，环糊精选自烷基环糊精、羟烷基环糊精、羧烷基环糊精和磺基烷基醚环糊精。在一些实施方案中，环糊精是羟丙基β-环糊精。在一些实施方案中，环糊精是磺基丁基醚β-环糊精。

在一些实施方案中，赋形剂是糖(例如糖类(例如单糖、二糖或多糖))或糖醇。例如，赋形剂是蔗糖、乳糖、海藻糖、葡聚糖、赤藓糖醇、阿拉伯糖醇、木糖醇、山梨糖醇、或甘露糖醇、或它们的组合。在一些实施方案中，赋形剂是甘露糖醇。在一些实施方案中，赋形剂是乳糖。

在一些实施方案中，本文所述的药物组合物还包含缓冲剂。在一些实施方案中，缓冲剂是单质子酸或多质子酸或它们的组合。在一些实施方案中，缓冲剂是一种或多种物质的溶液。在一些实施方案中，缓冲剂是弱酸和弱碱的盐的溶液。在一些实施方案中，缓冲剂是弱酸与强碱的盐的溶液。在一些实施方案中，缓冲剂选自马来酸盐缓冲剂、柠檬酸盐缓冲剂和磷酸盐缓冲剂。在一些实施方案中，缓冲剂是磷酸盐缓冲剂。在一些实施方案中，磷酸盐缓冲剂是磷酸一钠、磷酸二钠、磷酸三钠、或它们的组合的溶液。

在一些实施方案中，药物组合物还包含增溶剂。在一些实施方案中，增溶剂是聚氧乙烯脱水山梨糖醇酯(例如20)或聚乙二醇(例如PEG400)。

在一些实施方案中，增溶剂的量为相对于式(I-A)的化合物的重量计约0.01重量％至约1重量％、约0.01重量％至约0.9重量％、约0.01重量％至约0.8重量％、约0.01重量％至约0.7重量％、约0.01重量％至约0.6、约0.01重量％至约0.5重量％、约0.01重量％至约0.4重量％、约0.01重量％至约0.3重量％、约0.01重量％至约0.2重量％、约0.01重量％至约0.1重量％、或约0.01重量％至约0.05重量％。

在一些实施方案中，组合物的pH为约2至约8(例如约3至约7、约4至约7、约5至约6、约6至约7、约6至约8、约5至约8、约4至约8、或约3至约8)。在一些实施方案中，pH为约6至约8。在一些实施方案中，pH为约6至约7。在一些实施方案中，pH为约7。在一些实施方案中，pH为约6.8。

在一些实施方案中，式(I-A)的化合物的浓度为约0.1mg/mL至约100mg/mL、约0.1mg/mL至约80mg/mL、约0.1mg/mL至约60mg/mL、约0.1mg/mL至约40mg/mL、约0.1mg/mL至约20mg/mL、约0.1mg/mL至约10mg/mL、约1mg/mL至约100mg/mL、约1mg/mL至约80mg/mL、约1mg/mL至约60mg/mL、约1mg/mL至约40mg/mL、约1mg/mL至约20mg/mL、约1mg/mL至约10mg/mL、约10mg/mL至约100mg/mL、约10mg/mL至约80mg/mL、约10mg/mL至约60mg/mL、约10mg/mL至约40mg/mL、约20mg/mL至约100mg/mL、约20mg/mL至约80mg/mL、约20mg/mL至约60mg/mL、约40mg/mL至约100mg/mL、约40mg/mL至约80mg/mL、约60mg/mL至约100mg/mL、约60mg/mL至约80mg/mL、或约80mg/mL至约100mg/mL。

在一些实施方案中，式(I-A)的化合物的浓度为约0.1mg/mL、约1mg/mL、约2.5mg/mL、约5mg/mL、约10mg/mL、约15mg/mL、约20mg/mL、约25mg/mL、约30mg/mL、约35mg/mL、约40mg/mL、约45mg/mL、或约50mg/mL。在一些实施方案中，式(I-A)的化合物的浓度为约10mg/mL。在一些实施方案中，式(I-A)的化合物的浓度为约3mg/mL。在一些实施方案中，式(I-A)的化合物的浓度为约1mg/mL。

在一些实施方案中，缓冲剂的浓度为约1mM至约500mM、约1mM至约250mM、约1mM至约100mM、约1mM至约50mM、约1mM至约20mM、约1mM至约10mM、10mM至约500mM、约10mM至约250mM、约10mM至约100mM、约10mM至约50mM、约10mM至约20mM、约20mM至约500mM、约20mM至约250mM、约20mM至约100mM、约20mM至约50mM、约50mM至约500mM、约50mM至约250mM、约50mM至约100mM、约100mM至约500mM、或约100mM至约250mM。

在一些实施方案中，缓冲剂的浓度为约5mM、约10mM、约15mM、约20mM、约25mM、约30mM、约40mM、约50mM、约60mM、约70mM、约80mM、约90mM、约100mM、约110mM、约120mM、约130mM、约140mM、约150mM、约160mM、约170mM、约180mM、约190mM、约200mM、约210mM、约220mM、约230mM、约240mM、约250mM、约300mM、约350mM、约400mM、约450mM、或约500mM。在一些实施方案中，缓冲剂的浓度为约10mM。

在一些实施方案中，缓冲剂是磷酸盐缓冲剂。

在一些实施方案中，磷酸盐缓冲剂的浓度为约1mM至约500mM、约1mM至约250mM、约1mM至约100mM、约1mM至约50mM、约1mM至约20mM、约1mM至约10mM、10mM至约500mM、约10mM至约250mM、约10mM至约100mM、约10mM至约50mM、约10mM至约20mM、约20mM至约500mM、约20mM至约250mM、约20mM至约100mM、约20mM至约50mM、约50mM至约500mM、约50mM至约250mM、约50mM至约100mM、约100mM至约500mM、或约100mM至约250mM。

在一些实施方案中，磷酸盐缓冲剂的浓度为约5mM、约10mM、约15mM、约20mM、约25mM、约30mM、约40mM、约50mM、约60mM、约70mM、约80mM、约90mM、约100mM、约110mM、约120mM、约130mM、约140mM、约150mM、约160mM、约170mM、约180mM、约190mM、约200mM、约210mM、约220mM、约230mM、约240mM、约250mM、约300mM、约350mM、约400mM、约450mM、或约500mM。在一些实施方案中，磷酸盐缓冲剂的浓度为约10mM。

在一些实施方案中，环糊精的量为相对于式(I-A)的化合物的重量计约0.1重量％至约10重量％、约0.1重量％至约7.5重量％、约0.1重量％至约5重量％、约0.1重量％至约3.5重量％、约0.1重量％至约1重量％、约1重量％至约10重量％、约1重量％至约7.5重量％、约1重量％至约5重量％、约3重量％至约10重量％、约3重量％至约7.5重量％、或约3重量％至约5重量％。在一些实施方案中，环糊精的量为相对于式(I-A)的化合物的重量计约1重量％、1.5重量％、2重量％、2.5重量％、3重量％、3.5重量％、4重量％、4.5重量％或5重量％。在一些实施方案中，环糊精的量为相对于式(I-A)的化合物的重量计约0.1重量％至约10重量％(例如约0.5重量％至约6重量％(例如约0.7重量％至约5.6重量％(例如约2.1重量％至约5重量％)))。在一些实施方案中，环糊精的量为相对于式(I-A)的化合物的重量计约3.5重量％。在一些实施方案中，环糊精的量为相对于式(I-A)的化合物的重量计约5重量％。

在一些实施方案中，环糊精是羟丙基β-环糊精。

在一些实施方案中，赋形剂的量为相对于式(I-A)的化合物的重量计约0.1重量％至约10重量％、约0.1重量％至约7.5重量％、约0.1重量％至约5重量％、约0.1重量％至约3.5重量％、约0.1重量％至约1重量％、约1重量％至约30重量％、约1重量％至约20重量％、约1重量％至约10重量％、约1重量％至约7.5重量％、约1重量％至约5重量％、约3重量％至约10重量％、约3重量％至约7.5重量％、约3重量％至约5重量％、约3重量％至约20重量％、约3重量％至约30重量％、约5重量％至约20重量％、或约5重量％至约30重量％。在一些实施方案中，赋形剂的量为相对于式(I-A)的化合物的重量计约1重量％、1.5重量％、2重量％、2.5重量％、3重量％、3.5重量％、4重量％、4.5重量％、5重量％、10重量％、20重量％、或30重量％。在一些实施方案中，赋形剂的量为相对于式(I-A)的化合物的重量计约3重量％。在一些实施方案中，赋形剂的量为相对于式(I-A)的化合物的重量计约5重量％。

在一些实施方案中，赋形剂是甘露糖醇。在一些实施方案中，赋形剂是乳糖。

在另一方面，本文提供了一种包含组合物的冻干制剂，该组合物在冻干之前对应于本文所述的水性药物组合物(例如，包含式(I-A)的化合物或其药学上可接受的盐、环糊精和赋形剂的水性药物组合物)。在一些实施方案中，将如本文所述的冻干制剂在水性介质中重构，从而制备适于肠胃外给药于有此需要的受试者的水性药物溶液。

在另一方面，本文提供了一种包含颗粒的药物组合物，其中颗粒包含式(I-A)的化合物，

或其药学上可接受的盐、环糊精和填充剂。

在一些实施方案中，药物组合物包含式(I-A)的化合物、环糊精和填充剂。在一些实施方案中，环糊精选自烷基环糊精、羟烷基环糊精、羧烷基环糊精和磺基烷基醚环糊精。在一些实施方案中，环糊精是羟丙基β-环糊精。在一些实施方案中，环糊精是磺基丁基醚β-环糊精。

在一些实施方案中，填充剂是糖(例如糖类(例如单糖、二糖或多糖))或糖醇。在一些实施方案中，填充剂是蔗糖、乳糖、海藻糖、葡聚糖、赤藓糖醇、阿拉伯糖醇、木糖醇、山梨糖醇、或甘露糖醇、或它们的组合。在一些实施方案中，填充剂是甘露糖醇。在一些实施方案中，填充剂是乳糖。

在一些实施方案中，填充剂是冻干保护剂。

在一些实施方案中，式(I-A)的化合物的浓度为按组合物的重量计约0.1％至约10％、约0.1％至约7.5％、约0.1％至约5％、约0.1％至约3.5％、约0.1％至约1％、约1％至约10％、约1％至约7.5％、约1％至约5％、约3％至约10％、约3％至约7.5％、或约3％至约5％。在一些实施方案中，式(I-A)的化合物的浓度为按组合物的重量计约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、或10％。在一些实施方案中，式(I-A)的化合物的浓度为按组合物的重量计约1％。在一些实施方案中，式(I-A)的化合物的浓度为按组合物的重量计约0.3％。

在一些实施方案中，环糊精的量为相对于式(I-A)的化合物的重量计约0.1重量％至约10重量％、约0.1重量％至约7.5重量％、约0.1重量％至约5重量％、约0.1重量％至约3.5重量％、约0.1重量％至约1重量％、约1重量％至约10重量％、约1重量％至约7.5重量％、约1重量％至约5重量％、约3重量％至约10重量％、约3重量％至约7.5重量％、或约3重量％至约5重量％。在一些实施方案中，环糊精的量为相对于式(I-A)的化合物的重量计约1重量％、1.5重量％、2重量％、2.5重量％、3重量％、3.5重量％、4重量％、4.5重量％或5重量％。在一些实施方案中，环糊精的量为相对于式(I-A)的化合物的重量计约0.1重量％至约10重量％(例如约0.5重量％至约6重量％(例如约0.7重量％至约5.6重量％(例如约2.1重量％至约5重量％)))。在一些实施方案中，环糊精的量为相对于式(I-A)的化合物的重量计约3.5重量％。在一些实施方案中，环糊精的量为相对于式(I-A)的化合物的重量计约5重量％。

在一些实施方案中，环糊精是羟丙基β-环糊精。

在一些实施方案中，赋形剂的量为相对于式(I-A)的化合物的重量计约0.1重量％至约10重量％、约0.1重量％至约7.5重量％、约0.1重量％至约5重量％、约0.1重量％至约3.5重量％、约0.1重量％至约1重量％、约1重量％至约30重量％、约1重量％至约20重量％、约1重量％至约10重量％、约1重量％至约7.5重量％、约1重量％至约5重量％、约3重量％至约10重量％、约3重量％至约7.5重量％、约3重量％至约5重量％、约3重量％至约20重量％、约3重量％至约30重量％、约5重量％至约20重量％、或约5重量％至约30重量％。在一些实施方案中，赋形剂的量为相对于式(I-A)的化合物的重量计约1重量％、1.5重量％、2重量％、2.5重量％、3重量％、3.5重量％、4重量％、4.5重量％、5重量％、10重量％、20重量％、或30重量％。在一些实施方案中，赋形剂的量为相对于式(I-A)的化合物的重量计约3重量％。在一些实施方案中，赋形剂的量为相对于式(I-A)的化合物的重量计约5重量％。

在一些实施方案中，赋形剂是甘露糖醇。在一些实施方案中，赋形剂是乳糖。

在另一方面，本文提供了一种用于由本文所述的药物组合物(例如，包含颗粒的药物组合物，其中颗粒包含式(I-A)的化合物或其药学上可接受的盐、环糊精和填充剂)制备水性药物组合物的方法，该方法包括将药物组合物重构到水性介质中，从而形成水性组合物。在一些实施方案中，水性介质是去离子水。在一些实施方案中，水性介质包含氯化钠。在一些实施方案中，水性介质包含约5％右旋糖。

在一些实施方案中，组合物被制备成适于肠胃外给药于有此需要的受试者。在一些实施方案中，组合物被制备成适于肌内、皮下或静脉内给药于有此需要的受试者。

在一些实施方案中，重构组合物的pH为约2至约8(例如约3至约7、约4至约7、约5至约6、约6至约7、约6至约8、约5至约8、约4至约8、或约3至约8)。在一些实施方案中，重构组合物的pH为约6至约8。在一些实施方案中，重构组合物的pH为约6至约7。在一些实施方案中，重构组合物的pH为约7。在一些实施方案中，重构组合物的pH为约6.8。

在一些实施方案中，重构组合物中的式(I-A)的化合物的浓度为约0.01mg/mL至约100mg/mL、约0.01mg/mL至约50mg/mL、约0.01mg/mL至约10mg/mL、约0.01mg/mL至约1mg/mL、约0.01mg/mL至约0.1mg/mL、约0.1mg/mL至约100mg/mL、约0.1mg/mL至约80mg/mL、约0.1mg/mL至约60mg/mL、约0.1mg/mL至约40mg/mL、约0.1mg/mL至约20mg/mL、约0.1mg/mL至约10mg/mL、约1mg/mL至约100mg/mL、约1mg/mL至约80mg/mL、约1mg/mL至约60mg/mL、约1mg/mL至约40mg/mL、约1mg/mL至约20mg/mL、约1mg/mL至约10mg/mL、约10mg/mL至约100mg/mL、约10mg/mL至约80mg/mL、约10mg/mL至约60mg/mL、约10mg/mL至约40mg/mL、约20mg/mL至约100mg/mL、约20mg/mL至约80mg/mL、约20mg/mL至约60mg/mL、约40mg/mL至约100mg/mL、约40mg/mL至约80mg/mL、约60mg/mL至约100mg/mL、约60mg/mL至约80mg/mL、或约80mg/mL至约100mg/mL。

在一些实施方案中，重构制剂中的式(I-A)的化合物的浓度为约0.01mg/mL、0.03mg/mL、0.05mg/mL、0.1mg/mL、0.3mg/mL、0.5mg/mL、约1mg/mL、约2.5mg/mL、约5mg/mL、约10mg/mL、约15mg/mL、约20mg/mL、约25mg/mL、约30mg/mL、约35mg/mL、约40mg/mL、约45mg/mL、或约50mg/mL。在一些实施方案中，式(I-A)的化合物的浓度为约10mg/mL。在一些实施方案中，式(I-A)的化合物的浓度为约1mg/mL。在一些实施方案中，式(I-A)的化合物的浓度为约0.1mg/mL。在一些实施方案中，式(I-A)的化合物的浓度为约0.3mg/mL。在一些实施方案中，式(I-A)的化合物的浓度为约0.03mg/mL。

给药途径

在此提供的药物组合物可以口服、直肠或肠胃外(例如静脉输注、静脉推注、吸入、植入)给药。如本文所用，术语肠胃外包括皮下、皮内、静脉内(例如静脉输注、静脉推注)、鼻内、吸入、肺部、透皮、肌内、关节内、动脉内、滑膜内、胸骨内、鞘内、病灶内和颅内注射或其他输注技术。在此提供的药物组合物可以包含任何常规无毒的药学上可接受的载体、佐剂或媒介物。在一些情况下，可以用药学上可接受的酸、碱或缓冲剂调节制剂的pH，以增强配制的化合物或其递送形式的稳定性。

药物组合物可以是无菌可注射制备物的形式，例如，作为无菌可注射水性或油性溶液或悬浮液。该悬浮液可根据本领域已知的技术使用合适的分散剂或润湿剂(例如，诸如Tween 80)和悬浮剂进行配制。无菌可注射制备物还可以是处于无毒的肠胃外可接受稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或悬浮液，例如作为1,3-丁二醇中的溶液。可采用的可接受媒介物和溶剂是甘露糖醇、水、林格氏液和等渗氯化钠溶液。此外，无菌的固定油通常用作溶剂或悬浮介质。为此，可以采用任何温和的固定油，包括合成的甘油单酯或甘油二酯。脂肪酸诸如油酸及其甘油酯衍生物可用于制备注射剂，如天然药学上可接受的油，诸如橄榄油或蓖麻油，尤其是它们的聚氧乙基化形式。这些油溶液或悬浮液还可以包含长链醇稀释剂或分散剂、或羧甲基纤维素或通常用于配制药学上可接受的剂型(诸如乳液和/或悬浮液)的类似分散剂。通常用于制造药学上可接受的固体、液体、或其他剂型的其他常用表面活性剂诸如Tweens或Spans或其他类似的乳化剂或生物利用度增强剂也可用于配制的目的。在一些实施方案中，静脉内药物组合物包含选自5％w/w右旋糖水(“5DW”)和盐水的载体。

在此提供的药物组合物可以以任何口服可接受的剂型口服给药，该口服可接受的剂型包括但不限于胶囊、片剂、乳液和水性悬浮液、分散体和溶液。在口服用片剂的情况下，通常使用的载体包括乳糖和玉米淀粉。通常还添加润滑剂，诸如硬脂酸镁。对于以胶囊形式口服给药，有用的稀释剂包括乳糖和干燥玉米淀粉。当口服给药水性悬浮液或乳液时，可将活性成分悬浮或溶解在与乳化剂或悬浮剂组合的油相中。如果需要，可以添加某些甜味剂或调味剂或着色剂或掩味剂。

本文所述的化合物可以例如通过注射、静脉内(例如静脉输注、静脉推注)、动脉内、真皮下、腹膜内、肌内或皮下；或口服、含服、鼻、经粘膜、局部给药，剂量范围为约0.5至约100mg/kg体重，或者剂量为1mg至1000mg/剂，每4至120小时，或根据具体药物的需求。本文的方法设想给药有效量的化合物或化合物组合物以实现所期望或陈述的效应。通常，在此提供的药物组合物将每天给药约1至约6次(例如，通过静脉推注)或者以连续输注给药。此类给药可用作慢性或急性疗法。可与载体材料组合以产生单一剂型的活性成分的量将取决于所治疗的宿主和具体给药模式而变化。典型的制剂将包含约5％至约95％活性化合物(w/w)。或者，此类制剂包含约20％至约80％活性化合物。

在一些实施方案中，将化合物或药物组合物静脉内给药于受试者。在一些实施方案中，将化合物或药物组合物皮下给药于受试者。在一些实施方案中，将化合物或药物组合物以连续静脉输注给药于受试者。在一些实施方案中，将化合物或药物组合物经推注给药于受试者。在一些实施方案中，将化合物或药物组合物经推注给药于受试者，随后连续静脉输注。

在一些实施方案中，将配制用于皮下给药或静脉内给药的药物组合物给药于受试者，每天1次至每天6次(例如，每天1次、每天2次或每天4次)。

组合

在实施本发明的方法中，可能期望将本发明的化合物(例如因子XIa或激肽释放酶抑制剂)彼此以及与一种或多种用于实现治疗有益效果的其他试剂(诸如，抗血栓形成剂或抗凝血剂、抗高血压剂、抗缺血剂、抗心律失常剂、血小板功能抑制剂等)组合给药。例如，本发明的方法可以通过给药小分子因子XIa或激肽释放酶抑制剂与小分子因子XIa的组合或激肽释放酶抑制剂来进行。更具体地，本发明的方法可以通过将小分子因子XIa或激肽释放酶抑制剂与以下组合给药来进行：阿司匹林、氯吡格雷、噻氯匹定或CS-747、华法林、低分子量肝素(诸如LOVENOX)、GPIIb/GPIIIa阻断剂、PAI-1抑制剂诸如XR-330和T-686、P2Y1和P2Y12受体拮抗剂；血栓素受体拮抗剂(诸如伊非曲班)、前列环素模拟物、血栓素A合成酶抑制剂(诸如吡考他胺)、血清素-2-受体拮抗剂(诸如酮色林)；抑制其他凝固因子诸如FVII、FVIII、FIX、FX、凝血酶原、TAFI和纤维蛋白原的化合物，或抑制FXI或激肽释放酶的其他化合物；纤溶剂，诸如TPA、链激酶、PAI-1抑制剂、以及α-2-抗纤维蛋白溶酶的抑制剂诸如抗-α-2-抗纤维蛋白溶酶抗体、纤维蛋白原受体拮抗剂、α-1-抗胰蛋白酶的抑制剂、降血脂剂诸如HMG-CoA还原酶抑制剂(例如普伐他汀、辛伐他汀、阿托伐他汀、氟伐他汀、西立伐他汀、AZ4522和伊伐他汀)，以及微粒体甘油三酯转运蛋白抑制剂(诸如，美国专利No.5,739,135、5,712,279和5,760,246中所公开)；抗高血压剂诸如血管紧张素转化酶抑制剂(例如卡托普利、赖诺普利或福辛普利)；血管紧张素-II受体拮抗剂(例如厄贝沙坦、氯沙坦或缬沙坦)；ACE/NEP抑制剂(例如奥帕曲拉和格莫曲拉)；或β-阻断剂(诸如普萘洛尔、纳多洛尔和卡维地洛)。本发明的方法可以通过将小分子因子XIa或激肽释放酶抑制剂与诸如用于心房纤颤的抗心律失常剂(例如胺碘酮或多非利特)组合给药来进行。本发明的方法还可以与用于治疗例如急性肾损伤的连续性肾脏替代疗法组合进行。

在实施本发明的方法中，可能期望将本发明的化合物(因子XIa或激肽释放酶抑制剂)与增加细胞中cAMP或cGMP水平以获得治疗有益效果的试剂组合给药。例如，本发明的化合物可在与磷酸二酯酶抑制剂组合使用时具有有益效果，包括PDE1抑制剂(诸如Journalof Medicinal Chemistry,第40卷,第2196-2210页[1997]中所述的那些)、PDE2抑制剂、PDE3抑制剂(诸如瑞维齐农、匹莫苯或奥普力农)、PDE4抑制剂(诸如咯利普兰、西洛司特或吡拉米司特)、PDE7抑制剂、或其他PDE抑制剂诸如双嘧达莫、西洛他唑、西地那非、地丁胺(denbutyline)、茶碱(1,2-二甲黄嘌呤)、ARIFLOT.TM.(即顺式-4-氰基-4-[3-(环戊氧基)-4-甲氧苯基]环己烷-1-羧酸)、arofyline、罗氟斯特、C-11294A、CDC-801、BAY-19-8004、西潘茶碱、SCH351591、YM-976、PD-189659、mesiopram、pumafentrine、CDC-998、IC-485和KW-4490。

本发明的方法可以通过将本发明的化合物与促溶栓剂，诸如组织纤溶酶原激活剂(天然的或重组的)、链激酶、瑞替普酶、活化酶、拉诺普酶、尿激酶、尿激酶原、苯甲醚化链激酶纤溶酶原激活剂复合物(anisolated streptokinase plasminogen activatorcomplex)(ASPAC)、动物唾液腺纤溶酶原激活剂等组合给药来进行。

本发明的方法可通过将本发明的化合物与β-肾上腺素能激动剂，诸如沙丁胺醇、特布他林、福莫特罗、沙美特罗、比托特罗、吡布特罗或非诺特罗；抗胆碱能剂，诸如异丙托溴铵；抗炎皮质类固醇，诸如倍氯米松、曲安西龙、布地奈德、氟替卡松、氟尼缩松或地塞米松；以及抗炎剂，诸如色甘酸、奈多罗米、茶碱、齐留通、扎鲁司特、孟鲁司特(monteleukast)和普仑司特(pranleukast)组合给药来进行。

小分子因子XIa或激肽释放酶抑制剂可与一种或多种上述试剂协同作用。因此，可以使用降低剂量的溶栓剂，因此获得给药这些化合物的有益效果，同时使潜在的出血和其他副作用最小化。

疗程

本文所述的组合物包含有效量的本发明的化合物(例如因子XIa或激肽释放酶抑制剂)，其任选地与一种或多种其他试剂(例如额外的治疗剂)诸如抗血栓形成剂或抗凝血剂、抗高血压剂、抗缺血剂、抗心律失常剂、血小板功能抑制剂等组合以实现治疗有益效果。

在一些实施方案中，将额外的治疗剂在给药本发明的组合物之后给药。在一些实施方案中，将额外的治疗剂在给药本发明的组合物之后15分钟、30分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、8小时、10小时、12小时、14小时、18小时、24小时、48小时、72小时或更久给药。在一些实施方案中，在从医疗机构(例如医院)出院后给药(例如口服)额外的治疗剂。

在一些实施方案中，将本发明的化合物(例如因子XIa或激肽释放酶抑制剂)和额外的治疗剂共同配制成单一组合物或剂量。在一些实施方案中，将本发明的化合物(例如因子XIa或激肽释放酶抑制剂)和额外的治疗剂分开给药。在一些实施方案中，将本发明的化合物(例如因子XIa或激肽释放酶抑制剂)和额外的治疗剂相继给药。在一些实施方案中，将本发明的化合物(例如因子XIa或激肽释放酶抑制剂)和额外的治疗剂分开且相继给药。通常，将至少一种本发明的化合物(例如，因子XIa或激肽释放酶抑制剂)和额外的治疗剂肠胃外(例如，鼻内、肌内、含服、吸入、植入、透皮、静脉内(例如静脉输注、静脉推注)、皮下、皮内、鼻内、肺部、透皮、关节内、动脉内、滑膜内、胸骨内、鞘内、病灶内和颅内注射或其他输注技术)；口服；或直肠，例如肌内注射或静脉内(例如，例如静脉输注、静脉推注))给药。在一些实施方案中，将本发明的化合物胃肠外(例如鼻内、含服、静脉内(例如静脉输注、静脉推注)或肌内)给药。在一些实施方案中，将额外的治疗剂口服给药。在一些实施方案中，本发明的化合物(例如因子XIa或激肽释放酶抑制剂)胃肠外(例如鼻内、含服、静脉内(例如静脉输注、静脉推注)或肌内)给药，并且将额外的治疗剂口服给药。

在一些实施方案中，可以将本发明的组合物一天给药一次或数次。治疗持续时间可以例如遵循每天一次，持续约1、2、3、4、5、6、7天或更久的时段。在一些实施方案中，治疗是慢性的(例如终身)。在一些实施方案中，给药单个剂量单位或几个较小剂量单位形式的单一剂量或者通过以特定间隔多次给药的细分剂量。例如，可将剂量单位在损伤后约0小时至约1小时、约1小时至约24小时、约1至约72小时、约1至约120小时、或约24小时至至少约120小时给药。或者，可将剂量单位在损伤后约0.5、1、1.5、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、30、40、48、72、96、120小时或更久给药。后续的剂量单位可以在初始给药后的任何时间给药，使得实现治疗效果。在一些实施方案中，将初始剂量口服给药。在一些实施方案中，将初始剂量之后的剂量肠胃外(例如，鼻内、肌内、含服、吸入、植入、透皮、静脉内(例如静脉输注、静脉推注)、皮下、皮内、鼻内、肺部、透皮、关节内、动脉内、滑膜内、胸骨内、鞘内、病灶内和颅内注射或其他输注技术)；口服；或直肠给药。

在一些实施方案中，将本发明的组合物例如以用于摄入的液体或固体剂型口服给药约5分钟至约1周；约30分钟至约24小时、约1小时至约12小时、约2小时至约12小时、约4小时至约12小时、约6小时至约12小时、约6小时至约10小时；约5分钟至约1小时、约5分钟至约30分钟；约12小时至约1周、约24小时至约1周、约2天至约5天、或约3天至约5天。在一个实施方案中，将组合物以液体剂型口服给药。在另一个实施方案中，将组合物以固体剂型口服给药。

在进行治疗的受试者表现出部分应答或完成第一周期治疗后复发的情况下，可能需要后续疗程以实现部分或完全治疗应答(例如，慢性治疗，例如终身)。

在一些实施方案中，将本文所述的组合物静脉内，例如以静脉输注或静脉推注给药约5分钟至约1周；约30分钟至约24小时、约1小时至约12小时、约2小时至约12小时、约4小时至约12小时、约6小时至约12小时、约6小时至约10小时；约5分钟至约1小时、约5分钟至约30分钟；约12小时至约1周、约24小时至约1周、约2天至约5天、或约3天至约5天。在一个实施方案中，将本文所述的组合物以静脉输注给药约5、10、15、30、45、或60分钟或更久；约1、2、4、6、8、10、12、16、或24小时或更久；约1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10天或更久。

剂量和给药方案

根据本发明给药的组合物的有效量可以由本领域的普通技术人员确定。用于任何特定受试者的具体剂量水平和给药频率可以变化并且将取决于多种因素，包括所用具体化合物的活性、该化合物的代谢稳定性和作用时间长短、受试者的物种、年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食、给药模式和时间、排泄率、药物组合，以及具体病症的严重程度。

在改善患者的病症时，可以根据需要给药维持剂量的在此提供的组合物或组合。随后，给药的剂量或频率或两者可以随症状的变化而降低至症状缓解到期望水平时保持改善的病症的水平。然而，基于疾病症状的任何复发，患者可能需要长期的间歇治疗。

实施例

为了可以更充分地理解本文所述的本发明，阐述了以下实施例。以下实施例中描述的起始材料和各种中间体可以从商业来源获得，由可商购的有机化合物制备，或者使用已知的合成方法制备。本申请中描述的实施例被提供成用于说明本文所提供的化合物，并且不以任何方式解释为限制其范围。

一般过程

所有非水相反应在氮气气氛下运行，以保持无水气氛并使收率最大化。借助于Teflon涂覆的搅拌棒，使用顶置式搅拌组件或磁力地搅拌所有反应。描述“经……干燥”是指将反应产物溶液经指定干燥剂干燥，然后使该溶液过滤通过合适的滤纸或通过烧结玻璃漏斗。描述“被浓缩”、“减压浓缩”或“蒸发”是指使用旋转蒸发仪在减压下除去溶剂。色谱法或用色谱层析是指在硅胶上使用快速柱色谱，除非另外指明。快速色谱法是指在气体压力(例如氮气)或施加溶剂压力的机械泵下的柱色谱法，诸如采用由Biotage或其他供应商供应的商业系统。除非另外指明，否则质子NMR谱(¹H)在400MHz下测量，并且碳NMR谱(¹³C)在100MHz下在指定溶剂中测量。

实验实施例中使用的缩写在以下缩写表中列出。

缩写表

实施例1.化合物1·HCl的示例性合成

(2S,3R)-3-[(2-氨基吡啶-4-基)甲基]-1-{[(1R)-1-环己基乙基]氨基甲酰基}-4-氧代氮杂环丁烷-2-甲酸三氟乙酸盐(以下结构2)、(4-溴甲基)吡啶-2-基](4-甲氧基苄基)氨基甲酸叔丁酯(以下结构3)和(R)-(1-异氰酸根合乙基)环己烷(以下结构8)的合成的非限制性实施例可见于美国专利No.9,499,532中，其以引用方式并入本文。

A.由2合成化合物1·HCl

将乙腈(12mL；10体积)添加到(2S,3R)-3-[(2-氨基吡啶-4-基)甲基]-1-{[(1R)-1-环己基乙基]氨基甲酰基}-4-氧代氮杂环丁烷-2-甲酸三氟乙酸盐(1.23g；2.52mmol)中，以产生混浊溶液。将该混合物用己烷(12mL)萃取两次；然后将其过滤(5微米)，得到澄清溶液。使该溶液浓缩至6mL(5体积)，此时开始形成悬浮液。添加浓HCl(0.42mL；2当量)。然后分两批添加醚(2×12mL)，以诱导沉淀的形成。使混合物冷却至～1℃保持15分钟。收集固体，用冷醚冲洗并风干，以给出0.82g(79％)呈白色固体的(2S,3R)-3-[(2-氨基吡啶-4-基)甲基]-1-{[(1R)-1-环己基乙基]氨基甲酰基}-4-氧代氮杂环丁烷-2-甲酸盐酸盐。

通过将固体在醚(7.5体积)中浆化来制备高度纯化样品。将产物收集，用醚冲洗并在50℃下真空干燥过夜。

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)ppmδ7.79(1H,d,J＝6.8Hz),6.99(1H,s),6.90(1H,dd,J＝1.5,6.8Hz),6.61(1H,d J＝8.8),4.28(1H,d,J＝2.8)3.70(2H,m),3.23(2H,m)1.75(5H,m)1.40(1H,m)1.25(3H,m)1.15(3H,d,J＝6.8Hz)1.00(2H,m).

HPLC保留时间：3.21分钟。HPLC条件：柱，Zorbax 50mm；流速＝1.5mL/min；240nm；温度＝30℃下；溶剂A＝1mL TFA/1L水；溶剂B＝2.8mL TFA/4L MeCN；梯度洗脱顺序：时间＝0，A:B＝95:5；线性梯度至2:98A:B，6分钟内；从1分钟线性梯度回到A:B＝95:5。

B.由3合成化合物1·HCl

步骤1.4的制备：(2S,3R)-3-{2-[(叔丁氧羰基)(4-甲氧基苄基)氨基]吡啶-4-基)甲基)-1-(叔丁基(二甲基)甲硅烷基]-4-氧代氮杂环丁烷-2-甲酸.

使(2S)-1-叔丁基(二甲基)甲硅烷基-4-氧代氮杂环丁烷-2-甲酸(175g，0.763mol)和THF(2L)的溶液冷却至-25℃(内部温度)。滴加2M LDA的THF溶液(800mL，2.1当量)，同时保持温度低于-10℃。将反应搅拌30分钟，并且形成凝胶状悬浮液。滴加(4-溴甲基)吡啶-2-基](4-甲氧基苄基)氨基甲酸叔丁酯(342g，0.84mol，1.12当量，结构3)的THF(600mL)溶液，同时使反应在2小时内保持低于-5℃，然后再搅拌30分钟。将反应用1M KHSO₄水溶液(2L)淬灭。分离各层并用EA(2L×2)萃取水层。将合并的有机相用盐水(1L×2)洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤并浓缩，以给出呈油状产物的(2S,3R)-3-{2-[(叔丁氧羰基)(4-甲氧基苄基)氨基]吡啶-4-基)甲基)-1-(叔丁基(二甲基)甲硅烷基]-4-氧代氮杂环丁烷-2-甲酸，其未经纯化即使用(436g，～70％纯度)。

步骤2.化合物5的制备：(2S,3R)-3-({2-[(叔丁氧羰基)(4-甲氧基苄基)氨基]吡啶-4-基}甲基)-1-[(叔丁基(二甲基)甲硅烷基]-4-氧代氮杂环丁烷-2-甲酸4-甲氧基苄基酯

将粗制(2S,3R)-3-{2-[(叔丁氧羰基)(4-甲氧基苄基)氨基]吡啶-4-基)甲基)-1-(叔丁基(二甲基)甲硅烷基]-4-氧代氮杂环丁烷-2-甲酸溶解于DCM(2.5L)以及EDC(137g，0.714mol，1.3当量)、PMBOH(76.2g，0.55mol,1当量，基于70％纯度的酸试剂)和DMAP(3.4g，0.05当量)中。将溶液在室温下搅拌过夜。将混合物用水(500mL)和盐水(500mL)萃取，干燥(MgSO₄)，并浓缩。对粗制油状残余物进行色谱层析(采用0％至50％EA/己烷梯度洗脱)，以给出呈无色油状物的(2S,3R)-3-({2-[(叔丁氧羰基)(4-甲氧基苄基)氨基]吡啶-4-基}甲基)-1-[(叔丁基(二甲基)甲硅烷基]-4-氧代氮杂环丁烷-2-甲酸4-甲氧基苄基酯(250g，48％收率，两步)。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)ppmδ8.24(1H,d,J＝5.5Hz),7.55(1H,s),7.22(2H,d,J＝8.8Hz),7.20(2H,d,J＝8.8Hz),6.89(1H,dd,J＝1.4,5.2Hz),6.87(2H,d,J＝8.6Hz),6.79(2H,d,J＝8.6Hz),5.09(2H,s),5.06(2H,s),3.81(3H,s),3.77(1H,d,J＝3.3Hz),3.76(3H,s),3.53(1H,m),3.06(1H,dd,J＝0.6,14.6Hz),2.99(1H,dd,J＝7.6,14.6Hz),1.41(9H,s),0.82(9H,s),0.19(3H,s),-0.05(3H,s).

步骤3.化合物6的制备：(2S,3R)-3-({2-[(叔丁氧羰基)(4-甲氧基苄基)氨基]吡啶-4-基}甲基)-4-氧代氮杂环丁烷-2-甲酸4-甲氧基苄基酯

首先向(2S,3R)-3-({2-[(叔丁氧羰基)(4-甲氧基苄基)氨基]吡啶-4-基}甲基)-1-[(叔丁基(二甲基)甲硅烷基]-4-氧代氮杂环丁烷-2-甲酸4-甲氧基苄基酯(314g，0.465mol)和甲醇(1.5L)的溶液中添加乙酸(112g，1.87mol)，然后添加NH₄F(20.6g，0.556mol，预溶解于1.2L的甲醇中)。将混合物在室温下搅拌2小时。浓缩反应。将残余物溶解于EA(2L)中并添加饱和NaHCO₃水溶液(2L)。分离各相并将有机相干燥(MgSO₄)，并且浓缩。对油状残余物进行色谱层析(采用0％至40％EA/己烷梯度洗脱)以给出澄清油状物，将该澄清油状物从EA/己烷(1:5)中结晶，以给出呈白色固体的(2S,3R)-3-({2-[(叔丁氧羰基)(4-甲氧基苄基)氨基]吡啶-4-基}甲基)-4-氧代氮杂环丁烷-2-甲酸4-甲氧基苄基酯(200g，77％收率)。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)ppmδ8.26(1H,d,J＝5.0Hz),7.55(1H,s),7.21(2H,d,J＝8.6Hz),7.19(2H,d,J＝8.6Hz),6.91(1H,dd,J＝1.5,5.0Hz),6.88(2H,d,J＝8.8Hz),6.79(2H,d,J＝8.8Hz),5.92(1H,s),5.10(2H,s),5.06(2H,s),3.87(1H,d,J＝2.5),3.81(3H,s),3.76(3H,s),3.56(1H,m),3.14(1H,dd,J＝5.8,14.6Hz),3.03(1H,dd,J＝8.1,14.6Hz),1.42(9H,s).

步骤4 7的制备：(2S,3R)-3-((2-[(叔丁氧羰基)(4-甲氧基苄基)氨基]吡啶-4-基}甲基)-1-([(1R)-1-环己基乙基)氨基甲酰基}-4-氧代氮杂环丁烷-2-甲酸4-甲氧基苄基酯.

向(2S,3R)-3-({2-[(叔丁氧羰基)(4-甲氧基苄基)氨基]吡啶-4-基}甲基)-4-氧代氮杂环丁烷-2-甲酸4-甲氧基苄基酯(210g，0.374mol)和DCM(3L)的溶液中添加TEA(188g，1.86mol，5当量)和(R)-(1-异氰酸根合乙基)环己烷(143g，0.933mol，2.5当量，结构8)。将混合物在室温下搅拌过夜。浓缩反应。对残余物进行色谱层析(采用0％至40％EA/己烷梯度洗脱)，以给出呈白色泡沫状物的(2S,3R)-3-((2-[(叔丁氧羰基)(4-甲氧基苄基)氨基]吡啶-4-基}甲基)-1-([(1R)-1-环己基乙基)氨基甲酰基}-4-氧代氮杂环丁烷-2-甲酸4-甲氧基苄基酯(159g，60％收率)。

¹H NMR(400MHz,CDCI₃)ppmδ8.25(1H,d,J＝5.1Hz),7.61(1H,s),7.23(2H,d,J＝8.8Hz),7.15(2H,d,J＝8.6Hz),6.85(2H,d,J＝8.8Hz),6.80(2H,d J＝8.6Hz),6.23(1H,d,J＝9.1Hz),5.12(1H,d,J＝15.9),5.11(2H,s),5.04(1H,d,J＝12.1Hz),4.23(1H,d,J＝2.8Hz),3.80(3H,s),3.78(1H,m),3.76(3H,s),3.45(1H,m),3.15(1H,dd,J＝6.5,14.8Hz),3.01(1H,dd,J＝8.9,14.8Hz),1.74(4H,m),1.68(2H,m),1.41(9H,s),1.35(1H,m),1.21(2H,m),1.14(3H,d,J＝6.8Hz),0.98(2H,m).

步骤5.化合物1·HCl的制备

将三氟乙酸(2.1L)添加到(2S,3R)-3-((2-[(叔丁氧羰基)(4-甲氧基苄基)氨基]吡啶-4-基}甲基)-1-([(1R)-1-环己基乙基)氨基甲酰基}-4-氧代氮杂环丁烷-2-甲酸4-甲氧基苄基酯(283g，0.396mol)中，给出红色溶液。添加Et₃SiH(138g，1.18mol,3当量)并且溶液变成无色。将反应在室温下搅拌4小时。真空除去TFA过夜，以给出呈白色泡沫状物的(2S,3R)-3-[(2-氨基吡啶-4-基)甲基]-1-([(1R)-1-环己基乙基]氨基甲酰基}-4-氧代氮杂环丁烷-2-甲酸三氟乙酸盐。

将乙腈(1.8L)添加到粗制TFA盐中，给出混浊溶液。通过过滤澄清溶液，将残余物用乙腈(100mL)洗涤。用己烷(1.8L×3)萃取合并的乙腈溶液。使乙腈溶液减压浓缩至约900mL。缓慢添加浓HCI(66mL，0.792mol，2当量)以形成悬浮液。在搅拌下缓慢添加TBME(3L)。使所得悬浮液冷却至0℃保持30分钟。通过过滤分离固体沉淀并用TBME冲洗。将固体风干过夜，然后在50℃下真空干燥5小时，以给出呈白色粉末的(2S,3R)-3[(2-氨基吡啶-4-基)甲基]-1-{[(1R)-1-环己基乙基]氨基甲酰基}-4-氧代氮杂环丁烷-2-甲酸盐酸盐(130g，80％收率)。

¹H NMR(400MHz,D₂O)ppmδ7.64(1H,d,J＝6.8Hz),6.84(1H,s),6.74(1H,dd,J＝1.5,6.8Hz),4.22(1H,d,J＝2.8Hz),3.75(1H,m),3.54(1H,m),3.17(2H,m),1.58(5H,m),1.22(1H,m),1.07(6H,m),0.89(2H,m).

实施例2.用于分析化合物1的HPLC方法参数

HPLC方法参数汇总于表1中。化合物1的代表性色谱图示于图1中。

表1.用于分析化合物1的方法参数的汇总

实施例3.用于测试化合物1在常见缓冲液中的平衡溶解度的实验设置

在常见缓冲液(表2)中以c(缓冲液)＝200mM的缓冲液强度测试化合物1的平衡溶解度。为此，在不同的缓冲溶液(表3)中制备具有c(化合物1，目标)＝16mg/mL的化合物1的样品，通过涡旋混合并检查固体残余物。对于没有观察到固体残余物的情况，对溶液任意地补充额外的固体化合物1。重复该过程(每小时观察)直到固体残余物保持容易观察到。将样品在室温下旋转24小时。

表2.缓冲液条件和经受平衡溶解度分析的样品

通过离心(台式离心机，rcf＝16,100×g，10分钟)使平衡溶解度的样品澄清。使上清液经受HPLC分析，并使用实施例2所述的HPLC方法一式三份测定化合物1浓度。测量上清液的pH(表3)。

表3.不同缓冲溶液中的平衡溶解度数据

实施例4.用于测试化合物1的pH依赖型稳定性和pH率概况的实验设置

在10天的时段内在若干pH值(pH＝2、3、4、5、6、7、8)以及在两个不同温度(4℃、40℃)下评估化合物1的稳定性。在标准缓冲液(表2)中以c(缓冲液)＝100mM的缓冲液强度制备c(化合物1)＝0.1mg/mL的化合物1的样品，并且在T＝4℃或T＝40℃下温育(在温育和分析期间避光)。在初始时间点(t₀)和在第1、2、3、4、7和10天(Δt＝天×24小时)，经由HPLC分析在此类样品中评估化合物1的浓度。在10天时段期间的相同时间点监测pH。

在这两个温度的10天时段内，监测样品溶液的pH(图2A&图2B)，并且化合物1的回收率(R％)(图3A&图3B)经由以下计算：

而c(化合物1，理论值)＝0.1mg/mL，并且c(化合物1，实际值)通过HPLC分析经由化合物1母体峰面积的积分来确定。

当在4℃下于暗处储存时，化合物1在宽pH范围(pH＝2-8)的缓冲水溶液中是稳定的。在升高的温度(T＝40℃，在暗处)下观察到显著的降解。稳定性/pH-相关性的趋势很明显，其中化合物1倾向于对低pH更稳定且对较高pH较不稳定。可以排除观察到的稳定性差异可能归因于pH的变化，因为研究溶液的pH值在实验的10天内保持恒定。所有溶液在整个实验过程中是澄清的；可以观察到药物化合物没有沉淀。

实施例5.化合物1·HCl的固态表征

使用Rigaku Miniflex X射线衍射仪(Cu-Kα源，NaI-闪烁计数器，U＝30kV，I＝15mA)，通过粉末X射线衍射法(XPRD)评估化合物1·HCl的固态的示例性样品。

在零背景保持器硅(Si)中分析固体化合物1·HCl(m＝15-20mg)。采用2θ-扫描(2θ＝3°→40°，Δ2θ＝0.05°，t_计数＝20秒)以FT模式进行扫描。所获得的衍射图在图4A中以2θ-标度显示，并且试样尺寸在实空间(d-标度)中如图4B所示。另外，来自化合物1·HCl的示例性XRD图的代表性峰可由它们的2θ、d-间距和相对强度的值指示(例如下表4中)。在低d下，全反射平台的指示指示了适当的样品对齐。

化合物1·HCl获得的限定峰模式示出药物化合物为结晶的，这可能使得结晶药物产品将由药物化合物与结晶赋形剂如甘露糖醇在冻干过程期间单独配对而产生。另一方面，无定形赋形剂的使用可能使结晶过程向潜在包含关于重构、溶解和溶解度的增强特性的无定形药物产品转变。

表4.化合物1·HCl的选择的实验粉末XRD图数据

实施例6.用于测试媒介物的实验设置和细节

两种额外的媒介物：柠檬酸钠(50mM)和PBS(商业)以不同浓度配制(表5，表6)。使用适当的最终氢氧化钠浓度(0.1M NaOH储备溶液)配混任何浓度的两种媒介物。

表5.柠檬酸盐和PBS制剂的配混信息

表6.柠檬酸盐和PBS制剂的浓度和回收率(HPLC分析)

将PBS媒介物配混至两个不同的pH值，同时将柠檬酸盐媒介物在相同的目标pH下以不同浓度配混并且测试其在24小时过程内的稳定性(室温，避光)。为了评价由沉淀潜在出现的颗粒，在每个时间点包括过滤步骤(0.2μm微型离心过滤器)。

在样品编号27的情况下，将代替NaOH溶液而添加的HCl(水溶液)(0.1M储备液)的量与10X PBS缓冲液混合，并且以单个步骤添加到化合物1的水溶液中。

在具有c(化合物1)＝0.5mg/mL的化合物1的低浓度下的PBS制剂的情况下，在迭代配混滴定中小心地测定HCl(水溶液)或NaOH(水溶液)的浓度(参见上文)。确认Δt＝24小时的化合物1在柠檬酸盐缓冲液中的稳定性；损失与通常在应用条件(环境温度)下观察到的化合物1的降解相当。在该时间范围内没有观察到化合物1的沉淀。

实施例7.冻干工艺的开发

针对化合物1目标制剂的冻干开发了保守的冻干循环(图5)。冻干循环包括退火步骤和20小时的初步干燥时间。在循环开发期间，改变退火温度以及初步干燥温度(搁板温度)以实现最佳的干燥特性和经济使用时间。图5示出了如由差示扫描量热法(DSC)测量的冻干机的搁板温度(T_搁板)以及化合物1的早期制剂的示例性参数，其中Tg’作为玻璃化转变温度，T_{(熔融，起始)}作为熔融起始温度，并且T_(冷冻)作为制剂的冷冻温度。

由于干燥过程期间(100毫托)水相的蒸发焓，产物温度T_产物通常低于冻干机的搁板温度；低于T＝-40℃的温度，冰上的水蒸气接近零。进行搁板温度的变化以实现缓慢的初步干燥，其中初步干燥温度低于制剂的Tg’(无定形产物)或共晶熔融温度(T_eu，结晶产物)，但高于T_产物>-40℃。在测试冻干期间，产品小瓶配备有温度传感器以记录T_产物，在最终循环中，在T_搁板＝-35℃下观察到T_产物＝-38.5℃(图6)。通过测量作为产品室与冻干机的真空回路之间的压力差的函数的水蒸气随时间推移的释放来确定初步干燥的结束(图6)。应注意，在某些赋形剂(例如甘露糖醇)存在下和在那些赋形剂的某些浓度下，可以在远高于Tg’或T_eu下完成初步干燥。

最优化冻干循环的参数可见于表7中。通过热重分析(TGA)测定冻干制剂媒介物的残余含水量为大约1.5-1.7％(w/w)。

表7.冻干循环程序的细节

所开发的冻干循环成功地应用于化合物1制剂。

实施例8.示例性制剂

目标产品概括(TPP)定义为：

·c(化合物1)＝10mg/mL

·磷酸钠缓冲液，pH＝6.8，

·有利于冻干药物产品的稳健制备的赋形剂(填充剂、增溶剂)的最小数量和最小浓度

·在制备冻干填充溶液期间，在液体配混期间化合物1·HCl的中和

产生了108种制剂的受限制剂基质。基质包含不同浓度的填充剂、共溶剂、环糊精(表8)；磷酸钠(10mM)和API(10mg/mL)的浓度保持恒定。

表8.在受限的制剂测试基质中评价的赋形剂

制剂始终包含甘露糖醇或乳糖作为填充剂以及不同量的环糊精和共溶剂。通常改变填充剂的浓度以将重量渗透摩尔浓度(osmolality)维持在适当的范围内。评价与最终重构强度相比，在与所有制剂组分的较低浓度一致的增加的总体积下的冻干。

由储备溶液配混108种制剂(包括中和化合物1·HCl)，并使用5mL冻干小瓶一式三份和一式两份以1mL规模冻干。以百分比w/w表示的赋形剂的浓度是相对于化合物1的重量。以百分比(w/w或w/v)表示的赋形剂的浓度仅可被认为是近似的并且不反映绝对w/w或w/v百分比，因为由储备溶液的中和配混涉及不考虑限定质量或体积比的稀释。

下面的制剂代表了最好的、性能同样好的候选物，其中含有甘露糖醇的制剂提供了更精致的饼结构，并且乳糖制剂实现了更清洁、更少泡沫的重构。

·制剂1：10mg/mL化合物1，10mM磷酸钠，pH＝6.8，5％HPβCD，3％甘露糖醇

·制剂2：10mg/mL化合物1，10mM磷酸钠，pH＝6.8，5％HPβCD，3％甘露糖醇，0.05％PEG400

·制剂3：10mg/mL化合物1，10mM磷酸钠，pH＝6.8，5％HPβCD，5％乳糖

·制剂4：10mg/mL化合物1，10mM磷酸钠，pH＝6.8，5％HPβCD，5％乳糖，0.05％PEG400

·制剂5：10mg/mL化合物1，10mM磷酸钠，pH＝6.8，3.5％HPβCD，3％甘露糖醇

·制剂6：10mg/mL化合物1，10mM磷酸钠，pH＝6.8，3.5％HPβCD，5％乳糖

实施例9.以增加的实验室规模制备制剂5

将制剂5以210mL规模制备至c(化合物1)＝10mg/mL的目标浓度。首先，配混液体填充溶液，包括化合物1·HCl组分的中和，然后填充冻干容器并进行冻干。应用V_容器＝20mL的琥珀色冻干容器和V_填充＝5mL的填充体积。

该填充溶液由以下给定多倍浓度的储备溶液配混：

i.化合物1储备水溶液，c(化合物1)＝40mg/mL，[4X]

ii.10％甘露糖醇储备水溶液(w/v)，[3.33X]

iii.28％HPβCD储备水溶液(w/w)，[8X]

iv.500mM氢氧化钠储备水溶液[12.82X]

v.100mM磷酸钠缓冲液水溶液，pH＝6.8[10X]。

为了制备填充溶液，在恒定搅拌下向化合物1储备溶液中添加残余体积的水以达到目标浓度。随后，将甘露糖醇和HPβCD储备溶液分配到混合物中，之后添加氢氧化钠储备溶液以产生最终c(NaOH)＝39mM。在最后步骤中，添加10X磷酸钠缓冲液并使溶液冷却至环境温度。

在配混之前过滤甘露糖醇、HPβCD和缓冲储备溶液(0.2μm PES膜，20mm注射器过滤器，Acrodisc Supor EKV)而没有观察到任何困难。在最佳清洁条件下，在分配到冻干小瓶中之前，同样过滤(0.2μm PES膜，20mm注射器过滤器，Acrodisc Supor EKV)准备好的配混冻干填充溶液。

将40个所得的冻干小瓶紧实包装布置在冻干的中心处，并放置在冻干机产品室的中心搁板处。产物小瓶由填充有缓冲溶液的小瓶环绕。将来自实施例7的开发的冻干循环应用于产品小瓶的冻干；在真空释放至环境空气之后手动塞住小瓶。

实施例10.冻干的化合物1药物产品的重构和重构稳定性

在用DI水V_DI水＝5mL重构之后，使冻干的化合物1药物产品经受重构测试和稳定性测试6小时。

冻干饼状物易于在10-20秒内重构。重构期间的溶液看起来非常像泡沫并含有许多气泡，其在添加重构溶液约2分钟内变澄清。容器壁上的残余微气泡可以通过涡旋(2秒)或超声处理(2秒)除去。重构溶液看起来澄清且无色。重构溶液的pH测量为pH＝6.81；重量渗透摩尔浓度测定为重构溶液几乎不含颗粒物，如由液体颗粒计数(LPC，HIAC：V_样品＝5mL，n_运行＝4，丢弃第1次运行，f_稀释＝10，V_{标称，容器}＝2mL)所测定，累积计数为3200个10μm尺寸的颗粒以及667个25μm尺寸的颗粒。

在重构后监测化合物1的回收率24小时，以测试重构溶液的使用稳定性(表9)。

表9.在受限的制剂测试基质中评价的赋形剂

*％回收率因为V_填充溶液＝V_{DI水，重构}；#不同的稀释度用于制备HPLC样品

含有HPβCD和甘露糖醇的当前基于磷酸盐的制剂示出在24小时的过程内化合物1回收率损失大约7％。

实施例11.与输注媒介物的相容性以及重构化合物1制剂的使用储存

对于c(化合物1，目标)＝0.1mg/mL和c(化合物1，目标)＝1.0mg/mL下的两种浓度(高/低)以及在环境条件下，在Δt＝4小时之后测试重构化合物1制剂与两种输注媒介物(生理盐水(NS)和5％右旋糖水溶液(D5W))的相容性(表10)。回收率％的平均值是相对于t₀时在DI水中稀释的重构药物产品。

表10.与输注媒介物的相容性的评估

*％回收率因为V_填充溶液＝V_{DI水，重构}；

输注NS和D5W两者在测试浓度下以及在环境温度和光照条件下4小时过程内均与重构化合物1药物产品相容。

实施例12.重构化合物1制剂与小瓶和塞子的相容性

在环境条件下，在c(化合物1，目标)＝10mg/mL下测试Δt＝1小时的接触时间的重构化合物1制剂与无菌制造小瓶和塞子的相容性(表17)。％回收率的平均值是相对于未与测试材料接触的重构药物产品。

表11.与制造用小瓶和塞子的相容性的评估

*％回收率因为V_填充溶液＝V_{DI水，重构}。

表11示出了测试的小瓶和塞子材料在测试浓度下以及在环境温度和光照条件下1小时过程内与重构化合物1药物产品相容。

实施例13.重构化合物1制剂与灭菌过滤器的相容性

评价无菌处理的可行性，并且测试三种不同的过滤器材料与重构化合物1制剂的相容性。无菌处理是通常提出的化合物1灭菌的方法，因为化合物1包含在升高的温度下减小的稳定性并且仅干燥灭菌循环(T＝160℃，t＝120分钟)适用于冻干药物产品作为最终灭菌选项。

用由聚醚砜(PES)、尼龙和聚偏二氟乙烯(PVDF)构成的不同过滤器材料(表17)测试重构化合物1药物产品的过滤器相容性。对此，使V_{过滤器通过}＝10mL的体积通过相应的过滤器，并且测定过滤体积的前10体积％以及最后10体积％的化合物1的回收率(表12)。

表12.与灭菌过滤器的相容性的评估

*％回收率因为V_填充溶液＝V_{DI水，重构}。

％回收率的平均值是相对于未与测试材料接触的重构药物产品。任何测试过滤器均未观察到背压增加。在所研究的过滤器通过体积和浓度下，未观察到化合物1回收率的显著损失。

实施例14.重构化合物1制剂与输液袋和IV系统的相容性

在c(化合物1)＝0.1mg/mL下测试重构化合物1制剂与两种输液袋(不同体积和材料)和两种IV管线的相容性(表13)。在将重构药物产品溶液注射到填充有NS的输液袋中之后，i)在与输注媒介物混合后直接(t₀，表14)以及ii)与输液袋接触Δt＝10分钟之后(表15)测量化合物1的回收率。另外，针对Δt＝6小时评估环境温度和光照条件下输液袋中的储存(表15)。％回收率的平均值是相对于未与测试材料接触的重构药物产品。

表13.测试的输液袋和IV系统材料

表14.t0时与输液袋的相容性的评估.

*％回收率因为V_填充溶液＝V_{DI水，重构}。

表15.在输液袋中储存t＝10分钟和6小时与输液袋的相容性的评估

*％回收率因为V_填充溶液＝V_{DI水，重构}。

通过用经稀释的(NS)药物产品溶液填充IV管线并且以5mL/min的流速使V_{流动通过(FT)}＝101mL流动通过相应的IV系统来评价两种IV系统与重构药物产品溶液的相容性。i)立即(V_FT＝0mL)，ii)在V_FT＝10mL之后以及iii)在V_FT＝100mL之后收集V_样品＝1mL的流动通过样品。针对化合物1的回收率测定流动通过样品，并且与t₀时贮存器中的输注溶液进行比较(表16)。

表16.与IV系统的相容性的评估

*％回收率

在测试浓度和暴露时间下，测试的输液袋和IV系统材料与重构化合物1药物产品相容。虽然在输液袋中储存最多6小时与t₀相比(暴露后大约1分钟)并未改变相应输注媒介物中化合物1的浓度，但情况似乎是一些化合物1材料在接触后立即由输液袋材料吸附。因此，所观察到的化合物1回收率变化与测试输液袋的表面积无关，但似乎取决于输液袋材料。1号输液袋(Viaflo)示出比2号输液袋(Viaflex)更小程度的化合物1吸附。

两种IV系统似乎对化合物1的结合呈惰性；在从重构药物产品溶液的稀释得到的化合物1溶液流过任一IV测试系统之后，没有观察到化合物1回收率的变化。

实施例15.材料和设备

表17.材料

表18.设备

实施例16.长期稳定性研究

化合物1冻干药物产品的示例性长期稳定性研究示于图7-9(分别为T＝-80℃，T＝-20℃和T＝2-8℃)中。通过收集初始时间点(t₀)的数据并使所需量的样品经受相应的测试条件来开始研究。在t＝1个月、3个月、6个月、9个月和12个月后评价化合物1冻干药物产品的稳定性。测试包括外观、重构时间、重构外观、回收率&杂质(HPLC测定)、pH和LPC(HIAC，颗粒物)。

实施例17.用于化合物1液体可注射制剂的配混(Compounding)方法

采用3.0mg/mL的化合物1(或3.13mg/mL化合物1游离碱当量)、磷酸盐缓冲溶液(PBS)以及6.4-7.2的pH开发出用于化合物1的液体制剂(设计用于在输注媒介物中稀释)的配混方法。配混方法在宽范围的规模(25-500mL)内应用。

药物产品的配混需要使用0.5N氢氧化钠溶液并用PBS缓冲的中和步骤，以将pH调节至与IV输注相容的值。配混方法还需要过滤步骤，其也充当无菌处理。观察到化合物1的最小损失或没有损失。

将配混的制剂稀释到输注媒介物中：生理盐水，5％右旋糖水溶液(D5W)和乳酸林格氏液(缓冲和未缓冲的)。在生理盐水中的稀释以100倍和600倍稀释度进行。

化合物1制剂在2-8℃下至少一周内是稳定的，标称降解<4％。所观察到的化合物1在样品制备的误差范围之内，因此在所研究的时间范围期间不发生可测量的降解是可行的。当将化合物1制剂稀释到生理盐水中时，所得的c(化合物1)＝0.03mg/mL的输注液在环境温度下至少48小时内是稳定的。pH在48小时内恒定，并且没有观察到化合物1回收率的显著损失。化合物1的纯度在48小时内似乎不变，并且在48小时后记录的色谱迹线并未显示出观察的降解物的额外峰或生长(图10)。

实施例18.化合物1在猎犬心肺转流术模型中的功效研究

本研究的目的在于证明与护理标准(SOC)肝素相比，化合物1在混种猎狗模型中第1天的延长运行时间期间使用心肺转流术(CPB)循环时防止凝血组分活化的功效。研究设计示于表19中：

表19.实验设计(化合物1的目标剂量^b)

NA–不适用

^a动物号1001接受0.6μg/mL并且动物号1004接受3mg/mL。

^b所示剂量是本研究给药的目标；实际剂量值示于结果部分中。

在本研究中评价了以下参数和终点：死亡率，体重，身体，临床病理学参数(血液学和凝结)，凝结时间，以及生物分析参数。

实验设计

给药

在第1天经由静脉内(IV)输注给药媒介物和测试制品一次，持续135分钟(在开始心肺转流术(CPB)前30分钟开始并且持续CPB的105分钟)。第2组动物在开始IV输注之前立即接受0.6μg/mL或3.0mg/mL IV推注剂量。第3、4和5组动物在开始IV输注之前接受10mg/kgIV推注剂量；其中CPB机器用10μg/mL测试制品灌注。

手术程序

第1组的输液泵设置为开放系统/贮存器。在将动物置于CPB泵上之前30分钟开始化合物1的输注。用0.9％盐水灌注CPB泵。

第2、3和4组的输液泵设置为开放系统/贮存器。用浓度为10μg/mL的化合物1冲洗静脉和动脉鞘。在开始输注之前立即给药测试制品的IV推注剂量。在将动物置于CPB泵上之前30分钟开始化合物1的输注。在CPB泵开始之前用10μg/mL的化合物1灌注CPB患者。

第5组的输液泵设置为封闭系统/“袋”。然后用10μg/mL的化合物1冲洗静脉和动脉鞘。在开始输注之前立即给药化合物1的IV推注剂量。在将动物置于CPB泵上之前30分钟开始化合物1的输注。

结果

图11示出跨越膜式氧合器评价的压力梯度。先前在没有抗凝血剂的情况下进行的研究表明，跨越膜式氧合器的压力在泵起动的15分钟内建立，并且在接下来的30分钟内呈指数增加，使得氧合器阻塞并且循环停止，而对于多剂量下的化合物1，跨越膜式氧合器的压力梯度在整个运行中保持一致，指示测试制品成功地维持了抗凝作用，从而允许泵运行在整个方案内继续进行。

图12示出化合物1血浆浓度与aPTT之间的相关性。所有动物存活至研究结束。总之，在心肺转流术/ECMO方案期间，在本研究中使用的剂量水平下，化合物1与发病率或死亡率的任何增加无关。

在化合物1输注期间和CPB之前，aPTT在所有动物中中度到显著地延长(图13)。aPTT的延长在整个化合物1输注和CPB中持续。在接受化合物1的负荷剂量的组中(第2至第5组)，在CPB之前(第3至第5组)或在CPB的前30分钟期间(第2组)，aPTT的延长最显著，但然后在达到稳态之前稍微改善。第1组动物未接受化合物1负荷剂量，并且在该组中化合物1输注期间的所有测量时间点，aPTT的延长保持相对一致。在停止化合物1输注和CPB后的所有组中，aPTT趋向基线值，但在研究结束时保持适度延长。

结论

将化合物1给药于模型成功地防止了心肺转流术组分中凝血的激活。化合物1的抗凝血效应对活化部分凝血活酶时间(aPTT)的抑制具有选择性。另外，数据表明，在开始输注之前立即添加推注剂量使得能够快速实现化合物1的目标血浆水平以及期望的稳态水平，并且足以实现成功的105分钟CPB运行并防止大部分循环组分中的凝结。

总之，这些数据指示在防止心肺转流术的组分中的凝血方面，化合物1可以是肝素的可接受的替代物。