具体实施方式

本发明涉及止血用密封剂的分配器，其包括用于接收纤维蛋白原溶液的容器和将凝血因子、优选凝血酶固定在其上的活化室。本发明还涉及用于活化室的载体、包括活化室的可更换的尖端以及用于产生和分配密封剂的方法和套件。

从本文呈现的数据可以明显看出，将凝血因子固定在活化室中的功能化载体上允许分配有效聚合的纤维蛋白作为密封剂，同时使凝血因子释放到沉积部位最小化。

本发明与传统分配器相比具有以下优点：本发明的分配器、组件、方法和套件快速、易于使用、可靠地且精确地将密封剂分配到所需位置，特别是用于止血。

如本文所用的，“止血”是指阻止潜在受损组织或血管出血并且由此防止出血的过程。止血是伤口愈合的第一阶段，并且包括凝血以阻止进一步出血。本发明的分配器允许纤维蛋白密封剂的沉积，该纤维蛋白密封剂有效地促进止血以及伤口愈合，并且容易被吸收。

内源性伤口愈合作为一种自然过程，几乎在受伤后立即开始，并且需要各种细胞的连续协调功能以及降解和再生步骤的密切调节。细胞的增殖、分化和迁移是伤口愈合的重要生物学过程，也涉及纤维蛋白凝块的形成、凝块的再吸收、组织重塑，例如，纤维化和内皮化。伤口愈合包括形成高度血管化的组织，其包含许多毛细血管、许多活跃的成纤维细胞和丰富的胶原纤维。创伤愈合过程可以由凝血活酶启动，凝血活酶从受损细胞和血浆因子VII中流出，以形成因子X活化剂，然后与因子V和磷脂、钙络合，将凝血酶原转化为凝血酶。凝血酶催化纤维蛋白原释放纤维蛋白肽A和B以产生纤维蛋白单体(即纤维蛋白I和纤维蛋白II)，其聚集形成纤维蛋白丝。凝血酶还激活转谷氨酰胺酶因子XIIIa，该酶催化异肽键的形成以共价交联纤维蛋白丝。

本发明的装置允许应用支持止血和促进伤口愈合的组织密封剂。含有血浆蛋白的外科粘合剂和组织密封剂通常用于封闭内外部伤口，以减少失血和维持止血。典型的组织密封剂含有凝血因子和其他血蛋白质。

如本文所使用的，“密封剂”优选为纤维蛋白密封剂。纤维蛋白密封剂是一种与从血浆中制备的天然凝块相似的凝胶。纤维蛋白密封剂的精确成分取决于用作起始材料的特定血浆部分。血浆成分的分离可以通过标准的蛋白质纯化方法来实现。例如，乙醇、聚乙二醇、硫酸铵沉淀、离子交换和凝胶过滤层析。典型的纤维蛋白密封剂含有蛋白质混合物，其包括微量白蛋白、纤维连接蛋白和血纤维蛋白溶酶原，有些还含有抑肽酶作为稳定剂。

本发明实践中使用的“纤维蛋白原”包括将在人体内形成纤维蛋白的任何纤维蛋白原。

“纤维蛋白原溶液”是指包含大量纤维蛋白原和任选的其它数量的刺激纤维蛋白形成的其他因子的水溶液，当其与固定的活化化合物(优选凝血酶)接触时，使得纤维蛋白形成和交联发生，从而赋予组合物组织密封剂的性质。纤维蛋白原溶液可以基于生理上可接受的流体如水、生理盐水、平衡盐溶液、葡萄糖水溶液、甘油等。纤维蛋白原溶液可以替代地或另外包含优化反应条件的其它物质，例如，pH调节剂和缓冲剂、张力调节剂、润湿剂等，例如，乙酸钠、乳酸钠、氯化钠、氯化钾、氯化钙、山梨醇酐单月桂酸酯、油酸三乙醇胺。

通常，纤维蛋白原以冻干形式提供，并且在使用前复原以形成纤维蛋白原溶液。纤维蛋白原也可以是冷冻的或新鲜的、自体来源(来自待治疗的受试者)、人体来源(包括汇集的人纤维蛋白原)、重组的和牛来源或其他非人类来源如鱼(例如，鲑鱼和海鳟鱼)。冻干的纤维蛋白原可以使用通常含有抑肽酶和氯化钙的溶液进行复原。纤维蛋白原可以用包含至少一种添加剂的溶液复原。例如，冻干纤维蛋白原可以使用例如含有麻醉剂或添加剂的生理盐水；含有抑肽酶和麻醉剂或添加剂的生理盐水溶液；含有麻醉剂、任选的添加剂和钙离子(Ca²⁺)(例如，可以由氯化钙供应)的生理盐水溶液；或含有麻醉剂、抗生素或其他和/或添加剂的混合物的溶液。

纤维蛋白原可以与其他蛋白质紧密混合，这些蛋白质通常存在于抗凝全血、富含血小板的血浆、血浆、冷沉淀物或通过诸如血浆的科恩沉淀(Cohn precipitation)等方法获得的血浆沉淀物中。这种额外的蛋白质组分可以包括纤维连接蛋白、免疫球蛋白，特别是IgG、因子XIII、血纤维蛋白溶酶原和白蛋白。本文所设想的纤维蛋白原溶液可以在应用于本发明之前通过一种或多种方法进行病毒灭活。

还可以设想人类纤维蛋白原的替代来源。例如，通过重组技术制备的纤维蛋白原也可以用于纤维蛋白密封剂中。可以用于生产重组纤维蛋白原的分子技术包括使用转染含有编码正常或突变人类纤维蛋白原的分离基因的DNA载体的COS-1或Hep G2细胞(RoyS.N.et al.,1991,J.Biol.Chem.,266:4758-4763)。

本文所用术语“凝血因子”表示通过切割凝血途径中的下游蛋白质而起作用的凝血因子或血液凝结因子。优选地，凝血因子因此是“纤维蛋白原裂解发蛋白酶”，其将可溶性纤维蛋白原转化为不溶性链。最优选的凝血因子是凝血酶。

如本文所用，术语“凝血酶”是指将可溶性纤维蛋白原转化为不溶性纤维蛋白链并且催化许多其它凝血相关反应的丝氨酸蛋白酶。除非另有规定，否则该术语不是物种特有的。该术语包括α化凝血酶和γ-凝血酶，α-凝血酶是凝血酶的天然形式，γ-凝血酶是由保留大部分血小板活化能力的α-凝血酶生产的不凝结的衍生物。凝血酶是常见的生理促凝剂。许多哺乳动物来源(最常见的是牛来源)的凝血酶通常用于商用纤维蛋白密封剂。

纤维蛋白原和凝血酶都可以通过血浆分离从血浆中分离得到。对每种制备技术的综合评述已经发表，并且是本领域技术人员所使用的并且适合于在本发明中使用的大多数商业血浆分离程序的基础(对于纤维蛋白原：Blomback,B.和Blomback,M.,1956年,ArkKemi,10:415-443；Stryker,M.H.&Waldman,A.A.,1978年,Kirk-Othmer Encyclopedia ofChemical Technology,第4卷第3辑,pp25-61,John Wiley；Lowe G.D.O.等,1987年,Fibrinogen 2:Biochemistry,Physiology and Clinical Relevance.Excerpta Medicus,Elsevier Science Publishers；对于凝血酶：Fenton II,J.W.等,1977,J.Biol.Chem.,252:3587-3598；Gaffney P.J.等,1992年,Thrombos.Haemostas.,67:424-427；Ward,G.,1991年,欧洲专利申请号EP 0 439 156A1；和Kraus等人的美国专利申请号US 5,143,838。

如本文所用的表达“载体”是指基质部分，其用作固定凝血因子(优选凝血酶)的“基板”或“支持材料”。根据本发明的合适载体应当具有亲水性以及在相关pH范围和温度上的机械和化学稳定性。

优选地，所述载体是树脂。如本文所使用的“树脂”是指包含聚合物颗粒的不溶性材料，其典型地呈球形珠或珍珠的形式，其可由本领域公知的悬浮聚合方法形成。因此，所述树脂的颗粒也可以称为树脂颗粒。

这种树脂可以是天然或生物聚合物、合成聚合物和无机材料。琼脂糖、葡萄糖和纤维素珠是常用的天然载体。合成聚合物或有机载体主要基于丙烯酰胺、聚苯乙烯和聚甲基丙烯酸酯衍生物，而多孔二氧化硅和玻璃是一些常用的无机载体。下文描述了可以根据本发明使用的其它材料。

如本文所用，术语“聚合物”是指由通常通过共价化学键连接的重复结构单元组成的分子。术语“聚合物”也意指包括术语共聚物和低聚物。

根据本发明的实施方式，所述树脂由选自海藻酸盐、壳聚糖、几丁质、胶原蛋白、卡拉胶、明胶、纤维素、淀粉、果胶和琼脂糖中的聚合物组成；从沸石、陶瓷、硅藻土、二氧化硅、玻璃、活性炭和煤焦中选择的无机材料；或选自以下的合成聚合物：聚乙烯(PE)、聚甲醛(POM)、聚丙烯(PP)、聚氯乙烯(PVC)、聚醋酸乙烯酯(PVA)、聚偏二氯乙烯(PVDC)、聚苯乙烯(PS)、聚四氟乙烯(PTFE)、聚丙烯酸酯(PAA)、聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)、聚丙烯酰胺、聚甲基丙烯酸缩水甘油酯(PGMA)、丙烯腈-丁二烯-苯乙烯(ABS)、聚丙烯腈(PAN)、聚酯、聚碳酸酯、聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)、聚酰胺、聚芳酰胺、聚乙二醇(PEG)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚砜(PS)、聚醚砜(PES)、聚芳醚砜(PEAS)、乙烯基乙酸乙烯酯(EVA)、乙烯乙烯醇共聚物(EVOH)、聚酰胺酰亚胺、聚芳醚酮(PAEK)、聚丁二烯(PBD)、聚丁烯(PB)、聚对苯二甲酸丁二醇酯(PBT)、聚己内酯(PCL)、聚羟基烷酸酯、聚醚醚酮(PEEK)、聚醚酮酮(PEKK)、聚醚酰亚胺(PEI)、聚酰亚胺、聚乳酸(PLA)、聚甲基戊烯(PMP)、聚对苯醚(PPE)、聚氨酯(PU)、苯乙烯-丙烯腈(SAN)、聚丁烯酸、聚(4-烯丙基苯甲酸)、聚丙烯酸缩水甘油酯、聚甲基丙烯酸缩水甘油酯(PGMA)、丙烯腈-丁二烯-苯乙烯共聚物(ABS)、聚二乙烯基苯(PDVB)、聚烯丙基缩水甘油醚、聚乙烯基缩水甘油醚、聚乙烯基缩水甘油氨基甲酸酯、聚烯丙胺、聚乙烯胺、所述聚合物的共聚物和通过引入官能团而改性的任何这些聚合物。根据本发明的一个具体实施方式，所述载体选自苯乙烯-二乙烯基苯(DVB)及其衍生物、聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)及其衍生物、甲基丙烯酸聚缩水甘油酯(PGMA)及其衍生物。

最优选地，所述树脂由甲基丙烯酸酯聚合物、优选聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)组成。

优选地，所述树脂是多孔树脂。在一些实施方式中，所述树脂可以是大孔、介孔或凝胶型树脂。

本文中使用的术语“孔”是指作为固体目标物的颗粒中任何尺寸或形状的凹陷、狭缝或孔。孔可以贯穿整个颗粒或部分穿过颗粒。孔可以与其他孔相交。

术语“大孔”(也被称为大孔网状)在本领域中是众所周知的，并且通常是指由共聚物珠制备的树脂，所述共聚物珠具有表现出分子大小孔隙的密集堆积的聚合物链区域，所述孔隙由无共聚物空隙(通常被称为介孔和大孔隙隔离。相反，微孔或凝胶型树脂通常具有分子大小的孔(通常小于)并且由不使用惰性稀释剂的单体混合物制备。美国专利申请号US 4224415和US 4382124中进一步描述了大孔树脂和凝胶树脂，其教导通过引用并入本文。

“颗粒尺寸”或“树脂尺寸”优选地指组成树脂的聚合物颗粒的特征尺寸。对于聚合物珠粒，所述粒径优选与珠粒直径有关。

一般而言，官能化树脂(例如，离子交换树脂)包含由悬浮聚合方法形成的多个聚合颗粒，并且具有多个当与含有这种蛋白质的液体接触时能够保持蛋白质如凝血因子的离子或分子的连接官能团。悬浮聚合过程的性质使得所得共聚物珠可以表现出不同的粒径，即，所述珠共同地适合粒径分布。当共聚物珠被官能团基本上功能化时，这种分布被保留，并且在大多数情况下被加宽。

“粒径的平均值”优选地涉及算术平均值，而“粒径的标准偏差”优选地量化树脂中存在的粒径的变化。

给定树脂或共聚物珠或树脂颗粒样品的粒径平均值和标准偏差可以使用设计用于测量离散颗粒样品粒径分布的任何商用仪器进行测定。这种仪器的例子是岛津或和田提供的粒度分析仪。

存在几种类型的载体，如上文和下文所述的，所述载体优选地可有利地用于固定诸如凝血因子之类的蛋白质。所述载体可以基于多糖等材料。合适的多糖是例如纤维素；硝化纤维素；壳聚糖；胶原；淀粉和交联多糖凝胶如琼脂、葡聚糖凝胶(Sephadex)或琼脂糖凝胶(Sepharose)。制备多糖基质衍生物的方法早已为人所知，并且例如在US 4411832或US3947352中描述。所述载体还可以基于合成的有机载体。合成的聚合物基质包括亲水性和疏水性合成聚合物及其组合。合成的载体包括例如选自由聚丙烯酰胺载体或其衍生物；聚甲基丙烯酸酯载体或其衍生物；聚苯乙烯载体或其衍生物；或聚醚砜载体或其衍生物所组成的载体组中的载体。否则，衍生的二氧化硅、玻璃或吖内酯(azlactone)珠可以用于根据本发明的装置中。此类装置优选利用有机载体。在本发明的上下文中，使用珠是特别有利的。

功能化载体(优选官能化树脂)是指包含允许固定或结合凝血因子的官能团的载体(优选树脂)。

将凝血因子到载体(优选树脂)的“固定”、“结合”或偶联(用于提供用于本发明的活化室)的表述是指将分子固定在一起的非共价或静电结合。非共价或静电固定可以用作同义词并且包括但不限于氢键、金属离子结合、带电基团之间的离子相互作用、范德华相互作用以及非极性基团之间的疏水相互作用。

这些相互作用中的一个或多个可以介导将凝血因子固定到功能化载体(优选树脂)上。所述结合可以是特异性的、或者选择性的或非特异性的。

所述固定可以通过常见的官能团进行，包括胺、醇、羧酸、醛和环氧基。制备载体的方法在本领域是已知的，并且例如在US 8142844B2、US 2015/0111194 A1和US 2014/0166580 A1中所描述的。这些参考文献还描述了可以用于生成功能化载体的间隔基团(或“连接体”基团)。

然而，对于在本发明中使用，特别优选在特定条件下考虑非共价或静电相互作用的官能团。

例如，特别优选使用包含氨基的氨基官能化树脂，其可以通过可电离表面氨基酸(例如，Lys、Arg、His、Asp、Glu)与聚合物上的带电胺的离子相互作用来用于蛋白质固定。

此类氨基官能化树脂也可以例如通过戊二醛预活化，并提供反应基团以形成共价键。然而，如上所述的，已发现例如基于离子相互作用的静电固定特别适合于维持高蛋白质活性。因此，当使用氨基官能化树脂时，凝血因子的固定将优选地在实现静电结合而不是共价结合的条件下进行。为此，例如，可能需要在固定反应期间调节pH值。

许多功能化树脂是市售的，并且是本领域技术人员所熟知的，其适合于蛋白质如凝血因子的静电固定。特别优选的示例包括Lifetech^TM，用氨基官能化的甲基丙烯酸酯聚合物，其中可以选择不同的间隔部分。然而，也可以设想其他特定功能化树脂，例如，Lifetech^TM，甲基丙烯酸十八酯、大孔苯乙烯或DVB/甲基丙烯酸酯，用于介导蛋白质吸收；以及苯乙烯叔胺或苯乙烯季胺，用于介导离子固定。

根据一个方面，Lifetech^TMECR8409F甲基丙烯酸氨基酯微球用作功能化树脂，其携带氨基作为可静电固定凝血因子如凝血酶的官能团。它们的粒径为150～300μm、平均粒径为198μm、孔径为(平均孔径：)以及六亚甲基(C₆)间隔部分。

如本文所用，术语“氨基官能化树脂”或“氨基封端树脂”是指包含氨基或胺基作为用于静电固定蛋白质如凝血因子的官能团的树脂。

本文优选使用术语“氨基”或“胺基”来指代基团-NZ¹Z²，其中Z¹和Z²中的每个独立地选自氢、烷基、取代的烷基、环烷基、取代的环烷基、杂环烷基、取代的杂环烷基、芳基、取代芳基、杂芳基、取代的杂芳基、烷氧基、芳氧基、甲硅烷基及其组合。

术语“伯氨基”在本文中用于指-NH₂，其是最优选的氨基。

术语“仲氨基”在本文中用于指代-NZ¹H，其中Z¹选自烷基、取代的烷基、环烷基、取代的环烷基、杂环烷基、取代的杂环烷基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、烷氧基、芳氧基、甲硅烷基及其组合。

术语“叔氨基”在本文中用于指代-NZ¹Z²，其中Z¹和Z²中的每个独立地选自氢、烷基、取代的烷基、环烷基、取代的环烷基、杂环烷基、取代的杂环烷基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、烷氧基、芳氧基、甲硅烷基及其组合。

术语“季氨基”在本文中用于指代–NZ¹Z²,Z³⁺，其中Z¹、Z²和Z³中的每个独立地选自氢、烷基、取代的烷基、环烷基、取代的环烷基、杂环烷基、取代的杂环烷基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、烷氧基、芳氧基、甲硅烷基及其组合。

进一步优选的功能性树脂可以从已知的离子交换树脂中选择，所述离子交换树脂可以在多种市场上购买到。如本文所用的，术语“离子交换树脂”意指其常规含义，即包含交联聚合物珠和使其适于在离子交换工艺中使用的官能团的树脂。

离子交换是众所周知的商业实践过程，并且在公开文献中广泛报道。离子交换技术的综述参见《柯克-奥瑟默化学技术百科全书》(第3版，第13卷，第678-705页，由R.M.Wheaton和L.J.Lefevre，由Wiley和Sons出版设出版)(Kirk-Othmer Cyclopedia ofChemical Technology(3rd ed.,Vol.13,p.678-705,by R.M.Wheaton and L.J.Lefevre,published by Wiley and Sons))。如上述Kirk-Othmer参考文献中公开的，常规离子交换树脂通常具有磺酸官能团，但是已知制备具有其它类型官能团的离子交换树脂。

离子交换包括可逆化学反应，其中流体介质中的离子被交换为连接在不溶于所述流体介质的不可移动固体颗粒上的类似带电离子。术语离子交换树脂用来指这种物质。由于离子交换基团连接在聚合物载体上的交联性质，使得树脂变得不可溶。离子交换树脂分为酸性阳离子交换树脂和碱性阴离子交换树脂，前者具有带正电荷的可交换离子，后者具有带负电荷的可交换离子。

本发明中可以使用酸性阳离子交换树脂和碱性阴离子交换树脂来固定凝血因子。在一种实施方式中，酸性阳离子交换树脂包含有机酸阳离子交换树脂，例如，磺酸阳离子交换树脂。预期用于本发明实践中的磺酸阳离子交换树脂可包含选自磺化苯乙烯-二乙烯基苯共聚物、磺化交联苯乙烯聚合物、酚醛磺酸树脂、苯甲醛磺酸树脂以及它们的混合物中的至少一种。

在另一实施方式中，酸性阳离子交换树脂包含至少一种有机酸阳离子交换树脂，例如，羧酸、丙烯酸或磷酸阳离子交换树脂及其混合物。此外，可以使用不同阳离子交换树脂的混合物。在许多情况下，可以使用碱性离子交换树脂将pH调节至所需水平，以确保凝血因子的静电固定。在某些情况下，可以使用碱性水溶液(例如，氢氧化钠、氢氧化铵、四甲基氢氧化铵、氢氧化钙、氢氧化铯及其混合物等的溶液)进一步调节pH值。

市售阳离子交换树脂包括但不限于例如具有磺酸基的阳离子交换树脂(例如，来自GE医疗保健公司的MonoS、MiniS、Source 15S和3OS、SP Sepharose Fast Flow^TM、SPSepharose High Performance；来自日本东曹公司的Toyopearl SP-650S和SP-650M；来自伯乐公司(BioRad)的Macro-Prep High S；来自颇尔技术公司(Pall Technologies)的Ceramic HyperD S、Trisacryl M和LS SP以及Spherodex LS SP)；具有磺乙基基团的阳离子交换树脂(例如，来自EMD公司的Fractogel SE、来自应用生物系统公司(AppliedBiosystems)的Poros S-10和S-20)；具有磺丙基基团的阳离子交换树脂(例如，来自日本东曹公司的TSK Gel SP 5PW和SP-5PW-HR；来自应用生物系统公司的Poros HS-20和HS 50)；具有磺异丁基基团的阳离子交换树脂(例如，来自EMD公司的Fractogel EMD SO3)；具有亚砜乙基(sulfoxyethyl)基团的阳离子交换树脂(例如，来自Whatman公司的SE52、SE53和Express-Ion S)；具有羧甲基基团的阳离子交换树脂(例如，来自GE医疗保健公司的CMSepharose Fast Flow；来自Biochrom Labs公司的Hydrocell CM；来自BioRad公司的Macro-Prep CM；来自颇尔技术公司(Pall Technologies)的Ceramic HyperD CM、Trisacryl M CM、Trisacryl LS CM；来自Millipore公司的Matrx Cellufme C500和C200；来自Whatman公司的CM52、CM32、CM23和Express-Ion C；来自日本东曹公司的ToyopearlCM-650S、CM-650M和CM-650C)；具有磺酸和羧酸基团的阳离子交换树脂(例如，来自J.TBaker公司的BAKEPVBOND羧基砜)；具有羧酸基团的阳离子交换树脂(例如，来自J.T Baker公司的WP CBX；来自陶氏液体分离公司的DOWEX MAC-3；来自Sigma Aldrich公司的Amberlite弱阳离子交换剂、DOWEX弱阳离子交换剂、和Diaion弱阳离子交换剂)；具有磺酸基团的阳离子交换树脂(例如，来自Biochrom Labs公司的Hydrocell SP；来自陶氏液体分离公司的的DOWEX细网强酸阳离子树脂；来自J.T Baker公司的UNOsphere S、WP Sulfonic；来自Sartorius公司的Sartobind S膜；来自Sigma-Aldrich公司的Amberlite强阳离子交换剂、DOWEX强阳离子交换剂和Diaion强阳离子交换剂)；以及具有正磷酸盐基团的阳离子交换树脂(例如，来自Whatman公司的Pl 1)。

在另一实施方式中，碱性阴离子交换树脂包含至少一种叔胺阴离子交换树脂。预期用于本发明实践中的叔胺阴离子交换树脂可以包含选自以下所组成的组中的至少一种：叔胺化苯乙烯-二乙烯基苯共聚物、叔胺化交联的苯乙烯聚合物、叔胺化酚醛树脂、叔胺化苯甲醛树脂及其混合物。在另一实施方式中，碱性阴离子交换树脂包含至少一种季胺阴离子交换树脂或其混合物，以及其它交换树脂。

市售阴离子交换树脂包括DEAE纤维素；来自应用生物系统公司(AppliedBiosystems)的Poros PI 20、PI 50、HQ 10、HQ 20、HQ 50、D 50；来自Sartorius公司的Sartobind Q；MonoQ、MiniQ、Source 15Q和3OQ、Q、DEAE和ANX Sepharose Fast Flow、QSepharose高性能、QAE SEPHADEX^TM和FAST Q-SEPHAROSE^TM(来自GE医疗保健公司)；来自J.T.Baker公司的WP PEI、WP DEAM、WP QUAT；来自Biochrom Labs公司的Hydrocell DEAE和Hydrocell QA；来自Biorad公司的UNOsphere Q、Macro Prep DEAE和Macro Prep High Q；来自颇尔技术公司(Pall Technologies)的Ceramic HyperD Q、Ceramic HyperD DEAE、Trisacryl M和LS DEAE、Sphereodex LS DEAE、QMA Sphereosil LS、QMA Sphereosil M和Mustang Q；来自陶氏液体分离公司的DOWEX细网强碱I型和II型阴离子树脂和DOWEXMonosphere E 77弱碱阴离子；来自Millipore公司的Intercept Q膜、Matrex CellufmeA200、A500、Q500和Q800；来自EMD公司的Fractogel EMD TMAE、Fractogel EMD DEAE和Fractogel EMD DMAE；来自Sigma-Aldrich公司的Amberite I型和II型弱强阴离子交换剂、DOWEX I型和II型弱和强阴离子交换剂、Diaion I型和II型弱和强阴离子交换剂、Duolite；来自日本东曹公司的TSK gel Q和DEAE 5PW和5PW-HR、Toyopearl SuperQ-650S、650M和650C、QAE-550C和650S、DEAE-650M和650C；来自Whatman公司的QA52、DE23、DE32、DE51、DE52、DE53、Express-Ion D和Express-Ion Q。

优选的功能化树脂可以通过选择平均粒径为150～150μm并且允许凝血因子、优选凝血酶的静电固定的功能化的树脂，从上述离子交换树脂或其它市售离子交换树脂中选择。

根据一个优选的实施方式，所述载体包括间隔部分，所述间隔部分上连接有可介导静电固定的官能化基团。

术语“间隔部分”、“连接基”或“连接体”在本文中用于指任选地用于例如通过共价连接将官能团连接到树脂的聚合物颗粒的原子或原子集合。间隔部分或连接体可以水解稳定或可以包括生理上可水解或酶降解的连接基。如本文所用的连接体不是单个共价键。连接体的结构并不重要，只要它能使官能团从树脂的聚合颗粒的表面物理分离。

在某些实施方式中，间隔有机部分包含C₂-C₄₀、C₂-C₂₀，优选C₃-C₁₀、优选有支链或没有支链的烷基、烯基、炔基、芳基、氨基烷基、氨基烯基、氨基炔基、杂芳基、酰胺和/或芳烷基或其组合。

术语“烷基”是指优选1～24个碳原子的有支链或没有支链的饱和烃基，例如，甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、戊基、己基、庚基、辛基、癸基、十四基、十六基、二十烷基、二十四烷基等。优选的烷基具有1～12个碳原子、1～6个碳原子、更优选1～4个碳原子。任何一个或多个本文所述的烷基可以是“被取代的烷基”，其中一个或多个氢原子被诸如卤素、环烷基、烷氧基、氨基、羟基、芳基或羧基等取代基取代。

术语“芳基”指任何基于碳的芳香族基团，包括但不限于苯、萘等。术语“芳基”还包括“杂芳基”，其被定义为具有至少一个杂原子引入芳香基团的环内的芳香基团。杂原子的示例包括但不限于氮、氧、硫和磷。所述芳基可以被一个或多个基团取代，所述基团包括但不限于烷基、炔基、烯基、芳基、卤化物、硝基、氨基、酯、酮、醛、羟基、羧酸或烷氧基，或者所述芳基可以不被取代。

术语“烷氧基”在本文中用于指代-OZ1基团，其中Z1选自烷基、取代的烷基、环烷基、取代的环烷基、杂环烷基、取代的杂环烷基、甲硅烷基及其组合，如本文所述的。合适的烷氧基包括例如甲氧基、乙氧基、苄氧基、叔丁氧基等。相关术语为“芳氧基”，其中Z1选自芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基及其组合。合适的芳氧基的实例包括苯氧基、取代的苯氧基、2-吡啶氧基、8-喹啉氧基等。

本文所使用的“分配器”是指允许分配流体的任何装置。通常，分配器将包括配置用于接收所述流体的容器以及用于通过位于容器下游的出口或尖端将流体从容器中排出的装置。分配器的优选实例是自动或手动操作的注射器，其包括容器(也称为筒)、柱塞(作为排出流体的装置，其典型形式为带有塞子的活塞)以及用于精确引导和沉积流体的尖端和/或针。

如本文所使用的，“配置成接收纤维蛋白原溶液的容器”优选是指任何适于接收和保持水溶液(例如，纤维蛋白原溶液)的容器。容器的材料不受特别限制，优选是防水的。合适材料的实例包括玻璃、塑料、优选硬质塑料或其它耐用材料。在优选的实施方式中，所述材料是透明的，使得纤维蛋白原溶液的颜色和/或填充状态可见。

所述容器的形状可以是锥形、长方体或圆柱形。优选的体积范围为0.1～100ml，优选0.5～10ml。

所述活化室是指配置用于接收和保持载体的分配器的室。所述活化室优选与容器流体连通，以允许纤维蛋白原溶液在分配时进入活化室。

在本发明的上下文中，上游和下游涉及分配的方向。在其典型操作模式下，分配器中的流体在分配时将首先通过上游部件，然后通过下游部件。

所述活化室和所述容器可以是相同的、优选刚性结构的一部分，并且优选由相同的材料制成以形成所述分配器的主体。所述活化室和所述容器还可以位于两个分开但可连接的组件中。这种情况，例如是活化室是可更换的尖端的一部分。

所述活化室和所述容器可以具有任何横截面形状(圆形、椭圆形、三角形、不规则形、方形或矩形等)。然而，优选所述活化室和所述容器在其接触位置处具有相似的横截面形状和尺寸。

如本文所使用的，“尖端”是指分配器的最下游挤出部分。在其分配端，与其更上游端相比，所述尖端通常表现出显著减小的横截面积，以便允许密封剂的精准沉积。所述尖端可以具有至少部分锥形的特征，并且在优选的实施方式中，包括钝端针或喷雾尖端部分。

如本文所使用的，术语“包括”和“包含”或其语法变体应该被视为指定所述特征、整数、步骤或组件，但不排除添加一个或多个附加特征、整数、步骤、组件或其组。该术语包括“由……组成”和“基本上由……组成”两个术语。

因此，术语“包括”/“包括”/“具有”意味着能够/可以存在任何进一步的组件(或类似的特征、整数、步骤等)。术语“由……组成”表示不存在另外组件(或类似的特征、整数、步骤等)。

当在本文中使用时，术语“基本上由……组成”或其语法变体将被视为指定所述特征、整数、步骤或组件，但不排除添加一个或多个附加特征、整数、步骤、组件或其组，但仅当附加特征、整数、步骤、其组件或组不会实质性地改变所要求保护的组合物、装置或方法的基本和新颖的特征。

因此，术语“基本上由……组成”意指那些特定的另外组件(或类似的特征、整数、步骤等)可以存在，即那些不会实质性地影响所述组合物、装置或方法的基本特征的组件。换言之，术语“基本上由……组成”(可在本文中与术语“基本上包括”互换使用)允许除了必要组件(或类似的特征、整数、步骤等)之外，在组合物、装置或方法中存在其他组件，前提是设备或方法的基本特性不受其他组件的存在的实质性影响。