膜联蛋白涂覆的颗粒
阅读说明：本技术 膜联蛋白涂覆的颗粒 (Annexin coated particles ) 是由 彼特·克雷默 海科·魏德特 凯文·博德 于 2020-02-06 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一种膜联蛋白涂覆的颗粒,其包含带负电荷的磷脂和与其非共价偶联的膜联蛋白。本发明进一步涉及包含膜联蛋白涂覆的颗粒的组合物。此外,本发明涉及一种用于预防或治疗选自慢性炎症性疾病、自身免疫性疾病、过敏症和癌症的疾病的方法的产品,所述产品包含膜联蛋白涂覆的颗粒和/或组合物。本发明进一步涉及一种制备膜联蛋白涂覆的颗粒的方法。(The present invention relates to an annexin coated particle comprising a negatively charged phospholipid and annexin non-covalently coupled thereto. The invention further relates to a composition comprising the annexin coated particles. Furthermore, the present invention relates to a product comprising an annexin coated particle and/or composition for use in a method for preventing or treating a disease selected from the group consisting of chronic inflammatory diseases, autoimmune diseases, allergy and cancer. The invention further relates to a method for preparing an annexin coated particle.)
技术领域
本发明涉及一种膜联蛋白涂覆的颗粒，其包含带负电荷的磷脂和与其非共价偶联的膜联蛋白。本发明进一步涉及一种包含膜联蛋白涂覆的颗粒的组合物。此外，本发明涉及一种用于预防或治疗选自慢性炎症性疾病、自身免疫性疾病、过敏和癌症的疾病的方法的产品，所述产品包含膜联蛋白涂覆的颗粒和/或组合物。本发明进一步涉及一种制备膜联蛋白涂覆的颗粒的方法。
背景技术
凋亡细胞（AC）的清除与免疫自耐受的诱导密切相关。每天，数十亿个AC被树突状细胞（DC）等抗原提呈细胞吞噬，并主动调节免疫反应。吞噬 AC之后，DC 获得了一种致耐受性表型，其特征是共刺激表面分子和炎性细胞因子的低表达以及对激活的抵抗力[1]。这种致耐受性DC处理并将AC 衍生的自身抗原呈递给初始 T 细胞，并诱导 T 细胞的耐受性 [2]。
早期AC在其表面暴露了膜联蛋白家族的几个成员，这作为DC的抑制信号，促进了外周耐受的发展[3], [4]。膜联蛋白是一个胞质蛋白家族，它们以钙依赖性方式与带负电荷的磷脂（例如磷脂酰丝氨酸）结合。脂质结合由所有膜联蛋白家族成员中高度保守的 C 末端核心结构域介导，与AnxA1 N端对应的肽已显示与 N-甲酰肽受体（FPR）家族成员结合，导致在几种急性和慢性炎症模型中，中性粒细胞的迁移减少[5]。
从结构说，膜联蛋白由进化上高度保守的膜联蛋白核心结构域和独特的N端组成。胞质蛋白膜联蛋白 A1（AnxA1）的早期暴露被确认为 AC表面的致耐受信号[3]。膜联蛋白A1的细胞外免疫调节功能被进行了最为突出的描述，并归因于其N末端与N-甲酰肽受体（FPR）家族的结合。然而，由保守的膜联蛋白核心结构域介导的致耐受功能独立于 FPR [4]。
此外，膜联蛋白与DC和其他免疫细胞上表达的C型凝集素受体（CLR）超家族中的Dectin-1（也称为 CLEC7A）结合[6]。它作为模式识别受体，对存在于真菌和细菌物种细胞壁中的β-1,3 连接葡聚糖（β-葡聚糖）具有高亲和力。Dectin-1参与微生物和真菌感染后免疫反应的激活。Dectin-1的信号传导主要依赖于其细胞质区域的半ITAM，通过脾酪氨酸激酶（SYK）、Raf-1 和 Card-9 激活信号通路。此外，β-葡聚糖对 Dectin-1 的刺激通过激活NADPH 氧化酶-2 (NOX-2) 导致活性氧（ROS）的产生。Dectin-1的刺激可以启动抗炎和致耐受反应，限制了 1 型糖尿病和过敏性免疫反应的诱发。
目前正在进行膜联蛋白和膜联蛋白制剂在慢性炎症、自身免疫性疾病、过敏、癌症疫苗接种（Therannex, DKFZ; Trio Medicines Ltd, UK）以及心血管疾病（AnnexinPharmaceuticals,Sweden）等疾病中的治疗潜力的研究。大多数这些治疗性膜联蛋白应用的共同点是使用可溶性膜联蛋白制剂。然而，除了与特定受体的期望结合之外，已知可溶性膜联蛋白可以与带负电荷的磷脂（如磷脂酰丝氨酸（PS）结合。因此，由于各种细胞和血管表面的PS表达，可溶性膜联蛋白制剂在体内给药时经常观察到高背景结合和脱靶效应[7], [8]。可溶性膜联蛋白通常随机结合包含带负电荷的磷脂的膜，并且不会选择性地与靶细胞上的靶受体结合。这些脱靶效应显着降低有效膜联蛋白的浓度，促使给药极高的膜联蛋白剂量。此外，高膜联蛋白剂量通常会导致不良的副作用，例如减少凝血而诱导的血管渗漏。
WO 2007/069895涉及通过使用新型膜联蛋白、膜联蛋白变体及其衍生物将化合物递送至特定靶标来治疗和诊断受试者的组合物和方法。
WO 2016/113022 描述了膜联蛋白与特定受体相关，可以通过膜联蛋白或其片段之一的结合或针对该受体的抗体来刺激或阻断膜联蛋白。因此，膜联蛋白和/或其功能片段和/或包含膜联蛋白或其功能片段的融合蛋白被认为可用于调节免疫系统。WO2016/113022没有提及任何减少膜联蛋白制剂脱靶结合的方法。
WO 2005/027965公开了膜联蛋白和抗膜联蛋白抗体及其用途，例如用于检测细胞凋亡和用于生产药物组合物，该药物组合物用于诊断和/或治疗癌症、自身免疫疾病、心血管和/或血管疾病。WO 2005/027965 不涉及减少膜联蛋白的脱靶结合。
WO 2001/072277公开了一种用于产生免疫应答的磷脂囊泡，该磷脂囊泡中含有抗原或编码抗原的多核酸。WO 2001/072277 不涉及具有降低的脱靶结合特性的膜联蛋白涂覆的颗粒。
Garnier等人[9]公开了聚乙二醇化脂质功能化的脂质体，其作为细胞靶向元件与膜联蛋白 A5 蛋白共价连接。Garnier等人不涉及一种减少膜联蛋白脱靶结合的方法。
因此，需要提供一种膜联蛋白制剂，其表现出较低的脱靶结合并因此具有比可溶性膜联蛋白更高的结合至靶细胞的有效膜联蛋白浓度。
因此，本发明的目的是提供一种膜联蛋白制剂和/或产品，其具有膜联蛋白的治疗效果并且与其他膜联蛋白制剂（例如可溶性膜联蛋白制剂）相比具有较少的副作用。因此，本发明旨在提供一种表现为较低脱靶结合的改良膜联蛋白制剂，以及制备所述膜联蛋白制剂的方法。此外，本发明的目的是将这些制剂和/或产品用于开发创新且有效的疗法，特别是用于治疗慢性炎性疾病、自身免疫性疾病、过敏和癌症。此外，本发明的目的是提供一种在靶细胞（如树突细胞）中诱导致耐受反应的方法。通过阅读本发明的以下描述，本发明的其他目的和方面对本领域技术人员将变得显而易见。