具体实施方式

下面将结合本发明实施例的附图，对本发明实施例的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

在本发明的描述中，需要理解的是，术语“上”、“下”、“顶”、“底”、“内”、“外”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或者元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。在本发明的描述中，“多个”的含义是两个或两个以上，除非另有明确具体的限定。

在本发明中，除非另有明确的规定和限定，术语“安装”、“相连”、“连接”、“固定”等术语应做广义理解，例如，可以是固定连接，也可以是可拆卸连接，或成一体；可以是机械连接，也可以是电连接；可以是直接相连，也可以通过中间媒介间接相连，可以是两个元件内部的连通或两个元件的相互作用关系。对于本领域的普通技术人员而言，可以根据具体情况理解上述术语在本发明中的具体含义。

下面结合附图与实施例进一步说明本发明要旨。

实施例：

参照图1，展示了一种具有电泳解离除蛋白功能的隐形眼镜清洗器的部分示意结构，所述隐形眼镜清洗器包括多个镜片清洗槽10，每个镜片清洗槽10内相对设置有两个电泳探针20，所述电泳探针20为纳米级镀层材料电泳解探针，所述电泳探针20自所述镜片清洗槽10的底部伸入所述镜片清洗槽10内部，且所述电泳探针20靠近所述镜片清洗槽10的内壁，所述电泳探针20的顶端低于所述镜片清洗槽10的槽壁上沿。

在一种实施例中，参见图2，本发明所述隐形眼镜清洗器还包括主机壳体，所述主机壳体包括清洗仓1和底座2，所述清洗仓1内设置有所述镜片清洗槽10，所述底座2内设置有集成电路30，所述镜片清洗槽 10内的电泳探针20与所述集成电路30电连接。

在一种实施例中，本发明所述清洗仓1为磁控集成仓。

在一种实施例中，本发明所述集成电路30包括电源管理电路、升压电路和开关，所述开关包括设置于所述清洗仓1或底座2上的触摸式按键。

所述电源管理电路包括电源，所述电源为所述导电回路提供电能，所述电能于所述电解池内转化为机械能和化学能，在机械能作用下所述泪蛋白在所述镜片清洗槽内发生电泳现象，且在化学能作用下所述电解质溶液在镜片清洗槽10(也可以说在整个镜片清洗槽10内尤其是靠近电极的附近)发生反应，获得可与泪蛋白发生反应的离子。

启动所述清洗器的电泳解离除蛋白功能，具体包括：

手动触摸所述触摸式按键，所述电源管理电路接通，形成导电回路，并产生回路电流，所述回路电流通过所述升压电路形成电压差，所述清洗槽内的两个电泳探针接收所述电压差，并通过所述清洗槽内的电解质溶液于所述清洗槽内形成电解池，实验情况下，利用所述电解池完全电解解离待清洗镜片上的泪蛋白的时间为30分钟，这个可通过后面的验证例得到， 30分钟后可以检测到蛋白被完全清除。

在一种实施例中，本发明提供一种使用所述隐形眼镜清洗器清洗镜片的方法，其包括如下步骤：

打开隐形眼镜清洗器中镜片清洗槽10上配置的盖子，

于所述镜片清洗槽10内填充电解质溶液，在一种实施例中，所述电解质溶液可以是中性溶液，比如0.9％NaCl溶液(即为生理盐水，其本身不具有消毒杀菌功能)，将待清洗镜片置入所述镜片清洗槽10内，

关闭所述镜片清洗槽10的盖子，

选择清洗电压、清洗时长，启动所述隐形眼镜清洗器的开关(触摸式按键)，隐形眼镜清洗器开始除蛋白灭菌，

清洗完成，打开所述镜片清洗槽10的盖子，可以对镜片冲洗后使用，也可直接佩戴。

需说明的是，本发明所述的解离除蛋白方法中使用含氯离子的溶液，当氯离子浓度较高，且发生反应之后还处于过饱和的状态，氯离子则会产生极少量的氯气，而用户在使用隐形眼镜清洗器时普遍是盖上盖子清洗的，因此，当清洗完成后，用户须打开清洗槽的盖子将清洗器放置在空气流通的地方，10-15分钟后使用该被清洗的隐形眼镜。但值得一提的是，本发明所述的电解质溶液是含Cl^-的浓度为0.01％～10％的溶液，或者生理盐水，这种浓度范围的溶液一般不会发生氯离子反应之后还处于过饱和状态的这种情况，再者，本发明所述的电解质溶液可以直接使用生理盐水或普通护理液，且效果是一样的，因此，在效果相同或相差不多的情况下，根据消费者的购买习惯，以及普遍的镜片洗护搭配习惯，一般不会出现这种Cl^-的浓度过高产生有害氯气的情况；最后，根据用户实际使用状况来讲，一般情况下也是不会出现这样的情况的，毕竟隐形眼镜镜片本身也有使用周期，比如月抛型镜片、季抛型镜片等，不会有很脏需要强效去蛋白的镜片，因此，消费者本身也不会去使用不在合理浓度范围内的溶液配合洗护。

但为了最大程度的保障用户的生命健康安全，还是要在此说明：

若用户使用了偏碱性的含氯离子的电解质溶液，最好是在空气流通的地方开盖静置10-15分钟，静置后并用清水冲洗，这就是为了防止氯离子浓度过高产生少量氯气可能造成人眼刺痛的情况发生。

进一步的，用户使用本发明所述的解离除蛋白方法清洗隐形眼镜时，清洗效果与电解质溶液中氯离子的浓度、清洗时长、隐形眼镜清洗器配备在电泳探针上的电压大小、隐形眼镜的累计使用时间，以及隐形眼镜上沉积的蛋白质的含量均有关系。用户也可根据镜片使用情况以及用来清洗的清洗器的电压配置情况，自由选择清洗时长，一般正常情况下30分钟左右即可清洗完成，当然，清洗时间过长或过短也不存在不良效果，在清洗器电压调大或者电解质溶液含氯离子的浓度稍微增大时，清洗时长小于 30分钟也不会影响清洗效果(再者，人眼本身就会分泌一些可以杀菌的物质，一般情况下，清洗时间不够长，镜片残留的少量微生物也是可以被人眼分泌的杀菌物质消灭的，因此，清洗时间过短也不会太大问题)。

关于清洗效果，还需强调的是，本发明所述的电解解离除蛋白灭菌方法是一个电泳加电解的叠加技术，就清洗效果来说，也是电泳和电解共同产生的除蛋白灭菌效果。因此，镜片清洗效果与电解质溶液中含Cl^-的浓度大小、电解电压大小、电泳电解时间长短，以及镜片本身附带的泪蛋白的多少均存在一定关系。比如，清洗镜片时，使用含Cl^-浓度较高的溶液作为电解质溶液，再配合使用大电压进行短时间电泳电解，则含Cl^-浓度较高的溶液也不会在溶液中产生浓度过高的次氯酸，这样就可以在缩短清洗时间的情况下进行有效的清洗，尤其适合赶时间的用户，且，退一步来讲，哪怕溶液中产生浓度过高的次氯酸，清洗完成后，用户可以在空气流通的地方开盖，直接用流水冲洗不到1分钟，也同样可以直接入眼使用了。同样的，若是消费者使用含Cl^-浓度极低的溶液清洗镜片，也可以在相对较小的电压下进行长时间的清洗，比如40-50分钟，这就是比较适合时间充裕的用户的清洗方案，一般使用这种含Cl^-浓度极低的溶液清洗镜片，在清洗完成后，几乎是可以直接入眼的。

本发明所述电泳解离除蛋白的原理是：

本发明所述电泳解离除蛋白灭菌方法主要是将蛋白电泳技术与电解技术进行叠加。首先，蛋白电泳技术(Electrophoresis)是指带电荷的粒子或分子在电场中移动的现象，大分子的蛋白质，多肽，病毒粒子，甚至细胞或小分子的氨基酸，核苷等在电场中都可作定向泳动，在本发明所述隐形眼镜清洗器的作用下，泪蛋白带电荷，在清洗仓镜片清洗槽内探针场强作用下向着探针电极位置移动，从而达到清洁角膜接触镜的功效。再者，电解技术是指，将电流通过电解质溶液或熔融态电解质(又称电解液)后，在阴极和阳极上引起氧化还原反应的过程。

在一种实施例中，本发明将Nacl溶液作为清洗镜片的电解质溶液，电解过程中Nacl溶液中的氯离子向正极探针移动，并失去电子被还原为氯气，一定浓度的Nacl溶液，产生的氯气一部分通过由气泡排出，一部分溶于水并发生如下化学反应：

Cl2+H2O＝HCl+HClO

该反应生成的HClO具有降解蛋白质和杀菌消毒的作用。

以上理论证明了本发明在实现电泳解离除蛋白灭菌方法时使用的电解质溶液可以是任何不含重金属的含氯离子的溶液，甚至于生理盐水、普通护理液(基本上市面流通的护理液均含有氯离子)都可以作为本发明所述的电解质溶液，比较常规的比如NaCl溶液、KCl溶液、MgCl₂溶液，以及含Cl^-的眼镜护理液，或者这些溶液中多种的组合(前提是不会发生反应从而破坏电解使得在镜片清洗槽内不能产生次氯酸)，或者整体来说，即含有氯酸盐的且可用作镜片护理液的离子溶液均可作为本发明所述的电解质溶液。因此，在本发明所述的电泳解离除蛋白灭菌方法中任何可用的含氯离子的溶液均可以起到除蛋白和灭菌的双重效果。

本发明所述镜片清洗槽10内的两个电泳探针20通过电解质溶液与电源连成导电回路，产生电流，所述两个电泳探针20形成两个带不同电性的电极(一个正电极，一个负电极)；

待清洗镜片表面具有泪蛋白，所述泪蛋白在所述电解质溶液中附带电荷属性(一般情况下，若所述电解质溶液是PH值高于所述泪蛋白等电点的溶液，则泪蛋白在该电解质溶液中因带负电荷而显电性，若所述电解质溶液是PH值低于所述泪蛋白等电点的溶液，则泪蛋白在所述电解质溶液中因带正电荷而显电性)，显电性的泪蛋白在所述清洗槽内根据电泳现象向与其电性相反的电极移动。

在一种实施例中，利用本发明所述的电泳解离除蛋白灭菌方法清洗镜片时，使用的电解质溶液是中性偏碱性的。

本发明所述隐形眼镜清洗器的电泳探针20为纳米级镀层材料电泳解探针，该电泳探针的材质耐腐蚀，因此，清洗槽内电解发生氧化还原反应不会引电极腐蚀，或者说，电解质溶液不与电泳探针发生反应，所述电解质溶液在所述两个带不同电性的电极附近发生反应(从浓度的角度来说，根据离子的定向移动的理论，相比于镜片清洗槽10内的其他位置而言，靠近电极附近的离子浓度就较高一些，但因为镜片清洗槽10内的位置原本就较小，而电解质浓度一定，也可以说是在镜片清洗槽10内发生反应)，形成破坏所述泪蛋白分子结构的离子，所述泪蛋白被所述离子电解解离。

下面结合所述隐形眼镜清洗器具体说明其利用电泳解离除蛋白的技术原理：

所述电泳探针20设置在靠近所述镜片清洗槽10内壁的位置，所述待清洗镜片置于所述镜片清洗槽10内，若接通电路电源，则所述镜片清洗槽10内的两个电泳探针20和电解质溶液形成导电回路，所述待清洗镜片上的泪蛋白在所述电解质溶液内产生电泳现象。

所述镜片清洗槽10内的两个电泳探针20和电解质溶液形成导电回路，所述导电回路产生电流，所述电解质溶液在电流的作用下与所述两个带不同电性的电极发生氧化还原反应形成具有强氧化性的离子(根据本发明实施例，可以理解为指代的是溶液中生成的次氯酸)，该离子与形成所述泪蛋白的肽键发生氧化反应，所述泪蛋白分子被降解。

所述镜片清洗槽10内的两个电泳探针20和电解质溶液形成导电回路，该导电回路产生电流，在电流作用下，该两个电泳探针20中的一个形成正电极(阳极电极)，另一个形成负电极(阴极电极)。

所述泪蛋白在所述电解质溶液中带电荷，所述带电荷的泪蛋白在清洗槽内向与其电性相反的电极移动，移动过程中泪蛋白自所述待清洗镜片表面脱落，向所述镜片清洗槽10内的与其电性相反的电极处聚集，实现所述电泳现象。

在一种实施例中，所述电解质溶液包括含NaCl的溶液，所述含NaCl 的溶液在电流的作用下被电解，溶液中的钠离子和氢离子向所述阴极电极移动，氯离子向所述阳极电极移动。

所述氢离子在所述阴极电极得到电子发生还原反应形成氢气，所述氯离子在所述阳极电极释放电子，发生氧化反应生成氯气，所述氯气与溶液中的水反应形成次氯酸。

电解Nacl过程中电解液中的Cl^-向探针的正极移动，并失去电子被还原为Cl₂，产生的氯气一部分通过由气泡排出，一部分溶于水并发生化学反应：Cl₂+H₂O＝HCl+HClO。

而HClO具有降解蛋白质的作用，可将角膜接触镜上沉积性蛋白分解为小分子蛋白和氨基酸，从而更利于角膜接触镜上泪蛋白的移除。这个降解反应主要有两种形式：一种是直接降解蛋白质的骨架肽链，在这种形式下，次氯酸与肽骨架反应，形成氯醛甲酰胺，氯醛甲酰胺形式的骨架在水溶液中容易水解，从而导致肽键断裂，蛋白降解；另一种则是通过降解肽骨架上的侧链，而且反应活性是甲硫氨酸>半胱氨酸>组氨酸>α-氨基酸> 色氨酸>赖氨酸>络氨酸>精氨酸>谷氨酸，在氨基和赖氨酸侧链上形成不稳定的氯胺，最后分解成羰基形式的有机分子片段【1,2】。

根据上述除蛋白原理，可预见的是对于长期使用的隐形眼镜上、以及清洗槽内的沉积性蛋白，通过本发明所述的解离除蛋白方法，次氯酸与沉积性蛋白发生氧化反应就可以将这些顽固的沉积性蛋白分解为小分子蛋白和氨基酸，小分子蛋白相比沉积性蛋白更易于吸附，因而，本发明所述的方法可以有效的去除沉积性蛋白。

同时，HClO也有杀菌消毒的作用：次氯酸会慢慢发生自身氧化还原反应而分解，在分解时每个次氯酸分子会吸收电子(次氯酸作为强氧化剂其可以吸收微生物细胞壁的表面蛋白的电子，从而氧化微生物表面功能蛋白，微生物最终因无法摄取营养、不能正常代谢、并停止分裂而失活，最终达到杀菌消毒的效果)，达到杀菌目的，并解离出氢离子，氯离子与氧气，化学式为：2HClO→2H++2Cl-+O₂↑。

次氯酸在杀菌、杀病毒过程中,不仅可作用于细胞壁、病毒外壳,而且因次氯酸分子小、不带电荷，还可渗透入菌(病毒)体内，与菌(病毒) 体蛋白、核酸、和酶等有机高分子发生氧化反应，从而杀死病原微生物。

本发明公开的电泳解离除蛋白灭菌方法，相比现有技术中配合护理液搓洗、浸泡镜片的方法，本发明所述的除蛋白方法延长了镜片使用寿命，不仅能有效去蛋白还能杀菌消毒，这种具有双重保护的高清洁度的清洗方法可以减小人眼遭受细菌感染的风险。

对于新的隐形眼镜或者使用周期较短的镜片来说，其镜片上附着的泪蛋白较少或几乎没有，因此，本发明所述的隐形眼镜清洗器可以用来给新镜片杀菌消毒；对于使用时间较长的镜片，其上必然沉积有较多的泪蛋白 (因为人眼本身就是一个较复杂的环境，镜片使用时间长了就必然会吸附有较多的泪蛋白)，本发明所述的隐形眼镜清洗器针对这种镜片进行清洗时就是有着除蛋白和灭菌的双重效果。

验证例1：

验证本发明所述隐形眼镜清洗器对蛋白质的清除效果：

使用本发明所述隐形眼镜清洗器的电泳解离除蛋白功能对溶菌酶进行清除实验(以下实验内容和数据均由经过苏州生物纳米园百拓生物医药公共服务平台测试并提供)：

配制一定浓度的蛋白溶液，将0.9％Nacl溶液加入本发明所述隐形眼镜清洗器中进行电泳实验，过程中会产生次氯酸，其可以对蛋白进行降解。需要说明的是，下面描述中使用的主要设备中：3N角膜接触镜电泳除蛋白灭菌仪即为本申请的隐形眼镜清洗器，为了便于描述，下面将隐形眼镜清洗器称作为3N角膜接触镜电泳除蛋白灭菌仪。

主要设备：1、3N角膜接触镜电泳除蛋白灭菌仪；

2、微量紫外分光光度计：Nanodrop One/One^c。

主要试剂溶液：1、蛋白：溶菌酶，索莱宝(货号：L8120)，分子量为14KDa；

2、0.9％NaCl配制，测试浓度，取2毫升电泳30分钟，检测电泳后浓度。

电泳中产生的次氯酸根会影响A280的紫外吸收，加10％的亚硫酸钠能完全消除影响。为了使检测的蛋白在同一个背景下，在电泳蛋白时，设置一个不加蛋白的0.9％NaCl溶液最为平行对照，也电泳30分钟，加10％的亚硫酸钠，用此溶液进行背景扣除。

实验结果：蛋白浓度均测试3次，进行平均后作为最终浓度。

电泳前3次分别为：657.4μg/mL；651.2μg/mL；649.8μg/mL；平均浓度为652.8μg/mL；30分钟电泳后，取1毫升溶液，加1毫升20％的亚硫酸钠，测得平均浓度为99.9μg/mL；96.1μg/mL；98.9μg/mL，平均为 98.3μg/mL；因为此浓度为亚硫酸钠对倍稀释后的浓度，所以最终浓度要乘以2，为196.6μg/mL。

蛋白降解率：(原始浓度-剩余浓度)/原浓度 x100％＝(652.8μg/mL-196.6μg/mL)/652.8μg/mL＝70％。

30分钟电泳解后取清洗仓内15微升上样，蛋白上样量为9μg，通过SDS-PAGE(生物电泳跑胶)未检测到溶菌酶，蛋白被完全分解，即电泳30分钟后蛋白清除率可达100％。

因此，结合上述实验数据，可以发明本发明所述的电泳解离除蛋白方法可以对蛋白质进行全面清除，清除率可达到100％。

验证例2：

验证不同护理液对蛋白的降解效果：

1、3N护理液对蛋白的降解：

在生理盐水条件下，3N护理液在电泳条件下，可以产生次氯酸，对蛋白进行降解。为了使检测结果直观可见，把人工泪液中溶菌酶的理论浓度由1.9mg/mL提高到3mg/mL。

主要设备：3N角膜接触镜电泳除蛋白灭菌仪；

电泳设备：Bio-Rad Mini；

主要试剂：

⑴、蛋白：溶菌酶，索莱宝(货号：L8120)，分子量为14KDa； 0.9％NaCl配制，3mg/mL；取3微升上样，蛋白上样量为9μg；

⑵、百拓配置的生理盐水；溶菌酶配制为0.6mg/mL，加2毫升电泳30分钟后，取15微升上样；蛋白上样量为9μg；

⑶、3N专用清洁液(0.9％NaCl溶液)，溶菌酶配制为0.6mg/mL，加2毫升电泳30分钟后，取15微升上样。蛋白上样量为9μg；

⑷、蛋白分子量标准：Thermo Fisher，货号：26619。

⑸、SDS-PAGE电泳缓冲液：上海生工，货号：C520001-0500。

⑹、SDS-PAGE蛋白电泳上样缓冲液：上海生工：货号： C508320-0001。

⑺、SDS-PAGE染色液：上海生工，货号：C900300-0100。

⑻、SDS-PAGE脱色液：上海生工，货号：C900299-0300。

⑼、SDS-PAGE凝胶：上海生工，货号：C661102-0001。

①溶菌酶：0.9％NaCl配制，3mg/mL；取3微升上样，蛋白上样量为9μg；

②溶菌酶：0.9％NaCl配制，3mg/mL，生理盐水浸泡30分钟跑胶；蛋白上样量为9μg；

③生理盐水配制0.6mg/mL溶菌酶，加2毫升电泳30分钟后，取 15微升上样；蛋白上样量为9μg；

④3N专用清洁液(0.9％NaCl溶液)配制溶菌酶为0.6mg/mL，加 2毫升电泳30分钟后，取15微升上样。蛋白上样量为9μg；

⑤蛋白分子量标准。

实验结果：如图3所示，为12％SDS-PAGE检测3N护理液对溶菌酶的降解情况得到的电镜图，从图中可以发现0.9％NaCl配制的溶菌酶和3N专用清洁液(0.9％NaCl溶液)均降解了蛋白，未见蛋白条带。

2、市售其它护理液对蛋白的降解：

主要试剂：A护理液：某品牌30分钟除蛋白组合液；

B护理液：某2小时除蛋白双氧水。

⑴、蛋白：溶菌酶，索莱宝(货号：L8120)，分子量为14KDa；

⑵、A护理液的样品处理：溶菌酶配制为0.6mg/mL，加2毫升浸泡30分钟后，取15微升上样；蛋白上样量为9μg；

B护理液的样品处理：溶菌酶配制为0.6mg/mL，加2毫升浸泡2小时后，取15微升上样；蛋白上样量为9μg；

⑶、蛋白分子量标准：Thermo Fisher，货号：26619。

⑷、SDS-PAGE电泳缓冲液：上海生工，货号：C520001-0500。

⑸、SDS-PAGE蛋白电泳上样缓冲液：上海生工：货号： C508320-0001。

⑹、SDS-PAGE染色液：上海生工，货号：C900300-0100。

⑺、SDS-PAGE脱色液：上海生工，货号：C900299-0300。

⑻、SDS-PAGE凝胶：上海生工，货号：C661103-0001。

①A护理液：溶菌酶配制为0.6mg/mL，加2毫升浸泡30分钟后，取15微升上样；蛋白上样量为9μg；

②B护理液：溶菌酶配制为0.6mg/mL，加2毫升浸泡2小时后，取15微升上样；蛋白上样量为9μg；

③B护理液配制0.6mg/mL溶菌酶，取15微升立即上样；蛋白上样量为9μg；

④蛋白分子量标准。

实验结果：如图4所示，为15％SDS-PAGE检测市场商用硬性角膜接触镜除蛋白液对溶菌酶的降解情况得到的电镜图，可见，A护理液溶菌酶配制为0.6mg/mL，浸泡处理30分钟后，蛋白大多被降解，仅剩微弱的条带；B护理液浸泡处理2小时后，蛋白条带和对照相比，几乎未见降解。

综上，对比3N护理液和其他商用硬性角膜接触镜除蛋白液对溶菌酶的降解情况，可以发现护理液或者说是用于除蛋白的电解质溶液对最终蛋白的降解情况是至关重要的，且利用3N护理液除蛋白的效果相较于其他护理液的效果确实更好。

验证例3：

验证利用本发明所述隐形眼镜清洗器除蛋白后镜片上的蛋白清除情况：

为了方便观察蛋白在镜片上的残留情况，用绿色荧光蛋白对3N角膜接触镜电泳除蛋白灭菌仪的电泳清除效果进行了检测。

主要设备：

3N角膜接触镜电泳除蛋白灭菌仪；

隐形眼镜镜片：爱博诺德货号：DS200114030/DS200114028；

主要试剂：

绿色荧光蛋(Green fluorescent protein，GFP，GenBank:AAA27721.1)，来源于维多利亚水母(Aequorea victoria)，大肠杆菌重组表达，全长238个氨基酸，分子量27kDa。

电泳液为上海生工的SDS-PAGE 10X Tris-Glycine电泳缓冲液，货号： C520001-0500。

样品处理：取0.5mg/mL的GFP 20μL，置于镜片上，相当于镜片上的蛋白含量为10μg。25℃避光放置48小时，使蛋白充分吸附到镜片上。然后用3N角膜接触镜电泳除蛋白灭菌仪进行电泳，时间为10分钟。

设置两组添加蛋白的镜片，即将蛋白加到镜片上，25℃吸附48小时后紫外灯下观察，镜片可见强烈绿色荧光，如图5所示，图中左右两边的镜片相同，用以之后进行对比实验。

将图5中左边的镜片用3N角膜接触镜电泳除蛋白灭菌仪配合3N护理液(电泳液)进行电泳，将图5中右边的镜片置于3N护理液中浸泡，紫外灯下比较荧光情况，得到图6，图6中的镜片与图5中的对应，左边镜片电泳10分钟后，GFP蛋白绿色荧光消失，右边镜片浸泡10分钟后，仍然有很强的荧光，因此可以说明3N角膜接触镜电泳除蛋白灭菌仪在该体系下能通过电泳清除镜片上的绿色荧光蛋白。

验证例4：

验证本发明所述隐形眼镜清洗器对细菌的灭杀效果：

使用本发明所述隐形眼镜清洗器的电泳解离除蛋白功能配合 0.9％NaCl溶液，电泳解离3分钟后的液体进行杀菌检测，其中对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌，以及铜绿假单胞菌的杀菌率达到99.999％，对白色念珠菌的杀菌率达到99.99％。

说明本发明所述隐形眼镜清洗器的电泳解离技术配合电解质溶液可以起到杀菌消毒作用，进一步避免人眼遭受细菌感染的风险。

验证例5：

验证本发明所述隐形眼镜清洗器对细菌的灭杀效果：

将含卡氏棘阿米巴(ATCC 30868 Acanthamoeba castellanii)包囊和滋养体PBS分别用角膜接触镜电泳除蛋白灭菌仪(隐形眼镜清洗器)、标准工作浓度消毒液，以及普通生理盐水处理，收集混合液，将收集的混合液通过碘液染色法、铁苏木素染色法等形态学观察判断虫体存活率并应用 ATCC medium 712培养基进行培养腹腔接种小鼠，分别计算棘阿米巴滋养体和包囊在角膜接触镜电泳除蛋白灭菌仪、标准工作浓度消毒液，以及普通生理盐水等处理后的存活率，与形态学观察结果比较验证；最后试验重复3次，评价角膜接触镜电泳除蛋白灭菌仪与标准消毒剂(具腐蚀性，不能应用常规接触角膜用具消毒)、生理盐水(作为阴性对照)对棘阿米巴的杀灭作用。

首选，对ATCC标准株卡氏棘阿米巴进行分子生物学鉴定，验证本株阿米巴原虫的品系。

实验步骤：

准备物品：5ml一次性空针，无菌细菌培养瓶，15ml离心管，ATCC 培养基712，铁苏木素相关染色液，玻片。

复苏：

(1)无菌操作台紫外线消毒20min，水浴箱温度调至28℃；

(2)取出棘阿米巴冻存管，在水浴箱中迅速融化；

(3)用空针吸取融化的阿米巴混悬液，加入离心管中，另取一空针吸取2mlATCC培养基712加入冻存管中，吹打洗净残留的阿米巴，移入离心管；

(4)500rpm离心7分钟；

(5)离心管中加入4ml培养基，吹打细胞成混悬液，均分两培养瓶中，每瓶培养基加至5ml，旋紧瓶盖；

(6)两培养瓶在28℃平缓摇动5min，使聚集的包囊均匀散开；

(7)28℃水平孵育培养(可用无菌手套包裹培养瓶，胶布封口，防止污染)；

(8)3-5天换液，滋养体长满后传代。

换液或者传代：

(1)吸管或者空针轻轻吹打，是铁逼的少量滋养体悬浮(若仅换液，可省略此步骤)；

(2)混悬液移入离心管中，500rpm离心7分钟；

(3)加入新的培养基吹打成混悬液，移入培养瓶中。

体外观察不同处理对卡式棘阿米巴的影响：

(1)对棘阿米巴进行三种不同处理，并进行铁苏木素染色：

将培养瓶中的棘阿米巴分别进行角膜接触镜电泳除蛋白灭菌仪(实验组)、标准工作浓度消毒液(对照组)、普通生理盐水(阴性对照)处理，观察棘阿米巴存活率。将处理后的棘阿米巴用生理盐水涂片法进行铁苏木素染色，观察视野下棘阿米巴滋养体的活动性变化。

(2)铁苏木素染色法

①0.5％苏林素液、4％及2％铁明矾液和肖氏固定液，均按常规配制。

②固定将包囊加入肖氏固定液水浴40℃固定5分钟或室温20～30 分，离心(1500rpm)5分钟后，去上清液。

③加入2％碘酒作用30分钟，以除去汞，离心去上清液。

④加入70％酒精静置1小时或过夜，除去碘化汞，离心去上清液，加水静置10分，再离心去上清液。

⑤媒染加入4％铁明矾液，水浴40℃媒染5分或室温30分，离心去上清液，加水洗3次。

⑥染色离心去上清液后，加入0.5％苏木素染液水浴40℃染色，染色时间5～15分钟，离心去上清液，加水洗3次。

⑦分色离心去上清后，加入2％铁明矾液进行分色，边分色边在显微镜下观察包囊退色情况，直至包囊内部结构清晰为止，一般需要3～5 分钟，加水洗3次。

⑧离心去上清液后,加水浸泡1小时(最好过夜)，以去掉分色剂，离心上清液。

⑨脱水逐步加入50～95％的酒精和纯酒精，进行脱水，每级脱水 10分钟，离心去上清液。

⑩透明加入纯酒精和冬青油(或二甲苯)各半的混合液10份，离心去上清液，加入纯冬青油或二甲苯液5份，离心去上清液。

封片加入几滴冬青油或二甲苯液(视沉淀物多少而定)拌匀，用小吸管吸1/2滴包囊悬液滴在载玻片上与1滴中性树胶拌匀加盖玻片，自然晾干即可。

体内观察不同处理对卡式棘阿米巴的影响：

将不同处理下的棘阿米巴培养液50mL，以PBS洗涤3次，用PBS 调节悬浮液至5ulPBS内含1×105个棘阿米巴滋养体。选取SPF级6周龄雌性BALB/c小鼠，腹腔注射小鼠后，分别计算不同处理组下棘阿米巴滋养体和包囊的存活率。若实验结果证实角膜接触镜电泳除蛋白灭菌仪对棘阿米巴具有杀灭和抑制作用，该实验拟推广到动物模型兔，在兔角膜进一步开展相关实验。

本发明所述的隐形眼镜清洗器通过电泳解离实现除蛋白目的，其将生物医学中蛋白电泳原理与电解技术结合，区别于常规的电泳和电解技术，独创性在于：泪蛋白在弱碱性条件下，带电荷，在电场中，带电荷的泪蛋白被电泳探针吸附，结合实施例和验证例1-3可以发现，该技术可达到近乎100除蛋白的效果，自主研发的特定ph值的NaCl清洁液，具有电泳和电解双重能效，电泳吸附带电荷的蛋白，电解过程产生适量浓度的ClO- 可以分解顽固性沉积蛋白，达到近乎100％深度清洁蛋白和99.9999％灭菌效果。

本发明采用电泳配合电解离的技术方案除蛋白，从原理上论证清洗过程和清洗结果，从而证明其可有效除蛋白，且根据此原理在实验室验证清洗效果，也获得了除蛋白效果100％的实验结果，如此高清洁度的清洗方法可以保护用户规避人眼遭受细菌感染的风险。

本发明利用电泳技术将镜片上的泪蛋白自镜片上脱离下来，并配合电解技术水解泪蛋白中的肽键(蛋白质在酸性或碱性条件下发生不可逆水解)，蛋白质水解后形成易溶于水的小分子，从而彻底清除泪蛋白分子，起到杀菌消毒作用。

本发明所述的3N角膜接触镜电泳除蛋白灭菌仪运用的是3N科技自主研究全球独创的电泳解离除蛋白原理，工作机制是通过接触按键控制电路开关，在清洗仓镜片清洗槽中加入含Nacl的溶液后探针接收电压差，实现电泳解离，从而对角膜接触镜除蛋白杀菌消毒工作。所述的电泳解离除蛋白技术是由生物电泳技术和电解Nacl技术叠加而成，电泳(Electrophoresis)是指带电荷的粒子或分子在电场中移动的现象称为电泳。大分子的蛋白质，多肽，病毒粒子，甚至细胞或小分子的氨基酸，核苷等在电场中都可作定向泳动。在3N角膜接触镜还原仪作用下，泪蛋白带电荷，在清洗仓内探针场强作用下向着电极位置移动，从而达到清洁角膜接触镜的功效。

综上所述，本发明公开的一种电泳解离除蛋白灭菌方法，相比现有技术中配合护理液搓洗、浸泡镜片的方法，本发明所述的除蛋白灭菌方法延长了镜片使用寿命，且在技术原理的支撑下清洗的效果可通过实验室检测结果将其量化，清洁度更高。

在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，本领域人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例进行接合和组合。

尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改和变型。