一种微乳凝胶面膜
阅读说明：本技术 一种微乳凝胶面膜 (Microemulsion gel mask ) 是由 董玲 于 2021-11-02 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种微乳凝胶面膜,先以将山茶油、维生素E琥珀酸酯、失水山梨醇单油酸酯、PEG-40氢化蓖麻油形成CO/VES微乳,然后用CO/VES微乳分别溶胀透明质酸、海藻酸钠和卡波姆980,接着将尿囊素、黑枸杞提取物、燕麦提取物、甘油、竹叶黄酮,植物提取物加入到CO/VES微乳中,最后混合,并添加三乙醇胺搅拌均匀即得微乳凝胶面膜；所述的植物提取物由厚朴、透骨草、木芙蓉、肉桂提取得到；黑枸杞提取物由酿酒酵母发酵提取；燕麦提取物由黄伞真菌发酵提取；所制备的微乳凝胶面膜具有补水保湿、经皮吸收效果好、抗衰老抗皱、抗黑色素能力强、稳定性高、抗菌率高、抗菌谱广、无助表面活性剂、不添加化学防腐剂、表面活性剂含量低,安全性好。(The invention discloses a microemulsion gel mask, which is prepared by forming CO/VES microemulsion by camellia oil, vitamin E succinate, sorbitan monooleate and PEG-40 hydrogenated castor oil, then respectively swelling hyaluronic acid, sodium alginate and carbomer 980 by using the CO/VES microemulsion, then adding allantoin, lycium ruthenicum extract, oat extract, glycerol and bamboo leaf flavone into the CO/VES microemulsion, finally mixing, adding triethanolamine and uniformly stirring to obtain the microemulsion gel mask; the plant extract is extracted from cortex Magnolia officinalis, herba Speranskiae Tuberculatae, flos Hibisci Mutabilis, and cortex Cinnamomi; the Lycium ruthenicum Murr extract is prepared by fermenting and extracting Saccharomyces cerevisiae; the oat extract is prepared by fermenting and extracting Pholiota adiposa fungus; the prepared micro-emulsion gel mask has the advantages of moisturizing, good percutaneous absorption effect, anti-aging, anti-wrinkle, strong anti-melanin capability, high stability, high antibacterial rate, wide antibacterial spectrum, no cosurfactant, no chemical preservative, low surfactant content and good safety.)
技术领域
本发明涉及乳化领域，特别是涉及一种微乳凝胶面膜。
背景技术
面膜凭借其便捷和快速改变肤质的特性，成为个人护理化妆品的“快消品”。其中，睡眠面膜为免洗型，使用更为方便，市售产品基本是以水和醇为溶剂载入多种水溶性活性成分，但是醇的长期使用会造成皮肤刺激，同时醇-水溶剂还限制了脂溶性美容活性成分载入，通过添加大量的表面活性剂和助表面活性剂制备成微乳来改善这一缺陷。而大量表面活性剂和助表面活性剂的使用又会引起皮肤粘膜刺激等安全问题。因此，而解决相容性差和安全缺陷普遍采用的方法：一是使用生物相容的表面活性剂、助表面活性剂和醇提高微乳的安全性；二是不断优化处方配比，通过表面活性剂、助表面活性剂和中低链醇的筛选和复配提高微乳区域，在满足载药量的基础上尽可能的降低表面活性剂、助表面活性剂和醇的使用量，但是效果并不显著。
此外，面膜中广泛使用的防腐剂-尼泊金酯类、甲基异噻唑啉酮类等化学防腐剂对皮肤也有一定的刺激性，而许多植物提取物具有非常出色的抑菌活性，有成为化妆品防腐剂的潜在可能性。但就目前而言，植物提取物作为化妆品防腐剂其防腐效力较化学防腐剂差，容易导致产品污染。因此，开发安全温和、防腐效力高、价格低的天然防腐体系来完全或部分替代化学防腐剂具有非常重要的实际意义。
发明内容
针对上述情况，本发明之目的在于提供一种微乳凝胶面膜，所开发的微乳凝胶面膜不使用助表面活性剂和化学防腐剂、安全温和、防腐效力高、稳定性好、各成分相容性好，具有补水保湿、美白、抗衰老的功效。
其解决的技术方案是：
一种微乳凝胶面膜，由以下步骤制备：
S1，以山茶油为脂溶性成分溶剂，添加维生素E琥珀酸酯，并与亲油性失水山梨醇单油酸酯表面活性剂、亲水性表面活性剂PEG-40氢化蓖麻油复配和去离子水在55-65℃下搅拌，通过山茶油中含羟基基团的油酸、亚油酸、亚麻酸与水分子以氢键作用结合，形成微乳，通过维生素E琥珀酸酯扩大山茶油微乳区域，得纳米尺寸的CO/VES微乳；
S2，分别将CO/VES微乳添加至保湿成分透明质酸、保湿成分海藻酸钠，凝胶剂卡波姆中，溶胀，记作A液、B液和C液；
S3，用CO/VES微乳尿囊素、黑枸杞提取物、燕麦提取物、甘油、竹叶黄酮、由厚朴、透骨草、木芙蓉、肉桂提取得到的植物提取物于38-42℃下加热增溶，竹叶黄酮与厚朴、木芙蓉叶、透骨草、肉桂通过作用菌体不同的生长周期协同抑菌，得D液；
S4，将A、B、C加入D液中，再加入三乙醇胺，用玻璃棒轻轻搅拌均匀，中和卡波姆980上的羧基，形成高分子稳定结构，得微乳凝胶面膜。
进一步的，所述的山茶油∶维生素E琥珀酸酯∶失水山梨醇单油酸酯∶PEG-40氢化蓖麻油∶去离子水的质量体积比为：2.3-2.5g∶0.35-0.45g∶0.62-0.84g∶3.51-3.98g∶30-50mL。
进一步的，所述的步骤S2-S4中CO/VES微乳∶透明质酸∶海藻酸钠∶卡波姆980∶尿囊素∶黑枸杞提取物∶燕麦提取物∶甘油∶竹叶黄酮∶植物提取物∶三乙醇胺的比例为：40-60份∶2-4份∶0.8-1.2份∶1.8-2.4份∶0.8-1.2份∶4-6份∶3-5份∶4-5份∶0.4-0.8份∶1.5-2.5份∶1.2-1.8份。
进一步的，所述的黑枸杞提取物由以下步骤制备：取黑枸杞于60℃下烘干，粉碎，过20目筛，得黑枸杞干粉；取黑枸杞干粉15g，加入300mL水，灭菌后接入2％的酿酒酵母，于37℃发酵48h后，将发酵液高温灭菌，10000r/min离心获得上清液，然后浓缩，干燥，得黑枸杞提取物。
进一步的，所述的燕麦提取物由以下步骤制备：取燕麦于60℃下烘干，粉碎，过20目筛，得燕麦干粉，取燕麦干粉15g，加入300mL水，灭菌后接入2％的黄伞真菌，于pH＝5，28℃条件下发酵48h，高温灭菌，然后在发酵液中加入1％的α-淀粉酶，接着升温至80℃，反应0.5h，采用sevaeg法去蛋白，冲洗次数为2次，然后加入60％的乙醇醇沉两次，收集沉淀，得燕麦提取物；所述的sevaeg法中试剂中sevage试剂由氯仿与正丁醇按4∶1的体积比组成，sevage试剂的添加量为发酵液总体积的50％。
进一步的，所述的植物提取物的提取方法为：将厚朴4g、透骨草10g、木芙蓉叶8g、肉桂4g洗净，50℃下干燥，然后粉碎过40目筛，加入到78％的乙醇溶液，67℃下回流3h，除去滤渣，15000r/min离心，收集上清液，减压浓缩，得天然提取物。
山茶油营养丰富，含脂肪酸(不饱和脂肪酸93％，其中油酸82％，亚油酸11％)、山茶甙、茶多酚、皂甙、鞣质,及富含黄酮类物质和角鲨烯，抗疲劳、抗低温应激、抗脂质氧化、抗辐射、抗菌、杀菌、抗皮肤过敏反应；其含有的角鲨烯极易被皮肤吸收，增强皮肤抵抗力，山茶油具有滋润及保养作用，主要在于保持皮肤水分并滋润营养肌肤，使皮肤恢复自然弹性，消除及延缓皱纹出现，减缓皮肤老化速度，抗击紫外线，对阳光晒伤有缓和的功能，不致于灼伤皮肤。
竹叶黄酮的主要功效成分为碳苷黄酮，4个特征性碳苷分别为:荭草苷、异荭草苷、牡荆苷和异牡荆苷；竹叶黄酮风味平和，带有竹子的清香，且具有抗氧化、美白、清除自由基、抗辐射、抑菌抗炎等多种生物学功效。
通过对黑枸杞进行酒酿酵母发酵，所得到的黑枸杞提取物中含有大量的枸杞多糖和氨基酸，具有清除自由基、抗氧化、延缓衰老等功效。
通过黄伞真菌发酵燕麦所得的燕麦提取物中含有大量的β-葡聚糖，燕麦经黄伞发酵后细胞毒性大大降低，透皮吸收好，抗衰老、抑制黑色素的功效提升。
天然抑菌提取物主要是以植物中多酚、黄酮、皂苷、生物碱、有机酸等物质来达到抑菌效果，单一的植物防腐体系有抑菌效果较差、抑菌谱窄等许多不足，因此通过将具有抑菌活性的不同植物提取物进行适当的复配，得到抑菌效果好，并且均有广谱抑菌活，本申请从抑菌植物:紫苏、紫花地丁、木芙蓉叶、荷叶、桑叶、地榆、蒲公英、厚朴、堇菜、透骨草、肉桂以及石莒蒲中反复试验复配中发现以厚朴、木芙蓉叶、透骨草、肉桂为配比与竹叶黄酮一起，能够实现其有效成分的互相协同，通过作用菌体不同的生长周期达到协同作用，参与制备成微乳凝胶面膜具有较广的抗菌范围，抑菌能力强，有效期长。
由于以上技术方案的采用，本发明与现有技术相比具有如下优点：
1.本发明以山茶油为脂溶性成分溶剂，添加维生素E琥珀酸酯，并与亲油性失水山梨醇单油酸酯表面活性剂和亲水性表面活性剂PEG-40氢化蓖麻油复配和去离子水制备成微乳，通过维生素E琥珀酸酯扩大山茶油微乳区域，提高载油量，无需助表面活性剂，同时降低了表面活性剂的用量，并促进微乳的形成。将所得微乳将黑枸杞提取物、燕麦提取物、植物提取物、竹叶黄酮溶解，并与透明质酸、海藻酸钠和卡波姆980的微乳液混合，添加三乙醇胺，制成微乳凝胶面膜，微乳颗粒达纳米级，微乳凝胶面膜由于黑枸杞多糖、燕麦β-葡聚糖、山茶油中油酸、亚油酸、亚麻酸等不饱和脂肪酸上的羟基通过少量表面活性剂与水氢键结合形成的微乳，无需助表面活性剂，更加稳定，微乳凝胶面膜呈弱酸性，脂溶性活性成分溶解率高，经皮吸收率高，因而抗菌、抗衰老、抗氧化、抗黑色素能力强；
2.本发明的微乳凝胶面膜具有良好的补水保湿作用，经皮吸收效果好，抗菌、抗衰老抗皱、抗黑色素能力强，感官和理化指标符合QB/T2872-2007的标准；微乳凝胶面膜稳定性高，抗菌率高，抗菌谱广，具有较长的使用时间；无助表面活性剂的使用，不添加化学防腐剂，表面活性剂含量低，无皮肤刺激性，安全性好。
具体实施方式
实施例1
一种微乳凝胶面膜，由以下步骤制备：
S1，将山茶油2.3g、维生素E琥珀酸酯0.35g、失水山梨醇单油酸酯0.62g、PEG-40氢化蓖麻油3.51g，旋涡混合后，加热到55℃，然后在600r/min搅拌下逐滴滴加30mL去离子水，直至澄清透明的微乳形成，得CO/VES微乳；
S2，用CO/VES微乳40份分别溶胀透明质酸2份、海藻酸钠0.8份和1.8份卡波姆980，其溶液分别记作A液、B液和C液；
S3，将尿囊素0.8份、黑枸杞提取物4份、燕麦提取物3份、甘油4份、竹叶黄酮0.4份，植物提取物1.5份加入到CO/VES微乳中，在38℃加热溶解，其溶液记作D液；
S4，将A、B、C加入D液中，再加入三乙醇胺1.2份，用玻璃棒轻轻搅拌均匀即得微乳凝胶面膜。
所述的黑枸杞提取物由以下步骤制备：取黑枸杞于60℃下烘干，粉碎，过20目筛，得黑枸杞干粉；取黑枸杞干粉15g，加入300mL水，灭菌后接入2％的酿酒酵母，于37℃发酵48h后，将发酵液高温灭菌，10000r/min离心获得上清液，然后浓缩，干燥，得黑枸杞提取物；所述的酿酒酵母由食品酿造研究所提供。
所述的燕麦提取物由以下步骤制备：取燕麦于60℃下烘干，粉碎，过20目筛，得燕麦干粉，取燕麦干粉15g，加入300mL水，灭菌后接入1％的黄伞真菌，于pH＝5，28℃条件下发酵48h，高温灭菌，然后在发酵液中加入1％的α-淀粉酶，接着升温至80℃，反应0.5h，采用sevaeg法去蛋白，冲洗次数为2次，然后加入60％的乙醇醇沉两次，收集沉淀，得燕麦提取物；所述的sevaeg法中试剂中sevage试剂由氯仿与正丁醇按4∶1的体积比组成，sevage试剂的添加量为发酵液总体积的50％；所述的黄伞真菌由北京市植物资源研究开发重点实验室提供。
所述的所述的植物提取物的提取方法为：将厚朴4g、透骨草10g、木芙蓉叶8g、肉桂4g洗净，50℃下干燥，然后粉碎过40目筛，加入到78％的乙醇溶液，67℃下回流3h，除去滤渣，15000r/min离心，收集上清液，减压浓缩，得天然提取物。
实施例2
一种微乳凝胶面膜，由以下步骤制备：
S1，将山茶油2.4g、维生素E琥珀酸酯0.40g、失水山梨醇单油酸酯0.73g、PEG-40氢化蓖麻油3.74g，旋涡混合后，加热到60℃，然后在700r/min搅拌下逐滴滴加40mL去离子水，直至澄清透明的微乳形成，得CO/VES微乳；
S2，用CO/VES微乳50份分别溶胀透明质酸3份、海藻酸钠1.0份和2.1份卡波姆980，其溶液分别记作A液、B液和C液；
S3，将尿囊素1.0份、黑枸杞提取物5份、燕麦提取物4份、甘油4.5份、竹叶黄酮0.6份，植物提取物2.0份加入到CO/VES微乳中，在40℃加热溶解，其溶液记作D液；
S4，将A、B、C加入D液中，再加入三乙醇胺1.5份，用玻璃棒轻轻搅拌均匀即得微乳凝胶面膜。
所述的黑枸杞提取物由以下步骤制备：取黑枸杞于60℃下烘干，粉碎，过20目筛，得黑枸杞干粉；取黑枸杞干粉15g，加入300mL水，灭菌后接入2％的酿酒酵母，于37℃发酵48h后，将发酵液高温灭菌，10000r/min离心获得上清液，然后浓缩，干燥，得黑枸杞提取物；所述的酿酒酵母由食品酿造研究所提供。
所述的燕麦提取物由以下步骤制备：取燕麦于60℃下烘干，粉碎，过20目筛，得燕麦干粉，取燕麦干粉15g，加入300mL水，灭菌后接入1％的黄伞真菌，于pH＝5，28℃条件下发酵48h，高温灭菌，然后在发酵液中加入1％的α-淀粉酶，接着升温至80℃，反应0.5h，采用sevaeg法去蛋白，冲洗次数为2次，然后加入60％的乙醇醇沉两次，收集沉淀，得燕麦提取物；所述的sevaeg法中试剂中sevage试剂由氯仿与正丁醇按4∶1的体积比组成，sevage试剂的添加量为发酵液总体积的50％；所述的黄伞真菌由北京市植物资源研究开发重点实验室提供。
所述的所述的植物提取物的提取方法为：将厚朴4g、透骨草10g、木芙蓉叶8g、肉桂4g洗净，50℃下干燥，然后粉碎过40目筛，加入到78％的乙醇溶液，67℃下回流3h，除去滤渣，15000r/min离心，收集上清液，减压浓缩，得天然提取物。
实施例3
一种微乳凝胶面膜，由以下步骤制备：
S1，将山茶油2.5g、维生素E琥珀酸酯0.45g、失水山梨醇单油酸酯0.84g、PEG-40氢化蓖麻油3.98g，旋涡混合后，加热到65℃，然后在800r/min搅拌下逐滴滴加50mL去离子水，直至澄清透明的微乳形成，得CO/VES微乳；
S2，用CO/VES微乳60份分别溶胀透明质酸4份、海藻酸钠1.2份和2.4份卡波姆980，其溶液分别记作A液、B液和C液；
S3，将尿囊素1.2份、黑枸杞提取物6份、燕麦提取物5份、甘油5份、竹叶黄酮0.8份，植物提取物2.5份加入到CO/VES微乳中，在42℃加热溶解，其溶液记作D液；
S4，将A、B、C加入D液中，再加入三乙醇胺1.8份，用玻璃棒轻轻搅拌均匀即得微乳凝胶面膜。
所述的黑枸杞提取物由以下步骤制备：取黑枸杞于60℃下烘干，粉碎，过20目筛，得黑枸杞干粉；取黑枸杞干粉15g，加入300mL水，灭菌后接入2％的酿酒酵母，于37℃发酵48h后，将发酵液高温灭菌，10000r/min离心获得上清液，然后浓缩，干燥，得黑枸杞提取物；所述的酿酒酵母由食品酿造研究所提供。
所述的燕麦提取物由以下步骤制备：取燕麦于60℃下烘干，粉碎，过20目筛，得燕麦干粉，取燕麦干粉15g，加入300mL水，灭菌后接入1％的黄伞真菌，于pH＝5，28℃条件下发酵48h，高温灭菌，然后在发酵液中加入1％的α-淀粉酶，接着升温至80℃，反应0.5h，采用sevaeg法去蛋白，冲洗次数为2次，然后加入60％的乙醇醇沉两次，收集沉淀，得燕麦提取物；所述的sevaeg法中试剂中sevage试剂由氯仿与正丁醇按4∶1的体积比组成，sevage试剂的添加量为发酵液总体积的50％；所述的黄伞真菌由北京市植物资源研究开发重点实验室提供。
所述的所述的植物提取物的提取方法为：将厚朴4g、透骨草10g、木芙蓉叶8g、肉桂4g洗净，50℃下干燥，然后粉碎过40目筛，加入到78％的乙醇溶液，67℃下回流3h，除去滤渣，15000r/min离心，收集上清液，减压浓缩，得天然提取物。
对比例1
将实施例2中，微乳凝胶面膜中黑枸杞提取物的成分去掉，其余不变，得微乳凝胶面膜。
对比例2
将实施例2中，微乳凝胶面膜中燕麦提取物的成分去掉，其余不变，得微乳凝胶面膜。
对比例3
将实施例2中，微乳凝胶面膜中竹叶黄酮的成分去掉，其余不变，得微乳凝胶面膜。
试验例1
实施例2以及对比例1-3制备的微乳凝胶面膜表征：
(1)外观性状：用目测法观察微乳凝胶面膜的外观，考察其澄明度和均匀度；(2)pH的测定：在25℃条件下，通过pH计测定微乳凝胶面膜的pH值，重复测量三次，记录结果；(3)粒径的测定：采用马尔文激光粒度仪在温度为25℃，散射角为90°的条件下，测定样品的粒径、多分散指数(PDI)，样品稀释50倍平行测量三次，最终结果以平均值±标准偏差表示；(4)黏度的测定：在25℃条件下，采用NDJ-5S型数显黏度计测定样品的黏度，黏度值为3次测量的平均值，结果表示为平均值±标准偏差；(5)微乳凝胶面膜的稳定性考察：依据QB/T2872-2007的标准对样品进行耐热、耐寒性考察，比较温度变化前后微乳凝胶面膜各理化指标有无明显变化；结果如表1：
从表1结果来看，相比于对比例1-3，实施例2所制微乳凝胶面膜外观都为半透明凝胶状，外观均匀，pH为5.6±0.1，酸碱度较好，黏度适中，为25.96±0.12Pa·s，且香气符合规定香型，放置数月无物质析出，外观无变化，耐热和耐寒实验表明，分别在40±1℃和-5±1℃下保持24h，恢复至室温后，外观和pH、黏度均无明显性变化，而对比例1-3则相对不稳定，说明所制微乳凝胶面膜的感官和理化指标符合QB/T2872-2007的标准。
试验例2
皮肤安全性测试：
用皮肤重复性开放型涂抹试验进行皮肤安全性测试：选30名合格志愿者为实验对象，以前臂屈侧作为受试部位，面积3cm×3cm,受试部位应保持干燥，避免接触其他外用制剂，将实施例2制备的微乳凝胶面膜约0.050+0.005g/次、每天2次均匀地涂于受试部位，连续7天，同时观察皮肤反应，在此过程中如出现3分或以上的皮肤反应时，应根据具体情况决定是否继续试验，皮肤反应重复性开放型涂抹试验皮肤反应评判标准参照《化妆品安全技术规范》(2015年版)，0分为无反应，大于0分为不良反应，结果如表2：
如表2所示，空白对照组经过测试，30例受试者未发生任何不良反应；实施例2制备的微乳凝胶面膜受试者中，30例受试者同样未发生任何不良反应，根据《化妆品安全技术规范》(2015年版)，说明本发明制备的微乳凝胶面膜对人体皮肤具有较高安全性。
试验例3
补水保湿效果评价：
选择25-40岁健康无过敏史的30名女性志愿者。左右前臂内侧4cm×4cm的区域做为受试部位，试验前受试者用清水清洁受试部位并且在测试前稳定30min，测试温度为(20-25)℃，相对湿度为50％-60％。在左右前臂内侧分别涂沫(30±1)mg/cm2的实施例2制备的微乳凝胶面膜、对比例1-3、或市售含有透明质酸、海藻酸钠成分的睡眠面膜，用智能水分测试仪测定各部位在0min、20min、40min、60min，120min的水分百分含量，每次测试重复五次，求得平均值，结果如表3：
由表3可见，涂抹实施例2、对比例1-3制备的微乳凝胶面膜、市售睡眠面膜
后在20min左右肌肤水分含量达到最高，之后略有下降，150min后平均肌肤水分含量分别是32.1％、30.7％、29.5％、30.9％、26.4％，均高于未涂抹时的水平；说明微乳凝胶面膜的保湿效果优于市售睡眠面膜，这可能是由于微乳载体的应用，微乳本身含较多的油使其具有较好的保湿效果。
试验例4
抗衰抗皱测试：
选择150名志愿者，分为5组，分别采用实施例1和对比例1-3中的微乳凝胶面膜以及市售抗衰老抗皱睡眠面膜，测试部位为两侧脸颊和眼角，每天使用1次，晚上洁面后使用；在使用面膜前1天，使用后7d、14d、21d、28d，使用MicroSkinII多功能皮肤镜图像分析系统测定皮肤平均粗糙度和皱纹平均深度数值变，测定环境：测试环境温度：22±3℃，湿度：50±5％，并且进行实时动态监测化，计算平均值，结果见表4：
从表4可见，对比例1-3制备的微乳凝胶面膜与市售面膜的抗衰抗皱效果相当，而实施例2制备的微乳凝胶面膜对皮肤粗糙和皮肤皱纹深度值改善效果最好。
试验例5
美白功效评价：
选择志愿者150名，年龄25-40岁，分为实施例2组、对比例1组、对比例2组、对比例3组、市售睡眠面膜组(具有美白功效的市售睡眠面膜)四组，每天使用1次，晚上洁面后使用；在使用面膜前1天，使用后7d、14d、21d、28d使用Lab色度系统光谱光度计测量皮肤颜色的变化：连续测试3次，取L*值平均值，同时使用MEXAMETERMX18皮肤色素仪测皮肤黑红色素含量，连续测试3次，取平均值，测试环境温度：22±3℃，湿度：50±5％，并且进行实时动态监测，结果见表5：
由表5可见，受试对象在使用实施例2与试验前有明显差异，随着产品使用时间的延长呈现降低的趋势，相对于对比例1-3及市售睡眠面膜皮肤的黑色素含量明显减少；皮肤色度L*值值越大，表示皮肤颜色越浅，使用实施例2后皮肤色度L*值有显著增加的趋势，明显大于对比例1-3及市售睡眠面膜和试验前水平，这说明实施例2制备的微乳凝胶面膜能够有效的减少皮肤黑色素，美白皮肤。
试验例6
抑菌效果测试：
试验菌株：金黄色葡萄球菌(真菌)、大肠杆菌(细菌)、白色念珠菌(细菌)、铜绿假单胞杆菌(真菌)、黑曲霉(真菌)；培养基：TSB固体培养基；SDB固体培养基；卵磷脂吐温80营养琼脂培养基、虎红培养基；
菌株的接种：各菌株活化传代培养3代后制成一定浓度的菌悬液，实施例2组以及对比例1-3制备的微乳凝胶面膜分装成30g的包装形式，加入菌悬液后，使样品含细菌的量为1×106cfu/mL或，1×106cfu/g，含真菌的量为1×104cfu/mL或1×104cfu/g，每个样品做三个平行样。
菌株检测：取样方法：称取10g，加到装有玻璃珠及90mL灭菌生理盐水的三角瓶中，充分振荡混匀，静置15min，用其上清液作为1:10的检液，后依次制成10倍稀释的浓度检液待用；分别在加入菌液后的第0d、7d、14d、21d、28d按上述取样方法进行取样检测。取上述制备的10倍稀释检液1mL加入灭菌平板中，再倒入冷却至45℃的卵磷脂吐温80营养琼脂培养基或虎红培养基适量，逆时针摇动混合均匀。每个稀释检液做三个平行的倒平板。待平板凝固后，细菌置于培养箱中37℃培养48h后计数，真菌置于培养箱中28℃培养72h后计数。
防腐体系的效能评价标准：
(1)第28天时，样品中含细菌或霉菌>103cfu/g(mL)，该样品不能通过微生物攻击的挑战性实验，表明样品的防腐体系不能有效地起到抑制微生物的作用，产品在生产、贮藏和使用中很容易受到微生物的污染；(2)第28天时，样品中含细菌在102cfu/g(mL)-103cfu/g(mL)，该样品有条件地通过挑战性实验，即当产品中蛋白质或其它动植物材料成分不是特别高，同时生产的卫生环境符合要求，包装物不易发生二次污染时，该防腐体系可以使用，否则不能；(3)第28天，样品中含细菌在10cfu/g(mL)～100cfu/g(mL)，表明该样品的防腐体系对微生物有较强的抑杀效果，通过挑战试验，产品在生产、贮藏和使用时不容易受到微生物污染；(4)从第7天起，样品中的细菌<10cfu/g(mL)，说明该样品的防腐体系对微生物有特强的抑杀作用，通过挑战试验，产品在生产、贮藏和使用时很不容易被微生物污染。
试验结果如表6：
由表6可知，相比于对比例3，实施例2以及对比例1-2制备的微乳凝胶面膜对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞杆菌、黑曲霉、白色念球菌的防腐效果较好，从第7d起，样品中的细菌及真菌均<10cfu/g(mL)，说明实施例2制备的微乳凝胶面膜能够对微生物有特强的抑杀作用，在生产、贮藏和使用时很不容易被微生物污染。
以上所述是结合具体实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明具体实施仅局限于此；对于本发明所属及相关技术领域的技术人员来说，在基于本发明技术方案思路前提下，所作的拓展以及操作方法、数据的替换，都应当落在本发明保护范围之内。
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