一种抗糖化海藻来源组合物及其制备方法和在美容产品中的应用
阅读说明：本技术 一种抗糖化海藻来源组合物及其制备方法和在美容产品中的应用 (Anti-saccharification seaweed-derived composition, preparation method thereof and application thereof in beauty products ) 是由 姜燕飞 于 2021-11-16 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种海藻来源组合物,其制备方法及用于制作抗糖化类美容产品的用途。本发明公开了一种由泡叶藻提取物和望春花提取物按照重量百分比40-60％：40-60％配制的组合物。进一步优选重量百分比为50％：50％配制的组合物。生化试验检测表明这种组合物具有协同增强的抑制蛋白质糖基化的活性,且组合物具有非常低的细胞毒性。本发明也公开了使用这种海藻来源组合物作为抗糖化成分用于制作美容产品,如面霜,的用途。(The invention discloses a seaweed-derived composition, a preparation method thereof and application of the seaweed-derived composition in preparing anti-saccharification cosmetic products. The invention discloses a tea prepared from a leaf-soaking algae extract and a hope spring flower extract according to the weight percentage of 40-60%: 40-60% of the formulated composition. Further preferably, the weight percentage is 50%: 50% of the formulated composition. The biochemical test detection shows that the composition has the activity of inhibiting protein glycosylation and has very low cytotoxicity. The use of such seaweed-derived compositions as anti-glycation ingredients for the manufacture of cosmetic products, such as creams, is also disclosed.)
技术领域
本发明涉及一种海藻来源抗糖化组合物，其制备方法，以及用来制作美容产品的用途，属于化妆品领域。
背景技术
1984年Brownlee首先报道了体内生物大分子存在晚期糖基化终末产物(AGEs)的现象。AGEs是指生物大分子(核酸、蛋白质和脂类)通过非酶催化机制而生成地一类复杂糖基化产物。非酶催化的糖基化反应主要指还原性单糖分子的末端游离羰基与核酸、蛋白质和脂类大分子中的游离氨基之间发生的一系列化学反应(图1)。研究发现，体内的AGEs产物可以分为三大类：非交联型无荧光产物、交联无荧光产物、非交联荧光产物。目前已经从人类血液以及组织中鉴定出20多种的AGEs产物。
AGEs是潜在的威胁人类健康的有毒分子。例如体内蛋白质分子的糖基化可能会造成蛋白质分子二级结构的改变，从而影响蛋白质的功能，直至导致细胞损伤。另外，胶原蛋白是皮肤中重要的组织蛋白，随着年龄的增长及高糖饮食习惯，胶原蛋白逐渐糖化，并造成皮肤变硬、变黑，最终导致皮肤衰老且影响美观。所以，如果能够有效抑制体内生物大分子的糖基化水平，有助于改善一些疾病状态，且延缓衰老，保持皮肤的年轻状态。研究发现，部分具有抗氧化活性的天然产物能够有效抑制AGEs的形成，即抗糖化(Anti-glycation)活性，同时这些天然产物的细胞毒性又比较小。文献报道，能够抑制AGEs形成的天然产物包括多酚、多糖、萜类化合物、维生素、生物碱和多肽，他们通过不同的机制来抑制AGEs的形成。
天然产物是抗糖化活性产物的重要来源。项目组前期筛选获得部分海藻提取物与植物提取物具有明显的抗糖化活性，不同的天然产物通过不同的机制来对抗AGEs的形成。对于不同的提取物进行组合，通过不同AGEs抑制机制的组合，力求寻找具有协同抗糖化活性海藻提取物组合物。
海藻是生长在海中的藻类，研究发现海藻具有很多药用价值，如抗病毒、抗肿瘤、保护心脏等。海藻也被作为一种重要的美容成分用来制作各类美容产品。海藻类美容产品，刺激性小，安全性高，备受广大消费者的欢迎。泡叶藻(ASCOPHYLLUM NODOSUM),是海边岩石上生长的一种褐藻。泡叶藻中含有丰富的海藻多糖、甘露醇、酚类、藻朊酸盐、褐藻多酚、海带多糖、岩藻多糖、细胞分裂素及赤霉素等，尤其是褐藻多酚具有抗病毒、抗肿瘤等药理。望春花(MAGNOLIA BIONDII)，别名辛夷，是玉兰科望春花属落叶灌木或小乔木，其药用部位主要是花蕾和树皮。望春花药性平和，味辛，能散风寒，通肺经，理窍，镇痛等功效。望春花主要含有柳叶木兰碱、木兰箭毒素、武当木兰碱、木兰碱、E-对羟基桂皮酸乙酯、望春花黄酮醇苷、辛夷脂素、木兰脂素等。迄今为止尚未见有关泡叶藻提取物和望春花提取物，单一组分或者组合物在抑制AGEs形成方面的药效活性的报道。
发明内容
本发明要解决的一个技术问题是，提供一种由两种提取物，即泡叶藻(ASCOPHYLLUM NODOSUM)提取物和望春花(MAGNOLIA BIONDII)提取物混合而成的组合物，及其制备方法。
本发明要解决的又一个技术问题是，泡叶藻提取物、望春花提取物具有一定的抗糖化活性。相对于单一成分，二者的混合物具有协同提高的抗糖化活性。另外泡叶藻提取物、望春花提取物和二者的混合物均具有非常低的细胞毒性。
本发明要解决的又一个技术问题是，采用上述制备海藻提取物组合物作为美容成分制备美容产品，如面霜，的应用。海藻提取物组合物展现出的良好的抗糖化活性有助于改善皮肤的老化状态。
为了解决本发明的技术问题，本发明采取如下的技术方案:
本发明第一方面涉及一种由两种提取物即泡叶藻提取物和望春花提取物，按照一定比例混合而成的组合物，其制备方法为：
组合物由泡叶藻提取物和望春花提取物按照一定的重量比进行混合，组合物中泡叶藻提取物含量与望春花提取物类似，二者的重量百分比为，泡叶藻提取物：望春花提取物＝40-60％：40-60％，称量后进行混匀。
进一步优选组合物的制备方法如下：泡叶藻提取物：望春花提取物＝50％：50％，的重量百分比进行称量与混匀。
本发明第二方面涉及上述海藻来源的组合物在制备抗糖化产品的用途；本发明通过海藻提取物组合物对白蛋白的糖基化的影响，证明相比较于单一提取物，组合物具有协同增强的抗糖化活性，组合物适合作为抗糖化成分用于制备相应美容产品。
本发明第三方面涉及上述海藻来源的组合物在制备具有抗糖化活性美容产品，如面霜，的用途。
附图说明
图1：晚期糖基化终末产物(AGEs)的形成机理。
图2：不同组分的抗糖化活性研究。四种检测组分为氨基胍、泡叶藻提取物、望春花提取物和提取物优选组合物。
图3：四种组分的抗糖化活性IC50。四种检测组分为氨基胍、泡叶藻提取物、望春花提取物和提取物优选组合物。
具体实施方式
下面的实施例及活性实验用来进一步说明本发明，实施例仅用于说明，不能限制本发明的范围。
实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道购买得到的常规产品。
下面实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为市售产品。
实施例1：海藻来源提取物组合物的制备方法
泡叶藻(ASCOPHYLLUM NODOSUM)提取物，棕黄色粉末，易溶于水，购自西安新合生物科技有限公司。望春花(MAGNOLIA BIONDII)提取物，棕色粉末，易溶于水，购自陕西新天域生物科技有限公司。组合物的制备方法：组合物由泡叶藻提取物与望春花提取物按照相似的重量比组成，二者的重量百分比为，泡叶藻提取物：望春花提取物＝40-60％：40-60％，称量后混匀。
进一步，优选组合物的制备方法如下：泡叶藻提取物：望春花提取物＝50％：50％的重量百分比进行称量与混匀。具体操作中，分别称量5g的泡叶藻提取物和望春花提取物，将二者混合且拌匀，即为海藻来源的提取物组合物。
实施例2：海藻来源提取物组合物的抗糖化活性
实验方法：按照Vinson和Howard在1996年提出的研究方法，检测泡叶藻提取物、望春花提取物和实验例1中制备的优选组合物对AGEs形成的抑制活性。将0.5mL的浓度10,20,50,100,200μg/mL的样品添加到含有0.5mL 20mg/mL BSA、0.5mL 0.5M葡萄糖和1.0mL 1％叠氮化钠的0.1M PBS缓冲液，pH＝7.4。37℃孵育7天，采用荧光光谱仪(Perkin-Elmer,MA,USA)，设置检测条件为Ex＝330nm,Em＝410nm,测量AGEs形成的荧光强度(FI)。对照组中不加抑制物。抗糖化参考化合物采用氨基胍进行比较。
通过下式计算对AGEs形成的抑制活性：
抑制活性(％)＝[1–(FI样品–FI样品空白)/(FI对照–FI对照空白)]×100％
根据不同浓度组分的抑制率来计算IC50，计算采用软件GraphPad Prism8.0进行。
结果如下：
表1，不同组分的抗糖化活性研究
实验结果如表1和图2所示。各个浓度的泡叶藻提取物或望春花提取物均具有一定的抗糖化活性，但是较之阳性化合物氨基胍的抗糖化活性还是偏弱。例如在200μg/mL时，泡叶藻提取物和望春花提取物的抗糖化活性分别为62％和65％。阳性化合物氨基胍的抗糖抑制活性为83％(与文献报道数据类似)，但是泡叶藻提取物和望春花提取物按照50％：50％的重量百分比混合得到的优选组合物具有明显提高的抗糖化抑制活性。如图3所示，采用GraphPadPrism8.0计算上述四种组分对于AGEs形成抑制活性IC50分别为，58.74μg/mL-氨基胍，95.23μg/mL-泡叶藻提取物，83.34μg/mL望春花提取物，39.55μg/mL-提取物组合物。
实施例3：海藻来源提取物组合物的抗糖化活性的协同效应证实
实验方法：协同指数采用金正均q值法进行判定，q值由以下的公式求得：
q＝PA+B/(PA+PB-PA×PB)。式中PA、PB和PA+B分别为A组、B组和两联用组治疗率。
q＜1说明两提取物合用后产生拮抗作用；q＞1，说明两提取物合用后产生协同作用，q＝1说明两提取物合用后产生相加作用。
按照上述的协同指数计算方法，我们分别测定单剂量的泡叶藻提取物、望春花提取物、二者重量百分比50％：50％混合的优选组合，具体浓度见表2。按照实施例2相同的方法进行AGEs形成的抑制活性检测。
结果如下：
表2，两种组分的抗糖化活性研究
经过测定，实验结果如表2所示。在三组选定的浓度下，优选组合物均表现出两种提取物的协同抗糖化活性，在抗糖化活性方面获得显著的增强。本项目前期我们筛选了一些具有抗糖化活性的中药提取物，两两组合筛选具有明显增强效果的组合物。我们推测由于不同的提取物富含不同的抗糖化天然产物组分，如多酚或者多糖。如果两种提取物采用不同的抗糖抑制机制，其组合具有互相增强效果，最终达到协同抗糖化活性。相较于单一提取物，组合物，尤其是优选组合物，具有协同的显著增强的抗糖化效果，可以用来作为抗糖化成分。
实施例4：海藻来源提取物组合物的细胞毒性
实验方法：化合物细胞毒性的检测采用CCK-8试剂盒进行。具体操作为，分别接种HepG2细胞、MCF-7细胞、A549细胞，到96孔板中，每孔约5000细胞/200μL培养液，细胞过夜培养。向每孔中加入不同浓度的待测化合物，继续培养48小时。向每孔中加入10μL的CCK-8试剂，混匀后继续培养1-4小时，观察培养液颜色发生明显变化，采用酶标仪进行检测，测定450nm吸光值。紫杉醇为阳性对照物。
结果如下：
结果如表3，细胞实验检测发现，泡叶藻提取物、望春花提取物和二者的优选组合物没有明显的细胞毒性。这与他们来源于植物提取物有关。结合实施例2和实施例3，二者的组合物尤其是优选组合物适合用来作为抗糖化成分制备美容产品。
表3，不同组分对于哺乳动物细胞的细胞毒性
实施例5：海藻来源提取物组合物作为美容成分制备抗糖化面霜
一种抗糖化面霜，其配方和重量份数如下：
文中出现的化妆品成分名称均为INCI(International Nomenclature ofCosmetic Ingredients)，即国际化妆品原料命名所规定的名称。
油相：矿油3.0份、角鲨烷3.0份、辛酸/癸酸甘油三酯2.0份、聚氧乙烯鲸蜡基硬脂基双醚0.4份、聚二甲基硅氧烷4.0份、甘油硬脂酸/PEG-100硬脂酸4.0份；
水相：抗糖化组合物(实施例1中优选组合物)10.0份、甘油3.0份、丙二醇5.0份、尿囊素0.1份卡波姆0.15份、去离子水65.03份、香精0.02份、羟苯甲酯0.15份、羟苯丙酯0.15份。
制备方法，包括以下步骤：按照上述配方，称量各个组分，其中每个质量份为1g。将油相组分混合，搅拌加热至80℃；将水相组分(除香精外)混匀，搅拌加热至80℃；将油相缓慢加入水相，边加入边搅拌，保持水相温度恒定80℃，继续搅拌5分钟；降温至45℃后加入香精，继续搅拌混匀，冷却至25℃，灌装。
显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。
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