一种利用C-SiO2吸附材料加速ELISA检测过程的方法
阅读说明：本技术 一种利用C-SiO2吸附材料加速ELISA检测过程的方法 (By using C-SiO2Method for accelerating ELISA detection process by using adsorbing material ) 是由 周骏懿 陈栩诗 王俊森 陈浩 王秉 于 2021-06-22 设计创作，主要内容包括：本发明涉及免疫学及免疫检测技术领域,公开了一种利用C-SiO-2吸附材料加速ELISA检测过程的方法,具体为利用C-SiO-2吸附材料的良好吸附性和强机械性能,分散、吸附抗原、抗体分子,提高抗原(或抗体)与固相载体的吸附速率,增加抗原、抗体分子的接触概率,减少抗原(或抗体)与固相载体的包被时间和抗原与对应抗体的反应时间,起到加速ELISA技术的作用。这种方法操作简单,不影响反应结果,且能加快ELISA技术检测的速率,为科研实验和检验测试提供便利。(The invention relates to the technical field of immunology and immunodetection, and discloses a method for utilizing C-SiO 2 A method for accelerating ELISA detection process by using adsorbing material, specifically C-SiO 2 The adsorbing material has good adsorbability and strong mechanical property, disperses and adsorbs antigen and antibody molecules, improves the adsorption rate of the antigen (or antibody) and a solid phase carrier, increases the contact probability of the antigen and antibody molecules, reduces the coating time of the antigen (or antibody) and the solid phase carrier and the reaction time of the antigen and the corresponding antibody, and plays a role in accelerating the ELISA technology. The method is simple to operate, does not affect the reaction result, can accelerate the detection speed of the ELISA technology, and provides convenience for scientific research experiments and inspection tests.)
技术领域
本发明涉及免疫学及免疫检测
技术领域
，更具体的说是一种通过C-SiO2吸附材料良好吸附性和高机械强度的特性，来加快ELISA（酶联免疫吸附剂测定）检测过程的方法。
背景技术
近几十年来，随着生物医学技术的飞速发展，推动了免疫检测技术的发展。在现代免疫学中，将“免疫”定义为：机体对与自身成分相同的“自己”和与自身成分不同的“异己”识别、产生应答反应的过程。其中，能够刺激机体免疫系统引起免疫应答反应的物质就是抗原。抗体是免疫应答的产物，针对不同的抗原产生的抗体不同。抗体只与特定的抗原结合，后形成聚凝，这一过程称为特异性的抗原抗体反应，是免疫检测技术的基础。
酶联免疫检测技术（enzyme linked immunosorbent assay, ELISA）又称为酶联免疫吸附剂测定，是目前在生物医学领域广泛应用的一种抗原或抗体定性定量的检测技术。酶的催化效率很高，可以极大的放大反应结果，从而使测定方法有很高的灵敏性。ELISA既可以用作抗原检测，又可以用作抗体检测。ELISA检测的准备过程为将可溶性的抗原或抗体结合到固相载体上，利用抗原和抗体的特异性结合进行免疫反应。但是抗原的包被和反应时间过长，使得整体测试时间较长，因而科研和检测人员不能及时得到鉴定结果。
发明内容
本发明提供了一种利用C-SiO2吸附材料加速ELISA检测过程的方法，本发明将含碳物质和四氯化硅制备成C-SiO2吸附材料。通过将C-SiO2吸附材料混合进抗原、抗体稀释液，利用C-SiO2吸附材料的良好吸附性和强机械性能，分散、吸附抗原、抗体分子，提高抗原（或抗体）与固相载体的吸附速率，增加抗原、抗体分子的接触概率，减少抗原（或抗体）与固相载体的包被时间和抗原与对应抗体的反应时间，起到加速ELISA技术的作用。
本发明的具体技术方案为：一种利用C-SiO2吸附材料加速ELISA检测过程的方法，包括如下步骤：
步骤1：将含碳物质经球磨机粉碎干燥后过筛，放入容器中并加入去离子水超声分散，混合均匀后室温放置过夜，使其充分浸渍。
粉碎干燥并充分浸渍后可使含碳物质和四氯化硅充分反应，提高原料利用率。
步骤2：充分浸渍后，向容器中逐滴滴加四氯化硅，同时不断搅拌；将所得混合物继续搅拌并室温放置，使其充分反应；取出后抽滤多次，并用蒸馏水冲洗滤渣至无氯离子残留。
步骤3：将步骤2所得滤渣在马弗炉中保持200-300℃活化0.5-3h，取出后充分干燥，得到C-SiO2吸附材料。
步骤4：称取步骤3制备得到的C-SiO2吸附材料两份，分别放置于两个容器中，分别向容器中加入抗原、抗体对应缓冲液，振荡使其充分溶解，得到含C-SiO2吸附材料的稀释液。
步骤5：在配制好ELISA所需的抗原、抗体溶液中，分别加入对应的、步骤4所得的含C-SiO2吸附材料的稀释液，振荡使其充分溶解。
步骤6：ELISA过程中，向酶标板中加入抗原或抗体与C-SiO2的混合物在1-5℃下包被1-3h；除去孔中液体，并用洗涤液洗涤多次；加入封闭液后放置于35-40℃烘箱中孵育0.5-1.5h；除去孔中液体，并用洗涤液洗涤多次；滴加对应抗体或抗原C-SiO2的混合物后置于35-40℃烘箱中20-40min；再次除去孔中液体，并用洗涤液洗涤多次；每孔加入TMB显色剂遮光反应5-15min后滴加终止液，10-20min内在450nm波长处测定各孔的OD值。
作为优选，步骤1中：所述含碳物质为木屑和/或花生壳。
作为优选，步骤1中：所用球磨机的球料比为1:12-16，使用的三种研磨珠型号为2mm、6 mm、10 mm，数量比为6:2-3:1，球磨机的设置频率为15-20 Hz；球磨后粉碎干燥后过十目筛。
作为优选，步骤1中：所述含碳物质和去离子水的固液比为（1-2g）：（10-20mL)；超声时间为10-30min。
作为优选，步骤2中：含碳物质和滴加的四氯化硅的固液比为（4-5g）：（3-4mL）；控制加料时间在1-2h内。
作为优选，步骤2中：室温放置时间为2-4h，抽滤次数为3-5次。
作为优选，步骤4中：每份C-SiO2吸附材料为0.8-1.2g，每个容器中加入抗原或抗体对应缓冲液80-120mL。
作为优选，步骤5中，抗原、抗体溶液与步骤4所得的含C-SiO2吸附材料的稀释液混合比分别为1：1-2.5。
与现有技术对比，本发明的有益效果是：
（1）本发明利用C-SiO2吸附材料的良好吸附性和强机械性能，分散、吸附抗原、抗体分子，提高抗原（或抗体）与固相载体的吸附速率，增加抗原、抗体分子的接触概率，减少抗原（或抗体）与固相载体的包被时间和抗原与对应抗体的反应时间，起到加速ELISA检测过程的作用。
（2）本发明在制备C-SiO2吸附材料时所使用的含碳物质为农业废弃物，直接焚烧会产生大量一氧化碳、二氧化碳等污染空气。废弃物再利用可以使废弃物资得到有效利用。
（3）本发明制备的C-SiO2吸附材料可在完全干燥后，密封长期保存，为长期实验、检测提供便利。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的描述。
实施例1
步骤1：将20g含碳物质（木屑）经球磨机粉碎干燥后过十目筛，放入烧杯中并加入200mL去离子水超声分散20min。混合均匀后室温放置过夜，使其充分浸渍。其中，所用球磨机的球料比为1:14，使用的三种研磨珠型号为2 mm、6 mm、10 mm，数量比为6:2.5:1，球磨机的设置频率为18 Hz。
步骤2：充分浸渍后，向烧杯中逐滴滴加15mL四氯化硅，同时不断搅拌，控制加料时间在1.5h。将上述产物混合物继续搅拌并室温放置3h，使其充分反应。取出后抽滤4次，并用蒸馏水冲洗滤渣至无氯离子残留。
步骤3：将步骤3所得滤渣在马弗炉中保持250℃活化2h，取出后充分干燥，得到C-SiO2吸附材料。
步骤4：称取步骤3制备得到的C-SiO2吸附材料两份，每份各1g，分别放置于2个200mL烧杯中，分别向烧杯中加入抗原、抗体对应缓冲液100mL，振荡使其充分溶解，得到含C-SiO2吸附材料的稀释液。
步骤5：在配制好ELISA实验所需的抗原、抗体溶液中，分别加入步骤4配制好的含C-SiO2吸附材料的稀释液，抗原、抗体溶液与步骤4配制好的含C-SiO2吸附材料的稀释液混合比为1：1，振荡使其充分溶解。
步骤6：ELISA实验过程中，向酶标板中加入抗原（或抗体）C-SiO2混合物4℃包被2h。除去孔中液体，并用洗涤液洗涤三次。加入封闭液后放置于37℃烘箱中孵育1h。除去孔中液体，并用洗涤液洗涤三次。滴加对应抗体（或抗原）C-SiO2混合物放置于37℃烘箱中30min。再次除去孔中液体，并用洗涤液洗涤五次。每孔加入TMB显色剂遮光反应10min后滴加终止液，15min内在450nm波长处测定各孔的OD值。
实施例2
步骤1：将20g含碳物质（花生壳）经球磨机粉碎干燥后过十目筛，放入烧杯中并加入200mL去离子水超声分散20min。混合均匀后室温放置过夜，使其充分浸渍。其中，所用球磨机的球料比为1:12，使用的三种研磨珠型号为2 mm、6 mm、10 mm，数量比为6:2:1，球磨机的设置频率为15 Hz。
步骤2：充分浸渍后，向烧杯中逐滴滴加15mL四氯化硅，同时不断搅拌，控制加料时间在1h。将上述产物混合物继续搅拌并室温放置3h，使其充分反应。取出后抽滤3次，并用蒸馏水冲洗滤渣至无氯离子残留。
步骤3：将步骤3所得滤渣在马弗炉中保持200℃活化2h，取出后充分干燥，得到C-SiO2吸附材料。
步骤4：称取步骤3制备得到的C-SiO2吸附材料两份，每份各1g，分别放置于2个200mL烧杯中，分别向烧杯中加入抗原、抗体对应缓冲液100mL，振荡使其充分溶解，得到含C-SiO2吸附材料的稀释液。
步骤5：在配制好ELISA实验所需的抗原、抗体溶液中，分别加入步骤4配制好的含C-SiO2吸附材料的稀释液，抗原、抗体溶液与步骤4配制好的含C-SiO2吸附材料的稀释液混合比为1：1.5，振荡使其充分溶解。
步骤6：ELISA实验过程中，向酶标板中加入抗原（或抗体）C-SiO2混合物4℃包被2h。除去孔中液体，并用洗涤液洗涤三次。加入封闭液后放置于37℃烘箱中孵育1h。除去孔中液体，并用洗涤液洗涤三次。滴加对应抗体（或抗原）C-SiO2混合物放置于37℃烘箱中30min。再次除去孔中液体，并用洗涤液洗涤五次。每孔加入TMB显色剂遮光反应10min后滴加终止液，15min内在450nm波长处测定各孔的OD值。
实施例3
步骤1：将20g含碳物质（木屑）经球磨机粉碎干燥后过十目筛，放入烧杯中并加入200mL去离子水超声分散20min。混合均匀后室温放置过夜，使其充分浸渍。其中，所用球磨机的球料比为1:16，使用的三种研磨珠型号为2 mm、6 mm、10 mm，数量比为6:3:1，球磨机的设置频率为20 Hz。
步骤2：充分浸渍后，向烧杯中逐滴滴加15mL四氯化硅，同时不断搅拌，控制加料时间在2h。将上述产物混合物继续搅拌并室温放置3h，使其充分反应。取出后抽滤5次，并用蒸馏水冲洗滤渣至无氯离子残留。
步骤3：将步骤3所得滤渣在马弗炉中保持300℃活化2h，取出后充分干燥，得到C-SiO2吸附材料。
步骤4：称取步骤3制备得到的C-SiO2吸附材料两份，每份各1g，分别放置于2个200mL烧杯中，分别向烧杯中加入抗原、抗体对应缓冲液100mL，振荡使其充分溶解，得到含C-SiO2吸附材料的稀释液。
步骤5：在配制好ELISA实验所需的抗原、抗体溶液中，分别加入步骤4配制好的含C-SiO2吸附材料的稀释液，抗原、抗体溶液与步骤4配制好的含C-SiO2吸附材料的稀释液混合比为1：2，振荡使其充分溶解。
步骤6：ELISA实验过程中，向酶标板中加入抗原（或抗体）C-SiO2混合物4℃包被2h。除去孔中液体，并用洗涤液洗涤三次。加入封闭液后放置于37℃烘箱中孵育1h。除去孔中液体，并用洗涤液洗涤三次。滴加对应抗体（或抗原）C-SiO2混合物放置于37℃烘箱中30min。再次除去孔中液体，并用洗涤液洗涤五次。每孔加入TMB显色剂遮光反应10min后滴加终止液，15min内在450nm波长处测定各孔的OD值。
实施例4
步骤1：将20g含碳物质（花生壳）经球磨机粉碎干燥后过十目筛，放入烧杯中并加入200mL去离子水超声分散20min。混合均匀后室温放置过夜，使其充分浸渍。其中，所用球磨机的球料比为1: 16，使用的三种研磨珠型号为2 mm、6 mm、10 mm，数量比为6: 3:1，球磨机的设置频率为15 Hz。
步骤2：充分浸渍后，向烧杯中逐滴滴加15mL四氯化硅，同时不断搅拌，控制加料时间在1h。将上述产物混合物继续搅拌并室温放置3h，使其充分反应。取出后抽滤3次，并用蒸馏水冲洗滤渣至无氯离子残留。
步骤3：将步骤3所得滤渣在马弗炉中保持260℃活化2h，取出后充分干燥，得到C-SiO2吸附材料。
步骤4：称取步骤3制备得到的C-SiO2吸附材料两份，每份各1g，分别放置于2个200mL烧杯中，分别向烧杯中加入抗原、抗体对应缓冲液100mL，振荡使其充分溶解，得到含C-SiO2吸附材料的稀释液。
步骤5：在配制好ELISA实验所需的抗原、抗体溶液中，分别加入步骤4配制好的含C-SiO2吸附材料的稀释液，抗原、抗体溶液与步骤4配制好的含C-SiO2吸附材料的稀释液混合比为1：2.5，振荡使其充分溶解。
步骤6：ELISA实验过程中，向酶标板中加入抗原（或抗体）C-SiO2混合物4℃包被2h。除去孔中液体，并用洗涤液洗涤三次。加入封闭液后放置于37℃烘箱中孵育1h。除去孔中液体，并用洗涤液洗涤三次。滴加对应抗体（或抗原）C-SiO2混合物放置于37℃烘箱中30min。再次除去孔中液体，并用洗涤液洗涤五次。每孔加入TMB显色剂遮光反应10min后滴加终止液，15min内在450nm波长处测定各孔的OD值。
本发明中所用原料、设备，若无特别说明，均为本领域的常用原料、设备；本发明中所用方法，若无特别说明，均为本领域的常规方法。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何限制，凡是根据本发明技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、变更以及等效变换，均仍属于本发明技术方案的保护范围。