一种复配杀菌组合物及其应用
阅读说明：本技术 一种复配杀菌组合物及其应用 (Compound bactericidal composition and application thereof ) 是由 卢晓红 高毓晗 李世东 孙漫红 于 2020-12-31 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一种复配杀菌组合物及其应用,所述复配杀菌组合物包含粉红螺旋聚孢霉孢子和咯菌腈,其中,所述粉红螺旋聚孢霉孢子粉与所述咯菌腈的重量比为90～99.98：0.02～10。本发明所提供的复配杀菌组合物适用于防治齐整小核菌引起的作物病害,诸如辣椒白绢病,可作保护地土壤处理；防治效果较单剂有明显提升,用量相对较少,可降低用药成本,并降低对土壤环境的污染。(The invention relates to a compound bactericidal composition and application thereof, wherein the compound bactericidal composition comprises spirosporium roseum spores and fludioxonil, wherein the weight ratio of the spirosporium roseum spore powder to the fludioxonil is 90-99.98: 0.02 to 10. The compound bactericidal composition provided by the invention is suitable for preventing and treating crop diseases caused by sclerotinia rolfsii, such as southern blight of pepper, and can be used for soil treatment of protected areas; compared with single agent, the control effect is obviously improved, the dosage is relatively less, the medication cost can be reduced, and the pollution to the soil environment is reduced.)
技术领域
本发明涉及一种复配杀菌组合物及其应用，具体涉及一种含有包含粉红螺旋聚孢霉孢子和咯菌腈的复配杀菌组合物及其应用。
背景技术
植物土传病害的化学防治用药量大，尤其保护地超剂量使用导致残留严重超标，病原菌产生抗药性。生物防治对环境友好，生防菌与化学农药混配的菌药复合剂在病害防治中可提高生物防治的防效并能减少化学农药施用量，有望避免植物病原菌产生抗药性，取得稳定而持久的防治效果。所以化学与生物协同防治植物病害受到越来越多的关注，其对食品安全、环境保护和农业可持续发展有益，菌药复合剂的开发越来越受国家政策支持。
辣椒白绢病作为一种世界范围内的土传病害，在中国南方辣椒生产区发病尤为严重，影响辣椒产量和产值。辣椒白绢病的病原菌为齐整小核菌(Sclerotium rolfsii)，其寄主范围广，能侵染约100多个科500多种植物，主要包括辣椒、番茄、茄子、花生等作物。辣椒白绢病菌在田间多见无性世代，不产孢，但能形成平滑而有光泽的菌核。菌核在土中或混在种子中越冬，适应性强且存活时间长。残留于土壤、病残体中的菌核与菌丝体是主要的初侵染源，主要侵染植物茎基部以及近地面的根，引起皮层腐烂，水分及养料输送中断，导致植株枯萎而死。目前因病原菌寄主范围广，缺少有效的抗病品种，农业技术推广不足等因素，给该病害防治带存在许多难点。
粉红螺旋聚孢霉：属于子囊菌门(Ascomycota)，肉座菌目(Hypocreales)，生赤壳科(Bionectriaceae),螺旋聚孢霉属(Clonostachys)，是具有高生防价值的有益真菌。其在土壤和环境中分布广泛，可寄生多种植物病原菌，具有繁殖快、适应性强、抗菌谱广的特点，还具有促进植物生长，诱导植物抗病和促进种子萌发的作用。它通过重寄生，产生抗性物质，竞争作用，产生降解酶类以及诱导植物抗性等一系列机制来防治多种植物病原真菌。
咯菌腈，英文通用名称：fludioxonil，化学名称：4-(2,2-二氟-1,3-苯并间二氧-4-基)吡咯-3-腈；分子式：C12H7N2O2F2；它是吡咯假单胞菌(Pseudomonas pyrrocinia)产生的次生代谢物硝吡咯菌素(pyrrolnitrin)的类似物，但比天然产物硝吡咯菌素抗光解，是一种高效、广谱、低毒、低残留、非内吸性的苯基吡咯类仿生杀菌剂。咯菌腈对多种植物真菌病害具有防效好、持效期长、使用安全等特点。咯菌腈对灰霉病菌的杀菌机制主要是干扰并破坏灰霉病菌的生物氧化和生物合成过程；咯菌腈的抑菌机制则是通过抑制葡萄糖磷酰化有关的转运来抑制菌丝生长，最终导致病菌死亡。咯菌腈对子囊菌、担子菌、半知菌等许多病原菌引起的种传和土传病害有非常好的防效，如甜瓜枯萎病，散黑穗病，腥黑穗病，纹枯病，茎枯病等。咯菌腈广泛应用于多种作物，如棉花、小麦、花生、大豆、水稻、甜瓜等。
发明内容
本发明所要解决的上述中的技术问题是，提供一种高效、安全、低毒且持效期长，有利于病害综合治理的含有粉红螺旋聚孢霉孢子和咯菌腈的复配杀菌组合物。
具体而言，所述复配杀菌组合物，包含粉红螺旋聚孢霉孢子粉和咯菌腈。
所述粉红螺旋聚孢霉孢子粉与所述咯菌腈的重量比为90～99.98:0.02～10；
其中，所述粉红螺旋聚孢霉孢子粉中孢子含量为1×108～8×108CFU/g。
本领域可知，多数化学杀菌剂在用量大时，才能达到一个较优的杀菌效果；本发明的发明人在前期研发过程中，发现粉红螺旋聚孢霉孢子具有优异的杀菌效果。但，若在将粉红螺旋聚孢霉孢子与一般的化学杀菌剂复配时，相融性非常差；而本发明提供的复配杀菌组合物以粉红螺旋聚孢霉孢子为基础，复配特定的化学杀菌剂。两种组合物在特定比例的组合下，不仅具有良好的相容性，且能大大提高杀菌效果。两者的复配的杀菌效果都显著大于粉红螺旋聚孢霉孢子和咯菌腈的杀菌效果；此外，本发明中化学杀菌剂的使用量非常小，在实际的田间使用中，可有效避免化学试剂对环境的影响。
优选的，所述重量比为99～99.98:0.02～1；所采用的化学杀菌剂的用量不超过1％，所达到杀菌效果更优异，且杀菌剂量使用更好。更优选的，当所述粉红螺旋聚孢霉孢子粉与所述咯菌腈的重量比为90.93～99.98:0.02～0.07；尤其是，所述重量比为90.93～99.94:0.06～0.07时，两者复配的互补效果最优。
其中，所述粉红螺旋聚孢霉孢子粉中孢子含量优选为2.5×108～3.5×108CFU/g。
本发明提供的粉红螺旋聚孢霉孢子粉通过本领域常规方式经液体发酵、吸附、干燥获得。
优选的，所述复配杀菌组合物的剂型为可湿性粉剂。本发明提供的粉红螺旋聚孢霉孢子粉与咯菌腈以可湿性粉剂直接混合；粉状不仅在制作中操作简单；在后续田间应用操作也简便；此外，本发明提供的可湿性粉剂在长时间存储过程中，依然能保持较优的杀菌效果。
其中，所述咯菌腈可湿性粉剂中原药(咯菌腈)含量为45％～55％。
优选的，所述可湿性粉剂还包括辅料；所述辅料不限于分散剂、稳定剂、润湿剂、载体等。
本发明提供的含有粉红螺旋聚孢霉孢子和咯菌腈的复配杀菌组合物可广泛应用于防治由齐整小核菌引起的辣椒白绢病等土传病害。
其中，所述复配杀菌组合物的施药方式包括叶面喷雾、拌土、灌根、种子处理。
尤其是，所述农作物土传病害为白绢病。
所述应用过程中，将所述可湿性粉剂按1：100～300的重量比稀释在水中，然后进行施药。
本发明提供的粉红螺旋聚孢霉孢子与咯菌腈复配杀菌组合物，至少具有以下有益效果：
1、所提供的复配杀菌组合物适用于防治齐整小核菌引起的作物病害，诸如辣椒白绢病，可作保护地土壤处理；
2、该复配杀菌组合物防治效果较单剂有明显提升，用量相对较少，可降低用药成本，并降低对土壤环境的污染。
3、产品具有较长的货架寿命。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
如下实施例中粉红螺旋聚孢霉孢子粉红螺旋聚孢霉发酵液发酵后、干燥等步骤获得；粉红螺旋聚孢霉(中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏登记编号CGMCC No.1037)。
实施例1
本实施例提供一种复配杀菌组合物，由质量百分比为9:1的粉红螺旋聚孢霉孢子可湿性粉剂和咯菌腈可湿性粉剂组成；
其中，所述咯菌腈可湿性粉剂中原药含量为50％；
其中，所述粉红螺旋聚孢霉孢子可湿性粉剂中孢子的含量为1×108CFU/g。
实施例2
本实施例提供一种复配杀菌组合物，与实施例1区别在于，由质量百分比为99.98:0.02的粉红螺旋聚孢霉孢子可湿性粉剂和咯菌腈可湿性粉剂组成，其中，所述粉红螺旋聚孢霉孢子可湿性粉剂中孢子的含量为3×108CFU/g。
实施例3
本实施例提供一种复配杀菌组合物，与实施例1区别在于，由质量百分比为99.93:0.07的粉红螺旋聚孢霉孢子可湿性粉剂和咯菌腈可湿性粉剂组成；其中，所述粉红螺旋聚孢霉孢子可湿性粉剂中孢子的含量为3×108CFU/g。
对比例1～2
本对比例提供一种复配杀菌组合物，与实施例1的区别仅在于，将所述“咯菌腈”替换为“醚菌酯”和“氟啶胺”。
试验例1
将粉红螺旋聚孢霉孢子、实施例1与对比例1～2所提供的复配杀菌组合物进行生物相容性测定。
(1)粉红螺旋聚孢霉孢子(HDL-1分生孢子)在含药PDB培养基中的生长情况
将100μL粉红螺旋聚孢霉HDL-1孢子悬浮液(1×106CFU/mL)加入100mL含药PDB培养基中(化学杀菌剂有效成分浓度均为100μg/mL)，于25℃条件下120r/min震荡培养7d，测定PDB中菌体干重，计算抑制率，以不含药的PDB培养基为CK对照。
抑制率＝(CK菌体干重-处理菌体干重)/CK菌体干重×100％
(2)HDL-1分生孢子在含药PDA培养基上的生长情况
含药培养基平板制作方法同上，其中咯菌腈有效浓度分别为100μg/mL和500μg/mL。将100μL粉红螺旋聚孢霉HDL-1孢子悬浮液(1×106CFU/mL)均匀涂布在含药平板上，以无药培养基为对照，于27.8℃下培养，72h后测定药剂培养基上的菌落数，计算抑菌率。
表1供试杀菌剂对HDL-1在PDB培养基中生长量的影响
表2杀菌剂在PDA培养基上对HDL-1分生孢子活性的影响
药剂名称
有效浓度(μg/mL)
菌落数(皿/个)
抑制率(％)
咯菌腈
100
123±9
-7.96
对照
—
114±4
0.00
注：表中数据为平均数±标准差。
结果表明：(表1)在含药量为100μg/mL浓度液体培养基中，化学杀菌剂对生防菌HDL-1生物量都有抑制效果，但抑制作用存在的差异较大。其中咯菌腈对生防菌HDL-1的抑制作用较小，抑制率为6.35％。生防菌HDL-1孢子在咯菌腈100μg/mL的浓度的含药培养基上可正常萌发和生长，说明咯菌腈对HDL-1分生孢子萌发和形成菌落没有抑制作用。
试验例2
将实施例2～3所提供的复配杀菌组合物、粉红螺旋聚孢霉孢子悬浮液、咯菌腈对辣椒白绢病病原菌的防效测定。
咯菌腈配成含药培养基：用无菌水将咯菌腈稀释成0.0μg/mL、200μg/mL、700μg/mL等不同浓度梯度的药液，取60μL药液加入60mL PDA培养基中，摇匀后平均倒入四个无菌培养皿中。菌核处理方法同上(从PDA平板上收集成熟菌核加入1％次氯酸钠溶液中消毒，再用无菌水冲洗三次，浸泡于HDL-1的孢子悬浮液(1×106CFU/mL)5min)，每个含药平板接10个菌核，4d后观察菌核的萌发情况。具体如下：
(1)实施例2提供的复配杀菌组合物对菌核萌发的抑制作用
(2)实施例3提供的复配杀菌组合物对菌核萌发的抑制作用
(3)0.02‰咯菌腈(200μg/mL)对菌核萌发的抑制作用
(4)0.07‰咯菌腈(700μg/mL)对菌核萌发的抑制作用
(5)粉红粘帚霉(3×108CFU/g)对菌核萌发的抑制作用
(6)未处理的菌核的萌发情况
表3：咯菌腈和粉红粘帚霉的不同配比对辣椒白绢病菌菌核萌发的影响
序号
萌发数(颗)
抑制率(％)
(1)
8
11.76
(2)
2
76.47
(3)
9
10.00
(4)
10
0.00
(5)
10
0.00
(6)
10
0.00
结果表明：(粉红粘帚霉)HDL-1菌株对菌核的萌发有抑制作用；杀菌剂对菌核萌发几乎没有抑制作用，但能抑制菌丝的生长；菌药复配组合物的应用具有协同互补作用；尤其是实施例3提供的复配杀菌组合物。
试验例3
将实施例1所提供的复配杀菌组合物进行货架期测定。
测定化学杀菌剂咯菌腈可湿性粉剂与粉红螺旋聚孢霉HDL-1孢子可湿性粉剂混配制成的菌药混剂(实施例1)的货架期。
在常温下保存，同时将不加化学杀菌剂的粉红螺旋聚孢霉孢子粉(ck)作为对照。分别在0d，15d，57d，109d，168d采用稀释涂布法测定混剂中HDL-1分生孢子的存活状况，每处理每次试验都设置四个重复，在27.8℃下培养，3d后观察并进行菌落计数法，根据活性孢子含量确定菌药混剂货架期。
表4：存储不同时间后菌药混剂中HDL-1活性分生孢子含量
结果表明：活性分生孢子含量总体随存储时间增长而减少。从109d以后菌药混剂中粉红螺旋聚孢霉活性孢子的数量开始显著下降，但168d后活性孢子数量仍然大于2×108CFU/g，且与对照差异不大。所以，菌药混剂的货架期可达6个月左右。
虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
- 上一篇：一种医用注射器针头装配设备
- 下一篇：一种植物源杀螺剂及其制备方法和应用