具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

一、将迷迭香精油用HP-β-CD进行包合得到迷迭香精油包合物，再以迷迭香精油包合物为原料，制备成迷迭香精油鼻用原位凝胶制剂，可减少迷迭香精油的刺激性，提高其溶解度和生物利用度，提高患者，尤其是儿童的顺应性。为此本发明首先制备迷迭香精油包合物。

实施例1

称HP-β-CD 12g，加纯化水8mL、迷迭香精油2mL于研钵中研磨40min，-80℃超低温冷冻24h，冷冻干燥24h，得到产物，将产物研碎后，用石油醚进行少量多次抽滤洗涤，洗去部分未包合的迷迭香精油，然后放入干燥器中干燥24h使石油醚挥发，得到迷迭香精油包合物。

实施例2

与实施例1的制备步骤相同，不同之处仅在于，HP-β-CD为14g。

实施例3

与实施例1的制备步骤相同，不同之处仅在于，HP-β-CD为16g。

实施例4

与实施例1的制备步骤相同，不同之处仅在于，HP-β-CD为18g。

实施例5

与实施例1的制备步骤相同，不同之处仅在于，HP-β-CD为20g。

迷迭香精油包合物的包合率评估

包合率的测定方法如下所示：

将2mL迷迭香精油置于圆底烧瓶中，加纯化水150mL，加热回流2h，准确读出回收的精油量并计算迷迭香精油的空白回收率，进行3次平行试验，结果取平均值，按照式(1)计算得到空白回收率，结果见下表2；

将制备的迷迭香精油包合物取2mL置于圆底烧瓶中，加纯化水150mL，加热回流2h，准确读出回收的精油量并记录，进行3次平行试验，结果取平均值，按照式(2)计算得到包合率。

表1迷迭香精油的空白回收率

由表1可知迷迭香精油的空白回收率为95％。

表2HP-β-CD和迷迭精油的投料比对迷迭香精油包合物的包合率影响

从实施例1-5可以看出，结果见表2，当HP-β-CD和迷迭精油的投料比为9g：1mL时，迷迭香精油包合物的包合率最高。

实施例6

称HP-β-CD 18g，加纯化水12mL、迷迭香精油2mL于研钵中研磨40min，-80℃超低温冷冻24h，冷冻干燥24h，得到产物，将产物研碎后，用石油醚进行少量多次抽滤洗涤，洗去部分未包合的迷迭香精油，然后放入干燥器中干燥24h使石油醚挥发，得到迷迭香精油包合物。

实施例7

与实施例6的制备步骤相同，不同之处仅在于，纯化水为9mL。

实施例8

与实施例6的制备步骤相同，不同之处仅在于，纯化水为7.2mL。

实施例9

与实施例6的制备步骤相同，不同之处仅在于，纯化水为6mL。

实施例10

与实施例6的制备步骤相同，不同之处仅在于，纯化水为5.14mL。

表3HP-β-CD和纯化水的配比对迷迭香精油包合物的包合率影响

从实施例6-10可以看出，结果见表3，HP-β-CD和纯化水的配比为2.5:1时，迷迭香精油包合物的包合率最高。

实施例11

与实施例8的制备步骤相同，不同之处仅在于，研磨时间为20min。

实施例12

与实施例8的制备步骤相同，不同之处仅在于，研磨时间60min。

实施例13

与实施例8的制备步骤相同，不同之处仅在于，研磨时间为80min。

实施例14

与实施例8的制备步骤相同，不同之处仅在于，研磨时间为100min。

表4研磨时间对迷迭香精油包合物的包合率影响

从实施例8和实施例11-14可知，结果见表4，研磨时间为40min时，迷迭香精油包合物的包合率最高。

在单因素试验基础上对迷迭香精油包合物进行正交试验设计

表5迷迭香精油包合物正交试验设计

其中，表1中A为羟丙基-β-环糊精(g)和迷迭精油(mL)的投料比，B为羟丙基-β-环糊精和纯化水的配料比，C为研磨时间(min)

迷迭香精油包合物正交试验设计结果与分析

表6正交试验与直观分析表结果

表7方差分析表

注：“*”为显著(0.01<P<0.05)，“**”为极显著(P<0.01)，P>0.05为不显著

从表6和表7可知，影响迷迭香精油包合物条件的程度依次为A＞B＞C，以HP-β-CD与迷迭香精油的投料比影响最大，是主要因素，其次为HP-β-CD与水的配比的影响。迷迭香精油最佳包合工艺条件为：A₃B₂C₁。制备的包合物中迷迭香精油含量较高，以此最佳工艺条件验证，进行3次平行试验，包合率分别为90.27％、91.06％、89.33％，平均值为90.22％，即证明迷迭香精油包合工艺条件为A₃B₂C₁时，包合率可达90.22％。在显微观察下，如图1-图3所示，HP-β-CD与迷迭香精油包合效果良好。

二、利用迷迭香精油包合物制备迷迭香精油鼻用原位凝胶，并以迷迭香精油鼻用原位凝胶的胶凝温度为考察指标。

胶凝温度的测定：

胶凝温度的测定采用倾斜法。打开水浴锅缓慢升温，取5mL凝胶溶液倒入具塞刻度试管中，然后把水银温度计缓缓插入具塞刻度试管中，恒温水浴锅加热，每升高1℃恒温10min，每20s倾斜一次具塞刻度试管，倾斜角度为45°，待凝胶不再流动时的温度即为胶凝温度，记录此时具塞刻度试管中温度计的读数，每个样品重复测量3次，取平均值。

本发明制备迷迭香精油鼻用原位凝胶，当泊洛沙姆407和泊洛沙姆188比例分别是19％和6％时，其作为空白凝胶的胶凝温度34.1℃，接近鼻腔温度，因此按此制备温敏凝胶。

磷酸盐缓冲液的制备：按照《中国药典》2020年版四部通则中记载的有关磷酸盐缓冲液的配制的内容进行制备得到。

19％泊洛沙姆407的制备：准确称取泊洛沙姆407，先放于烧杯中加磷酸盐缓冲液，缓慢搅拌溶解，5℃冰箱静置24h，使凝胶充分溶胀分散均匀，最后得到澄明的液体。泊洛沙姆188配制方法同泊洛沙姆407。

实施例15

迷迭香精油鼻用原位凝胶由以下质量百分比组分组成：3％迷迭香精油包合物、19％泊洛沙姆407、6％泊洛沙姆188、5％甘油、66.99％磷酸盐缓冲液，0.01％羟苯甲酯。

迷迭香精油鼻用原位凝胶的制备方法如下所示：

步骤1：按上述配方称取各组分；

步骤2：取HP-β-CD 20g、加入纯化水8mL、迷迭香精油2mL于在研钵中研磨20min，-80℃超低温冷冻24h，冷冻干燥24h，得到产物，将产物研碎后，用石油醚进行少量多次抽滤洗涤，洗去部分未包合的迷迭香精油，然后放入干燥器中干燥24h使石油醚挥发，得到迷迭香精油包合物。

步骤3：

将甘油和羟苯甲酯置烧杯中，加入泊洛沙姆407、泊洛沙姆188和迷迭香精油包合物，然后再加入磷酸盐缓冲液，搅拌使泊洛沙姆407、泊洛沙姆188均被润湿后，在5℃冰箱中冷藏24h，使原料混合均匀，得到迷迭香精油鼻用原位凝胶，制备的迷迭香精油鼻用原位凝胶的pH值为6。

迷迭香精油鼻用原位凝胶的胶凝温度为33.6℃。

实施例16

迷迭香精油鼻用原位凝胶由以下质量百分比组分组成：2％迷迭香精油包合物、19％泊洛沙姆407、6％泊洛沙姆188、5％甘油、67.99％磷酸盐缓冲液，0.01％羟苯甲酯。

迷迭香精油鼻用原位凝胶的制备方法如下所示：

步骤1：按上述配方称取各组分；

步骤2：取HP-β-CD 20g、加入纯化水8mL、迷迭香精油2mL于在研钵中研磨20min，-80℃超低温冷冻24h，冷冻干燥24h，得到产物，将产物研碎后，用石油醚进行少量多次抽滤洗涤，洗去部分未包合的迷迭香精油，然后放入干燥器中干燥24h使石油醚挥发，得到迷迭香精油包合物。

步骤3：

将甘油和羟苯甲酯置烧杯中，加入泊洛沙姆407、泊洛沙姆188和迷迭香精油包合物，然后再加入磷酸盐缓冲液，搅拌使泊洛沙姆407、泊洛沙姆188均被润湿后，在5℃冰箱中冷藏24h，使原料混合均匀，得到迷迭香精油鼻用原位凝胶，制备的迷迭香精油鼻用原位凝胶的pH值为6。

迷迭香精油鼻用原位凝胶的胶凝温度为35.4℃。

实施例17

迷迭香精油鼻用原位凝胶由以下质量百分比组分组成：4％迷迭香精油包合物、19％泊洛沙姆407、6％泊洛沙姆188、5％甘油、磷酸盐缓冲液为65.99％，0.01％羟苯甲酯。

迷迭香精油鼻用原位凝胶的制备方法如下所示：

步骤1：按上述配方称取各组分；

步骤2：取HP-β-CD 20g、加入纯化水8mL、迷迭香精油2mL于研钵中研磨20min，-80℃超低温冷冻24h，冷冻干燥24h，得到产物，将产物研碎后，用石油醚进行少量多次抽滤洗涤，洗去部分未包合的迷迭香精油，然后放入干燥器中干燥24h使石油醚挥发，得到迷迭香精油包合物。

步骤3：

将甘油和羟苯甲酯置烧杯中，加入泊洛沙姆407、泊洛沙姆188和迷迭香精油包合物，然后再加入磷酸盐缓冲液，搅拌使泊洛沙姆407、泊洛沙姆188均被润湿后，在5℃冰箱中冷藏24h，使原料混合均匀，得到迷迭香精油鼻用原位凝胶，制备的迷迭香精油鼻用原位凝胶的pH值为5。

迷迭香精油鼻用原位凝胶的胶凝温度为31.5℃。

实施例18

迷迭香精油鼻用原位凝胶由以下质量百分比组分组成：5％迷迭香精油包合物、19％泊洛沙姆407、6％泊洛沙姆188、5％甘油、磷酸盐缓冲液为64.99％，0.01％羟苯甲酯。

迷迭香精油鼻用原位凝胶的制备方法如下所示：

步骤1：按上述配方称取各组分；

步骤2：取HP-β-CD 20g、加入纯化水8mL、迷迭香精油2mL于研钵中研磨20min，-80℃超低温冷冻36h，冷冻干燥24h，得到产物，将产物研碎后，用石油醚进行少量多次抽滤洗涤，洗去部分未包合的迷迭香精油，然后放入干燥器中干燥24h使石油醚挥发，得到迷迭香精油包合物。

步骤3：

将甘油和羟苯甲酯置烧杯中，加入泊洛沙姆407、泊洛沙姆188和迷迭香精油包合物，然后再加入磷酸盐缓冲液，搅拌使泊洛沙姆407、泊洛沙姆188均被润湿后，在5℃冰箱中冷藏24h，使原料混合均匀，得到迷迭香精油鼻用原位凝胶，制备的迷迭香精油鼻用原位凝胶的pH值为6.5。

迷迭香精油鼻用原位凝胶的胶凝温度为30.2℃。

实施例19

迷迭香精油鼻用原位凝胶由以下质量百分比组分组成：3％迷迭香精油包合物、19％泊洛沙姆407、6％泊洛沙姆188、5％甘油、66.99％磷酸盐缓冲液，0.01％羟苯甲酯。

迷迭香精油鼻用原位凝胶的制备方法如下所示：

步骤1：按上述配方称取各组分；

步骤2：取HP-β-CD 16g，加入纯化水5.33mL、迷迭香精油2mL于在研钵中研磨60min，-60℃超低温冷冻24h，冷冻干燥30h，得到产物，将产物研碎后，用石油醚进行少量多次抽滤洗涤，洗去部分未包合的迷迭香精油，然后放入干燥器中干燥24h使石油醚挥发，得到迷迭香精油包合物。

步骤3：

将甘油和羟苯甲酯置烧杯中，加入泊洛沙姆407、泊洛沙姆188和迷迭香精油包合物，然后再加入磷酸盐缓冲液，搅拌使泊洛沙姆407、泊洛沙姆188均被润湿后，在5℃冰箱中冷藏24h，使原料混合均匀，得到迷迭香精油鼻用原位凝胶，制备的迷迭香精油鼻用原位凝胶的pH值为6.5。

迷迭香精油鼻用原位凝胶的胶凝温度为34.9℃。

实施例20

迷迭香精油鼻用原位凝胶由以下质量百分比组分组成：3％迷迭香精油包合物、19％泊洛沙姆407、6％泊洛沙姆188、5％甘油、66.99％磷酸盐缓冲液，0.01％羟苯甲酯。

迷迭香精油鼻用原位凝胶的制备方法如下所示：

步骤1：按上述配方称取各组分；

步骤2：取HP-β-CD20 g、加入纯化水10mL、迷迭香精油2mL在研钵中研磨40min，-70℃超低温冷冻30h，冷冻36h，得到产物，将产物研碎后，用石油醚进行少量多次抽滤洗涤，洗去部分未包合的迷迭香精油，然后放入干燥器中干燥24h使石油醚挥发，得到迷迭香精油包合物。

步骤3：

将甘油和羟苯甲酯置烧杯中，加入泊洛沙姆407、泊洛沙姆188和迷迭香精油包合物，然后再加入磷酸盐缓冲液，搅拌使泊洛沙姆407、泊洛沙姆188均被润湿后，在5℃冰箱中冷藏18h，使原料混合均匀，得到迷迭香精油鼻用原位凝胶，制备的迷迭香精油鼻用原位凝胶的pH值为5.5。

迷迭香精油鼻用原位凝胶的胶凝温度为32.4℃。

实施例21

迷迭香精油鼻用原位凝胶由以下质量百分比组分组成：3％迷迭香精油包合物、18.5％泊洛沙姆407、6.5％泊洛沙姆188、5％甘油、66.98％磷酸盐缓冲液，0.02％羟苯甲酯。

迷迭香精油鼻用原位凝胶的制备方法如下所示：

步骤1：按上述配方称取各组分；

步骤2：取HP-β-CD18 g，加入纯化水7.2mL、迷迭香精油2mL于研钵中研磨40min，-80℃超低温冷冻24h，冷冻干燥24h，得到产物，将产物研碎后，用石油醚进行少量多次抽滤洗涤，洗去部分未包合的迷迭香精油，然后放入干燥器中干燥24h使石油醚挥发，得到迷迭香精油包合物。

步骤3：

将甘油和羟苯甲酯置烧杯中，加入泊洛沙姆407、泊洛沙姆188和迷迭香精油包合物，然后再加入磷酸盐缓冲液，搅拌使泊洛沙姆407、泊洛沙姆188均被润湿后，在5℃冰箱中冷藏20h，使原料混合均匀，得到迷迭香精油鼻用原位凝胶，制备的迷迭香精油鼻用原位凝胶的pH值为6.5。

迷迭香精油鼻用原位凝胶的胶凝温度为35.1℃。

实施例22

迷迭香精油鼻用原位凝胶由以下质量百分比组分组成：2％迷迭香精油包合物、19.5％泊洛沙姆407、6％泊洛沙姆188、4.5％甘油、67.99％磷酸盐缓冲液，0.01％羟苯甲酯。

迷迭香精油鼻用原位凝胶的制备方法如下所示：

步骤1：按上述配方称取各组分；

步骤2：取HP-β-CD20 g，加入纯化水10mL、迷迭香精油2mL于研钵中研磨40min，-70℃超低温冷冻24h，冷冻干燥24h，得到产物，将产物研碎后，用乙醚进行少量多次抽滤洗涤，洗去部分未包合的迷迭香精油，然后放入干燥器中干燥24h使乙醚挥发，得到迷迭香精油包合物。

步骤3：

将甘油和羟苯甲酯置于烧杯中，加入泊洛沙姆407、泊洛沙姆188和迷迭香精油包合物，然后再加入磷酸盐缓冲液，搅拌使泊洛沙姆407、泊洛沙姆188均被润湿后，在5℃冰箱中冷藏24h，使原料混合均匀，得到迷迭香精油鼻用原位凝胶，制备的迷迭香精油鼻用原位凝胶的pH值为5。

迷迭香精油鼻用原位凝胶的胶凝温度为33.3℃。

实施例23

迷迭香精油鼻用原位凝胶由以下质量百分比组分组成：3％迷迭香精油包合物、19％泊洛沙姆407、5.5％泊洛沙姆188、5.5％甘油、66.99％磷酸盐缓冲液，0.01％羟苯甲酯。

迷迭香精油鼻用原位凝胶的制备方法如下所示：

步骤1：按上述配方称取各组分；

步骤2：取HP-β-CD16 g，加入纯化水8mL、迷迭香精油2mL于研钵中研磨40min，-60℃超低温冷冻24h，冷冻干燥24h，得到产物，将产物研碎后，用乙醚进行少量多次抽滤洗涤，洗去部分未包合的迷迭香精油，然后放入干燥器中干燥24h使乙醚挥发，得到迷迭香精油包合物。

步骤3：

将甘油和羟苯甲酯置烧杯中，加入泊洛沙姆407、泊洛沙姆188和迷迭香精油包合物，然后加入磷酸盐缓冲液，搅拌使泊洛沙姆407、泊洛沙姆188均被润湿后，在5℃冰箱中冷藏24h，使原料混合均匀，得到迷迭香精油鼻用原位凝胶，制备的迷迭香精油鼻用原位凝胶的pH值为6。

迷迭香精油鼻用原位凝胶的胶凝温度为31.5℃。

以实施例15-17为例，进行迷迭香精油鼻用原位凝胶配方组分的条件试验

(1)凝胶基质的组成对凝胶温度的影响

凝胶中添加保湿剂(甘油)，以保持凝胶的形状并避免干涸，磷酸盐缓冲液作为pH值调节剂。19％泊洛沙姆407、6％泊洛沙姆188、甘油、磷酸盐缓冲液的配比如表8所示，制备得到空白温敏凝胶。

表8凝胶基质的组成对凝胶温度的影响

由表8可知，当泊洛沙姆407与泊洛沙姆188的组成分别为19％和6％时空白温敏凝胶的胶凝温度为34.1℃，

(2)迷迭香精油包合物用量对胶凝温度的影响

根据表8的结果可知，当19％泊洛沙姆407、6％泊洛沙姆188的组成分别为65％和15％时，空白温敏凝胶的凝胶温度为33.2℃，接近鼻腔温度，以此考察迷迭香精油包合物用量对胶凝温度的影响，配方及结果见表9。

表9迷迭香精油包合物用量对凝胶温度的影响

由表9可知，随着迷迭香精油包合物用量的增加，胶凝温度下降。

由于其所制备的迷迭香精油鼻用原位凝胶为多剂量剂型，所以加入0.01％的羟苯甲酯作为防腐剂，由于含量较少，对泊洛沙姆溶液的胶凝温度无明显影响。按照表9所得的处方，制备得到实施例15-17的迷迭香精油鼻用原位凝胶，测试其凝胶温度结果分别为：33.6℃、35.4℃、31.5℃、30.2℃。可以用于使用。

本发明根据迷迭香精油鼻用原位凝胶的性质和剂型要求选用甘油、磷酸盐缓冲液、羟苯甲酯为辅料，其中甘油为保湿剂、磷酸盐缓冲液为pH值调节剂、羟苯甲酯为防腐剂；将制备的迷迭香精油鼻用原位凝胶装入容器中，如图4所示，图4中3瓶迷迭香精油鼻用原位凝胶均为实施例15制备得到的迷迭香精油鼻用原位凝胶，容器用纯化水清洗、干燥、消毒、灌装。每瓶的装量为6mL，符合药典规定(标准规定不得多于10mL)；制得的迷迭香精油鼻用原位凝胶应置于20℃以下阴冷保存。本发明制得的迷迭香精油鼻用原位凝胶澄清，没有沉淀和异物；迷迭香精油鼻用原位凝胶柔软细腻，易涂布；无刺激性。

本发明制备的迷迭香精油鼻用原位凝胶，制备工艺简单，给药方便，迷迭香精油鼻用原位精油可直接滴入鼻腔，在鼻腔生理温度下转变成凝胶，减少药液流失，可以大大延长药物在鼻腔中的滞留时间，能够促进药物通过鼻腔吸收，由于凝胶的生物相容性，可以大大延长药物在鼻腔中的滞留时间，提高了药物的生物利用度，经鼻腔给药还可以降低口服给药的不良反应和首过效应。

尽管已描述了本发明的优选实施例，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念，则可对这些实施例作出另外的变更和修改。所以，所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本发明范围的所有变更和修改。

显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。