猫爪草提取物制备治疗顺铂致急慢性肾损伤药物中的应用
阅读说明：本技术 猫爪草提取物制备治疗顺铂致急慢性肾损伤药物中的应用 (Application of radix ranunculi ternati extract in preparation of medicine for treating acute and chronic kidney injury caused by cisplatin ) 是由 刘丽荣 郭兵 徐卫卫 于 2021-01-25 设计创作，主要内容包括：本发明公开了猫爪草提取物制备治疗顺铂致急慢性肾损伤药物中的应用,取猫爪草干燥块根,研磨至粗颗粒,用提取溶媒进行提取,所得提取液除去溶剂后得到猫爪草提取物。该猫爪草提取物在制备治疗顺铂导致的急慢性肾损伤药物中的应用。本发明的猫爪草提取物的制备过程简单易行,作为制备治疗顺铂导致的急慢性肾损伤药物的原料,药理作用强、安全无毒,且其单剂提取物较复合剂提取物更能有效地改善肾脏损伤、维持和修复肾功能。本发明的突出进步和显著效果还在于猫爪草是贵州、河南和云南等省常见易得的中草药,成本低廉,为社会提供了一种具有显著治疗顺铂导致的急慢性肾损伤的天然有效的药物。(The invention discloses an application of radix ranunculi ternati extract in preparation of a medicine for treating acute and chronic kidney injury caused by cisplatin. The application of the radix ranunculi ternati extract in preparing medicines for treating acute and chronic kidney injury caused by cisplatin is provided. The preparation process of the radix ranunculi ternati extract is simple and easy to implement, the radix ranunculi ternati extract is used as a raw material for preparing the medicine for treating acute and chronic kidney injury caused by cisplatin, the pharmacological effect is strong, the radix ranunculi ternati extract is safe and non-toxic, and the single-dose extract can effectively improve the kidney injury and maintain and repair the kidney function compared with a compound-dose extract. The invention has the outstanding advantages and obvious effects that the catclaw buttercup root is a common and easily-obtained Chinese herbal medicine in Guizhou, Henan, Yunnan and the like, has low cost and provides a natural and effective medicine for remarkably treating acute and chronic kidney injury caused by cis-platinum for the society.)
技术领域
本发明涉及一种天然中草药提取物，特别涉及猫爪草提取物、猫爪草提取物制备方法和猫爪草在制备治疗顺铂导致的急慢性肾损伤药物中的应用。本发明所述的猫爪草，特指学名为毛茛科毛茛属植物小毛茛(Ranunculus ternatus Thunb.)的干燥块根。
背景技术
顺铂是临床上最常用的抗肿瘤药物之一，广泛用于卵巢癌、非小细胞肺癌、膀胱癌、头颈部鳞癌等多种实体肿瘤。然而顺铂化疗存在多种严重不良反应，如肾毒性、耳毒性、神经毒性以及恶心呕吐等，其中，肾毒性是最常见最严重的毒性反应，发生率高达30％(Nutrients，2018)。研究发现，单次大剂量顺铂刺激会引起肾小管上皮细胞凋亡，导致急性肾损伤，而大剂量或连续多次小剂量顺铂刺激可引起肾小管坏死及间质损伤等，引起TGF-β1等蛋白在肾脏的表达上调和细胞外基质增多，介导成纤维细胞转化为肌成纤维细胞，导致慢性肾脏病的发生(Archives of toxicology，2009，381-387)。因此，如何降低顺铂所致肾毒性，更好的发挥其抗肿瘤作用，提高患者化疗疗效及生活质量，是当前急需解决的问题。
顺铂诱导的肾损伤的病理机制复杂，其中肾小管损伤、氧化应激反应和炎症反应均为导致急性肾损伤的关键因素(Journal of biomedical science，2019，25)。多种不同的病理反应均可诱发肾小管损伤，例如：细胞凋亡、坏死、炎症和激活信号转导和转录活化因子(STAT3)或核转录因子κB(NF-κB)信号通路信号通路等(Journal of agriculturaland food chemistry，2019，5754-5763.)。有关肾小管细胞凋亡在顺铂-急性肾损伤中的作用已有诸多文献报道。相对于顺铂-急性肾损伤，目前国内外对于顺铂-慢性肾损伤的研究相对较少，具体机制也不明确。研究发现，多次小剂量或大剂量腹腔注射顺铂将导致肾功能障碍、肾间质纤维化，进而导致肾损伤。肾脏纤维化主要表现为细胞过度沉积和上皮-间质转分化等，最终导致肾实质破坏和肾功能丧失(EbioMedicine,2019,491-504)。总之，药物诱发的肾损伤，尤其是顺铂引起的急慢性肾损伤已成为临床上最常见的问题，严重影响了临床化疗药物的使用、肿瘤的治疗效果及肾脏的结构和功能。但目前其病理机制还不明确，探寻有效的治疗药物至关重要。
猫爪草系毛茛科毛茛属植物小毛茛(RanunculusternatusThunb.)的干燥块根，本品呈纺锤形，多5-6个簇生，形似猫爪，长3-10mm，直径2-3mm，顶端有黄褐色残茎或茎痕。表面黄褐色或灰黄色，久存色泽变深，微有纵皱纹，并有点状须根痕和残留须根。质坚实，断面类白色或黄白色，实心，粉性。味微甘。又名三散草、猫爪儿草、猫爪子，主产于河南信阳，贵州、云南也有广泛分布。性温，味甘、辛，入肝、肺经，具有清热解毒、消肿散结、止咳祛痰等功效，临床用于治疗肺结核、淋巴结结核、咽喉炎、疟疾等症(广东药科大学学报，2019，1-5)。民间用于治疗淋巴结核，不论结核大小或是否化脓均有较好的疗效。
猫爪草单剂提取物或者复合剂提取物作为中草药使用的记载较多。猫爪草单剂提取物在治疗淋巴结核中具有良好的效果；其单剂的注射液对小鼠S180、S37癌株有抑制作用；对痢疾杆菌、金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、四联球菌等也有显著抑制作用(中国医院药学杂志，2011，1673-1676)；还具有显著抗肿瘤作用(一种猫爪草抗肿瘤成分的制备方法，CN105412265A，2018)。但猫爪草单剂提取物在急慢性肾损伤中的作用及可能机制目前尚无相关的研究报道。研究发现，猫爪草、火麻仁、葵菜子和天目木兰等多种中药成分混合加水煎煮得到的复合剂可有效防治糖尿病肾病，但具体机制未阐明(一种糖尿病肾病药物的制方法，CN104815194A，2015)。同样，猫爪草、蛤蚧、西红花、蜈蚣和炙百部等中药成分混合煎煮得到的混合物可有效治疗肾结核，其作用机制与调整机体免疫力、抗炎、抗结核有关，疗效显著、无毒副作用(一种治疗肾结核的中药制剂，CN1911411，2007)。猫爪草、重楼、车前子、黄芪蒸煮成膏制得混合物可有效根治急慢性肾炎和尿路感染，与迅速消炎、消肿和排毒有关，但具体机制未明确(治疗肾炎的中药制剂，CN101904970A，2010)。猫爪草单剂或复合剂提取物用于治疗顺铂导致的小鼠急慢性肾损伤的研究和相关应用尚未见相关报道。因此，发明一种能有效治疗顺铂诱导的急慢性肾损伤的天然有效药物，且阐明其可能的作用机制对急慢性肾损伤的未来防治具有重要作用。
研究发现，表观遗传学在调控肾脏疾病的发生发展过程中发挥重要作用(Naturereviews Nephrology，2019，327-345)。表观遗传学是指DNA序列未发生改变的情况下，通过DNA修饰、蛋白修饰和非编码RNA等多种调控，导致基因发生了可遗传的表型变化(世界最新医学信息文摘，2016，58-59)。组蛋白甲基化是表观遗传学的研究内容之一，是赖氨酸甲基转移酶催化的一种可逆的酶促反应，某些赖氨酸甲基转移酶既可催化组蛋白(如：组蛋白H3第36位赖氨酸(H3K36)或组蛋白H3第4位赖氨酸(H3K4))也可催化非组蛋白(如：信号转导和转录活化因子(STAT3)或核转录因子κB(NF-κB))发生甲基化来执行其生物学功能。组蛋白上的众多位点(尤其是赖氨酸)均可以被甲基化修饰，不同位点的甲基化可由不同的赖氨酸甲基转移酶催化完成，导致基因转录的抑制或激活。在常染色体显性多囊肾患者和小鼠的肾上皮细胞中组蛋白H3第36位赖氨酸三甲基化(H3K36me3)表达上调，且其表达上调与肾囊肿生成和肾小管凋亡的发生密切相关(The Journal of clinical investigation，2017，2751-2764)。但组蛋白H3第36位赖氨酸三甲基化(H3K36me3)在顺铂诱导急慢性肾损伤中的表达变化及可能作用机制尚未见研究报道。
综上，顺铂作为一种有效的抗肿瘤化疗药物，但因其具有严重的肾毒性限制了该药的临床应用。目前对顺铂所致的急慢性肾损伤的发病机制尚未完全阐明，研究发现与表观遗传学具有显著相关性。近年来，猫爪草提取物在各类疾病中的治疗作用日益突显，受到了广泛关注，但在顺铂注诱导急慢性肾损伤中的作用尚未见报道。故，本发明为社会提供了一种具有显著治疗顺铂导致的急慢性肾损伤的天然有效药物，且阐明了其可能的作用机制。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是，提供一种猫爪草提取物及其制备方法以及在制备治疗顺铂导致的急慢性肾损伤药物中的应用，为顺铂导致的急慢性肾损伤的治疗提供一种新的药物，且该原料易得、制备工艺简单、药用价值高、药用效果显著。
本发明的技术方案：为了解决上述技术问题，本发明提供了猫爪草提取物以及猫爪草提取物的制备方法。
该猫爪草提取物采用以下工艺制备：猫爪草干燥块根，研磨至粗颗粒，用提取溶媒进行提取，所得提取液除去溶剂后得到猫爪草提取物。
提取溶媒为70％无水乙醇。
提取方法为80℃加热回流、冷浸。
提取液除去溶剂的方法为减压蒸汽浓缩。
本发明还提供了猫爪草提取物制备治疗顺铂致急慢性肾损伤药物中的应用。
本发明的猫爪草提取物制备过程简单易行、作为制备治疗顺铂导致的急慢性肾损伤药物的原料，药理作用强、安全无毒，且其单剂较复合剂更能有效地缓解肾脏损伤、维持和修复肾脏功能。经顺铂所致的急性肾损伤小鼠模型实验结果显示，猫爪草提取物可明显改善小鼠肾功能，下调急性肾损伤标志蛋白(NGAL)、细胞凋亡蛋白(Bax和cleavedcaspase-3)，上调抗凋亡蛋白(BCL-2)的蛋白表达，具有明显抗凋亡作用，其作用机制可能与抑制信号转导和转录调节因子(STAT3)信号转导通路激活密切相关，其分子机制可能是通过抑制组蛋白H3第36位赖氨酸三甲基化(H3K36me3)蛋白表达来发挥缓解急性肾损伤的作用。经顺铂所致的肾纤维化小鼠模型实验结果显示，猫爪草提取物可显著下调纤维化蛋白(Fibronectin、Vimentin)的表达，具有显著抗纤维化作用，其作用机制可能与抑制核转录因子κB(NF-κB)信号转导通路激活，进而缓解肾小管上皮细胞炎症反应密切相关。本发明的突出进步和显著效果还在于猫爪草是河南、贵州、云南等地常见易得的中草药，成本低廉，为社会提供了一种具有显著治疗顺铂导致的急慢性肾损伤的天然有效的药物。
附图说明
图1：各组C57BL/6小鼠的BUN和Scr水图；
图2：各组C57BL/6小鼠急性肾损伤标志蛋白(NGAL)表达水平图；
图3：各组C57BL/6小鼠细胞凋亡蛋白(Bax和cleaved caspase-3)和抗凋亡蛋白(BCL-2)表达水平图；
图4：各组C57BL/6小鼠肾组织中信号转导和转录活化因子(STAT3)表达水平图；
图5：各组C57BL/6小鼠肾组织中组蛋白H3第36位赖氨酸三甲基化(H3K36me3)表达水平图；
图6：各组C57BL/6小鼠的肾纤维化蛋白(Fibronectin和Vimentin)表达水平图；
图7：各组C57BL/6小鼠的cleaved caspase-3、Bax和BCL-2表达水平图；
图8：各组C57BL/6小鼠肾组织中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-6(IL-6)和核转录因子κB(NF-κB)水平图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。且本发明所述的猫爪草提取物的相关药理活性及药用制剂的制备是按如下实施例所表示的方法进行。所涉及到的方法是本领域的技术人员能够掌握和运用的技术手段。但是，以下具体实施例不得理解为任何意义上的对本发明权利要求的限制。
实施例1：猫爪草提取物样品制备
猫爪草干燥块根，研磨至粗颗粒，用70％无水乙醇作为提取溶媒进行提取，所采用的提取方法为80℃加热回流、冷浸，所得的提取液采用减压蒸汽浓缩的方法除去溶剂后得到猫爪草提取物。具体原料及其重量，所用提取溶媒，采用的提取方法，去除溶剂方法等如下表1所示。
表1猫爪草提取物样品的制备方法
实施例2：猫爪草提取物对顺铂所致的急性肾损伤小鼠肾功能的影响。
6-8周龄C57BL/6小鼠适应性喂养1周，随机分为对照组(正常+双蒸水)、顺铂诱导急性肾损伤模型组(顺铂20mg/kg+双蒸水)、猫爪草治疗组(顺铂20mg/kg+2.5g/kg猫爪草提取物)，每组7只。以单次腹腔注射顺铂(20mg/kg)(溶于0.9％生理盐水)，构建急性肾损伤小鼠模型；对照组小鼠腹腔注射等体积顺铂溶媒(0.9％生理盐水)。猫爪草治疗组于顺铂注射前2小时给予猫爪草提取物(2.5g/kg)灌胃，1次/天，连续3天，对照组和顺铂诱导急性肾损伤模型组小鼠腹腔注射等体积双蒸水。于顺铂注射后3天麻醉状态下收取小鼠血清样本，通过全自动生化分析仪检测血清中尿素氮(BUN)和肌酐(Scr)的含量。
参照图1中各组C57BL/6小鼠的BUN和Scr水平(注：vs对照组，*P<0.05；vs顺铂模型组，#P<0.05；BUN：尿素氮；Scr：血肌酐；RTT：猫爪草提取物)
生化结果如图1(A)显示：顺铂诱导急性肾损伤模型组小鼠尿素氮(BUN)含量明显升高，肾功能明显恶化，而猫爪草提取物可显著降低尿素氮(BUN)水平，图1(B)结果显示：猫爪草提取物可显著降低肌酐(Scr)水平，提示猫爪草提取物对肾功能具有明显改善作用，因此猫爪草提取物可显著降低顺铂所致的急性肾损伤小鼠尿素氮(BUN)和肌酐(Scr)水平。
实施例3：猫爪草提取物对顺铂所致的急性肾损伤小鼠肾小管损伤的保护作用。
6-8周龄C57BL/6小鼠适应性喂养1周，随机分为对照组(正常+双蒸水)、顺铂诱导急性肾损伤模型组(顺铂20mg/kg+双蒸水)、猫爪草治疗组(顺铂20mg/kg+2.5g/kg猫爪草提取物)，每组7只。以单次腹腔注射顺铂(20mg/kg)(溶于0.9％生理盐水)，构建急性肾损伤小鼠模型；对照组小鼠腹腔注射等体积顺铂溶媒(0.9％生理盐水)。猫爪草治疗组于顺铂注射前2小时给予猫爪草提取物(2.5g/kg)灌胃，1次/天，连续3天，对照组和顺铂诱导急性肾损伤模型组小鼠腹腔注射等体积双蒸水。于顺铂注射后3天麻醉状态下收取小鼠肾组织样本，提取组织总蛋白。
参照图2中各组C57BL/6小鼠的NGAL表达水平，(注：vs对照组，*P<0.05；vs顺铂模型组，#P<0.05；RTT：猫爪草提取物；NGAL：急性肾损伤标志蛋白)
结果如图2显示：顺铂诱导急性肾损伤模型组急性肾损伤标志蛋白(NGAL)水平显著增加，而猫爪草提取物可明显降低急性肾损伤标志蛋白(NGAL)水平，提示猫爪草具有减轻肾脏损伤的作用。
实施例4：猫爪草提取物对顺铂所致的急性肾损伤小鼠肾小管细胞凋亡的抑制作用。
6-8周龄C57BL/6小鼠适应性喂养1周，随机分为对照组(正常+双蒸水)、顺铂诱导急性肾损伤模型组(顺铂20mg/kg+双蒸水)、猫爪草治疗组(顺铂20mg/kg+2.5g/kg猫爪草提取物)，每组7只。以单次腹腔注射顺铂(20mg/kg)(溶于0.9％生理盐水)，构建急性肾损伤小鼠模型；对照组小鼠腹腔注射等体积顺铂溶媒(0.9％生理盐水)。猫爪草治疗组于顺铂注射前2小时给予猫爪草提取物(2.5g/kg)灌胃，1次/天，连续3天，对照组和顺铂诱导急性肾损伤模型组小鼠腹腔注射等体积双蒸水。于顺铂注射后3天麻醉状态下收取小鼠肾组织样本，提取组织总蛋白。
参照图3中各组C57BL/6小鼠细胞凋亡蛋白(Bax和cleaved caspase-3)和抗凋亡蛋白(BCL-2)表达水平(注：vs对照组，*P<0.05；vs顺铂模型组，#P<0.05；RTT：猫爪草提取物；Bax、cleaved caspase-3：细胞凋亡蛋白；BCL-2：抗凋亡蛋白)
结果如图3显示：顺铂诱导急性肾损伤模型组细胞凋亡蛋白(Bax和cleavedcaspase-3)表达水平显著增加，抗凋亡蛋白(BCL-2)表达水平显著下降，而猫爪草提取物可明显降低细胞凋亡蛋白(Bax和cleaved caspase-3)表达水平，增加抗凋亡蛋白(BCL-2)表达水平，减少细胞凋亡，此现象是猫爪草提取物保护急性肾损伤的作用机制之一。
实施例5：猫爪草提取物对顺铂所致的急性肾损伤小鼠肾组织中信号转导和转录活化因子(STAT3)的影响。
6-8周龄C57BL/6小鼠适应性喂养1周，随机分为对照组(正常+双蒸水)、顺铂诱导急性肾损伤模型组(顺铂20mg/kg+双蒸水)、猫爪草治疗组(顺铂20mg/kg+2.5g/kg猫爪草提取物)，每组7只。以单次腹腔注射顺铂(20mg/kg)(溶于0.9％生理盐水)，构建急性肾损伤小鼠模型；对照组小鼠腹腔注射等体积顺铂溶媒(0.9％生理盐水)。猫爪草治疗组于顺铂注射前2小时给予猫爪草提取物(2.5g/kg)灌胃，1次/天，连续3天，对照组和顺铂诱导急性肾损伤模型组小鼠腹腔注射等体积双蒸水。于顺铂注射后3天麻醉状态下收取小鼠肾组织样本，提取组织总蛋白。
参照图4中各组C57BL/6小鼠肾组织中信号转导和转录活化因子(STAT3)表达水平(注：vs对照组，*P<0.05；vs顺铂模型组，#P<0.05；RTT：猫爪草提取物；STAT3：信号转导和转录活化因子；p-STAT3：磷酸化的信号转导和转录活化因子)
结果如图4显示：顺铂模型组中信号转导和转录活化因子(STAT3)和磷酸化的信号转导和转录活化因子(p-STAT3)水平显著上升，而猫爪草提取物可明显降低信号转导和转录活化因子(STAT3)和磷酸化的信号转导和转录活化因子(p-STAT3)水平，提示猫爪草提取物可能是通过抑制信号转导和转录活化因子(p-STAT3)信号转导通路激活，进而抑制肾小管细胞凋亡，缓解顺铂诱导的急性肾损伤。
实施例6：猫爪草提取物对C57BL/6小鼠顺铂模型肾小管上皮细胞中组蛋白H3第36位赖氨酸三甲基化(H3K36me3)表达的影响。
6-8周龄C57BL/6小鼠适应性喂养1周，随机分为对照组(正常+双蒸水)、顺铂诱导急性肾损伤模型组(顺铂20mg/kg+双蒸水)、猫爪草治疗组(顺铂20mg/kg+2.5g/kg猫爪草提取物)，每组7只。以单次腹腔注射顺铂(20mg/kg)(溶于0.9％生理盐水)，构建急性肾损伤小鼠模型；对照组小鼠腹腔注射等体积顺铂溶媒(0.9％生理盐水)。猫爪草治疗组于顺铂注射前2小时给予猫爪草提取物(2.5g/kg)灌胃，1次/天，连续3天，对照组和顺铂诱导急性肾损伤模型组小鼠腹腔注射等体积双蒸水。于顺铂注射后3天麻醉状态下收取小鼠肾组织样本，提取组织总蛋白。
参照图5中各组C57BL/6小鼠肾组织中组蛋白H3第36位赖氨酸三甲基化(H3K36me3)表达水平(注：vs对照组，*P<0.05；vs顺铂组，#P<0.05；RTT：猫爪草提取物；H3K36me3:组蛋白H3第36位赖氨酸三甲基化(H3K36me3))
结果如图5显示：顺铂模型组中组蛋白H3第36位赖氨酸三甲基化(H3K36me3)水平显著上升，而猫爪草提取物可明显降低组蛋白H3第36位赖氨酸三甲基化(H3K36me3)水平，提示猫爪草提取物可能是通过抑制组蛋白H3第36位赖氨酸三甲基化(H3K36me3)表达从分子水平缓解顺铂诱导的急性肾损伤。
实施例7：猫爪草提取物对顺铂所致的肾纤维化小鼠肾组织中纤维化相关蛋白表达的影响。
6-8周龄C57BL/6小鼠适应性喂养1周，随机分为对照组(正常+双蒸水)、顺铂诱导肾纤维化模型组(顺铂10mg/kg+双蒸水)、猫爪草治疗组(顺铂10mg/kg+1.25g/kg猫爪草提取物)，每组7只。以多次腹腔注射顺铂(10mg/kg)(溶于0.9％生理盐水)，连续3周，1次/周，构建慢性肾纤维化小鼠模型；对照组小鼠腹腔注射等体积顺铂溶媒(0.9％生理盐水)。猫爪草治疗组于顺铂注射次日起，给予猫爪草提取物(1.25g/kg)灌胃，1次/天，连续21天。对照组和顺铂诱导肾纤维化模型组给予等量双蒸水灌胃。于首次顺铂注射21天后麻醉状态下收取小鼠肾组织样本，提取组织总蛋白。
参照图6中各组C57BL/6小鼠的肾纤维化蛋白(Fibronectin和Vimentin)表达水平(注：vs对照组，*P<0.05；vs顺铂模型组，#P<0.05；RTT：猫爪草提取物；Fibronectin、Vimentin：肾纤维化蛋白)
结果如图6显示：顺铂诱导肾纤维化模型组中纤维化蛋白(Fibronectin和Vimentin)表达显著增加，而猫爪草提取物可明显降低纤维化蛋白(Fibronectin和Vimentin)水平，提示RTT具有缓解肾脏纤维化的作用。
实施例8：猫爪草提取物对顺铂所致的肾纤维化小鼠肾小管细胞凋亡的抑制作用。
6-8周龄C57BL/6小鼠适应性喂养1周，随机分为对照组(正常+双蒸水)、顺铂诱导肾纤维化模型组(顺铂10mg/kg+双蒸水)、猫爪草治疗组(顺铂10mg/kg+1.25g/kg猫爪草提取物)，每组7只。以多次腹腔注射顺铂(10mg/kg)(溶于0.9％生理盐水)，连续3周，1次/周，构建慢性肾纤维化小鼠模型；对照组小鼠腹腔注射等体积顺铂溶媒(0.9％生理盐水)。猫爪草治疗组于顺铂注射次日起，给予猫爪草提取物(1.25g/kg)灌胃，1次/天，连续21天。对照组和顺铂诱导肾纤维化模型组给予等量双蒸水灌胃。于首次顺铂注射21天后麻醉状态下收取小鼠肾组织样本，提取组织总蛋白。
参照图7中各组C57BL/6小鼠细胞凋亡蛋白(cleaved caspase-3和Bax)和抗凋亡蛋白(BCL-2)的表达水平(注：vs对照组，*P<0.05；vs顺铂模型组，#P<0.05；RTT：猫爪草提取物；cleaved caspase-3、Bax：细胞凋亡蛋白；BCL-2：抗凋亡蛋白)
结果如图7显示：顺铂诱导肾纤维化模型组中细胞凋亡蛋白(cleaved caspase-3和Bax)水平显著增加，抗凋亡蛋白(BCL-2)水平显著下降，而猫爪草提取物可明显降低细胞凋亡蛋白(cleaved caspase-3和Bax)表达水平，增加抗凋亡蛋白(BCL-2)表达水平，减少细胞凋亡，这可能是猫爪草提取物保护慢性肾损伤的作用机制之一。
实施例9：猫爪草提取物对顺铂所致的肾纤维化小鼠肾组织中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-6(IL-6)和核转录因子κB(NF-κB)水平的影响。
6-8周龄C57BL/6小鼠适应性喂养1周，随机分为对照组(正常+双蒸水)、顺铂诱导肾纤维化模型组(顺铂10mg/kg+双蒸水)、猫爪草治疗组(顺铂10mg/kg+1.25g/kg猫爪草提取物)，每组7只。以多次腹腔注射顺铂(10mg/kg)(溶于0.9％生理盐水)，连续3周，1次/周，构建慢性肾纤维化小鼠模型；对照组小鼠腹腔注射等体积顺铂溶媒(0.9％生理盐水)。猫爪草治疗组于顺铂注射次日起，给予猫爪草提取物(1.25g/kg)灌胃，1次/天，连续21天。对照组和顺铂诱导肾纤维化模型组给予等量双蒸水灌胃。于首次顺铂注射21天后麻醉状态下收取小鼠肾组织样本，提取组织总蛋白。
参照图8中各组C57BL/6小鼠肾组织中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-6(IL-6)和核转录因子κB(NF-κB)水平(注：vs对照组，*P<0.05；vs顺铂模型组，#P<0.05；RTT：猫爪草提取物；TNF-α、IL-6、NF-κB p-p65和NF-κB p65：炎症反应相关蛋白)
结果如图8显示：顺铂诱导肾纤维化模型组中炎症反应相关蛋白(TNF-α、IL-6、NF-κB p-p65和NF-κB p65)水平显著增加，而猫爪草提取物可明显降低炎症反应相关蛋白(TNF-α、IL-6、NF-κB p-p65和NF-κB p65)表达水平，提示猫爪草提取物可能通过抑制核转录因子κB(NF-κB)信号转导通路激活，进而抑制炎症反应，缓解顺铂诱导的肾纤维化。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。