一种阻止凡纳滨对虾肝肠孢子虫垂直传播的方法

文档序号:639907 发布日期:2021-05-14 浏览:28次 >En<

阅读说明:本技术 一种阻止凡纳滨对虾肝肠孢子虫垂直传播的方法 (Method for preventing Vertically spreading of liver and intestinal sporozoon of Litopenaeus vannamei ) 是由 林海川 谢阳 陈金坤 于 2020-12-31 设计创作,主要内容包括:本发明公开了一种阻止凡纳滨对虾肝肠孢子虫垂直传播的方法包括以下步骤:亲虾的选择与暂养、亲虾的感染与强化、亲虾产卵、收集卵子、洗卵、洗幼体。本发明利用H试剂并结合采用特制的清洗系统装置,在对虾育苗初始阶段即对该胞子虫病害进行全面彻底的有效清除,阻断该胞子虫病害在对虾发育生长过程中的垂直传播,解决凡纳滨对虾增养殖中无法有效防控该胞子虫病害的难题。(The invention discloses a method for preventing Vertically propagating liver enterosporidium of Litopenaeus vannamei, which comprises the following steps: selecting and temporarily breeding parent shrimps, infecting and strengthening the parent shrimps, enabling the parent shrimps to lay eggs, collecting eggs, washing the eggs and washing larvae. The invention utilizes the H reagent and combines with a special cleaning system device, completely and effectively eliminates the cytozoosis disease in the initial stage of prawn breeding, blocks the vertical propagation of the cytozoosis disease in the prawn development and growth process, and solves the problem that the cytozoosis disease can not be effectively prevented and controlled in the litopenaeus vannamei breeding.)

一种阻止凡纳滨对虾肝肠孢子虫垂直传播的方法

技术领域

本发明涉及一种阻止凡纳滨对虾肝肠孢子虫垂直传播的方法,属于防止水产养殖病害的传播领域,特别是涉及一种采用阴离子聚丙烯酰胺、聚维酮碘等配制剂防控阻止凡纳滨对虾肝肠孢子虫垂直传播的方法。

背景技术

凡纳滨对虾是中国常见的水产对虾养殖种类。凡纳滨对虾的虾肝肠胞子虫(英文简写为EPH)是严重危害凡纳滨对虾正常生长的胞子虫病害,且其繁殖能力极强,用常规方式(酸性或碱性溶液)难以达到在对虾增养殖环境中对其完全杀灭的目的。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种阻止凡纳滨对虾肝肠孢子虫垂直传播的方法,采用阴离子聚丙烯酰胺、聚维酮碘等配制剂防控对虾肝肠孢子虫传播。

为解决上述技术问题,本发明的技术方案为:一种阻止凡纳滨对虾肝肠孢子虫垂直传播的方法,其创新点在于包括以下步骤:

步骤A:亲虾的选择与暂养,按照雌雄比为1∶2的比例选择健康的亲虾,亲虾暂养方法为:将亲虾放入亲虾隔离池,隔离池使用前用PH≥14的NaOH溶液浸泡24小时,整个隔离池的用水经过陶氏水处理器,每天按照40%的进行换水,在整个暂养期间水温控制在28℃,盐度为28-34‰,溶氧保证在5mg/L以上,PH8.4-8.7,水中总氨氮含量低于0.6mg/L,每天按照对虾体重的2%投喂亲虾饲料,每天投喂4次;

步骤B:亲虾的感染与强化:亲虾在隔离池暂养10天后,开始投喂拌有虾肝肠胞子虫液的亲虾饲料,拌料的量为10ml/kg,投喂量为体重的2%,连续投喂15天后,经PCR检测证明为虾肝肠胞子虫阳性;取亲虾隔离池亲虾,检测完隔天剪除亲虾隔离池中母虾的眼柄,换水量每天换60%,光照强度控制在500x,采用优化后饲料每天投喂量按照亲虾体重的2%计算,每天投喂4次,养殖20天后,亲虾大小达到47-60g,母虾性腺饱满,公虾精夹成熟。

步骤C:亲虾产卵:亲虾在达到性成熟后,于晚上轻轻把亲虾隔离池中的母虾性腺成熟的亲虾挑出,检查是否交配完成,已交配母虾即母虾生殖器处有公虾的精夹并且牢固,放到产卵隔离池,产卵隔离池水为经过陶氏处理器处理过的干净水,水温控制在29℃,溶解氧5mg/L以上,水中总氨氮为0;未交配的母虾放回亲虾隔离池的网箱,挑完所有池子中所有性腺饱满的母虾后,再拿出网箱,使未授精的母虾回到亲虾隔离池中,当晚挑出授精合格的母虾数尾;于晚上从产卵隔离池中轻轻挑出母虾,亲虾隔离池;

步骤D:收集卵子:隔日凌晨用300目的网箱及300目的捞网收集产卵离池中的卵子,将收集到的亲虾卵放于20L的白桶中;白桶中水为经过陶氏水处理器处理的干净水,水温29℃,溶解氧5mg/L以上,水中氨氮亚硝酸盐均为0;在白桶中放置微孔暴气,调整气量至微沸腾状态,用10ml的液移滴管取10ml,放到100ml的烧杯中,烧杯中再加入90ml干净的超滤水,用1ml玻璃液移管取1ml,计算出液移管中的虾卵数量,由此可以得知虾卵数量总共为280万-320万个;

步骤E:洗卵:用500ml的烧杯小心从白桶中取500ml含有虾的水10杯,随机分别放置编号为1-10的清洗系统装置中的集卵桶,可知每个清洗系统装置中虾卵的数量为7万-8万个;清洗系统装置中的水为经过陶氏水处理器处理过的干净水,水温控制在29℃,溶解氧5mg/L以上,水中总氨氮亚硝酸盐均为0,水中加入H溶液2ppm,即0.08ml的H试剂,均匀混合;用60目的捞网小心捞出肉眼可见的母虾粪便及杂质,调节集卵桶中的微孔增氧气石至微微沸腾的状态,使虾卵在该溶液中浸泡2分钟;2分钟后往集卵桶中缓缓加入准备好的清洗水,清洗水为经过陶氏水处理器处理过的干净水,水温控制在29℃,PH8.6,水中总氨氮亚硝酸盐均为0,使清洗系统装置内的水边进边排,流入的水为清洗桶体积的20倍,合计流入800L的清洗水;清洗完后轻轻拿出集卵桶,把集卵桶里的卵转移到对应编号1-10的孵化桶,孵化桶中的水为经过陶氏水处理器处理过的干净水,水位为1m,水温32℃,溶解氧5mg/L以上,水中氨氮亚硝酸盐均为0,孵化桶中放置一个微孔增氧气石,气量调节至微微沸腾状态;

步骤F:洗幼体:隔天中午检查编号1-10的孵化桶内的虾卵均正常孵化,取编号11-20的清洗系统装置放置于孵化桶下方,清洗系统装置中的水为经过陶氏水处理器处理过的干净水,水温控制在32℃,PH8.6,水中总氨氮亚硝酸盐均为0,关掉孵化桶里的微孔增氧气石,静置10分钟;10分钟后打开集卵桶中的微孔增氧,气量大小调节至微微沸腾,再打开孵化桶下方的pvc球阀,调整大小使带有幼体的水流缓缓流入对应的清洗系统装置中的集卵桶,直至无水流出为止;收集好幼体后,用500ml的烧杯从清洗桶中取500ml的水出来,放0.08ml的H试剂,均匀混合后,倒入即集卵桶,轻轻上下晃动集卵桶,使清洗桶和集卵桶的溶液均匀分布,打开已经准备好的清洗水,使清洗水缓缓流入集卵桶,清洗水为经过陶氏水处理器处理过的干净水,水温控制在32℃,水中总氨氮亚硝酸盐均为0,使清洗系统装置内的水边进边排,流入的水为清洗桶体积的40倍,合计流入1600L的清洗水;清洗完后,收集编号11-20的清洗系统装置里的幼体,送至隔离育苗池,进入常规标准的育苗程序。

优选的,所述步骤A中健康的亲虾。所述的健康亲虾为体长16-18cm、体重为32-40g、体型大、体色正常、副肢完整、鳃部清洁、无特定病毒感染;所述亲虾暂养方法中按照11-14尾/m2的密度将亲虾放入亲虾隔离池,且亲虾隔离池的大小为25m2的水泥池,水深0.6m。

优选的,所述步骤B中所述虾肝肠胞子虫液的制备方法为,在爆发虾肝肠胞子虫的养殖池塘取粪便,该虾池肝肠孢子虫症状明显,经PCR检测证明为虾肝肠胞子虫阳性,取0.1g爆发虾肝肠胞子虫的对虾粪便放入匀浆器中,加入1mL的LPBS缓冲液并浴研磨均匀,然后将虾肝肠胞子虫液置入1.5mL的EP管中3000r/min离心5min,取上清液200uL加入到1800uL的PBS缓冲液,用经高温消毒过的装有0.22uL孔目的过滤器过滤,取滤液500uL加入到49.5mL且PH7.4的PBS缓冲液混匀,共计50mL,4℃保存备用。

优选的,所述步骤B中优化后饲料为亲虾饲料、沙虫、鱿鱼、牛肝等按照1∶3∶1∶1的比例调配。

优选的,所述步骤C中所述网箱长宽高为1m*1m*1m,四周用40目的网目围起来,上下两面为放空,产卵时保持安静,关闭所有灯光,提高产卵率。

优选的,所述步骤E和步骤F中所述清洗系统装置包括清洗桶和集卵桶,所述清洗桶为长为40cm,宽为40cm,高为25cm的正方形塑料桶;所述集卵桶为半径15cm,高为35cm的圆形塑料桶,在距离桶底10cm处有一块长方形环形切割,切割的孔洞为长40cm,宽30cm,孔洞中固定一块250目的滤网。

优选的,所述集卵桶使用过程中,所述集卵桶放在所述清洗桶里面,往集卵桶中加水,水会带着细小粪便、杂质及虾肝肠胞子虫从滤网中流出来,且所述集卵桶中放一个微孔增氧气石,气量的大小调节至微微沸腾。

优选的,所述步骤E和步骤F中所述H试剂为阴离子聚丙烯酰胺、聚维酮碘、纯净水按照1∶5∶10的比例配置。

优选的,所述步骤E和步骤F中所述孵化桶为底部半径25cm,高1.5m的塑料圆桶,桶底装有32mm口径的pvc管,出水口装配球阀跟32mm的塑料软管15cm,桶内部装配弯头与20cm高的32mm口径的pvc管。

优选的,所述步骤E中孵化桶正上方40cm处安装一盏50w的白炽灯,孵化期间白炽灯保持常亮状态,孵化桶放置于离地35cm的台面上。

本发明的有益效果为:本发明利用H试剂并结合采用特制的清洗系统装置,在对虾育苗初始阶段即对该胞子虫病害进行全面彻底的有效清除,阻断该胞子虫病害在对虾发育生长过程中的垂直传播,解决凡纳滨对虾增养殖中无法有效防控该胞子虫病害的难题。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述。

实施例1

1)亲虾的选择与暂养:按照雌雄比为1∶2的比例选择健康的亲虾,健康亲虾为体长17cm、体重为36g、体型大、体色正常、副肢完整、鳃部清洁、无特定病毒感染。亲虾暂养方法为:按照12尾/m2的密度将亲虾放入亲虾隔离池,亲虾隔离池的大小为25m2的水泥池,水深0.6m,隔离池使用前用PH≥14的NaOH溶液浸泡24小时,整个隔离场的用水经过陶氏水处理器,过滤孔径为0.1~0.2um,每天按照40%的进行换水,在整个暂养期间水温控制在28℃,盐度为28-34‰,溶氧保证在5mg/L以上,PH8.6,水中总氨氮含量低于0.6mg/L,每天按照对虾体重的2%投喂亲虾饲料,每天投喂4次。

2)亲虾的感染与强化:亲虾在隔离场暂养10天后,开始投喂拌有虾肝肠胞子虫液的亲虾饲料,拌料的量为10ml/kg,投喂量为体重的2%,连续投喂15天后,取亲虾隔离池亲虾所产出的新鲜粪便,经PCR检测证明为虾肝肠胞子虫阳性。检测完隔天减除亲虾隔离池中母虾的眼柄,换水量每天换60%,光照强度控制在500x。将亲虾饲料、沙虫、鱿鱼、牛肝等按照1∶3∶1∶1的比例饲喂亲虾。每天投喂量按照亲虾体重的2%计算,每天投喂4次。养殖20天后,亲虾大小达到50g。母虾性腺饱满,公虾精夹成熟。

上述的虾肝肠胞子虫液的制备方法为:在爆发虾肝肠胞子虫的养殖池塘取粪便,该虾池肝肠孢子虫症状明显,经PCR检测证明为虾肝肠胞子虫阳性。取0.1g爆发虾肝肠胞子虫的对虾粪便放入匀浆器中,加入1mL的LPBS缓冲液并浴研磨均匀,然后将虾肝肠胞子虫液置入1.5mL的EP管中3000r/min离心5min,取上清液200uL加入到1800uL的PBS缓冲液,用经高温消毒过的装有0.22uL孔目的过滤器过滤。取滤液500uL加入到49.5mL且PH7.4的PBS缓冲液混匀,共计50mL,4℃保存备用。

3)亲虾产卵及收集卵子:亲虾在达到性成熟后,于晚上7点轻轻把亲虾隔离池中的母虾性腺成熟的亲虾挑出,检查是否交配完成,已交配母虾即母虾生殖器处有公虾的精夹并且牢固,放到产卵隔离池,产卵隔离池为水泥池,面积25平方米,水位0.6m,水为经过陶氏处理器处理过的干净水,水温控制在29℃,PH8.6,溶解氧5mg/L以上,水中总氨氮为0。未交配的母虾放回亲虾隔离池的网箱,挑完所有池子中所有性腺饱满的母虾后,再拿出网箱,使未授精的母虾回到亲虾隔离池中。当晚挑出授精合格的母虾15尾。网箱长宽高为1m*1m*1m,四周用40目的网目围起来,上下两面为放空。产卵时保持安静,关闭所有灯光,提高产卵率。于晚上12点从产卵隔离池中轻轻挑出母虾,亲虾隔离池。隔日凌晨1点用300目的网箱及300目的捞网收集产卵离池中的卵子。将收集到的亲虾卵放于20L的白桶中。白桶中水为经过陶氏水处理器处理的干净水,水温29℃,PH8.6,溶解氧5mg/L以上,水中氨氮亚硝酸盐均为0。在白桶中放置微孔暴气,调整气量至微沸腾状态,用10ml的液移滴管取10ml,放到100ml的烧杯中,烧杯中再加入90ml干净的超滤水,用1ml玻璃液移管取1ml,计算出液移管中的虾卵数量尾16个,由此可以得知虾卵数量总共为320万个。

4)洗卵:用500ml的烧杯小心从白桶中取500ml含有虾的水10杯,随机分别放置编号为1-10的清洗系统装置中的集卵桶,可知每个清洗系统装置中虾卵的数量为8万个。清洗系统装置中的水为经过陶氏水处理器处理过的干净水,水温控制在29℃,PH8.6,溶解氧5mg/L以上,水中总氨氮亚硝酸盐均为0,水中加入H溶液2ppm,即0.08ml的H试剂,均匀混合。用60目的捞网小心捞出肉眼可见的母虾粪便及杂质,调节集卵桶中的微孔增氧气石至微微沸腾的状态,使虾卵在该溶液中浸泡2分钟。2分钟后,往集卵桶中缓缓加入准备好的清洗水。清洗水为经过陶氏水处理器处理过的干净水,水温控制在29℃,PH8.6,水中总氨氮亚硝酸盐均为0。使清洗系统装置内的水边进边排,流入的水为清洗桶体积的20倍,合计流入800L的清洗水。清洗完后,轻轻拿出集卵桶,把集卵桶里的卵转移到对应编号1-10的孵化桶。孵化桶中的水为经过陶氏水处理器处理过的干净水,水位为1m,水温32℃,PH8.6,溶解氧5mg/L以上,水中氨氮亚硝酸盐均为0。孵化桶中放置一个微孔增氧气石,气量调节至微微沸腾状态。孵化桶正上方40cm处安装一盏50w的白炽灯,孵化期间白炽灯保持常亮状态。孵化桶放置于离地35cm的台面上。

上述的H试剂为阴离子聚丙烯酰胺、聚维酮碘、纯净水按照1∶5∶10的比例配置。上述的清洗系统装置包括两个部分,第一部分为清洗桶,清洗桶长为40cm,宽为40cm,高为25cm的正方形塑料桶。第二部分为集卵桶,集卵桶半径15cm,高为35cm的圆形塑料桶,在距离桶底10cm处有一块长方形环形切割,切割的孔洞为长40cm,宽30cm,孔洞中固定一块250目的滤网。使用过程中,集卵桶放在清洗桶里面,往集卵桶中加水,水会带着细小粪便、杂质及虾肝肠胞子虫从滤网中流出来。集卵桶中放一个微孔增氧气石,气量的大小调节至微微沸腾。上述的孵化桶为底部半径25cm,高1.5m的塑料圆桶,桶底装有32mm口径的pvc管,出水口装配球阀跟32mm的塑料软管15cm,桶内部装配弯头与20cm高的32mm口径的pvc管。

5)洗幼体:隔天中午12点,检查编号1-10的孵化桶,均正常孵化。取编号11-20的清洗系统装置放置于孵化桶下方。清洗系统装置中的水为经过陶氏水处理器处理过的干净水,水温控制在32℃,PH8.6,水中总氨氮亚硝酸盐均为0。孵化桶的放置高于地面35cm的台面上。关掉孵化桶里的微孔增氧气石,静置10分钟。10分钟后打开集卵桶中的微孔增氧,气量大小调节至微微沸腾。再打开孵化桶下方的pvc球阀,调整大小,使带有幼体的水流缓缓流入对应的清洗系统装置中的集卵桶,直至无水流出为止。收集好幼体后,用500ml的烧杯从清洗桶中取500ml的水出来,放0.08ml的H试剂,均匀混合后,倒入即集卵桶,轻轻上下晃动集卵桶,使清洗桶和集卵桶的溶液均匀分布,打开已经准备好的清洗水,使清洗水缓缓流入集卵桶。清洗水为经过陶氏水处理器处理过的干净水,水温控制在32℃,PH8.6,水中总氨氮亚硝酸盐均为0。使清洗系统装置内的水边进边排,流入的水为清洗桶体积的40倍,合计流入1600L的清洗水。清洗完后,收集编号11-20的清洗系统装置里的幼体,送至隔离育苗池,进入常规标准的育苗程序。

实施例2

1)亲虾的选择与暂养:按照雌雄比为1∶2的比例选择健康的亲虾,健康亲虾为体长16cm、体重为32g、体型大、体色正常、副肢完整、鳃部清洁、无特定病毒感染。所述的亲虾暂养方法为:按照14尾/m2的密度将亲虾放入亲虾隔离池,亲虾隔离池的大小为25m2的水泥池,水深0.6m,隔离池使用前用PH≥14的NaOH溶液浸泡24小时,整个隔离场的用水经过陶氏水处理器,过滤孔径为0.1~0.2um,每天按照40%的进行换水,在整个暂养期间水温控制在28℃,盐度为28-34‰,溶氧保证在5mg/L以上,PH8.4,水中总氨氮含量低于0.6mg/L。每天按照对虾体重的2%投喂亲虾饲料,每天投喂4次。

2)亲虾的感染与强化:亲虾在隔离场暂养10天后,开始投喂拌有虾肝肠胞子虫液的亲虾饲料,拌料的量为10ml/kg,投喂量为体重的2%。连续投喂15天后,取亲虾隔离池亲虾所产出的新鲜粪便,经PCR检测证明为虾肝肠胞子虫阳性。检测完隔天减除亲虾隔离池中母虾的眼柄,换水量每天换60%,光照强度控制在500x。将亲虾饲料、沙虫、鱿鱼、牛肝等按照1∶3∶1∶1的比例饲喂亲虾。每天投喂量按照亲虾体重的2%计算,每天投喂4次。养殖20天后,亲虾大小达到47g。母虾性腺饱满,公虾精夹成熟。

上述的虾肝肠胞子虫液的制备方法为:在爆发虾肝肠胞子虫的养殖池塘取粪便,该虾池肝肠孢子虫症状明显,经PCR检测证明为虾肝肠胞子虫阳性。取0.1g爆发虾肝肠胞子虫的对虾粪便放入匀浆器中,迅速加入1mL的LPBS缓冲液并浴研磨均匀,然后将虾肝肠胞子虫液置入1.5mL的EP管中3000r/min离心5min,取上清液200uL加入到1800uL的PBS缓冲液,用经高温消毒过的装有0.22uL孔目的过滤器过滤。取滤液500uL加入到49.5mL且PH7.4的PBS缓冲液混匀,共计50mL,4℃保存备用。

3)亲虾产卵及收集卵子:亲虾在达到性成熟后,于晚上7点轻轻把亲虾隔离池中的母虾性腺成熟的亲虾挑出,检查是否交配完成,已交配母虾即母虾生殖器处有公虾的精夹并且牢固,放到产卵隔离池,产卵隔离池为水泥池,面积25平方米,水位0.6m,水为经过陶氏处理器处理过的干净水,水温控制在29℃,PH8.4,溶解氧5mg/L以上,水中总氨氮为0。未交配的母虾放回亲虾隔离池的网箱,挑完所有池子中所有性腺饱满的母虾后,再拿出网箱,使未授精的母虾回到亲虾隔离池中。当晚挑出授精合格的母虾17尾。所述网箱长宽高为1m*1m*1m,四周用40目的网目围起来,上下两面为放空。产卵时保持安静,关闭所有灯光,提高产卵率。于晚上12点从产卵隔离池中轻轻挑出母虾,亲虾隔离池。隔日凌晨1点用300目的网箱及300目的捞网收集产卵离池中的卵子。将收集到的亲虾卵放于20L的白桶中。白桶中水为经过陶氏水处理器处理的干净水,水温29℃,PH8.6,溶解氧5mg/L以上,水中氨氮亚硝酸盐均为0。在白桶中放置微孔暴气,调整气量至微沸腾状态,用10ml的液移滴管取10ml,放到100ml的烧杯中,烧杯中再加入90ml干净的超滤水,用1ml玻璃液移管取1ml,计算出液移管中的虾卵数量尾13个,由此可以得知虾卵数量总共为280万个。

4)洗卵:用500ml的烧杯小心从白桶中取500ml含有虾的水10杯,随机分别放置编号为1-10的清洗系统装置中的集卵桶,可知每个清洗系统装置中虾卵的数量为7万个。清洗桶中清洗系统装置包扣清洗桶和集卵桶。清洗系统装置中的水为经过陶氏水处理器处理过的干净水,水温控制在29℃,PH8.4,溶解氧5mg/L以上,水中总氨氮亚硝酸盐均为0,水中加入H溶液2ppm,即0.08ml的H试剂,均匀混合。用60目的捞网小心捞出肉眼可见的母虾粪便及杂质,调节集卵桶中的微孔增氧气石至微微沸腾的状态,使虾卵在该溶液中浸泡2分钟。2分钟后,往集卵桶中缓缓加入准备好的清洗水。清洗水为经过陶氏水处理器处理过的干净水,水温控制在29℃,PH8.4,水中总氨氮亚硝酸盐均为0。使清洗系统装置内的水边进边排,流入的水为清洗桶体积的20倍,合计流入800L的清洗水。清洗完后,轻轻拿出集卵桶,把集卵桶里的卵转移到对应编号1-10的孵化桶。孵化桶中的水为经过陶氏水处理器处理过的干净水,水位为1m,水温32℃,PH8.4,溶解氧5mg/L以上,水中氨氮亚硝酸盐均为0。孵化桶中放置一个微孔增氧气石,气量调节至微微沸腾状态。孵化桶正上方40cm处安装一盏50w的白炽灯,孵化期间白炽灯保持常亮状态。孵化桶放置于离地35cm的台面上。

上述的H试剂为:阴离子聚丙烯酰胺、聚维酮碘、纯净水按照1∶5∶10的比例配置。上述的清洗系统装置包括两个部分,第一部分为清洗桶,清洗桶长为40cm,宽为40cm,高为25cm的正方形塑料桶。第二部分为集卵桶,集卵桶半径15cm,高为35cm的圆形塑料桶,在距离桶底10cm处有一块长方形环形切割,切割的孔洞为长40cm,宽30cm,孔洞中固定一块250目的滤网。使用过程中,集卵桶放在清洗桶里面,往集卵桶中加水,水会带着细小粪便、杂质及虾肝肠胞子虫从滤网中流出来。集卵桶中放一个微孔增氧气石,气量的大小调节至微微沸腾。上述的孵化桶为底部半径25cm,高1.5m的塑料圆桶,桶底装有32mm口径的pvc管,出水口装配球阀跟32mm的塑料软管15cm,桶内部装配弯头与20cm高的32mm口径的pvc管。

5)洗幼体:隔天中午12点,检查编号1-10的孵化桶,均正常孵化。取编号11-20的清洗系统装置放置于孵化桶下方。清洗系统装置中的水为经过陶氏水处理器处理过的干净水,水温控制在32℃,PH8.6,水中总氨氮亚硝酸盐均为0。孵化桶的放置高于地面35cm的台面上。关掉孵化桶里的微孔增氧气石,静置10分钟。10分钟后打开集卵桶中的微孔增氧,气量大小调节至微微沸腾。再打开孵化桶下方的pvc球阀,调整大小,使带有幼体的水流缓缓流入对应的清洗系统装置中的集卵桶,直至无水流出为止。收集好幼体后,用500ml的烧杯从清洗桶中取500ml的水出来,放0.08ml的H试剂,均匀混合后,倒入即集卵桶,轻轻上下晃动集卵桶,使清洗桶和集卵桶的溶液均匀分布,打开已经准备好的清洗水,使清洗水缓缓流入集卵桶。清洗水为经过陶氏水处理器处理过的干净水,水温控制在32℃,PH8.4,水中总氨氮亚硝酸盐均为0。使清洗系统装置内的水边进边排,流入的水为清洗桶体积的40倍,合计流入1600L的清洗水。清洗完后,收集编号11-20的清洗系统装置里的幼体,送至隔离育苗池,进入常规标准的育苗程序。

实施例3

1)亲虾的选择与暂养:按照雌雄比为1∶2的比例选择健康的亲虾,健康亲虾为体长18cm、体重为40g、体型大、体色正常、副肢完整、鳃部清洁、无特定病毒感染。亲虾暂养方法为:按照11尾/m2的密度将亲虾放入亲虾隔离池,亲虾隔离池的大小为25m2的水泥池,水深0.6m,隔离池使用前用PH≥14的NaOH溶液浸泡24小时,整个隔离场的用水经过陶氏水处理器,过滤孔径为0.1~0.2um,每天按照40%的进行换水,在整个暂养期间水温控制在28℃,盐度为28-34‰,溶氧保证在5mg/L以上,PH8.7,水中总氨氮含量低于0.6mg/L。每天按照对虾体重的2%投喂亲虾饲料,每天投喂4次。

2)亲虾的感染与强化:亲虾在隔离场暂养10天后,开始投喂拌有虾肝肠胞子虫液的亲虾饲料,拌料的量为10ml/kg,投喂量为体重的2%。连续投喂15天后,取亲虾隔离池亲虾所产出的新鲜粪便,经PCR检测证明为虾肝肠胞子虫阳性。检测完隔天减除亲虾隔离池中母虾的眼柄,换水量每天换60%,光照强度控制在500x。将亲虾饲料、沙虫、鱿鱼、牛肝等按照1∶3∶1∶1的比例饲喂亲虾。每天投喂量按照亲虾体重的2%计算,每天投喂4次。养殖20天后,亲虾大小达到60g。母虾性腺饱满,公虾精夹成熟。

上述的虾肝肠胞子虫液的制备方法为:在爆发虾肝肠胞子虫的养殖池塘取粪便,该虾池肝肠孢子虫症状明显,经PCR检测证明为虾肝肠胞子虫阳性。取0.1g爆发虾肝肠胞子虫的对虾粪便放入匀浆器中,迅速加入1mL的LPBS缓冲液并浴研磨均匀,然后将虾肝肠胞子虫液置入1.5mL的EP管中3000r/min离心5min,取上清液200uL加入到1800uL的PBS缓冲液,用经高温消毒过的装有0.22uL孔目的过滤器过滤。取滤液500uL加入到49.5mL且PH7.4的PBS缓冲液混匀,共计50mL,4℃保存备用。

3)亲虾产卵及收集卵子:亲虾在达到性成熟后,于晚上7点轻轻把亲虾隔离池中的母虾性腺成熟的亲虾挑出,检查是否交配完成,已交配母虾即母虾生殖器处有公虾的精夹并且牢固,放到产卵隔离池,产卵隔离池为水泥池,面积25平方米,水位0.6m,水为经过陶氏处理器处理过的干净水,水温控制在29℃,PH8.7,溶解氧5mg/L以上,水中总氨氮为0。未交配的母虾放回亲虾隔离池的网箱,挑完所有池子中所有性腺饱满的母虾后,再拿出网箱,使未授精的母虾回到亲虾隔离池中。当晚挑出授精合格的母虾11尾。所述网箱长宽高为1m*1m*1m,四周用40目的网目围起来,上下两面为放空。产卵时保持安静,关闭所有灯光,提高产卵率。于晚上12点从产卵隔离池中轻轻挑出母虾,亲虾隔离池。隔日凌晨1点用300目的网箱及300目的捞网收集产卵离池中的卵子。将收集到的亲虾卵放于20L的白桶中。白桶中水为经过陶氏水处理器处理的干净水,水温29℃,PH8.6,溶解氧5mg/L以上,水中氨氮亚硝酸盐均为0。在白桶中放置微孔暴气,调整气量至微沸腾状态,用10ml的液移滴管取10ml,放到100ml的烧杯中,烧杯中再加入90ml干净的超滤水,用1ml玻璃液移管取1ml,计算出液移管中的虾卵数量尾13个,由此可以得知虾卵数量总共为300万个。

4)洗卵:用500ml的烧杯小心从白桶中取500ml含有虾的水10杯,随机分别放置编号为1-10的清洗系统装置中的集卵桶,可知每个清洗系统装置中虾卵的数量为75000个。清洗桶中清洗系统装置包扣清洗桶和集卵桶。清洗系统装置中的水为经过陶氏水处理器处理过的干净水,水温控制在29℃,PH8.7,溶解氧5mg/L以上,水中总氨氮亚硝酸盐均为0,水中加入H溶液2ppm,即0.08ml的H试剂,均匀混合。用60目的捞网小心捞出肉眼可见的母虾粪便及杂质,调节集卵桶中的微孔增氧气石至微微沸腾的状态,使虾卵在该溶液中浸泡2分钟。2分钟后,往集卵桶中缓缓加入准备好的清洗水。清洗水为经过陶氏水处理器处理过的干净水,水温控制在29℃,PH8.7,水中总氨氮亚硝酸盐均为0。使清洗系统装置内的水边进边排,流入的水为清洗桶体积的20倍,合计流入800L的清洗水。清洗完后,轻轻拿出集卵桶,把集卵桶里的卵转移到对应编号1-10的孵化桶。孵化桶中的水为经过陶氏水处理器处理过的干净水,水位为1m,水温32℃,PH8.4,溶解氧5mg/L以上,水中氨氮亚硝酸盐均为0。孵化桶中放置一个微孔增氧气石,气量调节至微微沸腾状态。孵化桶正上方40cm处安装一盏50w的白炽灯,孵化期间白炽灯保持常亮状态。孵化桶放置于离地35cm的台面上。

上述的H试剂为:阴离子聚丙烯酰胺、聚维酮碘、纯净水按照1∶5∶10的比例配置。上述的清洗系统装置包括两个部分,第一部分为清洗桶,清洗桶长为40cm,宽为40cm,高为25cm的正方形塑料桶。第二部分为集卵桶,集卵桶半径15cm,高为35cm的圆形塑料桶,在距离桶底10cm处有一块长方形环形切割,切割的孔洞为长40cm,宽30cm,孔洞中固定一块250目的滤网。使用过程中,集卵桶放在清洗桶里面,往集卵桶中加水,水会带着细小粪便、杂质及虾肝肠胞子虫从滤网中流出来。集卵桶中放一个微孔增氧气石,气量的大小调节至微微沸腾。上述的孵化桶为底部半径25cm,高1.5m的塑料圆桶,桶底装有32mm口径的pvc管,出水口装配球阀跟32mm的塑料软管15cm,桶内部装配弯头与20cm高的32mm口径的pvc管。

5)洗幼体:隔天中午12点,检查编号1-10的孵化桶,均正常孵化。取编号11-20的清洗系统装置放置于孵化桶下方。清洗系统装置中的水为经过陶氏水处理器处理过的干净水,水温控制在32℃,PH8.7,水中总氨氮亚硝酸盐均为0。孵化桶的放置高于地面35cm的台面上。关掉孵化桶里的微孔增氧气石,静置10分钟。10分钟后打开集卵桶中的微孔增氧,气量大小调节至微微沸腾。再打开孵化桶下方的pvc球阀,调整大小,使带有幼体的水流缓缓流入对应的清洗系统装置中的集卵桶,直至无水流出为止。收集好幼体后,用500ml的烧杯从清洗桶中取500ml的水出来,放0.08ml的H试剂,均匀混合后,倒入即集卵桶,轻轻上下晃动集卵桶,使清洗桶和集卵桶的溶液均匀分布,打开已经准备好的清洗水,使清洗水缓缓流入集卵桶。清洗水为经过陶氏水处理器处理过的干净水,水温控制在32℃,PH8.7,水中总氨氮亚硝酸盐均为0。使清洗系统装置内的水边进边排,流入的水为清洗桶体积的40倍,合计流入1600L的清洗水。清洗完后,收集编号11-20的清洗系统装置里的幼体,送至隔离育苗池,进入常规标准的育苗程序。

以上所述,仅为本发明专利的具体实施方式,但本发明专利的保护范围并不局限于此,任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明专利所公开的范围内,根据本发明专利的技术方案及其构思加以等同替换或改变,都属于本发明专利的保护范围。

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