具体实施方式

电子烟和烟草加热装置对于减少烟草危害具有巨大的潜力；然而，需要纠正重要问题。首先，在吸烟者尝试了电子烟或烟草加热装置之后，完全采用这些气溶胶装置的吸烟者的比率较低且需要增加。其次，在经常使用电子烟或烟草加热装置的人群中，这个人群很大百分比仍然吸着其常见品牌的传统香烟。这称为“双重使用”，并且如本文所用，意指每天或少于每天，仍有规律地结合电子烟或结合烟草加热装置抽吸传统香烟。举例来说，在Philip Morris对美国(n＝969)、日本(n＝638)、南韩(n＝843)、意大利(n＝535)、德国(n＝377)和瑞士(n＝416)的THS-PBA-07研究中，在研究最后一周期间对香烟与的双重使用范围为瑞士的96％到南韩的84％。换句话说，瑞士和南韩分别只有4％和16％受试者落入“排它性使用率”类别，所述类别在研究中定义为≥95％HeatStick使用率。如果排它性使用率定义为99％到100％HeatStick使用率，则这些百分比是较低的。HeatStick是Philip Morris Products S.A.生产且销售的的烟草棒类型。

对于电子烟或烟草加热装置来说，为了显著地减少传统香烟对戒烟不感兴趣的吸烟者造成的危害，必须将尽可能多的吸烟者从香烟完全转用电子烟或烟草加热装置且为实现这一点，必须尽可能快速地使其转用。这需要使尽可能多的吸烟者尽可能快速地尝试电子烟或烟草加热装置且提高这些产品的采用率。在传统香烟和烟草加热产品的目前双重用户中，必须尽可能多地排除或至少减少抽吸传统香烟。在传统香烟和电子烟的目前双重用户中，必须尽可能多地排除或至少减少抽吸传统香烟。最近的市场数据表明，吸烟者转用烟草加热产品的比率在日本和其它市场已趋于稳定。传统香烟吸烟者在尝试电子烟或烟草加热产品后转用这些产品的采用率必需提高，并且在双重用户中，香烟使用必需被电子烟或烟草加热产品的使用完全替换或至少因电子烟或烟草加热产品的使用而减少。

因此，对于促进从未尝试电子烟或烟草加热装置的传统香烟吸烟者转用这些类型的产品之一以及促进传统香烟与电子烟双重用户完全转用电子烟以及促进传统香烟与烟草加热装置的双重用户完全转用烟草加热装置的方法和产品，存在着重大需求。本公开的实施例涉及促进吸烟者转用电子烟或烟草加热装置的新颖方法和产品。为了促进香烟吸烟者过渡，在过渡期期间利用心理学的条件反射原理，其中消除来自可燃香烟的烟雾的愉悦作用，同时以来自电子烟或烟草加热装置的气溶胶奖赏吸烟者。

传统香烟的吸烟者紧接着体验到显著存在于烟草烟雾中的尼古丁引起的所谓‘喉咙冲击’。这就是吸烟者在吸入来自传统香烟的烟雾后立即在喉背部感受到的感觉。烟雾中的尼古丁从烟雾被吸入起大约十秒内到达脑。吸烟所致的这种尼古丁冲击引起轻度欣快。通常被吸烟者感知为积极的其它作用包括专注力和短期记忆的改善、心率增加和食欲抑制。吸烟者一再重复着渴求香烟、吸香烟、在吸香烟期间和之后获得奖赏性愉悦的循环，然后重新开始所述循环。

消除原理指出，当预先已经强化的行为(应答)不再产生强化结果时，所述行为最终停止发生。点燃和抽吸传统尼古丁内容物可燃香烟的行为被喉冲击强化，紧接着被轻度欣快和其它前述作用强化。抽吸极低尼古丁香烟就任何显著的程度来说不会引起喉冲击或传统香烟的其它作用。在研究型研究中，抽吸极低尼古丁香烟减少了每日香烟使用率和烟雾暴露并且使得对传统香烟的渴求减少。参见例如Donny等人，2015,新英格兰医学杂志(NEngl J Med)；373:1340-9。由于非常低的尼古丁香烟看起来像传统香烟那样有气味和烟雾，因此它们可用于促进吸烟者从传统香烟转用电子烟或烟草加热装置。

当一种行为(应答)是奖赏的或所述行为之后是奖赏性的另一个刺激时，发生积极的强化(强化)，从而增加这种行为的频率。在本文公开方法的过渡期期间，虽然抽吸极低尼古丁香烟消除了传统香烟的愉悦和强化作用，但使用电子烟或烟草加热装置强化了烟草的愉悦作用，由此促进吸烟者从传统香烟转用这些较少危害性产品中的任一种。举例来说，如图1所示，吸烟者停止抽吸传统香烟以起始方法A的示例性4周过渡期1(如下文进一步解释)且开始抽吸极低尼古丁香烟。吸烟者在无法抗拒地渴求传统香烟之后，开始使用电子烟或烟草加热装置并且还可以继续抽吸极低尼古丁香烟直至过渡期结束为止，此时，吸烟者停止抽烟极低尼古丁香烟并且继续使用电子烟或烟草加热装置。不同于流行的电子烟，全世界现有吸烟者中大约99.95％从未抽吸过极低尼古丁香烟，并且全世界现有吸烟者中大约97％从未使用过烟草加热装置。极低尼古丁香烟，包括本文中所公开的改进型，是吸烟者结合本文公开的方法使用以使吸烟者转用电子烟或烟草加热产品的理想选择。在美国，严格地用于研究型研究的极低尼古丁香烟是依据尼古丁研究型香烟药物供应规划，由美国国家卫生研究院(National Institutes of Health，NIH)的国家药物滥用研究所(NationalInstitute on Drug Abuse，NIDA)获得并且配送。

本申请中引用的各参考文献，包括专利、专利申请出版物、非专利文献和任何其它参考文献，均以全文引用的方式并入本文。术语“约”或“大约”中的每一个在本文中用于表示大概、大致、接近或近似。当术语“约”或“大约”结合数值或区间使用时，其通过合理地扩展界限高于和低于所述数值来修饰这个数值或区间。

如本文所用，“香烟”意指包覆于纸中且当点燃时燃烧且产生烟雾的任何烟草卷，其可以包括非烟草材料。香烟通常还包括过滤器、滤棒成型纸(围束过滤材料)和接装纸(将香烟纸与过滤器和滤棒成型纸固定)。胶水将香烟纸密封在一起，并且如果香烟有过滤器，则胶水将这些其它组件固定在一起。术语香烟还应包括包覆于含有烟草的任何物质(例如雪茄包装材料)中或作为香烟由消费者购买的任何烟草卷，由于其外观，可以向消费者提供填料中所用烟草的类型或其包装和标签。一个实例是‘小雪茄’，其可以包括过滤器且通常看起来非常类似于香烟。

术语香烟包括自卷式香烟和自制式香烟；两种类型的香烟典型地被最终用户放在一起。自卷式香烟能够简单地用烟草和卷烟纸制成，或可以利用香烟辊将烟草卷入卷烟纸中。自制式香烟通常是使用机械香烟注入机、结合香烟管(例如不含任何烟草的已组装过滤式香烟)制成。注入机将烟草注入烟草管并且得到看起来与典型的预卷市售香烟相同的香烟。最终用户也可以使用电动化香烟自制机制造香烟。

如本文所用，“填料”意指包覆于香烟杆中或包覆于烟草加热装置的烟草棒中(或包覆于烟草加热杆[例如]中，如果没有单独的固持器)的累积可吸材料(除香烟纸之外)，所述累积可吸材料由以下所构成的族群中选出：切割的烟草叶(烟丝)、烟草茎、再造烟草、膨胀烟草、大麻、衣壳、调味剂和其它添加剂，可以包括来自外部来源的其它生物碱或类大麻酚。再造烟草(又称为再造)通常纳入香烟填料中并且类似于烟丝烟草。膨胀烟草通常也纳入香烟填料中并且通过适合气体的膨胀而被加工，以便‘吹’烟草，从而减小烟丝条的密度且增大烟丝条的填充容量。膨胀烟草减少了香烟中所用烟草的重量。

如本文所用，“再造烟草薄片”意指通过辊压或铸造烟草尘、烟草茎和/或副产物而制成的烟草薄片，所述烟草尘、烟草茎和/或副产物预先已研磨成粉状，然后与粘结剂或粘合剂混合且可以包括保湿剂、香料、防腐剂、类大麻酚和/或其它萜烯类。所属领域中基本上存在两种类型的再造烟草：带铸和纸铸，但是对于其中的任一种类型来说，每个生产商具有稍微不同的工艺。基本上是‘已回收’烟草的再造烟草薄片一经制成，然后切成小条。条带的尺寸和形状类似于烟丝烟草并且这种“再造烟草”可以掺混到香烟的填料中。参见例如美国专利4,270,552和5,724,998，以及烟草：生产、化学处理和技术(Tobacco:Production,Chemistry and Technology)，第11章，377-379，1999；两者以全文引用的方式并入本文中。

“生物碱”是通常来源于植物的一类含氮化合物。举例来说，尼古丁是市售传统香烟烟草中所发现的主要生物碱，视烟草类型(例如烤烟)和种类(例如K326)而定，其占烟草叶的总生物碱的约95％。去氢新烟碱、去甲烟碱、新烟碱和其它生物碱占总生物碱的剩余部分。视烟草类型和品种而定，在烟草叶中，去氢新烟碱占约1％至约4％，去甲烟碱占约1％至约3％，且新烟碱占约0.02％至约0.4％。如本文所用，‘尼古丁’、‘去氢新烟碱’和‘新烟碱’可以衍生自任何植物物质，包括烟草属(Nicotiana)的任何物质，并且这些生物碱中的任一种也可以合成，或者是类似物，或者以有机酸盐形式制成。尼古丁、去氢新烟碱和新烟碱的含义中分别包括合成的尼古丁、合成的去氢新烟碱和合成的新烟碱、尼古丁的类似物、去氢新烟碱的类似物和新烟碱的类似物，以及有机酸的尼古丁盐、有机酸的去氢新烟碱盐和有机酸的新烟碱盐。参见例如Sisson等人1990Beitrage zur TabakforschungInternational，第14卷，第6期，6月-7月。

如本文所用，“传统香烟”意指常规尼古丁含量为每支香烟至少9mg的香烟。每支香烟的尼古丁含量是香烟棒中的填料重量与香烟棒中的填料尼古丁含量的乘积。流行的品牌通常含有大约13mg尼古丁/香烟。举例来说，如图2所示，香烟(代码102)含有13.04mg尼古丁，等于填料重量660mg乘以填料的尼古丁含量19.75mg/g。在图2所分析的23种美国市售香烟品牌样式中，每支香烟的尼古丁含量在9.94mg(-代码116)到16.18mg(-代码106)范围内并且平均为13.25mg。参见Morton等人，2008，管制毒理学和药理学(Regul Toxicol Pharmacol).数字对象标识符：10.1016/j.yrtph.2008.03.001。然而，每支香烟的尼古丁含量可以超过20mg；图2中未显示这些较高尼古丁的品牌。

市售香烟中的填料重量可以在各品牌之间大幅变化并且取决于多种因素，例如填料中所含组分的比率(例如全叶烟草比膨胀烟草更重)、烟丝条长度和周长(体积)、水分含量，以及每支香烟装填时的填料密度水平。在图2中所分析且所示的23种品牌样式中，每支香烟的填料重量在480mg(-代码120)到800mg(-代码106)范围内，并且平均为659mg。

市售香烟填料中尼古丁含量也可以在各品牌之间大幅变化。一个主要因素是所用烟草的类型和所用各种类型的百分比。一般来说，白肋烟草(burley tobacco)具有最高的尼古丁含量，继之为烤烟烟草和东方烟草。一些香烟品牌包括烤烟烟草而不含任何白肋或东方烟草，其它包括烤烟和白肋烟草而不含东方烟草，且其它包括所有三种烟草类型。大多数香烟品牌也含有再造烟草和膨胀烟草。填料尼古丁含量的另一个主要因素是填料中的非尼古丁组分(例如衣壳和热销香料)的量。在图2所分析的23种品牌样式中，填料的尼古丁含量在16.85mg/g(GPC-代码116)到24.27mg/g(Merit-代码120)范围内，填料的平均尼古丁含量是20.18mg/g，且每支香烟的平均尼古丁含量是13.25mg。

3R4F参考香烟是由肯塔基大学的肯塔基烟草研发中心(Kentucky TobaccoResearch&Development Center of the University of Kentucky)供应给烟草制造商并且是确立已久的用于测量香烟填料和烟雾化学物质的标准。3R4F参考香烟填料中的烟草重量(13％OV)是0.783克，并且填料每克含有20.5mg(2.05％)总生物碱。香烟因此含有约16.05mg总生物碱。尽管肯塔基大学对3R4F参考香烟的分析未公开总生物碱中的尼古丁部分，但是由于尼古丁典型地占烟草中的总生物碱的大约95％，因此3R4F参考香烟的尼古丁含量是约15.7mg。

如本文所用，“极低尼古丁香烟”意指每支香烟含有2.0毫克(mg)或更少尼古丁的香烟，例如每支香烟少于0.05mg、0.10mg、0.15mg、0.20mg、0.25mg、0.30mg、0.35mg、0.40mg、0.45mg、0.50mg、0.55mg、0.60mg、0.65mg、0.70mg、0.75mg、0.80mg、0.85mg、0.90mg、0.95mg、1.00mg、1.05mg、1.10mg、1.15mg、1.20mg、1.25mg、1.30mg、1.35mg、1.40mg、1.45mg、1.50mg、1.55mg、1.60mg、1.65mg、1.70mg、1.75mg、1.80mg、1.85mg、1.90mg或1.95mg尼古丁。这是按照将香烟棒中的填料重量乘以香烟棒中的填料的尼古丁含量来计算。例如，含有2.0mg尼古丁且重量为0.667克的香烟具有尼古丁含量为约3mg/g的填料。具有3mg/g尼古丁含量的填料相当于图2中的香烟品牌样式的烟草填料的平均尼古丁含量减少约85％。

总生物碱含量或个别生物碱含量(例如尼古丁、去氢新烟碱或新烟碱的含量)能够利用所属领域中已知的若干方法测量。实例包括基于气体色谱法(GC)和高效液相色谱法的定量。参见例如Lisko等人2013，分析化学(Anal Chem)，3月19日；85(6):3380-3384，所述文献提供了用于测量各香烟品牌的填料和各烟草类型(例如白肋烟草)中的生物碱数量的以下方法。次要生物碱的分析已利用气相色谱法(GC)联合广谱的检测技术执行，所述检测技术包括火焰离子化检测(FID)、氮-磷检测(NPD)和质谱法(MS)。其它分析方法包括高效液相色谱-紫外检测(HPLC-UV)、毛细管区电泳-紫外检测(CZE-UV)、胶束动电学毛细管色谱-紫外检测(MECC-UV)、氮化学发光检测(NCD)和微乳剂动电学色谱-紫外检测(MEEKC-UV)。气相色谱-串联质谱(GC-MS/MS)按照多重反应模式(MRM)模式使用允许增大化合物特异度，这是通过排除共享相同母体质量但缺乏适当过渡金属离子的其它化合物所产生的基质离子、从而显著减少背景干扰和减小检测极限来实现的。除非另外暗示说明，否则分析物测量(例如尼古丁)均以干重计。

如本文所用，“烟草加热装置”是加热、但不燃烧烟草，并且产生气溶胶而非烟草烟雾的装置。烟草加热装置可包括固持器、烟草棒和充电器。在这种示例性配置中，将烟草棒例如插入固持器中，借助于电子控制式加热叶片加热烟草材料。在许多方面不同于香烟。举例来说，用于产品的中的烟草是由烟草粉末制成并且烟草经过独特处理且经特别设计以通过固持器发挥功能，从而产生气溶胶。不同于含有烟丝填料(香烟中发现的烟草叶丝小碎片)的香烟，含有特别处理的烟草，其在添加水、甘油、瓜尔胶(guar gum)(半纤维素)和纤维素纤维之后，已经再造成薄片(称为铸叶)。与香烟不同，这种烟草棒含有两个独特且独立的过滤器、一个用于冷却气溶胶的聚合物膜过滤器和一个用于模拟香烟的这个方面的低密度乙酸纤维素过滤嘴。中空乙酸盐管将烟草塞与聚合物膜过滤器分离。充电器向固持器充电并且储存足以供约20个烟草棒使用的能量，并且能够从家用电源中充电。

是通过用户将烟草棒插入固持器中且借助于开关开启装置来操作。这些步骤初始是通过插入烟草塞中的加热叶片加热烟草。电子控制加热与烟草的独特处理组合阻止了燃烧发生。固持器通过加热叶片向烟草棒供热约六分钟且允许用户在这段时间期间吹吸多达14次。小心地控制加热叶片的温度，并且如果其操作温度超过350℃，则停止向叶片供应能量。烟草中所测的温度从未达到350℃，并且大部分烟草保持低于250℃。

由于加热烟草低于燃烧水平，因此产生了在组成上与香烟烟雾差异极大的气溶胶。与香烟烟雾相比，气溶胶中含有的危害性和潜在危害性成分(HPHC)的含量显著减少，并且气溶胶主要由水、甘油和尼古丁组成。产生的气溶胶的化学分析证实气溶胶所含HPHC的含量实质上减少。平均而言，这相当于HPHC含量减少>90％(相较于3R4F参考香烟的烟雾)。

在另一个示例性配置中，烟草加热装置如同传统香烟一样点燃。可以不存在任何固持器、充电器或电池，并且可以用烟草加热杆直接加热烟草。举例来说，点燃的碳热源加热(而不燃烧)烟草并且类似于包含单独烟草棒的烟草加热装置产生气溶胶。举例来说，具有碳热源的烟草加热装置的类型紧密地类似于物理上的、但不燃烧的典型香烟。每个杆中含有产生吸入的气溶胶的抛弃式加热元件，本文中称为“烟草加热杆”或“加热杆”。这些类型的烟草加热装置还显著降低了HPHC的含量。一个实例是Philip Morris International正在开发的其它实例包括和它们之前在美国销售，但不再上市。在另一示例性配置中，烟草加热装置不具有固持器或充电器，且在每个加热杆中包括电池，且每个加热杆可以是可抛弃的。因此，应了解，低于燃烧点加热烟草(或烟草提取物或烟草形式，例如再造烟草)(而不燃烧烟草)以产生气溶胶的任何装置是烟草加热装置(或任何其它同义术语)，不论烟草棒是否与固持器或加热元件分开、不论是否需要对电池充电或甚至需要电池组、不论是否需要点燃某物(例如碳热源的末端)，和/或不论是否涉及任何电子器件。如本文所用，烟草加热装置、烟草加热产品、加热非燃烧烟草装置和加热非燃烧烟草产品是同义的。

烟草棒或加热杆容纳的烟草比香烟少。举例来说，每个含有约320mg填料，相比之下，传统香烟含有约480至约900mg填料。的尼古丁含量是约4.8mg，比传统香烟少得多，但是向吸烟者递送尼古丁的水平与传统香烟相当。由于不存在燃烧(包括吹吸之间)，因此烟草棒或加热杆中需要的烟草较少。参见Farsalinos等人，2017，尼古丁和烟草研究(Nicotine Tob Res)，6月16日，数字对象标识符：10.1093/ntr/ntx138；烟草加热系统(IQOS)，简报文件，2017年12月，Philip Morris Products S.A.制备，2018年1月24-25日的烟草产品科学顾问委员会会议(Tobacco Products Scientific AdvisoryCommittee Meeting)。烟草加热装置的每个烟草棒和不含单独固持器的产生气溶胶的每个烟草加热杆(杆本身产生热的元件)可以含有至少以下尼古丁含量：1.0mg、1.1mg、1.2mg、1.3mg、1.4mg、1.5mg、1.6mg、1.7mg、1.8mg、1.9mg、2.0mg、2.1mg、2.2mg、2.3mg、2.4mg、2.5mg、2.6mg、2.7mg、2.8mg、2.9mg、3.0mg、3.1mg、3.2mg、3.3mg、3.4mg、3.5mg、3.6mg、3.7mg、3.8mg、3.9mg、4.0mg、4.1mg、4.2mg、4.3mg、4.4mg、4.5mg、4.6mg、4.7mg、4.8mg、4.9mg、5.0mg、5.1mg、5.2mg、5.3mg、5.4mg、5.5mg、5.6mg、5.7mg、5.8mg、5.9mg、6.0mg、6.1mg、6.2mg、6.3mg、6.4mg、6.5mg、6.6mg、6.7mg、6.8mg、6.9mg、7.0mg、7.1mg、7.2mg、7.3mg、7.4mg、7.5mg、7.6mg、7.7mg、7.8mg、7.9mg、8.0mg、8.1mg、8.2mg、8.3mg、8.4mg、8.5mg、8.6mg、8.7mg、8.8mg、8.9mg或9.0mg。

如本文所用，“气溶胶装置”意指产生气溶胶以供吸入的任何装置，例如任何电子烟或烟草加热装置。

电子烟的典型组件包括可充电装置，包括将电子烟液转变成气溶胶的加热线圈和雾化器、容纳电子烟液的筒柱等(棒或匣)、衔嘴和位于可充电装置中的电池组。尽管存在可以涵盖不同步骤的许多外观和设计，但其操作通常是抽吸电子烟、启动加热元件使电子烟液气溶胶化以及吸入烟液气溶胶。电子烟液典型地含有尼古丁、水、香料和保湿剂。保湿剂充当溶解尼古丁和香料的载剂溶剂且在电子烟的雾化器上、在一定温度下气溶胶化。典型地，丙二醇和/或甘油是电子烟液中所用的溶剂。电子烟的容纳于筒中的电子烟液含有尼古丁的含量例如因品牌和品牌样式而大幅变化。举例来说，每个匣含有0.7ml体积的尼古丁，等于5重量％的尼古丁。一个匣就本文中任何方法的供应量计算而言，大约相当于20支香烟持续约200次吹吸。每个品牌的电子烟可以在尼古丁含量和电子烟液体积方面不同。筒、匣、棒(或其类似物)的电子烟液中所含的尼古丁百分比至少可以是大致以下重量百分比：0.25％、0.50％、0.75％、1.0％、1.25％、1.5％、1.75％、2.0％、2.25％、2.5％、2.75％、3.0％、3.25％、3.5％、3.75％、4.0％、4.25％、4.5％、4.75％、5.0％、5.25％、5.5％、5.75％、6.0％、6.25％、6.5％、6.75、7.0％、7.25％、7.5％、7.75％、8.0％等等。或者，电子烟的筒、匣、棒(或其类似物)的电子烟液中所含的尼古丁的近似量可以是至少0.025ml、0.05ml、0.075ml、0.10ml、0.15ml、0.20ml、0.25ml、0.30ml、0.35ml、0.40ml、0.45ml、0.50ml、0.55ml、0.60ml、0.65ml、0.70ml、0.75ml、0.80ml、0.85ml、0.90ml、0.95ml、1.00ml、1.05ml、1.10ml、1.15ml、1.20ml、1.25ml等等。

电子烟装置有时基于其产品特征和特点，鉴定为第一代、第二代或第三代。第一代电子烟装置由于其被设计成在外观方面模拟传统香烟而称为‘雪茄类似物(cigalikes)’或气化棒(vape sticks)。第二代电子烟的特征可在于透明雾化器，所述透明雾化器是固持电子烟液、雾化器和电池组的透明筒。这些第二代装置相对大于第一代装置并且因透明储槽容纳电子烟液的量大于以往装置而有时称为‘储罐系统’。第三代装置通常被视为“气化产品”，并且与传统香烟几乎没有相似性。这些装置的特征可以是可建构的并且可以定制雾化器和电池组。

最新类型或第四代电子烟是使用尼古丁盐和有机酸。举例来说，匣(筒)含有基于盐的尼古丁电子烟液专有配方，包括苯甲酸(在烟草中发现的天然存在的成分)和其它物质。将苯甲酸与尼古丁盐组合时，有助于提供增强的满足感(相较于大部分电子烟)。是封闭系统，其匣不设计成可再填充的，并且可通过USB端口再充电。

在一些方面中，提供了促进对完全戒除烟草产品不感兴趣的吸烟者从抽吸传统尼古丁内容物可燃香烟转用电子烟或烟草加热装置的方法。在这种方法中，极低尼古丁香烟用作吸烟者的常用香烟品牌与电子烟之间或吸烟者的常用香烟品牌与烟草加热装置之间的桥梁。

在其它方面中，计算机或移动应用程序(App)有助于吸烟者利用所公开的方法和产品转用电子烟或烟草加热装置。

在其它方面中，提供了去氢新烟碱和/或新烟碱含量增加的极低尼古丁香烟，其可以根据所公开的方法使用。

在其它方面中，提供了过渡套装，其包含极低尼古丁香烟、烟草加热装置、烟草棒，以及有助于使吸烟者转用烟草加热装置的信息、说明和建议。

在其它方面中，提供了过渡套装，其包括极低尼古丁香烟、电子烟，以及有助于使吸烟者转用烟草加热装置的信息、说明和建议。

在其它方面中，提供了包含类大麻酚和/或无THC大麻的极低尼古丁香烟，其可以根据上述方法使用。在此方法中，极低尼古丁香烟中可以包括再造大麻或含有类大麻酚或无THC大麻的再造烟草。

1.低尼古丁烟草

可以采用多种方法来使极低尼古丁香烟中所用的烟草的尼古丁含量减少。这些方法包括植物育种技术、烟草品系或烟草品种的基因工程改造，和/或从传统烟草提取尼古丁。减少烟草植物(包括用于生产传统香烟的市售烟草品种)的尼古丁含量的方法可以包括植物育种技术。通过将来自古巴雪茄(Cuban cigar)烟草品种的两种低生物碱基因(nic1和nic2双重突变体)通过一系列回交而引入传统烟草品种中所生产的低尼古丁烟草品系的实例包括LA Burley 21、LAFC 53和LAMD 609。NIC1和NIC2基因座是普通烟草(N.tabacum)中的两个独立基因座，并且nic1和nic2突变分别减少尼古丁生物合成酶的表达水平和尼古丁含量。参见Legg等人，1969，遗传杂志(Journal of Heredity)第60卷，第4期：213-217；Hibi等人，1994，植物细胞(Plant Cell)6:723-35；Reed和Jelesko 2004，植物科学(PlantScience)167(5):1123-1130。

LA Burley 21(有时称为Burley 21LA)烟草是肯塔基大学农业实验站(肯塔基州列克星敦(Lexington,Kentucky))和美国农业部(马里兰州贝茨维尔(Beltsville,Maryland))的农作物研究署(Crops Research Division)农业研究服务中心(Agricultural Research Service，ARS)合作开发并且发布的遗传稳定育种品系。通过将来自古巴雪茄品种的nic1和nic2双重突变体基因引入Burley 21品种中来开发LABurley21。相较于Burley 21(用于香烟时的市售品种)的平均值3.5％，LA Burley 21的低生物碱含量是大约0.20％(以干重计)，大约减少94％。参见Legg等人，1970，LA Burley 21烟草胚质的登记(Registration of LA Burley 21Tobacco Germplasm)，登记号GP 8，《农作物科学(Crop Science)》，第10卷，1970年3月-4月：212。

LAFC 53(有时称为LA 53)是美国农业部农业研究服务中心和北卡罗莱纳州农业实验站合作开发且发布的低生物碱烤烟烟草品系。通过使含有nic1和nic2双重突变体的低生物碱品系与NC 95品种回交且选择低生物碱植物来开发出LAFC 53。所述品系于1974年发布给植物育种员、实验站和其它组织用于研究和育种目的。LAFC 53可以含有NC 95的尼古丁含量的少到大约10％(减少约90％)，是流行的市售烤烟烟草品种。参见Chaplin 1975，LAFC 53烟草胚质的登记(Registration of LAFC 53Tobacco Germplasm)，登记号GP 13，《农作物科学》(Crop Science)，15，1975年3月-4月：282。RJ Reynolds烟草公司和PhilipMorris在二十世纪八十年代期间研究且培育LAFC 53。参见烟草行业文件(TobaccoIndustry Documents)，贝茨文件(Bates Document)第505348876号，低尼古丁烟草(LowNicotine Tobacco)1985，农作物(Crop)，化学分析(Chemical Analysis)，RJ Reynolds烟草公司；以及烟草行业文件，贝茨文件第2031403998-2031404044号，1987年3月27日，项目(Project)1904，烟草生理学和生物化学(Tobacco Physiology and Biochemistry)，美国Philip Morris。

LAMD 609是由马里兰农业实验站开发并于1994年发布的马里兰州烟草的低生物碱胚质品系。LAMD 609来源于含有nic1和nic2双重突变体的LA Burley 21与MD 609品种之间的1970杂交。在1991年和1992年的2年现场研究中，在马里兰州中枢研究和教育中心(Central Maryland Research and Education Center)的上层万宝路机构，通过四次重复实验来评估LAMD 609、MD 609和LA Burley 21的农艺学表现和化学含量。与MD 609的1.93％相比，LAMD 609在这2年期间的总生物碱含量平均为0.06％，减少大约97％。参见Aycock等人，1998，LAMD 609烟草胚质的登记(Registration of LAMD 609TobaccoGermplasm)，登记号GP-52，PI 599689，农作物科学(Crop Science)，第38卷，1998年5月-6月：904；Aycock等人，1997，LAMD 609：低生物碱马里兰州烟草育种品系(A low-alkaloidMaryland tobacco breeding line)，马里兰州大学农艺学研究公告ARB-5。

基因工程是一种生产尼古丁含量减少的烟草或去氢新烟碱含量增加而尼古丁含量减少的烟草的优选方法。基因工程包括将核酸或特异性突变引入宿主生物体内、从而降低或增加所关注的基因产物(即，靶基因产物)的表达或功能的任何方法。举例来说，当植物包含例如抑制基因表达、使得靶基因的表达相较于对照植物减少的多核苷酸序列时，所述植物被基因工程改造。涉及尼古丁生物合成路径的任何酶可以是尼古丁减少的烟草品系的靶标。用于抑制表达的基因工程可以通过本领域已知的任何方法进行，例如反义技术、RNA干扰(RNAi)、核酶、CRISPR技术和微RNA(miRNA)。

如本文关于烟草所用，“下调”或“抑制”是同义的并且意指烟草植物(包括例如其衍生的子代植物)中的特定基因序列或其变异体或所述基因序列中的至少15个核苷酸的核苷酸片段的表达相较于在类似生长条件下生长时的对照植物已经减少，其中所述对照植物与烟草植物共享基本上相同的基因背景，例外为烟草植物中的尼古丁变化和任何相关的附带影响减少。

在一些示例性实施例中，通过对烟草植物进行基因工程改造以包含直接下调一种或多种基因表达或活性的转基因或突变来提供促进吸烟者转用电子烟或烟草加热装置的极低尼古丁香烟中所用的低尼古丁烟草，所述一种或多种基因编码例如以下产物：腐胺N-甲基转移酶(PMT)、喹啉酸磷酸核糖基转移酶(QPT)、N-甲基腐胺氧化酶(MPO)、BBL(BBL酶是含有黄素的氧化酶)、A622(A622酶是NADPH依赖性还原酶的PIP家族成员)，和MATE转运体。所属领域中已知的任何适合方法能够用于生产低尼古丁烟草，包括有义抑制、有义共抑制、反义抑制、RNAi抑制、双链RNA(dsRNA)干扰、发夹RNA干扰和含有内含子的发夹RNA干扰、核酶、扩增子介导的干扰、小干扰RNA、人工反式作用siRNA、人工或合成微RNA、敲除方法、随机诱变和靶向诱变方法。举例来说，Mark Conkling博士在北卡罗莱纳州立大学(NorthCarolina State University)利用QPT(核苷酸序列示于SEQ ID NO:1中且氨基酸序列示于SEQ ID NO:2中)的反义抑制开发出了极低尼古丁烟草品种Vector 21-41。参见美国专利6,586,661。这种经基因修饰的白肋品种的尼古丁含量约为0.10％，大约是其亲代LA Burley21的尼古丁含量的一半。参见例如美国植物品种保护证书第200100039号和Xie等人，2004，烟草科学的最新进展(Recent Advances in Tobacco Science)，30:17-37。

在一些示例性实施例中，通过通过精确的基因工程技术将非转基因突变引入一个或多个尼古丁生物合成基因(包括(但不限于)PMT基因家族、QPT、MPO、BBL基因家族，包括NBB1和A622)中来产生低尼古丁烟草品系或烟草品种(促进吸烟者转用电子烟或烟草加热装置的极低尼古丁香烟中所用)。NBB1核苷酸序列示于SEQ ID NO:11中且氨基酸序列示于SEQ ID NO:12中。由于转基因烟草商业化存在许多障碍，例如让美国和其它国家放松对基因修饰农作物的管制要求，因此，不产生含有外来DNA(不是烟草属植物原生的DNA)的低尼古丁植物品系的基因工程改造方法优于产生含有外来DNA的烟草的转基因方法。举例来说，北卡罗莱纳州立大学开发了一种突变育种方法，以识别BBL基因家族中的表达最高的三种同功异型物中的EMS诱导突变。小蘖碱桥酶样(BBL)在烟草生物碱形成时起主要作用。BBL酶是含有黄素的氧化酶，其被认为涉及用于生产尼古丁的最终氧化步骤。抑制BBL基因家族的表达的影响产生低尼古丁表型。参见Kajikawa等人，2011，液泡局域化小蘖碱桥酶样蛋白质是烟草中的尼古丁生物合成的后期步骤所必需的(Vacuole-Localized Berberine BridgeEnzyme-Like Proteins Are Required for a Late Step of Nicotine Biosynthesis inTobacco)，植物生理学(Plant Physiology)，4月，第155卷，第2010-2022页；Lewis等人，2015，公共科学图书馆·综合(PLOS One)，2月17日；10(2):e0117273，两个文献均以全文引用的方式并入本文中。

在其它示例性实施例中，提供低尼古丁烟草(促进吸烟者转用电子烟或烟草加热装置的极低尼古丁香烟中所用)的非转基因方法包括利用随机诱变方法或通过精确的基因体工程化技术，例如转录活化因子样效应物核酸酶(TALEN)、大范围核酸酶、锌指核酸酶和CRISPR-cas9系统。参见例如Gaj等人，2013，生物技术趋势(Trends in Biotechnology)，31(7):397-405；Bomgardner 2017，化学和工程新闻(Chemical&Engineering News)，第95卷，第24期：30-34。

在一些示例性实施例中，利用烟草品系或品种的基因工程转录因子来提供低尼古丁烟草(促进吸烟者转用电子烟或烟草加热装置的极低尼古丁香烟中所用)。转录因子是一种蛋白质，其利用DNA结合域结合到DNA区域(典型地为启动子区域)且减少或增加特异性基因的转录。如果转录因子的表达减少编码尼古丁生物合成酶的一种或多种基因的转录且减少尼古丁产生，则转录因子负向调控尼古丁生物合成。如果转录因子的表达增加编码尼古丁生物合成酶的一种或多种基因的转录且增加尼古丁产生，则转录因子正向调控尼古丁生物合成。转录因子是基于其DNA结合域的相似性分类。参见Todd等人，2010，功能基因体学筛选识别了调控本氏烟草中的生物碱生物合成的多种转录因子(A functional genomicsscreen identifies diverse transcription factors that regulate alkaloidbiosynthesis in Nicotiana benthamiana)，植物杂志(The Plant Journal)，62，589-600，其以全文引用的方式并入本文中。

在一些示例性实施例中，对烟草品系或品种进行基因工程改造以在Nicl或Nic2基因座包含一个或多个非天然存在的突变体等位基因，从而减少或消除Nic1或Nic2基因座的一个或多个基因活性，产生低尼古丁烟草，所述低尼古丁烟草是促进吸烟者转用电子烟或烟草加热装置的极低尼古丁香烟中所用的。突变体Nicl或Nic2等位基因能够通过所属领域中已知的任何方法引入，包括随机诱变方法或通过精确的基因体工程技术，例如转录活化因子样效应物核酸酶(TALEN)、大范围核酸酶、锌指核酸酶和CRISPR-cas9系统。

现场种植的任何特定烟草品种或烟草品系中的尼古丁含量可以依据许多因素而变化，例如气候条件、肥料等级、土壤条件和去梢操作(去除烟草花，使尼古丁和其它烟草生物碱增加)以及种植地点。举例来说，干燥的气候条件通常使得烟草农作物的烟碱生物碱含量(包括尼古丁含量)更高。不同生长季节在同一现场种植的相同市售烟草品种可以使得烤烟中的尼古丁含量能够改变高达大约百分之四十。

在一些示例性实施例中，利用从传统烟草中提取尼古丁用于极低尼古丁香烟的工艺，以促进吸烟者转用电子烟或烟草加热装置。这些工艺的成本通常比种植尼古丁水平低的烟草更高，原因是需要额外的生产工艺。举例来说，从1989年到1991年试销的市售香烟已经使用超临界CO₂工艺从烟草中去除高达大约97％尼古丁，类似于生产脱咖啡因咖啡的工艺。结论是，从烟草中提取尼古丁还去除了对烟草味道特征重要的各种其它烟草叶化合物和组分。这些附带提取包括烟草植物的油和蜡。与柑橘水果中的精油类似，烟草中这些化合物的存在和平衡赋予其与烟草相关的特征风味和香气。去除这些化合物，或甚至浓度比的变化，会破坏植物的特征风味和香气。提取方法的优点在于从烟草中提取的尼古丁和其它烟碱生物碱可用于其它产品，例如电子烟。参见例如烟草行业文件，贝茨文件第2057908259-2057908291号，1994年9月1日，生物碱减少的烟草(ART)规划(AlkaloidReduced Tobacco(ART)Program)，美国Philip Morris。

2.评估并且使吸烟者转用电子烟或烟草加热装置

Fagerstrom测试是个人对传统香烟烟雾依赖性的短期便捷自报告测量方式。它询问吸烟者六个多选项问题。参见关于尼古丁依赖性的Fagerstrom测试：Fagerstrom耐受性调查表修订版中的表3，英国成瘾杂志(British Journal of Addiction)(1991)86，1119-1127。根据吸烟者对六个问题中的每一个问题的回答，其中就四个问题分配了0至1的得分，就两个问题分配了0至3的得分，所有六个问题的回答的得分结果相加在一起，总范围为0至10，在本文中称为“依赖性得分”。分值越高，表明对香烟烟雾的依赖程度越高。在Fagerstrom测试中得分在1与2之间的吸烟者被视为具有低依赖性，Fagerstrom得分为3或4被视为低至中度依赖性，得分为4被视为中度依赖性，且得分为5或更大被视为高度依赖性。参见Heatherton等人，1991，英国成瘾杂志(British Journal of Addiction)，86:1119-1127。存在测量尼古丁依赖性的其它方法，例如37项威斯康辛州抽烟依赖性动机目录(得分区间是11到77，分值越高，表明依赖性越大)。

吸烟者的过去传统香烟使用量是消除或改变任何正强化行为的重要考虑因素，包括本文所述的使吸烟者转用电子烟或烟草加热装置的方法。传统香烟使用量由年吸包数度量，即一个人吸烟的年数乘以此吸烟人在这个时间范围内每天吸烟的平均包数。举例来说，每天吸约1包烟(每包含有20支香烟)且如此吸烟15年的人等于15年包。年包范围如下评分：直至且包括五年包(评级为1)、超过五年包直至且包括十年包(评级为2)、超过十年包直至且包括十五年包(评级为3)、超过十五年包直至且包括二十年包(评级为4)、超过二十年包直至且包括二十五年包(评级为5)、超过二十五年包直至且包括三十年包(评级为6)、超过三十年包直至且包括三十五年包(评级为7)、超过三十五年包直至且包括四十年包(评级为8)、超过四十年包直至且包括四十五年包(评级为9)、超过四十五年包(评级为10)。5年包或更少(评级为1)的吸烟者通常比二十五年包(评级为5)的吸烟者更容易转用电子烟或烟草加热装置。

Fagerstrom依赖性得分与年包评级的组合相加在一起，在本文中称为“烟雾依赖性总分”，有助于确定使吸烟者转用电子烟或烟草加热装置的最优方法和产品变量(如下文所定义)，例如转用方法、过渡期的持续时间、极低尼古丁香烟的尼古丁含量，和/或个别吸烟者希望的烟草棒的尼古丁含量。举例来说，依赖性得分为7且年包评级为5(等于烟雾依赖性总分为12)的吸烟者需要的过渡期通常比依赖性得分为2且年包评级为1(等于烟雾依赖性总分为3)的吸烟者更长。

促进吸烟者转用电子烟或烟草加热装置的本文所述方法和这些方法的过渡期的持续时间可以改变。有助于吸烟者转用电子烟或烟草加热装置(在本文中能够使用计算机或移动应用程序)的个性化方法可以根据吸烟者的任何数目个“人口统计和烟草使用特征”确定，可以包括吸烟者的Fagerstrom依赖性得分、年包评级、吸烟年数、每天包数、烟雾依赖性总分、吸烟者首次如何学习应用程序、最后一个月每天吸烟平均数、常用香烟品牌、尼古丁产品(包括电子烟)的任何目前或以往使用、烟草加热产品的任何目前或以往使用、任何其它烟草产品的任何目前或以往使用、以往尝试戒烟(如果有)的次数、相较于完全戒烟的兴趣水平转用电子烟或烟草加热产品的兴趣水平、婚姻状况、重要的他人的吸烟状况和与吸烟者同居的任何人的吸烟状况、性别、年龄、种族、民族、国籍、所达到的最高教育水平、职业、工作时能够抽吸传统香烟、电子烟或烟草加热产品的容易程度。这些人口统计和烟草使用特征用于构建吸烟者概况，所述吸烟者概况可以输入到考虑各种因素并执行各种操作的计算系统或装置。

以此方式，软件基于特定吸烟者的信息或概况生成关于特定过渡方案和产品类型的说明和建议，以帮助吸烟者转用电子烟或烟草加热装置。如本文所用，术语“方法和产品变量”包括(a)使吸烟者转用电子烟或烟草加热产品的方法(例如方法A)和所述方法的任何变量，例如过渡期长度；(b)电子烟(例如和JUUL匣，其是设计成不可再装填电子烟液的封闭系统)或烟草加热产品(固持器和烟草棒，如相对于烟草加热杆)的类型、品牌和型号；(c)极低尼古丁香烟品牌；(d)所述方法在过渡期期间(以及潜在地在过渡期之后)的产品变量，例如极低尼古丁香烟、电子烟或烟草棒/加热杆的尼古丁、去氢新烟碱和新烟碱含量、极低尼古丁香烟、电子烟或烟草棒/加热杆的大麻含量或大麻素含量(如果有)，以及极低尼古丁香烟、电子烟或烟草棒/加热杆中的调味剂；以及(e)关于使用所述方法和产品(包括任何的每日提示、个别化或个性化方面，和递送方法)的信息、建议和说明(例如通过智能电话)。用于使传统香烟吸烟者转用电子烟或烟草加热装置的任何方法可以与本文公开的任何产品组合。

所述方法和产品变量的功效是基于吸烟者通常在过渡期使用过渡方案之后的一段时间(也可以在过渡期期间)使用电子烟或使用烟草棒(或使用烟草加热杆)且使用香烟(如果有)的百分比来测量。此测量期可以是任何天数，并且可以在任何时间点开始。例如，临床试验的测量期可以是紧接过渡期之后的1周。还可以有一个或多个随访测量期，例如紧接过渡期结束后的3个月和紧接过渡期结束后的6个月。在一些情况下，测量期可以在过渡期期间，例如过渡期的最后三天。临床试验中的转用功效的三种最高水平可以是以下：吸烟者完全转用烟草加热产品(≥99％和≤100％烟草棒使用率和≥0到≤1％香烟使用率)；吸烟者势不可挡地转用(≥90％且<99％烟草棒以及>1％且≤10％香烟)；以及吸烟者主要转用(≥70％且<90％烟草棒以及>10％且≤30％香烟)。当研究是为了根据吸烟者或吸烟者群体小组的某些概况测量方法和产品变量的组合对协助其转用电子烟或烟草加热产品的功效而执行时，这些类型的细节可以由管制机构确定，例如美国美国食品药物管理局(FDA)。

如本文所用，“最优方法和产品变量”意指推荐给吸烟者的方法和产品变量的组合，这在大多数情况下为吸烟者提供了转用电子烟或烟草加热产品的最高估计概率。最优方法和产品变量可以由支持应用程序的计算系统计算，并且基于具有相同或相似的人口统计和烟草使用特征的吸烟者的历史数据以及计算系统内的机器学习算法的预测建模。根据测量期期间的标准，转用意指例如烟草棒使用率≥70％且<90％以及香烟使用率>10％且≤30％，或者烟草棒使用率≥99％且≤100％以及香烟使用率≥0到≤1％。在某些情况下，算法可以推荐可能未向吸烟者提供转用电子烟或烟草加热产品的最高数学概率的方法和产品变量，以利于使算法了解哪些方法或产品变量针对给定档案或群体小组提高转用率。测量期可以是任何天数，并且可以在任何时间点开始。在一些示例性实施例中，对于吸烟者的群体或亚群，可以存在相同的方法和产品变量。举例来说，在吸烟者转用电子烟或烟草加热装置的临床试验中，某些研究组可能都使用相同方法和产品并且最有效的方案可能变成管制机构或健康保险商批准的商业产品。

在一些示例性实施例中，利用计算机或移动应用程序将吸烟者概况与人口统计和烟草使用特征最相似的已使用过本文方法且达成最佳转用结果的吸烟者匹配，例如已完全转用烟草加热装置的吸烟者(烟草棒≥99％且≤100％以及香烟≥0到≤1％)；已势不可挡地转用的吸烟者(烟草棒≥90％且＜99％以及香烟＞1％且≤10％)；以及已主要转用的吸烟者(烟草棒≥70％且<90％以及香烟>10％且≤30％)。在其它示例性实施例中，利用计算机或移动应用程序将吸烟者概况与人口统计和烟草使用特征最相似的已使用过本文方法且达成最佳转用结果的吸烟者匹配，例如已完全转用电子烟的吸烟者(电子烟使用率≥99％且≤100％以及以往香烟使用率≥0到≤1％)；势不可挡地已转用的吸烟者(电子烟使用率≥90％且<99％以及香烟使用率>1％且≤10％)；以及主要已转用的吸烟者(电子烟使用率≥70％且<90％以及香烟使用率>10％且≤30％)。应用程序然后向吸烟者推荐例如电子烟或烟草加热产品(固持器和烟草棒相对于加热杆)的类型以及品牌和型号、最优转用方法，包括过渡期的持续时间、必需的烟草棒数量和极低尼古丁香烟，以及最优的烟草棒类型和极低尼古丁香烟(就生物碱分布而言)、调味剂，以及是否包括极低THC大麻。举例来说，用于本文所述的任何方法的过渡期的持续时间可以是至少2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、22天、23天、24天、25天、26天、27天、28天、29天、30天、31天、32天、33天、34天、35天、36天、37天、38天、39天、40天、41天、42天、43天、44天、45天、46天、47天、48天、49天、50天、51天、52天、53天、54天、55天、56天、57天、58天、59天、60天、61天、62天、63天、64天、65天、66天、67天、68天、69天、70天、71天、72天、73天、74天、75天、76天、77天、78天、79天、80天、81天、82天、83天、84天、85天、86天、87天、88天、89天、90天、91天、92天、93天、94天、95天、96天、97天或98天。在一些示例性实施例中，过渡期的持续时间就一类人来说可以是固定的天数，例如14天。举例来说，在确定一般吸烟者群体的理想方法变量或产品变量时，特别是在启动应用程序后，可以将给定方法(例如方法A)的过渡期固定。这可以有助于对应用程序的机器学习算法进行预测性建模，以快速地提高吸烟者对气溶胶装置的采用率。

一般来说，在研究中，传统香烟与烟草加热装置的双重用户在一比一基础上在传统香烟与烟草棒之间作出取舍且反之亦然，因为香烟和烟草棒向吸烟者递送大约相同量的尼古丁。例如，先前每天吸20支传统香烟的双重用户现在每天吸10支传统香烟，并且每天使用10支烟草棒，这等于50％香烟使用率和50％烟草棒使用率。本文方法在过渡期期间所需的烟草棒数量可以部分地基于每天所吸的香烟数量(例如最近的30天)乘以过渡期的天数。也可包括一定百分比的额外烟草棒的衬垫。举例来说，如果吸烟者每天吸25支香烟，则存在21天过渡期，且向吸烟者提供15％的超额分配率：至少604(525+79)个烟草棒。一些类型的烟草棒或加热杆可以向吸烟者递送比传统香烟更多或更少的尼古丁(每支香烟大约1到1.5mg)，在此情况下调整向吸烟者提供的烟草棒数量。例如，烟草棒可以每支烟草棒递送20mg的尼古丁。这个烟草棒将足以供吸烟者在约1天内使用一天一包(典型地为20支香烟)。

类似地，对于电子烟来说，根据电子烟的类型，本文方法所需的电子烟液罐、筒、棒或匣的数量可以不按照一比一基础，如烟草加热产品的烟草棒相对于传统香烟。举例来说，电子烟每天需要的匣比烟草棒少。一个匣大约相当于20支香烟(就本文中任何方法的供应量计算而言)持续约200次吹吸，这足以供吸烟者在一天内使用一天一包(典型地为20支香烟)。必需基于烟草棒加热杆、电子烟液罐、电子烟筒、棒或匣中的尼古丁数量进行适当的调整，以便在过渡期(和任何随访期)期间供应足够数量的烟草棒，并且还考虑已完全转用特定类型的气溶胶装置的曾吸烟者的典型使用率。举例来说，方法A的匣筒的供应大约等于吸烟者每天所吸传统香烟的数量与过渡期的天数的乘积除以20。因此，本文中任何方法所需的任何气溶胶装置中的烟草棒、加热杆、电子烟液罐、筒、棒或匣(或其类似物)的数量可以称为足以供过渡期用的数量，其基于气溶胶装置、烟草加热产品或电子烟的设计和吸烟者的香烟消费史。

本文方法所需的极低尼古丁香烟数量(在过渡期期间和在一些情况下在过渡期之后的一段时间内)也可以部分地基于每天所吸香烟数量(例如，在最近30天)乘以过渡期的天数。然后将这个乘积乘以至少17％且结果是过渡期所需的极低尼古丁香烟的最少数量。举例来说，如果吸烟者每天吸20支香烟且存在28天过渡期，则向吸烟者提供至少95支极低尼古丁香烟(20*28)*0.17。这个数字可四舍五入成100，因为一包通常有20支香烟。可以根据方法调整100支香烟的数量。举例来说，推荐方法A的移动应用程序可能需要将每天所吸香烟数与过渡期天数的乘积乘以大于17％的百分比，这是基于应用程序的过去用户的人口统计和烟草使用特征和人口统计和烟草使用特征的吸烟者概况。这些烟草产品的必需量的最佳预测因子之一是已使用过本文中的方法和产品而转用到气溶胶装置的吸烟者的实际使用模式。

如本文所用，“过渡套装”是具有一个或多个隔室的包装，并且包括极低尼古丁香烟、电子烟或烟草加热装置和烟草棒(或烟草加热杆替代烟草加热装置和烟草棒)，并且可以包括使用这些烟草产品协助传统香烟吸烟者转用电子烟或烟草加热装置的信息、建议和/或说明。过渡套装可以是单个包装，并且作为单个包装递送至吸烟者，如图1中所示，或者过渡套装可以包括多个包装。举例来说，烟草棒和极低尼古丁香烟可以分开出售或交付，或足以供一半过渡期用的烟草棒或极低尼古丁香烟可以分开出售或交付。当软件产生的关于使用过渡套装执行方法A或本文中任何其它方法的信息、建议或说明以讯息、文本或电子邮件形式发送到使用所述方法的人时，或者如果所述说明例如在上传送或纳入社交媒体平台，例如或则由此可以消除存在于过渡套装中的说明的需要。理想情况下，过渡套装的所有组件都纳入一个包装中直接装运给希望受助转用气溶胶装置的吸烟者，或其都可以在一个零售地点获得。这个重要的方便特征允许吸烟者在转用气溶胶装置的紧张过渡期期间有较大的灵活性来遵循应用程序的建议和说明。

用于使传统香烟吸烟者转用电子烟或烟草加热装置的本文中任何方法的信息、建议和说明对于所有吸烟者或吸烟者群体小组来说都是通用的，但是转用方案优选针对个别吸烟者个性化，此个性化是基于人口统计和烟草使用特征相似的吸烟者的历史数据和移动应用程序的计算系统的机器学习算法的预测建模，如下文进一步描述。信息、建议和说明可以采取计算机系统所产生的电子格式和/或采取硬拷贝形式，例如放在提供给吸烟者的过渡套装中或上的标签，所述过渡套装含有电子烟或烟草加热装置和烟草棒(或加热杆)和极低尼古丁香烟。在这两种情况下，信息和建议可以由计算机或移动应用程序基于对计算系统的输入来确定，所述计算系统考虑各种因素，包括方法和产品变量(下文描述)，并且执行各种操作。这些软件产生的关于本文方法的过渡期(和过渡期之后的一段时间)的说明和/或关于每天的日常说明可以讯息、文本或电子邮件形式发送给使用所述方法的人。

3.示例性硬件和软件实施

在其它方面，本公开提供了一种用于使传统香烟的吸烟者转用电子烟或烟草加热装置的设备、计算机实施的方法等。举例来说，此类设备具有通信模块(例如乙太网网络接口卡(NIC)、无线收发器(蓝牙、WiFi等))、具有指令的存储单元(即存储器)和至少一个处理器，所述至少一个处理器与通信模块和存储单元通过一个或多个总线或有线连接耦接，使得所述处理器经配置以执行指令。就此而言，所述设备可以执行指令以接收第一个吸烟者的人口统计和烟草使用信息；获得第二个吸烟者的人口统计信息和烟草使用率等；将概率算法应用于第一人口统计数据的各部分且计算出指示第一个吸烟者使用多种候选产品和方法中的每一种从传统香烟转用电子烟或烟草加热装置的可能性的数值，所述候选产品和方法能够使第一个吸烟者从传统香烟转用电子烟或烟草加热装置；基于计算值选择一种候选物施予第一个吸烟者；以及通过通信单元产生识别所选产品或方法的第二信号且发射到第一个吸烟者的装置，所述第二信号包含指示所述装置在相应介面内展示数据的信息，所述数据鉴定所选产品或服务的施予。

本说明书中所述的标的物和功能操作的实施例能够在数字电子电路中、有形实施的计算机软件或固件中、计算机硬件中实施，包括本说明书和其结构等效物中所公开的结构，或其中一种或多种的组合。本说明书中所述的标的物的实施例，包括(但不限于)本文所述的可执行或移动应用和应用程序，能够作为一种或多种计算机程序实施，即，在有形的非暂时性程序载体上加密的由数据处理设备(或计算机系统)执行的或控制数据处理设备(或计算机系统)操作的一个或多个计算机程序指令模块。另外地或可替代地，程序指令能够用人工产生的传播信号加密，例如机器产生的电、光或电磁信号，所述信号是为了对发射到适合的接收器设备供数据处理设备执行的信息加密而产生。计算机存储介质可以是机器可读存储装置、机器可读存储基板、随机或串行存取存储装置，或者其中一个或多个的组合。

术语“设备”、“装置”和/或“系统”是指数据处理硬件，并且涵盖用于处理数据的所有类型的设备、装置和机器，包括例如可编程处理器、计算机或多个处理器或计算机。设备、装置和/或系统也可以是或还可包括专用逻辑电路，例如FPGA(现场可编程门阵列)或ASIC(专用集成电路)。除硬件外，设备、装置和/或系统还可任选地包括为计算机程序创建执行环境的代码，例如构成处理器固件、协议栈、数据库管理系统、操作系统或其中一个或多个的组合的代码。

计算机程序也可以被称为或描述为程序、软件、软件应用程序、模块、软件模块、脚本或代码，可以任何形式的编程语言编写，包括编译或解释的语言，或声明性或程序性语言，并且可以任何形式部署，包括作为独立程序或作为模块、组件、子例程或其它适用于计算环境中的单元。计算机程序可以但不必对应于文件系统中的文件。程序可以存储在文件的一部分中，所述文件保存其它程序或数据，例如存储在标记语言文件中的一个或多个脚本，存储在专用于所述程序的单个文件中，或存储在多个协调文件中，例如存储一个或多个模块、子程序或部分代码的文件。计算机程序可以部署成在一个计算机上或在位于一个站点或分布在多个站点上且通过通信网络互连的多个计算机上执行。

本说明书中所述的工艺或逻辑流能够由一个或多个可编程计算机执行，所述可编程计算机执行一种或多种计算机程序以通过对输入数据进行操作并产生输出来执行功能。工艺和逻辑流也能够由以下执行并且设备也能够以如下形式实施：专用逻辑电路，例如FPGA(现场可编程门阵列)或ASIC(专用集成电路)。

适合执行计算机程序的计算机包括例如通用或专用微处理器或两者，或任何其它类型的中央处理单元。通常，中央处理单元将从只读存储器或随机存取存储器或两者接收指令和数据。计算机的必要元件是用于实施或执行指令的中央处理单元，以及用于存储指令和数据的一个或多个存储装置。一般来说，计算机还将包括一个或多个用于存储数据的大容量存储装置，例如磁盘、磁光盘或光盘，或可操作地耦接以从所述大容量存储装置接收数据或向其传输数据。然而，计算机不需要具有此类装置。此外，计算机可以嵌入到另一个装置中，例如移动电话、个人数字助理(PDA)、移动音频或视频播放器、游戏控制台、全球定位系统(GPS)接收器，或便携式存储装置，例如通用串行总线(USB)闪存驱动器，等等。

适合于存储计算机程序指令和数据的计算机可读介质包括所有形式的非易失性存储器、介质和存储器装置，包括例如半导体存储器装置，例如EPROM、EEPROM和闪存装置；磁盘，例如内部硬盘或可移动盘；磁光盘；以及CD-ROM和DVD-ROM盘。处理器和存储器可以由专用逻辑电路补充或并入到专用逻辑电路中。

为了提供与用户的交互，本说明书中所述的标的物的实施例能够在计算机上实施，所述计算机具有显示装置，例如CRT(阴极射线管)或LCD(液晶显示器)监视器以用于向用户显示信息，以及指示装置，例如鼠标或轨迹球，用户可通过其向计算机提供输入。其它类型的装置也可用于提供与用户的交互；例如，提供给用户的反馈可以是任何形式的感觉反馈，例如视觉反馈、听觉反馈或触觉反馈；并且来自用户的输入可以任何形式接收，包括声学、语音或触觉输入。另外，计算机通过向用户使用的装置发送文件且从其接收文件而能够与用户交互；例如响应于从网页浏览器接收的请求而将网页发送到用户装置上的网页浏览器。

本说明书中所述的标的物的实施方案能够在计算系统中实施，所述计算系统包括后端组件，例如数据服务器；或包括中间件组件，例如应用程序服务器；或包括前端组件，例如客户端计算机，其具有用户能够借以与本说明书中所述标的物的实施交互的图形用户介面或网页浏览器；或者一个或多个此后端、中间件或前端组件的任何组合。系统中的组件可以通过数字数据通信的任何形式或介质(例如通信网络)互连。通信网络的实例包括局域网(LAN)和广域网(WAN)，例如互联网。

计算系统可以包括客户端和服务器。客户端和服务器通常彼此远离，并且典型地通过通信网络进行交互。客户端和服务器的关系是由于计算机程序在相应计算机上运行并彼此具有客户端-服务器关系而产生。在一些实施方案中，服务器将数据(例如HTML页)传送至用户装置，例如用于向作为客户端的与用户装置交互的用户显示数据并从其接收用户输入。服务器能够从用户装置接收到用户装置产生的数据，例如用户交互的结果。

虽然本说明书包含许多细节，但这些不应解释为对本发明的范围或可要求保护的内容的限制，而应解释为对本发明的特定实施例所特有的特征的描述。本说明书在单独实施例的上下文中描述的某些特征也可以通过单个实施例的组合实施。相反，在单个实施例的上下文中描述的各种特征也可以通过多个实施例单独地或以任何合适的子组合实施。此外，尽管上文可以将特征描述为以某些组合起作用，并且甚至一开始就如此要求保护，但是在一些情况下，来自所要求保护的组合的一个或多个特征可以从组合中排除，并且所要求保护的组合可以针对子组合或子组合的不同形式。

类似地，虽然图中以特定顺序描绘操作，但不应将其理解为需要以所示的特定顺序或依序执行此类操作，或执行所有示出的操作以实现期望的结果。在某些情况下，多任务处理和并行处理可能是有利的。此外，上述实施例中的各种系统组件的分离不应理解为在所有实施例中都需要这种分离，并且应理解，所描述的程序组件和系统通常可以集成在单个软件产品中或打包成多个软件产品。

在提及HTML文件的每个情况下，可以用其它文件类型或格式取代。例如，HTML文件可以用XML、JSON、纯文本或其它类型的文件代替。此外，当提及表格或散列表时，可以使用其它数据结构(例如电子表格、关系数据库或结构化文件)。

在其它实施例中，本申请可以使用机器学习算法或自适应过程。一种或多种机器学习算法或自适应过程的实例包括(但不限于)关联规则算法(例如Apriori算法、Eclat算法或FP生长算法)、聚类算法(例如分级聚类模块、k均值算法，或其它统计学聚类算法)、协同过滤算法(例如基于记忆或模型的算法)，或人工智能算法(例如人工神经网络)。另外，且如本文所述，可以针对训练数据的某些部分训练且使用训练数据的某些部分适应性地改进这些机器学习算法中的一种或多种或自适应过程，所述训练数据包括(但不限于)鉴定施给吸烟者以使其从传统香烟转用电子烟或烟草加热产品的一种或多种产品和方法的数据，以及鉴定这些产品和方法成功(或失败)的数据。

本申请提供了用于促进吸烟者从传统香烟转用电子烟或烟草加热产品的方法、设备、装置、产品等的实例。实施例是说明性的和非限制性的，并且包括本申请的精神内的变化。

4.实例1

方法A-促进吸烟者转用电子烟或烟草加热产品的示例性实施例

图1是时间线图，其示出了使香烟吸烟者转用烟草加热装置的方法。如图1中所示，在吸烟者下载应用程序2之后，可以要求吸烟者回答一系列人口统计和烟草使用问题以有助于确定每个吸烟者的概况，所述概况将用于构建吸烟者概况的数据库且用于计算机向每个吸烟者推荐最优方法和产品变量。这些初始人口统计和烟草使用问题可以包括(但不限于)以下问题：确定吸烟者的Fagerstrom依赖性得分、年包评级、烟雾依赖性总分、吸烟者首次如何学习应用程序、最近一个月每天吸烟平均数、常用香烟品牌、尼古丁产品(包括电子烟)的任何目前或以往使用、烟草加热产品的任何目前或以往使用、任何其它烟草产品的任何目前或以往使用、以往戒烟尝试(如果有)的次数、相较于完全戒烟的兴趣水平转用电子烟或烟草加热产品的兴趣水平、重要的其他人的吸烟状况和与吸烟者同居的任何人的吸烟状况、性别、年龄、种族、民族、国籍、所达到的最高教育水平、职业，以及工作时能够抽吸传统香烟、电子烟和烟草加热产品的容易程度。

吸烟者概况的一个实例是抽吸Gold(先前称为“醇”万宝路)的美国37岁白种人男性吸烟者，其首次跟着朋友学习应用程序，每天平均吸20支香烟，Fagerstrom依赖性得分为8，年包评级为5(烟雾依赖性总分为13)，从未尝试戒烟，目前不使用且过去从未明显使用过尼古丁产品(除了已尝试电子烟几次，但是从未尝试转用电子烟)，目前不使用且以往从未使用过除传统香烟之外的烟草产品且因此从未经历香烟和另一种烟草产品的任何明显双重使用，对转用电子烟或烟草加热产品高度感兴趣、但不完全戒烟，是教育程度为硕士的高中教师，未婚，工作时仅能在午餐时间吸烟，有女友，但她不吸烟，并且吸烟者单独居住。

基于吸烟者的对关于人口统计和烟草使用特征以及机器学习算法的预测建模的问题的回答，移动应用程序的计算机选择最优转用方案用于吸烟者。如图1所示，这包括通过4周过渡期1使传统香烟吸烟者转用的方法A，所述过渡期始于时间点零3且终于时间点二4。向吸烟者推荐过渡套装5，其包括烟草加热装置的烟草棒。吸烟者随后同意所述方法和产品变量，包括方法A的概述，并且购买或不购买过渡套装。在其它示例性实施例中，移动应用程序计算机向吸烟者推荐过渡套装，所述过渡套装包括电子烟，例如电子烟和匣，而不包括烟草加热装置。在吸烟者确认所述方法和产品变量以及过渡期的时间线之后，基于吸烟者的人口统计和烟草使用特征将关于吸烟者转用电子烟或烟草加热产品的信息、建议和说明6发送到吸烟者的智能电话，并且随后不久将过渡套装5装运且交付给吸烟者。如果吸烟者是为了促进吸烟者转用的研究或其它试验的一部分，则吸烟者可以无需购买过渡套装。

图1中关于方法A的信息、建议和说明6包括应用程序给吸烟者的建议，所述建议关于重要时间点在转用方案期间的时序。举例来说，当确定理想的潜在时间点(例如时间点零)时，应用程序在许多其它因素中将考虑吸烟者的工作计划表，在应用程序推荐一些选项之后，吸烟者最终作出决定。在整个过渡期期间，关于即将到来的事件(例如过渡套装的送达、时间点零、时间点一7，和时间点二4)的提示传送到吸烟者的智能电话，一天至少一次。在过渡期期间和之后，鼓励遵循方法A的建议和说明的讯息还有规律地传送到吸烟者的智能电话。在这个示例性实施例中，基于所考虑的吸烟者概况对发送给吸烟者的信息、建议和说明进行个性化，并且通过对装置、设备和/或计算机系统的机器学习算法进行预测建模来加权。在其它实施例中，信息、建议和说明对于吸烟群体的小组可以是更通用和标准的。

用于概况已知的37岁吸烟者的示例性过渡套装包括含有4周过渡期用的含有1.0mg尼古丁/香烟和特定类型(品牌和型号)的烟草加热系统的极低尼古丁香烟以及含有4.8mg尼古丁/烟草棒的烟草棒，并且交付给吸烟者的过渡套装中包括使吸烟者转用烟草加热装置的方法A的信息和说明。过渡套装包括足以供至少4周过渡期和过渡期之后潜在存在的一段时间用的烟草产品。在一些示例性实施例中，过渡套装中的组件各自可以分开提供给吸烟者，例如在药店或其它零售地点。

图3A是数据流图，其示出了使香烟吸烟者转用烟草加热装置的系统。如图3A中所示，从每个吸烟者收集的数据集，包括在方法A的过渡期之前输入应用程序中的人口统计和烟草使用特征以及过渡期(和任何测量期)期间的吸烟者每日烟草使用，由吸烟者通过应用程序报告并且添加到计算机系统的吸烟者概况数据库中。吸烟者每日将吸烟者在过渡期(和潜在地在其后的一段时间)期间对极低尼古丁香烟、电子烟或烟草棒(或加热杆)和传统香烟(如果有)的每日烟草使用量输入应用程序中。

如图1所示，这个示例性实施例中的方法A的方案指示吸烟者在称为“时间点零”的时刻停止使用其常用传统香烟品牌(和任何其它传统香烟)。3一旦吸烟者拥有过渡套装4(包括极低尼古丁香烟、烟草加热装置和烟草棒(或电子烟))以及关于方法A的说明和建议6，则将吸烟者引向计划表时间点零，从而开始过渡期。在说明和建议中概述过渡期的持续时间并且考虑吸烟者的烟雾依赖性总分和人口统计和烟草使用特征。利用应用程序中的计算系统可以计算出最优方法和产品变量。通常在吸烟者的最后一包中的最后一支传统香烟已吸完或丢弃(使得吸烟者没有任何传统香烟)之后的时刻，向吸烟者推荐计划表时间点零3。在时间点零之后，指示吸烟者尽可能长时间地无限制抽吸极低尼古丁香烟。无限制是指吸烟者可以按需要抽吸许多极低尼古丁香烟并且吸烟者可以按需要对每支香烟吹吸任何多次。不存在限制。可以建议在过渡期的这个部分期间不使用其它烟草或尼古丁产品。

在这个示例性实施例中，从时间点零3到过渡期1的结束，指示吸烟者无限制抽吸极低尼古丁香烟。在完全抽吸极低尼古丁香烟的时间期间(从过渡期的时间点零直到时间点一)，吸烟者正消除可燃香烟的愉悦和强化作用。抽吸极低尼古丁香烟通常减少了对传统香烟的渴求。吸烟者的依赖性得分越低，极低尼古丁香烟有效减少渴求的可能性通常越大，并且传统香烟吸烟者能够不依赖吸传统香烟的时间段越长。吸烟者在时间点零之后能够完全抽吸极低尼古丁香烟的时间段越长，转用烟草加热装置(或电子烟)将越容易。

如图1所示，如果且当吸烟者对传统香烟具有无法抗拒的渴求时，指示吸烟者开始无限制使用烟草加热装置(或电子烟)。无法抗拒的渴求的特征可以是，对吸传统香烟的需求如此强烈，以致吸烟者的心理由或几乎由吸烟者的需求构成，并且准备吸传统香烟。“时间点一”7称为吸烟者开始使用烟草加热装置(或电子烟)的时刻。由于来自烟草加热装置(电子烟)的气溶胶对吸烟者起到积极的强化作用并且在一定程度上置换了传统香烟的烟雾的愉悦作用，因此在吸烟者对传统香烟出现无法抗拒的渴求后，指示吸烟者开始使用烟草加热装置(或电子烟)(以及抵制抽吸传统香烟)。由于预先使用极低尼古丁香烟消除了可燃香烟的愉悦和强化作用，因此这种体验容易受到影响。在这个时段期间(时间点零3与时间点一7之间)，相较于从传统香烟直接转用烟草加热装置(或直接转用电子烟)的吸烟者，极低尼古丁香烟使得烟草加热装置(或电子烟)对吸烟者更适口，这有助于吸烟者继续使用烟草加热装置(或电子烟)。

在时间点零3与时间点一7之间，可以建议吸烟者不使用任何其它烟草产品或尼古丁产品。如果且当吸烟者在这两个时间点之间且在过渡期的整个剩余期间需要可燃香烟时，指示且推动吸烟者抽吸极低尼古丁香烟而非传统香烟。吸烟者在此时段期间每次抽吸极低尼古丁香烟以及随后使用烟草加热产品(或对电子烟充分满足)时，吸烟者继续执行着消除可燃香烟的积极作用和强化烟草加热产品或电子烟的积极作用的过程。使用烟草加热装置(电子烟)(无限制)和极低尼古丁香烟(无限制)的提示可以采取例如每日讯息的形式，例如发送到智能电话或智能手表的文本讯息、警报、电话呼叫或其他类型的通信。也可以建议并且也可以发送如下提示：在过渡期期间和/或在过渡期之后，不使用其它烟草或尼古丁产品。本文所述的计算机和移动应用程序极大地促进和增强了这些类型的提示，无论是每天还是其它方式，因为吸烟者的联系信息以及吸烟者的人口统计和烟草使用特征已通过计算系统包括和考虑在内。

如图1中所示，指示吸烟者在计划的过渡期的最后一天停止吸烟，称为“时间点二”，并且在过渡期之后继续使用烟草加热装置(或电子烟)，而不抽吸任何传统香烟。随着时间点二4接近，至少每天通过文本消息提示吸烟者此日期，并且不抽吸传统香烟的这些提示可以在过渡期之后继续存在。在此实例中，过渡期1的结束从时间点零开始恰好为28天，并且在过渡期之后还提示吸烟者无限制使用烟草加热装置(或电子烟)并且完全使用烟草加热装置(或电子烟)(不使用其它烟草产品)。可以指示吸烟者将任何剩余的极低尼古丁香烟储存在冰箱中(使得这些香烟不会走味)，并且仅在吸烟者对传统香烟产生无法抗拒的渴求时才吸这些极低尼古丁香烟。如果吸烟者在时间点二4之前吸完极低尼古丁香烟，或基于计算系统的评估推荐额外的极低尼古丁香烟，则可以指示吸烟者获得额外的极低尼古丁香烟以利于其不抽吸任何传统香烟。可以在任何时间通过应用程序订购极低尼古丁香烟和烟草棒(或加热杆)或电子烟，并且应用程序能够设定成在应用程序用户的烟余量较低后自动地订购任何烟草产品，例如烟草棒。

虽然吸烟者在整个过渡期期间抽吸极低尼古丁香烟且从过渡期的时间点一开始使用烟草加热装置(或电子烟)，但是极低尼古丁香烟正消除可燃香烟的愉悦和强化作用，并且烟草加热装置(或电子烟)正强化烟草的愉悦作用。过渡期期间发生的这两种调节原理促进吸烟者从传统香烟转用烟草加热装置(或电子烟)。如图1中所描绘，预期遵循方法A的各吸烟者在过渡期期间对极低尼古丁香烟的平均烟草使用量8减少，并且尽管使用前述过渡套装且假设不消费传统香烟，但烟草加热装置(或电子烟)的烟草棒平均使用量8大约增加到吸烟者以往每天的传统香烟水平。用来自烟草加热装置或电子烟的气溶胶置换香烟烟雾降低了吸烟者所暴露的危害性和潜在地危害性成分(HPHC)的水平并且预期降低了烟草相关疾病的风险。

从时间点零的前奏直到整个过渡期期间，以及根据吸烟者成功转用烟草加热装置(或电子烟)的水平，潜在地在过渡期之后的一段时间期间，可以通过应用程序将讯息发送到吸烟者的装置(例如智能电话)。每天可以发送多条讯息以利于吸烟者具有最高的转用烟草加热装置(或电子烟)的概率。这些讯息就其内容、频率和时序而言，部分地基于应用程序的新用户与具有类似概况的吸烟者的匹配，所述吸烟者已成功地结合本文公开的方法和产品使用应用程序并且已成功地转用烟草加热产品(电子烟)。举例来说，最优讯息内容、发送讯息的次数以及讯息在吸烟者接收到过渡套装与时间点零之间的时段内的时序可以包括吸烟者当接收到过渡套装时开始接收讯息以及随后每八小时接收讯息直至时间点零为止。这些讯息提示吸烟者对时间点零做好准备。来自应用程序的后续讯息提示吸烟者对方案中的其它显著事件做好准备并且鼓励吸烟者遵循所推荐的方案以利于实现无烟。

尽管截至本申请提交时，尚无已知的、已公开的、经同行评审的利用极低尼古丁香烟使吸烟者转用电子烟或烟草加热产品的研究结果，但是此类研究的信息和结果在其变得可获得时，也可以输入与应用程序关联的计算机系统，并且利用所述计算机系统评估。不同于流行的电子烟，全世界现有吸烟者中大约99.95％从未抽吸过极低尼古丁香烟，并且全世界现有吸烟者中大约97％从未使用过烟草加热装置。

5.实例2

建立吸烟者概况并且吸烟者通过应用程序转用电子烟或烟草加热装置的比率增加

由于本公开提供了用户为了输入计算机系统而产生的信息，例如年包评级、每天所吸香烟数量等，因此本公开涵盖了可供传统香烟吸烟者下载到智能电话、可穿戴装置、计算机或其它装置中的计算机和移动应用程序(应用程序)，以进一步有助于传统香烟吸烟者使用本文公开的方法和产品转用电子烟或烟草加热装置。就此而言，首次产生数据库且填入来自吸烟行为、电子烟行为和烟草加热装置行为研究的数据和信息。这些数据库包括市场研究和评估传统香烟与电子烟双重使用率以及传统香烟与烟草加热装置双重使用率的研究中的吸烟者的人口统计和烟草使用特征。

如本文所述，“计算机或移动应用程序”或“应用程序”包括应用程序、脚本或可由相应网络环境内操作的计算装置或计算系统执行的编译代码的一个或多个元素。由于全世界近十亿个吸烟者的人口统计和烟草使用特征因有许多组合而潜在地存在数百万种吸烟者概况，加上所记录的在本文公开方法的过渡期期间和之后对电子烟或烟草加热装置和极低尼古丁香烟的每日使用量的庞大数据量，因此人类不可能在智力上计算出此数据量以及推荐最优方法和产品变量。这些人口统计和烟草使用特征以及烟草产品使用的日常输入数据需要输入到计算系统或装置，所述计算系统或装置具有足以对此大量数据进行处理、分析且从中作出预测的计算能力。

另一个吸烟者具有与上述37岁男性吸烟者概况恰好一样的吸烟者概况的概率较小。恰好一样的概率取决于应用程序如何提问、问题类型(例如多选项问题)，以及吸烟者对每个问题有多少个选择。举例来说，吸烟者的职业可以决定应用程序推荐何种方法和方法变量和方法所用产品变量的重要因素。职业选项是白领或蓝领的多选项问题的展现内容比吸烟者具有几十种职业选项的菜单少。应用程序询问吸烟者的问题数量越大且每个问题的潜在回答数量越大，则潜在吸烟者概况的数量越大并且吸烟者概况数据库的差异程度越大。数据库在过渡期期间和过渡期之后的人口统计和烟草使用特征和每日烟草使用数据方面的差异程度越大，则机器学习算法的预测建模在计算机系统内越有效。

吸烟者回答必要问题并且应用程序实时计算最优方法和产品变量之后，吸烟者的装置屏幕上出现订单以订购个性化过渡套装。这包括电子烟或烟草加热装置和烟草加热装置用的烟草棒、极低尼古丁香烟，和高度个别化的计算机产生信息，包括用于传统香烟吸烟者转用电子烟或烟草加热装置的说明和建议。如果不存在单独的固持器，则烟草棒可以不纳入烟草加热装置中，在此情况下，加热元件容纳于每个烟草加热杆(例如上述型或型的烟草加热产品)中。然后通过快递将包装交付给吸烟者，或可以将其交付给药店或其它地点，其中吸烟者将其选出来并且出示吸烟者具有使用烟草产品的最低年龄的身份证明。

除了纳入向吸烟者提供的过渡套装中之外，计算机产生的用于促进吸烟者转用电子烟或烟草加热产品的任何方法的信息、建议或说明还可以在智能电话、蜂窝电话、智能手表或其它装置上、通过应用程序、作为弹出式讯息或文本讯息提供给吸烟者并且可以每日或以其它方式提供。这增强了所述信息、建议和说明的有效性并且基于应用程序的推荐且考虑吸烟者的人口统计和烟草使用特征来有效地提供任何提示、鼓励和/或个别化建议和说明。举例来说，对于与上述37岁男性具有类似概况的吸烟者来说，在工作周期间，他在学校授课时可以每个工作日有两次户外吸烟的机会：9:30AM休息15分钟和12:30PM午休一小时。在过渡期期间，甚至在过渡期之后，应用程序可以在这些时间向他准点发送文本讯息，提示他不抽吸传统烟草香烟，并且根据其正使用的方法阶段，提示他抽吸极低尼古丁香烟或使用烟草加热装置或电子烟。

在一些实施例中，包括电子烟或烟草加热装置与烟草加热装置用的烟草棒以及极低尼古丁香烟的过渡套装可以是免费的、按照制造商成本出售，或相较于零售价有深度折扣的，只要吸烟者在整个过渡期期间以及在过渡期之后的时间段期间将必要相关信息输入应用程序或以其它方式将相关信息传送到计算系统即可。吸烟者提供的这种必要相关信息包括过渡套装中的极低尼古丁香烟和烟草棒在过渡期期间或在过渡期期间以及过渡期之后的时间段(例如6个月)内的每日使用量细节。每日还必须向计算系统报告任何传统香烟的使用。例如，对于免费或深度折扣的烟草产品的过渡套装来说，吸烟者可能还必须同意在某一时点将烟草加热装换成新的烟草加热装置，因为诸如等一些烟草加热装置具有数据存储容量，其跟踪各种使用信息。甚至更苛刻的要求可以包括在过渡期期间和/或之后进行一氧化碳(CO)、血液和/或尿液测试，以化学方式验证个人在某些时段内暴露的烟草产品的类型和量。

吸烟者使用应用程序准确报告他们在过渡期期间和之后的烟草使用情况非常重要，这是向应用程序用户提供免费或打折产品等激励措施的原因。在某些情况下，通过应用程序输入到计算机系统的这些数据的价值值得向某些利益相关者(例如健康保险运营商)提供产品补贴的成本。通过应用程序对烟草棒或极低的烟香在一段时间内的任何重新订购都有助于确认应用程序用户输入的数据。

使用应用程序收集来自每个吸烟者的所有数据并添加到计算机系统中，包括吸烟者的概况、应用程序推荐的最优方法和产品变量、再订购信息，以及过渡期期间和过渡期之后的香烟和烟草加热装置使用(或电子烟使用)。将应用程序在过渡期后向吸烟者推荐的方法和产品变量的成功水平与应用程序在过渡期后向具有类似吸烟者概况的吸烟者推荐的方法和产品变量的成功水平进行比较。测量期是典型地在方法的过渡期之后用于测量所述方法和产品变量使吸烟者成功实现转换的水平的一个或多个时间段，可以具有任何长度的持续时间，可以始于任何时间(甚至在过渡期期间)。测量期的实例包括紧接着过渡期之后的7天和/或过渡期之后6个月开始的10天。测量期期间的烟草使用的相关水平包括(a)已经尝试烟草加热产品(或电子烟)且无论如何不再使用烟草加热产品(或电子烟)而恢复吸香烟的吸烟者；(b)双重使用香烟和烟草加热产品(或双重使用香烟和电子烟)的吸烟者；(c)已经成功地转用烟草加热产品(或电子烟)且完全使用烟草加热产品(电子烟)的吸烟者；和(d)已经完全戒烟的吸烟者。然后，这些水平可以由计算系统进一步分成八类：

(i)完全未能采用电子烟或烟草加热产品的吸烟者(仍然吸烟者：100％香烟)，

(ii)主要吸香烟的吸烟者(主要吸烟者：香烟使用率≥70％且烟草棒使用率或电子烟使用率≤30％)，

(iii)大多数吸香烟的吸烟者(倾向型吸烟者：香烟使用率≥50％且<70％以及烟草棒使用率或电子烟使用率>30％且≤50％)，

(iv)抽吸香烟的数量与使用烟草棒或电子烟的数量大约相同的吸烟者(半吸烟者：香烟使用率约50％且烟草棒或电子烟使用率约50％)，

(v)大多数使用烟草棒或电子烟的吸烟者(倾向型烟草棒或电子烟用户：烟草棒或电子烟使用率≥50％且<70％以及香烟使用率>30％且≤50％)，

(vi)主要使用烟草棒或电子烟的吸烟者(以烟草棒或电子烟为主的用户：烟草棒或电子烟使用率≥70％且<90％以及香烟使用率>10％且≤30％)，

(vii)势不可挡地使用烟草棒或电子烟的吸烟者(势不可挡的烟草棒或电子烟用户：烟草棒或电子烟使用率≥90％且<99％以及香烟使用率>1％且≤10)，以及

(viii)完全转用电子烟或烟草加热装置的曾吸烟者(排他性的烟草棒或电子烟用户：烟草棒或电子烟使用率≥99％且≤100％以及香烟使用率≥0到≤1％)。

在研究中，传统香烟和烟草加热装置双重用户典型地在一比一基础上在传统香烟与烟草棒之间作出取舍且反之亦然。使用烟草棒或加热杆对吸香烟的任何替代通常有利于健康，原因在于相较于仅吸香烟和不使用烟草加热装置，吸香烟(不论传统和/或极低尼古丁)与使用烟草加热装置的双重使用通常减少了吸烟者的烟雾暴露。由于烟草加热装置产生气溶胶而非任何烟雾，由此明显减少毒素，因此，吸烟者完全使用烟草加热装置的完全转换是最终目标(除了完全的烟草和尼古丁戒除之外)。使用电子烟对吸香烟的任何替代通常也有利于健康，原因在于相较于仅吸香烟而不使用电子烟，电子烟与传统香烟的双重使用通常减少了吸烟者的烟雾暴露。

专有的机器学习算法结合计算系统的数据库工作并且识别且计算首次使用应用程序的人与已经使用应用程序且转用电子烟或烟草加热装置的人的人口统计和烟草使用特征之间的显著相关度。启动应用程序后且随后不久，应用程序向应用程序新用户推荐最优方法和产品变量，其最紧密地类似于数据库中的大多数类似吸烟者概况所使用的最成功的方法和产品变量。随后，随着更多吸烟者使用应用程序且提供数量越来越多的吸烟者概况和来自方法和产品变量的多种组合的转换结果，应用程序的预测建模算法连续地改进以使吸烟者成功地转用烟草加热产品。

如图3A的应用程序数据流图所示，应用程序9的计算机系统内存在多个输入和输出。下载应用程序之后，通过回答例如以下问题，吸烟者10将人口统计和烟草使用特征11输入应用程序：确定吸烟者的Fagerstrom依赖性得分、年包评级、烟雾依赖性总分、吸烟者首次如何学习应用程序、最近一个月每天吸烟平均数、常用香烟品牌、尼古丁产品(包括电子烟)的任何目前或以往使用、烟草加热产品的任何目前或以往使用、任何其它烟草产品的任何目前或以往使用、以往戒烟尝试(如果有)的次数、相较于完全戒烟的兴趣水平转用电子烟或烟草加热产品的兴趣水平、重要的其他人的吸烟状况和与吸烟者同居的任何人的吸烟状况、性别、年龄、种族、民族、国籍、所达到的最高教育水平、职业，以及工作时能够抽吸传统香烟、电子烟和烟草加热产品的容易程度。这些输入在吸烟者开始使用本文公开的任一种方法和产品之前进行，并且将这个数据添加到计算机系统的数据库中。

作为这些输入的结果，计算机系统和应用程序识别发送给吸烟者的一系列输出，如图3A中所示。这些输出包括用于吸烟者的最优方法和产品变量12，例如特定的转换方法(例如方法A)；过渡期的持续时间；极低尼古丁香烟的尼古丁水平；烟草棒的尼古丁水平；极低尼古丁香烟填料中的极低THC大麻(如果有)的水平；烟草棒填料中的极低THC大麻(如果有)的水平；以及连续评审和微调的个性化建议和说明，包括应用程序提示和鼓励讯息。吸烟者同意这些输出后，将个性化过渡套装13以及信息、建议和说明转发到吸烟者。

另一组输入在吸烟者开始利用本文公开的任何方法和产品之后发生。如图3A中所示，吸烟者输入他或她在过渡期和任何测量期期间的每日烟草使用量14，包括极低尼古丁香烟、电子烟或烟草棒或加热杆，以及任何传统香烟使用量或其它烟草或尼古丁产品使用量。吸烟者将此信息输回到应用程序中且添加到计算机系统的数据库中对于机器学习算法的预测建模提高所述方法和产品变量的转用方案对应用程序未来用户的有效性具有重要作用。基于所推荐的方法和方法变量，图3A中的应用程序的整个计算系统中的信息流(包括过渡期期间和之后的产品使用信息)与每个应用程序用户基本上相同，除了某些时间点的时序发生变化之外。随着吸烟者越来越多地使用应用程序并且使用本文中的方法和过渡套装，计算机数据库中的数据量和关于所述方法和产品变量的机器学习算法的准确度也增加，从而提高转换率。随着吸烟者概况的数量增加，有更多的相关数据关于方法和产品变量的不同组合如何影响类似吸烟者概况的转换结果。此外，应用程序新用户与数据库中的预先证实已成功转用烟草加热装置的吸烟者概况匹配或紧密匹配的概率增加。应了解，算法的单数形式还可以包括算法的复数形式，即，多个应用程序，其通常是预测建模和分析所必需的。

图3B是用于识别图3A的最优方法和产品变量12的算法匹配过程的一个示例性实施例的图。计算机如何识别应用程序新用户的最优方法和产品变量的这种过程显示于图3B中。第一步骤是将应用程序新用户的几十个人口统计和烟草使用特征中的每一个特征与数据库中的已完成转换方法15的那些吸烟者以及数据库中的已开始转换方法、但尚未完成转换方法16的那些吸烟者的人口统计和烟草使用特征匹配。数据库中的人口统计和烟草使用特征的概况最相似的吸烟者可以在这两组中的每一个中识别出来。这可以通过将应用程序新用户的每个人口统计和烟草使用特征与已存在于数据库中的已完成转换方法的那些用户匹配来实现，并且人口统计和烟草使用特征数量最大的某一百分比(例如10％)的那些吸烟者前行到下一步骤17。对于未完成转换方法18的群组，也是如此。或者，向每个人口统计和烟草使用特征赋予权重(例如10是最重要的，而1是最不重要的)并且数据库中的已完成转换方法且累积匹配数目最高的某一百分比(例如5％)的那些吸烟者前行到下一步骤。

已完成方法的应用程序旧用户小组然后可以分类成转换结果的前述八个类别(i-viii)：仍然吸烟者(i)到已完全转用电子烟或烟草加热产品的曾吸烟者(viii)19。分析这些八个类别之间的统计显著关系以及应用程序曾用户所使用的方法和产品变量。方法和产品变量包括(i)使吸烟者转用电子烟或烟草加热产品的方法(例如方法A)和所述方法的任何变量，例如过渡期长度；(ii)电子烟(例如和JUUL匣，其是设计成不可再装填电子烟液的封闭系统)或烟草加热产品((例如包括固持器和烟草棒相对于烟草加热杆)的类型、品牌和型号；(iii)极低尼古丁香烟品牌；(iv)所述方法在过渡期期间(以及潜在地在过渡期之后)的产品变量，例如极低尼古丁香烟、电子烟或烟草棒/加热杆的尼古丁、去氢新烟碱和新烟碱含量、极低尼古丁香烟、电子烟或烟草棒/加热杆的大麻含量或大麻素含量(如果有)，以及极低尼古丁香烟、电子烟或烟草棒/加热杆中的调味剂；以及(v)关于使用所述方法和产品(包括任何的每日提示、个别化或个性化方面，和递送方法)的信息、建议和说明(例如通过智能电话)。

如图3B中所示，基于这些应用程序旧用户用于实现最高转换率的方法和产品变量，考虑到以往吸烟者未完成方法和提高转换率的预测建模，向应用程序新用户20推荐最优方法和产品变量。由于不遵守推荐方案导致转换率降低，因此需要研究且解决可能会导致吸烟者无法完成所推荐的过渡期的任何因素。预测学习的一个实例是，除了概况既定的或人口统计和烟草使用特征子集既定的实现最高转换率的应用程序旧用户所使用的方法变量和/或产品变量之外，应用程序还可以向应用程序新用户推荐不同的方法变量(例如过渡期的持续时间)和/或不同的产品变量(例如包含2mg尼古丁相对于1mg尼古丁或更少的极低尼古丁香烟)。举例来说，如果(a)包数评级为4、(b)吸(c)已尝试戒烟(根据购买戒烟助剂来界定)2或3次的40岁吸烟者使用方法A的过渡期越长就具有越好的转换结果并且应用程序迄今推荐的最长过渡期仅为30天，则算法将连续地向人口统计和烟草使用特征匹配的这个子集的这些吸烟者推荐更长过渡期。这个小组的40岁吸烟者的转换成功率就过渡期长度(例如42天)而言实现最大化之后，应用程序将不再推荐更长过渡期且继续识别其它变量来提高这个小组的转换率。

通过这种方式，应用程序从起初仅利用已使用应用程序的吸烟者的人口统计和烟草使用特征之间的历史相关度演变到使用预测建模和分析。应用程序利用人工智能(AI)、根据尽可能多的吸烟者概况、通过利用原因和效果以及历史相关度来‘学习’最优方法和产品变量。通过优化使吸烟者转用电子烟或烟草加热装置的方法和产品变量可以连续地提高每种类型的吸烟者概况的转换率。还可以定期增添或修改在建立吸烟者概况时出现的新问题，以利于进一步使每个吸烟者概况多样化，从而提高转换成功率。应用程序还可以向人口统计和烟草使用特征子集与不同转换方法重叠的吸烟者推荐相同方法和产品变量以便在数学上测定转换率的提高。

应用程序选择最优方法和产品变量是指转换方法、电子烟或烟草加热产品的类型与其它方法变量和产品变量的组合已使得已使用应用程序的吸烟者得到最佳转换结果，所述吸烟者概况最紧密地类似于当时的应用程序新用户。由于人口统计和烟草使用特征因有许多组合而存在数百万或至少数十万种潜在吸烟者概况，因此应用程序的新用户与应用程序的旧用户之间很少存在完全匹配。

通过计算机系统的机器学习算法计算的用于应用程序新用户的最优方法和产品变量不一定是指已使得吸烟者完全转用电子烟或烟草加热装置的方法和产品变量(电子烟或烟草棒≥99％且≤100％，并且香烟≥0到≤1％)，而是也指势不可挡地已转换的吸烟者(电子烟或烟草棒≥90％且<99％，并且香烟>1％且≤10％)以及主要已转换的吸烟者(电子烟或烟草棒≥70％且<90％，并且香烟>10％且≤30％)等。举例来说，相较于应用程序推荐例如有20％概率使吸烟者成功变成完全烟草棒用户(烟草棒≥99％且≤100％，并且香烟≥0到≤1％)的方法和产品变量集，应用程序可以更有效地推荐例如有55％概率使吸烟者变成势不可挡的烟草棒用户(烟草棒≥90％且<99％，并且香烟>1％且≤10％)的方法和产品变量集。这些计算将基于证据，并且考虑比较来自电子烟或烟草加热装置的不同水平的烟草烟雾和气溶胶暴露的流行病学记录。此时，没有足够的证据来确定这些类型的折衷，但是随着对电子烟和烟草加热装置的研究的更多结果变得可用，机器学习算法将利用的数据更多。来自同行评审研究的数据将输入应用程序的计算系统中并定期更新。

6.实例3

方法B-促进吸烟者转用电子烟或烟草加热产品的示例性实施例

对于已结合其常用品牌的传统香烟使用过电子烟或烟草加热装置的某些吸烟者来说，方法B可以比方法A更适合。不同于电子烟或烟草加热装置的新用户，这些双重用户在使用电子烟和/或烟草加热装置与传统香烟方面已有体验并且可以分成已尝试电子烟或烟草加热装置的吸烟者的前述八种类别中的七种(ii-viii)。不同于流行的电子烟，全世界现有吸烟者中仅约3％以前已使用过烟草加热装置；然而，预期这个数量会随时间增加。优选通过如本文所述的应用程序中的计算系统确定方法和产品变量。

图4是示出使香烟吸烟者转换的方法B的时间线图。这个示例性实施例可以转变传统香烟与电子烟的双重用户或传统香烟与烟草加热装置的双重用户以减少或消除传统香烟的烟雾暴露并且用来自电子烟或烟草加热装置的气溶胶替换此香烟使用。下载应用程序且回答所有人口统计和烟草使用问题之后，应用程序建议吸烟者21(传统香烟和烟草加热装置的双重用户)使用方法B和6周过渡期22，其始于时间点零23且终于时间点二24(方法B中不存在时间点一)。还向吸烟者建议，在6周的过渡期内，使用含有1.50mg尼古丁/香烟的极低尼古丁香烟，并使用烟草加热系统的特定类型品牌和型号(可能与吸烟者常用的品牌和型号不同)的烟草加热产品，以及含有6.5mg尼古丁/烟草棒的烟草棒。吸烟者随后同意推荐的方法和产品变量，包括方法B的概述，并购买过渡套装或不同意。如果吸烟者是为使吸烟者转换而进行的研究或其它努力的一部分，则吸烟者可以不必购买任何物品。在任一情况下，在吸烟者同意推荐的方法和产品变量后，应用程序告知吸烟者如何以及何时将过渡套装交付给吸烟者。基于吸烟者的人口统计和烟草使用回答，将减少香烟使用和增加烟草加热产品使用的信息、建议和说明25传送至吸烟者的智能手机。过渡套装26随后不久交付给吸烟者。这包括应用程序给吸烟者提出的停止抽吸传统香烟的理想时间点(称为时间点零23)以及继续抽吸极低尼古丁香烟的建议，包括吸烟者的常用品牌。举例来说，当确定时间点零的潜在的理想时间时，应用程序可以考虑吸烟者的年龄、婚姻状况和/或工作计划表以及许多其它因素，从而吸烟者最终在应用程序推荐一些选项之后作出决定。

如果吸烟者是传统香烟和电子烟的双重用户，则应用程序可以推荐例如方法B，所述方法B使用6周过渡期以及含有2.00mg尼古丁的极低尼古丁香烟和尼古丁含量相对于高于吸烟者常用品牌的电子烟。根据吸烟者的传统香烟和烟草加热产品的常用品牌和其它因素，应用程序可以向传统香烟和烟草加热产品的双重用户推荐电子烟作为方法B，并且根据吸烟者的传统香烟和电子烟的常用品牌和其它因素，应用程序可以向传统香烟电子烟电子烟的双重用户推荐烟草加热产品。

方法B可用于将来自吸烟者所用香烟的烟雾部分用电子烟的气溶胶或烟草加热装置的气溶胶替换，并且根据香烟使用水平，使双重用户完全转用电子烟或烟草加热装置(电子烟或烟草棒≥99％且≤100％，并且香烟≥0到≤1％)，使双重用户势不可挡地转用电子烟或烟草加热装置(电子烟或烟草棒≥90％且<99％，并且香烟>1％且≤10％)，或使双重用户主要转用电子烟或烟草加热装置(电子烟或烟草棒≥70％且<90％，并且香烟>10％且≤30％)。如图4中所示，方法B的方案指示过渡期期间的吸烟者在称为“时间点零”23的时刻停止使用其常用品牌的传统香烟且继续使用电子烟或烟草加热装置。这可以是吸烟者已经结合传统香烟使用的电子烟品牌或烟草加热装置品牌，或者可以是具有高尼古丁含量的不同电子烟品牌或烟草加热装置品牌，例如可以纳入过渡套装中的品牌。一旦吸烟者获得包括极低尼古丁香烟、电子烟或带有烟草棒的烟草加热装置以及方法B的信息、建议和说明25的过渡套装26，则将吸烟者引向计划时间点零23，从而开始过渡期。

本文任何方法(包括双重用户使用方法B)使用的过渡套装26中的电子烟或烟草棒的尼古丁含量可以更高(高于典型的尼古丁含量)。过渡期期间使用和/或随后使用的较高尼古丁含量的电子烟或烟草棒(或烟草加热杆)有可能促进某些吸烟者不抽吸任何传统香烟，包括吸烟者的常用品牌。可以通过应用程序的计算系统计算的过渡期的持续时间概述于说明25中并且部分地取决于吸烟者的Fagerstrom依赖性得分、年包评级和烟雾依赖性总分、当前的双重使用水平(例如主要的烟草棒使用率≥70％，并且烟草棒使用率<90％，并且传统香烟使用率>10％且≤30％)，以及可以认为通过应用程序计算的其它因素。

过渡期期间的时间点零23之后，指示吸烟者无限制抽吸极低尼古丁香烟且无限制抽吸电子烟或烟草加热装置。如果且当吸烟者在过渡期期间(且在一些情况下，是在过渡期之后)需要可燃香烟时，则指示且推动吸烟者抽吸极低尼古丁香烟而非任何传统香烟。在过渡期期间使用电子烟或烟草加热装置(无限制)和极低尼古丁香烟(无限制)的提示还可以采取例如每日文本讯息、电话呼叫或其它类型的通信形式。也可以建议并且也可以发送如下提示：在过渡期期间和/或在过渡期之后，不使用其它烟草或尼古丁产品。由于吸烟者的通讯信息以及吸烟者的人口统计和烟草使用特征已知，因此本文所述的应用程序大大增强了这些类型的提示的有效性(不论以每日或其它方式计)。

指示吸烟者在预定的过渡期的最后一天(定义为“时间点二”24)停止抽吸极低尼古丁香烟并且在过渡期之后继续使用电子烟或烟草加热装置而不抽吸传统香烟。随着时间点二24临近，还可以每日向吸烟者提示这个日期并且可以采取讯息形式的这些提示在过渡期之后，能够继续发送到智能电话。可以指示吸烟者将任何剩余的极低尼古丁香烟储存在冰箱中。任何打开的包装都可以储存在塑料袋中，使得香烟不会走味。这些剩余的极低尼古丁香烟应该只在吸烟者对可燃香烟有无法抗拒的渴求时使用。如果吸烟者吸完极低尼古丁香烟并且吸烟者认为仍可以需要极低尼古丁香烟，而非抽吸任何传统香烟，例如吸烟者的常用品牌，则可以指示吸烟者获得额外的极低尼古丁香烟(不论通过应用程序或其它方式)。

如图4中所示，预计在过渡期期间，在遵循方法B的吸烟者之间，极低尼古丁香烟的平均烟草使用量27减少，并且在假设不抽吸传统香烟的情况下，电子烟或烟草加热装置的烟草棒27的平均使用量大约增加到吸烟者每天的电子烟和传统香烟或烟草棒和传统香烟的以往累积水平。用来自电子烟或烟草加热装置的气溶胶置换香烟烟雾降低了吸烟者所暴露的危害性和潜在地危害性成分(HPHC)的水平并且预期降低了烟草相关疾病的风险。

吸烟者在整个过渡期期间抽吸极低尼古丁香烟且使用烟草加热装置(或电子烟)的同时，极低尼古丁香烟正消除传统可燃香烟的愉悦和强化作用，并且烟草加热装置(或电子烟)正强化烟草的愉悦作用，强化的程度大于双重使用传统香烟和烟草加热装置(或电子烟)时。通过在过渡期期间发生的这两种调节原理，双重用户更容易减少其对传统香烟的抽吸或完全消除其对传统香烟的抽吸，并且通过增加的烟草加热装置(或电子烟)使用来置换其减少的传统香烟抽吸。由此降低了吸烟者所暴露的危害性和潜在危害性成分(HPHC)的水平并且预期降低了烟草相关疾病的风险。

7.实例4

去氢新烟碱和/或新烟碱含量增加的极低尼古丁香烟

去氢新烟碱和新烟碱与尼古丁具有共同的化学结构，并且去氢新烟碱和新烟碱已显示对烟碱乙酰胆碱受体(nAChR)具有亲和力。对大鼠的研究已证实，去氢新烟碱的剂量越高，则尼古丁自我施用就越少，而去氢新烟碱的剂量越低，则尼古丁自我施用就越多。2.0mg/kg去氢新烟碱预治疗将尼古丁自我施用明显减少几乎一半。新烟碱显示了两阶段剂量效应功能。0.02mg/kg新烟碱预治疗使得尼古丁自我施用增加25％，而2.0mg/kg新烟碱使每个阶段的尼古丁输注减少逾50％。去氢新烟碱经口施予大鼠的消除半衰期是尼古丁的消除半衰期的大约2到2.5倍大。这些结果表明，去氢新烟碱和新烟碱能够取代尼古丁的主观效应并且减弱了戒断和渴求，而无滥用尼古丁的责任。参见例如Hall等人，2014年5月，药理学生物化学与行为学(Pharmacol Biochem Behav)；120:103-108。

本发明的另一个示例性实施例是使用为了含有提高的去氢新烟碱和/或新烟碱含量而设计的极低尼古丁香烟。相较于传统香烟，极低尼古丁香烟中的去氢新烟碱和/或新烟碱的水平是典型的，或甚至升高而超过传统香烟中发现的典型水平；然而，去氢新烟碱和/或新烟碱的最低水平相较于研究型研究中使用的典型的极低尼古丁香烟增加。需要这些类型的极低尼古丁香烟，其中在烟草中发现的这些重要生物碱具有独特的比例，并且当用于帮助吸烟者转用电子烟或烟草加热装置或帮助吸烟者完全戒烟时，这些香烟尤其有利。图5显示了美国五十种热销香烟品牌样式的填料中的某些微量烟碱生物碱的水平。去氢新烟碱含量在0.927到1.390mg/g范围内，平均值为1.1mg/g。新烟碱含量在0.127到0.185mg/g范围内，平均值为0.147mg/g。参见Lisko等人，2013，分析化学(Anal Chem)，3月19日；85(6):3380-3384。

一般来说，由于共同的生物合成路径，因此在烟草植物的总生物碱中占约95％的尼古丁含量与烟草品种和烟草品系中的去氢新烟碱含量或新烟碱含量存在高度相关性。尼古丁含量较低的烟草(与传统香烟中的烟草相比)，包括具有nic1/nic2双重突变体的所有前述烟草品系(LA Burley 21、LAFC 53、LAMD 609和Vector 21-41)，在去氢新烟碱和新烟碱方面也是相对较低的。举例来说，美国国家卫生研究院(National Institutes ofHealth，NIH)的国家药物滥用研究所(National Institute on Drug Abuse，NIDA)依据尼古丁研究香烟药物供应计划(Nicotine Research Cigarettes Drug Supply Program)分配给研究型研究用的六种样式的极低尼古丁研究香烟(NRC 100、NRC 101、NRC 102、NRC103、NRC 104和NRC 105)在这些香烟的填料中含有约0.40mg/g尼古丁、0.0065mg/g去氢新烟碱和0.0315mg/g新烟碱。参见Lisko等人，2013，von Weymarn等人，2016，化学毒理学研究(Chem Res Toxicol)，3月21日；29(3):390-397；以及通过NIDA的药物供应计划可获得尼古丁研究香烟的通知(Notice of Availability of Nicotine Research Cigarettesthrough NIDA's Drug Supply Program)，通知编号：NOT-DA-14-004:https://grants.nih.gov/grants/guide/notice-files/NOT-DA-14-004.html.访问日期：2018年7月20日。

这些极低尼古丁研究香烟的尼古丁、去氢新烟碱和新烟碱水平相较于图2中的传统香烟品牌的平均尼古丁水平和图5中的传统香烟品牌的平均去氢新烟碱和平均新烟碱水平分别降低98％、99％和79％。这些传统香烟品牌都不含有基因工程改造的低尼古丁烟草。典型地，通过下调尼古丁生物合成基因的表达而使烟草植物中的去氢新烟碱和新烟碱水平以及尼古丁水平同时降低。举例来说，通过基因工程抑制BBL基因家族成员的表达是同时减少尼古丁、去氢新烟碱和新烟碱含量的另一实例。在六种功能型RNAi烟草品系中，烤烟叶中的尼古丁水平明显低于(P＜0.05)未转化的对照品系K326的观察水平，并且相较于未转化的对照品系K326，这些6种烟草品系的去氢新烟碱含量平均值为16％且新烟碱含量平均值为70％。参见Lewis等人，公共科学图书馆·综合(PLOS One)，2015年2月17日；10(2):e0117273。

然而，当通过下调(1)腐胺N-甲基转移酶(PMT)基因家族成员(例如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:5中所示的PMT1和PMT2核苷酸序列)、(2)N-甲基腐胺氧化酶(MPO)(SEQ ID NO:7)或(3)鸟氨酸脱羧酶(ODC)(SEQ ID NO:9)的表达对烟草品系进行基因工程改造时，尼古丁含量与去氢新烟碱含量的正相关性出现例外情况。实际上，在一些所得烟草品系中，叶中的去氢新烟碱水平可能高于尼古丁含量。参见Chintapakom等人，2003，植物分子生物学(Plant Molecular Biology)53:87-105；以及美国专利第8,410,341号。尽管出于实验原因而非为了用于烟草产品中，已在烟草植物中进行了这些改造以阐明次级代谢物的路径，但本说明书的申请人发现，使用去氢新烟碱水平增加的极低尼古丁香烟相对于典型的极低尼古丁香烟是一种改进，特别是对于尝试转用电子烟或烟草加热产品或尝试完全戒烟的吸烟者。典型的极低尼古丁香烟(例如NIDA所分配的那些香烟)含有的去氢新烟碱水平是传统香烟的去氢新烟碱水平的很小部分，如Lisko等人所证明。不论增加的去氢新烟碱水平是否来自PMT、MPO和/或ODC表达的下调或来自去氢新烟碱从外部来源的添加，去氢新烟碱含量增加的极低尼古丁香烟都适用于帮助消除传统可燃香烟的愉悦和强化作用。PMT1核苷酸序列示于SEQ ID NO:3中且氨基酸序列示于SEQ ID NO:4。PMT2核苷酸序列示于SEQ ID NO:5中且氨基酸序列示于SEQ ID NO:6。MPO核苷酸序列示于SEQ ID NO:7中且氨基酸序列示于SEQID NO:8。ODC核苷酸序列示于SEQ ID NO:9中且氨基酸序列示于SEQ ID NO:10。

如本文所用，“去氢新烟碱增加的极低尼古丁香烟”是指含有2.0毫克(mg)或更少尼古丁和至少0.15mg去氢新烟碱的香烟。在一些示例性实施例中，可以使用去氢新烟碱的外部来源且添加到所述香烟的填料中。这个来源可以是植物，包括去氢新烟碱高的烟草植物，其中通过例如超临界CO₂提取工艺来提取去氢新烟碱。或者，在其它示例性实施例中，基因工程改造的烟草植物可以用于其中去氢新烟碱相较于对照植物已经增加的所述香烟。在任一情况下，外部去氢新烟碱或高去氢新烟碱植物可以纳入再造烟草中，所述再造烟草用于去氢新烟碱增加的极低尼古丁香烟的填料中。还可以用有机酸的去氢新烟碱盐、去氢新烟碱类似物或合成的去氢新烟碱提高去氢新烟碱含量。这些去氢新烟碱来源中的任一种还可以并入再造烟草中，所述再造烟草用于去氢新烟碱增加的极低尼古丁香烟的填料中。去氢新烟碱增加的极低尼古丁香烟可以含有至少以下每支香烟的去氢新烟碱含量：0.15mg、0.20mg、0.25mg、0.30mg、0.35mg、0.40mg、0.45mg、0.50mg、0.55mg、0.60mg、0.65mg、0.70mg、0.75mg、0.80mg、0.85mg、0.90mg、0.95mg、1.0mg、1.05mg、1.10mg、1.15mg、1.20mg、1.25mg、1.30mg、1.35mg、1.40mg、1.45mg、1.50mg、1.55mg、1.60mg、1.65mg、1.70mg、1.75mg、1.80mg、1.85mg、1.90mg、1.95mg、2.0mg、2.05mg、2.10mg、2.15mg、2.20mg、2.25mg、2.30mg、2.35mg、2.4mg、2.45mg、2.50mg、2.55mg、2.60mg、2.65mg、2.70mg、2.75mg、2.80mg、2.85mg、2.90mg、2.95mg、3.0mg、3.05mg、3.1mg、3.15mg、3.20mg、3.25mg、3.30mg、3.35mg、3.40mg、3.45mg、3.50mg、3.55mg、3.60mg、3.65mg、3.70mg、3.75mg、3.80mg、3.85mg、3.90mg、3.95mg、4.0mg、4.05mg、4.10mg、4.15mg、4.20mg、4.25mg、4.30mg、4.35mg、4.40mg、4.45mg、4.50mg、4.55mg、4.60mg、4.65mg 4.70mg、4.75mg、4.80mg、4.85mg、4.90mg、4.95mg或5.0mg去氢新烟碱/香烟。去氢新烟碱增加的极低尼古丁香烟的一个优点在于，这种类型的香烟比填料包含例如0.0065mg/g去氢新烟碱的极低尼古丁香烟更有效地减少对传统香烟的戒断和渴求。去氢新烟碱增加的极低尼古丁香烟当用于帮助吸烟者转用电子烟或烟草加热装置或帮助吸烟者完全戒烟时特别有用。

重要的是应注意，提及香烟(毫克)或填料(mg/g或百分比)中所含的尼古丁、去氢新烟碱或新烟碱的量的这些百分比和本文中的其它百分比与填料所含的烟草叶中的这些生物碱的量不完全相关。香烟填料不仅包括烟丝烟草形式的烟草叶，而且几乎总是包括不含有任何生物碱的非烟草组分，例如衣壳、调味剂以及制造再造烟草的一部分组分。相较于填料所含的烟草叶本身(或其中生物碱水平独立于填料测量的完整烟草叶，或在烟草叶变成香烟填料的一部分之前)的生物碱的百分比，填料的这些非烟草部分中的生物碱(包括填料中的尼古丁、去氢新烟碱、新烟碱和去甲烟碱)百分比减少。

如本文所用，“新烟碱增加的极低尼古丁香烟”是指含有2.0毫克(mg)或更少的尼古丁和至少0.10mg新烟碱的香烟。在一些示例性实施例中，可以使用新烟碱的外部来源且添加到所述香烟的填料中。这个来源可以是植物，包括烟草植物或其中主要生物碱是新烟碱的植物，例如粉蓝烟草(Nicotianaglauca)、夜花烟草(Nicotiana noctiflora)、碧冬烟草(Nicotiana petunioides)和/或迪勃烟草(Nicotiana debneyi)植物。新烟碱可以通过例如超临界CO₂提取工艺从任何类型的烟草中提取。在其它示例性实施例中，基因工程改造的烟草植物可以用于新烟碱增加的极低尼古丁香烟，其中新烟碱相较于对照植物已经增加。在任一情况下，可以将外部新烟碱或高新烟碱植物纳入再造烟草中，所述再造烟草用于新烟碱增加的极低尼古丁香烟的填料中。还可以用有机酸的新烟碱盐、新烟碱类似物或合成的新烟碱增加新烟碱含量。这些新烟碱中的每一种还可以并入再造烟草中，所述再造烟草用于新烟碱增加的极低尼古丁香烟的填料中。新烟碱增加的极低尼古丁香烟可以含有至少以下每支香烟的新烟碱含量：每支香烟0.10mg、0.12mg、0.14mg、0.16mg 0.18mg、0.20mg0.22mg、0.24mg 0.26mg、0.28、0.30mg、0.32mg.0.34mg、0.36mg 0.38mg、0.40mg、0.42mg、0.44mg、0.46mg、0.48mg、0.50mg、0.52mg、0.54mg、0.56mg、0.58mg、0.60mg、0.62mg、0.64mg、0.66mg、0.68mg、0.70mg、0.72mg、0.74mg、0.76mg、0.78mg、0.80mg、0.82mg、0.84mg、0.86mg、0.88mg、0.90mg、0.92mg、0.94mg、0.96mg、0.98mg、1.0mg、1.02mg、1.04mg、1.06mg、1.08mg、1.10mg、1.12mg、1.14mg、1.16mg、1.18mg、1.20mg、1.22mg、1.24mg、1.26mg、1.28mg、1.30mg、1.32mg、1.34mg、1.36mg、1.38mg、1.40mg、1.42mg、1.44mg、1.46mg、1.48mg、1.50mg、1.52mg、1.54mg、1.56mg、1.58mg、1.60mg、1.62mg、1.64mg、1.66mg、1.68mg、1.70mg、1.72mg、1.74mg、1.76mg、1.78mg、1.80mg、1.82mg、1.84mg、1.86mg、1.88mg、1.90mg、1.92mg、1.94mg、1.96mg、1.98mg或2.0mg新烟碱。新烟碱增加的极低尼古丁香烟的一个优点在于，这种香烟比填料包含例如0.0135mg/g新烟碱的极低尼古丁香烟更有效地减少对传统香烟的戒断和渴求。新烟碱增加的极低尼古丁香烟当用于帮助吸烟者转用电子烟或烟草加热装置或帮助吸烟者完全戒烟时特别有用。

普通烟草植物品种或品系能够与烟草属物种杂交，其中主要生物碱是新烟碱(例如粉蓝烟草)。回交是指使子代植物与其亲代之一反复回交的过程。在这种情况下，‘供体’亲代(粉蓝烟草)是指具有待渗入的所需基因或基因座的亲代植物，其具有高新烟碱。‘受体’亲代(可以是能够使用一次或多次的优良商业化普通烟草)，或能够使用两次或更多次的‘循环’亲代，是指基因或基因座正在渗入的亲代植物。初次杂交产生Fl代并且第二次杂交产生F2代等。在这个实例中，使用本身与相同亲代基因型回交的每个连续回交代的个别子代反复地执行回交。在上述回交方案中，产生足够的代以便获得新烟碱含量高、但是尽可能合理多地具有典型香烟烟草普通烟草的其它所需性状。

去氢新烟碱含量增加的并且新烟碱含量增加的极低尼古丁香烟(即，“去氢新烟碱增加且新烟碱增加的极低尼古丁香烟”可以含有例如每支香烟大约1.0毫克尼古丁、每支香烟大约2.0mg/g去氢新烟碱和每支香烟大约0.55mg/g新烟碱。假设这些极低尼古丁香烟的填料每支香烟重700mg，这些香烟的填料含有约1.43mg/g尼古丁、约2.86mg/g去氢新烟碱和约0.79mg/g新烟碱。去氢新烟碱增加且新烟碱增加的这种极低尼古丁香烟含有极低尼古丁香烟的尼古丁以及大约传统香烟的去氢新烟碱含量和稍微高于传统香烟的上限范围的新烟碱含量。去氢新烟碱增加且新烟碱增加的极低尼古丁香烟当用于帮助吸烟者转用电子烟或烟草加热装置或帮助吸烟者完全戒烟时特别有用。其比去氢新烟碱增加的极低尼古丁香烟或新烟碱增加的极低尼古丁香烟可以更有效。

尼古丁含量相较于如上文所述的其亲代品种NC 95减少大约90％的LAFC 53是用于产生改进的低尼古丁烟草植物品系的优选烟草品系的一个实例。作为合法的烤烟品种，NC 95已经种植数十年并且已经用于许多商业产品中。LAFC 53是已经天然地从NC 95培育(nic1/nic2)且因此是非转基因的的烟草品系。重要的是，不同于其它nic1/nic2低尼古丁品系(例如LA Burley 21)，LAFC 53是一种烤烟品系。几乎所有的过滤型香烟的填料仅包括烤烟烟丝烟草，或烤烟烟丝烟草是填料中主要类型的烟草。

在一个示例性实施例中，对LAFC 53进行了基因工程改造，其中利用上述方法中的任一种抑制腐胺甲基转移酶(例如PMT1或PMT2)的表达。这可以通过通过反义或RNAi技术下调PMT来实现，两种技术在所属领域中是众所周知的。举例来说，使用携带2.0kb NtQPT1根皮质特异性启动子(或任何其它合适的植物启动子)的二元农杆菌载体转化LAFC 53，所述启动子驱动NtPMT1 cDNA(或NtPMT2 cDNA)的反义表达。允许自身存在三百种独立转化株。筛选这些植物的子代(Tl)以便隔离转基因。原代转化株三分之二的子代按照3:1隔离(单一基因座)。剩余三分之一子代按照15:1或更高的比率隔离(两个或更多个基因座)。优化按照3:1隔离的Tl子代(在单一基因座转化而产生)。

使用气相色谱法测量按照3:1隔离的Tl子代的尼古丁和去氢新烟碱水平。允许自身存在尼古丁含量小于LAFC 53亲代的50％的T1子代以产生T2子代。通过选择其中100％子代携带转基因的群体来识别同型接合的T2子代(异型接合的子代按照3:1隔离)。使用气相色谱法测量同型接合和异型接合型T2子代的尼古丁和去氢新烟碱水平以确认尼古丁水平小于LAFC 53亲代的尼古丁含量的50％。允许自身存在去氢新烟碱水平也与LAFC 53亲代相同或增加的转化株的同型接合型T2子代，从而产生T3子代。种植T3子代且再次测量且证实尼古丁和去氢新烟碱水平。允许自身存在尼古丁水平最低且去氢新烟碱水平最高的植物品系的T3子代，从而产生T4子代。种植T4子代的膨化种子的样品并且再次测量且证实尼古丁和去氢新烟碱。这种低尼古丁、去氢新烟碱增加型烟草品系重新命名为LN-HA。LN-HA植物品系进一步在现场测试并且与其NC 95亲代和另一种对照物进行比较。

在另一示例性实施例中，对LAFC 53进行基因工程改造，其中利用任一种上述方法抑制N-甲基腐胺氧化酶(SEQ ID NO:7)的表达。这可以通过通过反义或RNAi技术下调MPO来实现。举例来说，使用携带2.0kb NtQPT1根皮质特异性启动子(或任何其它合适的植物启动子)的二元农杆菌载体转化LAFC 53，所述启动子驱动NtMPO cDNA的反义表达。允许自身存在三百个独立转化株，并且MPO下调的这些转化株的其余过程恰好与前述PMT下调方法和所属领域中已知的类似方法相同。

在另一示例性实施例中，将属于传统尼古丁含量的优良烤烟烟草品种的植物中的PMT基因家族(例如PMT1，SEQ ID NO:5)中的一个或多个基因敲除。在使蛋白质靶向活细胞基因组中的特定DNA序列方面已经取得了相当大的进展。锌指、TALENS和CRISPR/CAS9蛋白质或蛋白质/RNA复合物在实验上顺应其氨基酸序列或RNA靶向序列的变化，以促进其与结合特定DNA序列。举例来说，并且如所属领域中已知，CRISPR(所聚集的有规律间隔的短回文重复)是含有短重复的碱基序列的DNA基因座，其存在于原核生物内且充当裂解外来DNA(来自入侵病毒)的原始免疫系统。CRISPR现作为基因编辑工具用于许多真核系统，包括植物系统，例如芥菜属(Arabidopsis)和烟草属(烟草属)模型。当与Cas9核酸酶配合时，CRISPR能够以定点方式裂解基因组DNA，从而敲除基因表达。向导RNA(gRNA或sgRNA)是针对特定基因组序列设计，从而引导Cas9敲除所述基因。gRNA设计存在用于设计的预测软件，并且对于植物来说，gRNA典型地通过U6或U3启动子表达，例如小麦U6启动子；稻米U3启动子；玉米U3启动子；或芥菜属或稻米U6启动子。关于植物的最新评述，参见Bortesi和Fischer，2015，生物技术进展(Biotechnology Advances)33(10):41-52。就此而言，并且如所属领域中已知，可以构建农杆菌转化载体，所述载体具有专门用于在受体转化的烟草属植物中敲除PMT基因家族任一成员(PMT1、PMT2、PMT3和PMT4)的gRNA。参见例如Nekrasov V，Staskawicz B，Weigel D，Jones JD，Kamoun S.，使用Cas9 RNA引导的内切核酸酶靶向诱导本氏烟草植物模型突变(Targeted mutagenesis in the model plant Nicotiana benthamiana usingCas9 RNA-guided endonuclease).自然·生物技术(Nat Biotechnol).2013年8月31；(8):691-3。

在另一示例性实施例中，使用例如CRISPR-cas9系统敲除属于优良烤烟型白肋或东方烟草品种的烟草品系中的MPO和一种或多种BBL基因。类似于上文针对抑制PMT基因表达所述的CRISPR/CAS9系统的使用，所述系统可以用于抑制MPO和/或一种或多种BBL基因。也就是说，并且如所属领域中已知，可以再次使用植物U6或U3启动子构建农杆菌转化载体，所述载体具有专门用于在受体转化的烟草属植物中敲除MPO和/或一种或多种BBL基因的gRNA。所产生的植物品系中的MPO和一种或多种BBL基因减少，所产生的植物品系含有尼古丁和去氢新烟碱的目标余量，然后用于去氢新烟碱增加的极低尼古丁香烟，其相对于去氢新烟碱水平未增加的极低尼古丁香烟有所改进。举例来说，含有大约2mg/g尼古丁和2mg/g去氢新烟碱的植物品系可以纳入极低尼古丁香烟中用于使吸烟者转用烟草加热产品或用于完全戒烟。

在另一个实施例中，为了产生尼古丁减少而去氢新烟碱增加的烟草，可以使单一植物品系中的NBB1和MPO同时减少。适合的烟草植物包括优良的烤烟型白肋或东方烟草品种，其中的每一种能够使用所属领域中已知的技术进行基因操纵。举例来说，且绝非限制，可以构建农杆菌转化载体，所述载体具有专门用于在受体转化的单一烟草属植物中敲除任何NBB1和MPO的gRNA。选择尼古丁减少(相较于对照植物)而去氢新烟碱增加(相较于低尼古丁对照植物)的烟草植物用于生产烟草产品，例如用于使吸烟者转用烟草加热产品或完全戒烟的极低尼古丁香烟。

类似地，独立植物品系中的NBB1和MPO可以分别加以抑制，且然后可以将所产生的烘烤烟草掺混以用于烟草产品。举例来说，在一种植物品系中，可以构建农杆菌转化载体，所述载体具有专门用于在受体转化的烟草属植物中敲除NBB1的gRNA。在单独的植物品系中，能够抑制MPO，例如使用农杆菌转化载体进行抑制，所述载体具有专门用于敲除MPO的gRNA。选择NBB1被抑制的第一种植物品系(特征在于尼古丁相较于对照植物减少)并且选择MPO被抑制的第二种植物品系(特征在于相较于对照植物，尼古丁减少而去氢新烟碱增加)之后，可以将来自各种植物品系的烘烤烟草掺混在一起用于烟草产品中，例如用于使吸烟者转用烟草加热产品或完全戒烟的极低尼古丁香烟。

烘烤烟草来自其中一种或多种以下基因已经敲除的这些去氢新烟碱增加型烟草植物品系(其可以登记为保护植物品种)：PMT、ODC和/或MPO可以直接用于去氢新烟碱增加型极低尼古丁香烟的填料，或者可以从这些烟草类型中提取去氢新烟碱(例如通过超临界CO2提取工艺)且并入再造烟草中，继而并入去氢新烟碱增加的极低尼古丁香烟中。其它示例性实施例包括精确掺混的填料以实现极低尼古丁的目标水平和增加去氢新烟碱和/或新烟碱的目标水平。尼古丁、去氢新烟碱和新烟碱目标含量分别为1mg/g、2mg/g和1/mg/g的去氢新烟碱增加型且新烟碱增加型极低尼古丁香烟中的填料可以基于现有烟草的生物碱含量、通过调节再造烟草的生物碱含量来制造。当香烟填料是60％烤烟烟草、20％白肋烟草和20％再造烟草时，基于烤烟烟草和白肋烟草的生物碱含量来调节再造烟草的尼古丁、去氢新烟碱和新烟碱含量。在烤烟烟草具有0.4mg/g尼古丁含量、0.02mg/g去氢新烟碱含量和0.05mg/g新烟碱含量且白肋烟草具有1.8mg/g尼古丁含量、5mg/g去氢新烟碱含量和0.10mg/g新烟碱含量的情况下，制得具有2mg/g尼古丁、4.94mg/g去氢新烟碱和4.75mg/g新烟碱的再造烟草。通过掺混60％烤烟烟草、20％白肋烟草和20％递增调节型再造烟草，最终填料分别具有1mg/g、2mg/g和1/mg/g的尼古丁、去氢新烟碱和新烟碱含量，从而精确命中生物碱靶标。出于说明性目的，这个实例中不考虑填料中的衣壳和顶级调味剂的重量，但是这容易如下调节：按照补足这些非烟草组分重量的量来增加再造烟草中的尼古丁、去氢新烟碱和新烟碱水平。

通过使用这种方法掺混且基于现有烟草品种的生物碱含量来调节再造烟草的尼古丁、去氢新烟碱和新烟碱水平，因此能够在香烟中实现几乎任何所期望的尼古丁、去氢新烟碱和新烟碱水平。香烟中的尼古丁、去氢新烟碱和新烟碱水平将不再基于所收集的烟草与现有烟草的逐年可变性而改变。利用这种方法精确掺混的填料能够并入去氢新烟碱增加的极低尼古丁香烟、新烟碱增加的极低尼古丁香烟，或去氢新烟碱增加且新烟碱增加的极低尼古丁香烟中，并且可以纳入烟草产品的过渡套装中以有助于吸烟者转用电子烟或烟草加热装置或完全戒烟。这些类型的极低尼古丁香烟比典型的极低尼古丁香烟更有效地减少传统香烟的戒断和渴求，所述典型的极低尼古丁香烟具有极低的去氢新烟碱水平和极低的新烟碱水平。

8.实例5

包含类大麻酚或无THC大麻的极低尼古丁香烟

本发明的另一个示例性实施例是将极低THC火麻(Cannabis sativa)纳入极低尼古丁香烟的填料中，其可以用于促进吸烟者转用电子烟或烟草加热产品或完全戒烟的任何方法。极低THC大麻(如下文所定义)不含显著水平的Δ9-四氢大麻酚(THC)。火麻(Cannabissativa)物种包括大麻和麻类植物。如本文所用，“大麻”包括印度大麻(C.indica)和莠草大麻(C.ruderalis)，其有时视为火麻(C.sativa)的单独物种，但是在本文中视为火麻的类型而非单独物种。麻类植物在基因上比火麻株系更类似于印度类型的大麻。类大麻酚是一类超过100种天然化合物，其主要积累于大麻植物的雌性花(称为芽)中。其作用于细胞中的类大麻酚受体，改变了脑中的神经传递素释放。THC是存在于大麻植物中的几十种类大麻酚之一。尽管含有极低THC大麻的极低尼古丁香烟不含有任何显著量的THC，但其的确含有其它类大麻酚，包括在治疗焦虑症和抑郁方面显示好处的大麻二酚(CBD)。当吸烟者停止抽吸传统香烟时，其焦虑症和抑郁的程度通常增加；因此，含有极低THC大麻的极低尼古丁香烟有益于帮助吸烟者转用电子烟或烟草加热装置或完全戒烟。来自还含有非THC类大麻酚的极低尼古丁香烟的烟雾相对于来自不含类大麻酚的极低尼古丁香烟的烟雾是一种改进。在本文方法的过渡期期间的时间点零之后，吸烟者能够完全抽吸极低尼古丁香烟(同时不抽吸任何传统香烟)的时间段越长，则转用电子烟或烟草加热产品或完全戒烟的概率越大。

THC的精神刺激作用主要是通过遍布于身体中并且作为内源性类大麻酚系统的一部分的类大麻酚受体的激活介导，其涉及多种生理过程，例如情绪和食欲。使用大麻，不论大麻染色剂(其含有较高THC水平)还是麻类植物株系或品种(其含有较低THC水平，因为麻类植物已经培育用于产生种子和生物质而非THC)纳入极低尼古丁香烟中来帮助吸烟者转用电子烟或烟草加热装置或帮助吸烟者完全戒烟都是有问题的，原因在于THC的精神刺激作用会干扰吸烟者的日常生活，干扰之处在于其身体和精神控制会减弱。举例来说，尝试转用电子烟或烟草加热装置的吸烟者在工作时的午休期间不能抽吸含有显著水平的THC的极低尼古丁香烟而不中毒且因此可能在恢复工作后无法正常行使功能并且可能危及同事。此外，如果雇员的极低尼古丁香烟包括含有THC的大麻，则其可能会无法通过药物测试。因此，其不仅是有用且有利的，而且有必要在极低尼古丁香烟中包括极低THC大麻(而非传统大麻)(对于吸烟群体中的小组)，从而阻止THC的显著精神刺激作用，同时保持其它类大麻酚的好处。

如本文所用，“极低THC大麻”是指(i)雌性大麻植物的花，不论经基因工程改造与否，其含有总共等于或小于大约1.25mg/g的Δ9-四氢大麻酚酸(THCA)和Δ9-四氢大麻酚(THC)；(ii)雌性大麻植物的其它部分(除花之外)(例如叶)，其含有总共等于或小于大约1.25mg/g的Δ9-四氢大麻酚酸(THCA)和Δ9-四氢大麻酚(THC)；和/或(iii)雄性大麻植物的所有部分，其含有总共等于或小于大约1.25mg/g的Δ9-四氢大麻酚酸(THCA)和Δ9-四氢大麻酚(THC)。可以利用高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)测量THCA和THC含量。参见Aizpurua-Olaizola等人，2014，分析和生物分析化学(Anal Bioanal Chem)(2014)406:7549-7560。测量尼古丁含量的上述方法还可以用于测量THCA和THC含量。举例来说，气相色谱与高效液相色谱在所属领域中均常规地用于测量THCA和THC含量。参见例如Mudge E.等人，2017，分析和生物分析化学(Analytical and Bioanalytical Chemistry)，409(12)3153-3163；Patel等人，2017，制药和生物医学分析杂志(J.Pharm Biomed Anal.)，11月30日:146:15-23。THC是已知本身具有明显毒性作用的唯一植物大麻素。THCV也可能具有毒性作用，尽管它以极少量存在于大麻株系和品种中，并且在低剂量下被认为是无毒的。通过基因工程下调负责以类大麻酚生物合成路径产生酶的基因的表达使得THC和THCV减少。

火麻中的类大麻酚生物合成路径已被了解并且基因工程是生产不具有THC或具有微量THC水平的大麻植物的有效方法。大麻萜酚酸(CBGA)是以下三种主要类大麻酚品系的前体：四氢大麻酚酸(THCA)、大麻二酚酸(CBDA)和大麻环萜酚酸(CBCA)。在脱羧基(脱羧基是在植物材料在使用前的干燥和烘烤期间和/或在加热(例如吸烟)后发生)变成类大麻酚酸期间，以下8种类大麻酚酸中的每一种：CBGA(大麻萜酚酸)、THCA(Δ9-四氢大麻酚酸)、CBDA(大麻二酚酸)、CBCA(大麻色烯酸)、CBGVA(次大麻酚酸)、THCVA(四氢次大麻酚酸)、CBDVA(次大麻二酚酸)和CBCVA(次大麻色酚酸)，转化成并且产生以下相应的8种类大麻酚化合物：CBG(大麻萜酚)、THC(Δ9-四氢大麻酚)、CBD(大麻二酚)、CBC(大麻环萜酚)、CBGV(次大麻酚)、THCV(四氢次大麻酚)、CBDV(次大麻二酚)和CBCV(次大麻色烯)。随着大麻烘干并且水分减少，类大麻酚化合物的酸性形式成熟并且缓慢转化成相关化合物(例如THCA转化成THC)。随时间烘烤大麻仅引起部分脱羧基发生，这是大麻花针对例如THCA和THC(本文中称为THCA/THC)测试通常呈阳性的原因。抽吸或气化大麻使类大麻酚瞬间被脱除羧基，原因是高温呈现出来，使得其立即可用于通过吸入来吸收。

利用基因工程产生极低THC大麻植物包括将核酸或特异性突变引入宿主生物体中以减少或增加所关注的基因产物(即，靶基因产物)表达或功能的任何方法。举例来说，当植物用抑制靶基因表达以便使靶基因表达相较于对照植物减少的多核苷酸序列转化时，所述植物被基因工程改造。类大麻酚生物合成路径中所牵涉的任何酶或酶组合可以是减少THCA以便产生极低THC大麻植物的靶标。举例来说，下调一种或多种基因的表达或活性可以用于极低THC大麻，所述一种或多种基因编码由以下所构成的族群中选出的产物：酰基活化酶(SEQ ID NO:13中所示的核苷酸序列和SEQ ID NO:14中所示的氨基酸序列)、橄榄醇合成酶(SEQ ID NO:15中所示的核苷酸序列和SEQ ID NO:16中所示的氨基酸序列)、橄榄醇酸环化酶(SEQ ID NO:17中所示的核苷酸序列和SEQ ID NO:18中所示的氨基酸序列)、芳香族异戊二烯基转移酶(SEQ ID NO:19中所示的核苷酸序列和SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列)、大麻萜酚酸合成酶(CBGAS)、四氢大麻酚酸合成酶(THCAS)(SEQ ID NO:21中所示的核苷酸序列和SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列)、大麻二酚酸合成酶(CBDAS)(SEQ ID NO:23中所示的核苷酸序列和SEQ ID NO:24中所示的氨基酸序列)、大麻环萜酚酸合成酶(CBCAS)(SEQ ID NO:25中所示的核苷酸序列和SEQ ID NO:26中所示的氨基酸序列)。以减少的THCA为特征(相较于对照植物)的基因工程改造植物在本文中称为THCA减少的大麻植物。这些植物可用于提供极低THC大麻花，其用于极低尼古丁香烟以有助于使吸烟者转用电子烟或烟草加热装置或完全戒烟。

所属领域中已知的任何适合基因工程方法能够用于产生极低THC大麻植物，包括有义抑制、有义共抑制、反义抑制、RNAi抑制、双链RNA(dsRNA)干扰、发夹RNA干扰和含有内含子的发夹RNA干扰、核酶、扩增子介导的干扰、小干扰RNA、人工反式作用siRNA、人工或合成微RNA、敲除方法、随机诱变和靶向诱变方法。提供极低THC大麻植物的非转基因方法优选用于极低尼古丁香烟，包括利用随机诱变方法或通过精确基因组工程技术，例如转录活化因子样效应物核酸酶(TALEN)、大范围核酸酶、锌指核酸酶和CRISPR-cas9系统。参见例如Gaj等人，2013，生物技术趋势(Trends in Biotechnology)，31(7):397-405和BomgardnerMelody M，2017，化学和工程新闻(Chemical&Engineering News)，第95卷，第24期：30-34。

类大麻酚生物合成路径中所牵涉的任何酶可以是使大麻植物中的THC减少的靶标。编码类大麻酚生物合成路径中的一种或多种酶的一种或多种核酸包括以下类大麻酚生物合成酶(多肽)：己酰基-辅酶A合成酶(参见美国专利第9,546,362号)、酰基活化酶(SEQID NO:14，参见Stout等人，2012，植物杂志(Plant J；71:353-65)、橄榄醇合成酶(SEQ IDNO:16，参见Taura等人，2009，欧洲生物化学学会联合会快报(FEBS Lett)；583:2061-6)、橄榄醇酸环化酶(SEQ ID NO:18，参见Gagne等人，2012，美国科学院院刊(P Natl Acad SciUSA)；109:12811-6)、芳香族异戊二烯基转移酶(SEQ ID NO:20，参见美国专利第8,884,100号)、大麻萜酚酸合成酶(参见Fellermeier和Zenk 1998，欧洲生物化学学会联合会快报；427:283-5)、四氢大麻酚酸合成酶(SEQ ID NO:22，参见Sirikantaramas等人，2004，生物化学杂志(J Biol Chem)；279:39767-74)、大麻二酚酸合成酶(SEQ ID NO:24，参见Taura等人，2007，欧洲生物化学学会联合会快报；581:2929-34.)、大麻环萜酚酸合成酶(SEQ IDNO:26，参见国际专利公开第WO/2015/196275号)。上述专利、专利申请和其它参考文献，包括多核苷酸和其序列以及多肽和其氨基酸序列，以全文引用的方式并入本文中。参见Carvalho等人，2017，欧洲微生物学会联合会酵母研究(FEMS Yeast Research)，第17卷，第4期，1-12。

在所有大麻株系和品种中，THC与CBD之间通常存在反比关系；THCA/THC含量越高，则CBDA/CBD含量越低，并且CBDA/CBD含量越高，则THCA/THC含量越低。CBDA/CBD通常是麻类植物染色剂或品种中最丰裕的类大麻酚组合。大部分大麻制品染色剂中的最丰裕类大麻酚组合是THCA/THC，其中的任一种平均而言大约可以在大麻花重量的10％与20％之间。虽然THCA是尚未脱羧的大麻花的较准确标记，但THCA或THC基本上是指相同物，条件是花将要以某些方式被抽吸、气化或加热，因为热量进一步使剩余THCA转化成THC。

如本文关于大麻所用，“下调”或“抑制”是同义的且意指特定基因序列或其变异体或所述基因序列的至少15个核苷酸的核苷酸片段在大麻植物(包括其衍生的所有子代植物)中的表达相较于在类似生长条件下生长的对照植物已经减少，其中对照植物与所述大麻植物共享基本上相同的基因背景，例外为大麻植物中的THCV/THC变化和任何相关的附带影响减少。

如本文所用，“再造大麻薄片”是指按照与再造烟草薄片相同的方式生产的大麻薄片，其中预先将大麻花、叶、粉尘、茎和/或副产物研磨成细粉状，然后滚卷或铸造且与粘结剂或粘合剂混合，且可以包括保湿剂、香料、防腐剂和/或其它类大麻酚或其它萜烯类。再造大麻薄片不需要包括任何烟草部分(不含烟草和尼古丁)并且容易制成再造薄片，如再造烟草。再造大麻薄片的大麻部分可以是大约70％到大约90％大麻，其余可以是粘结剂或粘合剂、保湿剂、香料、防腐剂和/或其它类大麻酚或其它萜烯类。再造大麻薄片一经制成，则以类似于全叶烟草的方式切割且可以将“再造大麻”纳入香烟填料中。或者，其本身可以市购而得。

如本文所用，“再造烟草和大麻薄片”是指按照与再造烟草薄片相同的方式生产的薄片，其中烟草尘、茎和/或副产物和大麻花、叶、粉尘、茎和/或副产物(均已预先研磨成细粉状)然后加以滚卷或铸造且与粘结剂或粘合剂混合在一起，且可以包括保湿剂、香料、防腐剂和/或其它类大麻酚或其它萜烯类。再造烟草和大麻薄片一经制成，则以类似于全叶烟草的方式切割且可以将“再造烟草和大麻”纳入香烟填料中。或者，其本身可以市购而得。再造烟草和大麻薄片的烟草和大麻部分累计起来可以是大约70％到大约90％烟草和大麻，其余10到30％可以是粘结剂或粘合剂、保湿剂、香料、防腐剂和/或其它类大麻酚或其它萜烯类。再造烟草和大麻薄片可以具有烟草相对于大麻的任何比率，例如99％烟草:1％大麻一直到99％大麻:1％烟草。

极低尼古丁香烟可以经特别设计而含有目标水平的尼古丁和目标水平的极低THC大麻。举例来说，极低尼古丁香烟中的填料可以精确地掺混并且包含82％低尼古丁烟草和18％极低THC大麻。极低尼古丁香烟的大麻部分可以直接添加到填料中，或可以纳入再造大麻薄片或再造烟草和大麻薄片中。将大麻纳入任一类型的再造薄片中促进香烟按照大麻相对于低尼古丁烟草的确切期望比率和/或尼古丁相对于一种或多种类大麻酚(例如CBD)的确切期望比率精确地掺混。另外，这种方法还改进了香烟制造工艺，因为在这些机器不进行一定再装配的情况下，大麻花或叶(不论完整、被切割或研磨)不具有有效通过自动化香烟辊压机(和装填香烟)的形状和形式。将再造大麻薄片或再造烟草和大麻薄片(可以包括极低THC大麻或任何类型的大麻)制成大薄片(类似于纸)，且然后可以切成与烟草烟丝刚好一样或相似的尺寸和细长形状并且由于这个原因，现容易通过自动化香烟辊压机纳入香烟中。

再造大麻容易与低尼古丁再造烟草和低尼古丁烟丝烟草作为填料的三种单独部分掺混在一起。分别生产再造大麻(不含烟草和尼古丁)(不论极低THC与否)具有优于将烟草部分和大麻部分混合成相同再造薄片的独特优势。这些包括再造薄片中的大麻百分比能够高得多，因为薄片中不存在烟草部分，并且再造大麻还能够起到将极低尼古丁香烟类型的尼古丁含量稀释的作用，因为再造大麻(不论极低THC与否)含有绝对为零的尼古丁。举例来说，如果极低尼古丁香烟类型的填料的目标是0.3mg/g尼古丁并且仅可获得0.4mg/g尼古丁烟草，则将不含尼古丁的再造大麻以25％的比率与75％低尼古丁烟丝烟草掺混将产生尼古丁含量为0.30mg/g尼古丁的填料。由于大麻是栽培最早的植物之一并且已经被人类消费千年，因此其具有众所周知的安全概况。除含有非THC类大麻酚的优势之外，极低THC大麻是用于与烟草掺混和抽吸的理想非烟草/非尼古丁植物，不论极低THC大麻再造成薄片或直接用于香烟填料。

尽管雌性大麻植物的大麻花(芽)含有绝大部分的类大麻酚，但大麻叶和/或茎也可以用于再造大麻薄片和再造烟草和大麻薄片。叶可以干燥到叶绿素充分减少为止。首先研磨植物材料直到大约100目与大约400目之间的粉末稠度，随后引入再造薄片工艺中，其中许多工艺在所属领域中已知。再造大麻或再造烟草和大麻可以并入香烟填料中并且再造大麻或再造烟草和大麻可以是极低THC大麻或可以是具有高THC水平的大麻。传统香烟或极低尼古丁香烟的填料可以含有任何百分比的再造大麻或再造烟草和大麻，包括以下示例性百分比的再造大麻或再造烟草和大麻：1％、2％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％(百分比是按重量计)。

在另一示例性实施例中，外部提取的类大麻酚或在大麻植物外部产生的类大麻酚(例如CBD/CBDA)可以纳入再造烟草、再造烟草/大麻，或再造大麻中。这允许个别类大麻酚在任何再造薄片中存在刚好相同的类大麻酚含量和分布(即，两种个别类大麻酚之间的比率或超过2种个别类大麻酚之间的比率)。举例来说，低尼古丁再造烟草可以包括CBD/CBDA和CBC/CBCA并且具有10/1的(CBD/CBDA)/(CBC/CBCA)比率，并且这些类大麻酚的来源可以大麻中提取出来或合成。参见例如美国专利第9,587,212号。极低尼古丁香烟、烟草棒、再造烟草和电子烟可以包含至少1.0mg、1.1mg、1.2mg、1.3mg、1.4mg、1.5mg、1.6mg、1.7mg1.8mg、1.9mg、2.0mg、2.1mg、2.2mg、2.3mg、2.4mg、2.5mg、2.6mg、2.7mg、2.8mg、2.9mg、3.0mg、3.1mg、3.2mg、3.3mg、3.4mg、3.5mg、3.6mg、3.7mg、3.8mg、3.9mg、4.0mg、4.1mg、4.2mg、4.3mg、4.4mg、4.5mg、4.6mg、4.7mg、4.8mg、4.9mg、5.0mg、5.1mg、5.2mg、5.3mg、5.4mg、5.5mg、5.6mg、5.7mg、5.8mg、5.9mg、6.0mg 6.1mg、6.2mg、6.3mg、6.4mg、6.5mg、6.6mg、6.7mg、6.8mg、6.9mg、7.0mg、7.1mg、7.2mg、7.3mg、7.4mg、7.5mg、7.6mg、7.7mg、7.8mg、7.9mg、8.0mg、8.1mg、8.2mg、8.3mg、8.4mg、8.5mg、8.6mg、8.7mg、8.8mg、8.9mg或9.0mg类大麻酚。

为了提供用于极低尼古丁香烟中的极低THC大麻，利用四氢大麻酚酸合成酶(THCAS)表达的下调。使用如此前所述的CRISPR-cas9系统抑制麻类植物品种(例如樱桃酒)中的THCAS，其雌花含有大量的CBDA和少量的THCA。THCAS被抑制且THCA/THC含量减少的经基因工程改造的大麻植物可以用于极低尼古丁香烟、电子烟和烟草加热产品中以有助于吸烟者摆脱传统香烟。参见Sirikantaramas等人，2004，生物化学杂志(J.Biol.Chem)，279(38),39767-39774。虽然可以使用用于抑制基因表达的任何已知系统，但本领域的普通技术人员可以使用如本文所述的CRISPR/CAS9系统来抑制基因表达。可以使用适合的植物启动子(例如植物U6或U3启动子)构建农杆菌转化载体，所述载体具有专门用于在受体转化的麻类植物(例如麻类植物品种樱桃酒)中敲除THCAS的gRNA。

不论育种或基因工程方法，提供大麻植物或其一部分，其中大麻植物中的THCA/THC水平减少到在类似生长条件下生长的对照植物中的THCA/THC的低于1％、低于2％、低于5％、低于8％、低于10％、低于12％、低于15％、低于20％、低于25％、低于30％、低于40％、低于50％、低于60％、低于70％或低于75％，其中对照植物与大麻植物共享基本上相同的基因背景，例外为THCA/THC变化和任何相关的附带影响减少。基因工程改造的植物在本文中称为THCA/THC减少的大麻植物。

在另一个实施例中，本公开提供用于使大麻植物中的Δ9-四氢大麻酚酸(THCA/THC)减少并且利用极低尼古丁香烟中的所述植物帮助吸烟者转用电子烟或烟草加热产品或完全戒烟的方法。THCA/THC减少的大麻植物还可用于任何类型的烟草或大麻配方或产品，例如电子烟、传统香烟，和烟草棒或烟草加热杆。如所属领域中已知，可以使用减少基因表达的任何方法，例如(但不限于)反义技术、RNA干扰(RNAi)、核酶、CRISPR技术和微RNA(miRNA)。

任何极低尼古丁香烟、传统香烟、电子烟、烟草棒或烟草加热杆可以各自含有至少以下极低THC大麻量：2mg、3mg、5mg、10mg、20mg、40mg、60mg、80mg、100mg、120mg、140mg、160mg、180mg、200mg、220mg、240mg、260mg、280mg、300mg、320mg、340mg、360mg 380mg、400mg、420mg、440mg、460mg、480mg、500mg、520mg、540mg、560mg、580mg、600mg、620mg、640mg、660mg、680mg、700mg、720mg、740mg、760mg、780mg、800mg、820mg、840mg、860mg、880mg、900mg、920mg、940mg、960mg、980mg、1000mg、1.020g、1.040g、1.060g、1.080g、1.100g、1.120g或1.140g。这些烟草产品，包括含有超过2mg尼古丁(例如3mg尼古丁)的传统香烟，可以用于使吸烟者摆脱典型的含尼古丁传统香烟，例如图2中的那些。任何大麻植物部分(例如花或叶)可以纳入这些烟草产品和其它烟草产品中。上述量2mg至1.140g的大麻还可以采取再造大麻形式(包括任何再造大麻工艺的非大麻部分)或再造烟草和大麻(包括任何再造烟草和大麻的非大麻和非烟草部分)。再造烟草、再造大麻或再造烟草和大麻可以包括提取的类大麻酚或在大麻植物外部产生的合成类大麻酚(例如CBD)。

通过抑制四氢大麻酚酸合成酶(THCAS)在植物中的表达以及抑制至少一种其它类大麻酚生物合成酶能够使大麻植物中的Δ9-四氢大麻酚酸(THCA)减少。在产生THCA/THC减少的大麻的单一植物品系中，如SEQ ID NO:21中所示的THCAS和一种或多种类大麻酚生物合成基因(SEQ ID NO:13、15、17、19、21、23、25)可以同时被抑制。另外，大麻植物中的THCAS和大麻萜酚酸合成酶(CBGAS)可以同时被抑制并且还抑制至少一种选自以下群组的其它类大麻酚生物合成酶：酰基活化酶、橄榄醇合成酶、橄榄醇酸环化酶、芳香族异戊二烯基转移酶、四氢大麻酚酸合成酶、大麻二酚酸合成酶(CBDAS)和大麻环萜酚酸合成酶(CBCAS)。可以使用如所属领域中已知的任何适合的植物基因工程方法。

适合的大麻植物可以是任何优良的火麻品系或品种，其中的每一种可以是使用所属领域中已知的技术进行基因操纵。举例来说，且绝非限制，可以构建农杆菌转化载体，所述载体具有专门用于在受体转化的单一火麻植物中敲除任何THCAS和另一种类大麻酚生物合成基因的gRNA。选择THCA/THC已减少(相较于对照植物)的大麻植物用于烟草或尼古丁产品，例如用于使吸烟者转用电子烟或烟草加热产品的极低尼古丁香烟，从而减少吸烟者的尼古丁暴露或完全戒烟。还可以将极低THCA/THC大麻植物部分(例如类大麻酚)并入电子烟的电子烟液中或并入烟草加热产品的烟草棒的烟草中。

类似地，独立植物品系中的THCAS和另一种类大麻酚生物合成基因的表达可以分别抑制，然后可以将所产生的大麻掺混在一起用于烟草产品中。举例来说，在一种植物品系中，可以构建农杆菌转化载体，所述载体具有专门用于在受体转化的火麻植物中敲除THCAS的gRNA。单独植物品系中的另一种类大麻酚生物合成基因(包括前述类大麻酚生物合成基因中的任一种)能够被抑制，例如使用具有专门用于敲除此基因的gRNA的农杆菌转化载体来抑制。选择THCAS被抑制的第一种植物品系(特征在于THCA/THC相较于对照植物减少)并且选择活性被抑制的第二种植物品系(特征在于THCA/THC低于对照植物)之后，可以将来自各种植物品系的大麻芽掺混在一起用于烟草产品中，例如用于使吸烟者转用烟草加热产品、减少尼古丁暴露或完全戒烟的极低尼古丁香烟。其它植物部分的这些芽可以并入再造大麻或再造烟草和大麻。

9.实例6

评估含有以及不含极低THC大麻的极低尼古丁香烟促进转用加热系统或转用电子烟的方法A临床试验方案

图6是时间线图，其示出了根据方法A使香烟吸烟者转用电子烟或烟草加热装置的临床试验方案。募入4组研究中的准则包括对戒烟不感兴趣的吸烟者和从未充分使用极低尼古丁香烟、电子烟或烟草加热装置的吸烟者。不同于流行的电子烟，全世界现有吸烟者中大约99.95％从未抽吸过极低尼古丁香烟，并且全世界现有吸烟者中大约97％从未使用过烟草加热装置。

在这个被考虑的试验中，试验的四个组中的所有受试者都设定了6周过渡期28，并且对于研究中使用烟草棒的所有受试者来说，烟草棒的尼古丁水平相同，并且对于研究中使用电子烟的所有受试者来说，电子烟的尼古丁水平相同。预期受试者总数是至少一千二百个吸烟者。作为过渡期前奏的时段包括招募、筛选受试者和随机分组29分成四组。随机分组完成之后，受试者下载30应用程序，然后将信息、建议和说明31发送到吸烟者的智能电话且向吸烟者供应其过渡套装32。研究的第一组中有四百个受试者且使用每支香烟含有大约0.67mg尼古丁的极低尼古丁香烟，并且这些受试者中有一半将使用加热系统且一半将使用电子烟。第二组中有四百个受试者且使用含有80％低尼古丁烟草(填料与第一组中的香烟相同)和20％再造大麻的极低尼古丁香烟，所述再造大麻包含75％极低THC大麻和25％非大麻、再造大麻工艺的非烟草部分，并且这些受试者中有一半将使用加热系统且一半将使用电子烟。第二组中的极低尼古丁香烟因此每支香烟含有约0.54mg尼古丁。第三组的两百个受试者和第四组的两百个受试者不使用任何极低尼古丁香烟，因此极低尼古丁香烟不纳入分配给其的临床试验材料中。

如图6所示，6周治疗期(过渡期)28之后是4周测量期33和1周随访测量期34以测定研究的所有四个组的香烟和烟草棒使用率。1周随访测量期34始于时间点零35后的第六个月以进一步评估此七天期间的烟草使用率。第一及第二组的受试者遵循与图1的方法A示例性实施例相同的一般说明和建议。受试者在时间点零35停止抽吸传统香烟且开始抽吸极低尼古丁香烟。其在时间点一36(在无法抗拒的渴求之后)开始使用加热系统或电子烟并且在时间点二37停止抽吸极低尼古丁香烟且在过渡期之后继续使用或

指示第三组受试者在时间点零35(第一及第二组受试者停止抽吸传统香烟且开始抽吸极低尼古丁香烟的相同时间点)开始使用加热系统并且不抽吸任何类型的香烟。还指示这些受试者在6周过渡期和4周测量期整个期间继续使用指示第四组受试者在时间点零35开始使用电子烟且不抽吸任何类型的香烟。指示这些受试者在6周过渡期和4周测量期整个期间继续使用

这个方法A临床试验在所有四个组中的主要终点是例如在图6所示的4周和一周测量期内完全地或势不可挡地使用烟草棒或电子烟(烟草棒或电子烟使用率≥90％且≤100％，并且香烟使用率≥0到≤10％)。评估过渡期和测量期期间的转用率，包括烟草棒和香烟以及电子烟和香烟的使用率，并且对研究的所有四个组进行比较。每个受试者在过渡期、4周测量期和1周随访测量期期间对每日香烟使用量(极低尼古丁香烟和传统香烟(如果有))、每日烟草棒使用量和每日电子烟使用量进行计数、追踪并且输入应用程序。

序列表

<110> 约瑟夫·潘多尔菲诺(JOSEPH PANDOLFINO)

<120> 促进吸烟者转用烟草加热产品或电子烟的方法和产品

<130> A240439

<160> 26

<170> PatentIn 3.5版

<210> 1

<211> 1399

<212> DNA

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

<220>

<223> 喹啉酸磷酸核糖基转移酶

<400> 1

caaaaactat tttccacaaa attcatttca caaccccccc aaaaaaaaac catgtttaga 60

gctattcctt tcactgctac agtgcatcct tatgcaatta cagctccaag gttggtggtg 120

aaaatgtcag caatagccac caagaataca agagtggagt cattagaggt gaaaccacca 180

gcacacccaa cttatgattt aaaggaagtt atgaaacttg cactctctga agatgctggg 240

aatttaggag atgtgacttg taaggcgaca attcctcttg atatggaatc cgatgctcat 300

tttctagcaa aggaagacgg gatcatagca ggaattgcac ttgctgagat gatattcgcg 360

gaagttgatc cttcattaaa ggtggagtgg tatgtaaatg atggcgataa agttcataaa 420

ggcttgaaat ttggcaaagt acaaggaaac gcttacaaca ttgttatagc tgagagggtt 480

gttctcaatt ttatgcaaag aatgagtgga atagctacac taactaagga aatggcagat 540

gctgcacacc ctgcttacat cttggagact aggaaaactg ctcctggatt acgtttggtg 600

gataaatggg cggtattgat cggtgggggg aagaatcaca gaatgggctt atttgatatg 660

gtaatgataa aagacaatca catatctgct gctggaggtg tcggcaaagc tctaaaatct 720

gtggatcagt atttggagca aaataaactt caaatagggg ttgaggttga aaccaggaca 780

attgaagaag tacgtgaggt tctagactat gcatctcaaa caaagacttc gttgactagg 840

ataatgctgg acaatatggt tgttccatta tctaacggag atattgatgt atccatgctt 900

aaggaggctg tagaattgat caatgggagg tttgatacgg aggcttcagg aaatgttacc 960

cttgaaacag tacacaagat tggacaaact ggtgttacct acatttctag tggtgccctg 1020

acgcattccg tgaaagcact tgacatttcc ctgaagatcg atacagagct cgcccttgaa 1080

gttggaaggc gtacaaaacg agcatgagcg ccattacttc tgctataggg ttggagtaaa 1140

agcagctgaa tagctgaaag gtgcaaataa gaatcatttt actagttgtc aaacaaaaga 1200

tccttcactg tgtaatcaaa caaaaagatg taaattgctg gaatatctca gatggctctt 1260

ttccaacctt attgcttgag ttggtaattt cattatagct ttgttttcat gtttcatgga 1320

atttgttaca atgaaaatac ttgatttata agtttggtgt atgtaaaatt ctgtgttact 1380

tcaaatattt tgagatgtt 1399

<210> 2

<211> 351

<212> PRT

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

<220>

<223> 喹啉酸磷酸核糖基转移酶

<400> 2

Met Phe Arg Ala Ile Pro Phe Thr Ala Thr Val His Pro Tyr Ala Ile

1 5 10 15

Thr Ala Pro Arg Leu Val Val Lys Met Ser Ala Ile Ala Thr Lys Asn

20 25 30

Thr Arg Val Glu Ser Leu Glu Val Lys Pro Pro Ala His Pro Thr Tyr

35 40 45

Asp Leu Lys Glu Val Met Lys Leu Ala Leu Ser Glu Asp Ala Gly Asn

50 55 60

Leu Gly Asp Val Thr Cys Lys Ala Thr Ile Pro Leu Asp Met Glu Ser

65 70 75 80

Asp Ala His Phe Leu Ala Lys Glu Asp Gly Ile Ile Ala Gly Ile Ala

85 90 95

Leu Ala Glu Met Ile Phe Ala Glu Val Asp Pro Ser Leu Lys Val Glu

100 105 110

Trp Tyr Val Asn Asp Gly Asp Lys Val His Lys Gly Leu Lys Phe Gly

115 120 125

Lys Val Gln Gly Asn Ala Tyr Asn Ile Val Ile Ala Glu Arg Val Val

130 135 140

Leu Asn Phe Met Gln Arg Met Ser Gly Ile Ala Thr Leu Thr Lys Glu

145 150 155 160

Met Ala Asp Ala Ala His Pro Ala Tyr Ile Leu Glu Thr Arg Lys Thr

165 170 175

Ala Pro Gly Leu Arg Leu Val Asp Lys Trp Ala Val Leu Ile Gly Gly

180 185 190

Gly Lys Asn His Arg Met Gly Leu Phe Asp Met Val Met Ile Lys Asp

195 200 205

Asn His Ile Ser Ala Ala Gly Gly Val Gly Lys Ala Leu Lys Ser Val

210 215 220

Asp Gln Tyr Leu Glu Gln Asn Lys Leu Gln Ile Gly Val Glu Val Glu

225 230 235 240

Thr Arg Thr Ile Glu Glu Val Arg Glu Val Leu Asp Tyr Ala Ser Gln

245 250 255

Thr Lys Thr Ser Leu Thr Arg Ile Met Leu Asp Asn Met Val Val Pro

260 265 270

Leu Ser Asn Gly Asp Ile Asp Val Ser Met Leu Lys Glu Ala Val Glu

275 280 285

Leu Ile Asn Gly Arg Phe Asp Thr Glu Ala Ser Gly Asn Val Thr Leu

290 295 300

Glu Thr Val His Lys Ile Gly Gln Thr Gly Val Thr Tyr Ile Ser Ser

305 310 315 320

Gly Ala Leu Thr His Ser Val Lys Ala Leu Asp Ile Ser Leu Lys Ile

325 330 335

Asp Thr Glu Leu Ala Leu Glu Val Gly Arg Arg Thr Lys Arg Ala

340 345 350

<210> 3

<211> 1706

<212> DNA

<213> 野生烟草(Nicotiana attenuata)

<220>

<223> 腐胺N-甲基转移酶AF280402.1

<400> 3

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ttaattttga aaatggaagt catatctacc aacacaaatg gctctactat cttcaagaat 120

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<212> PRT

<213> 野生烟草(Nicotiana attenuata)

<220>

<223> 腐胺N-甲基转移酶AF280402.1

<400> 4

Met Glu Val Ile Ser Thr Asn Thr Asn Gly Ser Thr Ile Phe Lys Asn

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Asn Gly His Gln Asn Gly Thr Ser Glu His Arg Asn Gly His Gln Asn

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Gly Ile Ser Glu His Gln Asn Gly His Lys Asn Gly Thr Ser Glu His

50 55 60

Gln Asn Gly His Gln Asn Gly Thr Ser Glu Gln Gln Asn Gly Thr Ile

65 70 75 80

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Val Val Val Asp Val Ser Arg Lys Phe Phe Pro Tyr Leu Ala Ala Asn

210 215 220

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Val Lys Ala Ala Gln Ala Gly Tyr Tyr Asp Ala Ile Ile Val Asp Ser

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<212> DNA

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

<220>

<223> 桑西种植型腐胺N-甲基转移酶AF126809.1

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tcaaattaaa ataaggctta gcgttaaaat caaaggaaat ggcaagcctg gctcctggag 240

caatgcttct gaggacagta gtaaaaacaa tatcagacaa aaagtaaagt tgtattattt 300

agcttgagga taaagtatgt cattagtttt gtgagagatt tggtgtcctc tacaatgatt 360

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tccgcaacga ctatttattt aatattgagg aatatttttt attaaatact atctggtgac 540

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<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

<220>

<223> 桑西种植型腐胺N-甲基转移酶AF126809.1

<400> 6

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Gly Ala Ile Pro Met Asn Gly His His Asn Gly Thr Ser Lys His Gln

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Asn Gly His Lys Asn Gly Thr Ser Glu Gln Gln Asn Gly Thr Ile Ser

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Ile Ile Gly Gly Gly Ile Gly Phe Thr Leu Phe Glu Met Leu Arg Tyr

145 150 155 160

Pro Thr Ile Glu Lys Ile Asp Ile Val Glu Ile Asp Asp Val Val Val

165 170 175

Asp Val Ser Arg Lys Phe Phe Pro Tyr Leu Ala Ala Asn Phe Asn Asp

180 185 190

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Ala Lys Ala Leu Arg Pro Gly Gly Val Val Cys Thr Gln Ala Glu Ser

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275 280 285

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Gln Val Lys Ser Lys Leu Ala Pro Leu Lys Phe Tyr Asn Ser Asp Ile

325 330 335

His Lys Ala Ala Phe Ile Leu Pro Ser Phe Ala Arg Ser Met Ile Glu

340 345 350

Ser

<210> 7

<211> 2465

<212> DNA

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

<220>

<223> N-甲基腐胺氧化酶AB289456.1的NtMPO1 mRNA

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gggttctcat cgcagctttc ttcctagcta agcagtactc acaatataat ggccactact 60

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ccaggaggag agttccctaa tcaaaatccc cgtgttggcg agggattagc ttcttgggtc 2160

aagcaagacc ggcctctgga agaaagtgat attgttctct ggtatatttt tggaatcaca 2220

catgttcctc ggttggaaga ctggcctgtt atgccagtag aacacattgg ttttgtgcta 2280

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taatc 2465

<210> 8

<211> 790

<212> PRT

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

<220>

<223> N-甲基腐胺氧化酶AB289456.1的NtMPO1 mRNA

<400> 8

Met Ala Thr Thr Lys Gln Lys Val Thr Ala Pro Ser Pro Ser Pro Ser

1 5 10 15

Ser Ser Thr Ala Ser Cys Cys Pro Ser Thr Ser Ile Leu Arg Arg Glu

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Val Leu Val Glu Pro Asp Lys Ser Val Val Ala Leu Ala Asp Ala Tyr

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Phe Phe Pro Pro Phe Gln Ser Ser Leu Met Pro Arg Thr Lys Gly Gly

145 150 155 160

Ser Gln Ile Pro Thr Lys Leu Pro Pro Arg Arg Ala Arg Leu Ile Val

165 170 175

Tyr Asn Lys Lys Thr Asn Glu Thr Ser Ile Trp Ile Val Glu Leu Asn

180 185 190

Glu Val His Ala Ala Ala Arg Gly Gly His His Arg Gly Lys Val Ile

195 200 205

Ala Ser Asn Val Val Pro Asp Val Gln Pro Pro Ile Asp Ala Gln Glu

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Ala Met Arg Arg Arg Gly Ile Asp Asp Leu Asp Leu Val Met Val Asp

245 250 255

Pro Trp Cys Val Gly Tyr His Ser Glu Ala Asp Ala Pro Ser Arg Arg

260 265 270

Leu Ala Lys Pro Leu Val Phe Cys Arg Thr Glu Ser Asp Cys Pro Met

275 280 285

Glu Asn Gly Tyr Ala Arg Pro Val Glu Gly Ile Tyr Val Leu Val Asp

290 295 300

Val Gln Asn Met Lys Ile Ile Glu Phe Glu Asp Arg Lys Leu Val Pro

305 310 315 320

Leu Pro Pro Val Asp Pro Leu Arg Asn Tyr Thr Ala Gly Glu Thr Arg

325 330 335

Gly Gly Val Asp Arg Ser Asp Val Lys Pro Leu His Ile Ile Gln Pro

340 345 350

Glu Gly Pro Ser Phe Arg Ile Ser Gly Asn Tyr Val Glu Trp Gln Lys

355 360 365

Trp Asn Phe Arg Ile Gly Phe Thr Pro Arg Glu Gly Leu Val Ile His

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<210> 9

<211> 1596

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 鸟氨酸脱羧酶（ODC）基因座AF127242

<400> 9

ggcacgaggg gaacaagaga aacatcatat tattgaatcc ctagtttctt ttctttccct 60

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gagatgcctt acaagatttc atgttatcaa tcataaccca aaaattacaa gatgagaaac 300

aaccttttta cgtgctagac ttgggtgagg ttgtttctct tatggaccaa tggaaatctg 360

ctctcccaaa tatccgtcca ttttacgctg ttaaatgtaa ccctgaaccg tcgttccttt 420

caattttatc tgctatgggc tcaaattttg attgtgctag ccgagctgaa attgagtatg 480

ttttatctct tggcatttca cctgaccgta ttgttttcgc aaatccatgc aaaccggaat 540

ccgatattat ttttgcagca aaagttgggg tgaatcttac aacctatgat tctgaagacg 600

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<220>

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His Ile Gly Ser Gly Asp Ala Asp Ser Asn Ala Tyr Leu Gly Ala Ile

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Ala Ala Ala Lys Glu Val Phe Glu Thr Ala Ala Lys Leu Gly Met Ser

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Ser

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<220>

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Ser Ala Gly Ser Gly Pro Thr Val Gly Ser Gly Gly His Ile Ser Gly

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<211> 2533

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<220>

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ttgaccaatt gcgtaaacgt gtttggttag ttggttatgc acttgaagaa atgggtttgg 780

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tagctattgt tcttgcggga tatgtagttg tttctattgc tgatagtttt tctgctcctg 900

aaatatcaac aagacttcga ctatcaaaag caaaagccat ttttacacag gatcatatta 960

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<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 酰基活化酶

<400> 14

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<212> DNA

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ctcggactga gtccctcagt gaagcgtgtg atgatgtatc aactaggctg ttatggtggt 480

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ttaccaaact cggaaggaac tattggggga catataaggg aagcaggact gatatttgat 780

ttacataagg atgtgcctat gttgatctct aataatattg agaaatgttt gattgaggca 840

tttactccta ttgggattag tgattggaac tccatatttt ggattacaca cccaggtggg 900

aaagctattt tggacaaagt ggaggagaag ttgcatctaa agagtgataa gtttgtggat 960

tcacgtcatg tgctgagtga gcatgggaat atgtctagct caactgtctt gtttgttatg 1020

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<211> 385

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 橄榄醇合成酶（AB164375）

<400> 16

Met Asn His Leu Arg Ala Glu Gly Pro Ala Ser Val Leu Ala Ile Gly

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Gly Thr Val Leu Arg Ile Ala Lys Asp Ile Ala Glu Asn Asn Lys Gly

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Ala Arg Val Leu Ala Val Cys Cys Asp Ile Met Ala Cys Leu Phe Arg

180 185 190

Gly Pro Ser Glu Ser Asp Leu Glu Leu Leu Val Gly Gln Ala Ile Phe

195 200 205

Gly Asp Gly Ala Ala Ala Val Ile Val Gly Ala Glu Pro Asp Glu Ser

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Val Gly Glu Arg Pro Ile Phe Glu Leu Val Ser Thr Gly Gln Thr Ile

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Leu Pro Asn Ser Glu Gly Thr Ile Gly Gly His Ile Arg Glu Ala Gly

245 250 255

Leu Ile Phe Asp Leu His Lys Asp Val Pro Met Leu Ile Ser Asn Asn

260 265 270

Ile Glu Lys Cys Leu Ile Glu Ala Phe Thr Pro Ile Gly Ile Ser Asp

275 280 285

Trp Asn Ser Ile Phe Trp Ile Thr His Pro Gly Gly Lys Ala Ile Leu

290 295 300

Asp Lys Val Glu Glu Lys Leu His Leu Lys Ser Asp Lys Phe Val Asp

305 310 315 320

Ser Arg His Val Leu Ser Glu His Gly Asn Met Ser Ser Ser Thr Val

325 330 335

Leu Phe Val Met Asp Glu Leu Arg Lys Arg Ser Leu Glu Glu Gly Lys

340 345 350

Ser Thr Thr Gly Asp Gly Phe Glu Trp Gly Val Leu Phe Gly Phe Gly

355 360 365

Pro Gly Leu Thr Val Glu Arg Val Val Val Arg Ser Val Pro Ile Lys

370 375 380

Tyr

385

<210> 17

<211> 485

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 橄榄醇酸环化酶（AFN42527.1）

<400> 17

aaaaaagaag aagaagaaga aagttgagaa agagaatggc agtgaagcat ttgattgtat 60

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agaataagga agaagggtac actcacatag ttgaggtaac atttgagagt gtggagacta 240

ttcaggacta cattattcat cctgcccatg ttggatttgg agatgtctat cgttctttct 300

gggaaaaact tctcattttt gactacacac cacgaaagta gactatatat agtagccgac 360

caagctgcct tcatcttcat cttctcaaat aatatatcta atatctaatt atataataat 420

aactacttaa taaaagactg tgtttataac attaaataat aataataata aagtcttttg 480

tagct 485

<210> 18

<211> 101

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 橄榄醇酸环化酶（AFN42527.1）

<400> 18

Met Ala Val Lys His Leu Ile Val Leu Lys Phe Lys Asp Glu Ile Thr

1 5 10 15

Glu Ala Gln Lys Glu Glu Phe Phe Lys Thr Tyr Val Asn Leu Val Asn

20 25 30

Ile Ile Pro Ala Met Lys Asp Val Tyr Trp Gly Lys Asp Val Thr Gln

35 40 45

Lys Asn Lys Glu Glu Gly Tyr Thr His Ile Val Glu Val Thr Phe Glu

50 55 60

Ser Val Glu Thr Ile Gln Asp Tyr Ile Ile His Pro Ala His Val Gly

65 70 75 80

Phe Gly Asp Val Tyr Arg Ser Phe Trp Glu Lys Leu Leu Ile Phe Asp

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Tyr Thr Pro Arg Lys

100

<210> 19

<211> 1188

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 芳香族异戊二烯基转移酶

<400> 19

atgggactct catcagtttg taccttttca tttcaaacta attaccatac tttattaaat 60

cctcacaata ataatcccaa aacctcatta ttatgttatc gacaccccaa aacaccaatt 120

aaatactctt acaataattt tccctctaaa cattgctcca ccaagagttt tcatctacaa 180

aacaaatgct cagaatcatt atcaatcgca aaaaattcca ttagggcagc tactacaaat 240

caaactgagc ctccagaatc tgataatcat tcagtagcaa ctaaaatttt aaactttggg 300

aaggcatgtt ggaaacttca aagaccatat acaatcatag catttacttc atgcgcttgt 360

ggattgtttg ggaaagagtt gttgcataac acaaatttaa taagttggtc tctgatgttc 420

aaggcattct tttttttggt ggctatatta tgcattgctt cttttacaac taccatcaat 480

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gaaatatcag taaacacagc ttggattatg agcataattg tggcactgtt tggattgata 600

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cttctcaatt tcctggccca tattattaca aatttcacat tttattatgc cagcagagca 780

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tcaatgggtt cagctttggc tttaatcaaa gatgcttcag acgttgaagg cgacactaaa 900

tttggcatat caaccttggc aagtaaatat ggttccagaa acttgacatt attttgttct 960

ggaattgttc tcctatccta tgtggctgct atacttgctg ggattatctg gccccaggct 1020

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atgtggaagc tttattatgc tgaatattta gtatatgttt tcatataa 1188

<210> 20

<211> 395

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 芳香族异戊二烯基转移酶

<400> 20

Met Gly Leu Ser Ser Val Cys Thr Phe Ser Phe Gln Thr Asn Tyr His

1 5 10 15

Thr Leu Leu Asn Pro His Asn Asn Asn Pro Lys Thr Ser Leu Leu Cys

20 25 30

Tyr Arg His Pro Lys Thr Pro Ile Lys Tyr Ser Tyr Asn Asn Phe Pro

35 40 45

Ser Lys His Cys Ser Thr Lys Ser Phe His Leu Gln Asn Lys Cys Ser

50 55 60

Glu Ser Leu Ser Ile Ala Lys Asn Ser Ile Arg Ala Ala Thr Thr Asn

65 70 75 80

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85 90 95

Leu Asn Phe Gly Lys Ala Cys Trp Lys Leu Gln Arg Pro Tyr Thr Ile

100 105 110

Ile Ala Phe Thr Ser Cys Ala Cys Gly Leu Phe Gly Lys Glu Leu Leu

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His Asn Thr Asn Leu Ile Ser Trp Ser Leu Met Phe Lys Ala Phe Phe

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Phe Leu Val Ala Ile Leu Cys Ile Ala Ser Phe Thr Thr Thr Ile Asn

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Gln Ile Tyr Asp Leu His Ile Asp Arg Ile Asn Lys Pro Asp Leu Pro

165 170 175

Leu Ala Ser Gly Glu Ile Ser Val Asn Thr Ala Trp Ile Met Ser Ile

180 185 190

Ile Val Ala Leu Phe Gly Leu Ile Ile Thr Ile Lys Met Lys Gly Gly

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Pro Leu Tyr Ile Phe Gly Tyr Cys Phe Gly Ile Phe Gly Gly Ile Val

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Tyr Ser Val Pro Pro Phe Arg Trp Lys Gln Asn Pro Ser Thr Ala Phe

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Leu Leu Asn Phe Leu Ala His Ile Ile Thr Asn Phe Thr Phe Tyr Tyr

245 250 255

Ala Ser Arg Ala Ala Leu Gly Leu Pro Phe Glu Leu Arg Pro Ser Phe

260 265 270

Thr Phe Leu Leu Ala Phe Met Lys Ser Met Gly Ser Ala Leu Ala Leu

275 280 285

Ile Lys Asp Ala Ser Asp Val Glu Gly Asp Thr Lys Phe Gly Ile Ser

290 295 300

Thr Leu Ala Ser Lys Tyr Gly Ser Arg Asn Leu Thr Leu Phe Cys Ser

305 310 315 320

Gly Ile Val Leu Leu Ser Tyr Val Ala Ala Ile Leu Ala Gly Ile Ile

325 330 335

Trp Pro Gln Ala Phe Asn Ser Asn Val Met Leu Leu Ser His Ala Ile

340 345 350

Leu Ala Phe Trp Leu Ile Leu Gln Thr Arg Asp Phe Ala Leu Thr Asn

355 360 365

Tyr Asp Pro Glu Ala Gly Arg Arg Phe Tyr Glu Phe Met Trp Lys Leu

370 375 380

Tyr Tyr Ala Glu Tyr Leu Val Tyr Val Phe Ile

385 390 395

<210> 21

<211> 1885

<212> DNA

<213> 火麻(Cannabis sativa)

<220>

<223> 四氢大麻酚酸合成酶前体AB057805.1

<400> 21

aaaaaaatca ttaggactga agaaaaatga attgctcagc attttccttt tggtttgttt 60

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tatacactca acacgaccaa ttgtatatgt ctatcctgaa ttcgacaata caaaatctta 240

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ctggtgggta ttgccctact gttggcgtag gtggacactt tagtggagga ggctatggag 600

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gtggtggagg agaaaacttt ggaatcattg cagcatggaa aatcaaactg gttgctgtcc 780

catcaaagtc tactatattc agtgttaaaa agaacatgga gatacatggg cttgtcaagt 840

tatttaacaa atggcaaaat attgcttaca agtatgacaa agatttagta ctcatgactc 900

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tcataagata tatttaataa aataaattgt ctttcttatt tcaatagcaa ataaaataat 1860

attattttaa aaaaaaaaaa aaaaa 1885

<210> 22

<211> 545

<212> PRT

<213> 火麻(Cannabis sativa)

<220>

<223> 四氢大麻酚酸合成酶前体AB057805.1

<400> 22

Met Asn Cys Ser Ala Phe Ser Phe Trp Phe Val Cys Lys Ile Ile Phe

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Trp Ile Asn Glu Lys Asn Glu Asn Leu Ser Phe Pro Gly Gly Tyr Cys

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Pro Thr Val Gly Val Gly Gly His Phe Ser Gly Gly Gly Tyr Gly Ala

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Leu Met Arg Asn Tyr Gly Leu Ala Ala Asp Asn Ile Ile Asp Ala His

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Leu Val Asn Val Asp Gly Lys Val Leu Asp Arg Lys Ser Met Gly Glu

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Asp Leu Phe Trp Ala Ile Arg Gly Gly Gly Gly Glu Asn Phe Gly Ile

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Ile Ala Ala Trp Lys Ile Lys Leu Val Ala Val Pro Ser Lys Ser Thr

245 250 255

Ile Phe Ser Val Lys Lys Asn Met Glu Ile His Gly Leu Val Lys Leu

260 265 270

Phe Asn Lys Trp Gln Asn Ile Ala Tyr Lys Tyr Asp Lys Asp Leu Val

275 280 285

Leu Met Thr His Phe Ile Thr Lys Asn Ile Thr Asp Asn His Gly Lys

290 295 300

Asn Lys Thr Thr Val His Gly Tyr Phe Ser Ser Ile Phe His Gly Gly

305 310 315 320

Val Asp Ser Leu Val Asp Leu Met Asn Lys Ser Phe Pro Glu Leu Gly

325 330 335

Ile Lys Lys Thr Asp Cys Lys Glu Phe Ser Trp Ile Asp Thr Thr Ile

340 345 350

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Tyr Pro Tyr Gly Gly Ile Met Glu Glu Ile Ser Glu Ser Ala Ile Pro

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Asn Phe Phe Arg Asn Glu Gln Ser Ile Pro Pro Leu Pro Pro His His

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His

545

<210> 23

<211> 1635

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 大麻二酚酸合成酶（AB292682）

<400> 23

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ttcaatatcc aaacttccat tgctaatcct cgagaaaact tccttaaatg cttctcgcaa 120

tatattccca ataatgcaac aaatctaaaa ctcgtataca ctcaaaacaa cccattgtat 180

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ctcaattata gagaccttga tataggaata aatgatccca agaatccaaa taattacaca 1500

caagcacgta tttggggtga gaagtatttt ggtaaaaatt ttgacaggct agtaaaagtg 1560

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<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 大麻二酚酸合成酶（AB292682）

<400> 24

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Phe Phe Phe Ser Phe Asn Ile Gln Thr Ser Ile Ala Asn Pro Arg Glu

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Ile Leu Cys Ser Lys Lys Val Gly Leu Gln Ile Arg Thr Arg Ser Gly

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Trp Val Asn Glu Lys Asn Glu Asn Leu Ser Leu Ala Ala Gly Tyr Cys

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Leu Met Arg Asn Tyr Gly Leu Ala Ala Asp Asn Ile Ile Asp Ala His

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Ile Val Ala Trp Lys Ile Arg Leu Val Ala Val Pro Lys Ser Thr Met

245 250 255

Phe Ser Val Lys Lys Ile Met Glu Ile His Glu Leu Val Lys Leu Val

260 265 270

Asn Lys Trp Gln Asn Ile Ala Tyr Lys Tyr Asp Lys Asp Leu Leu Leu

275 280 285

Met Thr His Phe Ile Thr Arg Asn Ile Thr Asp Asn Gln Gly Lys Asn

290 295 300

Lys Thr Ala Ile His Thr Tyr Phe Ser Ser Val Phe Leu Gly Gly Val

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Asp Ser Leu Val Asp Leu Met Asn Lys Ser Phe Pro Glu Leu Gly Ile

325 330 335

Lys Lys Thr Asp Cys Arg Gln Leu Ser Trp Ile Asp Thr Ile Ile Phe

340 345 350

Tyr Ser Gly Val Val Asn Tyr Asp Thr Asp Asn Phe Asn Lys Glu Ile

355 360 365

Leu Leu Asp Arg Ser Ala Gly Gln Asn Gly Ala Phe Lys Ile Lys Leu

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Asp Tyr Val Lys Lys Pro Ile Pro Glu Ser Val Phe Val Gln Ile Leu

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Glu Lys Leu Tyr Glu Glu Asp Ile Gly Ala Gly Met Tyr Ala Leu Tyr

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<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 大麻环萜酚酸合成酶

<400> 25

atgaattgct caacattctc cttttggttt gtttgcaaaa taatattttt ctttctctca 60

ttcaatatcc aaatttcaat agctaatcct caagaaaact tccttaaatg cttctcggaa 120

tatattccta acaatccagc aaatccaaaa ttcatataca ctcaacacga ccaattgtat 180

atgtctgtcc tgaattcgac aatacaaaat cttagattca cctctgatac aaccccaaaa 240

ccactcgtta ttgtcactcc ttcaaatgtc tcccatatcc aggccagtat tctctgctcc 300

aagaaagttg gtttgcagat tcgaactcga agcggtggcc atgatgctga gggtttgtcc 360

tacatatctc aagtcccatt tgctatagta gacttgagaa acatgcatac ggtcaaagta 420

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gctgataata tcattgatgc acacttagtc aatgttgatg gaaaagttct agatcgaaaa 660

tccatgggag aagatctatt ttgggctata cgtggtggag gaggagaaaa ctttggaatc 720

attgcagcat gtaaaatcaa acttgttgtt gtcccatcaa aggctactat attcagtgtt 780

aaaaagaaca tggagataca tgggcttgtc aagttattta acaaatggca aaatattgct 840

tacaagtatg acaaagattt aatgctcacg actcacttca gaactaggaa tattacagat 900

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gattgcaaag aattgagctg gattgataca accatcttct acagtggtgt tgtaaattac 1080

aacactgcta attttaaaaa ggaaattttg cttgatagat cagctgggaa gaagacggct 1140

ttctcaatta agttagacta tgttaagaaa ctaatacctg aaactgcaat ggtcaaaatt 1200

ttggaaaaat tatatgaaga agaggtagga gttgggatgt atgtgttgta cccttacggt 1260

ggtataatgg atgagatttc agaatcagca attccattcc ctcatcgagc tggaataatg 1320

tatgaacttt ggtacactgc tacctgggag aagcaagaag ataacgaaaa gcatataaac 1380

tgggttcgaa gtgtttataa tttcacaact ccttatgtgt cccaaaatcc aagattggcg 1440

tatctcaatt atagggacct tgatttagga aaaactaatc ctgagagtcc taataattac 1500

acacaagcac gtatttgggg tgaaaagtat tttggtaaaa attttaacag gttagttaag 1560

gtgaaaacca aagctgatcc caataatttt tttagaaacg aacaaagtat cccacctctt 1620

ccaccgcgtc atcat 1635

<210> 26

<211> 545

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 大麻环萜酚酸合成酶

<400> 26

Met Asn Cys Ser Thr Phe Ser Phe Trp Phe Val Cys Lys Ile Ile Phe

1 5 10 15

Phe Phe Leu Ser Phe Asn Ile Gln Ile Ser Ile Ala Asn Pro Gln Glu

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Asn Phe Leu Lys Cys Phe Ser Glu Tyr Ile Pro Asn Asn Pro Ala Asn

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Pro Lys Phe Ile Tyr Thr Gln His Asp Gln Leu Tyr Met Ser Val Leu

50 55 60

Asn Ser Thr Ile Gln Asn Leu Arg Phe Thr Ser Asp Thr Thr Pro Lys

65 70 75 80

Pro Leu Val Ile Val Thr Pro Ser Asn Val Ser His Ile Gln Ala Ser

85 90 95

Ile Leu Cys Ser Lys Lys Val Gly Leu Gln Ile Arg Thr Arg Ser Gly

100 105 110

Gly His Asp Ala Glu Gly Leu Ser Tyr Ile Ser Gln Val Pro Phe Ala

115 120 125

Ile Val Asp Leu Arg Asn Met His Thr Val Lys Val Asp Ile His Ser

130 135 140

Gln Thr Ala Trp Val Glu Ala Gly Ala Thr Leu Gly Glu Val Tyr Tyr

145 150 155 160

Trp Ile Asn Glu Met Asn Glu Asn Phe Ser Phe Pro Gly Gly Tyr Cys

165 170 175

Pro Thr Val Gly Val Gly Gly His Phe Ser Gly Gly Gly Tyr Gly Ala

180 185 190

Leu Met Arg Asn Tyr Gly Leu Ala Ala Asp Asn Ile Ile Asp Ala His

195 200 205

Leu Val Asn Val Asp Gly Lys Val Leu Asp Arg Lys Ser Met Gly Glu

210 215 220

Asp Leu Phe Trp Ala Ile Arg Gly Gly Gly Gly Glu Asn Phe Gly Ile

225 230 235 240

Ile Ala Ala Cys Lys Ile Lys Leu Val Val Val Pro Ser Lys Ala Thr

245 250 255

Ile Phe Ser Val Lys Lys Asn Met Glu Ile His Gly Leu Val Lys Leu

260 265 270

Phe Asn Lys Trp Gln Asn Ile Ala Tyr Lys Tyr Asp Lys Asp Leu Met

275 280 285

Leu Thr Thr His Phe Arg Thr Arg Asn Ile Thr Asp Asn His Gly Lys

290 295 300

Asn Lys Thr Thr Val His Gly Tyr Phe Ser Ser Ile Phe Leu Gly Gly

305 310 315 320

Val Asp Ser Leu Val Asp Leu Met Asn Lys Ser Phe Pro Glu Leu Gly

325 330 335

Ile Lys Lys Thr Asp Cys Lys Glu Leu Ser Trp Ile Asp Thr Thr Ile

340 345 350

Phe Tyr Ser Gly Val Val Asn Tyr Asn Thr Ala Asn Phe Lys Lys Glu

355 360 365

Ile Leu Leu Asp Arg Ser Ala Gly Lys Lys Thr Ala Phe Ser Ile Lys

370 375 380

Leu Asp Tyr Val Lys Lys Leu Ile Pro Glu Thr Ala Met Val Lys Ile

385 390 395 400

Leu Glu Lys Leu Tyr Glu Glu Glu Val Gly Val Gly Met Tyr Val Leu

405 410 415

Tyr Pro Tyr Gly Gly Ile Met Asp Glu Ile Ser Glu Ser Ala Ile Pro

420 425 430

Phe Pro His Arg Ala Gly Ile Met Tyr Glu Leu Trp Tyr Thr Ala Thr

435 440 445

Trp Glu Lys Gln Glu Asp Asn Glu Lys His Ile Asn Trp Val Arg Ser

450 455 460

Val Tyr Asn Phe Thr Thr Pro Tyr Val Ser Gln Asn Pro Arg Leu Ala

465 470 475 480

Tyr Leu Asn Tyr Arg Asp Leu Asp Leu Gly Lys Thr Asn Pro Glu Ser

485 490 495

Pro Asn Asn Tyr Thr Gln Ala Arg Ile Trp Gly Glu Lys Tyr Phe Gly

500 505 510

Lys Asn Phe Asn Arg Leu Val Lys Val Lys Thr Lys Ala Asp Pro Asn

515 520 525

Asn Phe Phe Arg Asn Glu Gln Ser Ile Pro Pro Leu Pro Pro Arg His

530 535 540

His

545