异喹啉化合物及其用途

文档序号：751363 发布日期：2021-04-02 浏览：28次 >En<

阅读说明：本技术 异喹啉化合物及其用途 (Isoquinoline compounds and uses thereof ) 是由 J·梁 S·马尔霍特拉 R·V·曼当卡 N·拉加帕克萨 M·休 C·斯蒂瓦拉 J·C·特于 2019-07-23 设计创作，主要内容包括：本公开描述了式(I)的异喹啉化合物,其变体,以及其作为HPK1(造血激酶1)抑制剂的用途。所述化合物可用于治疗HPK1依赖性疾患以及增强免疫应答。本公开还描述了抑制HPK1的方法、治疗HPK1依赖性疾患的方法、用于增强免疫应答的方法以及用于制备所述异喹啉化合物的方法。(The present disclosure describes isoquinoline compounds of formula (I), variants thereof, and their use as HPK1 (hematopoietic kinase 1) inhibitors. The compounds are useful for treating HPK1 dependent disorders and for enhancing immune responses. The disclosure also describes methods of inhibiting HPK1, methods of treating HPK 1-dependent disorders, methods for enhancing an immune response, and methods for making the isoquinoline compounds.)

异喹啉化合物及其用途

相关申请的交叉引用

本申请要求于2018年7月24日提交的国际专利申请号PCT/CN2018/096780的权益，该国际专利申请的公开内容全文以引用方式并入本文。

技术领域

本公开涉及作为HPK1抑制剂的异喹啉化合物、包含这些化合物的组合物以及用于增强免疫应答和治疗HPK1依赖性疾患诸如癌症的方法。

背景技术

肿瘤科医生治疗癌症的主要方式是手术切除、放疗和经典的化疗药物。遗憾的是，对于许多肿瘤或许多类型的癌症，手术切除并非可行的选择。此外，放疗和化疗药物不仅仅靶向患病的细胞，因此最终损伤健康细胞。人们正在利用抗原的肿瘤特异性表达或肿瘤细胞内特定蛋白的不适当的过表达或激活，开发更特异性地靶向肿瘤细胞的疗法，但是肿瘤细胞易于突变，并且可能对专门靶向肿瘤细胞的药物产生耐药性。

一种新型癌症治疗范例已经出现，其利用患者自身的免疫系统来克服许多癌症所用的免疫逃避策略并且增强抗肿瘤免疫力。一种此类策略是抑制免疫应答的负调节剂，这些负调节剂通常起到维持外周免疫耐受的作用，从而使肿瘤抗原被识别为非自身实体。

造血祖细胞激酶1(HPK1)是树突状细胞活化以及T细胞和B细胞应答的负调节剂，可用于增强抗肿瘤免疫力。HPK1主要由造血细胞(包括早期祖细胞)表达。在T细胞中，据信HPK1通过使Ser376处的SLP76(Di Bartolo等人(2007)JEM 204:681-691)和Thr254处的Gads发生磷酸化来降低信号传导微簇的持久性对T细胞活化进行负调控，从而募集与磷酸化SLP76和Gads结合的14-3-3蛋白，从包含LAT的微簇中释放出SLP76-Gads-14-3-3复合物(Lasserre等人(2011)J Cell Biol 195(5):839-853)。HPK1还可响应于通常由肿瘤分泌的前列腺素E2而被激活，从而促使肿瘤细胞从免疫系统中逃逸。

发明内容

本发明公开了作为HPK1抑制剂的异喹啉化合物、包含这些化合物的组合物以及用于增强免疫应答和治疗HPK1依赖性疾患诸如癌症的方法。

在一个方面，提供了式(I)化合物或该化合物的任何变体或该化合物的盐(例如，该化合物的药学上可接受的盐)，如本文所详述。还提供了一种药物组合物，该药物组合物包含：式(I)化合物或本文所详述的该化合物的任何变体，或该化合物的药学上可接受的盐；以及药学上可接受的载体或赋形剂。

在另一方面，提供了一种用于抑制HPK1的方法，该方法包括使受试者体内的HPK1与有效量的式(I)化合物或本文所详述的该化合物的任何变体或该化合物的药学上可接受的盐接触。还提供了一种用于增强有此需要的受试者的免疫应答的方法，该方法包括向受试者施用有效量的式(I)化合物或本文所详述的该化合物的任何变体或该化合物的药学上可接受的盐。

进一步提供了一种用于治疗HPK1依赖性疾患的方法，该方法包括向有此需要的受试者施用有效量的式(I)化合物或本文所详述的该化合物的任何变体或该化合物的药学上可接受的盐。在一些实施例中，受试者是人。在一些实施例中，HPK1依赖性疾患为癌症，例如结直肠癌、黑素瘤、非小细胞肺癌、卵巢癌、乳腺癌、胰腺癌、血液恶性肿瘤和肾细胞癌。在一些实施例中，该方法进一步包括向受试者施用化疗剂。

还提供了式(I)化合物或本文所详述的该化合物的任何变体或该化合物的药学上可接受的盐，其用于抑制HPK1、增强免疫应答或治疗HPK1依赖性疾患诸如癌症的方法中。

还提供了式(I)化合物或本文所详述的该化合物的任何变体或该化合物的药学上可接受的盐在本文所详述的方法(例如，治疗HPK1依赖性疾患诸如癌症)中的用途。

还提供了式(I)化合物或本文所详述的该化合物的任何变体或该化合物的药学上可接受的盐在生产用于本文所详述的方法(例如，治疗HPK1依赖性疾患诸如癌症)中的药物中的用途。

还提供了一种用于治疗HPK1依赖性疾患的试剂盒，该试剂盒包含：药物组合物，该药物组合物包含式(I)化合物或本文所详述的该化合物的任何变体或该化合物的药学上可接受的盐；以及使用说明书。

在另一方面，提供了一种制备式(I)化合物或其任何变体的方法。还提供了可用于合成式(I)化合物或其任何变体的化合物中间体。

具体实施方式

本文公开了式(I)化合物或其变体诸如式(IA)、(IB)和(IC)及其药物组合物，这些药物组合物为HPK1(造血祖细胞激酶1)的抑制剂或调节剂。因此，这些化合物和组合物可用于治疗由HPK1介导的疾病和疾患。一个治疗方法的实例是针对患有癌症的受试者。这些化合物不仅可用于抗击癌症，还可有利地用于增强有此需要的受试者的免疫应答。

现在将在下文中更全面地描述本发明所公开的主题。但是，本发明所公开的主题所涉及的领域的技术人员受益于前述说明书中给出的教导内容，将想到本文所述的本发明所公开的主题的许多修改和其他实施例。因此，应当理解，本发明所公开的主题不限于所公开的具体实施例，并且修改形式和其他实施例旨在涵盖于所附权利要求书的范围内。换言之，本文所述的主题涵盖所有替换、修改和等同形式。如果并入的文献、专利和类似材料中的一项或多项与本申请有所不同或矛盾，包括但不限于定义的术语、术语用法、描述的技术等，则以本申请为准。除非另有定义，否则本文所用的所有科学技术术语具有本领域的普通技术人员通常理解的相同意义。本文提及的所有出版物、专利申请、专利及其他参考文献的全文均以引用方式并入本文。

定义

如本文所用的“烷基”是指具有指定碳原子数(即C_1-10意指一至十个碳原子)的饱和直链(即，非支链)或支链单价烃链或其组合。特定的烷基基团是那些具有1至20个碳原子(“C_1-20烷基”)、具有1至8个碳原子(“C_1-8烷基”)、具有1至6个碳原子(“C_1-6烷基”)、具有2至6个碳原子(“C_2-6烷基”)或具有1至4个碳原子(“C_1-4烷基”)的基团。烷基基团的实例包括但不限于以下基团，诸如甲基、乙基、、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、仲丁基，以及例如正戊基、正己基、正庚基、正辛基的同系物和异构体等。

如本文所用的“烯基”是指具有至少一个烯属不饱和位点(即，具有式C＝C的至少一部分)并且具有指定碳原子数(即，C_2-10意指二至十个碳原子)的不饱和直链(即，非支链)或支链单价烃链或其组合。烯基基团可为“顺式”或“反式”构型，或替代地为“E”或“Z”构型。特定的烯基基团为具有2至20个碳原子(“C_2-20烯基”)、具有2至8个碳原子(“C_2-8烯基”)、具有2至6个碳原子(“C_2-6烯基”)或具有2至4个碳原子(“C_2-4烯基”)的基团。烯基基团的实例包括但不限于诸如次乙基(或乙烯基)、丙-1-烯基、丙-2-烯基(或烯丙基)、2-甲基丙-1-烯基、丁-1-烯基、丁-2-烯基、丁-3-烯基、丁-1,3-二烯基、2-甲基丁-1,3-二烯基、其同系物和异构体等。

如本文所用的“炔基”是指具有至少一个炔属不饱和位点(即，具有至少一个式C≡C部分)并且具有指定碳原子数(即，C_2-10意指二至十个碳原子)的不饱和直链(即，非支链)或支链单价烃链或其组合。特定的炔基基团为具有2至20个碳原子(“C_2-20炔基”)、具有2至8个碳原子(“C_2-8炔基”)、具有2至6个碳原子(“C_2-6炔基”)或具有2至4个碳原子(“C_2-4炔基”)的基团。炔基基团的实例包括但不限于以下基团，诸如乙炔基、丙-1-炔基、丙-2-炔基(或炔丙基)、丁-1-炔基、丁-2-炔基、丁-3-炔基、其同系物和异构体等。

如本文所用的“亚烷基”是指与烷基相同、但具有二价的残基。特定的亚烷基基团为具有1至6个碳原子(“C_1-6亚烷基”)、具有1至5个碳原子(“C_1-5亚烷基”)、具有1至4个碳原子(“C_1-4亚烷基”)或具有1至3个碳原子(“C_1-3亚烷基”)的基团。亚烷基的实例包括但不限于以下基团，诸如亚甲基(-CH₂-)、亚乙基(-CH₂-CH₂-)、亚丙基(-CH₂-CH₂-CH₂-)、亚丁基(-CH₂-CH₂-CH₂-CH₂-)等。

如本文所用的“环烷基”是指具有指定碳原子数(即，C_3-10意指三至十个碳原子)的非芳族饱和或不饱和的环状单价烃结构。环烷基可由一个环组成(诸如环己基)，也可由多个环组成(诸如金刚烷基)，但不包括芳基基团。包含多于一个环的环烷基可为稠合、螺环或桥接基团或其组合。特定的环烷基基团为具有3至12个环状碳原子的基团。优选的环烷基为具有3至8个环状碳原子(“C_3-8环烷基”)或具有3至6个碳原子(“C_3-6炔基”)的环烃。环烷基的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、1-环己烯基、3-环己烯基、环庚基、降冰片基等。

如本文所用的“芳基”是指具有单个环(例如，苯基)或多个稠环(例如，萘基或蒽基)的不饱和芳族碳环基团，这些稠环可以是或不是芳族环。特定的芳基基团为具有6至14个环状(即，环)碳原子的基团(“C_6-14芳基”)。具有多于一个环(其中至少一个环非芳香环)的芳基基团可在芳香环位置或非芳香环位置连接至母结构。在一个变体中，具有多于一个环(其中至少一个环非芳香环)的芳基基团在芳香环位置连接至母结构。

如本文所用的“杂芳基”是指具有1至14个环状(即，环)碳原子和至少一个环状杂原子(包括但不限于杂原子诸如氮、磷、氧和硫)的不饱和芳族环状基团。杂芳基基团可具有单个环(例如，吡啶基、呋喃基)或多个稠环(例如，吲哚嗪基、苯并噻吩基)，这些稠环可以是芳香环，也可以不是芳香环。特定的杂芳基基团为：具有1至12个环状(即，环)碳原子和1至6个独立地选自氮、磷、氧和硫的环状(即，环)杂原子的5元至14元环；具有1至8个环状碳原子和1至4个独立地选自氮、磷、氧和硫的环状杂原子的5元至10元环；以及具有1至5个环状碳原子和1至4个独立地选自氮、氧和硫的环状杂原子的5元、6元或7元环。在一个变体中，杂芳基包括具有1至6个环状碳原子和1至4个独立地选自氮、氧和硫的环状杂原子的单环芳族5元、6元或7元环。在另一个变体中，杂芳基包括具有1至12个环状碳原子和1至6个独立地选自氮、磷、氧和硫的环状杂原子的多环芳香环。具有多于一个环(其中至少一个环非芳香环)的杂芳基基团可在芳香环位置或非芳香环位置连接至母结构。在一个变体中，具有多于一个环(其中至少一个环非芳香环)的杂芳基基团在芳香环位置连接至母结构。

如本文所用的“杂环”、“杂环的”或“杂环基”是指具有单个环或多个稠环并且具有1至14个环状(即，环)碳原子和1至6个环状(即，环)杂原子诸如氮、磷、硫或氧等的饱和或不饱和的非芳族环状基团。包含多于一个环的杂环可为稠合、螺环或桥接基团或其任意组合。在稠环体系中，一个或多个稠环可为环烷基。特定的杂环基基团为：具有1至13个环状碳原子和1至6个独立地选自氮、磷、硫的环状杂原子的3元至14元环；具有1至11个环状碳原子和1至6个独立地选自氮、磷、硫的环状杂原子的3元至12元环；具有1至9个环状碳原子和1至4个独立地选自氮、磷、硫的环状杂原子的3元至10元环；具有1至7个环状碳原子和1至4个独立地选自氮、磷、硫的环状杂原子的3元至8元环；以及具有1至5个环状碳原子和1至4个独立地选自氮、磷、硫的环状杂原子的3元至6元环。在一个变体中，杂环基包括具有1至2个、1至3个、1至4个、1至5个或1至6个环状碳原子和1至2个、1至3个或1至4个独立地选自于氮、磷、硫的环状杂原子的单环3元、4元、5元、6元或7元环。在另一个变体中，杂环基包括具有1至12个环状碳原子和1至6个独立地选自氮、磷、硫的环状杂原子的多环非芳香环。

“卤代”或“卤素”是指氟、氯、溴和/或碘。“卤代烷基”是指被一个或多个可以相同或不同的卤素取代的烷基基团。在残基被多于一个卤素取代的情况下，可通过使用与连接的卤素部分的数量相对应的前缀来指代该残基，例如，二卤代芳基、二卤代烷基、三卤代芳基等是指被两个(“二”)或三个(“三”)卤代基团取代的芳基和烷基，这些卤代基团可以是但不一定是相同的卤代基团；因此，4-氯-3-氟苯基在二卤代芳基的范围内。其中每个氢被卤代基团取代的烷基基团称为“全卤代烷基”。一种优选的全卤代烷基基团为三氟烷基(-CF₃)。类似地，“全卤代烷氧基”是指其中卤素取代构成烷氧基基团的烷基部分的烃中的每个H的烷氧基基团。全卤代烷氧基基团的一个实例为三氟甲氧基(-OCF₃)。

“羰基”是指基团C＝O。

“氧代”是指部分＝O。

“偕”是指连接至同一原子的两个部分之间的关系。例如，在残基-CH₂-CR^xR^y-中，R^x和R^y为偕基团，并且R^x可以称为R^y的偕R基团。

“邻近”是指连接至相邻原子的两个部分之间的关系。例如，在残基-CHR^x-CHR^y-中，R^x和R^y为邻近基团，并且R^x可以称为R^y的邻近R基团。

除非另外指明，否则“任选取代的”是指基团可以是未取代的或被一个或多个(例如，1个、2个、3个、4个或5个)针对该基团列出的取代基取代，其中取代基可以相同或不同。在一个实施例中，任选取代的基团具有一个取代基。在另一个实施例中，任选取代的基团具有两个取代基。在另一个实施例中，任选取代的基团具有三个取代基。在另一个实施例中，任选取代的基团具有四个取代基。在一些实施例中，任选取代的基团具有1至2个、1至3个、1至4个或1至5个取代基。

本文中使用的“抑制剂”一词意指抑制HPK1活性的分子。本文中的“抑制”是指靶酶的活性与不存在抑制剂的情况下的活性相比有所降低。在一些实施例中，术语“抑制”意指HPK1活性降低至少约5％、至少约10％、至少约20％、至少约25％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或至少约95％。在其他实施例中，“抑制”意指HPK1活性降低约5％至约25％、约25％至约50％、约50％至约75％或约75％至100％。在一些实施例中，“抑制”意指HPK1活性降低约95％至100％，例如，活性降低95％、96％、97％、98％、99％或100％。此类降低可使用本领域的技术人员公认的各种技术来测量，包括体外激酶测定。

如本文所用，“HPK1拮抗剂”或“HPK1抑制剂”是降低、抑制或以其他方式削弱HPK1的生物学活性中的一种或多种(例如，丝氨酸/苏氨酸激酶活性、在TCR激活时募集TCR复合物、与蛋白质结合伴侣诸如SLP76相互作用)。使用HPK1拮抗剂的拮抗作用不一定表明HPK1活性被完全消除。相反，活性可降低具有统计学意义的量，包括例如HPK1的活性相比于适当的对照降低至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、95％或100％。在一些实施例中，HPK1拮抗剂降低、抑制或以其他方式削弱HPK1的丝氨酸/苏氨酸激酶活性。在其中一些实施例中，HPK1拮抗剂降低、抑制或以其他方式削弱HPK1介导的SLP76和/或Gads的磷酸化。本发明所公开的化合物直接与HPK1结合并且抑制其激酶活性。

“特异性拮抗剂”是指降低、抑制或以其他方式削弱确定的靶点活性的幅度大于无关靶点的试剂。例如，HPK1特异性拮抗剂降低HPK1的至少一种生物学活性的量在统计学上大于该拮抗剂对任何其他蛋白质(例如，其他丝氨酸/苏氨酸激酶)的抑制作用。在一些实施例中，拮抗剂对靶点的IC₅₀为该拮抗剂对非靶点的IC₅₀约90％、80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％、10％、5％、1％、0.1％、0.01％、0.001％或更小。本发明所公开的化合物可以是也可以不是特异性HPK1拮抗剂。特异性HPK1拮抗剂降低HPK1的生物学活性的量在统计学上大于该拮抗剂对任何其他蛋白质(例如，其他丝氨酸/苏氨酸激酶)的抑制作用。在某些实施例中，HPK1拮抗剂特异性抑制HPK1的丝氨酸/苏氨酸激酶活性。在其中一些实施例中，HPK1拮抗剂对HPK1的IC₅₀为HPK1拮抗剂对另一种丝氨酸/苏氨酸激酶或其他类型的激酶(例如，酪氨酸激酶)的IC₅₀的约90％、80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％、10％、0.1％、0.01％、0.001％或更小。

如本文所用，“疗法”或“治疗”是用于获得有益或期望的结果(包括临床结果)的方法。出于本发明的目的，有益或期望的临床结果包括但不限于以下结果中的一种或多种：减少由疾病引起的一种或多种症状，降低疾病的程度，稳定疾病(例如，预防或延缓疾病的恶化)，预防或延缓疾病的传播(例如，转移)，延缓或减慢疾病进展，改善疾病状态，(部分或全部)缓解疾病，减少治疗疾病所需的一种或多种药物的剂量，增强其他药物的作用，延缓疾病进展，提高生活质量，和/或延长存活期。“治疗”还包括减少癌症的病理学结果。本发明的方法设想了这些治疗方面中的任何一个或多个。

如本文所用，“延缓”癌症的发展意指延迟、阻碍、减慢、减缓、稳定和/或推迟疾病的发展。这种延迟可以具有不同的时间长度，这取决于病史和/或待治疗的受试者。对于本领域技术人员显而易见的是，充分或显著延迟实际上可以涵盖预防，因为受试者不会患该病。“延迟”癌症发展的方法是与不使用该方法相比，在给定时间范围内降低疾病发展的可能性和/或在给定时间范围内减小疾病程度的方法。此类比较通常基于使用具有统计学意义的数量的受试者的临床研究。癌症发展可使用标准方法诸如常规体检、乳房X线摄影术、成像或活检进行检测。发展也可以指最初可能无法检测到的疾病进展，并且包括发生、复发和发作。

如本文所用，“有风险的”受试者是具有罹患癌症的风险的受试者。在接受本文所述的治疗方法治疗之前，“有风险的”受试者可能患有或不患有可检测的疾病，并且可能表现出或不表现出可检测的疾病。“有风险的”表示受试者具有一种或多种所谓的风险因素，这些风险因素是与癌症的发展相关的可测量参数，如本文所述。具有这些风险因素中的一种或多种的受试者罹患癌症的可能性高于不具有这些风险因素的受试者。

如本文所用，“联合治疗”意指包括两种或更多种不同化合物的疗法。因此，在一个方面，提供了包含本文所详述的化合物与另一种化合物的联合疗法。在一些变体中，联合疗法任选地包括一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂、无药学活性的化合物和/或惰性物质。

如本文所用，术语“有效量”意指本发明化合物的结合其功效和毒性参数的量，其在给定的治疗形式下应当有效。如本领域所理解的，有效量可以在一次或多次给药中，即，可能需要单次给药或多次给药才能达到所需的治疗终点。可以在施用一种或多种治疗剂的情况下考虑“有效量”，并且如果与一种或多种其他试剂结合可以获得或实现预期或有益的结果，则可以考虑给予有效量的单一药剂。由于化合物的联合效应(例如，累加或协同效应)，可任选地降低任何联合施用的化合物的合适的剂量。在各种实施例中，有效量的组合物或疗法可以(i)减少癌细胞的数量；(ii)减小肿瘤大小；(iii)在一定程度上抑制、延迟、减慢并且优选地阻止癌细胞浸润到周围器官中；(iv)抑制(例如，在一定程度上减慢并且优选地停止)肿瘤转移；(v)抑制肿瘤生长；(vi)预防或延迟肿瘤的发生和/或复发；和/或(vii)在一定程度上缓解与癌症相关联的症状中的一种或多种。在各种实施例中，施用的量足以缓解、减轻、降低和/或延迟癌症症状中的一种或多种。

如本领域所理解的，“有效量”可以在一次或多次给药中，即，可能需要单次给药或多次给药才能达到所需的治疗终点。可以在施用一种或多种治疗剂的情况下考虑“有效量”，并且如果与一种或多种其他试剂结合可以获得或实现预期或有益的结果，则可以考虑给予有效量的治疗剂和化合物或其药学上可接受的盐。

“治疗有效量”是指足以产生所需的疗效的化合物或其盐的量(例如，降低癌症症状中的一种或多种的严重程度或持续时间、稳定其严重程度或将其消除)。出于治疗用途，有益或所需的结果包括例如：减少由疾病引起的一种或多种症状(生化、组织学和/或行为，包括其并发症以及疾病发展期间出现的中间病理表型)，改善罹患该疾病的患者的生活质量，减小治疗该疾病所需的其他药物的剂量，增强另一种药物的效应，延缓疾病的进展，和/或延长患者的生存期。

“预防有效量”是指施用于易患癌症和/或可能罹患癌症的受试者时足以预防或减轻癌症的一种或多种将来的症状的严重程度的化合物或其药学上可接受的盐的量。对于预防用途、有益或所需的结果包括例如消除或降低风险、减轻将来的严重程度或延迟疾病发作(包括延迟疾病的生化、组织学和/或行为症状、其并发症以及在将来的疾病发展过程中出现的中间病理表型)。

应当理解，可在辅助疗法中向受试者施用有效量的化合物或其药学上可接受的盐，该辅助疗法是指受试者具有癌症史并且通常(但不一定)对治疗有反应的临床疗法，该治疗包括但不限于手术(例如手术切除)、放疗和化疗。但是，由于其癌症病史，这些受试者被认为有罹患癌症的风险。“辅助疗法”中的治疗或施用是指随后的治疗方式。

如本文所用，“单位剂型”是指物理上分离的单位，其适合作为单位剂量，每个单位包含经计算可产生所需疗效的预定量的活性成分以及所需的药物载体或赋形剂。单位剂型可包含单一疗法或联合疗法。

如本文所用，术语“受控释放”是指不立即释放药物的含药制剂或其部分，即，对于“受控释放”制剂，施用后药物不会立即释放到吸收池中。该术语包括旨在在较长时间内逐渐释放药物化合物的贮库制剂。受控释放制剂可包括多种药物输送系统，其通常包括将药物化合物与具有所需的释放特性(例如，pH依赖性或非pH依赖性溶解度、不同程度的水溶性等)的载体、聚合物或其他化合物混合并且根据所需的递送途径配制混合物(例如，带包衣的胶囊、可植入的储库、包含可生物降解的胶囊的注射液等)。

如本文所用，“药学上可接受的的”或“药理学上可接受的”意指并非生物学上或以其他方式不可取的物料，例如，该物料可掺入施用于患者的药物组合物中，而不引起任何显著的不良生物学效应或以有害的方式与包含该组分的制剂的任何其他组分相互作用。药学上可接受的载体或赋形剂优选地符合所需的毒理学和生产测试标准，并且/或者包含在美国食品药品监督管理局编写的《非活性成分指南》中。

在一些实施例中，本发明的化合物的盐是药学上可接受的盐。“药学上可接受的盐”是指那些保留了游离(非盐)化合物的生物活性的至少一部分并且可作为药物或药剂施用于受试者的盐。此类盐例如包括：(1)与无机酸诸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等形成或与有机酸诸如乙酸、草酸、丙酸、琥珀酸、马来酸、酒石酸等形成的酸加成盐；(2)当母体化合物中存在的酸性质子被金属离子(例如，碱金属离子、碱土金属离子或铝离子)替代或与有机碱配位时形成的盐。可接受的有机碱包括乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺等。可接受的无机碱包括氢氧化铝、氢氧化钙、氢氧化钾、碳酸钠、氢氧化钠等。药学上可接受的盐可在生产过程中原位制备，或通过使本发明的纯化的游离酸或碱形式的化合物分别与合适的有机或无机碱或酸反应并且分离出在后续纯化过程中形成的盐来制备。

如本文所用，术语“赋形剂”意指可用于药物或药剂(诸如包含本发明的化合物作为活性成分的片剂)中的惰性或非活性物质。术语“赋形剂”可涵盖各种物质，包括但不限于用作粘结剂、崩解剂、包衣、压缩/包囊助剂、乳霜或洗液、润滑剂、肠胃外给药溶液、可咀嚼片剂的材料、甜味剂或调味剂、悬浮剂/胶凝剂或湿法制粒剂的任何物质。粘结剂包括例如卡波姆、聚维酮、黄原胶等；包衣包括例如乙酸邻苯二甲酸纤维素、乙基纤维素、结冷胶、麦芽糖糊精、肠溶衣等；压缩/包囊助剂包括例如碳酸钙、葡聚糖、果糖dc(dc–“可直接压缩”)、蜂蜜dc、乳糖(无水或一水合物；任选地与阿斯巴甜、纤维素或微晶纤维素结合使用)、淀粉dc、蔗糖等；崩解剂包括例如交联羧甲基纤维素钠、结冷胶、羟乙酸淀粉钠等；乳霜或洗液包括麦芽糖糊精、角叉菜胶等；润滑剂包括例如硬脂酸镁、硬脂酸、硬脂酰富马酸钠等；用于咀嚼片剂的物料包括例如葡聚糖、果糖dc、乳糖(一水合物，任选地与阿斯巴甜或纤维素结合)等；悬浮剂/胶凝剂包括例如角叉菜胶、淀粉羟乙酸钠、黄原胶等；甜味剂包括例如阿斯巴甜、葡聚糖、果糖dc、山梨糖醇、蔗糖dc等；并且湿法制粒剂包括例如碳酸钙、麦芽糖糊精、微晶纤维素等。在某些情况下，术语“赋形剂”和“载体”可互换使用。

术语“受试者”或“患者”是指动物诸如哺乳动物，包括但不限于灵长类动物(例如人)、牛、绵羊、山羊、马、犬、猫、兔、大鼠、小鼠等。在某些实施例中，受试者是人或人类患者。

在本申请中，术语“异常细胞生长”、“不受调控的细胞生长”和“过度增殖疾患”可互换使用。除非另有说明，否则如本文所用的“异常细胞生长”是指独立于正常调节机制(例如接触抑制的丧失)的细胞生长。

术语“癌症”是指受试者中特征在于不受调控的细胞生长的病症，其中癌细胞能够局部侵袭和/或转移至非相邻部位。如本文所用，“癌细胞”、“癌性细胞”或“肿瘤细胞”是指特征在于该不受调控的细胞生长和侵袭特性的细胞。术语“癌症”涵盖所有类型的癌症，包括但不限于所有形式的癌、黑素瘤、胚细胞瘤、肉瘤、淋巴瘤和白血病，包括但不限于膀胱癌、膀胱肿瘤、脑瘤、乳腺癌、宫颈癌、结直肠癌、食道癌、子宫内膜癌、肝细胞癌、喉癌、肺癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肾癌和甲状腺癌、急性淋巴细胞白血病、急性髓细胞性白血病、室管膜瘤、尤文肉瘤、胶质母细胞瘤、髓母细胞瘤、神经母细胞瘤、骨肉瘤、横纹肌肉瘤、横纹肌癌和肾母细胞瘤(Wilm瘤)。

“化疗剂”是可用于治疗癌症的化学化合物或生物制剂。化疗剂的实例包括：烷化剂，例如噻替哌和环磷酰胺烷基磺酸盐，诸如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡；氮丙啶类化合物，诸如苯佐替哌(benzodopa)、卡波醌、美妥替派(meturedopa)和乌瑞替派(uredopa)；乙烯亚胺和甲基密胺类(methylamelamines)，包括六甲蜜胺、曲他胺(triethylenemelamine)、三亚乙基磷酰胺、三亚乙基硫代磷酰胺和三羟甲蜜胺；己酸配质(acetogenins)，尤其是bulIatacin和bulIatacinone；δ-9-四氢大麻酚(屈大麻酚，)；β-拉帕醌；拉帕醇；秋水仙碱；桦木酸；喜树碱(包括合成类似物托泊替康CPT-11(伊立替康，)、乙酰喜树碱、东莨菪素(scopolectin)和9-氨基喜树碱)；苔藓抑素；培美曲塞；CC-1065(包括其阿多来新、卡折来新和比折来新合成类似物)；鬼臼毒素；鬼臼酸；替尼泊苷；念珠藻素(尤其是念珠藻素1和念珠藻素8)；尾海兔素；倍癌霉素(包括合成类似物KW-2189和CB1-TM1)；艾榴塞洛素(eleutherobin)；水鬼蕉碱；TLK-286；CDP323，一种口服α-4整合素抑制剂；枝珊瑚醇(sarcodictyin)；海绵素(spongistatin)；氮芥，诸如苯丁酸氮芥、萘氮芥、氯磷酰胺、雌莫司汀、异环磷酰胺、氮芥、盐酸氧氮芥、美法仑、新氮芥、苯芥胆甾醇、泼尼莫司汀、曲磷胺、乌拉莫司汀；亚硝基脲，诸如卡莫司汀、氯脲菌素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀和雷莫司汀；抗生素，诸如烯二炔抗生素(例如，刺孢霉素，尤其是刺孢霉素γ1I和刺孢霉素ωI1(参见例如，Nicolaou等人，Angew.Chem Intl.Ed.Engl.，33:183-186(1994))；dynemicin(包括dynemicin A)；esperamicin；新制癌菌素发色团和相关色素蛋白烯二炔抗生素生色团)、阿克拉霉素、放线菌素、氨茴霉素、重氮丝氨酸、博莱霉素、放线菌素C、carabicin、洋红霉素、嗜癌菌素、chromomycinis、放线菌素D、柔红霉素、地托比星、6-重氮基-5-氧代-L-正亮氨酸、多柔比星(包括吗啉代-多柔比星、氰基吗啉代-多柔比星、2-吡咯啉并-多柔比星、盐酸多柔比星脂质体注射液和脱氧多柔比星)、表柔比星、依索比星、伊达比星、马塞罗霉素、丝裂霉素诸如丝裂霉素C、霉酚酸、诺加霉素、橄榄霉素、培洛霉素、泊非霉素、嘌呤霉素、三铁阿霉素、罗多比星、链黑菌素、链佐星、杀结核菌素、乌苯美司、净司他丁、佐柔比星；抗代谢物，例如甲氨蝶呤、吉西他滨替加氟卡培他滨埃博霉素和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物，诸如二甲叶酸、氨甲蝶呤、蝶罗呤、三甲曲沙；嘌呤类似物诸如氟达拉滨、6-巯基嘌呤、硫咪嘌呤、硫鸟嘌呤；嘧啶类似物，诸如安西他滨、阿扎胞苷、6-氮杂尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、双脱氧尿苷、去氧氟尿苷、依诺他滨和氟尿苷；抗肾上腺素，诸如氨鲁米特、米托坦、曲洛司坦；叶酸补充剂，诸如亚叶酸；醋葡醛内酯；醛磷酰胺糖苷；氨基乙酰丙酸；恩尿嘧啶；安吖啶；bestrabucil；比生群；依达曲沙；defofamine；秋水仙胺；地吖醌；依氟鸟氨酸；依利醋铵；依托格鲁；硝酸镓；羟基脲；蘑菇多糖；Ionidainine；美登素，诸如美登素和安丝菌素；米托胍腙；米托蒽醌；mopidanmol；nitraerine；喷司他丁；蛋氨氮芥；吡柔比星；洛索蒽醌；鬼臼酸；2-乙基肼；甲基苄肼；多糖复合物(JHS Natural Products,Eugene,OR)；雷佐生；根霉素；西佐喃；锗螺胺；细格孢氮杂酸；三亚胺醌；2,2',2”-三氯三乙胺；单端孢菌素(尤其是T-2毒素、verracurin A、杆孢菌素A和蛇形菌素)；乌拉坦；长春地辛达卡巴嗪；甘露醇氮芥；二溴甘露醇；二溴卫矛醇；哌泊溴烷；gacytosine；阿拉伯糖苷(“Ara-C”)；噻替哌；紫杉烷类，例如紫杉醇白蛋白工程化紫杉醇的纳米颗粒制剂(ABRAXANE^TM)和多烯紫杉醇苯丁酸氮芥；6-硫鸟嘌呤；巯基嘌呤；氨甲蝶呤；铂类似物，诸如顺铂和卡铂；长春碱铂；依托泊苷(VP-16)；异环磷酰胺；米托蒽醌；长春新碱奥沙利铂；甲酰四氢叶酸(leucovovin)；长春瑞滨Novantrone；依达曲沙；道诺霉素；氨基蝶呤；伊班膦酸盐；拓扑异酶抑制剂RFS 2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；类视色素诸如维甲酸；以及任何上述项的药学上可接受的盐、酸或衍生物；以及上述项中的两种或更多种的组合，诸如CHOP(环磷酰胺、多柔比星、长春新碱和泼尼松龙联合疗法的缩写)和LFLFOX(奥沙利铂(ELOXATIN^TM)与5-FU和甲酰四氢叶酸联合治疗方案的缩写)。

化疗剂的其他实例包括抗激素剂，其用来调节、减少、阻断或抑制可促进癌症的生长激素的作用，并且通常采用系统性或全身治疗的形式。它们本身可能是激素。实例包括抗雌激素和选择性雌激素受体调节剂(SERM)，包括例如他莫昔芬(包括他莫昔芬)、雷洛昔芬屈洛昔芬、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬、keoxifene、LY117018、奥那司酮和托瑞米芬抗孕激素；雌激素受体下调剂(ERD)；雌激素受体拮抗剂，诸如氟维司群具有抑制或关闭卵巢功能的药剂，例如黄体生成素释放激素(LHRH)激动剂诸如醋酸氟维司群(和)、醋酸戈舍瑞林、醋酸布舍瑞林和tripterelin；抗雄激素，诸如氟他胺、尼鲁米特和比卡鲁胺；以及抑制酶芳香酶(其在肾上腺中调节雌激素的生产)的芳香化酶抑制剂，诸如4(5)-咪唑、氨鲁米特、醋酸甲地孕酮依西美坦formestanie、法倔唑、伏氯唑来曲唑和阿纳托唑此外，此类化疗剂的定义包括：双膦酸盐，诸如氯膦酸盐(例如或)、依替膦酸盐NE-58095、唑来膦酸/唑来膦酸盐阿仑膦酸盐帕米膦酸盐替洛膦酸盐或利塞膦酸盐以及曲沙他滨(1,3-二氧戊环胞嘧啶核苷类似物)；反义寡核苷酸，特别是那些在涉及异常细胞增殖的信号通路中抑制基因的表达的反义寡核苷酸，诸如PKC-α、Ralf、H-Ras和表皮生长因子受体(EGF-R)；疫苗，诸如疫苗和基因治疗疫苗(例如疫苗、疫苗和疫苗；拓扑异构酶1抑制剂(例如，)；抗雌激素诸如氟维司群；EGFR抑制剂，诸如厄洛替尼或西妥昔单抗；抗VEGF抑制剂，诸如贝伐单抗；伊立替康；rmRH(例如，)；17AAG(作为热休克蛋白(Hsp)90毒物的格尔德霉素衍生物)，以及任何上述项的药学上可接受的盐、酸和衍生物。

“化疗剂”的定义中还包括：(i)抗激素剂，其用来调节或抑制对肿瘤的激素作用诸如抗雌激素和选择性雌激素受体调节剂(SERM)，包括例如他莫昔芬(包括柠檬酸他莫昔芬)、雷洛昔芬、屈洛昔芬、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬、keoxifene、LY117018、奥那司酮和(柠檬托瑞米芬)；(ii)芳香酶抑制剂，这些抑制剂抑制酶芳香酶(其在肾上腺中调节雌激素的生产)，诸如4(5)-咪唑、氨鲁米特、(醋酸甲地孕酮)、(依西美坦；Pfizer)、formestanie、法倔唑、(伏氯唑)、(来曲唑；Novartis)和(阿纳托唑；AstraZeneca)；(iii)抗雄激素，诸如氟他胺、尼鲁米特、比卡鲁胺、亮丙立德和戈舍瑞林；以及曲沙他滨(1,3-二氧戊环胞嘧啶核苷类似物)；(iv)蛋白激酶抑制剂；(v)脂质激酶抑制剂；(vi)反义寡核苷酸，特别是那些在涉及异常细胞增殖的信号通路中抑制基因的表达的反义寡核苷酸，诸如PKC-α、Ralf和H-Ras；(vii)核酶，诸如VEGF表达抑制剂(例如，)和HER2表达抑制剂；(viii)疫苗，诸如基因治疗疫苗，例如和rIL-2；拓扑异构酶1抑制剂，诸如rmRH；(ix)抗血管生成剂，诸如贝伐单抗(Genentech)；以及(x)任何上述项的药学上可接受的盐、酸和衍生物。

在一些实施例中，化疗剂为免疫治疗剂。如本文所用，“免疫治疗剂”是增强免疫系统以帮助特异性或非特异性地抗击癌症的化合物。免疫治疗剂包括单克隆抗体和增强免疫系统的非特异性免疫治疗剂，诸如细胞因子、白细胞介素(例如，IL-2、IL-7、IL-12、IL-15、IL-21)、干扰素(例如，IFN-α、IFN-β、IFN-γ)、GM-CSF、沙利度胺(Celgene)、来那度胺(Celgene)、泊马度胺(Celgene)、咪喹莫特(Valeant)。可用作化疗剂的单克隆抗体的非限制性实例包括曲妥珠单抗(Genentech)、贝伐单抗(Genentech)、西妥昔单抗(Bristol-Myers Squibb)、帕尼单抗(Amgen)、易普利姆玛(Bristol-Myers Squibb)、利妥昔单抗(Genentech)、阿仑单抗(Genzyme)、奥法木单抗(Genmab)、吉妥珠单抗奥佐米星(Wyeth)、本妥昔单抗(Seattle Genetics)、⁹⁰Y标记的替伊莫单抗(Biogen Idec)、¹³¹I标记的托西莫单抗(GlaxoSmithKline)、ado曲妥珠单抗(Genentech)、博纳吐单抗(Amgen)、帕妥珠单抗(Genentech)、obinutuzumab(Genentech)、纳武单抗(Bristol-Myers Squibb)、派姆单抗(Merck)、匹利珠单抗(CureTech)、MPDL3280A(描述于WO2010/077634中，其全文以引用方式并入本文)、MDX-1105(描述于WO2007/005874中，其全文以引用方式并入本文)和MEDI4736(描述于WO2011/066389和US2013/034559中，这两件专利全文以引用方式并入本文)。另一种可用的免疫治疗剂是AMP-224(描述于WO2010/027827和WO2011/066342中，这两件专利全文并入本文)。

化合物

本文所公开的化合物为式(I)化合物或这些化合物的盐(例如，药学上可接受的盐)、溶剂化物(例如，水合物)、前药、代谢物或衍生物。这些化合物可用作HPK1的抑制剂。

在一个方面，提供了一种式(I)化合物：

或该化合物的盐(例如，药学上可接受的盐)、溶剂化物(例如，水合物)、前药、代谢物或衍生物，其中：

R¹为氢、卤素、羟基、任选地被卤素取代的C_1-6烷基、C_3-4环烷基或任选地被卤素取代的-O(C_1-6烷基)；

R²为任选地被R¹⁰取代的5元至14元杂芳基；

R³为氢、卤素、氰基、C_1-6烷基、C_3-8环烷基、3元至14元杂环基或–OR⁷；其中R³的所述C_1-6烷基、C_3-8环烷基和3元至14元杂环基各自任选地被1个、2个、3个、4个或5个独立地选自R¹⁰的取代基取代；

R⁴为C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-8环烷基、C_6-14芳基、5元至14元杂芳基、3元至14元杂环基、卤素、氰基、-C(O)R⁶、-C(O)OR⁷、-C(O)NR^8aR^8b、-OR⁷、-OC(O)R⁶、-OC(O)NR^8aR^8b、-SR⁷、-S(O)R⁹、-S(O)₂R⁹、-S(O)₂NR^8aR^8b、-P(O)R^9aR^9b、-NR^8aR^8b、-N(R⁸)C(O)R⁶、-N(R⁸)C(O)OR⁷、-N(R⁸)C(O)NR^8aR^8b、-N(R⁸)S(O)₂R⁹或-N(R⁸)S(O)₂NR^8aR^8b；其中R⁴的所述C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-8环烷基、C_6-14芳基、5元至14元杂芳基和3元至14元杂环基各自任选地被1个、2个、3个、4个或5个独立地选自R¹⁰的取代基取代；

R⁵为氢、卤素、氰基、C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-8环烷基、C_6-14芳基、5元至14元杂芳基、3元至14元杂环基、卤素、氰基、-C(O)R⁶、-C(O)OR⁷、-C(O)NR^8aR^8b、-OR⁷、-OC(O)R⁶、-OC(O)NR^8aR^8b、-SR⁷、-S(O)R⁹、-S(O)₂R⁹、-S(O)₂NR^8aR^8b、-P(O)R^9aR^9b、-NR^8aR^8b、-N(R⁸)C(O)R⁶、-N(R⁸)C(O)OR⁷、-N(R⁸)C(O)NR^8aR^8b、-N(R⁸)S(O)₂R⁹或-N(R⁸)S(O)₂NR^8aR^8b；其中R⁵的所述C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-8环烷基、C_6-14芳基、5元至14元杂芳基和3元至14元杂环基各自任选地被1个、2个、3个、4个或5个独立地选自R¹⁰的取代基取代；

每个R⁶独立地为氢、C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-8环烷基、C_6-10芳基、5元至14元杂芳基或3元至12元杂环基；其中R⁶的所述C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-8环烷基、C_6-10芳基、5元至14元杂芳基和3元至12元杂环基各自任选地被1个、2个、3个、4个或5个独立地选自R¹⁰的取代基取代；

每个R⁷独立地为氢、C_1-6烷基、C_3-8环烷基、C_6-10芳基、5元至14元杂芳基或3元至12元杂环基；其中R⁷的所述C_1-6烷基、C_3-8环烷基、C_6-10芳基、5元至14元杂芳基和3元至12元杂环基各自任选地被1个、2个、3个、4个或5个独立地选自R¹⁰的取代基取代；

每个R⁸独立地为氢或C_1-6烷基；

每个R^8a和R^8b独立地为氢、C_1-6烷基、C_3-8环烷基、C_6-10芳基、5元至14元杂芳基或3元至12元杂环基；其中R^8a和R^8b的所述C_1-6烷基、C_3-8环烷基、C_6-10芳基、5元至14元杂芳基和3元至12元杂环基各自任选地被1个、2个、3个、4个或5个独立地选自R¹⁰的取代基取代；

或者R^8a和R^8b与它们所连接的氮原子一起形成任选地被1个、2个、3个、4个或5个独立地选自R¹⁰的取代基取代的4元至12元杂环基；

每个R⁹独立地为C_1-6烷基、C_3-8环烷基、C_6-10芳基、5元至14元杂芳基或3元至12元杂环基；其中R⁹的所述C_1-6烷基、C_3-8环烷基、C_6-10芳基、5元至14元杂芳基和3元至12元杂环基各自任选地被1个、2个、3个、4个或5个独立地选自R¹⁰的取代基取代；

每个R^9a和R^9b独立地为C_1-6烷基、C_3-8环烷基、C_6-10芳基、5元至14元杂芳基、3元至12元杂环基或-O-C_1-6烷基；其中R^9a和R^9b的所述C_1-6烷基、C_3-8环烷基、C_6-10芳基、5元至14元杂芳基和3元至12元杂环基各自任选地被1个、2个、3个、4个或5个独立地选自R¹⁰的取代基取代；

或者R^9a和R^9b与它们所连接的磷原子一起形成任选地被1个、2个、3个、4个或5个独立地选自R¹⁰的取代基取代的4元至12元杂环基；

每个R¹⁰独立地为氧代、C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-8环烷基、C_6-10芳基、5元至10元杂芳基、3元至12元杂环基、卤素、氰基、-C(O)R^a、-C(O)OR^b、-C(O)NR^cR^d、-OR^b、-OC(O)R^a、-OC(O)NR^cR^d、-SR^b、-S(O)R^e、-S(O)₂R^e、-S(O)(＝NH)R^e、-S(O)₂NR^cR^d、-NR^cR^d、-N(R^f)C(O)R^a、-N(R^f)C(O)OR^b、-N(R^f)C(O)NR^cR^d、-N(R^f)S(O)₂R^e、-N(R^f)S(O)₂NR^cR^d或-P(O)R^gR^h；其中R¹⁰的所述C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-8环烷基、C_6-14芳基、5元至14元杂芳基和3元至14元杂环基各自任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹¹的取代基取代；

每个R^a独立地为氢、C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-8环烷基、C_6-10芳基、5元至10元杂芳基或3元至12元杂环基；其中R^a的所述C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-8环烷基、C_6-10芳基、5元至10元杂芳基和3元至12元杂环基各自任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹¹的取代基取代；

每个R^b独立地为氢、C_1-6烷基、C_3-8环烷基、C_6-10芳基、5元至10元杂芳基或3元至12元杂环基；其中R^b的所述C_1-6烷基、C_3-8环烷基、C_6-10芳基、5元至10元杂芳基和3元至12元杂环基各自任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹¹的取代基取代；

每个R^c和R^d独立地为氢、C_1-6烷基、C_3-8环烷基、C_6-10芳基、5元至10元杂芳基或3元至12元杂环基；其中R^c和R^d的所述C_1-6烷基、C_3-8环烷基、C_6-10芳基、5元至10元杂芳基和3元至12元杂环基各自任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹¹的取代基取代；

或者R^c和R^d与它们所连接的氮原子一起形成任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹¹的取代基取代的4元至12元杂环基；

每个R^e独立地为C_1-6烷基、C_3-8环烷基、C_6-10芳基、5元至10元杂芳基或3元至12元杂环基；其中R^e的所述C_1-6烷基、C_3-8环烷基、C_6-10芳基、5元至10元杂芳基和3元至12元杂环基各自任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹¹的取代基取代；

每个R^f独立地为氢或C_1-6烷基；

每个R^g和R^h独立地为C_1-6烷基、C_3-8环烷基、C_6-10芳基、5元至10元杂芳基、3元至12元杂环基或-O-C_1-6烷基；其中R^g和R^h的所述C_1-6烷基、C_3-8环烷基、C_6-10芳基、5元至10元杂芳基和3元至12元杂环基各自任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹¹的取代基取代；

或者R^g和R^h与它们所连接的磷原子一起形成任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹¹的取代基取代的4元至12元杂环基；

每个R¹¹独立地为氧代、C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-6环烷基、C_6-10芳基、5元至10元杂芳基、3元至8元杂环基、卤素、氰基、-C(O)R^a1、-C(O)OR^b1、-C(O)NR^c1R^d1、-OR^b1、-OC(O)R^a1、-OC(O)NR^c1R^d1、-SR^b1、-S(O)R^e1、-S(O)₂R^e1、-S(O)₂NR^c1R^d1、-NR^c1R^d1、-N(R^f1)C(O)R^a1、-N(R^f1)C(O)OR^b1、-N(R^f1)C(O)NR^c1R^d1、-N(R^f1)S(O)₂R^e1、-N(R^f1)S(O)₂NR^c1R^d1或-P(O)R^g1R^h1；其中R¹¹的所述C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-6环烷基、C_6-14芳基、5元至14元杂芳基和3元至14元杂环基各自任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹²的取代基取代；

每个R^a1独立地为氢、C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-6环烷基、C_6-10芳基、5元至10元杂芳基或3元至8元杂环基；其中R^a1的所述C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-6环烷基、C_6-10芳基、5元至10元杂芳基和3元至8元杂环基各自任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹²的取代基取代；

每个R^b1独立地为氢、C_1-6烷基、C_3-6环烷基、C_6-10芳基、5元至10元杂芳基或3元至8元杂环基；其中R^b1的所述C_1-6烷基、C_3-6环烷基、C_6-10芳基、5元至10元杂芳基和3元至8元杂环基各自任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹²的取代基取代；

每个R^c1和R^d1独立地为氢、C_1-6烷基、C_3-6环烷基、C_6-10芳基、5元至10元杂芳基或3元至8元杂环基；其中R^c1和R^d1的所述C_1-6烷基、C_3-6环烷基、C_6-10芳基、5元至10元杂芳基和3元至8元杂环基各自任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹²的取代基取代；

或者R^c1和R^d1与它们所连接的氮原子一起形成任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹²的取代基取代的4元至8元杂环基；

每个R^e1独立地为C_1-6烷基、C_3-6环烷基、C_6-10芳基、5元至10元杂芳基或3元至8元杂环基；其中R^e1的所述C_1-6烷基、C_3-6环烷基、C_6-10芳基、5元至10元杂芳基和3元至8元杂环基各自任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹²的取代基取代；

每个R^f1独立地为氢或C_1-6烷基；

每个R^g1和R^h1独立地为C_1-6烷基、C_3-6环烷基、C_6-10芳基、5元至10元杂芳基、3元至8元杂环基或-O-C_1-6烷基；其中R^g1和R^h1的所述C_1-6烷基、C_3-6环烷基、C_6-10芳基、5元至10元杂芳基和3元至8元杂环基各自任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹²的取代基取代；

或者R^g1和R^h1与它们所连接的磷原子一起形成任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹²的取代基取代的4元至8元杂环基；

每个R¹²独立地为氧代、C_1-6烷基、C_3-6环烷基、C₆芳基、5元至6元杂芳基、3元至6元杂环基、卤素、氰基、-C(O)R^a2、-C(O)OR^b2、-C(O)NR^c2R^d2、-OR^b2、-OC(O)R^a2、-OC(O)NR^c2R^d2、-S(O)₂R^e2、-S(O)₂NR^c2R^d2、-NR^c2R^d2、-N(R^f2)C(O)R^a2、-N(R^f2)C(O)OR^b2、-N(R^f2)C(O)NR^c2R^d2、-N(R^f2)S(O)₂R^e2、-N(R^f2)S(O)₂NR^c2R^d2或-P(O)R^g2R^h2；其中R¹²的所述C_1-6烷基、C_3-6环烷基、C₆芳基、5元至6元杂芳基和3元至6元杂环基各自任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹³的取代基取代；

每个R^a2独立地为氢、C_1-6烷基、C_3-6环烷基、C₆芳基、5元至6元杂芳基或3元至6元杂环基；其中R^a2的所述C_1-6烷基、C_3-6环烷基、C₆芳基、5元至6元杂芳基和3元至6元杂环基各自任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹³的取代基取代；

每个R^b2独立地为氢、C_1-6烷基、C_3-6环烷基或3元至6元杂环基；其中R^b2的所述C_1-6烷基、C_3-6环烷基和3元至6元杂环基各自任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹³的取代基取代；

每个R^c2和R^d2独立地为氢、C_1-6烷基、C_3-6环烷基或3元至8元杂环基；其中R^c2和R^d2的所述C_1-6烷基、C_3-6环烷基和3元至8元杂环基各自任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹³的取代基取代；

或者R^c2和R^d2与它们所连接的氮原子一起形成任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹³的取代基取代的4元至6元杂环基；

每个R^e2独立地为C_1-6烷基、C_3-6环烷基、C₆芳基、5元至6元杂芳基或3元至6元杂环基；其中R^e2的所述C_1-6烷基、C_3-6环烷基、C₆芳基、5元至6元杂芳基和3元至6元杂环基各自任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹³的取代基取代；

每个R^f2独立地为氢或C_1-6烷基；

每个R^g2和R^h2独立地为C_1-6烷基、C_3-6环烷基、3元至8元杂环基或-O-C_1-6烷基；其中R^g2和R^h2的所述C_1-6烷基、C_3-6环烷基和3元至8元杂环基各自任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹³的取代基取代；

或者R^g2和R^h2与它们所连接的磷原子一起形成任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹³的取代基取代的4元至6元杂环基；并且

每个R¹³独立地为氧代、卤素、羟基、-O(C_1-6烷基)、氰基、C_1-6烷基或C_1-6卤代烷基。

在一些实施例中，化合物并非表1X中的化合物及其盐。在一些实施例中，本文所述的化合物诸如式(I)化合物并非选自表1X中的化合物1x-63x中的一种或多种及其盐的化合物。在一些实施例中，本文所述的化合物诸如式(I)化合物并非选自表1X中的化合物1x-62x中的一种或多种及其盐的化合物。在一些实施例中，本文所述的化合物诸如式(I)化合物并非化合物63x及其盐。在一些实施例中，本公开的化合物以及使用本文所详述的化合物的方法包括具有式(I)的任何化合物，其包括表1X所列的那些化合物及其盐。

表1X

在一个方面，提供了一种式(I)化合物或该化合物的盐(例如，药学上可接受的盐)、溶剂化物(例如，水合物)、前药、代谢物或衍生物，其中R¹、R³、R⁴和R⁵如上文所述，并且R²为任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹⁰的取代基取代的单环5元或6元杂芳基。在一个变体中，化合物并非选自表1X中的化合物9x-62x中的一种或多种及其盐的化合物。在一个变体中，化合物并非选自表1X中的化合物9x-63x中的一种或多种及其盐的化合物。在一些实施例中，R²为任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹⁰的取代基取代的5元杂芳基，前提条件是R²并非吡唑基或取代的吡唑基。在一些实施例中，R²为任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹⁰的取代基取代的5元杂芳基，前提条件是R²并非选自表1X中的化合物9x-27x中的一种或多种及其盐的化合物。在一些实施例中，R²为任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹⁰的取代基取代的5元杂芳基，前提条件是R²并非选自表1X中的化合物9x-27x和63x中的一种或多种及其盐的化合物。

在一个方面，提供了一种式(I)化合物或该化合物的盐(例如，药学上可接受的盐)、溶剂化物(例如，水合物)、前药、代谢物或衍生物，其中R¹、R³、R⁴和R⁵如上文所定义，并且R²为具有式(a)或式(b)的多环杂芳基：

其中波形线表示连接到母结构的连接点，

Q为CR²⁰、NR²¹、N、O或S；

T为N或CR²²；

Z¹和Z²独立地为N或C，前提条件是Z¹和Z²中的至少一个为C；

T¹、T²和T³独立地为N或CR²³；

环A和环B独立地为C_5-8环烷基或5元至8元杂环，该杂环具有至少3个成环碳原子和1个、2个或3个独立地选自由N、P、O和S组成的组的成环杂原子；其中C_5-8环烷基和5元至8元杂环独立地任选地被1个、2个、3个、4个或5个独立地选自R¹⁰的取代基取代；并且其中C_5-8环烷基或5元至8元杂环的两个取代基在存在时任选地一起形成任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹⁰的取代基取代的螺环、稠合或桥接环烷基(例如，C_3-6环烷基)或任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹⁰的取代基取代的螺环、稠合或桥接杂环基(例如，3元至6元杂环基)；并且

R²⁰、R²¹、R²²和R²³各自独立地为氢或R¹⁰。

在一些实施例中，环A或环B为任选地被R¹⁰取代的C_5-8环烷基。在一些实施例中，环A或环B为任选地被R¹⁰取代的5元至8元杂环(例如，具有至少3个成环碳原子和1个、2个或3个独立地选自由N、P、O和S组成的组的成环杂原子)。在一些实施例中，C_5-8环烷基或5元至8元杂环的两个偕取代基在存在的情况下任选地与它们所连接的原子一起形成任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹⁰的取代基取代的螺环C_3-6环烷基或任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹⁰的取代基取代的螺环3元至6元杂环基。在一些实施例中，C_5-8环烷基或5元至8元杂环的两个邻近的取代基在存在的情况下任选地与它们所连接的原子一起形成任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹⁰的取代基取代的稠合的5元或6元杂芳基或任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹⁰的取代基取代的稠合的5元或6元杂环基。

在式(I)化合物或该化合物的盐(例如，药学上可接受的盐)、溶剂化物(例如，水合物)、前药、代谢物或衍生物的一些实施例中，其中R¹、R³、R⁴和R⁵如上文所定义，并且R²为具有式(a)的多环杂芳基：

其中波形线表示连接到母结构的连接点，Q、T、Z¹、Z²和环A如上文所定义。

在式(I)化合物或该化合物的盐(例如，药学上可接受的盐)、溶剂化物(例如，水合物)、前药、代谢物或衍生物的一些实施例中，其中R¹、R³、R⁴和R⁵如上文所定义，并且R²为具有式(b)的多环杂芳基：

其中波形线表示连接到母结构的连接点，T¹、T²、T³和环B如上文所定义。在一些实施例中，T¹、T²和T³中的至少一个为N。在一个变体中，化合物并非选自表1X中的化合物1x-8x中的一种或多种及其盐的化合物。在另一个变体中，前提条件是R⁴并非甲基氨基羰基[即-C(O)NHMe]和哌啶-4-基氧基。

在一个方面，提供了一种式(I)化合物：

或其盐(例如，药学上可接受的盐)，其中：

R¹为氢、卤素、羟基、任选地被卤素取代的C_1-6烷基、C_3-4环烷基或任选地被卤素取代的-O(C_1-6烷基)；

R²为(i)或(ii)：

(i)任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹⁰的取代基取代的单环5元或6元杂芳基；或

(ii)具有式(a)或式(b)的多环杂芳基：

其中波形线表示连接到母结构的连接点，

Q为CR²⁰、NR²¹、N、O或S；

T为N或CR²²；

Z¹和Z²独立地为N或C，前提条件是Z¹和Z²中的至少一个为C；

T¹、T²和T³独立地为N或CR²³；

环A和环B独立地为C_5-8环烷基或5元至8元杂环，该杂环具有至少3个成环碳原子和1个、2个或3个独立地选自由N、P、O和S组成的组的成环杂原子(成环原子数包括指定为Z¹和Z²的原子)；其中C_5-8环烷基和5元至8元杂环独立地任选地被1个、2个、3个、4个或5个独立地选自R¹⁰的取代基取代；并且其中C_5-8环烷基或5元至8元杂环的两个取代基在存在时任选地一起形成任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹⁰的取代基取代的螺环、稠合或桥接环烷基(例如，C_3-6环烷基)或任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹⁰的取代基取代的螺环、稠合或桥接杂环基(例如，3元至6元杂环基)；

R²⁰、R²¹、R²²和R²³各自独立地为氢或R¹⁰；

每个R⁸独立地为氢或C_1-6烷基；

或者R^8a和R^8b与它们所连接的氮原子一起形成任选地被1个、2个、3个、4个或5个独立地选自R¹⁰的取代基取代的4元至12元杂环基；

2个、3个、4个或5个独立地选自R¹⁰的取代基取代的4元至12元杂环基；

或者R^c和R^d与它们所连接的氮原子一起形成任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹¹的取代基取代的4元至12元杂环基；

每个R^f独立地为氢或C_1-6烷基；

或者R^g和R^h与它们所连接的磷原子一起形成任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹¹的取代基取代的4元至12元杂环基；

或者R^c1和R^d1与它们所连接的氮原子一起形成任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹²的取代基取代的4元至8元杂环基；

每个R^f1独立地为氢或C_1-6烷基；

或者R^g1和R^h1与它们所连接的磷原子一起形成任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹²的取代基取代的4元至8元杂环基；

或者R^c2和R^d2与它们所连接的氮原子一起形成任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹³的取代基取代的4元至6元杂环基；

每个R^f2独立地为氢或C_1-6烷基；

或者R^g2和R^h2与它们所连接的磷原子一起形成任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹³的取代基取代的4元至6元杂环基；并且

每个R¹³独立地为氧代、卤素、羟基、-O(C_1-6烷基)、氰基、C_1-6烷基或C_1-6卤代烷基；

前提条件是该化合物并非表1X中的化合物及其盐。

在一个方面，提供了一种式(IA)化合物：

或其盐(例如，药学上可接受的盐)，其中：

R¹为氢、卤素、羟基、任选地被卤素取代的C_1-6烷基、C_3-4环烷基或任选地被卤素取代的-O(C_1-6烷基)；

Q为CR²⁰、NR²¹、N、O或S；

T为N或CR²²；

Z¹和Z²独立地为N或C，前提条件是Z¹和Z²中的至少一个为C；

环A为C_5-8环烷基或5元至8元杂环，该杂环具有至少3个成环碳原子和1个、2个或3个独立地选自由N、P、O和S组成的组的成环杂原子；其中C_5-8环烷基和5元至8元杂环独立地任选地被1个、2个、3个、4个或5个独立地选自R¹⁰的取代基取代；并且其中C_5-8环烷基或5元至8元杂环的两个取代基在存在时任选地一起形成任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹⁰的取代基取代的螺环、稠合或桥接环烷基(例如，C_3-6环烷基)或任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹⁰的取代基取代的螺环、稠合或桥接杂环基(例如，3元至6元杂环基)；

R²⁰、R²¹和R²²各自独立地为氢或R¹⁰；

每个R⁸独立地为氢或C_1-6烷基；

或者R^8a和R^8b与它们所连接的氮原子一起形成任选地被1个、2个、3个、4个或5个独立地选自R¹⁰的取代基取代的4元至12元杂环基；

或者R^9a和R^9b与它们所连接的磷原子一起形成任选地被1个、2个、3个、4个或5个独立地选自R¹⁰的取代基取代的4元至12元杂环基；

或者R^c和R^d与它们所连接的氮原子一起形成任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹¹的取代基取代的4元至12元杂环基；

每个R^f独立地为氢或C_1-6烷基；

或者R^g和R^h与它们所连接的磷原子一起形成任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹¹的取代基取代的4元至12元杂环基；

或者R^c1和R^d1与它们所连接的氮原子一起形成任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹²的取代基取代的4元至8元杂环基；

每个R^f1独立地为氢或C_1-6烷基；

或者R^g1和R^h1与它们所连接的磷原子一起形成任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹²的取代基取代的4元至8元杂环基；

或者R^c2和R^d2与它们所连接的氮原子一起形成任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹³的取代基取代的4元至6元杂环基；

每个R^f2独立地为氢或C_1-6烷基；

或者R^g2和R^h2与它们所连接的磷原子一起形成任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹³的取代基取代的4元至6元杂环基；并且

每个R¹³独立地为氧代、卤素、羟基、-O(C_1-6烷基)、氰基、C_1-6烷基或C_1-6卤代烷基。

在一个方面，提供了一种式(IB)化合物：

或其盐(例如，药学上可接受的盐)，其中：

R¹为氢、卤素、羟基、任选地被卤素取代的C_1-6烷基、C_3-4环烷基或任选地被卤素取代的-O(C_1-6烷基)；

T¹、T²和T³独立地为N或CR²³；

环B为C_5-8环烷基或5元至8元杂环，该杂环具有至少3个成环碳原子和1个、2个或3个独立地选自由N、P、O和S组成的组的成环杂原子；其中C_5-8环烷基和5元至8元杂环独立地任选地被1个、2个、3个、4个或5个独立地选自R¹⁰的取代基取代；并且其中C_5-8环烷基或5元至8元杂环的两个取代基在存在时任选地一起形成任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹⁰的取代基取代的螺环、稠合或桥接环烷基(例如，C_3-6环烷基)或任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹⁰的取代基取代的螺环、稠合或桥接杂环基(例如，3元至6元杂环基)；

R²³为氢或R¹⁰；

每个R⁸独立地为氢或C_1-6烷基；

或者R^8a和R^8b与它们所连接的氮原子一起形成任选地被1个、2个、3个、4个或5个独立地选自R¹⁰的取代基取代的4元至12元杂环基；

或者R^9a和R^9b与它们所连接的磷原子一起形成任选地被1个、2个、3个、4个或5个独立地选自R¹⁰的取代基取代的4元至12元杂环基；

或者R^c和R^d与它们所连接的氮原子一起形成任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹¹的取代基取代的4元至12元杂环基；

每个R^f独立地为氢或C_1-6烷基；

或者R^g和R^h与它们所连接的磷原子一起形成任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹¹的取代基取代的4元至12元杂环基；

或者R^c1和R^d1与它们所连接的氮原子一起形成任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹²的取代基取代的4元至8元杂环基；

每个R^f1独立地为氢或C_1-6烷基；

或者R^g1和R^h1与它们所连接的磷原子一起形成任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹²的取代基取代的4元至8元杂环基；

或者R^c2和R^d2与它们所连接的氮原子一起形成任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹³的取代基取代的4元至6元杂环基；

每个R^f2独立地为氢或C_1-6烷基；

或者R^g2和R^h2与它们所连接的磷原子一起形成任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹³的取代基取代的4元至6元杂环基；并且

每个R¹³独立地为氧代、卤素、羟基、-O(C_1-6烷基)、氰基、C_1-6烷基或C_1-6卤代烷基；

前提条件是该化合物并非表1X中的化合物1x-8x及其盐。

在一个方面，提供了一种式(IC)化合物：

或其盐(例如，药学上可接受的盐)，其中：

R¹为氢、卤素、羟基、任选地被卤素取代的C_1-6烷基、C_3-4环烷基或任选地被卤素取代的-O(C_1-6烷基)；

R²为任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹⁰的取代基取代的单环5元或6元杂芳基；

每个R⁸独立地为氢或C_1-6烷基；

或者R^8a和R^8b与它们所连接的氮原子一起形成任选地被1个、2个、3个、4个或5个独立地选自R¹⁰的取代基取代的4元至12元杂环基；

或者R^9a和R^9b与它们所连接的磷原子一起形成任选地被1个、2个、3个、4个或5个独立地选自R¹⁰的取代基取代的4元至12元杂环基；

或者R^c和R^d与它们所连接的氮原子一起形成任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹¹的取代基取代的4元至12元杂环基；

每个R^f独立地为氢或C_1-6烷基；

或者R^g和R^h与它们所连接的磷原子一起形成任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹¹的取代基取代的4元至12元杂环基；

或者R^c1和R^d1与它们所连接的氮原子一起形成任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹²的取代基取代的4元至8元杂环基；

每个R^f1独立地为氢或C_1-6烷基；

或者R^g1和R^h1与它们所连接的磷原子一起形成任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹²的取代基取代的4元至8元杂环基；

或者R^c2和R^d2与它们所连接的氮原子一起形成任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹³的取代基取代的4元至6元杂环基；

每个R^f2独立地为氢或C_1-6烷基；

或者R^g2和R^h2与它们所连接的磷原子一起形成任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹³的取代基取代的4元至6元杂环基；并且

每个R¹³独立地为氧代、卤素、羟基、-O(C_1-6烷基)、氰基、C_1-6烷基或C_1-6卤代烷基；

前提条件是该化合物并非表1X中的化合物9x-62x及其盐。

在一些实施例中，化合物为式(IC)化合物，前提条件是该化合物并非表1X中的化合物9x-63x及其盐。

在一些实施例中，化合物为式(I)或其变体诸如式(IA)、(IB)和(IC)化合物或其盐(例如，药学上可接受的盐)，其中R¹为氢、卤素、羟基、任选地被卤素取代的C_1-6烷基、C_3-4环烷基或任选地被卤素取代的-O(C_1-6烷基)。在一些实施例中，R¹为氢、氟、氯、C_3-4环烷基、C_1-6烷基、C_1-6卤代烷基、-O(C_1-6烷基)或-O(C_1-6卤代烷基)。在一个变体中，R¹为氢、氟、氯或C_1-6烷基(例如，甲基)。在另一个变体中，R¹为氢、氟或甲基。在另一个变体中，R¹为氢。

在一些实施例中，化合物为式(I)或其变体诸如式(IA)、(IB)和(IC)化合物或其盐(例如，药学上可接受的盐)，其中R³为氢、卤素、氰基、C_1-6烷基、C_3-8环烷基、3元至14元杂环基或–OR⁷；其中R³的C_1-6烷基、C_3-8环烷基和3元至14元杂环基各自任选地被1个、2个、3个、4个或5个独立地选自R¹⁰的取代基取代。在一些实施例中，R³为氢、氟、氯、氰基、羟基、C_3-4环烷基、C_1-6烷基、C_1-6卤代烷基、-O(C_1-6烷基)或-O(C_1-6卤代烷基)。在一个变体中，R³为氢、氟、氰基或C_1-6烷基(例如，甲基)。在另一个变体中，R³为氢或氟。在另一个变体中，R³为氢。

在一些实施例中，化合物为式(I)或其变体诸如式(IA)、(IB)和(IC)化合物或其盐(例如，药学上可接受的盐)，其中R⁵为氢、卤素、氰基、C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-8环烷基、C_6-14芳基、5元至14元杂芳基、3元至14元杂环基、卤素、氰基、-C(O)R⁶、-C(O)OR⁷、-C(O)NR^8aR^8b、-OR⁷、-OC(O)R⁶、-OC(O)NR^8aR^8b、-SR⁷、-S(O)R⁹、-S(O)₂R⁹、-S(O)₂NR^8aR^8b、-P(O)R^9aR^9b、-NR^8aR^8b、-N(R⁸)C(O)R⁶、-N(R⁸)C(O)OR⁷、-N(R⁸)C(O)NR^8aR^8b、-N(R⁸)S(O)₂R⁹或-N(R⁸)S(O)₂NR^8aR^8b；其中R⁵的C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-8环烷基、C_6-14芳基、5元至14元杂芳基和3元至14元杂环基各自任选地被1个、2个、3个、4个或5个独立地选自R¹⁰的取代基取代。在一些实施例中，R⁵为氢、卤素、氰基、C_1-6烷基、C_3-8环烷基、3元至14元杂环基、-OR⁷、-NR^8aR^8b或-N(R⁸)C(O)R⁶；其中R⁵的C_1-6烷基、C_3-8环烷基和3元至14元杂环基各自任选地被1个、2个、3个、4个或5个独立地选自R¹⁰的取代基取代。在一些实施例中，R⁵为氢、氟、氯、氰基、羟基、C_3-4环烷基、C_1-6烷基、C_1-6卤代烷基、-O(C_1-6烷基)或-O(C_1-6卤代烷基)。在一个变体中，R⁵为氢、氟、氰基或C_1-6烷基。在另一个变体中，R⁵为氢、氟或氰基。在另一个变体中，R⁵为氢。

应当理解，针对式(I)、(IA)、(IB)或(IC)所述的R¹、R³和R⁵的每个变体可以组合，就像针对每种组合具体并且单独描述一样。例如，在一些实施例中，R¹为氢、氟、氯或C_1-6烷基(例如，甲基)；R³为氢或氟；并且R⁵为氢、氟或氰基。在一个变体中，R¹为氢、氟或甲基；R³为氢；并且R⁵为氢。

在一些实施例中，化合物为式(I)或其变体诸如式(IA)、(IB)和(IC)化合物或其盐(例如，药学上可接受的盐)，其中R⁴为C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-8环烷基、C_6-14芳基、5元至14元杂芳基、3元至14元杂环基、卤素、氰基、-C(O)R⁶、-C(O)OR⁷、-C(O)NR^8aR^8b、-OR⁷、-OC(O)R⁶、-OC(O)NR^8aR^8b、-SR⁷、-S(O)R⁹、-S(O)₂R⁹、-S(O)₂NR^8aR^8b、-P(O)R^9aR^9b、-NR^8aR^8b、-N(R⁸)C(O)R⁶、-N(R⁸)C(O)OR⁷、-N(R⁸)C(O)NR^8aR^8b、-N(R⁸)S(O)₂R⁹或-N(R⁸)S(O)₂NR^8aR^8b；其中R⁴的C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-8环烷基、C_6-14芳基、5元至14元杂芳基和3元至14元杂环基各自任选地被1个、2个、3个、4个或5个独立地选自R¹⁰的取代基取代。

在一些实施例中，R⁴为C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-8环烷基、C_6-14芳基、5元至14元杂芳基、3元至14元杂环基、卤素、氰基、-C(O)R⁶、-C(O)OR⁷、-OC(O)R⁶、-OC(O)NR^8aR^8b、-SR⁷、-S(O)R⁹、-S(O)₂R⁹、-S(O)₂NR^8aR^8b、-P(O)R^9aR^9b、-NR^8aR^8b、-N(R⁸)C(O)R⁶、-N(R⁸)C(O)OR⁷、-N(R⁸)C(O)NR^8aR^8b、-N(R⁸)S(O)₂R⁹或-N(R⁸)S(O)₂NR^8aR^8b；其中R⁴的C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-8环烷基、C_6-14芳基、5元至14元杂芳基和3元至14元杂环基各自任选地被1个、2个、3个、4个或5个独立地选自R¹⁰的取代基取代。

在一些实施例中，R⁴为C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-8环烷基、C_6-14芳基、5元至14元杂芳基、3元至14元杂环基、氰基、-C(O)R⁶、-OC(O)R⁶、-OC(O)NR^8aR^8b、-SR⁷、-S(O)R⁹、-S(O)₂R⁹、-S(O)₂N R^8aR^8b、-P(O)R^9aR^9b、-NR^8aR^8b、-N(R⁸)C(O)R⁶、-N(R⁸)C(O)OR⁷、-N(R⁸)C(O)NR^8aR^8b、-N(R⁸)S(O)₂R⁹或-N(R⁸)S(O)₂NR^8aR^8b；其中R⁴的C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-8环烷基、C_6-14芳基、5元至14元杂芳基和3元至14元杂环基各自任选地被1个、2个、3个、4个或5个独立地选自R¹⁰的取代基取代。

在一些实施例中，R⁴为

在一些实施例中，R⁴为C_3-8环烷基、C_6-14芳基、5元至14元杂芳基或3元至14元杂环基；其中R⁴的C_3-8环烷基、C_6-14芳基、5元至14元杂芳基和3元至14元杂环基各自任选地被1个、2个、3个、4个或5个独立地选自R¹⁰的取代基取代。

在一些实施例中，R⁴为C_6-10芳基、5元至10元杂芳基或5元至6元杂环基；其中R⁴的C_6-10芳基、5元至10元杂芳基和5元至6元杂环基各自任选地被1个、2个、3个、4个或5个独立地选自R¹⁰的取代基取代。

在一些实施例中，R⁴为

其中波形线表示连接到母结构的连接点，R^4a、R^4b和R^4c各自独立地为氢或R¹⁰，或者两个邻近的R^4(a-c)与它们所连接的原子一起形成任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹⁰的取代基取代的稠合的5元或6元杂芳基或任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹⁰的取代基取代的稠合的5元或6元杂环基。

在一个变体中，R⁴为

在一个变体中，R⁴为5元至10元杂芳基，该杂芳基任选地被1个、2个、3个、4个或5个独立地选自R¹⁰的取代基取代。

在一些实施例中，R⁴为

在一个变体中，R⁴为

在另一个变体中，R⁴选自由以下项组成的组：

其各自可任选地被1个、2个、3个、4个或5个独立地选自R¹⁰的取代基取代。

应当理解，针对式(I)、(IA)、(IB)或(IC)所述的R¹、R³和R⁵或其组合的每个变体可以与针对式(I)、(IA)、(IB)或(IC)所述的R⁴的每个变体组合，就像具体并且单独描述一样。例如，在一些实施例中，R¹为氢、氟、氯或C_1-6烷基(例如，甲基)；R³为氢或氟；R⁵为氢、氟或氰基；并且R⁴为C_6-10芳基、5元至10元杂芳基或5元至6元杂环基；其中R⁴的C_6-10芳基、5元至10元杂芳基和5元至6元杂环基各自任选地被1个、2个、3个、4个或5个独立地选自R¹⁰的取代基取代。在一个变体中，R¹为氢、氟或甲基；R³为氢；R⁵为氢；并且R⁴为

在一些实施例中，化合物为式(I)或其变体诸如式(IA)、(IB)和(IC)化合物或其盐(例如，药学上可接受的盐)，其中R²为任选地被R¹⁰取代的5元至14元杂芳基。在一些实施例中，R²为任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹⁰的取代基取代的单环5元或6元杂芳基。在一些实施例中，R²具有式(a)或式(b)的多环杂芳基：

其中波形线表示连接到母结构的连接点。

在一些实施例中，化合物为式(I)化合物或其盐(例如，药学上可接受的盐)，其中R²为具有式(a)的多环杂芳基：

或化合物为式(IA)化合物：

或其盐(例如，药学上可接受的盐)，其中Q、T、Z¹、Z²和环A如本文所述。

在一些实施例中，Q为CR²⁰、NR²¹、N、O或S；T为N或CR²²；Z¹和Z²独立地为N或C，前提条件是Z¹和Z²中的至少一个为C；环A为具有至少3个成环碳原子和1个、2个或3个独立地选自由N、P、O和S组成的组的成环杂原子的5元至8元杂环，其中该5元至8元杂环任选地被1个、2个、3个、4个或5个独立地选自R¹⁰的取代基取代，并且该5元至8元杂环的两个偕取代基在存在的情况下任选地与它们所连接的原子一起形成任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹⁰的取代基取代的螺环C_3-6环烷基或任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹⁰的取代基取代的螺环3元至6元杂环基，或者该5元至8元杂环的两个邻近的取代基在存在的情况下任选地与它们所连接的原子一起形成任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹⁰的取代基取代的稠合的5元或6元杂芳基或任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹⁰的取代基取代的稠合的5元或6元杂环基；并且R²⁰、R²¹和R²²各自独立地为氢或R¹⁰。在一个变体中，R²⁰、R²¹和R²²各自独立地为氢、卤素、羟基、-O(C_1-6烷基)、氰基、C_1-6烷基或C_1-6卤代烷基。

在一些实施例中，Q为CR²⁰。在一些实施例中，Q为NR²¹、O或S。在一些实施例中，Q为NR²¹。在一些实施例中，Q为S。在一些实施例中，T为N。在一些实施例中，T为NR²²。在一些实施例中，Z¹为N并且Z²为C。在一些实施例中，Z¹为C并且Z²为C。在一些实施例中，Z¹为C并且Z²为N。在一个变体中，Q为CR²⁰；T为N；Z¹为N并且Z²为C。在一些实施例中，Q为NR²¹；T为N；Z¹为C并且Z²为C。在一些实施例中，Q为S；T为N；Z¹为C并且Z²为C。在一个变体中，R²⁰、R²¹和R²²各自独立地为氢、卤素、羟基、-O(C_1-6烷基)、氰基、C_1-6烷基(例如，甲基)或C_1-6卤代烷基(例如，-CF₃)。在一个变体中，R²⁰为氢或甲基。在一个变体中，R²⁰为氢。在一个变体中，R²¹为氢。在一个变体中，R²²为氢。

在其中一些实施例中，式(I)中的R²或式(IA)中式(a)的部分为：

其中q为0、1、2、3、4、5或6；R²⁴独立地为氢或R¹⁰；Y为C_1-4亚烷基，其中C_1-4亚烷基的碳原子中的一个或多个任选地被选自氧、硫和氮的杂原子替代，并且C_1-4亚烷基任选地被R¹⁰取代；并且R¹⁰和R²⁰如本文所详述。在一些实施例中，R¹⁰取代基中的两个任选地一起形成任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹¹的取代基取代的螺环、稠合或桥接环烷基(例如，C_3-6环烷基)或任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹¹的取代基取代的螺环、稠合或桥接杂环基(例如，3元至6元杂环基)。在一个变体中，R²⁴独立地为氢或C_1-6烷基；并且R²⁰为氢。在一个变体中，R²⁴为氢。在一个变体中，Y为任选地被R¹⁰取代的C_1-4亚烷基。在一个变体中，式(I)中的R²或式(IA)中式(a)的部分为：

在一个此类变体中，R²⁴独立地为氢或C_1-6烷基；并且R²⁰为氢。在一个此类变体中，R²⁴为氢。

在一些实施例中，式(I)中的R²或式(IA)中式(a)的部分为：

在其中一些实施例中，式(I)中的R²或式(IA)中式(a)的部分为：

其中q为0、1、2、3或4；R²⁴独立地为氢或R¹⁰；并且R¹⁰和R²⁰如本文所详述。在一个变体中，R²⁴独立地为氢或C_1-6烷基；并且R²⁰为氢。在一个变体中，R²⁴为氢。在一个变体中，式(I)中的R²或式(IA)中式(a)的部分为：

在一个此类变体中，R²⁴独立地为氢或C_1-6烷基；并且R²⁰为氢。在一个此类变体中，R²⁴为氢。

在一些实施例中，式(I)中的R²或式(IA)中式(a)的部分为：

在其中一些实施例中，式(I)中的R²或式(IA)中式(a)的部分为：

其中p为0、1、2、3或4；R²⁴独立地为氢或R¹⁰；并且R¹⁰和R²⁰如本文所详述。在一个变体中，R²⁴独立地为氢或C_1-6烷基；并且R²⁰为氢。

在其中一些实施例中，式(I)中的R²或式(IA)中式(a)的部分为：

其中p为0、1、2、3或4；R²⁴独立地为氢或R¹⁰；并且R¹⁰和R²⁰如本文所详述。在一个变体中，R²⁴独立地为氢或C_1-6烷基；并且R²⁰为氢。

在一些实施例中，式(I)中的R²或式(IA)中式(a)的部分为

在其中一些实施例中，式(I)中的R²或式(IA)中式(a)的部分为：

其中X为CH₂、N、O或S；n为1、2、3或4；p为0、1、2、3或4；R²⁴为氢或R¹⁰；并且R¹⁰和R²⁰如本文所详述。在一个变体中，R²⁴独立地为氢或C_1-6烷基；并且R²⁰为氢。

在其中一些实施例中，式(I)中的R²或式(IA)中式(a)的部分为：

其中q为0、1、2、3、4、5或6；并且R¹⁰和R²⁰如本文所详述。

在一个变体中，R²⁰为氢。

在一些实施例中，式(I)中的R²或式(IA)中式(a)的部分为

在其中一些实施例中，式(I)中的R²或式(IA)中式(a)的部分为：

其中Q为NR²¹、O或S；

X为CR^26aR^26b、NR²⁴、O或S，

X'为CR^27aR^27b、NR²⁴、O、S或S(O)₂，

R²⁴、R^25a、R^25b、R^26a和R^26b独立地为氢或R¹⁰；

R^27a和R^27b独立地为氢或R¹⁰，或者R^27a和R^27b与它们所连接的碳原子一起形成C_3-8环烷基或3元至8元杂环基；并且

R¹⁰和R²¹如本文所详述。

在一个变体中，式(I)中的R²或式(IA)中式(a)的部分为：

在一个此类变体中，R²⁴在存在的情况下独立地为氢或C_1-6烷基；并且R²¹在存在的情况下为氢。

在其中一些实施例中，式(I)中的R²或式(IA)中式(a)的部分为：

其中q为0、1、2、3、4、5或6；

G独立地为C或N；

G'独立地为N、NR²⁸、CR²⁹、S或O；

R²⁸和R²⁹独立地为氢或R¹¹；或者两个邻近的基团R²⁸和R²⁹一起形成5元至6元杂环基；并且

R¹⁰、R¹¹和R²⁰如本文所详述。

在一个变体中，式(I)中的R²或式(IA)中式(a)的部分为：

在一个此类变体中，R²⁸独立地为氢或C_1-6烷基；并且R²⁰为氢。

在一些实施例中，化合物为式(I)化合物或其盐(例如，药学上可接受的盐)，其中R²为具有式(b)的多环杂芳基：

或化合物为式(IB)化合物：

或其盐(例如，药学上可接受的盐)，其中T¹、T²、T³和环B如本文所述。

在一些实施例中，T¹、T²和T³独立地为N或CR²³；环B具有至少3个成环碳原子和1个、2个或3个独立地选自由N、P、O和S组成的组的成环杂原子的5元至8元杂环，其中该5元至8元杂环任选地被1个、2个、3个、4个或5个独立地选自R¹⁰的取代基取代，并且该5元至8元杂环的两个偕取代基在存在的情况下任选地与它们所连接的原子一起形成任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹⁰的取代基取代的螺环C_3-6环烷基或任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹⁰的取代基取代的螺环3元至6元杂环基，或者该5元至8元杂环的两个邻近的取代基在存在的情况下任选地与它们所连接的原子一起形成任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹⁰的取代基取代的稠合的5元或6元杂芳基或任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹⁰的取代基取代的稠合的5元或6元杂环基；并且R²³为氢或R¹⁰。在一个变体中，T¹、T²和T³中的至少一个为N。在一个变体中，R²³为氢、卤素、羟基、-O(C_1-6烷基)、氰基、C_1-6烷基或C_1-6卤代烷基。

在一些实施例中，T¹、T²和T³中的至少一个为N。在一些实施例中，T¹、T²和T³中的一个为N；并且T¹、T²和T³中的剩余两个独立地为CR²³。在一些实施例中，T¹为N，并且T²和T³独立地为CR²³。在一些实施例中，T²为N，并且T¹和T³独立地为CR²³。在一些实施例中，T³为N，并且T¹和T²独立地为CR²³。在一些实施例中，T¹、T²和T³中的一个为CR²³；并且T¹、T²和T³中的剩余两个为N。在一些实施例中，T¹和T²为N；并且T³为CR²³。在一些实施例中，T¹和T³为N；并且T²为CR²³。在一个变体中，R²³为氢、卤素、羟基、-O(C_1-6烷基)、氰基、C_1-6烷基(例如，甲基)或C_1-6卤代烷基(例如，-CF₃)。在一个变体中，R²³为氢或甲基。在一个变体中，R²³为羟基。在一个变体中，R²³为氢。

在其中一些实施例中，式(I)中的R²或式(IB)中式(b)的部分为：

其中q为0、1、2、3或4；并且R¹⁰、R²³和R²⁴如本文所详述。在一个变体中，每个R²³为氢，并且R²⁴为氢或C_1-6烷基(例如，甲基)。在一个变体中，式(I)中的R²或式(IB)中式(b)的部分为：

在一些实施例中，化合物为式(I)或(IC)化合物：

或其盐(例如，药学上可接受的盐),其中R²为任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹⁰的取代基取代的单环5元或6元杂芳基。

在其中一些实施例中，R²为任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹⁰的取代基取代的5元杂芳基。在其中一些实施例中，R²为任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹⁰的取代基取代的6元杂芳基。

在其中一些实施例中，R²为

其中波形线表示连接到母结构的连接点，并且R^2a、R^2b、R^2c和R^2d各自独立地为氢或R¹⁰。在一个变体中，R²为

在一些实施例中，R^2a、R^2b、R^2c和R^2d(在存在的情况下)各自独立地为氢；任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹¹的取代基取代的C_1-6烷基；任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹¹的取代基取代的C_3-8环烷基；或任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹¹的取代基取代的3元至14元杂环基。在一些实施例中，R^2a、R^2b、R^2c和R^2d(在存在的情况下)各自独立地为氢或任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自卤素和氰基的取代基取代的C_1-6烷基[例如，甲基、乙基、二氟甲基或1-氰基乙基]。在一些实施例中，R^2a、R^2b、R^2c和R^2d(在存在的情况下)各自独立地为氢或者任选地被3元至14元杂环基取代的C_1-6烷基任选地被C_1-6烷基取代[例如，(1-甲基吡咯烷-3-基)甲基]。在一些实施例中，R^2a、R^2b、R^2c和R^2d(在存在的情况下)各自独立地为氢或任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹¹取代基取代的3元至14元杂环基[例如，四氢呋喃-3-基]。

在一些实施例中，R²为

在式(IC)化合物的一些实施例中，R⁴为C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-8环烷基、C_6-14芳基、5元至14元杂芳基、3元至14元杂环基、氰基、-C(O)R⁶、-OC(O)R⁶、-OC(O)NR^8aR^8b、-SR⁷、-S(O)R⁹、-S(O)₂R⁹、-S(O)₂NR^8aR^8b、-NR^8aR^8b、-N(R⁸)C(O)R⁶、-N(R⁸)C(O)OR⁷、-N(R⁸)C(O)NR^8aR^8b、-N(R⁸)S(O)₂R⁹或-N(R⁸)S(O)₂NR^8aR^8b；其中R⁴的C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-8环烷基、C_6-14芳基、5元至14元杂芳基和3元至14元杂环基各自任选地被1个、2个、3个、4个或5个独立地选自R¹⁰的取代基取代。在一个变体中，R⁴为C_3-8环烷基、C_6-14芳基、5元至14元杂芳基或3元至14元杂环基；其中R⁴的C_3-8环烷基、C_6-14芳基、5元至14元杂芳基和3元至14元杂环基各自任选地被1个、2个、3个、4个或5个独立地选自R¹⁰的取代基取代。

应当理解，针对式(I)、(IA)、(IB)或(IC)所述的R¹、R³、R⁴和R⁵或其组合的每个变体可以与针对式(I)或式(IA)、(IB)或(IC)(在适用的情况下)所述的R²的每个变体组合，就像具体并且单独描述一样。例如，在一些实施例中，R¹为氢、氟、氯或C_1-6烷基(例如，甲基)；R³为氢或氟；R⁵为氢、氟或氰基；R⁴为C_6-10芳基、5元至10元杂芳基或5元至6元杂环基；其中R⁴的C_6-10芳基、5元至10元杂芳基和5元至6元杂环基各自任选地被1个、2个、3个、4个或5个独立地选自R¹⁰的取代基取代；并且R²具有式(a)，其中Q为CR²⁰；T为N；Z¹为N；Z²为C；并且环A如本文所详述。在一个变体中，R¹为氢、氟或甲基；R³为氢；R⁵为氢；R⁴为并且R²具有式(a)，其中Q为CH；T为N；Z¹为N并且Z²为C。

在式(I)或其变体诸如式(IA)、(IB)和(IC)(在适用的情况下)化合物或其盐(例如，药学上可接受的盐)的一些实施例中，每个R⁶独立地为氢、C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-8环烷基、C_6-10芳基、5元至14元杂芳基或3元至12元杂环基；其中R⁶的C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-8环烷基、C_6-10芳基、5元至14元杂芳基和3元至12元杂环基各自任选地被1个、2个、3个、4个或5个独立地选自R¹⁰的取代基取代。在一个变体中，R⁶为C_1-6烷基、C_3-8环烷基或3元至12元杂环基；其中R⁶的C_1-6烷基、C_3-8环烷基和3元至12元杂环基各自任选地被1个、2个、3个、4个或5个独立地选自R¹⁰的取代基取代。在一个变体中，R⁶为任选地被1个、2个、3个、4个或5个独立地选自R¹⁰的取代基取代的3元至12元杂环基[例如，4-甲基哌嗪-1-基]。

在式(I)或其变体诸如式(IA)、(IB)和(IC)(在适用的情况下)化合物或其盐(例如，药学上可接受的盐)的一些实施例中，每个R⁷独立地为氢、C_1-6烷基、C_3-8环烷基、C_6-10芳基、5元至14元杂芳基或3元至12元杂环基；其中R⁷的C_1-6烷基、C_3-8环烷基、C_6-10芳基、5元至14元杂芳基和3元至12元杂环基各自任选地被1个、2个、3个、4个或5个独立地选自R¹⁰的取代基取代。在一个变体中，R⁷为氢、任选地被R¹⁰取代的C_1-6烷基。在一个变体中，R⁷为3元至12元杂环基[例如，哌啶-4-基]。

在式(I)或其变体诸如式(IA)、(IB)和(IC)(在适用的情况下)化合物或其盐(例如，药学上可接受的盐)的一些实施例中，每个R⁸独立地为氢或C_1-6烷基；并且每个R^8a和R^8b独立地为氢、C_1-6烷基、C_3-8环烷基、C_6-10芳基、5元至14元杂芳基或3元至12元杂环基；其中R^8a和R^8b的C_1-6烷基、C_3-8环烷基、C_6-10芳基、5元至14元杂芳基和3元至12元杂环基各自任选地被1个、2个、3个、4个或5个独立地选自R¹⁰的取代基取代；或者R^8a和R^8b与它们所连接的氮原子一起形成任选地被1个、2个、3个、4个或5个独立地选自R¹⁰的取代基取代。在一个变体中，R⁸为氢或C_1-6烷基(例如，甲基)。在一个变体中，每个R^8a和R^8b独立地为氢或C_1-6烷基。在一个变体中，R^8a和R^8b与它们所连接的氮原子一起形成任选地被R¹⁰取代的5元至7元杂环基。

在式(I)或其变体诸如式(IA)、(IB)和(IC)(在适用的情况下)化合物或其盐(例如，药学上可接受的盐)的一些实施例中，每个R⁹独立地为C_1-6烷基、C_3-8环烷基、C_6-10芳基、5元至14元杂芳基或3元至12元杂环基；其中R⁹的C_1-6烷基、C_3-8环烷基、C_6-10芳基、5元至14元杂芳基和3元至12元杂环基各自任选地被1个、2个、3个、4个或5个独立地选自R¹⁰的取代基取代。在一个变体中，R⁹为任选地被R¹⁰取代的C_1-6烷基；或任选地被R¹⁰取代的C_6-10芳基。

在式(I)或其变体诸如式(IA)、(IB)和(IC)(在适用的情况下)化合物或其盐(例如，药学上可接受的盐)的一些实施例中，每个R¹⁰独立地为氧代、C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-8环烷基、C_6-10芳基、5元至10元杂芳基、3元至12元杂环基、卤素、氰基、-C(O)R^a、-C(O)OR^b、-C(O)NR^cR^d、-OR^b、-OC(O)R^a、-OC(O)NR^cR^d、-SR^b、-S(O)R^e、-S(O)₂R^e、-S(O)(＝NH)R^e、-S(O)₂NR^cR^d、-NR^cR^d、-N(R^f)C(O)R^a、-N(R^f)C(O)OR^b、-N(R^f)C(O)NR^cR^d、-N(R^f)S(O)₂R^e或-N(R^f)S(O)₂NR^cR^d；其中R¹⁰的C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-8环烷基、C_6-14芳基、5元至14元杂芳基和3元至14元杂环基各自任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹¹的取代基取代。

在一个变体中，R¹⁰独立地为：氧代；任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹¹的取代基取代的C_1-6烷基；任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹¹的取代基取代的5元至10元杂芳基；卤素、-OR^b、-S(O)(＝NH)R^e、-NR^cR^d、-N(R^f)C(O)R^a或-N(R^f)S(O)₂NR^cR^d。

在一个变体中，R¹⁰独立地为氧代、卤素、氰基、任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹¹的取代基取代的C_1-6烷基或者-OR^b。

在一个变体中，R¹⁰独立地为-NR^cR^d、-N(R^f)C(O)R^a、-N(R^f)C(O)OR^b、-N(R^f)C(O)NR^cR^d、-N(R^f)S(O)₂R^e或-N(R^f)S(O)₂NR^cR^d。

在一个变体中，R¹⁰独立地为氧代、-OR^b、-OC(O)R^a、-OC(O)NR^cR^d、-SR^b、-S(O)R^e、-S(O)₂R^e、-S(O)(＝NH)R^e或-S(O)₂NR^cR^d。

在一个变体中，每个R¹⁰独立地为C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-8环烷基、C_6-10芳基、5元至10元杂芳基、3元至12元杂环基、卤素、氰基、-C(O)R^a、-C(O)OR^b、-C(O)NR^cR^d；其中R¹⁰的C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-8环烷基、C_6-14芳基、5元至14元杂芳基和3元至14元杂环基各自任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹¹的取代基取代。

在一个变体中，每个R¹⁰独立地为C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基，其各自任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹¹的取代基取代。

在一个变体中，R¹⁰为任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹¹的取代基取代的C_1-6烷基。在一个变体中，R¹⁰为任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹¹的取代基取代的3元至12元杂环基。

在一个变体中，R¹⁰为卤素、氰基、-NR^cR^d、-C(O)NR^cR^d、-OR^b、-S(O)₂R^e、C_1-6卤代烷基、-(C_1-6亚烷基)-OH或-(C_1-6亚烷基)-OH。

在一个变体中，R¹⁰为羟基、氰基、卤素、-CHF₂、-CF₃、-NH₂、-NH(C_1-6烷基)、-N(C_1-6烷基)₂、-O(C_1-6烷基)、–SO₂(C_1-6烷基)、-S(O)₂NR^cR^d、-C(O)NR^cR^d或-N(R^f)C(O)R^a。

在一些实施例中，每个R^a独立地为氢、C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-8环烷基、C_6-10芳基、5元至10元杂芳基或3元至12元杂环基；其中R^a的C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-8环烷基、C_6-10芳基、5元至10元杂芳基和3元至12元杂环基各自任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹¹的取代基取代。在一个变体中，R^a独立地为氢或C_1-6烷基。

在一些实施例中，每个R^b独立地为氢、C_1-6烷基、C_3-8环烷基、C_6-10芳基、5元至10元杂芳基或3元至12元杂环基；其中R^b的C_1-6烷基、C_3-8环烷基、C_6-10芳基、5元至10元杂芳基和3元至12元杂环基各自任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹¹的取代基取代。在一个变体中，R^b独立地为氢或C_1-6烷基。

在一些实施例中，每个R^c和R^d独立地为氢、C_1-6烷基、C_3-8环烷基、C_6-10芳基、5元至10元杂芳基或3元至12元杂环基；其中R^c和R^d的C_1-6烷基、C_3-8环烷基、C_6-10芳基、5元至10元杂芳基和3元至12元杂环基各自任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹¹的取代基取代；或者R^c和R^d与它们所连接的氮原子一起形成任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹¹的取代基取代的4元至12元杂环基。在一个变体中，每个R^c和R^d独立地为氢或C_1-6烷基。

在一些实施例中，每个R^e独立地为C_1-6烷基、C_3-8环烷基、C_6-10芳基、5元至10元杂芳基或3元至12元杂环基；其中R^e的C_1-6烷基、C_3-8环烷基、C_6-10芳基、5元至10元杂芳基和3元至12元杂环基各自任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹¹的取代基取代。在一个变体中，R^e独立地为C_1-6烷基。

在一些实施例中，每个R^f独立地为氢或C_1-6烷基。在一个变体中，R^f为氢。

在一些实施例中，每个R¹¹独立地为氧代、C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-6环烷基、C_6-10芳基、5元至10元杂芳基、3元至8元杂环基、卤素、氰基、-C(O)R^a1、-C(O)OR^b1、-C(O)NR^c1R^d1、-OR^b1、-OC(O)R^a1、-OC(O)NR^c1R^d1、-SR^b1、-S(O)R^e1、-S(O)₂R^e1、-S(O)₂NR^c1R^d1、-NR^c1R^d1、-N(R^f1)C(O)R^a1、-N(R^f1)C(O)OR^b1、-N(R^f1)C(O)NR^c1R^d1、-N(R^f1)S(O)₂R^e1或-N(R^f1)S(O)₂NR^c1R^d1；其中R¹¹的C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-6环烷基、C_6-14芳基、5元至14元杂芳基和3元至14元杂环基各自任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹²的取代基取代。

在一个变体中，每个R¹¹独立地为氧代、C_1-6烷基、C_3-6环烷基、3元至8元杂环基、卤素、氰基或-OR^b1；其中R¹¹的C_1-6烷基、C_3-6环烷基和3元至14元杂环基各自任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹²的取代基取代。

在一个变体中，R¹¹为任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹²的取代基取代的C_1-6烷基。在一个变体中，R¹¹为任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹²的取代基取代的3元至8元杂环基。

在一个变体中，R¹¹为卤素、氰基、-NR^c1R^d1、-C(O)NR^c1R^d1、-OR^b1、-S(O)₂R^e1、C_1-6卤代烷基、-(C_1-6亚烷基)-OH或-(C_1-6亚烷基)-OH。

在一个变体中，R¹¹为羟基、氰基、卤素、-CHF₂、-CF₃、-NH₂、-NH(C_1-6烷基)、-N(C_1-6烷基)₂、-O(C_1-6烷基)、-SO₂(C_1-6烷基)、-S(O)₂NR^c1R^d1、-C(O)NR^c1R^d1或-N(R^f1)C(O)R^a1。

在一个变体中，R¹¹为卤素、氰基、-O(C_1-6烷基)、-O(C_1-6亚烷基)-NH₂或-(C_1-6亚烷基)-OH。

在一些实施例中，每个R^a1独立地为氢、C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-6环烷基、C_6-10芳基、5元至10元杂芳基或3元至8元杂环基；其中R^a1的C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-6环烷基、C_6-10芳基、5元至10元杂芳基和3元至8元杂环基各自任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹²的取代基取代。

在一些实施例中，每个R^b1独立地为氢、C_1-6烷基、C_3-6环烷基、C_6-10芳基、5元至10元杂芳基或3元至8元杂环基；其中R^b1的C_1-6烷基、C_3-6环烷基、C_6-10芳基、5元至10元杂芳基和3元至8元杂环基各自任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹²的取代基取代。在一个变体中，R^b1独立地为氢或C_1-6烷基。

在一些实施例中，每个R^c1和R^d1独立地为氢、C_1-6烷基、C_3-6环烷基、C_6-10芳基、5元至10元杂芳基或3元至8元杂环基；其中R^c1和R^d1的C_1-6烷基、C_3-6环烷基、C_6-10芳基、5元至10元杂芳基和3元至8元杂环基各自任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹²的取代基取代；或者R^c1和R^d1与它们所连接至的氮原子一起形成任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹²的取代基取代。在一个变体中，每个R^c1和R^d1独立地为氢或C_1-6烷基。

在一些实施例中，每个R^e1独立地为C_1-6烷基、C_3-6环烷基、C_6-10芳基、5元至10元杂芳基或3元至8元杂环基；其中R^e1的C_1-6烷基、C_3-6环烷基、C_6-10芳基、5元至10元杂芳基和3元至8元杂环基各自任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹²的取代基取代。在一个变体中，R^e1独立地为C_1-6烷基。

在一些实施例中，每个R^f1独立地为氢或C_1-6烷基。在一个变体中，R^f1为氢。

在一些实施例中，每个R¹²独立地为氧代,C_1-6烷基、C_3-6环烷基、C₆芳基、5元至6元杂芳基、3元至6元杂环基、卤素、氰基、-C(O)R^a2、-C(O)OR^b2、-C(O)NR^c2R^d2、-OR^b2、-OC(O)R^a2、-OC(O)NR^c2R^d2、-S(O)₂R^e2、-S(O)₂NR^c2R^d2、-NR^c2R^d2、-N(R^f2)C(O)R^a2、-N(R^f2)C(O)OR^b2、-N(R^f2)C(O)NR^c2R^d2、-N(R^f2)S(O)₂R^e2或-N(R^f2)S(O)₂NR^c2R^d2；其中R¹²的C_1-6烷基、C_3-6环烷基、C₆芳基、5元至6元杂芳基和3元至6元杂环基各自任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹³的取代基取代。

在一个变体中，每个R¹²独立地为氧代、卤素、氰基、-OR^b2或任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹³的取代基取代的C_1-6烷基。在一个变体中，每个R¹²独立地为氧代、卤素、氰基或羟基。

在一个变体中，R¹²为任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹³的取代基取代的C_1-6烷基。

在一个变体中，R¹²为氧代、羟基、C_1-6烷基或-O(C_1-6烷基)。

在一些实施例中，每个R^a2独立地为氢、C_1-6烷基、C_3-6环烷基、C₆芳基、5元至6元杂芳基或3元至6元杂环基；其中R^a2的C_1-6烷基、C_3-6环烷基、C₆芳基、5元至6元杂芳基和3元至6元杂环基各自任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹³的取代基取代。在一个变体中，R^a2独立地为氢或C_1-6烷基。

在一些实施例中，每个R^b2独立地为氢、C_1-6烷基、C_3-6环烷基或3元至6元杂环基；其中R^b2的C_1-6烷基、C_3-6环烷基和3元至6元杂环基各自任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹³的取代基取代。在一个变体中，R^b2为氢。

在一些实施例中，每个R^c2和R^d2独立地为氢、C_1-6烷基、C_3-6环烷基或3元至8元杂环基；其中R^c2和R^d2的C_1-6烷基、C_3-6环烷基和3元至8元杂环基各自任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹³的取代基取代；或者R^c2和R^d2与它们所连接的氮原子一起形成任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹³的取代基取代的4元至6元杂环基。在一个变体中，每个R^c2和R^d2独立地为氢或C_1-6烷基。

在一些实施例中，每个R^e2独立地为C_1-6烷基、C_3-6环烷基、C₆芳基、5元至6元杂芳基或3元至6元杂环基；其中R^e2的C_1-6烷基、C_3-6环烷基、C₆芳基、5元至6元杂芳基和3元至6元杂环基各自任选地被1个、2个、3个或4个独立地选自R¹³的取代基取代。在一个变体中，R^e2独立地为C_1-6烷基。

在一些实施例中，每个R^f2独立地为氢或C_1-6烷基。在一个变体中，R^f2为氢。

在一些实施例中，每个R¹³独立地为氧代、卤素、羟基、-O(C_1-6烷基)、氰基、C_1-6烷基或C_1-6卤代烷基。

在一个变体中，每个R¹³独立地为卤素、羟基、-O(C_1-6烷基)、氰基或C_1-6烷基。

在一个变体中，R¹³为氧代、羟基、C_1-6烷基或-O(C_1-6烷基)。

代表性化合物列于表1中。应当理解，下表中按化合物编号和化合物名称列出各个对映异构体和非对映异构体，并且它们相应的结构可易于从中确定。在一些例子中，对映异构体或非对映异构体通过其各自的特性(例如在手性HPLC上的保留时间或其生物学活性)来鉴定，并且任意指定手性中心的绝对立体构型。

表1

在一些实施例中，提供了选自表1中的化合物101-244中的化合物及其盐(例如，药学上可接受的盐)。在一些实施例中，提供了选自表1中的化合物101-239中的化合物及其盐(例如，药学上可接受的盐)。在一些实施例中，提供了选自表1中的化合物101-201、203-204和206-239中的化合物及其盐(例如，药学上可接受的盐)。在一些实施例中，提供了选自表1中的化合物101-109中的化合物及其盐(例如，药学上可接受的盐)。在一些实施例中，提供了选自表1中的化合物110-239中的化合物及其盐(例如，药学上可接受的盐)。在一些实施例中，提供了选自表1中的化合物110-201、203-204和206-239中的化合物及其盐(例如，药学上可接受的盐)。在一些实施例中，提供了选自表1中的化合物110-244中的化合物及其盐(例如，药学上可接受的盐)。在一些实施例中，提供了选自表1中的化合物202、205和240-244中的化合物及其盐(例如，药学上可接受的盐)。

本文所述的式(I)化合物或其盐可能以立体异构体形式存在(例如，它含有一个或多个不对称碳原子)。各种立体异构体(对映异构体和非对映异构体)及其混合物包括在本文所公开的主题范围内。同样，应当理解，式(I)化合物或盐可以除式中所示的结构以外的互变异构形式存在，并且也包括在本文所公开的主题范围内。应当理解，本文所公开的主题包括本文所述的特定组的组合和子集。本文所公开的主题范围包括立体异构体的混合物以及纯化的对映异构体或对映体/非对映体富集的混合物。应当理解，本文所公开的主题包括本文所定义的特定组的组合和子集。

本文所公开的主题还包括本文所述的化合物的同位素标记的形式，但事实上，一个或多个原子被原子质量或质量数不同于自然界中通常发现的原子质量或质量数的原子所取代。可掺入本文所述的化合物及其药学上可接受的盐的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、碘和氯的同位素，诸如²H、³H、¹¹C、¹³C、¹⁴C、¹⁵N、¹⁷O、¹⁸O、³¹P、³²P、³⁵S、¹⁸F、³⁶Cl、¹²³I和¹²⁵I。

本文所公开的主题包括式(I)化合物的前药、代谢物、衍生物和药学上可接受的盐。式(I)化合物的代谢物包括通过使式(I)化合物与哺乳动物接触足以生成其代谢物的时间段而产生的化合物。

如果式(I)化合物为碱，则所需的药学上可接受的盐可通过本领域可用的任何合适的方法进行制备，例如，用无机酸(诸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、甲磺酸、磷酸等)或用有机酸(诸如乙酸、马来酸、琥珀酸、扁桃酸、富马酸、丙二酸、丙酮酸、草酸、乙醇酸、水杨酸、吡喃葡糖苷酸诸如葡糖醛酸或半乳糖醛酸、α-羟基酸诸如柠檬酸或酒石酸、氨基酸诸如天冬氨酸或谷氨酸、芳香酸诸如苯甲酸或肉桂酸、磺酸诸如对甲苯磺酸或乙磺酸等)处理游离碱。

如果式(I)化合物为酸，则所需的药学上可接受的盐可通过任何合适的方法进行制备，例如用无机碱或有机碱(诸如伯胺、仲胺或叔胺、碱金属氢氧化物或碱土金属氢氧化物等)处理游离酸。合适的盐的例示性实例包括但不限于衍生自氨基酸(诸如甘氨酸和精氨酸)、氨、伯胺、仲胺和叔胺以及环状胺(诸如哌啶、吗啉和哌嗪)的有机盐以及衍生自钠、钙、钾、镁、锰、铁、铜、锌、铝和锂的无机盐。

式(I)化合物可为“前药”形式，其包括可在体内代谢的部分的化合物。通常，前药在体内通过酯酶或其他机制代谢为活性药物。前药的实例及其用途在本领域中众所周知(参见例如：Berge等人(1977)“Pharmaceutical Salts”，J.Pharm.Sci.66:1-19)。前药可在化合物的最终分离和纯化过程中原位制备，或通过使纯化的游离酸形式的化合物或羟基与合适的酯化剂分别反应来制备。羟基基团可通过用羧酸处理转化为酯。前药部分的实例包括取代和未取代的、支链或直链的低级烷基酯部分(例如丙酸酯)、低级烯基酯、二低级烷基-氨基低级烷基酯(例如，二甲基氨基乙基酯)、酰基氨基低级烷基酯(例如，乙酰氧基甲基酯)、酰氧基低级烷基酯(例如，新戊酰氧基甲基酯)、芳基酯(苯酯)、芳基-低级烷基酯(例如，苄基酯)、取代的(例如，用甲基、卤代或甲氧基取代基取代)芳基和芳基-低级烷基酯、酰胺、低级烷基酰胺、二低级烷基酰胺和羟基酰胺。还包括通过体内其他机制转化为活性形式的前药。在一些方面，本发明的化合物是本文中任何式的前药。

一般合成方法

式(I)化合物可通过实例中的程序并且一般按照方案1和2进行制备，其中R基团如式(I)或其前体中所述。

方案1

方案1显示了由式2化合物制备式(I)化合物的一般合成方案，其中R¹、R²、R³、R⁴和R⁵如本文所详述，然后该式2化合物可由式1化合物制得，其中X⁴为卤素(例如，Cl、Br或I)。R⁴的安装可通过在溶剂(例如，1,4-二噁烷和水或乙腈和水)中存在碱(例如，碳酸钠或乙酸钾)的情况下使用钯基催化剂(例如，Pd(dppf)Cl₂或(Ph₃P)₄Pd)使式1化合物与式R⁴-B(OR)₂的相应的硼酸或频哪醇硼酸酯发生Suzuki偶联来实现，其中R为H、任选地被取代的C_1-6烷基或者两个OR基团预期所连接的硼原子一起形成环(例如，频哪醇硼酸酯)。然后通过在存在催化剂(例如，tBuBrettPhos Pd G₃或XantPhos/Pd₂(dba)₃)、碱(例如碳酸铯)和溶剂(例如1,4-二噁烷)的情况下，使式2化合物与式R²-X²(其中X²为Cl、Br或I)的相应的芳基或杂芳基卤化物发生Pd催化的偶联来安装R²。

提供了用于制备式(I)化合物：

或其盐的方法，其中R¹、R²、R³、R⁴和R⁵如本文所详述，该方法包括使式2化合物：

或其盐(其中R¹、R³、R⁴和R⁵如针对式(I)所定义，任选地呈其受保护的形式)与式R²-X²化合物(其中X²为Cl、Br或I)在存在Pd催化剂(例如，tBuBrettPhos Pd G₃或XantPhos/Pd₂(dba)₃)、碱(例如碳酸铯)和溶剂(例如1,4-二噁烷)的情况下反应。在一些实施例中，反应在升高的温度(例如约80-100℃)下进行。

在一些实施例中，方法进一步包括使式1化合物：

或其盐(其中R¹、R³和R⁵如针对式(I)或式2所定义，任选地呈其受保护的形式)与式R⁴-B(OR)₂化合物(其中R为H、任选地被取代的C_1-6烷基或者两个OR基团与它们所连接的硼原子一起形成环(例如，频哪醇硼酸酯)在存在Suzuki偶联催化剂(例如，Pd(dppf)Cl₂或(Ph₃P)₄Pd)、碱(例如，碳酸钠或乙酸钾)和溶剂(例如，1,4-二噁烷和水或乙腈和水)的情况下反应，以形成式2化合物。在一些实施例中，Suzuki偶联反应在升高的温度(例如约100-120℃)下进行。

方案2

方案2显示了如方案1中所述的一般合成方法的实例，其中在式(I)化合物中，R²为任选地被取代的杂芳基，R³为氢，并且R⁴为任选地被取代的杂芳基；在形成式2化合物的Suzuki偶联反应中，用于Suzuki偶联的催化剂为Pd(dppf)Cl₂，碱为碳酸钾，并且溶剂为1,4-二噁烷和水；并且在形成式(I)化合物的钯催化的偶联反应中，Pd催化剂为tBuBrettPhosPd G₃或XantPhos/Pd₂(dba)₃，碱为碳酸铯，并且溶剂溶剂为1,4-二噁烷。

药物组合物和制剂

本发明所公开的化合物可与药学上可接受的载体或赋形剂一起配制为药物组合物。

式(I)或其变体诸如式(IA)、(IB)和(IC)化合物可根据标准药学实践配制为药物组合物。根据这一方面，提供了一种包含式(I)或其变体诸如式(IA)、(IB)和(IC)化合物以及药学上可接受的赋形剂、稀释剂或载体的药物组合物。

典型制剂通过混合式(I)或其变体诸如式(IA)、(IB)和(IC)化合物与载体、稀释剂或赋形剂来制备。合适的载体、稀释剂和赋形剂是本领域技术人员众所周知的，并且包括诸如碳水化合物、蜡、水溶性和/或可溶胀聚合物的材料、亲水或疏水材料、明胶、油、溶剂，水等。所使用的特定载体、稀释剂或赋形剂将取决于式(I)或其变体诸如式(IA)、(IB)和(IC)化合物的应用方式和目的。通常基于本领域技术人员公认对哺乳动物施用安全的溶剂(GRAS)来选择溶剂。通常，安全溶剂是无毒的水性溶剂，例如水和其他可溶于水或与水混溶的无毒溶剂。合适的水性溶剂包括水、乙醇、丙二醇、聚乙二醇(例如PEG 400、PEG 300)等及其混合物。制剂还可包含一种或多种缓冲剂、稳定剂、表面活性剂、润湿剂、润滑剂、悬浮剂、防腐剂、抗氧化剂、不透明剂、助流剂、加工助剂、着色剂、甜味剂、加香剂、调味剂和其他已知的添加剂，以提供美观的药物(即，式(I)或其变体诸如式(IA)、(IB)和(IC)化合物或其药物组合物)展示或有助于药物产品(例如，药物)的制备。

可使用常规的溶解和混合程序来制备制剂。例如，在上述一种或多种赋形剂的存在下，将原料药(即，式(I)或其变体诸如式(IA)、(IB)和(IC)化合物或稳定形式的式(I)或其变体诸如式(IA)、(IB)和(IC)化合物(例如，与环糊精衍生物或其他已知的络合剂的复合物))溶于合适的溶剂中。通常将式(I)化合物配制成药物剂型，以提供易于控制的药物剂量并使患者能够遵循处方。

根据用于施用药物的方法，可以以多种方式包装用于施用的药物组合物(或制剂)。一般来讲，用于分配的制品包括以适当形式沉积药物制剂的容器。合适的容器是本领域技术人员熟知的，并且包括诸如瓶(塑料和玻璃)、小袋、安瓿、塑料袋、金属圆筒等之类的材料。容器还可以包括干预防护组件，以防止不慎接触包装的内容物。另外，容器上贴有描述容器内容物的标签。标签上还可能包括适当的警告。

可针对各种给药途径和类型制备药物制剂。例如，可任选地将具有所需纯度的式(I)化合物与药学上可接受的稀释剂、载体、赋形剂或稳定剂混合(Osol,A.主编，Remington's Pharmaceutical Sciences，第16版，1980年)为冻干制剂、研磨粉或水溶液的形式。可通过在环境温度下和适当的pH值和所需的纯度下与生理学上可接受的赋形剂或载体(即在所用剂量和浓度下对接受者无毒的赋形剂或载体)混合来进行配制。制剂的pH主要取决于化合物的具体用途和浓度，但是可在约3至约8的范围内。在pH 5的乙酸盐缓冲液中的制剂是合适的实施例。

式(I)化合物可为无菌化合物。特别地，待用于体内施用的制剂应为无菌的。此类灭菌通过无菌过滤膜过滤很容易实现。

化合物通常可作为固体组合物、冻干制剂或作为水溶液储存。

包含式(I)化合物的药物组合物可按照良好医学实践进行配制、计量和施用(即，施用的量、浓度、计划、疗程、载体和途径)。在这种情况下需要考虑的因素包括所治疗的特定疾患、所治疗的特定哺乳动物、个体患者的临床病症、疾患的原因、药剂的递送部位、施用方法、施用的时间安排，以及执业医师已知的其他因素。待施用的化合物的“治疗有效量”将受此类考虑因素的约束，并且是预防、改善或治疗凝血因子介导的疾患所需的最小量。在一些实施例中，该量低于对宿主有毒或使宿主更易出血的量。

可接受的稀释剂、载体、赋形剂和稳定剂在使用的剂量和浓度下对接受体无毒，包括缓冲液，诸如磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和蛋氨酸；防腐剂(诸如十八烷基二甲基苄基氯化铵；氯化六甲双铵；苯扎氯铵；苄索氯铵；苯酚、丁醇或苄醇；对羟基苯甲酸烷基酯，诸如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，诸如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，诸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，诸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，诸如EDTA；糖，诸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨糖醇；成盐抗衡离子，诸如钠；金属络合物(例如，锌蛋白络合物)；和/或非离子表面活性剂，诸如TWEEN^TM、PLURONICS^TM或聚乙二醇(PEG)。活性药物成分也可以包埋在例如通过凝聚技术或通过界面聚合制备的微胶囊(例如，分别为羟甲基纤维素或明胶微胶囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊)中，被包埋在胶体药物递送系统(例如，脂质体、白蛋白微球、微乳液、纳米粒子和纳米胶囊)中或粗滴乳液中。此类技术公开于《Remington's Pharmaceutical Sciences》第16版(Osol,A.主编，1980年)中。

可以制备式(I)化合物的缓释制剂。缓释制剂的合适实例包括含有式(I)或Ia化合物的固态疏水聚合物的半透性基质，这些基质是例如膜或微胶囊等成型制品的形式。缓释基质的实例包括聚酯、水凝胶(例如，聚(2-甲基丙烯酸羟乙酯)或聚(乙烯醇))、聚丙交酯(US 3773919)、L-谷氨酸和γ-乙基-L-谷氨酸的共聚物、不可降解的乙烯-乙酸乙烯酯、可降解的乳酸-乙醇酸共聚物，诸如LUPRON DEPOT^TM(由乳酸-乙醇酸共聚物和醋酸亮丙瑞林组成的可注射微球)，以及聚-D-(-)-3-羟基丁酸。

该制剂包括适合于本文详述的施用途径的制剂。该制剂可方便地以单位剂量的形式存在，并且可通过药学领域公知的任何方法制备。技术和配方通常可以见于Remington'sPharmaceutical Sciences(Mack Publishing Co.,Easton,PA)。此类方法包括使活性成分与构成一种或多种辅助成分的载体或赋形剂缔合的步骤。通常，通过将活性成分与液体赋形剂或载体或细分的固体赋形剂或载体或两者均匀和紧密地缔合，然后在必要时使产品成型来制备制剂。

适合口服施用的式(I)化合物的制剂可制成离散的单位，例如丸剂、胶囊剂、扁囊剂或片剂，每个单位均包含预定量的式(I)或Ia化合物。

可通过在合适的机器中将自由流动形式(例如粉末或颗粒，任选地与粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、表面活性剂或分散剂混合)的活性成分压缩来制备压制的片剂。模制片剂可通过在合适的机器中模制用惰性液体稀释剂润湿的粉状活性成分的混合物来制备。片剂可任选地被包衣或刻痕，并且可任选地被配制以提供活性成分从其中的缓慢或受控释放。

可制备片剂、口含片、锭剂、水性或油性悬浮液、可分散的粉剂或颗粒剂、乳剂、硬胶囊或软胶囊，例如明胶胶囊、糖浆或酏剂用于口服。用于口服的式(I)化合物的制剂可根据本领域已知的用于制备药物组合物的任何方法来制备，并且这种组合物可包含一种或多种制剂，包括甜味剂、调味剂、着色剂和防腐剂以提供适口的制剂。包含活性成分与适合于制备片剂的无毒药学上可接受的赋形剂混合的片剂是可接受的。这些赋形剂可为例如惰性稀释剂，例如碳酸钙或碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；制粒和崩解剂，例如玉米淀粉或海藻酸；粘合剂，例如淀粉、明胶或阿拉伯胶；润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石粉。片剂可不包衣，也可通过包括微囊化在内的已知技术进行包衣，以延迟在胃肠道中的崩解和吸收，从而在更长的时间内提供持续的作用。例如，可使用延时材料，例如单独或与蜡一起使用的单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。

为了治疗眼睛或其他外部组织(例如口腔和皮肤)，该制剂优选以局部软膏或乳膏剂的形式施用，其含有例如0.075％w/w至20％w/w含量的活性成分。当配制成软膏时，活性成分可与石蜡或与水混溶的软膏剂基质一起使用。另选地，可将活性成分与水包油乳膏基质一起配制成乳膏。

如果需要，乳膏基质的水相可包括多元醇，即具有两个或更多个羟基基团的醇，例如丙二醇、1,3-丁二醇、甘露醇、山梨糖醇、甘油和聚乙二醇(包括PEG 400)及其混合物。局部制剂可期望地包括增强活性成分通过皮肤或其他受影响区域的吸收或渗透的化合物。这种皮肤渗透促进剂的实例包括二甲基亚砜和相关类似物。

乳液的油相可由已知成分以已知方式构成。尽管该相可以仅包含乳化剂，但是还可包含至少一种乳化剂与脂肪或油或与脂肪和油两者的混合物。亲水性乳化剂与亲脂性乳化剂可一起用作稳定剂。具有或不具有稳定剂的乳化剂一起构成所谓的乳化蜡，并且蜡与油和脂肪一起构成所谓的乳化软膏基质，形成乳膏制剂的油性分散相。适用于制剂的乳化剂和乳液稳定剂包括鲸蜡硬脂醇、苄醇、肉豆蔻醇、单硬脂酸甘油酯和十二烷基硫酸钠。

式(I)化合物的水性悬浮液包含与适合制造水性悬浮液的赋形剂混合的活性物质。这样的赋形剂包括悬浮剂，例如羧甲基纤维素钠、交联羧甲基纤维素、聚维酮、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄芪胶和阿拉伯胶，以及分散剂或湿润剂，例如天然存在的磷脂(例如卵磷脂)、环氧烷与脂肪酸的缩合产物(例如，聚氧乙烯硬脂酸酯)、环氧乙烷与长链脂族醇的缩合产物(例如，十七烷乙烯氧基鲸醇)、环氧乙烷与衍生自脂肪的偏酯和己糖醇酐的缩合产物(例如，聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯)。水性悬浮液还可包含一种或多种防腐剂(诸如对羟基苯甲酸乙酯或对羟基苯甲酸正丙酯)、一种或多种着色剂、一种或多种调味剂和一种或多种甜味剂(诸如蔗糖或糖精)。

式(I)或其变体诸如式(IA)、(IB)和(IC)化合物的药物组合物可以呈无菌可注射制剂(诸如无菌可注射的水性或油性悬浮液)的形式。该悬浮液可根据已知技术使用上面已经提到的那些合适的分散剂或湿润剂和悬浮剂来配制。无菌可注射制剂也可以是无菌注射液或悬浮液，其处于非毒性的肠胃外可接受的稀释剂或溶剂(诸如1,3-丁二醇)中。无菌可注射制剂也可以制成冻干粉。可采用的可接受的溶媒和溶剂包括水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。此外，无菌不挥发油常规上可用作溶剂或悬浮介质。为此，可使用任何温和的不挥发性油，包括合成的甘油单酯或甘油二酯。此外，脂肪酸诸如油酸同样可以用于注射剂的制备中。

可与赋形剂或载体材料组合以产生单一剂型的活性成分的量将根据所治疗的宿主和特定的施用方式而变化。例如，用于人口服施用的延时释放制剂可含有约1至1000mg与适当和方便量的赋形剂或载体物质复配的活性物质，该载体物质可占总组合物的约5％至约95％(重量:重量)。可以制备药物组合物以提供易于测量的施用量。例如，用于静脉内输注的水溶液可每毫升溶液包含约3μg至500μg活性成分，以便可以约30mL/h的速率输注合适的体积。

适于肠胃外施用的制剂包括水性和非水性无菌注射溶液，其可以包含抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和溶质，从而使制剂与预期接受者的血液等渗，以及水性和非水性无菌悬浮液，其可以包括悬浮剂和增稠剂。

适用于局部施用于眼睛的制剂还包括滴眼剂，其中活性成分溶解或悬浮在合适的赋形剂或载体中，尤其是活性成分的水性溶剂中。活性成分优选以约0.5％w/w至20％w/w，例如约0.5％w/w至10％w/w，例如约1.5％w/w的浓度存在于此类制剂中。

适于在口腔内局部施用的制剂包括在调味基料(通常是蔗糖和阿拉伯胶或黄芪胶)中包含活性成分的锭剂；在惰性基料(例如明胶和甘油，或蔗糖和阿拉伯胶)中包含活性成分的含片；以及在合适的液体赋形剂或载体中包含活性成分的漱口水。

直肠施用的制剂可以用包含例如可可脂或水杨酸酯的合适的基质呈现为栓剂。

适于肺内或鼻腔施用的制剂具有例如在0.1至500微米的范围内的粒径(包括以0.5微米、1微米、30微米、35微米等增量在0.1微米至500微米的范围内的粒径)，可通过鼻腔快速吸入或通过嘴部吸入达到肺泡囊。合适的制剂包括活性成分的水性或油性溶液。适于气雾剂或干粉剂施用的制剂可根据常规方法制备，并且可与其他治疗剂，例如迄今为止如下所述用于治疗或预防疾患的化合物一起递送。

适于阴道施用的制剂可以呈阴道栓、卫生棉条、乳膏、凝胶、糊剂、泡沫或喷雾剂的形式，其中除活性成分以外还包含本领域中已知的合适的赋形剂或载体。

制剂可包装在单位剂量或多剂量容器中，例如密封的安瓿瓶和小瓶中，并且可在冷冻干燥(冻干)条件下储存，仅需要在使用前添加注射用无菌液体赋形剂或载体(例如水)。临时注射溶液和悬浮液由前述类型的无菌粉末、颗粒和片剂制备。优选的单位剂量制剂是含有如本文上文所述的每日剂量或单位每日亚剂量的，或其适当分数的活性成分的那些。

本发明的主题进一步提供了兽用组合物，其包含至少一种如上定义的活性成分以及兽用赋形剂或载体。兽用赋形剂或载体是可用于施用组合物的材料，并且可以是固体、液体或气体材料，其在兽医领域是惰性的或可接受的并且与活性成分相容。这些兽用组合物可以肠胃外、口服或通过任何其他预期途径施用。

在特定实施例中，包含本发明所公开的化合物的药物组合物进一步包含化疗剂。在其中一些实施例中，化疗剂为免疫治疗剂。

使用方法

本发明所公开的化合物可用于抑制酶HPK1的活性。HPK1也称为丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶激酶1或MAP4K1，是Ste20相关丝氨酸/苏氨酸激酶的偕中心激酶亚家族的成员。HPK1用作MAP4K，通过磷酸化和激活MAP3K蛋白(包括MEKK1、MLK3和TAK1)，导致MAPK Jnk的激活。

在一个实施例中，本文所公开的主题涉及抑制HPK1的方法，该方法包括使HPK1与有效量的本文所述的式(I)或其变体诸如式(IA)、(IB)和(IC)化合物接触。

在一个实施例中，本文所公开的主题涉及增强有此需要的受试者体内的免疫应答的方法，其中该方法包括向所述受试者施用有效量的本文所述的式(I)或其变体诸如式(IA)、(IB)和(IC)化合物或药物组合物。在该实施例的某些方面，相对于施用化合物或药物组合物之前，受试者体内的T细胞具有增强的引发、增强的活化、增强的迁移、增强的增殖、增强的存活期和增强的细胞溶解活性中的至少一种。在该实施例的某些方面，T细胞活化的特征在于相对于施用化合物或药物组合物之前，γ-IFN+CD8 T细胞的频率升高、γ-IFN+CD4 T细胞的频率升高或T细胞产生的IL-2或颗粒酶B的水平升高。在该实施例的某些方面，相对于施用化合物或药物组合物之前，T细胞的数量增加。在该实施例的某些方面，T细胞为抗原特异性CD8 T细胞。在该实施例的某些方面，T细胞为抗原特异性CD4 T细胞。在该实施例的某些方面，相对于施用化合物或药物组合物之前，受试者体内的抗原呈递细胞的成熟和活化增强。在该实施例的某些方面，抗原呈递细胞为树突状细胞。在该实施例的某些方面，抗原呈递细胞的成熟特征在于CD83+树突状细胞的频率升高。在该实施例的某些方面，抗原呈递细胞的活化的特征在于树突状细胞上CD80和CD86的表达升高。在一些方面，式(I)或其变体诸如式(IA)、(IB)和(IC)化合物或其药物组合物提供了对肿瘤或病毒的免疫应答的通用引发作用(即，疫苗)以增强/产生抗病毒/肿瘤免疫力。

在本文所述的方法中，向患有本文其他地方所述的癌症的受试者施用式(I)或其变体诸如式(IA)、(IB)和(IC)化合物或其药物组合物。

在一个实施例中，本文所公开的主题涉及治疗HPK1依赖性疾患的方法，该方法包括向有此需要的受试者施用有效量的本文所述的式(I)或其变体诸如式(IA)、(IB)和(IC)化合物或药物组合物。在该实施例的某些方面，HPK1依赖性疾患为癌症。在该实施例的某些方面，癌症包括选自由以下项组成的组中的至少一种癌症：结直肠癌、黑素瘤、非小细胞肺癌、卵巢癌、乳腺癌、胰腺癌、血液恶性肿瘤和肾细胞癌。在该实施例的某些方面，癌症具有升高的T细胞浸润水平。在该实施例的某些方面，相对于施用化合物或组合物之前，受试者体内的癌细胞选择性地具有升高的I类MHC抗原表达的表达水平。

在本文所述的方法中，该方法可进一步包括向所述受试者施用化疗剂。在该实施例的某些方面，向受试者同时施用化疗剂与本文所述的化合物或组合物。在该实施例的某些方面，在施用本文所述的化合物或组合物之前，向受试者施用化疗剂。在该实施例的某些方面，在施用本文所述的化合物或所述组合物之后，向受试者施用化疗剂。

HPK1多核苷酸和多肽是本领域已知的(Hu等人(1996)Genes Dev.10:2251-2264，该文献全文以引用方式并入本文)。某些HPK1多核苷酸和包含人HPK1多核苷酸的多肽是可获得的，并且其序列是已知的，例如GenBank登录号NM_007181.5的核苷酸141-2642和编码的人HPK1多肽(登录号NP_009112.1)；以及GenBank登录号NM_001042600.2的核苷酸141-2606和编码的人HPK1多肽(登录号NP_001036065.1)。

HPK1多肽包含各种保守的结构基序。HPK1多肽包含氨基末端Ste20样激酶结构域，该结构域包括ATP结合位点。激酶结构域之后为四个富含脯氨酸(PR)的基序，这些基序是含SH3的蛋白质诸如CrkL、Grb2、HIP-55、Gads、Nck和Crk的结合位点。HPK1响应于TCR或BCR刺激而发生磷酸化并且被激活。TCR和BCR诱导的PR1和PR2之间的酪氨酸残基的磷酸化通过SLP-76或BLNK SH2结构域介导与T细胞中的SLP-76或B细胞中的BLNK结合，并且激酶活化所必需的。在HPK1的C端发现的Citron同源结构域可能是一个调节域，并且可能参与了大分子相互作用。

本发明所公开的化合物直接与HPK1结合并且抑制其激酶活性。在一些实施例中，本发明所公开的化合物降低、抑制或以其他方式削弱HPK1介导的SLP76和/或Gads的磷酸化。

本发明所公开的化合物可以是也可以不是特异性HPK1拮抗剂。特异性HPK1拮抗剂降低HPK1的生物学活性的量在统计学上大于该拮抗剂对任何其他蛋白质(例如，其他丝氨酸/苏氨酸激酶)的抑制作用。在某些实施例中，本发明所公开的化合物特异性抑制HPK1的丝氨酸/苏氨酸激酶活性。在其中一些实施例中，HPK1拮抗剂对HPK1的IC₅₀为HPK1拮抗剂对另一种丝氨酸/苏氨酸激酶或其他类型的激酶(例如，酪氨酸激酶)的IC₅₀的约90％、80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％、10％、0.1％、0.01％、0.001％或更小。

本发明所公开的化合物可用于抑制HPK1的方法中。此类方法包括使HPK1与有效量的本发明所公开的化合物接触。“接触”是指使化合物与分离的HPK1酶或表达HPK1的细胞(例如，T细胞、B细胞、树突状细胞)足够接近，使得该化合物能够结合至HPK1并且抑制其活性。可使该化合物在体外与HPK1接触，或通过向受试者施用化合物，使该化合物在体内与HPK1接触。

可使用本领域中已知的可用于测定HPK1激酶活性的任何方法来确定HPK1是否受到抑制，这些方法包括体外激酶测定、使用对HPK1磷酸化靶点具有特异性的抗体(诸如SLP76和Gads)进行免疫印迹检测或测量HPK1激酶活性的下游生物学效应(诸如将14-3-3蛋白募集到磷酸化的SLP7和Gads、从包含LAT的微簇释放出SLP76-Gads-14-3-3复合物或者T细胞或B细胞活化)。

本发明所公开的化合物可用于治疗HPK1依赖性疾患。如本文所用，“HPK1依赖性疾患”是指以下病理状态，其中HPK1活性对于该病理状态的发生或维持是必需的。在一些实施例中，HPK1依赖性疾患为癌症。

本发明所公开的化合物还可用于增强有此需要的受试者的免疫应答。此类方法包括施用有效量的本发明所公开的化合物(即，式(I)或其变体诸如式(IA)、(IB)和(IC)化合物或其药学上可接受的盐、前药、代谢物或衍生物)。

如本文所用，“增强免疫应答”是指对抗原的任何免疫原性应答的改善。对抗原的免疫原性应答的改善的非限制性实例包括树突状细胞的成熟或迁移的增强、T细胞(例如，CD4 T细胞、CD8 T细胞)活化增强、T细胞(例如，CD4 T细胞、CD8 T细胞)增殖增强，B细胞增殖增强、T细胞和/或B细胞的存活期延长、抗原呈递细胞(例如树突状细胞)的抗原呈递改善、抗原清除率改善、T细胞产生的细胞因子(例如，白细胞介素-2)增加、对前列腺素E2诱导的免疫抑制的抵抗力增强以及CD8 T细胞的引发和/或细胞溶解活性提高。

在一些实施例中，相对于施用式(I)或其变体诸如式(IA)、(IB)和(IC)化合物或其药学上可接受的盐、前药、代谢物或衍生物之前，受试者体内的CD8 T细胞具有增强的引发、活化、增殖和/或细胞溶解活性。在一些实施例中，CD8 T细胞引发的特征在于CD8 T细胞中CD44表达水平升高和/或细胞溶解活性增强。在一些实施例中，CD8 T细胞活化的特征在于γ-IFN⁺CD8 T细胞的频率升高。在一些实施例中，CD8 T细胞为抗原特异性T细胞。

在一些实施例中，相对于施用式(I)或其变体诸如式(IA)、(IB)和(IC)化合物或其药学上可接受的盐、前药、代谢物或衍生物之前，受试者体内的CD4 T细胞具有增强的引发、活化、增殖和/或细胞溶解活性。在一些实施例中，CD4 T细胞引发的特征在于CD4 T细胞中CD44表达水平升高和/或细胞溶解活性增强。在一些实施例中，CD4 T细胞活化的特征在于γ-IFN⁺CD4 T细胞的频率升高。在一些实施例中，CD4 T细胞为抗原特异性T细胞。

在一些实施例中，相对于施用式(I)或其变体诸如式(IA)、(IB)和(IC)化合物或其药学上可接受的盐、前药、代谢物或衍生物之前，受试者体内的抗原呈递细胞具有增强的成熟和活化作用。在一些实施例中，抗原呈递细胞为树突状细胞。在一些实施例中，抗原呈递细胞的成熟特征在于CD83⁺树突状细胞的频率升高。在一些实施例中，抗原呈递细胞的活化的特征在于树突状细胞上CD80和CD86的表达升高。

在一些实施例中，相对于施用式(I)或其变体诸如式(IA)、(IB)和(IC)化合物或其药学上可接受的盐、前药、代谢物或衍生物之前，受试者体内的血清细胞因子IL-10和/或趋化因子IL-8(鼠KC的人同源物)的血清水平下降。

TCR的参与导致HPK1活化，其用作TCR诱导的AP-1应答途径的负调节剂。据信HPK1通过使Ser376处的SLP76(Di Bartolo等人(2007)JEM 204:681-691)和Thr254处的Gads发生磷酸化来降低信号传导微簇的持久性对T细胞活化进行负调控，从而募集与磷酸化SLP76和Gads结合的14-3-3蛋白，从包含LAT的微簇中释放出SLP76-Gads-14-3-3复合物，其导致T细胞功能紊乱(包括细胞无能和细胞耗竭)(Lasserre等人(2011)J Cell Biol 195(5):839-853)。

在免疫功能紊乱的上下文中，术语“功能紊乱”是指对抗原刺激的免疫应答下降的状态。该术语包括可能发生抗原识别的耗竭和/或无能的常见要素，但随后的免疫应答对控制感染或肿瘤生长无效。

如本文所用，术语“功能紊乱的”还包括难以实现抗原识别或对抗原识别无反应，具体地，将抗原识别转化为下游T细胞效应子功能(诸如增殖、细胞因子产生(例如，IL-2、γ-IFN)和/或靶细胞杀伤)的功能受损。

术语“无能”是指通过T细胞受体传递的信号不完全或不充分而引起的对抗原刺激的无反应状态(例如，在不存在ras激活的情况下细胞内Ca⁺²升高)。在不存在协同刺激的情况下，抗原刺激也导致T细胞无能，即使在发生协同刺激的情况下，细胞随后也难以被抗原激活。无反应状态通常可能被存在的白细胞介素-2覆盖。无能T细胞不发生克隆扩增和/或获得效应子功能。

术语“耗竭”是指T细胞耗竭，是由于许多慢性感染和癌症期间持续发生的TCR信号传导所引起的T细胞功能紊乱状态。它与“无能”的不同之处在于，并非由不完全或不充分的信号产生，而是由持续的信号传导产生。它是指效应子功能不佳、抑制性受体的持续表达以及不同于功能性效应子或记忆T细胞的转录状态。细胞耗竭阻碍了对感染和肿瘤的最佳控制。耗竭可能源于外在的负调控途径(例如，免疫调节性细胞因子)以及细胞内在负调控(协同刺激)途径(PD-1、B7-H3、B7-H4等)。

在一些实施例中，向受试者施用式(I)或其变体诸如式(IA)、(IB)和(IC)化合物或其药学上可接受的盐、前药、代谢物或衍生物导致T细胞功能增强。在一些实施例中，施用本文所述的HPK1抑制剂可增强/更新/重新激活免疫应答或激活新的免疫应答。

“增强T细胞功能”是指诱导、引起或刺激T细胞具有持续或放大的生物学功能或更新或重新激活耗竭或失活的T细胞。增强T细胞功能的实例包括：相对于干预前的此类水平，细胞因子(例如，γ-干扰素、IL-2、IL-12和TNFα)分泌增加、增殖增加、抗原反应(例如，病毒、病原体或肿瘤清除率)增加，以及CD8 T细胞或CD4 T细胞产生的效应颗粒诸如颗粒酶B增加。在一个实施例中，增强水平为至少50％或者60％、70％、80％、90％、100％、120％、150％、200％。测量该增强效应的方式是本领域的普通技术人员已知的。

因此，本发明所公开的式(I)或其变体诸如式(IA)、(IB)和(IC)化合物或其药学上可接受的盐、前药、代谢物或衍生物可用于治疗T细胞功能失调的疾患。“T细胞功能失调的疾患”是指特征在于对抗原刺激的应答下降的T细胞疾患或病症。在一个特定的实施例中，T细胞功能失调的疾患是与HPK1的激酶活性升高明确相关联的疾患。在另一个实施例中，T细胞功能失调的疾患是其中T细胞无能或分泌细胞因子、增殖或执行细胞溶解活性的能力下降的疾患。在一个具体方面，反应下降导致无法有效控制表达免疫原的病原体或肿瘤。特征在于T细胞功能失调的T细胞功能失调的疾患的实例包括无法消退的急性感染、慢性感染和肿瘤免疫。

因此，本发明所公开的化合物可用于治疗需要增强免疫原性的病症，诸如提高肿瘤免疫原性以治疗癌症。

“免疫原性”是指特定物质引起免疫应答的能力。肿瘤具有免疫原性，并且增强免疫原性有助于通过免疫应答清除肿瘤细胞。病毒也可能具有免疫原性，并且增强/激活免疫原性可有助于通过免疫应答清除病毒颗粒。

“肿瘤免疫”是指肿瘤逃避免疫识别和清除的过程。因此，作为治疗概念，当此类逃避行为减弱时，肿瘤免疫得到“治疗”，并且肿瘤被免疫系统识别并且攻击。肿瘤识别的实例包括肿瘤结合、肿瘤缩小和肿瘤清除。

在一个方面，本文提供了一种用于治疗有此需要的受试者的癌症的方法，该方法包括向受试者施用有效量的式(I)或其变体诸如式(IA)、(IB)和(IC)化合物或其药学上可接受的盐、前药、代谢物或衍生物。在一些实施例中，受试者患有黑素瘤。黑素瘤可处于早期或晚期。在一些实施例中，受试者患有结直肠癌。结直肠癌可处于早期或晚期。在一些实施例中，受试者患有非小细胞肺癌。非小细胞肺癌可处于早期或晚期。在一些实施例中，受试者患有胰腺癌。胰腺癌可处于早期或晚期。在一些实施例中，受试者患有血液恶性肿瘤。血液恶性肿瘤可处于早期或晚期。在一些实施例中，受试者患有卵巢癌。卵巢癌可处于早期或晚期。在一些实施例中，受试者患有乳腺癌。乳腺癌可处于早期或晚期。在一些实施例中，受试者患有肾细胞癌。肾细胞癌可处于早期或晚期。在一些实施例中，癌症具有升高的T细胞浸润水平。

在一个方面，提供了一种用于治疗有此需要的受试者的病毒感染的方法，该方法包括向受试者施用有效量的式(I)或其变体诸如式(IA)、(IB)和(IC)化合物或其药学上可接受的盐、前药、代谢物或衍生物。在一个方面，提供了用于增强或促进有此需要的受试者对疫苗(诸如癌症疫苗或个性化癌症疫苗(PCV))或CAR-T细胞疗法的反应的方法，该方法包括向受试者施用有效量的式(I)或其变体诸如式(IA)、(IB)和(IC)化合物或其药学上可接受的盐、前药、代谢物或衍生物。

本发明所公开的化合物可通过本领域中已知的任何合适的方式来施用。在一些实施例中，式(I)或其变体诸如式(IA)、(IB)和(IC)化合物或其药学上可接受的盐、前药、代谢物或衍生物经静脉内、肌内、皮下、局部、经口、经皮、腹膜内、经眶内、通过植入、通过吸入、鞘内、心室内、肿瘤内或鼻内施用。

在一些实施例中，连续施用HPK1拮抗剂。在其他实施例中，间歇地施用HPK1拮抗剂。此外，施用有效量的HPK1拮抗剂治疗受试者可包括单次治疗或者可包括一系列治疗。

应当理解，适当剂量的活性化合物取决于本领域普通技术水平的医师或兽医的知识范围内的的许多因素。活性化合物的剂量可以变化，例如，取决于受试者的年龄、体重、总体健康状况、性别和饮食、施用时间、施用途径、排泄率以及任何药物组合。

还应当理解，用于治疗的式(I)或其变体诸如式(IA)、(IB)和(IC)化合物或其药学上可接受的盐、前药、代谢物或衍生物的有效剂量在特定治疗过程中可能增加或减少。剂量的变化可能由诊断测定的结果引起并且从诊断测定的结果中变得显而易见。

在一些实施例中，向受试者施用剂量介于约0.001μg/kg和约1000mg/kg之间(包括但不限于约0.001μg/kg、约0.01μg/kg、约0.05μg/kg、约0.1μg/kg、约0.5μg/kg、约1μg/kg、约10μg/kg、约25μg/kg、约50μg/kg、约100μg/kg、约250μg/kg、约500μg/kg、约1mg/kg、约5mg/kg、约10mg/kg、约25mg/kg、约50mg/kg、约100mg/kg和约200mg/kg)的HPK1拮抗剂。

在一些实施例中，提供了一种用于治疗有此需要的受试者的癌症的方法，该方法包括向受试者施用有效量的式(I)或其变体诸如式(IA)、(IB)和(IC)化合物或其药学上可接受的盐、前药、代谢物或衍生物，其进一步包括施用附加疗法。附加疗法可以是放疗、手术(例如，乳房肿瘤切除术和乳房切除术)、化疗、基因疗法、DNA疗法、病毒疗法、RNA疗法、免疫疗法、骨髓移植、纳米疗法、单克隆抗体疗法或前述疗法的组合。附加疗法可以是辅助疗法或新辅助疗法的形式。在一些实施例中，附加疗法为施用抗转移剂。在一些实施例中，附加疗法为施用副作用限制剂(例如，旨在减轻治疗副作用的发生和/或减轻其严重程度的药物，例如止吐剂等)。在一些实施例中，附加疗法为放疗。在一些实施例中，附加疗法为手术。在一些实施例中，附加疗法为放疗与手术的组合。在一些实施例中，附加疗法为伽玛辐照。在一些实施例中，附加疗法为靶向PI3K/AKT/mTOR通路的疗法、HSP90抑制剂、微管蛋白抑制剂、细胞凋亡抑制剂和/或化学预防试剂。

附加疗法可为化疗剂中的一种或多种。因此，治疗癌症的方法可包括与至少一种化疗剂联合施用本发明所公开的HPK1拮抗剂。

如本文所用，“与……联合”是指在一种治疗方式以外还施用另一种治疗方式。因此，“与……联合”是指在向受试者施用一种治疗方式之前、施用过程中或施用之后施用另一种治疗方式。

例如，HPK1拮抗剂和化疗剂可依次(在不同时间)或同时(在同一时间)施用。HPK1拮抗剂和化疗剂可通过相同的施用途径或不同的施用途径来施用。

在某些实施例中，HPK1拮抗剂与另一种免疫疗法联合施用。例如，HPK1拮抗剂可与靶向PD-L1/PD-1通路的化疗剂或生物制剂联合施用。已知的抑制检查点通路涉及通过PD-1受体的信号传导。程序性死亡1(PD-1)受体及其配体PD-L1和PD-L2与CTLA-4属于同一共调节分子家族。-更多信息参见：http://www.onclive.com/web-exclusives/the-role-of-anti-pd-l1-immunotherapy-in-cancer/2#sthash.cGfYa1T1.dpuf。阻断PD-L1与PD-1和CD80结合的化疗剂或生物制剂可防止PD-L1介导的T细胞活化的抑制/压制。程序性细胞死亡配体-1(PD-L1)在抗原呈递细胞(APC)及其他免疫细胞上广泛表达。它在各种人类癌症的肿瘤细胞中上调，并且与抑制抗肿瘤T细胞免疫有关。PD-L1是一种细胞表面蛋白，与活化的T细胞、B细胞和其他骨髓细胞上的受体PD-1和CD80结合。已发现PD-L1与活化T细胞上的PD-1结合以干扰T细胞增殖并且抑制免疫应答。PD-L1在癌细胞上的过表达可能使这些细胞避免免疫检测和清除。PD-L1在肿瘤细胞上的高表达水平与肿瘤侵袭性增加和预后不良相关联。阻断PD-L1与PD-1结合的化疗剂或生物制剂包括抗PD-L1抗体，诸如德瓦鲁单抗、纳武单抗、pidlizumab、MPDL3280A、MK-3475和BMS-936559等。在一些实施例中，HPK1拮抗剂与PD-1拮抗剂(诸如抗PD-1抗体)、PD-L1拮抗剂(诸如抗PD-L1抗体)和/或PD-L2拮抗剂(诸如抗PD-L2抗体)联合施用。抗PD-L1抗体的实例包括但不限于阿维单抗、阿特珠单抗(也称为MPDL3280A)、派姆单抗(也称为MK-3475)、LY3300054(Eli Lilly)、STI-A1014(Sorrento)、KN035(Suzhou Alphamab)和BMS-936559(Bristol Myers Squibb)。抗PD-1抗体的实例包括但不限于纳武单抗、pidlizumab、PDR001(Novartis)、REGN2810(Regeneron)、BGB-108(BeiGene)、BGB-A317(BeiGene)、JS-001(Shanghai Junshi)、STI-A1110(Sorrento)、INCSHR-1210(Incyte)、PF-06801591(Pfizer)、TSR-042(也称为ANB011；Tesaro/AnaptysBio)、AM0001(ARMO Biosciences)和ENUM 244C8(Enumeral BiomedicalHoldings)。

在另一个实例中，HPK1拮抗剂可与靶向OX40及其配体OX40L(TNF超家族的成员)的化疗剂或生物制剂组合。OX40在活化的CD4(+)和CD8(+)T细胞以及许多其他淋巴样细胞和非淋巴样细胞上表达。从OX40到常规T细胞的协同刺激信号促进分裂和存活，从而增加效应子和记忆群在产生抗原时的克隆扩增。OX40还抑制T调节细胞的分化和活性，进一步放大这一过程。OX40和OX40L还调节T细胞、抗原呈递细胞、自然杀伤细胞和自然杀伤T细胞的细胞因子产生，并且调节细胞因子受体信号传导。作为已知控制T细胞的最重要的协同刺激分子之一，刺激OX40已被证明是针对癌症的治疗免疫策略的目标。某些OX40激动剂包括GBR830以及Linch等人在Frontiers in Oncology第5卷第1-10页(2015年)中公开的那些，该文献全文以引用方式并入本文。

在其他实例中，HPK1拮抗剂可与靶向CD28、OX40、GITR、CD137、CD27、CD40、ICOS、HVEM、NKG2D、MICA、2B4、IL-2、IL-12、IFNγ、IFNα、TNFα、IL-1、CDN、HMGB1、TLR、PD-L1轴、CTLA-4、TIM-3、BTLA、VISTA、LAG-3、B7H4、CD96、CD226、前列腺素、VEGF、内皮素B、IDO、精氨酸酶、MICA/MICB、TIM-3、IL-10、IL-4、IL-13、TIGIT或TGFβ的化疗剂或生物制剂组合。在其他实例中，HPK1拮抗剂可与包含PD-L1轴、CTLA-4、TIM-3、BTLA、VISTA、LAG-3、B7H4、CD96、TIGIT、CD226、前列腺素、VEGF、内皮素B、IDO、精氨酸酶、MICA/MICB、TIM-3、IL-10、IL-4或IL-13拮抗剂的免疫疗法组合。在其他实例中，HPK1拮抗剂可与包含CD28、OX40、GITR、CD137、CD27、CD40、ICOS、HVEM、NKG2D、MICA、2B4、IL-2、IL-12、IFNγ、IFNα、TNFα、IL-1、CDN、HMGB1或TLR拮抗剂的免疫疗法组合。

在另一个实例中，HPK1拮抗剂可与PCV组合。在另一个实例中，HPK1拮抗剂过继性T细胞治疗组合。

提供了一种抑制HPK1的方法，所述方法包括使受试者体内的HPK1与有效量的式(I)或其变体诸如式(IA)、(IB)和(IC)化合物或其药学上可接受的盐或者包含式(I)或其变体诸如式(IA)、(IB)和(IC)化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物接触。

一种用于增强有此需要的受试者的免疫应答的方法，其中该方法包括向所述受试者施用有效量的式(I)或其变体诸如式(IA)、(IB)和(IC)化合物或其药学上可接受的盐或者包含式(I)或其变体诸如式(IA)、(IB)和(IC)化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物接触。

在一些实施例中，所述受试者患有癌症。

还提供了一种用于治疗HPK1依赖性疾患的方法，所述方法包括向有此需要的受试者施用有效量的式(I)或其变体诸如式(IA)、(IB)和(IC)化合物或其药学上可接受的盐或者包含式(I)或其变体诸如式(IA)、(IB)和(IC)化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物接触。

在一些实施例中，所述HPK1依赖性疾患为癌症。

在一些实施例中，其中癌症包括选自由以下项组成的组中的至少一种癌症：结直肠癌、黑素瘤、非小细胞肺癌、卵巢癌、乳腺癌、胰腺癌、血液恶性肿瘤和肾细胞癌。

在一些实施例中，所述方法进一步包括向所述受试者施用化疗剂。

在一些实施例中，本发明还提供了本文所述的式(I)或其变体诸如式(IA)、(IB)和(IC)化合物或本文所述的药物组合物，其用于如本文所述的抑制HPK1的方法中、用于如本文所述的增强有此需要的受试者的免疫应答的方法中和/或用于如本文所述的治疗HPK1依赖性疾患的方法中。

在一些实施例中，本发明还提供了本文所述的式(I)或其变体诸如式(IA)、(IB)和(IC)化合物或本文所述的药物组合物，其用于如本文所述的抑制HPK1的方法中。

在一些实施例中，本发明还提供了本文所述的式(I)或其变体诸如式(IA)、(IB)和(IC)化合物或本文所述的药物组合物，其用于如本文所述的增强有此需要的受试者的免疫应答的方法中。

在一些实施例中，本发明还提供了本文所述的式(I)或其变体诸如式(IA)、(IB)和(IC)化合物或本文所述的药物组合物，其用于如本文所述的治疗HPK1依赖性疾患的方法中。

在一些实施例中，本发明还提供了本文所述的式(I)或其变体诸如式(IA)、(IB)和(IC)化合物或本文所述的药物组合物在生产用于抑制HPK1的药物、用于增强有此需要的受试者的免疫应答的药物和/或用于治疗HPK1依赖性疾患的药物中的用途。

在一些实施例中，本发明还提供了本文所述的式(I)或其变体诸如式(IA)、(IB)和(IC)化合物或本文所述的药物组合物在生产用于抑制HPK1的药物中的用途。

在一些实施例中，本发明还提供了本文所述的式(I)或其变体诸如式(IA)、(IB)和(IC)化合物或本文所述的药物组合物在生产用于增强有此需要的受试者的免疫应答的药物中的用途。

在一些实施例中，本发明还提供了本文所述的式(I)或其变体诸如式(IA)、(IB)和(IC)化合物或本文所述的药物组合物在生产用于治疗HPK1依赖性疾患的药物中的用途。

在一些实施例中，本发明还提供了本文所述的式(I)或其变体诸如式(IA)、(IB)和(IC)化合物或本文所述的药物组合物在用于如本文所述的抑制HPK1的方法中、用于如本文所述的增强有此需要的受试者的免疫应答的方法中和/或用于如本文所述的治疗HPK1依赖性疾患的方法中的用途。

在一些实施例中，本发明还提供了本文所述的式(I)或其变体诸如式(IA)、(IB)和(IC)化合物或本文所述的药物组合物在用于如本文所述的抑制HPK1的方法中的用途。

在一些实施例中，本发明还提供了本文所述的式(I)或其变体诸如式(IA)、(IB)和(IC)化合物或本文所述的药物组合物在用于如本文所述的增强有此需要的受试者的免疫应答的方法中的用途。

在一些实施例中，本发明还提供了本文所述的式(I)或其变体诸如式(IA)、(IB)和(IC)化合物或本文所述的药物组合物在用于如本文所述的治疗HPK1依赖性疾患的方法中的用途。

在一些实施例中，治疗导致受试者在停止治疗后产生持续缓解。“持续缓解”是指停止治疗后减少肿瘤生长的持续作用。例如，与施用阶段开始时的肿瘤大小相比，肿瘤大小可保持相同或减小。在一些实施例中，持续缓解的持续时间至少与治疗持续时间相同，或为治疗持续时间的1.5倍、2.0倍、2.5倍或3.0倍。

本文所公开的治疗方法可能导致部分或完全缓解。如本文所用，“完全缓解”或“CR”是指所有靶病灶消失；“局部缓解”或“PR”是指靶病灶的最长直径(SLD)之和以基线SLD作为参考减小至少30％；并且“疾病稳定”或“SD”是指以治疗开始以来的最小SLD作为参考，靶病灶既未充分缩小以达到PR的要求，也未充分增加以达到PD的要求。如本文所用，“总体缓解率”(ORR)是指完全缓解(CR)率与部分缓解(PR)率之和。

本文所公开的治疗方法可导致被施用HPK1拮抗剂的受试者的无进展生存期和总生存期延长。如本文所用，“无进展生存期”(PFS)是指治疗期间和治疗后被治疗的疾病(例如，癌症)不恶化的时长。无进展生存期可包括患者发生完全缓解或部分缓解的时间以及患者发生疾病稳定的时间。

如本文所用，“总生存期”是指一组受试者中在特定时间段之后可能存活的百分比。

在一些实施例中，接受HPK1拮抗剂给药的受试者为哺乳动物，诸如驯养的动物(例如，牛、绵羊、猫、犬和马)、灵长类动物(例如，人和非人灵长类动物诸如猴)、兔以及啮齿类动物(例如，小鼠和大鼠)。在一些实施例中，接受治疗的受试者是人。

需要治疗癌症的受试者可能是表现出癌症症状的人、已诊断出患有癌症的受试者、处于癌症缓解期的受试者或罹患癌症的风险高的受试者(例如，遗传易感性、某些饮食或环境暴露)。

在本文所述的任何方法中，在一方面，受试者是人，诸如需要该方法的人。受试者可能是已诊断出或疑似患有HPK1依赖性疾患诸如癌症的人。个体可能是无可检测的疾病但具有一种或多种患癌风险因素的人。

进一步提供了用于执行本文详述的方法的试剂盒，其包含本文所述的一种或多种化合物或包含本文所述的化合物的药物组合物。试剂盒可采用本文所公开的任何化合物。在一个变体中，试剂盒采用本文所述的化合物或其药学上可接受的盐。试剂盒可用于本文所述的任何一种或多种用途，因此可包含用于治疗HPK1依赖性疾患诸如癌症的说明书。在一些实施例中，试剂盒包含治疗癌症的使用说明书。

试剂盒通常包含合适的包装。试剂盒可包含一个或多个包含本文所述的任何化合物的容器。各种组分(如果存在多于一种组分)可包装在单独的容器中，或者某些组分可在交叉反应性和有效期允许的情况下组合在一个容器中。试剂盒中的一种或多种组分可以是无菌的和/或可以容纳于无菌包装中。

试剂盒可以是单位剂型、大包装(例如，多剂量包装)或亚单位剂量。例如，可提供包含足够剂量的本文所公开的化合物(例如，治疗有效量)和/或可用于HPK1依赖性疾患(例如，癌症)的第二药物活性化合物的试剂盒，为个体提供长时间(诸如一周、2周、3周、4周、6周、8周、3个月、4个月、5个月、7个月、8个月、9个月或更长时间)的有效治疗。试剂盒还可包括多个单位剂量的化合物和使用说明书，并且包装的数量足以在药房(例如，医院药房和复配药房)中储存和使用。

试剂盒可任选地包括一组说明书，通常为书面说明书，但包含说明书的电子存储介质(例如，磁盘或光盘)也是可接受的，其中涉及本发明的方法的组分的使用。试剂盒随附的说明书通常包括有关组分及其施用于受试者的信息。

下列实例以举例的方式而非限制性的方式给出。

实例

LC/MS方法

方法K：实验采用Shimadzu 20AD HPLC与Shimadzu LCMS2020质谱仪联用系统，该仪器系统使用ESI作为离子源，使用Shim-Pack XR-ODS C18 2.2μm，3.0×50mm色谱柱，并且流速为1.2mL/min。溶剂系统为梯度，从95％的0.05％TFA水溶液(溶剂A)和5％的0.05％TFA的乙腈溶液(溶剂B)开始，在2.0分钟内升至95％溶剂B。最终溶剂体系保持恒定0.7分钟。

方法L：实验采用Shimadzu 30AD HPLC与Shimadzu LCMS2020质谱仪联用系统，该仪器系统使用ESI作为离子源，使用Ascentis Express C182.7μm，2.1×50mm色谱柱，并且流速为1.0mL/min。溶剂系统为梯度，从95％的0.05％TFA水溶液(溶剂A)和5％的0.05％TFA的乙腈溶液(溶剂B)开始，在2.0分钟内升至95％溶剂B。最终溶剂体系保持恒定0.7分钟。

方法M：实验采用Shimadzu 20AD XR HPLC与Shimadzu LCMS2020质谱仪联用系统，该仪器系统使用ESI作为离子源，使用Poroshell HPH-C18 2.7μm，3.0×50mm色谱柱，并且流速为1.2mL/min。溶剂系统为梯度，从95％的5mM碳酸氢铵水溶液(溶剂A)和5％的乙腈溶液(溶剂B)开始，在2.0分钟内升至95％溶剂B。最终溶剂体系保持恒定0.7分钟。

方法N：实验采用Agilent 1290UHPLC与Agilent MSD(6140)质谱仪联用系统，该质谱仪使用ESI作为离子源。LC分离使用Phenomenex XB-C18，1.7mm，50×2.1mm色谱柱，并且流速为0.4mL/min。溶剂A为0.1％FA水溶液，溶剂B为0.1％FA的乙腈溶液。梯度包括在7min内使用2-98％溶剂B，并且以98％B保持1.5min，然后平衡1.5min。LC柱温为40℃。在220nm和254nm下采集UV吸光度，并且在所有实验中应用质谱全扫描。

方法O：实验采用Waters Acquity UPLC与Waters LCT Premier XE质谱仪联用系统，该质谱仪使用ESI离子源。LC分离使用Acquity UPLC BEH C18，1.7mm，2.1×50mm色谱柱，并且流速为0.6mL/min。MPA(流动相A)为0.05％TFA水溶液，并且MPB(流动相B)为0.05％TFA的乙腈溶液。梯度包括在5min内使用2-98％MPB，并且以98％B保持0.5min，然后平衡0.5min。LC柱温为40℃。在220nm和254nm下采集UV数据，并且在所有实验中应用质谱全扫描。

方法P：实验采用Shimadzu 20AD HPLC与Shimadzu LCMS2020质谱仪联用系统，该仪器系统使用ESI作为离子源，使用Shim-Pack GIST 2.0μm，3.0mm×50mm色谱柱，并且流速为1.0mL/min。溶剂体系为梯度，从90％的5mM NH₄HCO₃水溶液(溶剂A)和10％乙腈(溶剂B)开始，在2.0分钟内升至100％溶剂B。最终溶剂体系保持恒定0.7分钟。

合成实例

实例1

6-溴-7-氟-异喹啉-3-胺

步骤1：(4-溴-3-氟苯基)甲胺

将4-溴-3-氟-苯甲腈(5.0g,25mmol)的BH₃·THF(80mL,1mol/L,80mmol)溶液在60℃下搅拌3h。将反应用MeOH(20mL)和HCl(20mL,12M)淬灭。将所得溶液用EtOAc(3×200mL)进行萃取，用无水MgSO₄干燥，并且在真空下浓缩，以得到(4-溴-3-氟苯基)甲胺(4.5g，粗产物)，将其直接用于下一步而不经纯化。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝204。

第2步：2,2-二乙氧基乙酰亚胺酸甲酯

将2,2-二乙氧基乙腈(4.0g,30.97mmol)和甲醇钠(1.2mL,5.4mol/L,6.19mmol)的甲醇(40mL)溶液在25℃下搅拌3h，然后浓缩至干。将残余物吸收于二氯甲烷(200mL)中，用水(3×80mL)和盐水洗涤，用无水MgSO₄干燥，过滤并且在真空下浓缩，以得到2,2-二乙氧基乙酰亚胺酸甲酯(5g，粗产物)，将其直接用于下一步而不经纯化。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝162。

步骤3：N-(4-溴-3-氟苄基)-2,2-二乙氧基乙脒

将(4-溴-3-氟-苯基)甲胺(4.5g，粗产物)、2,2-二乙氧基乙酰亚胺甲酯(5g，粗产物)的甲醇(40mL)溶液在25℃下搅拌3h。将反应混合物浓缩至干，并且将残余物吸收于二氯甲烷中。将有机层用盐水洗涤，干燥(Na₂SO₄)并且浓缩，以得到N-(4-溴-3-氟苄基)-2,2-二乙氧基乙脒(5.0g，粗产物)，将其直接用于下一步而不经纯化。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝333。

第4步：6-溴-7-氟-异喹啉-3-胺

将N-[(4-溴-3-氟-苯基)甲基]-2,2-二乙氧基-乙脒(5.0g，粗产物)的H₂SO₄(30mL)溶液在60℃下搅拌12h。将反应混合物冷却至0℃，并且加入NaOH以将pH调节至9。将混合物用DCM(3×150mL)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，干燥Na₂SO₄，过滤，并且浓缩至干。将残余物在硅胶柱上纯化，用EA/PE(3/7)进行洗脱，以得到6-溴-7-氟-异喹啉-3-胺与6-溴-5-氟异喹啉-3-胺的混合物(800mg,6:6a＝5:1,3.32mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝241。

实例2

8-甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-羧酸叔丁酯

第1步：7-溴-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-羧酸叔丁酯

在0℃下，向7-溴-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪(1g,4.37mmol)的四氢呋喃(2mL)溶液中逐滴加入LiHMDS(8.73mL,8.73mmol,1mol/L)。将所得溶液在氮气保护下在0℃下搅拌0.5h。然后加入二碳酸二叔丁酯(2.85g,13.07mmol)，并且将反应混合物在室温下搅拌2h。将反应用甲醇(50mL)淬灭。将溶剂在真空下浓缩。利用硅胶快速层析法纯化残余物(乙酸甲酯/石油醚，1/4)，以得到7-溴-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-羧酸叔丁酯(800mg,2.43mmol)，其为黄色油状物。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝329.2。

第2步：8-甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-羧酸叔丁酯

在氮气气氛下，将7-溴-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-羧酸叔丁酯(6.2g,18.83mmol)、双(频那醇酯合)二硼(23.93g,94.22mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(2.76g,3.77mmol)和乙酸钾(5.55g,56.62mmol)与1,4-二噁烷(2mL)的混合物在90℃下搅拌2.5h。将溶剂在真空下浓缩。利用硅胶快速层析法纯化残余物，用乙酸乙酯/石油醚(30％)进行洗脱，以得到8-甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-羧酸叔丁酯(5g,13.29mmol)，其为黄色油状物。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝376.3。

实例3

2-溴-5,5,6-三甲基-4,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮

第1步：2-(3,5-二溴吡唑-1-基)乙腈

将3,5-二溴-1H-吡唑(1.0g,4.43mmol)和碳酸钾(1.22g,8.85mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(20mL)溶液在25℃下搅拌10min。加入溴乙腈(796.59mg,6.64mmol)，并且将反应混合物在25℃下搅拌2h。过滤后，将滤液用乙酸乙酯(30mL)稀释。将反应混合物用水洗涤。将有机相用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。利用硅胶快速层析法纯化残余物，用石油醚/二氯甲醇(1/1)进行洗脱，以得到2-(3,5-二溴吡唑-1-基)乙腈(950mg,3.59mmol)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝264。

第2步：2-[3-溴-5-(2-甲基丙-1-烯基)吡唑-1-基]乙腈

在氮气气氛下，将2-(3,5-二溴吡唑-1-基)乙腈(1.0g,3.77mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-(2-甲基丙-1-烯-1-基)-1,3,2-二氧杂戊硼烷(687.29mg,3.77mmol)、Pd(dppf)Cl₂(552.64mg,0.75mmol)和碳酸钾(1.56g,11.32mmol)与1,4-二噁烷(20mL)和水(2mL)的混合物在100℃下搅拌1h。过滤后，在真空下浓缩滤液。利用硅胶快速层析法纯化残余物，用乙酸乙酯/石油醚(1/3)进行洗脱，以得到2-[3-溴-5-(2-甲基丙-1-烯基)吡唑-1-基]乙腈(700mg,2.92mmol)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝240。

第3步：2-溴-5,5-二甲基-6,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮

将2-[3-溴-5-(2-甲基丙-1-烯基)吡唑-1-基]乙腈(700mg,2.92mmol)与甲磺酸(15mL)的混合物在65℃下搅拌3天。将反应用冰水淬灭。用氢氧化钠水溶液将反应混合物的pH调节至9-10。将所得溶液用二氯甲烷萃取，并且用无水硫酸钠进行干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。利用反相色谱(乙腈0-40％/0.1％NH₄HCO₃水溶液)纯化残余物，以得到2-溴-5,5-二甲基-6,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮(300mg,1.16mmol)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝258。

第4步：2-溴-5,5,6-三甲基-4,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮

将2-溴-5,5-二甲基-6,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮(100mg,0.39mmol)和叔丁醇钾(52.07mg,0.46mmol)与四氢呋喃(10mL)的混合物在25℃下搅拌10min。加入碘甲烷(82.52mg,0.58mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌1h。将反应混合物在真空下浓缩，并且利用硅胶快速层析法纯化(用二氯甲烷/甲醇(95/5)进行洗脱)，以得到2-溴-5,5,6-三甲基-4,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮(80mg,0.29mmol)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝272。

实例4

2-溴-4-亚甲基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮

第1步：3,5-二溴-1H-吡唑

向处于N₂保护的3L 3颈圆底烧瓶中加入化合物1(200g,656mmol,1.0eq)的二甲基四氢呋喃(1000mL)溶液，然后将该溶液冷却至-78℃。在-78℃下，在1小时内向上述溶液中逐滴加入n-BuLi(2.5M,525mL,2.0eq)，并且将该混合物在-78℃下搅拌3小时。TLC(石油醚/乙酸乙酯＝3/1，R_f＝0.51)表明反应完全，并且形成一个新的主斑点。将反应混合物倒入0℃的水(1000mL)中，并且用2N HCl将溶液的pH值酸化至4-5。将所得溶液用乙酸乙酯(1000mL,800mL,400mL)进行萃取。将合并的有机相用盐水(800mL)洗涤，用无水Na₂SO₄干燥，并且在真空下浓缩，以得到标题化合物(284g，1.26mol，产率95.8％)，其为黄色固体。将粗产物直接用于下一步而不经进一步纯化。

第2步：2-(3,5-二溴-1H-吡唑-1-基)乙酸叔丁酯

向3,5-二溴-1H-吡唑(137g,607mmol,1.0eq)的MeCN(959mL)溶液中加入2-氯乙酸叔丁酯(137g,910mmol,131mL,1.5eq)、K₂CO₃(137g,989mmol,1.63eq)和TBAI(11.0g,29.7mmol,0.049eq)。在25℃下，将所得溶液搅拌12小时。TLC(石油醚/乙酸乙酯＝5/1，R_f＝0.74)表明反应完全，并且形成一个新的主斑点。对反应混合物进行过滤，并且将滤饼用EtOAc(500mL×3,300mL,200mL)洗涤。浓缩合并的滤液，以得到残余物，将该残余物溶于EtOAc(2.0L)中，然后依次用水(1.0L)和盐水(1.0L)进行洗涤。将有机层用无水Na₂SO₄干燥，过滤，并且在真空下浓缩，以得到标题化合物(744g，粗产物)，其为棕色油状物。¹H NMR：(400MHz,CDCl₃)：δ6.35(s,1H),4.80(s,2H),1.46(s,9H)。

第3步：2-(3,5-二溴-1H-吡唑-1-基)乙酸

向化合物2-(3,5-二溴-1H-吡唑-1-基)乙酸叔丁酯(248g,729mmol,1.0eq)的DCM(140mL)溶液中加入TFA(2.08kg,18.2mol,1.35L,25eq)，并且将所得溶液加热至80℃，并且搅拌2小时。该反应以此规模重复进行三次。TLC(石油醚/乙酸乙酯＝5/1，R_f＝0.03)表明反应完全，并且形成一个新的主斑点。在减压条件下浓缩合并的反应混合物，以得到粗产物。将粗产物用石油醚/乙酸乙酯(4/1,1.0L)稀释，并且将所得悬浮液在25℃下搅拌1小时，然后过滤。收集滤饼，并且在真空下干燥，以得到标题化合物(471g，1.66mol，产率75.8％)，其为灰白色固体。¹H NMR：(400MHz,DMSO)δ13.3(br s,1H),6.70(s,1H),4.96(s,2H)。

步骤4：N-烯丙基-2-(3,5-二溴-1H-吡唑-1-基)乙酰胺

在0℃下，向2-(3,5-二溴-1H-吡唑-1-基)乙酸(157g,553mmol,1.0eq)的DMF(1.10L)溶液中加入DIPEA(357g,2.77mol,482mL,5.0eq)和EDCI(138g,719mmol,1.3eq)，并且将所得溶液在0℃下搅拌30min。加入HOBt(97.1g,719mmol,1.3eq)，并且将混合物在0℃下继续搅拌30min。加入0℃的丙-2-烯-1-胺(47.4g,830mmol,62.2mL,1.5eq)，然后将混合物温热至25℃，并且搅拌16小时。该反应以此规模重复进行三次。TLC(石油醚/乙酸乙酯＝1/1，R_f＝0.60)表明反应完全，并且形成一个新的主斑点。将三批反应混合物合并，并且将合并的反应混合物倒入冰水(12.0L)中，然后用乙酸乙酯(2.00L,2.00L,1.00L)进行萃取。将合并的有机相用盐水(2.0L)洗涤，然后在真空下浓缩，以得到粗产物。利用硅胶柱层析法(石油醚/乙酸乙酯＝3/1)对粗产物进行纯化，以得到标题化合物(340g，1.05mol，产率63.5％)，其为白色固体。¹H NMR：(400MHz,CDCl3)δ6.41(s,1H),5.89(br s,1H),5.79(m,1H),5.08-5.17(m,2H),4.85(s,2H),3.86-3.93(m,2H)。

步骤5：N-烯丙基-2-(3,5-二溴-1H-吡唑-1-基)-N-(4-甲氧基苄基)乙酰胺

向N-烯丙基-2-(3,5-二溴-1H-吡唑-1-基)乙酰胺(103g,319mmol,1.0eq)的THF(721mL)溶液中加入KOH(32.2g,574mmol,1.8eq)、18-Crown-6(3.37g,12.8mmol,0.04eq)和1-(氯甲基)-4-甲氧基-苯(64.9g,415mmol,56.5mL,1.3eq)，然后将混合物在25℃下搅拌64h。TLC(石油醚/乙酸乙酯＝2/1，R_f＝0.50)表明形成了一个新的主斑点。将反应再重复两次。将三批反应混合物合并，并且向合并的反应混合物中加入水(1.00L)，然后用1M HCl将pH值调节至7-8，然后用EtOAc(1.00L,800mL×3)进行萃取。将合并的有机相用盐水(800mL)洗涤，用无水Na₂SO₄干燥，过滤，并且在真空下浓缩，以得到粗产物。利用硅胶柱层析法(石油醚/乙酸乙酯＝2/1)对粗产物进行纯化，以得到标题化合物(320g，722mmol，产率75.5％)，其为黄色油状物。

第6步：2-溴-6-(4-甲氧基苄基)-4-亚甲基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮

在Ar保护下，向N-烯丙基-2-(3,5-二溴-1H-吡唑-1-基)-N-(4-甲氧基苄基)乙酰胺(50.0g,113mmol,1.0eq)的DMF(1.0L)溶液中加入K₂CO₃(31.2g,226mmol,2.0eq)、Pd(PPh₃)₄(17.0g,14.7mmol,0.13eq)，然后将混合物在120℃下搅拌16小时。将反应再重复六次。将七批反应混合物合并，并且将合并的反应混合物在真空下浓缩，以除去溶剂，得到残余物。向残余物中加入水(2.0L)和乙酸乙酯(2.0L)。收集有机层，然后将水层用乙酸乙酯(1.0L,1.0L)萃取两次。将合并的有机相用盐水(1.0L)洗涤，然后浓缩以得到粗产物。利用硅胶柱层析法(石油醚/乙酸乙酯＝2/1)对粗产物进行纯化，以得到标题化合物(74.1g，204mmol，产率25.9％，纯度98.7％)，其为白色固体。¹H NMR：(400MHz,CDCl₃)δ7.21(d,J＝8.8Hz,2H),6.86-6.92(m,2H),6.52(s,1H),5.50(s,1H),5.20(s,2H),5.02(s,1H),4.58(s,2H),4.13(s,2H),3.83(s,3H)。

第7步：2-溴-4-亚甲基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮

将2-溴-6-(4-甲氧基苄基)-4-亚甲基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮(3.90g,10.8mmol,1.0eq)、TFA(38.4g,336mmol,24.9mL,31.3eq)和三氟甲磺酸(16.2g,108mmol,9.5mL,10eq)的DCM(28mL)溶液在25℃下搅拌12小时。将反应混合物浓缩以得到残余物。向残余物中加入水(100mL)，然后用饱和NaHCO₃水溶液将pH值调节至6-7，用EtOAc(100mL×3,60mL×3)进行萃取。将合并的有机相用无水Na₂SO₄干燥，过滤，并且在真空下浓缩，以得到粗产物。利用硅胶柱层析法(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)对粗产物进行纯化，以得到标题化合物(1.90g，7.85mmol，产率72.9％)，其为灰色固体。¹H NMR：(400MHz,CDCl₃)δ6.88(s,1H),6.54(s,1H),5.55(s,1H),5.21(s,1H),5.08(s,2H),4.15(d,J＝6.0Hz,2H)。

实例5

2-溴-6-甲基-4-亚甲基-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮

第1步：2-(3,5-二溴-1H-吡唑-1-基)-N-甲基-N-(丙-2-烯-1-基)乙酰胺

将2-(3,5-二溴-1H-吡唑-1-基)乙酸(15g,52.84mmol)、甲基(丙-2-烯-1-基)胺(5.7g,80.15mmol)、N,N-二异丙基乙基胺(27g,208.9mmol)和HATU(30g,78.9mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(500mL)溶液在室温下搅拌16小时。将所得混合物用乙酸乙酯稀释，然后用氯化钠溶液进行洗涤。将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，然后在真空下浓缩。利用硅胶快速层析法纯化残余物，用乙酸乙酯/石油醚(2/3)进行洗脱，以得到2-(3,5-二溴-1H-吡唑-1-基)-N-甲基-N-(丙-2-烯-1-基)乙酰胺(16.3g,92％)，其为黄色油状物。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝338.0。

第2步：2-溴-6-甲基-4-亚甲基-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮

将2-(3,5-二溴-1H-吡唑-1-基)-N-甲基-N-(丙-2-烯-1-基)乙酰胺(5g,14.84mmol)、乙酸钯(166mg,0.74mmol)、三苯基膦(388mg,1.48mmol)、TBAB(4.8g,14.890mmol)和乙酸钾(4.2g,42.80mmol)与N,N-二甲基甲酰胺(100mL)的混合物在80℃下搅拌10h。将混合物冷却至室温，然后过滤，并且在真空下浓缩。利用硅胶柱纯化残余物，并且用乙酸乙酯/石油醚(2/1)进行洗脱，以得到2-溴-6-甲基-4-亚甲基-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮(3.2g,84％)，其为棕色油状物。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝258.1。

实例6

2-溴-6-异丙基-4-亚甲基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮

在25℃下，向N-烯丙基-2-(3,5-二溴吡唑-1-基)-N-异丙基-乙酰胺(6.3g,17.26mmol)、乙酸钯(386.5mg,1.73mmol)、三苯基膦(904.29mg,3.45mmol)和四丁基溴化铵(5.56g,17.26mmol)与N,N-二甲基甲酰胺(150mL)的混合物中加入乙酸钾(4.87g,51.77mmol)。将所得混合物在90℃下搅拌12小时。将反应混合物用乙酸乙酯稀释，然后用水洗涤。将有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，并且在真空下浓缩。利用硅胶快速层析法纯化残余物，用乙酸乙酯/石油醚(2/3)进行洗脱，以得到2-溴-6-异丙基-4-亚甲基-5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮(2.34g，8.23mmol，产率47.7％)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝284。

实例7

2'-溴-6'-甲基-5',6'-二氢螺[环丙烷-1,4'-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓]-7'(8'H)-酮

将碘化三甲氧硫鎓(1.29g,5.86mmol)和叔丁醇钾(656mg,5.85mmol)与二甲基亚砜(30mL)的混合物在室温下搅拌30min。然后加入2-溴-6-甲基-4-亚甲基-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮(500mg,1.95mmol)的二甲基亚砜(3mL)溶液，并且将混合物在50℃下搅拌12h。将反应混合物冷却至室温，然后用乙酸乙酯稀释，并且用水洗涤。将有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，并且在真空下浓缩。利用硅胶柱纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(10/1)进行洗脱，以得到2'-溴-6'-甲基-5',6'-二氢螺[环丙烷-1,4'-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓]-7'(8'H)-酮(120mg,23％)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝270。

实例8

2-溴-6-甲基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮

步骤1：2-(3-溴-5-甲基-吡唑-1-基)乙酸甲酯

向3-溴-5-甲基-1H-吡唑(100g,621.12mmol)、2-氯乙酸甲酯(101.11g,931.68mmol)和K₂CO₃(154.29g,1118mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(1L)溶液中加入TBAI(11.46g,31.06mmol)。将所得溶液在20℃下搅拌12h。将反应混合物用EA(5000mL)进行稀释。将溶液用水(300mL×3)洗涤，然后用无水硫酸钠使有机层干燥，并且在真空下进行浓缩。利用硅胶快速层析法纯化残余物，用PE/DCM(60/40)进行洗脱，以得到2-(3-溴-5-甲基-吡唑-1-基)乙酸甲酯(120g，产率82.9％)，其为白色固体。

步骤2：2-[3-溴-5-(溴甲基)吡唑-1-基]乙酸甲酯

将2-(3-溴-5-甲基-吡唑-1-基)乙酸甲酯(50.0g,214.54mmol)和AIBN(3.52g,21.45mmol)的四氯化碳(1500mL)溶液在RT下搅拌5min。加入1-溴-2,5-吡咯烷二酮(40.09g,225.26mmol)。将该混合物在80℃下搅拌1小时。将反应混合物在真空下浓缩。利用硅胶快速层析法纯化残余物，用PE/EA(92/8)进行洗脱，以得到2-[3-溴-5-(溴甲基)吡唑-1-基]乙酸甲酯(35.5g，产率53％)，其为白色固体。

步骤3：2-(3-溴-5-(氰基甲基)-1H-吡唑-1-基)乙酸甲酯

将2-[3-溴-5-(溴甲基)吡唑-1-基]乙酸甲酯(35.4g,113.48mmol)和氰化钠(8.87g,181.02mmol)的二甲基亚砜(550mL)溶液在RT下搅拌1小时。将反应溶液用EA(2.5L)进行稀释。将溶液用水(200mL×5)洗涤，然后用无水硫酸钠使有机层干燥，过滤，并且在真空下进行浓缩。利用硅胶快速层析法纯化残余物，用DCM/MeOH(99/1)洗脱，以得到2-(3-溴-5-(氰基甲基)-1H-吡唑-1-基)乙酸甲酯(17.6g，产率60％)，其为白色固体。

步骤4：2-(5-(2-氨基乙基)-3-溴-1H-吡唑-1-基)乙酸甲酯

向2-[3-溴-5-(氰基甲基)吡唑-1-基]乙酸甲酯(3.0g,11.62mmol)的甲醇(600mL)溶液中加入PtO₂(600mg,2.64mmol)。将混合物在10atm氢气下在25℃下搅拌15小时，然后过滤，并且直接用于下一步而不经纯化。

第5步：2-溴-4,5,6,8-四氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮

向粗制2-[5-(2-氨基乙基)-3-溴-吡唑-1-基]乙酸甲酯的甲醇溶液(600mL)中加入三乙胺(70mL)。将该混合物在25℃下搅拌15小时。将所得溶液在真空下浓缩。利用硅胶快速层析法纯化残余物，用DCM/MeOH(98/2)进行洗脱，以得到2-溴-4,5,6,8-四氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮(1.12g，两步合成的产率为41.9％)，其为白色固体。

第6步：2-溴-6-甲基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮

在20℃下，向2-溴-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓(469.53mg,2.17mmol)和叔丁醇钾(365.74mg,3.26mmol)与四氢呋喃(20mL)的混合物中加入碘甲烷(616.86mg,4.35mmol)。将所得溶液在20℃下搅拌1h。将混合物在真空下浓缩。利用硅胶快速层析法纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(20/1)进行洗脱，以得到2-溴-6-甲基-4,5,7,8-四氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓(400mg，1.74mmol，产率80％)。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝244

实例9

2-溴-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮

将2-溴-4,5,6,8-四氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮(3.0g,13.04mmol)和NaH(1.56g,39.12mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(75mL)溶液在0℃下搅拌10min。然后加入2-碘丙烷(11.08g,65.2mmol)。将该混合物在25℃下搅拌1小时。完成后，将反应用水淬灭。将混合物在真空下浓缩。利用反相色谱(乙腈0-40％/0.1％NH₄HCO₃水溶液)纯化所得残余物，以得到2-溴-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮(2.1g，7.7166mmol，产率59.2％)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝272。

实例10

8-溴-5,6-二氢-11H-咪唑并[1,2-a]吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓

第1步：2-溴-4,5,6,8-四氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-硫酮

将2-溴-4,5,6,8-四氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮(314mg,1.36mmol)和Lawesson试剂(551.4mg,1.36mmol)与1,4-二噁烷(10mL)的混合物在90℃下搅拌1h。将反应混合物在真空下浓缩。利用硅胶快速层析法纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(96/4)进行洗脱，以得到2-溴-4,5,6,8-四氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-硫酮(265mg,78.9％)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝246.0。

第2步：2-溴-N-(2,2-二乙氧基乙基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-胺

将2-溴-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-硫酮(265.0mg,1.07mmol)、2,2-二乙氧基乙-1-胺(1.42g,10.7mmol)和碳酸银(590mg,2.14mmol)与四氢呋喃(10mL)的混合物在80℃下搅拌1h。将反应混合物在真空下浓缩。利用反相HPLC纯化残余物，用水(0.05％TFA)/CH₃CN(85/15)进行洗脱，以得到2-溴-N-(2,2-二乙氧基乙基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-胺(295mg,80％)，其为棕色油状物。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝345.0。

第3步：8-溴-5,6-二氢-11H-咪唑并[1,2-a]吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓

将2-溴-N-(2,2-二乙氧基乙基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-胺(228mg,0.66mmol)和浓盐酸(0.17mL,0.66mmol)的乙酸(5mL)溶液在80℃下搅拌1h。将反应混合物在真空下浓缩。利用反相HPLC纯化残余物，用水(0.05％TFA)/ACN(85/15)进行洗脱，以得到8-溴-5,6-二氢-11H-咪唑并[1,2-a]吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓(150mg,89.7％)，其为棕色油状物。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝253.0。

实例11

7-溴-8-氯-6-碘异喹啉-3-胺

第1步：4-氨基-3-溴-2-氯苯甲腈

向4-氨基-2-氯苯甲腈(1.5g,9.83mmol)的乙腈(30mL)溶液中加入1,3-二溴-5,5-二甲基-2,4-咪唑烷二酮(1.5g,5.25mmol)。将该溶液在25℃下搅拌2小时。加入饱和NaHSO₃(30mL)溶液使反应淬灭，并且用乙酸乙酯(50mL×2)进行萃取。浓缩有机层，然后利用快速层析法(10％乙酸乙酯的石油醚溶液)进行纯化，以得到4-氨基-3-溴-2-氯苯甲腈和4-氨基-5-溴-2-氯苯甲腈的混合物(850mg，5/2的区域异构体，产率26％)，其为黄色固体，直接用于下一步。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.67(s,1H),7.38(d,J＝8.4Hz,2.6H),6.80(s,1H),6.65(d,J＝8.4Hz,2.6H),4.81(bs,5H),4.71(bs,2H)。

第2步：3-溴-2-氯-4-碘苯甲腈

向CuI(51.63g,271.74mmol)的乙腈(300mL)悬浮液中加入亚硝酸叔丁酯(33.59g,326.09mmol)。将混合物在65℃下搅拌10分钟。加入4-氨基-3-溴-2-氯苯甲腈与4-氨基-5-溴-2-氯苯甲腈(3/4ratio,25g,108.7mmol)的混合物，然后将反应混合物在65℃下搅拌12小时。冷却至室温后，将混合物用饱和Na₂S₂O₄溶液(30mL)淬灭，并且用乙酸乙酯(3×50mL)进行萃取。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，用Na₂SO₄干燥，然后过滤。浓缩滤液，并且利用快速柱层析法(5％乙酸乙酯的石油醚溶液)进行纯化，以得到3-溴-2-氯-4-碘苯甲腈(5g，产率31％)，其为黄色固体。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)7.91(d,J＝8.0Hz,1H),7.30(d,J＝8.0Hz,1H)。

步骤3：(3-溴-2-氯-4-碘苯基)甲胺

向3-溴-2-氯-4-碘苯甲腈(3g,8.76mmol)的THF(30mL)溶液中加入硼烷-THF(30mL，1M的THF溶液，30mmol)。将混合物在N₂气氛下在65℃下搅拌3h。冷却至室温后，加入甲醇(10mL)和HCl(12N,10mL)以使混合物淬灭。将反应混合物浓缩至干，然后将残余物吸收于乙酸乙酯(100mL)中，并且用水(50mL×2)进行萃取。弃去有机层，并且通过加入饱和NaHCO₃水溶液，将水层的pH调节至9。将混合物用乙酸乙酯(50mL×3)进行萃取，然后合并的有机层用水(10mL×2)和盐水(10mL)洗涤，干燥(Na₂SO₄)、过滤并且浓缩，以得到(3-溴-2-氯-4-碘苯基)甲胺(3g，产率99％)，其为黄色油状物，直接用于下一步。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝345.9。

步骤4：N-(3-溴-2-氯-4-碘苄基)-2,2-二乙氧基乙脒

向(3-溴-2-氯-4-碘苯基)甲胺(2.5g,7.22mmol)的甲醇(20mL)溶液中加入2,2-二乙氧基乙酰亚胺酸甲酯(3.75g,23.26mmol)。将溶液在25℃下搅拌12小时，然后浓缩至干。将残余物溶于二氯甲烷(20mL)中，用水和盐水洗涤，用MgSO₄干燥，过滤并且浓缩，以得到N-(3-溴-2-氯-4-碘苄基)-2,2-二乙氧基乙脒(3g，产率87％)，其为黄色固体，直接用于下一步。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝474.9。

第5步：7-溴-8-氯-6-碘异喹啉-3-胺

将硫酸(10mL)和N-(3-溴-2-氯-4-碘苄基)-2,2-二乙氧基乙脒(3g,6.31mmol)在60℃下搅拌12小时。将反应混合物冷却至0℃，然后加入NaOH溶液，以将pH调节至9。将所得溶液用二氯甲烷(100mL×3)进行萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，过滤，并且浓缩，以得到7-溴-8-氯-6-碘异喹啉-3-胺(2.4g，产率99％)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝382.8。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)：δ8.99(s,1H),8.32(s,1H),6.56(s,1H),6.49(s,2H)。

实例12

6-溴-8-氯-异喹啉-3-胺

第1步：2,2-二乙氧基乙酰亚胺甲酯

向不断搅拌的二乙氧基乙腈(7.0g,54.2mmol)的无水甲醇(50mL)溶液中加入甲醇钠的甲醇溶液(4.2mL,20％,8.4mmol)。添加后，将反应混合物在室温下搅拌48小时。将反应混合物浓缩至干，并且将残余物吸收于氯仿中，将有机层用水洗涤，干燥，并且浓缩，以得到2,2-二乙氧基乙酰亚胺甲酯(8.37g，产率95％)，其为无色油状物，直接用于下一步而不经进一步纯化。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.95(s,1H),4.82(s,1H),3.65(s,3H),3.51(q,J＝7.2Hz,4H),1.14(t,J＝7.2Hz,6H)。

第2步：(4-溴-2-氯-苯基)甲胺

向50mL圆底烧瓶中加入BH₃-THF(1.0M的THF溶液，32.5mL，32.5mmol)和4-溴-2-氯苯甲腈(1.76g,8.13mmol)的THF(10mL)溶液。将混合物加热回流2小时。加入3M HCl水溶液，将反应混合物淬灭。加入NaOH(5重量％)，将pH调节至8，然后用二氯甲烷进行萃取。将有机层干燥、过滤并且浓缩，以得到(4-溴-2-氯-苯基)甲胺(1.62g，产率90％)，其直接用于下一步而不经进一步纯化。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝220.0。

步骤3：N-[(4-溴-2-氯-苯基)甲基]-2,2-二乙氧基-乙脒

将2,2-二乙氧基乙酰亚胺甲酯(2.7g,16.8mmol)逐滴加入不断搅拌的(4-溴-2-氯-苯基)甲胺(2.47g,11.2mmol)的甲醇(100mL)溶液中。将混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物浓缩至干，并且将残余物吸收于二氯甲烷中。将有机层用盐水洗涤，干燥(Na₂SO₄)，并且浓缩，以得到N-[(4-溴-2-氯-苯基)甲基]-2,2-二乙氧基-乙脒粗产物(3.76g，产率89％)，其为白色固体，直接用于下一步而不经进一步纯化。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝349.0

第4步：6-溴-8-氯-异喹啉-3-胺

在N₂气氛和0℃下，向N-[(4-溴-2-氯-苯基)甲基]-2,2-二乙氧基-乙脒粗产物(1.9g,5.05mmol)中加入浓H₂SO₄(14.9g,152mmol)。将反应混合物在室温下搅拌16小时，然后冷却至0℃，并且用1M NaOH水溶液将pH调节至7.0。然后将混合物用二氯甲烷萃取3次，将合并的有机层用盐水洗涤，干燥(Na₂SO₄)，并且浓缩至干。利用快速柱层析法(乙酸乙酯:石油醚＝1:3)浓缩粗制混合物，以得到6-溴-8-氯-异喹啉-3-胺(410mg，产率33％)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝256.9

实例13

8-氯-7-氟-6-碘异喹啉-3-胺

第1步：4-氨基-2-氯-3-氟苯甲腈

向密封管中加入氰化亚铜(I)(1.2g,13.37mmol)、4-溴-3-氯-2-氟苯胺(1g,4.46mmol)和1-甲基-2-吡咯烷酮(8mL)。在微波反应器中，将混合物在170℃下加热1小时。加入饱和NH₄Cl溶液(20mL)使反应混合物淬灭，然后进行过滤。将滤液用乙酸乙酯(3×100mL)进行萃取。将合并的有机层用盐水(3×10mL)洗涤，用Na₂SO₄干燥，通过硅胶垫进行过滤，并且浓缩至干，以得到4-氨基-2-氯-3-氟苯甲腈(700mg，产率92％)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝171.1。

第2步：2-氯-3-氟-4-碘苯甲腈

在N₂气氛和65℃下，向CuI(3341mg,17.59mmol)的乙腈(50mL)悬浮液中加入亚硝酸叔丁酯(1811mg,17.59mmol)。将混合物在65℃下搅拌10分钟，然后加入4-氨基-2-氯-3-氟苯甲腈(2g,11.73mmol)。在65℃下，将该混合物搅拌12小时。冷却至室温后，将混合物用饱和Na₂S₂O₄水溶液(30mL)和NH₄Cl水溶液(30mL)淬灭，并且用乙酸乙酯(3×300mL)进行萃取。将合并的有机层用盐水(2×10mL)洗涤，用Na₂SO₄干燥，然后进行过滤。浓缩滤液，以得到粗产物，其通过快速层析法(石油醚/乙酸乙酯＝5/1)纯化，以得到2-氯-3-氟-4-碘苯甲腈(1g，产率30％)，其为黄色固体。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.80(dd,J＝5.6,8.2Hz,1H),7.22(dd,J＝1.4,8.2Hz,1H)。

步骤3：(2-氯-3-氟-4-碘苯基)甲胺

在0℃下，将2-氯-3-氟-4-碘苯甲腈(1g,3.55mmol)加入硼烷-THF(35.53mL，1M的THF溶液，35.53mmol)的THF(30mL)溶液中。然后将混合物温热至室温，并且搅拌过夜。通过逐滴加入HCl溶液(6M,2mL)，使反应溶液淬灭，然后用NaHCO₃水溶液将其中和至pH＝8，并且用二氯甲烷(2×200mL)进行萃取。将合并的有机层用水(2×10mL)和盐水(1×10mL)洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤，并且浓缩，以得到(2-氯-3-氟-4-碘苯基)甲胺(400mg，粗产物)，其直接用于下一步而不经进一步纯化。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝285.9。

步骤4：N-(2-氯-3-氟-4-碘苄基)-2,2-二乙氧基乙脒

向2,2-二乙氧基乙酰亚胺酸甲酯(0.3g,1.88mmol)的甲醇(5mL)溶液中加入(2-氯-3-氟-4-碘苯基)甲胺(250mg,0.88mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌12小时，然后浓缩至干。将残余物吸收于二氯甲烷(20mL)中，依次用水(2×10mL)和盐水洗涤，干燥(MgSO₄)、过滤并且浓缩，以得到N-(2-氯-3-氟-4-碘苄基)-2,2-二乙氧基乙脒(360mg，粗产物)，其为黄色固体，直接用于下一步而不经进一步纯化。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝415.0。

第5步：8-氯-7-氟-6-碘异喹啉-3-胺

将N-(2-氯-3-氟-4-碘苄基)-2,2-二乙氧基乙脒(0.36g,0.87mmol)溶液和浓H₂SO₄(10mL,26.05mmol)在60℃下搅拌12小时。将混合物冷却至0℃，并且用NaOH(10重量％)将pH调节至9，然后用二氯甲烷(5×100mL)进行萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，干燥(Na₂SO₄)、过滤并且浓缩，以得到8-氯-7-氟-6-碘异喹啉-3-胺(0.25g，粗产物)，其为黄色固体，直接用于下一步而不经进一步纯化。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝322.9。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ9.00(s,1H),8.08(d,J＝5.6Hz,1H),6.70(s,1H)。

实例101

2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]氨基]-6-甲基-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮(化合物110)

向8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-胺(100mg,0.35mmol)的1,4-二噁烷(10mL)溶液中加入2-溴-6-甲基-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮(110mg,0.45mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(72mg,0.07mmol)、9,9-二甲基-4,5-双(二苯基膦基)氧杂蒽(80mg,0.14mmol)和碳酸铯(290mg,0.89mmol)。将所得混合物在110℃下搅拌2h，然后冷却至室温。过滤后，在真空下浓缩滤液。利用制备型HPLC(XBridge PrepC18OBD，19×15mm，5μm；10mmol NH₄HCO₃水:CH₃CN(在8min内由50％增加至77％))纯化残余物，以得到2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]氨基]-6-甲基-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮(45mg,29％)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝451.2；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.57(s,1H),9.22(s,1H),8.57(d,J＝5.2Hz,1H),8.51(s,1H),8.03(s,1H),7.86(d,J＝7.2Hz,1H),7.45(d,J＝5.2Hz,1H),6.02(s,1H),5.01(s,2H),3.85-3.82(m,2H),3.07-3.04(m,2H),2.96(s,3H),2.23(s,3H)。

实例102

2-[[6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-甲基-螺[5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-4,1'-环丙烷]-7-酮(化合物111)

第1步：N-叔丁氧基羰基-N-[5-[7-氟-3-[(6-甲基-7-氧代-螺[5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-4,1'-环丙烷]-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯

将N-[5-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁酯(200mg,0.40mmol)、2-溴-6-甲基-螺[5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-4,1'-环丙烷]-7-酮(129mg,0.48mmol)、t-BuBrettphos Pd G3(137mg,0.16mmol)、t-Bubrettphos(97mg,0.2mmol)和碳酸铯(391mg,1.2mmol)的1,4-二噁烷溶液在130℃下搅拌1小时。将溶剂在真空下浓缩。利用硅胶快速层析法纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(96/4)进行洗脱，以得到N-叔丁氧基羰基-N-[5-[7-氟-3-[(6-甲基-7-氧代-螺[5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-4,1'-环丙烷]-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(60mg,0.091mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝658.3。

第2步：2-[[6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-甲基-螺[5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-4,1'-环丙烷]-7-酮

将N-叔丁氧基羰基-N-[5-[7-氟-3-[(6-甲基-7-氧代-螺[5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-4,1'-环丙烷]-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(50mg,0.08mmol)和2,2,2-三氟乙酸(1.0mL)的二氯甲烷(1mL)溶液在室温下搅拌1h。将溶剂在真空下浓缩。将残余物重新溶于甲醇中，然后用氨的甲醇溶液(7M)将pH值调节至pH＝8。过滤后，在真空下浓缩滤液。利用制备型HPLC(Xbridge C18，19×15mm，5μm；10mmol NH₄HCO₃水:CH₃CN(在7min内由28％增加至43％))，以得到2-[[6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-甲基-螺[5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-4,1'-环丙烷]-7-酮(13.8mg,0.03mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝458.2；¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ9.19(s,1H),8.99(s,1H),8.02(s,1H),7.88(s,1H),7.82(d,J＝9.9Hz,1H),7.72(d,J＝9.9Hz,1H),7.70(s,1H),5.62(s,1H),5.28(s,2H),5.08(s,2H),3.73(s,2H),2.99(s,3H),1.92(s,3H),1.24-1.17(m,2H),0.97-093(m,2H)。

实例103

2-[[6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-8-氯-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-甲基-螺[5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-4,1'-环丙烷]-7-酮(化合物112)

第1步：N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-7-氟-3-[(6-甲基-7-氧代-螺[5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-4,1'-环丙烷]-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯

将N-[5-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁酯(90mg,0.18mmol)、2-溴-6-甲基-螺[5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-4,1'-环丙烷]-7-酮(50mg,0.19mmol)、t-BuBrettphos Pd G3(63mg,0.07mmol)、t-Bubrettphos(45.0mg,0.09mmol)、碳酸铯(181.0mg,0.56mmol)的1,4-二噁烷(6mL)溶液在130℃下搅拌1小时。在真空下浓缩所得混合物。利用硅胶快速层析法纯化残余物，用甲醇/二氯甲烷(4/96)进行洗脱，以得到N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-7-氟-3-[(6-甲基-7-氧代-螺[5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-4,1'-环丙烷]-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(58mg，产率45％)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝694.3。

步骤2：2-[[6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-8-氯-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-甲基-螺[5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-4,1'-环丙烷]-7-酮

将N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-7-氟-3-[(6-甲基-7-氧代-螺[5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-4,1'-环丙烷]-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(105.0mg,0.15mmol)和2,2,2-三氟乙酸(1.0mL)的二氯甲烷(1mL)溶液在25℃下搅拌1h。将残余物重新溶于甲醇中，然后用氨的甲醇溶液(7M)将pH调节至8。过滤后，在真空下浓缩滤液。利用制备型HPLC(Xbridge C18 19×150；CH₃CN/10mmol/L NH₄HCO₃水溶液＝30％-48％；7min，25mL/min)纯化粗产物，以得到2-[[6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-8-氯-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-甲基-螺[5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-4,1'-环丙烷]-7-酮(1.5mg,1.9％)。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝492.2；¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ9.45(s,1H),9.19(s,1H),8.04(s,1H),7.94(s,1H),7.77(d,J＝6.0Hz,1H),7.72(s,1H),5.65(s,1H),5.33(s,2H),5.09(s,2H),3.74(s,2H),2.99(s,3H),1.92(s,3H),1.19-1.17(m,2H),0.98-0.96(m,2H)。

实例104

2-((6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-4,6-二甲基-5,6-二氢-4H,8H-吡唑并[5,1-e][1,2,6]噻二氮杂卓7,7-二氧化物(化合物113)

第1步：1-溴-N-甲基甲磺酰胺

将甲基胺(1.94mL,3.88mmol)和溴代甲烷磺酰氯(500.0mg,2.58mmol)的四氢呋喃(10mL)溶液在25℃下搅拌2h。将反应溶液用二氯甲烷(40mL)稀释，然后用水(10mL)洗涤。将有机层用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液，以得到1-溴-N-甲基-甲磺酰胺(400mg,2.13mmol)，其为白色固体。LCMS(ESI,m/z)[M+H]⁺＝188。

第2步：1-(3,5-二溴吡唑-1-基)-N-甲基-甲磺酰胺

将1-溴-N-甲基-甲磺酰胺(200mg,1.06mmol)、3,5-二溴-1H-吡唑(240.24mg,1.06mmol)和碳酸钾(220.17mg,1.6mmol)的乙腈(10mL)溶液在80℃下搅拌12h。过滤后，在真空下浓缩滤液，以得到1-(3,5-二溴吡唑-1-基)-N-甲基-甲磺酰胺(300mg,0.90mmol)，其为无色油状物。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝332。

步骤3：N-烯丙基-1-(3,5-二溴吡唑-1-基)-N-甲基-甲磺酰胺

将1-(3,5-二溴吡唑-1-基)-N-甲基-甲磺酰胺(200mg,0.60mmol)、烯丙基溴(145.32mg,1.2mmol)和碳酸钾(165.77mg,1.2mmol)的乙腈(10mL)溶液在25℃下搅拌12h。在真空下浓缩溶剂。利用反相色谱(乙腈0-50/0.1％NH₃水溶液)纯化残余物，以得到N-烯丙基-1-(3,5-二溴吡唑-1-基)-N-甲基-甲磺酰胺(200mg,0.54mmol)，其为无色油状物。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝372。

步骤4：2-溴-6-甲基-4-亚甲基-5,8-二氢吡唑并[5,1-e][1,2,6]噻二氮杂卓7,7-二氧化物

在氮气气氛下，将[N-烯丙基-1-(3,5-二溴吡唑-1-基)-N-甲基-甲磺酰胺(200mg,0.54mmol)、四丁基溴化铵(172.63mg,0.54mmol)、乙酸钯(12.01mg,0.05mmol)、三苯基膦(28.09mg,0.11mmol)和乙酸钾(157.62mg,1.61mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(2mL)溶液在90℃下搅拌12h。将反应混合物用水稀释。将所得溶液用乙酸乙酯萃取，并且用无水硫酸钠进行干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。利用硅胶快速层析法纯化残余物，用EA/PE(1/4)进行洗脱，以得到2-溴-6-甲基-4-亚甲基-5,8-二氢吡唑并[5,1-e][1,2,6]噻二氮杂卓7,7-二氧化物(90mg,0.31mmol)，其为无色油状物。LCMS(ESI，m/z)：[M+H]⁺＝292。

第5步：N-叔丁氧基羰基-N-[5-[7-氟-3-[(6-甲基-4-亚甲基-7,7-二氧代-5,8-二氢吡唑并[5,1-e][1,2,6]噻二氮杂卓-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯

在氮气气氛下，将2-溴-6-甲基-4-亚甲基-5,8-二氢吡唑并[5,1-e][1,2,6]噻二氮杂卓7,7-二氧化物(200mg,0.68mmol)、N-[5-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁酯(309.89mg,0.62mmol)、t-BuBrettphos(165.67mg,0.34mmol)、t-BuBrettphos G3(233.85mg,0.27mmol)和碳酸铯(557.93mg,1.71mmol)与1,4-二噁烷(15mL)混合物在120℃下搅拌1h。过滤后，在真空下浓缩滤液。利用硅胶快速层析法纯化残余物，用乙酸乙酯/石油醚(4/1)进行洗脱，以得到N-叔丁氧基羰基-N-[5-[7-氟-3-[(6-甲基-4-亚甲基-7,7-二氧代-5,8-二氢吡唑并[5,1-e][1,2,6]噻二氮杂卓-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(60mg,0.088mmol)，其为棕色固体。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝680。

第6步：N-叔丁氧基羰基-N-[5-[3-[(4,6-二甲基-7,7-二氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[5,1-e][1,2,6]噻二氮杂卓-2-基)氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯

在氢气气氛下，将N-叔丁氧基羰基-N-[5-[7-氟-3-[(6-甲基-4-亚甲基-7,7-二氧代-5,8-二氢吡唑并[5,1-e][1,2,6]噻二氮杂卓-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(60.0mg,0.09mmol)和Raney镍(10.0mg)的甲醇(10mL)溶液在25℃下搅拌5h。过滤后，在真空下浓缩滤液，以得到N-叔丁氧基羰基-N-[5-[3-[(4,6-二甲基-7,7-二氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[5,1-e][1,2,6]噻二氮杂卓-2-基)氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(50mg,0.073mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝682。步骤7：N-[6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-异喹啉基]-4,6-二甲基-7,7-二氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[5,1-e][1,2,6]噻二氮杂卓-2-胺

将N-叔丁氧基羰基-N-[5-[3-[(4,6-二甲基-7,7-二氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[5,1-e][1,2,6]噻二氮杂卓-2-基)氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(60mg,0.09mmol)和2,2,2-三氟乙酸(1mL,1.76mmol)的二氯甲烷(2mL)溶液在25℃下搅拌2h。将残余物重新溶于甲醇中，然后用氨的甲醇溶液(7M)将pH调节至8。利用反相色谱(乙腈0-40％/0.1％NH₃水溶液)纯化所得残余物，以得到N-[6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-异喹啉基]-4,6-二甲基-7,7-二氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[5,1-e][1,2,6]噻二氮杂卓-2-胺(12.2mg,0.025mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝482；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.42(s,1H)9.03(s,1H)8.03(s,2H)7.84-7.82(m,1H)7.70(s,2H)6.19-6.02(m,2H)5.50-5.28(m,3H),3.58-3.56(m,2H)3.28-3.21(m,1H)3.05(s,3H),1.92(s,3H)1.26(s,3H)。

实例105

2-((8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基)-7-甲基-6,7-二氢-5H-咪唑并[1,2-d][1,4]二氮杂卓-8(9H)-酮(化合物114)

第1步：2-[叔丁氧基羰基(甲基)氨基]乙基甲磺酸酯

在氮气气氛和0℃下，向(2-羟基乙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(6.0g,34.24mmol)和三乙胺(6.92g,68.48mmol)的二氯甲烷(100mL)溶液中逐滴加入甲磺酰氯(4.68g,41.09mmol)。将反应混合物在0℃下搅拌1h。将所得溶液用水(3×20mL)洗涤。将有机相用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液，以得到2-[叔丁氧基羰基(甲基)氨基]乙基甲磺酸酯(8g，31.58mmol，产率92.2％)，其为无色油状物。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝254。

步骤2：N-[2-(4-溴-2-甲基-咪唑并-1-基)乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯

在氮气气氛和0℃下，向5-溴-2-甲基-1H-咪唑(5.0g,31.06mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(100mL)溶液中分批加入氢化钠(1.12g,46.58mmol,60％)。在加入2-[叔丁氧基羰基(甲基)氨基]乙基甲磺酸酯(8.0g,31.58mmol)之前，将反应混合物在0℃下搅拌30min。将反应混合物在室温下搅拌12h。将反应混合物用水(1mL)淬灭，并且用水(100mL)进一步稀释。将所得溶液用乙酸乙酯(3×100mL)进行萃取。将有机层混合，并且用无水硫酸钠使其干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。利用反相色谱(C18，乙腈0-40％/0.1％NH₃H₂O水溶液)纯化残余物，以得到N-[2-(4-溴-2-甲基-咪唑并-1-基)乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(6g,18.86mmol)，其为无色油状物。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝318。

第3步：2-[4-溴-1-[2-[叔丁氧基羰基(甲基)氨基]乙基]咪唑并-2-基]乙酸甲酯

在氮气气氛和-70℃下，向N-[2-(4-溴-2-甲基-咪唑并-1-基)乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(2.0g,6.29mmol)和碳酸二甲酯(2.83g,31.43mmol)的四氢呋喃(100mL)溶液中逐滴加入LDA(7.54mL,18.86mmol,2.5mol/L)。将所得溶液在-70℃至-30℃下搅拌2h，然后用水(1mL)使其淬灭。将所得溶液在真空下浓缩，并且利用反相色谱(C18，乙腈0-40％/0.1％NH₃水溶液)进行纯化，以得到2-[4-溴-1-[2-[叔丁氧基羰基(甲基)氨基]乙基]咪唑并-2-基]乙酸甲酯(400mg,1.06mmol)，其为无色固体。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝376。

第4步：2-[4-溴-1-[2-(甲基氨基)乙基]咪唑并-2-基]乙酸甲酯

将2-[4-溴-1-[2-[叔丁氧基羰基(甲基)氨基]乙基]咪唑并-2-基]乙酸甲酯(400mg,1.06mmol)和2,2,2-三氟乙酸(1mL,1.06mmol)的二氯甲烷(3mL)溶液在25℃下搅拌2h。将反应混合物在真空下浓缩，以得到2-[4-溴-1-[2-(甲基氨基)乙基]咪唑并l-2-基]乙酸甲酯(250mg，粗产物)，其为无色固体。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝276。

第5步：2-溴-7-甲基-6,9-二氢-5H-咪唑并[1,2-d][1,4]二氮杂卓-8-酮

将2-[4-溴-1-[2-(甲基氨基)乙基]咪唑并-2-基]乙酸甲酯(250mg，粗产物)和三乙胺(914.42mg,9.05mmol)的甲醇(10mL)溶液在25℃下搅拌12h。将反应混合物在真空下浓缩，并且利用反相色谱(乙腈0-40％/0.1％NH₃水溶液)进行纯化，以得到2-溴-7-甲基-6,9-二氢-5H-咪唑并[1,2-d][1,4]二氮杂卓-8-酮(160mg,0.66mmol)，其为无色油状物。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝244。

第6步：2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]氨基]-7-甲基-6,9-二氢-5H-咪唑并[1,2-d][1,4]二氮杂卓-8-酮

在氮气气氛下，将2-溴-7-甲基-6,9-二氢-5H-咪唑并[1,2-d][1,4]二氮杂卓-8-酮(50mg,0.20mmol)、8-氯-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)异喹啉-3-胺(47.15mg,0.16mmol)、t-BuBrettPhos G3(69.97mg,0.08mmol)、t-BuBrettPhos(49.67mg,0.10mmol)和碳酸铯(200mg,0.61mmol)与1,4-二噁烷(6mL)的混合物在120℃下搅拌3h。过滤后，在真空下浓缩滤液。利用反相色谱(乙腈，0-40％/0.1％NH₄HCO₃水溶液)纯化残余物，以得到2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]氨基]-7-甲基-6,9-二氢-5H-咪唑并[1,2-d][1,4]二氮杂卓-8-酮(5.7mg,0.013mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝451；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.35(s,1H),9.22(s,1H),8.55(d,J＝5.2Hz,1H),8.49(s,1H)7.72(s,1H)7.45(s,1H),7.32(s,1H),7.15(s,1H),4.15-4.09(m,2H),4.05-3.98(m,2H),3.90(s,2H),2.96(s,3H),2.22(s,3H)。

实例106

2-((8-氯-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮(化合物115)

第1步：7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-羧酸叔丁酯

将8-氯-7-氟-6-碘-异喹啉-3-胺(1.14g,3.54mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(518.19mg,0.71mmol)、碳酸钾(1.47g,10.62mmol)和8-甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-羧酸叔丁酯(2.0g,5.32mmol)与1,4-二噁烷(20mL)和水(4mL)的混合物在90℃下搅拌1h。过滤后，在真空下浓缩滤液。利用硅胶快速层析法纯化残余物，用PE/EA(3/1)进行洗脱，以得到7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-羧酸叔丁酯(1.5g,3.37mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝445。

第2步：7-[8-氯-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-羧酸叔丁酯

将7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-羧酸叔丁酯(50mg,0.11mmol)、2-溴-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮(36.7mg,0.13mmol)、t-BuBrettphos Pd G3(19.17mg,0.02mmol)、t-BuBrettphos(25.98mg,0.04mmol)和碳酸铯(109.85mg,0.34mmol)与1,4-二噁烷(10mL)的混合物在120℃下搅拌1h。该反应重复进行四次，然后过滤合并的批次，并且在真空下浓缩。利用硅胶快速层析法纯化残余物，用二氯甲醇/甲醇(20/1)进行洗脱，以得到7-[8-氯-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-羧酸叔丁酯(150mg,0.024mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝517.24。

第3步：2-((8-氯-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮

将7-[8-氯-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-羧酸叔丁酯(150mg,0.024mmol)和2,2,2-三氟乙酸(2mL)的二氯甲烷(4mL)溶液在25℃下搅拌1h。将反应混合物在真空下浓缩。将残余物重新溶于甲醇中，然后用氨的甲醇溶液(7M)将pH值调节至pH＝8。过滤后，在真空下浓缩滤液。利用硅胶快速层析法纯化残余物，用二氯甲醇/甲醇(20/1)进行洗脱，以得到2-((8-氯-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮(30mg,0.056mmol)，其为黄色固体。

实例107

2-((7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮(化合物116)

第1步：7-溴-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-羧酸叔丁酯

在0℃下，向7-溴-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪(1g,4.37mmol)的四氢呋喃(2mL)溶液中逐滴加入LiHMDS(8.73mL,8.73mmol,1mol/L)。将所得溶液在氮气保护下在0℃下搅拌0.5h。然后加入二碳酸二叔丁酯(2.85g,13.07mmol)，并且将反应物在室温下搅拌2h。将反应用甲醇(50mL)淬灭。将反应混合物在真空下浓缩。利用硅胶快速层析法纯化残余物(乙酸甲酯/石油醚，1/4)，以得到7-溴-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-羧酸叔丁酯(800mg,2.43mmol)，其为黄色油状物。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝329.2。

第2步：8-甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-羧酸叔丁酯

在氮气气氛下，将7-溴-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-羧酸叔丁酯(6.2g,18.83mmol)、双(频那醇酯合)二硼(23.93g,94.22mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(2.76g,3.77mmol)和乙酸钾(5.55g,56.62mmol)与1,4-二噁烷(2mL)的混合物在90℃下搅拌2.5h。将反应混合物在真空下浓缩。利用硅胶快速层析法纯化残余物，用乙酸乙酯/石油醚(30％)进行洗脱，以得到8-甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-羧酸叔丁酯(5g,13.29mmol)，其为黄色油状物。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝376.3。

第3步：7-(3-氨基-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-羧酸叔丁酯

在氮气气氛下，将8-甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-羧酸叔丁酯(160mg,0.43mmol)、6-溴-7-氟-异喹啉-3-胺(80mg,0.33mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(41.14mg,0.06mmol)和碳酸钠(91.43mg,0.86mmol)与1,4-二噁烷(1mL)/水(0.2mL)的混合物在100℃下搅拌12h。将反应混合物在真空下浓缩。利用硅胶快速层析法纯化残余物，用EA/PE(30％)进行洗脱，以得到7-(3-氨基-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-羧酸叔丁酯(100mg,0.24mmol)，其为黄色油状物。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝411.2。第4步：7-[7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-羧酸叔丁酯

将7-(3-氨基-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-羧酸叔丁酯(200mg,0.49mmol)、2-溴-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮(200mg,0.73mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(100mg,0.10mmol)、9,9-二甲基-4,5-双(二苯基膦基)氧杂蒽(120mg,0.21mmol)和碳酸铯(500mg,1.53mmol)与1,4-二噁烷(10mL)的混合物在100℃下搅拌3h。将反应混合物在真空下浓缩。利用硅胶快速层析法纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(20/1)进行洗脱，以得到7-[7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-羧酸叔丁酯(300mg,0.50mmol)，其为棕色油状物。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝601.7。

第5步：2-[[7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮

将7-[7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-羧酸叔丁酯(300mg,0.50mmol)与二氯甲烷(5mL)和2,2,2-三氟乙酸(5mL)的混合物在25℃下搅拌3h。将反应混合物在真空下浓缩。将残余物重新溶于甲醇中，然后用氨的甲醇溶液(7M)将pH值调节至pH＝8。利用制备型HPLC(Atlantis HILIC OBD，19×150mm×5μm；水(0.1％FA):CH₃CN(在10min由22％增加至30％))，以得到2-[[7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮(22.5mg,0.045mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝501；¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ9.24(s,1H),8.93(s,1H),7.90(s,1H),7.79(d,J＝10.2Hz,1H),7.68(d,J＝10.2Hz,1H),7.38(s,1H),5.98(s,1H),5.70(s,1H),4.98(s,2H),4.61-4.57(m,1H),4.31-4.29(m,2H),3.79-3.77(m,2H),3.34-3.32(m,2H),3.30-2.98(m,2H),1.93(d,J＝1.9Hz,3H),1.13(d,J＝6.9Hz,6H)。

实例108

2-((6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-8-氯异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮(化合物117)

第1步：N-[5-(3-氨基-8-氯-6-异喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁酯

将N-叔丁氧基羰基-N-[4-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(927.66mg,2.14mmol)、6-溴-8-氯-异喹啉-3-胺(500mg,1.94mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(141.94mg,0.19mmol)、碳酸钾(803.85mg,5.83mmol)与1,4-二噁烷(10mL)和水(1mL)的混合物在90℃下搅拌8h。将反应混合物在真空下浓缩。利用硅胶快速层析法纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(15/1)进行洗脱，以得到N-[5-(3-氨基-8-氯-6-异喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁酯(500mg,1.03mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝485。

第2步：N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯

将N-[5-(3-氨基-8-氯-6-异喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁酯(120mg,0.25mmol)、2-溴-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮(101mg,0.37mmol)、tBuBrettphospd G3(84.52mg,0.10mmol)、tBuBrettphos(60mg,0.12mmol)和碳酸铯(241.99mg,0.74mmol)的1,4-二噁烷(6mL)溶液在130℃下搅拌1.5小时。将反应混合物在真空下浓缩。利用硅胶快速层析法纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(10/1)进行洗脱，以得到N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(82mg,0.12mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝676。第3步：2-[[6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-8-氯-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮

将N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(120mg,0.18mmol)和2,2,2-三氟乙酸(1.0mL,0.18mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液在20℃下搅拌1小时。将反应混合物在真空下浓缩。将残余物重新溶于甲醇中，然后用氨的甲醇溶液(7M)将pH值调节至pH＝8。过滤后，在真空下浓缩滤液。利用制备型HPLC(Atlantis HILICOBD，19×150mm，5μm；10mmol NH₄HCO₃水溶液:CH₃CN(在9min内由18％增加至43％)，以得到2-[[6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-8-氯-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮(80mg,0.17mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝476；¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ9.24(s,1H),9.00(s,1H),7.98-7.93(m,2H),7.85(s,1H),7.71(s,1H),7.61(s,1H),7.24-7.21(m,1H),6.01(s,1H),5.23(s,2H),4.99(s,2H),4.64-4.55(m,1H),3.80-3.76(m,2H),3.01-2.97(m,2H),2.02(s,3H),1.13(d,J＝6.9Hz,6H)。

实例109

2-((6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7,8-二氟异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮(化合物118)

第1步：2,3-二氟-4-碘苯甲腈

在氮气气氛下，将亚硝酸叔丁酯(6.48mL,54.5mmol)和碘化亚铜(I)(0.69mL,20.44mmol)与乙腈(50mL)的混合物在65℃下搅拌10min。然后加入4-氨基-2,3-二氟-苯甲腈(2.1g,13.63mmol)，并且将混合物在65℃下搅拌6h。将反应溶液冷却至室温，然后通过加入硫代硫酸钠(1M,30mL)使反应淬灭。将所得溶液用乙酸乙酯(3×100mL)萃取，并且用无水硫酸钠进行干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。利用硅胶快速层析法纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(5/1)进行洗脱，以得到2,3-二氟-4-碘-苯甲腈(2.2g,8.30mmol)，其为黄色固体。GCMS M⁺：265.

步骤2：(2,3-二氟-4-碘苯基)甲胺

在氮气气氛和0℃下，向2,3-二氟-4-碘-苯甲腈(2.2g,8.30mmol)的四氢呋喃(30mL)溶液中加入硼烷-四氢呋喃络合物(83mL，83mmol，1M的THF溶液)。将反应混合物在室温下搅拌12h，然后加入盐酸溶液(20mL，6M水溶液)使反应淬灭。将所得溶液用二氯甲烷(3×100mL)萃取，并且用无水硫酸钠进行干燥。过滤后，将滤液在真空下浓缩，以得到(2,3-二氟-4-碘苯基)甲胺(0.84g，粗产物)，其直接用于下一步而不经进一步纯化。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝270。

第3步：2,2-二乙氧基乙酰亚胺酸甲酯

向二乙氧基乙腈(5g,38.75mmol)的甲醇(40mL)溶液中加入乙醇钠(0.42g,7.75mmol)。将反应物在室温下搅拌3h。将所得溶液在真空下浓缩，然后将残余物用二氯甲烷(100mL)稀释，并且用水(20mL)进行洗涤。将有机相用无水硫酸钠干燥。过滤后，将滤液在真空下浓缩，以得到2,2-二乙氧基乙酰亚胺甲酯(4.8g，粗产物)，其为黄色油状物。将粗产物直接用于下一步而不经纯化。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝162。

步骤4：N-(2,3-二氟-4-碘苄基)-2,2-二乙氧基乙脒

向(2,3-二氟-4-碘-苯基)甲胺(0.84g，粗产物)的甲醇(14mL)溶液中加入2,2-二乙氧基乙酰亚胺甲酯(2.01g,12.49mmol)。将混合物在室温下搅拌12h。将所得溶液用二氯甲烷(100mL)稀释，然后用盐水(50mL)进行洗涤。将有机层用无水硫酸钠干燥。过滤后，将滤液在真空下浓缩，以得到N-[(2,3-二氟-4-碘-苯基)甲基]-2,2-二乙氧基-乙脒(910mg，粗产物)，其为黄色固体。将粗产物直接用于下一步而不经进一步纯化。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝399。

第5步：7,8-二氟-6-碘异喹啉-3-胺

将N-[(2,3-二氟-4-碘-苯基)甲基]-2,2-二乙氧基-乙脒(910.0mg，粗产物)与浓硫酸(10mL)的混合物在60℃下搅拌2h。将反应混合物冷却至室温，然后将其倒在冰(10mL)上。用氢氧化钠溶液(5重量％)将所得溶液的pH调节至8。将所得溶液用二氯甲烷(3×100mL)萃取，并且用无水硫酸钠进行干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。利用硅胶快速层析法纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(1/1)进行洗脱，以得到7,8-二氟-6-碘异喹啉-3-胺(500mg,1.63mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝307。

第6步：N-[5-(3-氨基-7,8-二氟-6-异喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁酯

向7,8-二氟-6-碘-异喹啉-3-胺(300.0mg,0.98mmol)和N-叔丁氧基羰基-N-[4-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(638.62mg,1.47mmol)与1,4-二噁烷(10mL)和水(1mL)的混合物中加入[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(110.26mg,0.20mmol)和碳酸钾(405mg,2.94mmol)。将混合物在80℃下搅拌3h。将所得混合物冷却至室温，然后在真空下浓缩。利用硅胶快速层析法纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(1/1)进行洗脱，以得到N-[5-(3-氨基-7,8-二氟-6-异喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁酯(230mg,0.46mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝487.5。

第7步：N-叔丁氧基羰基-N-[5-[7,8-二氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯

在氮气气氛下，向N-[5-(3-氨基-7,8-二氟-6-异喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N-(叔丁氧基甲基)氨基甲酸叔丁酯(225.0mg,0.46mmol)的1,4-二噁烷(10mL)溶液中加入2-溴-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮(187.99mg,0.69mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(84.34mg,0.09mmol)、4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基氧杂蒽(106mg,0.184mmol)和碳酸铯(452.93mg,1.38mmol)。将反应混合物在100℃下搅拌4h。将所得混合物冷却至室温，然后在真空下浓缩。利用硅胶快速层析法纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(20/1)进行洗脱，以得到N-叔丁氧基羰基-N-[5-[7,8-二氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(171mg,0.25mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI,m/z)[M+H]⁺＝678.7。

第8步：2-[[6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-7,8-二氟-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮

向N-叔丁氧基羰基-N-[5-[7,8-二氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(171.25mg,0.21mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液中加入2,2,2-三氟乙酸(2mL)。将混合物在室温下搅拌1h。将残余物重新溶于甲醇中，然后用氨的甲醇溶液(7M)将pH值调节至8。将所得溶液在真空下浓缩。利用制备型HPLC(XBridge Shield RP18 OBD，5μm，19×150mm；10mmol/L NH₄HCO₃水溶液/CH₃CN(在7min内由20％增加至40％)，25ml/min)，以得到2-[[6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-7,8-二氟-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮(24.9mg,0.052mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝478.5；¹HNMR(300MHz,DMSO-d₆)δ9.49(s,1H),9.18(s,1H),8.04(s,1H),7.97(s,1H),7.72(s,1H),7.57(d,J＝6.9Hz,1H),6.00(s,1H),5.33(s,2H),5.00(s,2H),4.65-4.54(m,1H),3.79-3.77(m,2H),3.01-2.99(m,2H),1.95(s,3H),1.13(d,J＝6.9Hz,6H)。

实例110

2-((6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮(化合物119)

第1步：N-叔丁氧基羰基-N-[5-[7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯

在氮气气氛下，向N-[5-(3-氨基-7-氟-6-异喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁酯(200mg,0.43mmol)的1,4-二噁烷(1mL)溶液中加入2-溴-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮(140mg,0.51mmol)、tBuBretphospG3(146mg,0.17mmol)、tBuBretphos(100mg,0.21mmol)和Cs₂CO₃(420mg,1.29mmol)。将反应混合物在120℃下搅拌1h，然后冷却至室温。将所得混合物在真空下浓缩。利用硅胶快速层析法纯化残余物，用甲醇/二氯甲烷(1/10)进行洗脱，以得到N-叔丁氧基羰基-N-[5-[7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(200mg,0.30mmol)]，其为棕色油状物。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝659.8。

第2步：2-((6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮

将N-叔丁氧基羰基-N-[5-[7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(200mg,0.30mmol)和2,2,2-三氟乙酸(1mL,0.30mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液在25℃下搅拌2小时。将残余物重新溶于甲醇中，然后用氨的甲醇溶液(7M)将pH值调节至8。利用制备型HPLC(Atlantis HILIC OBD色谱柱，19×150mm×5μm；水(10mmol/L NH₄HCO₃):CH₃CN(在7min内由10％增加至60％))，以得到[2-[[6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮(45.7mg,0.10mmol)，其为有色固体。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝459；¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ9.25(s,1H),8.99(s,1H),8.01(s,1H),7.92(s,1H),7.82(d,J＝10.2Hz,1H),7.71-7.69(m,2H),5.98(s,1H),5.27(s,2H),4.98(s,2H),4.61-4.57(m,1H),3.78-3.76(m,2H),3.00-2.97(m,2H),1.92(s,3H),1.13(d,J＝6.9Hz,6H)。

实例111

2-((6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-5,5,6-三甲基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮(化合物120)

第1步：2-(3,5-二溴吡唑-1-基)乙腈

将3,5-二溴-1H-吡唑(1.0g,4.43mmol)和碳酸钾(1.22g,8.85mmol)与N,N-二甲基甲酰胺(20mL)的混合物在25℃下搅拌10min。加入溴乙腈(796.59mg,6.64mmol)，然后将反应混合物在25℃下搅拌2h。过滤后，将滤液用乙酸乙酯(30mL)稀释，然后用水洗涤。将有机相用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。利用硅胶快速层析法纯化残余物，用石油醚/二氯甲醇(1/1)进行洗脱，以得到2-(3,5-二溴吡唑-1-基)乙腈(950mg,3.59mmol)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝264。

第2步：2-[3-溴-5-(2-甲基丙-1-烯基)吡唑-1-基]乙腈

第3步：2-溴-5,5-二甲基-6,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮

第4步：2-溴-5,5,6-三甲基-4,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮

步骤5：N-叔丁氧基羰基-N-[5-[7-氟-3-[(5,5,6-三甲基-7-氧代-4,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯

在氮气气氛下，将2-溴-5,5,6-三甲基-4,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮(70mg,0.26mmol)、N-[5-(3-氨基-7-氟-6-异喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁酯(120.51mg,0.26mmol)、t-BuBrettPhos-Pd-G3(87.87mg,0.10mmol)、t-BuBrettPhos(62.38mg,0.13mmol)和碳酸铯(251.56mg,0.77mmol)与1,4-二噁烷(10mL)的混合物在120℃下搅拌2h。过滤后，在真空下浓缩滤液。利用硅胶快速层析法纯化残余物，用乙酸乙酯/石油醚(95/5)进行洗脱，以得到N-叔丁氧基羰基-N-[5-[7-氟-3-[(5,5,6-三甲基-7-氧代-4,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(30mg,0.046mmol)，其为棕色固体。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝660。

步骤6：2-[[6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-5,5,6-三甲基-4,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮甲酸盐

将N-叔丁氧基羰基-N-[5-[7-氟-3-[(5,5,6-三甲基-7-氧代-4,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(30mg,0.05mmol)和2,2,2-三氟乙酸(1mL,0.05mmol)的二氯甲烷(3mL)溶液在25℃下搅拌2h。将反应混合物在真空下浓缩。将残余物重新溶于甲醇中，然后用氨的甲醇溶液(7M)将pH值调节至pH＝8。过滤后，在真空下浓缩滤液。利用反相HPLC(乙腈0-40％/0.1％甲酸水溶液)纯化残余物，以得到2-[[6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-5,5,6-三甲基-4,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮甲酸盐(7.4mg,0.015mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝460；¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ8.94(s,1H),8.04(s,1H),7.82-7.78(m,2H),7.69-7.67(m,2H),6.15(s,1H),5.21(s,2H),3.24(s,2H),2.98(s,3H),2.07(s,3H),1.40(s,6H)。

实例112

2-((6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟-8-甲基异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮(化合物121)

第1步：7-[7-氟-3-[(6-甲基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-羧酸叔丁酯

在氮气气氛下，将N-[5-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁酯(100mg,0.20mmol)、2-溴-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮(50mg,0.18mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(75mg,0.07mmol)、9,9-二甲基-4,5-双(二苯基膦基)氧杂蒽(85mg,0.15mmol)和碳酸铯(360mg,1.1mmol)与1,4-二噁烷(10mL)的混合物在100℃下搅拌3h。将反应混合物在真空下浓缩。利用硅胶快速层析法纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(95/5)进行洗脱，以得到7-[7-氟-3-[(6-甲基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-羧酸叔丁酯(61mg,0.088mmol)，其为棕色油状物。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝694.2。

第2步：N-叔丁氧基羰基-N-[5-[7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-2-基)氨基]-8-甲基-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯

在氮气气氛下，将三甲基环三硼氧烷(61mg,0.07mmol)、N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(60mg,0.12mmol)、四(三苯基膦)钯(14mg,0.012mmol)和碳酸钾(50mg,0.36mmol)与1,4-二噁烷(10mL)和水(2.5mL)的混合物在100℃下搅拌12h。将反应混合物在真空下浓缩。利用硅胶快速层析法纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(95/5)进行洗脱，以得到N-叔丁氧基羰基-N-[5-[7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-2-基)氨基]-8-甲基-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(60mg,0.089mmol)，其为棕色油状物。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝673.8。

第3步：2-[[6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-8-甲基-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮

将N-叔丁氧基羰基-N-[5-[7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-2-基)氨基]-8-甲基-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(80mg,0.12mmol)和2,2,2-三氟乙酸(2mL,0.12mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液在25℃下搅拌3h。用氨的甲醇溶液(7M)将反应混合物的pH调节至7。将反应混合物在真空下浓缩。利用反相HPLC纯化残余物，以得到[2-[[6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-8-甲基-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮(11.7mg,0.023mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝473；¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ9.23(s,1H),9.12(s,1H),8.00(s,1H),7.88(s,1H),7.67(s,1H),7.51(d,J＝7.1Hz,1H),5.98(s,1H),5.25(s,2H),4.96(s,2H),4.62-4.54(m,1H),3.78-3.76(m,2H),3.00-2.97(m,2H),2.59(s,3H),1.89(s,3H),1.10(d,J＝6.8Hz,6H)。

实例113

6-异丙基-2-[[6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]氨基]-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮(化合物122)

第1步：2-((8-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮

将8-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-胺(120mg,0.44mmol)、2-溴-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮(101mg,0.37mmol)、tBuBrettphospd G3(84.52mg,0.10mmol)、tBuBrettphos(60mg,0.12mmol)和碳酸铯(241.99mg,0.74mmol)与1,4-二噁烷(6mL)的混合物在120℃下搅拌1.5h。将反应混合物在真空下浓缩，并且利用硅胶快速层析法进行纯化，用乙酸乙酯/石油醚(1/1)进行洗脱，以得到2-((8-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮(82mg,0.18mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝461。

第2步：6-异丙基-2-[[6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]氨基]-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮

将2-[[8-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮(40mg,0.09mmol)、硼氢化钠(16.49mg,0.43mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(12.67mg,0.02mmol)和TMEDA(80.53mg,0.69mmol)与四氢呋喃(6mL)的混合物在25℃下搅拌1.5h。将反应混合物在真空下浓缩。利用硅胶快速层析法纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(15/1)进行洗脱，以得到6-异丙基-2-[[6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]氨基]-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮(10.8mg,0.025mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝427；¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ9.28(s,1H),9.03(s,1H),8.48(t,J＝2.5Hz,2H),8.00(d,J＝8.4Hz,1H),7.90(s,1H),7.72(s,1H),7.39-7.30(m,2H),6.01(s,1H),4.99(s,2H),4.65-4.56(m,1H),3.79(t,J＝5.2Hz,2H),2.99(t,J＝5.2Hz,2H),2.33(s,3H),1.12(d,J＝6.6Hz,6H)。

实例114

7-[7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-2-酮(化合物123)

第1步：7-(3-氨基-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-2-酮

在氮气气氛下，将7-氟-6-碘异喹啉-3-胺(149mg,0.52mmol)、Pd(dppf)C_l2(76mg,0.10mmol)、碳酸钾(215.6mg,1.56mmol)和8-甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-2-酮(151mg,0.52mmol)与1,4-二噁烷(10mL)的混合物在80℃下搅拌2h。将反应混合物在真空下浓缩，并且利用硅胶柱进行纯化，用乙酸乙酯/石油醚(1:1)进行洗脱，以得到7-(3-氨基-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-2-酮(120mg,0.37mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝325.1。

步骤2：7-[7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-2-酮

将2-溴-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮(80.56mg,0.30mmol)、7-(3-氨基-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-2-酮(80mg,0.25mmol)、t-BuBrettphosPd G3(84.27mg,0.10mmol)、t-BuBrettphos(59.57mg,0.12mmol)和碳酸铯(241.25mg,0.74mmol)与1,4-二噁烷(8mL，超干)的混合物在130℃下搅拌1.5h。过滤后，将滤液在真空下浓缩，并且利用反相色谱(乙腈0-40％/0.1％NH₄HCO₃水溶液)进行纯化，以得到7-[7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-2-酮(19.4mg,0.038mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝516；¹H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.58(s,1H),9.28(s,1H),9.01(s,1H),7.93(s,1H),7.88-7.70(m,3H),5.99(s,1H),4.99(s,2H),4.82(s,2H),4.60(q,J＝6.7Hz,1H),3.81-3.77(m,2H),3.01-2.97(m,2H),2.11(s,3H),1.12(d,J＝6.8Hz,6H)。

实例115

2-((7-氟-6-(4-甲基哌嗪-1-羰基)异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮(化合物124)

第1步：3-氨基-8-氯-7-氟异喹啉-6-羧酸

将3-氨基-8-氯-7-氟-异喹啉-6-羧酸甲酯(240mg,0.94mmol)和LiOH(120mg,5.01mmol)与四氢呋喃(10mL)和水(1mL)的混合物在室温下搅拌16h。将所得混合物在真空下浓缩。将残余物重新溶于水(5mL)中。用1M HCl将所得溶液调节至pH 2。过滤后，收集固体，并且用水(2mL)洗涤，以得到3-氨基-8-氯-7-氟-异喹啉-6-羧酸(130mg,0.54mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝241.0。

步骤2：(3-氨基-8-氯-7-氟异喹啉-6-基)(4-甲基哌嗪-1-基)甲酮

向3-氨基-8-氯-7-氟-异喹啉-6-羧酸(130.0mg,0.54mmol)与N,N-二甲基甲酰胺(10mL)的混合物中加入1-甲基哌嗪(108.2mg,1.08mmol)、乙基二异丙基胺(139.4mg,1.08mmol)和HATU(246.5mg,0.65mmol)。将溶液在20℃下搅拌12h。将所得溶液在真空下浓缩。利用反相色谱在C18柱上纯化所得混合物(用水(含0.05％TFA)/ACN(在10min内由0增加至40％)进行洗脱)，以得到(3-氨基-7-氟-6-异喹啉基)-(4-甲基哌嗪-1-基)甲酮(150mg,0.52mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝323.0。

第3步：2-((8-氯-7-氟-6-(4-甲基哌嗪-1-羰基)异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮

在氮气气氛下，将(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-(4-甲基哌嗪-1-基)甲酮(150mg,0.46mmol)、2-溴-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮(270mg,0.99mmol)、tBubrettPhos Pb G3(210mg,0.25mmol)、tBubrettPhos(240mg,0.42mmol)和Cs₂CO₃(450mg,1.38mmol)与1,4-二噁烷(15mL)的混合物在120℃下搅拌1.5h。通过硅藻土垫过滤悬浮液。在真空下浓缩滤液。利用硅胶快速层析法纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(10/1)进行洗脱，以得到(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-(4-甲基哌嗪-1-基)甲酮(150mg,0.46mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝514.0。

第4步：2-((7-氟-6-(4-甲基哌嗪-1-羰基)异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮。

在氮气气氛下，将2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基哌嗪-1-羰基)-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮(85.0mg,0.17mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(34mg,0.05mmol)、TMEDA(255mg,1.58mmol)和硼氢化钠(26.15mg,0.69mmol)与四氢呋喃(8mL)的混合物在室温下搅拌1.5h。将所得溶液用乙腈和水(0.05mL)稀释。过滤后，在真空下浓缩滤液。利用硅胶快速层析法纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(10/1)进行洗脱，以得到粗产物(60mg)。利用反相色谱纯化粗产物(用水(含0.05％NH₄HCO₃)和乙腈(在10min内由0增加至50％)进行洗脱)，以得到2-[[7-氟-6-(4-甲基哌嗪-1-羰基)-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮(10.5mg，0.022mmol，产率13.2％)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝480.0；¹HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.31(s,1H),8.98(s,1H),7.93(s,1H),7.81(t,J＝7.2Hz,2H),5.97(s,1H),5.00(s,2H),4.65-4.56(m,1H),3.83-3.76(m,2H),3.73-3.66(m,2H),3.29-3.23(m,2H),3.04-2.97(m,2H),2.44-2.36(m,2H),2.30-2.23(m,2H),2.22(s,3H),1.14(d,J＝6.9Hz,6H)。

实例116

N-(6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)-5,6-二氢-11H-咪唑并[1,2-a]吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-8-胺(化合物125)

第1步：2-溴-4,5,6,8-四氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-硫酮

第2步：2-溴-N-(2,2-二乙氧基乙基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-胺

将2-溴-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-硫酮(265.0mg,1.07mmol)、2,2-二乙氧基乙-1-胺(1.42g,10.7mmol)和碳酸银(590mg,2.14mmol)与四氢呋喃(10mL)的混合物在80℃下搅拌1h。将反应混合物在真空下浓缩。利用反相色谱柱纯化残余物，用水(0.05％TFA)/CH₃CN(85/15)进行洗脱，以得到2-溴-N-(2,2-二乙氧基乙基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-胺(295mg,80％)，其为棕色油状物。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝345.0。

第3步：8-溴-5,6-二氢-11H-咪唑并[1,2-a]吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓

将2-溴-N-(2,2-二乙氧基乙基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-胺(228mg,0.66mmol)和浓盐酸(0.17mL,0.66mmol)的乙酸(5mL)溶液在80℃下搅拌1h。将反应混合物在真空下浓缩。利用反相色谱柱纯化残余物，用水(0.05％TFA)/ACN(85/15)进行洗脱，以得到8-溴-5,6-二氢-11H-咪唑并[1,2-a]吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓(150mg,89.7％)，其为棕色油状物。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝253.0。

第4步：N-叔丁氧基羰基-N-[5-[3-[(4,4-二氟-6-甲基-7-氧代-5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-2-基)氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯

将N-[5-(3-氨基-7-氟-6-异喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁酯(223.47mg,0.48mmol)、4,4-二氟-2-碘-6-甲基-5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮(130mg,0.40mmol)、tBuBrettphos Pd G3(135.78mg,0.16mmol)、tBuBrettphos(96.39mg,0.20mmol)和碳酸铯(388.72mg,1.19mmol)与1,4-二噁烷(20mL)的混合物在130℃下搅拌1h。将反应混合物在真空下浓缩。利用硅胶快速层析法纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(92/8)进行洗脱，以得到N-叔丁氧基羰基-N-[5-[3-[(4,4-二氟-6-甲基-7-氧代-5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-2-基)氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(85mg,32％)，其为棕色固体。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝641.3。

步骤5：N-(6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)-5,6-二氢-11H-咪唑并[1,2-a]吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-8-胺

向N-叔丁氧基羰基-N-[5-[3-(6,11-二氢-5H-咪唑并吡唑并[1,4]二氮杂卓-8-基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(80.0mg,0.12mmol)与二氯甲烷(5mL)的混合物中加入2,2,2-三氟乙酸(1.0mL)。将反应混合物在25℃下搅拌1h。将所得溶液在真空下浓缩。将残余物重新溶于甲醇中，然后用氨的甲醇溶液(7M)将pH值调节至pH＝8。过滤后，将滤液在真空下浓缩。利用制备型HPLC纯化残余物(Xbridge C18，19*150mm；水(10mmol/L NH₄HCO₃):CH₃CN(在7min内由17％增加至41％)，以得到N-(6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)-5,6-二氢-11H-咪唑并[1,2-a]吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-8-胺(22mg,40％)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝441；¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ9.29(s,1H),8.99(s,1H),8.02(s,1H),7.94(s,1H),7.81(d,J＝9.0Hz,1H),7.72–7.70(m,2H),7.21(s,1H),6.84(s,1H),6.06(s,1H),5.42(s,2H),5.27(s,2H),4.35(t,J＝6.0Hz,2H),3.24(t,J＝6.0Hz,2H),1.92(s,3H)。

实例117

2-((6-(5-氨基-4,6-二甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮(化合物126)和

2-((6-(5-氨基-4,6-二甲基吡啶-3-基)-7-氟-8-羟基异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮(化合物133)

步骤1：2-(5-溴-2-甲基-3-硝基吡啶-4-基)丙二酸二甲酯

在氮气气氛下，在不断搅拌的情况下，向丙二酸二甲酯(3.5mL,30mmol)的DMF(100mL)冰冷溶液(0℃)中加入氢化钠(60％，分散于矿物油中)(1.42g,35.5mmol)，其为固体。将混合物在0℃下搅拌30分钟，然后在10分钟内加入5-溴-2-氯-4-甲基-2-硝基-吡啶(5g,20mmol)。在0℃下搅拌30分钟后，将混合物在40℃下搅拌过夜。将反应混合物冷却至室温，并且在减压条件下浓缩，以得到红色固体，将其溶于乙酸乙酯(50mL)中，并且用水(100mL)稀释。收集有机层，然后将水层用乙酸乙酯(50mL)再萃取一次。将合并的有机层用盐水洗涤，然后用无水硫酸镁粉末干燥，过滤并且浓缩，以得到红色固体。将粗产物直接用于下一步而不经进一步纯化。LCMS(ESI,m/z)：349[M+H]⁺。

第2步：5-溴-2,4-二甲基-3-硝基吡啶

将2-(5-溴-2-甲基-3-硝基吡啶-4-基)丙二酸二甲酯(8.2,24mmol)的12N HCl(50mL,609mmol)溶液在100℃下加热过夜。然后将反应混合物冷却至室温，并且在减压条件下浓缩。然后将残余物用1N NaOH溶液进行处理，以将pH调节至10，然后用乙酸乙酯(3×100mL)进行萃取。将合并的有机层用硫酸镁干燥，过滤并且浓缩，以得到棕色油状物。然后利用快速柱层析法(使用0-100％乙酸异丙酯的庚烷溶液)纯化残余物，以得到产物，其为黄色固体(2.77g,12mmol)。LCMS(ESI,m/z)：233[M+H]⁺。

步骤3：(4,6-二甲基-5-硝基吡啶-3-基)硼酸

在氮气气氛下，将5-溴-2,4-二甲基-3-硝基吡啶(2.75g,11.9mmol)、双(频那醇酯合)二硼(6.42g,24.8mmol)、Pd₂(dppf)Cl₂CH₂Cl₂(2.06g,2.47mmol)和乙酸钾(3.5g,35.7mmol)用1,4-二噁烷(50mL)进行处理。然后在氮气气氛下，将反应混合物在90℃下加热过夜。冷却至室温后，将混合物用50mL乙酸乙酯稀释，然后通过硅藻土/硫酸镁/硅藻土塞进行过滤。将滤液用水稀释，并且收集有机层。将有机层用乙酸乙酯(50mL,50mL)再萃取两次。将合并的有机层用硫酸镁干燥，过滤并且浓缩，以得到黑色油状物，将其溶于乙酸乙酯中，并且通过硅胶塞进行过滤。然后浓缩滤液以得到棕色油状物，利用快速柱层析法(使用0-100％乙酸异丙酯的庚烷溶液)进行纯化，以得到产物，其为浅黄色固体。LCMS(ESI,m/z)：197[M+H]⁺。

第4步：8-氯-6-(4,6-二甲基-5-硝基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-胺

在氮气气氛下，将8-氯-7-氟-6-碘-异喹啉-3-胺(2.84g,8.81mmol)、(4,6-二甲基-5-硝基吡啶-3-基)硼酸(2.86g,14.6mmol)、Pd(dppf)Cl₂CH₂Cl₂(980mg,1.18mmol)和碳酸钾(2.88g,20.8mmol)溶于1,4-二噁烷(41mL)和水(3mL)中。然后将混合物在120℃下加热过夜。然后将反应混合物冷却至室温，并且用50mL乙酸乙酯稀释。然后将混合物通过硅藻土/硫酸镁/硅藻土塞进行过滤。然后将硅胶塞进一步用20mL 5％MeOH的二氯甲烷溶液进行洗涤。然后浓缩滤液，以得到黑色油状物，利用快速柱层析法(使用0-20％甲醇的二氯甲烷溶液)进行纯化，以获得黑色油状物。然后将该油状物用庚烷(含少量甲醇)进行处理，以沉淀产物，其为浓黄色固体(2.2g,6.3mmol)。LCMS(ESI,m/z)：347[M+H]⁺。

第5步：2-((6-(4,6-二甲基-5-硝基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮

在氮气气氛下，将8-氯-6-(4,6-二甲基-5-硝基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-胺(104.5mg,0.3mmol)、2-溴-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮(100.6mg,0.37mmol)、tBuBrettPhos Pd G3(62.2mg,0.07mmol)和碳酸铯(185mg,0.57mmol)的混合物溶于1,4-二噁烷(3mL)中，然后在120℃下加热过夜。然后将反应物冷却至室温，并且用25mL乙酸乙酯稀释。然后通过硅藻土对混合物进行过滤。浓缩滤液以得到黑色油状物，并且利用快速柱层析法(使用0-15％甲醇的二氯甲烷溶液)进行纯化，以获得2-((6-(4,6-二甲基-5-硝基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮(39.1mg,0.08mmol)(LCMS(ESI,m/z)：504)和2-((6-氯-(4,6-二甲基-5-硝基吡啶-3-基)-7-氟-8-羟基异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮(30.4mg,0.06mmol)(LCMS(ESI,m/z)：521)。

第6步：2-((6-(5-氨基-4,6-二甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮(化合物126)

在氢气气氛下(使用气球)，将2-((6-(4,6-二甲基-5-硝基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮(39.1mg,0.08mmol)和Raney镍(53mg,0.9mmol)与甲醇(3mL)的混合物在室温下搅拌过夜。通过硅藻土对混合物进行过滤。浓缩滤液，并且利用反相HPLC进行纯化，以得到2-((6-(5-氨基-4,6-二甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮(8.9mg,0.08mmol)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.23(s,1H),8.99(s,1H),7.90(s,1H),7.78(d,J＝10.1Hz,1H),7.66(d,J＝7.2Hz,1H),7.62(s,1H),5.98(s,1H),4.98(s,2H),4.94(s,2H),4.62–4.56(m,1H),3.78(t,J＝5.9Hz,2H),2.99(t,J＝5.9Hz,2H),2.37(s,3H),1.94(d,J＝1.9Hz,3H),1.12(d,J＝6.8Hz,6H)。分析型HPLC保留时间3.174min。方法N。LCMS(ESI,m/z)：474.1。

第7步：2-((6-(5-氨基-4,6-二甲基吡啶-3-基)-7-氟-8-羟基异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮(化合物133)

在氢气气氛下(使用气球)，将2-((6-氯-(4,6-二甲基-5-硝基吡啶-3-基)-7-氟-8-羟基异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮(95.1mg,0.18mmol)和Raney镍(126mg,2.14mmol)与甲醇(7mL)的混合物在室温下搅拌过夜。然后对混合物进行过滤。浓缩滤液，并且利用反相HPLC进行纯化，以得到2-((6-(5-氨基-4,6-二甲基吡啶-3-基)-7-氟-8-羟基异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮(16.7mg,0.03mmol)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.54(s,1H),9.17(d,J＝1.3Hz,2H),7.77(d,J＝1.0Hz,1H),7.62(s,1H),7.04(d,J＝5.9Hz,1H),5.98(s,1H),4.95(d,J＝8.8Hz,4H),4.61–4.56(m,1H),3.77(t,J＝6.0Hz,2H),2.98(s,2H),2.37(s,3H),1.96(d,J＝1.7Hz,3H),1.12(d,J＝6.8Hz,6H)。分析型HPLC保留时间。2.829min。方法N。LCMS(ESI,m/z)：490.2。

实例118

2-[[6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-4,4-二氟-6-甲基-5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮(化合物127)

第1步：2-氨基-4,4-二氟-6,8-二氢-5H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮

在1atm氢气下，将4,4-二氟-2-硝基-6,8-二氢-5H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮(100mg,0.43mmol)和Pd/C(25.0mg,0.43mmol)与甲醇(10mL)的混合物在25℃下搅拌1h。过滤后，将滤液在真空下浓缩，以得到2-氨基-4,4-二氟-6,8-二氢-5H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮(60mg,68.9％)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝203.1

第2步：4,4-二氟-2-碘-6,8-二氢-5H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮

将2-氨基-4,4-二氟-6,8-二氢-5H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮(356mg,1.76mmol)、亚硝酸叔丁酯(544.14mg,5.28mmol)和碘化亚铜(401.5mg,2.11mmol)与乙腈(5mL)的混合物在室温下搅拌1h。利用反相色谱柱纯化残余物，用水(NH₄HCO₃,10mmol/L)/ACN(65/35)进行洗脱，以得到4,4-二氟-2-碘-6,8-二氢-5H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮(320mg,58％)，其为淡黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝314.0。

步骤3：4,4-二氟-2-碘-6-甲基-5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮

将4,4-二氟-2-碘-6,8-二氢-5H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮(100mg,0.32mmol)、叔丁醇钾(53.67mg,0.48mmol)和碘甲烷(68.04mg,0.48mmol)与四氢呋喃(4mL)的混合物在25℃下搅拌2h。将反应混合物在真空下浓缩，并且利用硅胶快速层析法进行纯化，用二氯甲烷/甲醇(96/4)进行洗脱，以得到4,4-二氟-2-碘-6-甲基-5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮(65mg,62.2％)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝328。

第4步：N-叔丁氧基羰基-N-[5-[3-[(4,4-二氟-6-甲基-7-氧代-5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-2-基)氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯

将N-[5-(3-氨基-7-氟-6-异喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁酯(223.47mg,0.48mmol)、4,4-二氟-2-碘-6-甲基-5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮(130.0mg,0.40mmol)、tBuBrettphos Pd G3(135.78mg,0.16mmol)、tBuBrettphos(96.39mg,0.20mmol)和碳酸铯(388.72mg,1.19mmol)与1,4-二噁烷(20mL)的混合物在130℃下搅拌1h。将反应混合物在真空下浓缩。利用硅胶快速层析法纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(92/8)进行洗脱，以得到N-叔丁氧基羰基-N-[5-[3-[(4,4-二氟-6-甲基-7-氧代-5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-2-基)氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(85mg,32％)，其为棕色固体。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝668.3。

第5步：2-[[6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-4,4-二氟-6-甲基-5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮

向N-叔丁氧基羰基-N-[5-[3-[(4,4-二氟-6-甲基-7-氧代-5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-2-基)氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(80mg,0.12mmol)与二氯甲烷(5mL)的混合物中加入2,2,2-三氟乙酸(1.0mL)。将反应混合物在25℃下搅拌1h，然后在真空下浓缩。将残余物重新溶于甲醇中，然后用氨的甲醇溶液(7M)将pH值调节至pH＝8。过滤后，在真空下浓缩滤液。利用制备型HPLC(Atlantis HILICOBD，19×150mm×5μm；水(10mM NH₄HCO₃):CH₃CN(在10min内由21％增加至42％))纯化残余物，以得到2-[[6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-4,4-二氟-6-甲基-5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮(18.8mg，产率33.6％)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝468；¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ9.59(s,1H),9.06(s,1H),8.02(s,1H),7.87(s,1H),7.85(d,J＝9.0Hz,1H),7.76(d,J＝9.0Hz,1H),7.71(s,1H),6.65(s,1H),5.29(s,2H),5.19(s,2H),4.51(t,J＝12.0Hz,2H),3.03(s,3H),1.92(s,3H)。

实例119

7-[7-氟-3-[(6-甲基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-羧酸叔丁酯(化合物128)

第1步：N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯

将2-溴-6-甲基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮(12.0mg,0.05mmol)、7-(3-氨基-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-羧酸叔丁酯(10.0mg,0.02mmol)、tBuBretphos G3(41.98mg,0.05mmol)、tBuBretophos(23.84mg,0.05mmol)和碳酸铯(16.03mg,0.05mmol)与1,4-二噁烷(1mL)的混合物在120℃下搅拌1h。将反应混合物在真空下浓缩，并且利用硅胶快速层析法进行纯化，用二氯甲烷/甲醇(20/1)进行洗脱，以得到N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(184mg,0.26mmol)，其为棕色油状物。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝573.6。

第2步：7-[7-氟-3-[(6-甲基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-羧酸叔丁酯

将7-[7-氟-3-[(6-甲基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-羧酸叔丁酯(60.0mg,0.10mmol)和2,2,2-三氟乙酸(1mL)与二氯甲烷(5mL)的混合物在25℃下搅拌1h。将所得溶液在真空下浓缩。将残余物重新溶于甲醇中，然后用氨的甲醇溶液(7M)将pH值调节至pH＝8。过滤后，将滤液在真空下浓缩，并且利用制备型HPLC(Atlantis HILIC OBD，19×150mm×5μm；水(10mmol/L NH₄HCO₃):CH₃CN(在7min内由20％增加至43％))纯化残余物，以得到7-[7-氟-3-[(6-甲基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-羧酸叔丁酯(60mg,0.10mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝473；¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ9.25(s,1H),8.99(s,1H),7.90(s,1H),7.79(d,J＝10.2Hz,1H),7.67(d,J＝7.2Hz,1H),7.38(s,1H),6.00(s,1H),5.71(s,1H),4.99(s,2H),4.32-4.29(m,2H),3.85-3.82(m,2H),3.38-3.34(m,2H),3.07-3.03(m,2H),2.96(s,3H),1.93(d,J＝1.9Hz,3H)。

实例120

2-[[6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮(化合物129)

第1步：N-[5-(3-氨基-6-异喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁酯

将6-溴异喹啉-3-胺(500mg,2.24mmol)、N-叔丁氧基羰基-N-[4-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(1265.59mg,2.91mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(163.63mg,0.22mmol)、碳酸钾(618.64mg,4.48mmol)与1,4-二噁烷(15mL)和水(1.5mL)的混合物在90℃下搅拌12h。将反应混合物在真空下浓缩，并且利用硅胶快速层析法进行纯化，用二氯甲烷/甲醇(15/1)进行洗脱，以得到N-[5-(3-氨基-6-异喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁酯(600mg,1.33mmol)，其为固体。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝451。

第2步：N-叔丁氧基羰基-N-[5-[3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯

将2-溴-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮(144.97mg,0.53mmol)、N-[5-(3-氨基-6-异喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁酯(160mg,0.36mmol)、tBuBrettphosG3(121.31mg,0.14mmol)、tBuBrettphos(86.12mg,0.18mmol)和碳酸铯(347.32mg,1.07mmol)与1,4-二噁烷(15mL)的混合物在120℃下搅拌1.5h。将反应混合物在真空下浓缩，并且利用硅胶快速层析法进行纯化，用二氯甲烷/甲醇(15/1)进行洗脱，以得到N-叔丁氧基羰基-N-[5-[3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(140mg,0.22mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝642。第3步：2-[[6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮

将N-叔丁氧基羰基-N-[5-[3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(100mg,0.16mmol)和2,2,2-三氟乙酸(1mL,0.16mmol)与二氯甲烷(5mL)的混合物在20℃下搅拌1h。将反应混合物在真空下浓缩。将残余物重新溶于甲醇中，然后用氨的甲醇溶液(7M)将pH值调节至pH＝8。过滤后，在真空下浓缩滤液。利用反相色谱(乙腈0-40％，0.1％NH₄HCO₃水溶液)纯化残余物，以得到2-[[6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮(44.1mg,0.099mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝442；¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ9.25(s,1H),8.99(s,1H),7.90(s,1H),7.79(d,J＝10.2Hz,1H),7.67(d,J＝7.2Hz,1H),7.38(s,1H),6.00(s,1H),5.71(s,1H),4.99(s,2H),4.30(s,2H),3.84(t,J＝5.5Hz,2H),3.4(m,2H),3.10–3.00(m,2H),2.96(s,3H),1.93(d,J＝1.9Hz,3H)。

实例121

6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-2-基)氨基]-8-甲基-异喹啉-7-腈(化合物130)

第1步：N-[5-(3-氨基-7-溴-8-氯-6-异喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁酯

将7-溴-8-氯-6-碘-异喹啉-3-胺(1.3g,3.39mmol)、N-叔丁氧基羰基-N-[4-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(1.9g,4.41mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(248.09mg,0.34mmol)和碳酸钠(840.88mg,6.78mmol)与1,4-二噁烷(30mL)和水(3mL)的混合物在80℃下搅拌16小时。过滤后，在真空下浓缩滤液。利用硅胶快速层析法纯化残余物，用PE/EA(2/1)进行洗脱，以得到N-[5-(3-氨基-7-溴-8-氯-6-异喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁酯(1.38g,2.45mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝563.1。第2步：N-[5-(3-氨基-8-氯-7-氰基-6-异喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯

在氮气气氛下，将N-[5-(3-氨基-7-溴-8-氯-6-异喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁酯(850mg,1.51mmol)、氰化锌(88.49mg,0.75mmol)和四(三苯基膦)钯(174.19mg,0.15mmol)in 1-甲基-2-吡咯烷酮(30mL)的混合物在130℃下搅拌1.5h。过滤后，将滤液在真空下浓缩。利用反相色谱(乙腈5-60％和0.1％NH₄HCO₃水溶液)纯化残余物，以得到N-[5-(3-氨基-8-氯-7-氰基-6-异喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(326mg,0.79mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝410.1。第3步：6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-8-氯-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-2-基)氨基]异喹啉-7-腈

将2-溴-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮(194.81mg,0.72mmol)、N-[5-(3-氨基-8-氯-7-氰基-6-异喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(326mg,0.48mmol)、2-(二叔丁基膦基)-2',4',6'-三异丙基-3,6-二甲氧基-1,1'-bi苯基(115.65mg,0.24mmol)、碳酸铯(310.98mg,0.95mmol)和t-BubrettPhos-Pd-G3(163.02mg,0.19mmol)与1,4-二噁烷(30mL)的混合物在120℃下搅拌2h。过滤后，在真空下浓缩滤液。利用硅胶快速层析法纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(10:1)进行洗脱，以得到6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-8-氯-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-2-基)氨基]异喹啉-7-腈(200mg,0.40mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝501.3。

第4步：6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-2-基)氨基]-8-甲基-异喹啉-7-腈

将6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-8-氯-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-2-基)氨基]异喹啉-7-腈(200mg,0.40mmol)、碳酸钾(165.28mg,1.2mmol)、三甲基环三硼氧烷(0.22mL,1.6mmol)和四(三苯基膦)钯(46.11mg,0.04mmol)与1,4-二噁烷(18mL)和水(4.5mL)的混合物在100℃下搅拌2h。过滤后，在真空下浓缩滤液。利用制备型HPLC(Sun Fire Prep C18 OBD，19×150mm，5μm；水(10mmol/LNH₄HCO₃):CH₃CN(在10min内由22％增加至36％)纯化残余物，以得到产物6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-2-基)氨基]-8-甲基-异喹啉-7-腈(19.7mg,0.041mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝481.2；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.68(s,1H),9.30(s,1H),8.02(s,1H),7.88(s,1H),7.66(s,1H),7.56(s,1H),6.04(s,1H),5.31(s,2H),5.00(s,2H),4.63-4.43(m,1H),3.78(t,J＝6.0Hz,2H),3.05-2.98(m,3H),2.97(s,2H),1.92(s,3H),1.12(d,J＝6.9Hz,6H)。

实例122

2-[[7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮(化合物131)

第1步：7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)异喹啉-3-胺

在25℃下，向7-氟-6-碘-异喹啉-3-胺(200mg,0.69mmol)、4-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)吡啶(228.17mg,1.04mmol)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(50.75mg,0.070mmol)与1,4-二噁烷(2mL)和水(0.2mL)的混合物中加入碳酸钾(210.79mg,1.53mmol)。将所得溶液在90℃下搅拌2h，然后过滤。在真空下浓缩滤液。利用硅胶快速层析法纯化残余物，用乙酸乙酯/石油醚(4/1)进行洗脱，以得到7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)异喹啉-3-胺(150mg,0.59mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝254.1。

第2步：2-[[7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮

在25℃下，向7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)异喹啉-3-胺(100mg,0.39mmol)、2-溴-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮(128.94mg,0.47mmol)、t-BuBrettphos Pd G3(134.88mg,0.16mmol)和t-BuBrettphos(95.55mg,0.20mmol)与1,4-二噁烷(20mL)的混合物中加入碳酸铯(643.58mg,1.97mmol)。将所得溶液在120℃下搅拌1h。将所得混合物冷却至室温。过滤后，在真空下浓缩滤液。利用反相色谱(乙腈0-40％/0.1％NH₄HCO₃水溶液)纯化残余物，以得到2-[[7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮(76.2mg,0.17mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝445.2；¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ9.28(s,1H),9.02(s,1H),8.54(d,J＝5.2Hz,1H),8.47(s,1H),7.95(s,1H),7.87-7.78(m,2H),7.42(d,J＝5.2Hz,1H),5.98(s,1H),4.98(s,2H),4.61-4.57(m,1H),3.78(t,J＝5.9Hz,2H),2.99(t,J＝5.7Hz,2H),2.22(s,3H),1.13(d,J＝6.9Hz,6H)。

实例123

2-[[7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基]-6-(2-吗啉代乙基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮(化合物132)

第1步：2-溴-6-(2-吗啉代乙基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮

将2-溴-4,5,6,8-四氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮(150mg,0.65mmol)和氢化钠(78.24mg,1.96mmol,60％)与N,N-二甲基甲酰胺(3mL)的混合物在0℃下搅拌30min。然后加入4-(2-溴乙基)吗啉(253.07mg,1.3mmol)，并且在0℃下搅拌2h。加入水(1mL)，使反应淬灭。过滤后，在真空下浓缩滤液。利用反相色谱(乙腈0-40％+0.05％TFA水溶液)纯化残余物，以得到2-溴-6-(2-吗啉代乙基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮(200mg,0.58mmol)，其为黄色油状物。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝343。

第2步：7-[7-氟-3-[[6-(2-吗啉代乙基)-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-2-基]氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-羧酸叔丁酯

将2-溴-6-(2-吗啉代乙基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮(100.35mg,0.29mmol)、7-(3-氨基-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-羧酸叔丁酯(100mg,0.24mmol)、t-BuBrettphos 3G Pd(83.23mg,0.10mmol)、t-BuBrettphos(58.96mg,0.12mmol)和碳酸铯(397.13mg,1.22mmol)与1,4-二噁烷(10mL)的混合物在120℃下搅拌1h。利用硅胶快速层析法纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(9/1)进行洗脱，以得到7-[7-氟-3-[[6-(2-吗啉代乙基)-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-2-基]氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-羧酸叔丁酯(80mg,0.12mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝673。

第3步：2-[[7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基]-6-(2-吗啉代乙基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮甲酸盐

将7-[7-氟-3-[[6-(2-吗啉代乙基)-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-2-基]氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-羧酸叔丁酯(80mg,0.12mmol)的1,2-二氯乙烷(2.5mL)和2,2,2-三氟乙酸(0.5mL)溶液在25℃下搅拌2h。将溶剂在真空下浓缩。将残余物重新溶于甲醇中，然后用氨的甲醇溶液(7M)将pH值调节至pH＝8。过滤后，在真空下浓缩滤液。利用制备型HPLC(Atlantis HILIC OBD色谱柱，19×150mm×5μm；水(0.1％FA):CH₃CN(在7min内由5％增加至35％))纯化残余物，以得到2-[[7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基]-6-(2-吗啉代乙基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7-酮(57.3mg,0.10mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝573；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.25(s,1H),8.99(s,1H),7.90(s,1H),7.79(d,J＝10.2Hz,1H),7.66(d,J＝7.1Hz,1H),7.37(s,1H),6.00(s,1H),5.70(s,1H),5.01(s,2H),4.30(t,J＝4.4Hz,2H),4.02-3.98(m,1H),3.87-3.85(m,2H),3.74-3.54(m,6H),3.37-3.35(m,3H),3.08-3.06(m,3H),2.45-2.40(m,3H),1.92(s,3H)。

实例124

2-((7-氟-6-(4-羟基-5-甲基-3,4-二氢-2H-吡喃酮[2,3-b]吡啶-6-基)异喹啉-3-基)氨基)-6-甲基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮(化合物

180)

第1步：3,5-二溴-2-甲氧基-4-甲基吡啶

向乙酸钠(9.86g,120mmol)和2-甲氧基-4-甲基吡啶(5g,39mmol)的乙酸(40mL)悬浮液中加入溴(6.0mL,120mmol)。然后将该混合物在80℃下搅拌12小时。将反应混合物冷却至室温，并且在减压条件下浓缩。然后将残余物用10％氢氧化钠水溶液(28g,698mmol)和饱和亚硫酸钠溶液(15g,120mmol)进行处理。将所得混合物用乙醚(3×100mL)进行萃取。将合并的有机层用无水硫酸镁粉末干燥，过滤并且浓缩，以得到白色固体，利用柱层析法(220g硅胶柱，乙酸异丙酯的庚烷溶液在12分钟内由0增加至30％)进行纯化，以得到3,5-二溴-2-甲氧基-4-甲基吡啶(10.02g,35.67mmol)，其为白色固体。¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δ8.14(s,1H),3.98(s,3H),2.56(s,3H)。LCMS(ESI,m/z)：280[M+H]⁺。

第2步：1-(5-溴-2-甲氧基-4-甲基吡啶-3-基)丙-2-烯-1-醇

在氮气气氛下，将3,5-二溴-2-甲氧基-4-甲基吡啶(7.6g,27mmol)的乙醚(100mL)溶液冷却至-65℃。在不断搅拌下，逐滴加入正丁基锂(2.5M的己烷溶液，12mL，29.7mmol)，同时保持温度为-65℃。将反应混合物冷却至-70℃，并且在氮气气氛下搅拌30分钟，然后温热至室温并且过夜。加入30mL饱和碳酸氢钠溶液，以使反应淬灭。将所得混合物用二氯甲烷淬灭，用硫酸镁使其干燥，然后过滤。浓缩滤液，以得到1-(5-溴-2-甲氧基-4-甲基吡啶-3-基)丙-2-烯-1-醇，其为透明油状物，直接用于下一步而不经进一步纯化。¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δ8.17(s,1H),6.14–6.06(m,1H),5.49-5.45(m,1H),5.20(t,J＝1.4Hz,1H),5.15(dt,J＝2.0,1.1Hz,1H),5.13(t,J＝1.4Hz,1H),3.97(s,3H),3.66(d,J＝10.3Hz,1H),2.43(s,3H)。LCMS(ESI,m/z)：260[M+H]⁺。

第3步：1-(5-溴-2-甲氧基-4-甲基吡啶-3-基)丙-2-烯-1-酮

在室温下，向1-(5-溴-2-甲氧基-4-甲基吡啶-3-基)丙-2-烯-1-醇(6.9g,26.7mmol)的二氯甲烷(100mL)溶液中加入Dess-Martinperiodinane(17.24g,39.4mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜，然后在不断搅拌下缓慢加入200mL饱和碳酸氢钠溶液以使其淬灭。将混合物转移至分液漏斗中，并且收集有机层。将水层用二氯甲烷再萃取两次。将合并的有机层用硫酸镁干燥，过滤并且浓缩，以得到黄色油状物，利用柱层析法(硅胶柱，120g，乙酸异丙酯的庚烷溶液在25分钟内由0增加至50％)进行纯化，以得到1-(5-溴-2-甲氧基-4-甲基吡啶-3-基)丙-2-烯-1-酮，其为透明油状物(6.03g,23.5mmol)。¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δ8.26(s,1H),6.59(dd,J＝17.6,10.5Hz,1H),6.13-5.94(m,2H),3.89(s,3H),2.24(s,3H)。LCMS(ESI,m/z)：258[M+H]⁺。

第4步：6-溴-5-甲基-2,3-二氢-4H-吡喃醇[2,3-b]吡啶-4-酮

向1-(5-溴-2-甲氧基-4-甲基吡啶-3-基)丙-2-烯-1-酮(4.7g,18.24mmol)的乙酸(80mL)溶液中加入氢溴酸(48％水溶液，6.4mL，57mmol)。将反应混合物在100℃下加热45分钟，然后冷却至室温，并且用醚(3×50mL)进行萃取。将合并的有机层用饱和碳酸氢钠溶液洗涤。收集有机层，用硫酸镁干燥，过滤并且浓缩，以得到黄色固体，利用柱层析法(硅胶柱，220g，乙酸异丙酯的庚烷溶液在20分钟内由0增加至65％)进行纯化，以得到6-溴-2-甲基-2,3-二氢-4H-吡喃醇[2,3-b]吡啶-4-酮，其为白色固体(2.27g,9.4mmol)。¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δ8.46(s,1H),4.59(d,J＝0.8Hz,2H),2.87–2.84(m,2H),2.81(s,3H)。LCMS(ESI,m/z)：244[M+H]⁺。

第5步：6-溴-5-甲基-3,4-二氢-2H-吡喃醇[2,3-b]吡啶-4-醇

向1-(5-溴-2-甲氧基-4-甲基吡啶-3-基)丙-2-烯-1-酮(468.3mg,1.9mmol)的甲醇(25mL)溶液中加入硼氢化钠(167.6mg,4.43mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜，然后加入水以使其淬灭，并且在减压条件下浓缩。将残余物分配在水(50mL)和乙酸乙酯(30mL)之间。收集有机层，然后将水层用乙酸乙酯(2×30mL)再萃取两次。然后将合并的有机层用硫酸镁干燥，过滤并且浓缩，以得到6-溴-5-甲基-3,4-二氢-2H-吡喃醇[2,3-b]吡啶-4-醇，其为白色固体，直接用于下一步而不经进一步纯化。LCMS(ESI,m/z)：246[M+H]⁺。

第6步：6-溴-4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-5-甲基-3,4-二氢-2H-吡喃醇[2,3-b]吡啶

向6-溴-5-甲基-3,4-二氢-2H-吡喃醇[2,3-b]吡啶-4-醇(507.2mg,2.1mmol)的二氯甲烷(12mL)溶液中加入三乙胺(0.75mL,5.4mmol)。在氮气气氛下，将混合物冷却至0℃，然后加入二甲基甲硅烷基三氟甲烷磺酸叔丁酯(0.58mL,2.47mmol)。将反应混合物在室温下搅拌45分钟，然后加入氯化铵浓溶液以使其淬灭。将混合物用二氯甲烷进行萃取，并且将有机层用硫酸钠干燥，过滤并且浓缩，以得到透明油状物，利用柱层析法(硅胶柱，80g，乙酸异丙酯的庚烷溶液在18分钟内由0增加至50％)进行纯化，以得到6-溴-4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-5-甲基-3,4-二氢-2H-吡喃醇[2,3-b]吡啶，其为白色固体(640.8mg,1.79mmol)。LCMS(ESI,m/z)：360[M+H]⁺。

第7步：6-溴-4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-5-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)-3,4-二氢-2H-吡喃醇[2,3-b]吡啶

在氮气气氛下，将6-溴-4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-5-甲基-3,4-二氢-2H-吡喃醇[2,3-b]吡啶(441.5mg,1.2mmol)、双(频那醇酯合)二硼(500mg,1.93mmol)、Pd₂(dppf)Cl₂CH₂Cl₂(134.7mg,0.16mmol)和乙酸钾(454.6mg,4.63mmol)溶于1,4-二噁烷(5mL)中，然后在氮气气氛和90℃下加热过夜。将所得混合物冷却至室温，用20mL乙酸乙酯进行稀释，然后过滤。将滤液在减压条件下浓缩，以得到6-溴-4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-5-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)-3,4-二氢-2H-吡喃醇[2,3-b]吡啶，其为黑色固体，直接用于下一步而不经进一步纯化。LCMS(ESI,m/z)：406[M+H]⁺。

(S)-2-((7-氟-6-(4-羟基-5-甲基-3,4-二氢-2H-吡喃酮[2,3-b]吡啶-6-基)异喹啉-3-基)氨基)-6-甲基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮和

(R)-2-((7-氟-6-(4-羟基-5-甲基-3,4-二氢-2H-吡喃酮[2,3-b]吡啶-6-基)异喹啉-3-基)氨基)-6-甲基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮

在室温下，向2-[[6-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-5-甲基-3,4-二氢-2H-吡喃醇[2,3-b]吡啶-6-基]-7-氟-3-异喹啉]氨基]-6-甲基-,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮平-7-酮(110mg,0.19mmol)的四氢呋喃(12mL)溶液中加入四丁基氟化铵(1.0M的THF溶液，1mL，1mmol)。将反应混合物在室温下搅拌3小时，然后加入水以使其淬灭。将所得混合物在减压条件下浓缩。依次利用反相HPLC以及手性SFC(Chiralpak IB-N，150×21mm，5μM；50％0.1％氢氧化铵的MeOH溶液，在CO₂下；流速＝70mL/min)纯化残余物，以得到2-氟-6-(4-羟基-5-甲基-3,4-二氢-2H-吡喃醇[2,3-b]吡啶-6-基)异喹啉-3-基)氨基)-6-甲基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮平-7(8H)-酮(9.5mg,.019mmol)，其为对映异构体。

峰1(化合物180a)：cSFC保留时间＝1.4min。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.25(s,1H),9.00(s,1H),8.03(s,1H),7.90(s,1H),7.81(d,J＝10.2Hz,1H),7.70(d,J＝7.2Hz,1H),6.00(s,1H),5.41(d,J＝5.6Hz,1H),4.98(s,2H),4.85(d,J＝5.5Hz,1H),4.40–4.32(m,2H),3.84–3.80(m,2H),3.07–3.03(m,2H),2.95(s,3H),2.25(d,J＝1.7Hz,3H),1.98(dd,J＝7.2,3.8Hz,2H)。分析型HPLC保留时间3.667min。方法N。LCMS(ESI,m/z)：489.3[M+H]+。

峰2(化合物180b)：cSFC保留时间＝1.84min。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.25(s,1H),9.00(s,1H),8.03(s,1H),7.90(s,1H),7.81(d,J＝10.1Hz,1H),7.70(d,J＝7.2Hz,1H),6.00(s,1H),5.41(d,J＝5.7Hz,1H),4.98(s,2H),4.85(d,J＝4.4Hz,1H),4.40–4.32(m,2H),3.84–3.80(m,2H),3.07–3.03(m,2H),2.95(s,3H),2.25(d,J＝1.6Hz,3H),1.98(dd,J＝6.9,3.7Hz,2H)。分析型HPLC保留时间3.666min。方法N。LCMS(ESI,m/z)：489.2[M+H]⁺。

实例125

N-(7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-3,3-二甲基-5,6-二氢-3H,11H-[1,2,4]噁二唑并[4,3-a]吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-8-胺(化合物134)

根据一般合成方法，按照类似于上文所述的那些程序进行合成。¹H NMR(300MHz,CD₃OD)δ8.99(s,1H),8.53-8.51(m,1H),8.47(s,1H),7.89(s,1H),7.77-7.72(m,2H),7.51-7.49(m,1H),6.13(s,1H),5.06(s,2H),3.47-3.43(m,2H),3.25-3.21(m,2H),2.34(s,3H),1.45(s,6H)。分析型HPLC保留时间1.987min。方法K。MS(ESI)[M+H]⁺＝458.2。

实例126

2-((7,8-二氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮(化合物135)

根据一般合成方法，按照类似于上文所述的那些程序进行合成。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ9.47(s,1H),9.16(s,1H),7.94(s,1H),7.54(d,J＝6.0Hz,1H),7.40(s,1H),6.01(s,1H),5.75(s,1H),5.00(s,2H),4.62-4.57(m,1H),4.32-4.30(s,2H),3.81-3.77(m,2H),3.36-3.33(m,2H),3.02-2.99(m,2H),1.95(s,3H),1.13(d,J＝6.9Hz,6H)。分析型HPLC保留时间2.316min。方法K。MS(ESI)[M+H]⁺＝520.2。

实例127

2-((6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-6-(2-吗啉代乙基)-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮(化合物136)

根据一般合成方法，按照类似于上文所述的那些程序进行合成。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.23(s,1H),8.90(s,1H),8.02(s,1H),7.91(s,1H),7.80(d,J＝7.5Hz,1H),7.70-7.69(m,2H),5.99(s,1H),5.26(s,2H),4.99(s,2H),3.87-3.84(m,2H),3.54-3.49(m,6H),3.10-3.07(m,2H),2.45-2.33(m,6H),1.92(s,3H)。分析型HPLC保留时间1.541min。方法K。MS(ESI)[M+H]⁺＝531.2。

实例128

2-((7-氟-6-(6-甲氧基-4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基)-6-甲基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮(化合物137)

根据一般合成方法，按照类似于上文所述的那些程序进行合成。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ9.27(s,1H),9.00(s,1H),8.08(s,1H),7.92(s,1H),7.81(d,J＝10.2Hz,1H),7.73(d,J＝7.2Hz,1H),6.85(s,1H),5.99(s,1H),4.99(s,2H),4.04(s,3H),4.02-3.83(m,2H),3.18-3.05(m,2H),2.96(s,3H),2.16(s,3H)。分析型HPLC保留时间1.878min。方法M。MS(ESI)[M+H]⁺＝447.2。

实例129

2-((7,8-二氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基)-6-甲基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮(化合物138)

根据一般合成方法，按照类似于上文所述的那些程序进行合成。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ9.50(s,1H),9.17(s,1H),7.93(s,1H),7.54(d,J＝6.0Hz,1H),7.40(s,1H),6.02(s,1H),5.76(s,1H),5.01(s,2H),4.31-4.29(m,2H),3.85-8.83(m,2H),3.34-3.13(m,2H),3.07-3.05(m,2H),2.96(s,3H),1.95(s,3H)。分析型HPLC保留时间2.326min。方法L。MS(ESI)[M+H]⁺＝492.1。

实例130

N-(6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)-5,6-二氢-11H-吡唑并[1,5-d][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-8-胺(化合物139)

根据一般合成方法，按照类似于上文所述的那些程序进行合成。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ9.35(s,1H),9.00(s,1H),8.52(s,1H),8.02(s,1H),7.96(s,1H),7.81(d,J＝10.2Hz,1H),7.71(d,J＝7.2Hz,1H),7.70(s,1H),6.12(s,1H),5.57(s,2H),5.28(s,2H),4.40-4.36(m,2H),3.32-3.28(m,2H),1.92(s,3H)。分析型HPLC保留时间1.572min。方法K。MS(ESI)[M+H]+＝442.2。

实例131

2-((6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氯异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮(化合物140)

根据一般合成方法，按照类似于上文所述的那些程序进行合成。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ9.37(s,1H),9.01(s,1H),8.15(s,1H),7.99(s,1H),7.89(s,1H),7.67(s,1H),7.60(s,1H),5.99(s,2H),5.25(s,2H),4.98(s,2H),4.61-4.56(m,1H),3.80-3.76(s,1H),3.00-2.98(m,2H),1.84(s,3H),1.12(d,J＝6.9Hz,6H)。分析型HPLC保留时间1.222min。方法K。MS(ESI)[M+H]⁺＝476.2。

实例132

(R)-2-((7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基)-4-羟基-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮(化合物141a)

根据一般合成方法，按照类似于上文所述的那些程序进行合成。任意指定的绝对立体化学结构。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ9.31(s,1H),8.99(s,1H),7.90(s,1H),7.78(d,J＝10.2Hz,1H),7.68(d,J＝7.2Hz,1H),7.37(s,1H),6.23(s,1H),5.85(d,J＝6.0Hz,1H),5.70(s,1H),5.21&5.16(s,1H),4.79-4.70(m,2H),4.56-4.47(m,1H),4.31-4.28(m,2H),3.80-3.60(m,2H),3.38(s,2H),1.92(s,3H),1.13-1.11(m,6H)。分析型HPLC保留时间1.903min。方法K。MS(ESI)[M+H]⁺＝518.2。

(S)-2-((7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基)-4-羟基-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮(化合物141b)

实例133

6-(7-氟-3-((6-异丙基-7-氧代-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-2-基)氨基)异喹啉-6-基)-7-甲基噁唑并[5,4-b]吡啶-2(1H)-酮(化合物142)

根据一般合成方法，按照类似于上文所述的那些程序进行合成。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.23(s,1H),9.28(s,1H),9.02(s,1H),7.93(s,1H),7.88-7.83(m,2H),7.77(d,J＝7.2Hz,1H),5.98(s,1H),4.98(s,2H),4.61-4.57(m,1H),3.78(t,J＝5.6Hz,2H),2.99(t,J＝5.6Hz,2H),2.18(s,3H),1.12(d,J＝6.8Hz,6H)。分析型HPLC保留时间2.133min。方法K。MS(ESI)[M+H]⁺＝502.2。

实例134

N-(7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-5,6-二氢-11H-咪唑并[1,2-a]吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-8-胺(化合物143)

根据一般合成方法，按照类似于上文所述的那些程序进行合成。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ9.28(s,1H),8.99(s,1H),7.92(s,1H),7.78(d,J＝10.2Hz,1H),7.67(d,J＝7.2Hz,1H),7.37(s,1H),7.21(s,1H),6.84(s,1H),6.06(s,1H),5.70(s,1H),5.42(s,2H),4.37-4.30(m,4H),3.37-3.32(m,2H),3.26-3.22(m,2H),1.92(s,3H)。分析型HPLC保留时间1.017min。方法K。MS(ESI)[M+H]⁺＝483.2。

实例135

2-((6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮(化合物144)

根据一般合成方法，按照类似于上文所述的那些程序进行合成。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ9.26(s,1H),8.99(s,1H),8.17-8.13(m,1H),8.01(s,1H),7.91(s,1H),7.80(d,J＝10.2Hz,1H),7.71-7.69(m,2H),5.99(s,1H),5.27(s,2H),4.90(s,2H),3.54-3.50(m,2H),2.99-2.95(m,2H),1.91(s,3H)。分析型HPLC保留时间1.130min。方法K。MS(ESI)[M+H]+＝418.2。

实例136

2-((7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基)-6-(2-羟基乙基)-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮(化合物145)

根据一般合成方法，按照类似于上文所述的那些程序进行合成。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ9.25(s,1H),9.00(s,1H),7.91(s,1H),7.80(d,J＝10.2Hz,1H),7.67(d,7.2Hz,1H),7.38(s,1H),5.99(s,1H),5.71(s,1H),5.00(s,2H),7.81-4.79(m,1H),4.32-4.30(m,2H),3.90-3.88(m,2H),3.51-3.46(m,6H),3.09-3.06(m,2H),1.94(s,3H)。分析型HPLC保留时间1.913min。方法K。MS(ESI)[M+H]⁺＝504.2。

实例137

2-((5-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基)-6-(2-羟基乙基)-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮(化合物146)

根据一般合成方法，按照类似于上文所述的那些程序进行合成。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.25(s,1H),9.00(s,1H),7.91(s,1H),7.79(d,J＝10.2Hz,1H),7.68(d,J＝7.2Hz,1H),7.38(s,1H),5.99(s,1H),5.71(s,1H),5.01(s,2H),4.80(t,J＝5.0Hz,1H),4.32-4.30(m,2H),3.89-3.85(m,2H),3.61-3.37(m,6H),3.08-3.06(m,2H),1.93(s,3H)。分析型HPLC保留时间1.915min。方法K。MS(ESI)[M+H]⁺＝504.2。

实例138

(S)-2-(2-((7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基)-7-氧代-4,5,7,8-四氢-6H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-6-基)丙腈(化合物147a)

根据一般合成方法，按照类似于上文所述的那些程序进行合成。任意指定的绝对立体化学结构。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.30(s,1H),9.00(s,1H),7.92(s,1H),7.79(d,J＝10.2Hz,1H),7.68(d,J＝7.2Hz,1H),7.38(s,1H),6.03(s,1H),5.71(s,1H),5.47(q,J＝7.1Hz,1H),5.24-4.96(m,2H),4.31-4.29(m,2H),4.03-4.00(m,2H),3.38-3.35(m,2H),3.10-3.08(m,2H),1.93(s,3H),1.53(d,J＝7.1Hz,3H)。分析型HPLC保留时间2.299min。方法K。MS(ESI)[M+H]⁺＝513.2。

(R)-2-(2-((7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基)-7-氧代-4,5,7,8-四氢-6H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-6-基)丙腈(化合物147b)

实例139

(S)-2-((7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基)-6-(1-羟基丙-2-基)-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮(化合物148a)

根据一般合成方法，按照类似于上文所述的那些程序进行合成。任意指定的绝对立体化学结构。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ9.24(s,1H),8.99(s,1H),7.91(s,1H),7.79(d,J＝10.2Hz,1H),7.67(d,J＝7.2Hz,1H),7.38(s,1H),5.97(s,1H),5.70(s,1H),5.00(s,2H),4.78(t,J＝5.4Hz,1H),4.47(q,J＝6.7Hz,1H),4.31-4.30(m,2H),3.81-3.79(m,2H),3.48-3.40(m,4H),3.11-2.96(m,2H),1.93(s,3H),1.08(d,J＝6.9Hz,3H)。分析型HPLC保留时间1.095min。方法K。MS(ESI)[M+H]⁺＝518.2。

(R)-2-((7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基)-6-(1-羟基丙-2-基)-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮

(化合物148b)

实例140

(S)-2-((6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-6-(1-羟基丙-2-基)-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮(化合物149a)

根据一般合成方法，按照类似于上文所述的那些程序进行合成。任意指定的绝对立体化学结构。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ9.25(s,1H),9.00(s,1H),8.02(s,1H),7.93(s,1H),7.81(d,J＝10.1Hz,1H),7.76-7.57(m,2H),5.97(s,1H),5.28(s,2H),5.00(d,J＝2.8Hz,2H),4.78(t,J＝5.4Hz,1H),4.47(q,J＝6.6Hz,1H),3.80(t,J＝5.9Hz,2H),3.54-3.37(m,2H),3.17-2.83(m,2H),1.92(s,3H),1.08(d,J＝6.9Hz,3H)。分析型HPLC保留时间1.020min。方法K。MS(ESI)[M+H]+＝476.2。

(R)-2-((6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-6-(1-羟基丙-2-基)-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮(化合物149b)

实例141

N-(7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-5,6-二氢-11H-吡唑并[1,5-d][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-8-胺(化合物151)

根据一般合成方法，按照类似于上文所述的那些程序进行合成。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ9.37(s,1H),9.01(s,1H),8.56(s,1H),7.95(s,1H),7.81(d,J＝10.2Hz,1H),7.70(d,J＝7.1Hz,1H),7.41(s,1H),6.12(s,1H),5.59(s,2H),4.52-4.22(m,4H),3.90-3.62(s,3H),3.49-3.24(m,2H),1.95(d,J＝1.8Hz,3H)。分析型HPLC保留时间1.907min。方法K。MS(ESI)[M+H]⁺＝484.2。

实例142

2-((6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-5-氯异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮(化合物152)

根据一般合成方法，按照类似于上文所述的那些程序进行合成。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.56(s,1H),9.09(s,1H),8.16(s,1H),8.05-7.92(m,2H),7.60(s,1H),7.16(d,J＝8.2Hz,1H),6.06(s,1H),5.28(s,2H),4.98(d,J＝2.4Hz,2H),4.65-4.50(m,1H),3.85-3.68(m,2H),3.01(t,J＝5.9Hz,2H),1.83(s,3H),1.13(d,J＝6.8Hz,6H)。分析型HPLC保留时间1.211min。方法K。MS(ESI)[M+H]⁺＝476.2。

实例143

(R)-2-((6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-4-羟基-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮(化合物153a)

根据一般合成方法，按照类似于上文所述的那些程序进行合成。任意指定的绝对立体化学结构。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ9.31(s,1H),8.99(s,1H),8.00(s,1H),7.91(s,1H),7.79(d,J＝10.1Hz,1H),7.72-7.70(m,2H),6.21(s,1H),5.83(d,J＝6.2Hz,1H),5.29-5.27(m,2H),5.16(d,J＝15.0Hz,1H),4.79-4.69(m,2H),4.58-4.39(m,1H),3.88-3.49(m,2H),1.90(s,3H),1.13-1.10(m,6H)。分析型HPLC保留时间1.074min。方法K。MS(ESI)[M+H]⁺＝476.2。

(S)-2-((6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-4-羟基-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮(化合物153b)

实例144

(S)-2-(2-((6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-7-氧代-4,5,7,8-四氢-6H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-6-基)丙腈(化合物154a)

根据一般合成方法，按照类似于上文所述的那些程序进行合成。任意指定的绝对立体化学结构。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ9.28(s,1H),8.98(s,1H),8.00(s,1H),7.92(s,1H),7.79(d,J＝10.1Hz,1H),7.72-7.70(m,2H),6.01(s,1H),5.58-5.33(m,1H),5.26(s,2H),5.14-4.95(m,2H),4.05-3.98(m,2H),3.12-3.08(m,2H),1.90(s,3H),1.50(d,J＝7.2Hz,3H)。分析型HPLC保留时间1.120min。方法K。MS(ESI)[M+H]⁺＝471.2。

(R)-2-(2-((6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-7-氧代-4,5,7,8-四氢-6H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-6-基)丙腈(化合物154b)

实例145

2-((7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基)-6-(2-甲氧基乙基)-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮(化合物155)

根据一般合成方法，按照类似于上文所述的那些程序进行合成。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.23(s,1H),8.98(s,1H),7.90(s,1H),7.78(d,J＝10.1Hz,1H),7.67(d,J＝7.2Hz,1H),7.37(s,1H),5.99(s,1H),5.69(s,1H),5.00(s,2H),4.30(t,J＝4.4Hz,2H),3.96-3.78(m,2H),3.56(t,J＝5.4Hz,2H),3.45(t,J＝5.4Hz,2H),3.37-3.35(m,2H),3.26(s,3H),3.08-2.99(m,2H),1.92(s,3H)。分析型HPLC保留时间2.095min。方法K。MS(ESI)[M+H]+＝518.2。

实例146

2-((6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-6-(2-甲氧基乙基)-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮(化合物156)

根据一般合成方法，按照类似于上文所述的那些程序进行合成。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.25(s,1H),9.00(s,1H),8.02(s,1H),7.92(s,1H),7.80(d,J＝10.0Hz,1H),7.73-7.66(m,2H),5.99(s,1H),5.27(s,2H),5.00(s,2H),3.96-3.77(m,2H),3.56(t,J＝5.4Hz,2H),3.45(t,J＝5.4Hz,2H),3.26(s,3H),3.12-2.96(m,2H),1.92(s,3H)。分析型HPLC保留时间1.090min。方法K。MS(ESI)[M+H]⁺＝476.2。

实例147

N-(6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7,8-二氟异喹啉-3-基)-5,6-二氢-11H-咪唑并[1,2-a]吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-8-胺(化合物157)

根据一般合成方法，按照类似于上文所述的那些程序进行合成。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ9.53(s,1H),9.18(s,1H),8.04(s,1H),7.99(s,1H),7.72(s,1H),7.58(d,J＝6.0Hz,1H),7.22(s,1H),6.85(s,1H),6.08(s,1H),5.43(s,2H),5.33(s,2H),4.37-4.34(m,2H),3.22-3.15(m,2H),1.95(s,3H)。分析型HPLC保留时间1.803min。方法K。MS(ESI)[M+H]⁺＝459.2。

实例148

2-((6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-6-(2-羟基-2-甲基丙基)-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮(化合物158)

根据一般合成方法，按照类似于上文所述的那些程序进行合成。¹H NMR(300MHz,CD₃OD)δ8.95(s,1H),8.04(s,1H),7.83(s,1H),7.77(s,1H),7.67-7.64(m,2H),6.07(s,1H),5.12(s,2H),4.27-3.95(m,2H),3.52(s,2H),3.26–3.24(m,2H),2.06(s,3H),1.20(s,6H)。分析型HPLC保留时间1.940min。方法M。MS(ESI)[M+H]⁺＝490.2。

实例149

2-((6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-6-(2-羟基乙基)-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮(化合物159)

根据一般合成方法，按照类似于上文所述的那些程序进行合成。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.26(s,1H),9.00(s,1H),8.02(s,1H),7.93(s,1H),7.81(d,J＝10.0Hz,1H),7.72-7.70(m,2H),5.99(s,1H),5.28(s,2H),4.99(s,2H),4.79(t,J＝5.2Hz,1H),3.88(t,J＝5.2Hz,2H),3.54-3.46(m,4H),3.07(t,J＝5.2Hz,2H),1.92(s,3H)。分析型HPLC保留时间1.675min。方法K。MS(ESI)[M+H]⁺＝462.2。

实例150

2-((7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基)-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮(化合物160)

根据一般合成方法，按照类似于上文所述的那些程序进行合成。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.24(s,1H),8.98(s,1H),8.14(t,J＝6.0Hz,1H),7.89(s,1H),7.78(d,J＝10.4Hz,1H),7.66(d,J＝7.2Hz,1H),7.37(s,1H),5.99(s,1H),5.69(s,1H),4.89(s,2H),4.29(t,J＝4.0Hz,2H),3.55-3.51(m,2H),3.40-3.37(m,2H),2.98-2.96(m,2H),1.92(s,3H)。分析型HPLC保留时间1.782min。方法K。MS(ESI)[M+H]⁺＝460.1。

实例151

N-(7,8-二氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-5,6-二氢-11H-咪唑并[1,2-a]吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-8-胺(化合物161)

根据一般合成方法，按照类似于上文所述的那些程序进行合成。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ9.52(s,1H),9.17(s,1H),7.97(s,1H),7.55(d,J＝5.7Hz,1H),7.40(s,1H),7.22(s,1H),6.85(s,1H),6.08(s,1H),5.77-5.75(m,1H),5.44(s,2H),4.38-4.31(m,4H),3.40-3.37(m,2H),3.27-3.23(m,2H),1.95(s,3H)。分析型HPLC保留时间1.710min。方法K。MS(ESI)[M+H]⁺＝501.2。

实例152

2-((6-(1,8-二甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-6-甲基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮(化合物162)

根据一般合成方法，按照类似于上文所述的那些程序进行合成。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ9.27(s,1H),8.99(s,1H),7.91(s,1H),7.85-7.77(m,2H),7.70(d,J＝6.0Hz,1H),5.97(s,1H),4.97(s,2H),4.36-4.35(m,2H),3.83-3.79(m,2H),3.11-3.03(m,4H),2.94(s,3H),2.72(s,3H),2.11(s,3H)。分析型HPLC保留时间1.556min。方法K。MS(ESI)[M+H]⁺＝488.2。

实例153

N-(6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)-3-甲基-5,6-二氢-11H-咪唑并[1,2-a]吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-8-胺(化合物163)

根据一般合成方法，按照类似于上文所述的那些程序进行合成。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ8.94(s,1H),8.04(s,1H),7.82(s,1H),7.76(s,1H),7.68(d,J＝9.6Hz,1H),7.64(d,J＝6.8Hz,1H),6.67(s,1H),6.13(s,1H),5.44(s,2H),4.28-4.25(m,2H),3.36-3.32(m,2H),2.25(s,3H),2.06(s,3H)。分析型HPLC保留时间0.958。方法K。MS(ESI)[M+H]⁺＝455.2。

实例154

2-((6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-6-(2-(3-氟氮杂环丁烷-1-基)乙基)-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮(化合物164)

根据一般合成方法，按照类似于上文所述的那些程序进行合成。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.26(s,1H),9.00(s,1H),8.02(s,1H),7.92(s,1H),7.81(d,J＝8.0Hz,1H),7.71-7.70(m,2H),5.99(s,1H),5.28(s,2H),5.24-5.04(m,1H),4.99(s,2H),3.83(t,J＝4.0Hz,2H),3.62-3.54(m,2H),3.36-3.33(m,2H),3.16-3.04(m,4H),2.59(t,J＝4.0Hz,2H),1.92(s,3H)。分析型HPLC保留时间1.477min。方法K。MS(ESI)[M+H]⁺＝519.2。

实例155

2-((6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-6-(2-(3-羟基氮杂环丁烷-1-基)乙基)-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮(化合物165)

根据一般合成方法，按照类似于上文所述的那些程序进行合成。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.26(s,1H),9.00(s,1H),8.02(s,1H),7.92(s,1H),7.81(d,J＝10.1Hz,1H),7.74-7.64(m,2H),5.99(s,1H),5.35-5.20(m,3H),4.98(s,2H),4.15-4.12(m,1H),3.83(t,J＝6.0Hz,2H),3.55-3.51(m,2H),3.34-3.30(m,4H),3.06(t,J＝6.0Hz,2H),2.71-2.69(m,2H),1.92(s,3H)。分析型HPLC保留时间0.921min。方法K。MS(ESI)[M+H]⁺＝259.2。

实例156

N-(6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)-3,3-二甲基-5,6-二氢-3H,11H-[1,2,4]噁二唑并[4,3-a]吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-8-胺(化合物166)

根据一般合成方法，按照类似于上文所述的那些程序进行合成。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ9.34(s,1H),9.01(s,1H),8.01(s,1H),7.94(s,1H),7.82(d,J＝12Hz,1H),7.71-7.70(m,2H),6.05(s,1H),5.28(s,2H),5.00(s,2H),3.37-3.33(m,2H),3.12(t,J＝6.0Hz,2H),1.92(s,3H),1.29(s,6H)。分析型HPLC保留时间2.202min。方法K。MS(ESI)[M+H]⁺＝473.2。

实例157

(R)-2-((6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-6-(叔丁基)-4-氟-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮(化合物167a)

根据一般合成方法，按照类似于上文所述的那些程序进行合成。任意指定的绝对立体化学结构。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ9.44(s,1H),9.04(s,1H),8.03(s,1H),7.90(s,1H),7.83(d,J＝10.2Hz,1H),7.75(d,J＝7.3Hz,1H),7.72(s,1H),6.41(s,1H),5.92-5.76(m,1H),5.29(s,2H),5.22-4.85(m,2H),4.26-4.12(m,2H),1.93(s,3H),1.40(s,9H)。分析型HPLC保留时间1.172min。方法L。MS(ESI)[M+H]⁺＝492.1。

(S)-2-((6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-6-(叔丁基)-4-氟-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮(化合物167b)

根据一般合成方法，按照类似于上文所述的那些程序进行合成。任意指定的绝对立体化学结构。任意指定的绝对立体化学结构。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ9.44(s,1H),9.04(s,1H),8.03(s,1H),7.90(s,1H),7.83(d,J＝10.2Hz,1H),7.75(d,J＝7.3Hz,1H),7.72(s,1H),6.41(s,1H),5.92-5.76(m,1H),5.29(s,2H),5.22-4.85(m,2H),4.26-4.12(m,2H),1.93(s,3H),1.40(s,9H)。分析型HPLC保留时间1.177min。方法L。MS(ESI)[M+H]⁺＝492.1。

实例158

N-(6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-8-氟异喹啉-3-基)-5,6-二氢-11H-咪唑并[1,2-a]吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-8-胺(化合物168)

根据一般合成方法，按照类似于上文所述的那些程序进行合成。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ9.52(s,1H),9.14(s,1H),7.99(s,1H),7.94(s,1H),7.72(s,1H),7.49(s,1H),7.22(d,J＝1.2Hz,1H),7.04(d,J＝9.0Hz,1H),6.85(d,J＝1.2Hz,1H),6.11(s,1H),5.44(s,2H),5.28(s,2H),4.36(t,J＝6.0Hz,2H),3.25(t,J＝6.0Hz,2H),2.03(s,3H)。分析型HPLC保留时间0.997min。方法K。MS(ESI)[M+H]⁺＝441.2。

实例159

6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-3-((6-异丙基-7-氧代-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-2-基)氨基)异喹啉-7-腈(化合物169)

根据一般合成方法，按照类似于上文所述的那些程序进行合成。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ9.74(s,1H),9.13(s,1H),8.62(s,1H),8.04(s,1H),7.92(s,1H),7.74(s,1H),7.68(s,1H),6.04(s,1H),5.35(s,2H),5.01(s,2H),4.62-4.57(m,1H),3.79(t,J＝6.0Hz,2H),3.00(t,J＝6.0Hz,2H),1.93(s,3H),1.12(d,J＝6.6Hz,6H)。分析型HPLC保留时间1.236min。方法K。MS(ESI)[M+H]⁺＝467.2。

实例160

(+/-)-8-((6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7,8-二氟异喹啉-3-基)氨基)-5,6-二氢-11H-咪唑并[1,2-a]吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-6-醇(化合物170)

根据一般合成方法，按照类似于上文所述的那些程序进行合成。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ9.58(s,1H),9.19(s,1H),8.04(s,1H),8.00(s,1H),7.73(s,1H),7.59(d,J＝6.0Hz,1H),7.24(s,1H),6.84(s,1H),6.24(s,1H),5.99(d,J＝6.0Hz,1H),5.43(s,2H),5.33(s,2H),5.05(s,1H),4.50-4.34(m,2H),1.95(s,3H)。分析型HPLC保留时间1.678min。方法K。MS(ESI)[M+H]⁺＝475.2。

实例161

N-(5-(7-氟-3-((6-甲基-7-氧代-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-2-基)氨基)异喹啉-6-基)-4-甲基吡啶-3-基)乙酰胺(化合物171)

根据一般合成方法，按照类似于上文所述的那些程序进行合成。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ9.66(s,1H),9.28(s,1H),9.02(s,1H),8.62(s,1H),8.31(s,1H),7.94(s,1H),7.85(d,J＝10.2Hz,1H),7.79(d,J＝6.9Hz,1H),6.00(s,1H),4.99(s,2H),3.83(t,J＝6.0Hz,2H),3.05(t,J＝6.0Hz,2H),2.95(s,3H),2.12(s,3H),2.08(s,3H)。分析型HPLC保留时间1.039min。方法K。MS(ESI)[M+H]⁺＝474.2

实例162

N-(5-(7-氟-3-((6-甲基-7-氧代-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-2-基)氨基)异喹啉-6-基)-4-甲基吡啶-3-基)甲基磺酰胺(化合物172)

根据一般合成方法，按照类似于上文所述的那些程序进行合成。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.53(s,1H),9.31(s,1H),9.03(s,1H),8.55(s,1H),8.39(s,1H),7.95(s,1H),7.86(d,J＝10.4Hz,1H),7.82(d,J＝8.0Hz,1H),5.99(s,1H),4.99(s,2H),3.83(t,J＝5.6Hz,2H),3.12(s,3H),3.05(t,J＝5.6Hz,2H),2.95(s,3H),2.20(s,3H)。分析型HPLC保留时间1.117min。方法K。MS(ESI)[M+H]⁺＝510.2。

实例163

6-(7-氟-3-((6-甲基-7-氧代-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-2-基)氨基)异喹啉-6-基)-5-甲基苯并[d]噁唑-2(3H)-酮(化合物173)

根据一般合成方法，按照类似于上文所述的那些程序进行合成。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ11.73(s,1H),9.27(s,1H),9.00(s,1H),7.92(s,1H),7.80(d,J＝12.0Hz,1H),7.69(d,J＝6.0Hz,1H),7.26(s,1H),7.08(s,1H),5.99(s,1H),4.99(s,2H),3.83(t,J＝6.0Hz,2H),3.05(t,J＝6.0Hz,2H),2.96(s,3H),2.17(s,3H)。分析型HPLC保留时间1.299min。方法K MS(ESI)[M+H]⁺＝473.2。

实例164

2-((5-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基)-6-甲基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮(化合物174)

根据一般合成方法，按照类似于上文所述的那些程序进行合成。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.49(s,1H),9.08(s,1H),7.92(s,1H),7.81(d,J＝8.4Hz,1H),7.38(s,1H),7.16-7.12(m,1H),6.04(s,1H),4.97(s,2H),4.31(t,J＝4.0Hz,2H),3.83(t,J＝5.6Hz,2H),3.37-3.35(m,2H),3.06(t,J＝5.6Hz,2H),2.96(s,3H),1.94(s,3H)。分析型HPLC保留时间1.116min。方法K。MS(ESI)[M+H]⁺＝474.2。

实例165

2-((7-氟-6-(7-甲基-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-6-基)异喹啉-3-基)氨基)-6-甲基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮(化合物175)

根据一般合成方法，按照类似于上文所述的那些程序进行合成。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ12.79(s,1H),8.99(s,1H),8.81(s,1H),8.37(s,1H),8.24(s,1H),7.84-7.69(m,3H),6.05(s,1H),4.95(s,2H),3.85-3.75(m,2H),3.10-3.02(m,2H),3.00(s,3H),2.45(s,3H)。分析型HPLC保留时间1.061min。方法K。MS(ESI)[M+H]+＝457.2。

实例166

2-((6-(3,3-二氟-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮(化合物176)

根据一般合成方法，按照类似于上文所述的那些程序进行合成。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ9.29(s,1H),9.02(s,1H),8.16(t,J＝5.9Hz,1H),7.93(s,1H),7.83(d,J＝10.1Hz,1H),7.75(d,J＝7.1Hz,1H),7.63(s,1H),6.37(s,1H),6.00(s,1H),4.90(s,2H),3.79-3.69(s,2H),3.59-3.49(m,2H),2.98(t,J＝5.7Hz,2H),2.04(d,J＝1.7Hz,3H)。分析型HPLC保留时间2.120min。方法K。MS(ESI)[M+H]⁺＝496.2。

实例167

2-((7-氟-6-(8-甲基-4,4-二氧化-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噻嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基)-6-甲基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮(化合物177)

根据一般合成方法，按照类似于上文所述的那些程序进行合成。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ9.29(s,1H),9.02(s,1H),7.93(s,1H),7.90(s,1H),7.87(d,J＝4.9Hz,1H),7.80(d,J＝7.0Hz,1H).6.37(s,1H),6.00(s,1H),4.90(s,2H),3.87-3.77(m,4H),3.60-3.54(m,2H),3.08-3.02(m,2H),2.98(t,J＝5.7Hz,3H),2.04(d,J＝1.7Hz,3H)。分析型HPLC保留时间1.928min。方法K。MS(ESI)[M+H]+＝522.2。

实例168

2-((7-氟-6-(4-甲基-6-(S-甲基磺酰亚胺基)吡啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基)-6-甲基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮(化合物178)

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ9.13(s,1H),8.72(s,1H),8.26(s,1H),7.93-7.83(m,3H),6.04(s,1H),5.15(s,2H),3.94(dd,J＝6.8,4.9Hz,2H),3.56(s,3H),3.23-3.15(m,2H),3.10(s,3H),2.46(d,J＝1.1Hz,3H)。分析型HPLC保留时间2.251min。方法K。MS(ESI)[M+H]⁺＝494.1。

实例169

N-(6-(5-(氮杂环丁烷-3-基氨基)-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)-5,6-二氢-11H-咪唑并[1,2-a]吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-8-胺(化合物179)

根据一般合成方法，按照类似于上文所述的那些程序进行合成。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.32(s,1H),9.02(s,1H),7.96(s,1H),7.92(s,1H),7.83(t,J＝5.1Hz,2H),7.73(d,J＝7.1Hz,1H),7.21(d,J＝1.3Hz,1H),6.84(d,J＝1.2Hz,1H),6.05(s,1H),5.95(s,1H),5.42(s,2H),4.59-4.49(m,1H),4.40-4.28(m,4H),4.00(t,J＝8.5Hz,2H),3.28-3.20(m,3H),2.02(d,J＝1.7Hz,3H)。分析型HPLC保留时间1.476min。方法K。MS(ESI)[M+H]+＝496.2。

实例170

2-((7-氟-6-(4-甲基-5-(甲基氨基)吡啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基)-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮(化合物181)

根据一般合成方法，按照类似于上文所述的那些程序进行合成。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ9.26(s,1H),8.99(s,1H),8.14(t,J＝5.5Hz,1H),7.90(s,2H),7.80(t,J＝5.0Hz,2H),7.70(d,J＝7.2Hz,1H),5.97(s,1H),5.49(s,1H),4.88(s,2H),3.56-3.47(m,2H),2.95(t,J＝6.0Hz,2H),2.84(d,J＝4.6Hz,3H),1.93(s,3H)。分析型HPLC保留时间1.012min。方法K。MS(ESI)[M+H]⁺＝432.2

实例171

(+/-)-2-((6-(2,8-二甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮(化合物182)

根据一般合成方法，按照类似于上文所述的那些程序进行合成。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.89(s,1H),7.83(s,1H),7.61(d,J＝5.0Hz,2H),7.52(d,J＝9.6Hz,1H),5.99(s,1H),5.06(s,2H),4.45-4.38(m,1H),4.05-3.96(m,1H),3.75-3.58(m,3H),3.19-3.10(m,2H),2.03(s,3H),1.31(d,J＝6.4Hz,3H)。分析型HPLC保留时间1.124min。方法K。MS(ESI)[M+H]⁺＝474.2。

实例172

N-(7-氟-6-(9-甲基-1,2,3,4-四氢吡啶并[2,3-b][1,4]氧氮杂卓-8-基)异喹啉-3-基)-5,6-二氢-11H-咪唑并[1,2-a]吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-8-胺(化合物183)

根据一般合成方法，按照类似于上文所述的那些程序进行合成。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ9.29(s,1H),8.98(s,1H),7.91(s,1H),7.78(d,J＝10.1Hz,1H),7.68(d,J＝7.2Hz,1H),7.44(s,1H),7.20(d,J＝1.2Hz,1H),6.83(d,J＝1.2Hz,1H),6.04(s,1H),5.40(s,2H),5.14(s,1H),4.32(dd,J＝14.3,8.5Hz,4H),3.27-3.17(m,2H),3.42-3.33(m,2H),1.96(dd,J＝6.7,3.8Hz,5H)。分析型HPLC保留时间1.886min。方法K。MS(ESI)[M+H]⁺＝497.2。

实例173

(+/-)-2-((6-(3,8-二甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮(化合物184)

根据一般合成方法，按照类似于上文所述的那些程序进行合成。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ9.26(s,1H),8.99(s,1H),8.16(t,J＝5.9Hz,1H),7.90(s,1H),7.79(d,J＝10.2Hz,1H),7.67(d,J＝7.2Hz,1H),7.38(s,1H),6.00(s,1H),5.72(s,1H),4.90(s,2H),4.30(t,J＝6.1Hz,1H),3.65-3.48(m,2H),3.47-3.39(m,1H),3.05-2.95(m,3H),1.93(d,J＝1.9Hz,3H),1.37(d,J＝6.2Hz,3H)。分析型HPLC保留时间1.107min。方法K。MS(ESI)[M+H]+＝474.2。

实例174

(R)-2-((6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-4-羟基-4,6-二甲基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮(化合物185a)

根据一般合成方法，按照类似于上文所述的那些程序进行合成。任意指定的绝对立体化学结构。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ9.31(s,1H),8.99(s,1H),8.00(s,1H),7.90(s,1H),7.79(d,J＝10.1Hz,1H),7.69(d,J＝6.9Hz,2H),6.24(s,1H),5.71(s,1H),5.26(s,2H),5.10(d,J＝14.9Hz,1H),4.82(d,J＝14.9Hz,1H),3.96(d,J＝15.3Hz,1H),3.56(d,J＝15.4Hz,1H),2.98(s,3H),1.90(d,J＝1.7Hz,3H),1.45(s,3H)。分析型HPLC保留时间0.998min。方法K。MS(ESI)[M+H]⁺＝462.2。

(S)-2-((6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-4-羟基-4,6-二甲基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮(化合物185b)

根据一般合成方法，按照类似于上文所述的那些程序进行合成。任意指定的绝对立体化学结构。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ9.31(s,1H),8.99(s,1H),8.00(s,1H),7.91(s,1H),7.79(d,J＝10.2Hz,1H),7.69(d,J＝6.9Hz,2H),6.24(s,1H),5.71(s,1H),5.27(s,2H),5.10(d,J＝14.9Hz,1H),4.82(d,J＝15.0Hz,1H),3.96(d,J＝15.4Hz,1H),3.56(d,J＝15.4Hz,1H),2.98(s,3H),1.90(d,J＝1.7Hz,3H),1.45(s,3H)。分析型HPLC保留时间0.998min。方法K。MS(ESI)[M+H]⁺＝462.2。

实例175

2-((7-氟-6-(7-甲基-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-6-基)异喹啉-3-基)氨基)-6-甲基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-7(8H)-酮(化合物186)

根据一般合成方法，按照类似于上文所述的那些程序进行合成。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ13.64(s,1H),9.30(s,1H),9.04(s,1H),8.43(s,1H),8.36(d,J＝1.3Hz,1H),7.95(s,1H),7.87(dd,J＝8.7,6.4Hz,2H),6.00(s,1H),4.98(s,2H),3.82(t,J＝5.7Hz,2H),3.09-3.00(m,2H),2.95(s,3H),2.47(d,J＝1.3Hz,3H)。方法K。分析型HPLC保留时间2.522min。方法K。MS(ESI)[M+H]⁺＝457.2。

实例176

7-(7-氟-3-((6-甲基-7-氧代-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-2-基)氨基)异喹啉-6-基)-3,8-二甲基-2,3-二氢吡啶并[3,2-d]嘧啶-4(1H)-酮(化合物187)

根据一般合成方法，按照类似于上文所述的那些程序进行合成。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.27(s,1H),9.02(s,1H),7.98(s,1H),7.93(s,1H),7.85(d,J＝10.1Hz,1H),7.78(d,J＝7.1Hz,1H),6.65(d,J＝2.9Hz,1H),6.00(s,1H),4.99(s,2H),4.67(d,J＝2.7Hz,2H),3.83(t,J＝5.7Hz,2H),3.05(t,J＝5.7Hz,2H),3.00(s,3H),2.95(s,3H),2.01(d,J＝1.6Hz,3H)。分析型HPLC保留时间1.052min。方法K。MS(ESI)[M+H]⁺＝501.2。

实例177

(5-(3-((5,6-二氢-11H-咪唑并[1,2-a]吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-8-基)氨基)-7-氟异喹啉-6-基)-4-甲基吡啶-2-基)(亚氨基)(甲基)-l6-亚磺酰(sulfanone)(化合物188)

根据一般合成方法，按照类似于上文所述的那些程序进行合成。¹H NMR(400MHz，甲醇-d₄)δ9.01(s,1H),8.63(s,1H),8.18(s,1H),7.90(s,1H),7.77(dd,J＝16.6,8.4Hz,2H),7.54(d,J＝1.9Hz,1H),7.47(d,J＝1.9Hz,1H),6.22(s,1H),5.72(s,2H),4.62-4.55(m,2H),3.51-3.43(m,2H),3.36(s,3H),2.42(s,3H)。分析型HPLC保留时间1.982min。方法M。MS(ESI)[M+H]⁺＝503.3。

实例178

(+/-)-7-(3-((5,6-二氢-11H-咪唑并[1,2-a]吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂卓-8-基)氨基)-7-氟异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噻嗪4-氧化物(化合物189)

根据一般合成方法，按照类似于上文所述的那些程序进行合成。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ8.96(s,1H),7.90(s,1H),7.87(d,J＝7.4Hz,1H),7.71(t,J＝9.1Hz,2H),7.17(d,J＝1.4Hz,1H),6.94(d,J＝1.4Hz,1H),6.13(s,1H),5.49(s,2H),4.47-4.40(m,2H),3.86-3.79(m,2H),3.39-3.29(m,3H),2.95(s,1H),2.10(d,J＝1.6Hz,3H)。分析型HPLC保留时间1.037min。方法K。MS(ESI)[M+H]⁺＝515.5。

实例179

根据本文所述的一般合成方法以及类似于上文所述的类似程序合成示例性化合物。化合物(也缩写为“Cpd.”或“Compd.”)表A1中提供了编号、结构、名称、HPLC分析方法、保留时间(RT)和MS m/z。

表A1

生物实例

测试示例性式(I)化合物以评估化合物对HPK-1的抑制率。测定各种示例性化合物的K_i

实例B1：HPK1-FL HTRF酶测定(“HTRF”)

测定原理：

HPK-FL酶在1mM ATP和不同浓度的供试化合物存在下使Biotin-SLP-76底物磷酸化。使用Eu-anti-pSLP76 Ab和SA-XL665通过FRET检测产物。另请参见www.cisbio.com/HTRF以了解更多HTRF技术信息。

仪器：

Echo555化合物分配器

Agilent Bravo

Perkin Elmer Envision

最终测定条件：

HPK全长、T165E S171E： 0.125nM

Biotin-SLP76： 100nM

ATP： 1mM(ATP Km＝20μM)

Eu-anti-pSLP76： 2nM

SA-XL665： 8.3nM

预孵育时间： 30min

激酶反应时间： 60min

温度：环境温度

总体积： 12μL

ATP^app Km： 17.7μM

材料：

测定板：白色ProxiPlate 384 F(PerkinElmer目录号6008289)

激酶：HPK全长双突变体

底物：Biotin-SLP76

ATP：100mM ATP

BSG2％BSG

DMSO:DMSO(Sigma目录号34869-100ML)

反应缓冲液：H₂O/50mM HEPES，pH 7.5/10mM MgCl₂/2mM TCEP/0.01％Brij-35/0.01％BSG

检测混合物：Eu-anti-pSLP76/SA-XL665(Cisbio,#610SAXAC)

测定程序Ki测定：

向包含80nL化合物或DMSO斑点的384孔Proxiplate中加入4μL/孔激酶混合物。将混合物预孵育30分钟，然后加入4μL/孔底物混合物。将该溶液孵育60min，然后加入4μL/孔的检测混合物。将该溶液再孵育60min。然后将板加载到Perkin Elmer Envision上，并且在615nm和665nm下测量TR-FRET信号。利用665/620的比率计算各种浓度的化合物的％活性。

实例B2：HPK1 Lantha结合测定(“Lanth”)

材料：

程序：

I.化合物稀释：

使用Bravo液体处理平台在第2列和第13列中制备12.5μL/孔的5mM化合物(100X)并且在第3-12列、第14-23列以及化合物板的孔A1-H1和I24-P24中制备10μL/孔的DMSO，对待测化合物进行稀释。对于参比化合物，最高浓度为1mM。向板的孔J1-P1和A24-H24中加入10μL 2mM星形孢菌素。使用Bravo液体处理平台进行11点5倍化合物系列稀释。从板中将2.5μL溶液从第2列和第13列转移至第3列和第14列的10μL DMSO中，依此类推。将化合物板在2500rpm下离心1min。使用Echo液体处理器系统将80nL化合物从化合物板转移至测定板中。一个化合物板可制成两个测定板。将每个测定板密封并且储存于N₂柜中。

Ⅱ.测定条件：

使用以下测定浓度和时间：2nM HPK1、2nM Eu-Anti-GST Ab和15nM Tracer222，孵育时间60min。

III.HPK Lantha结合测定：

在结合测定中，使用Multidrop试剂分配器将4μL 2X HPK1和Eu-anti-GST抗体加入测定板的各个孔中。将溶液在23C培养箱中孵育1h。使用Multidrop试剂分配器向测定板的每个孔中加入4μL 2X Tracer-222。将溶液再次在23C培养箱中孵育1h。使用Envision读板仪读取测定结果，该读板仪采用以下参数：TR_FRET、340ex/615和665em；延迟时间：100微秒；积分时间：200微秒。

IV.分析：

在XL-fit中使用Morrison ki拟合模型分析化合物Ki

a.拟合＝(1-((((E+x)+(Ki*(1+(S/Kd))))-(((((E+x)+(Ki*(1+(S/Kd))))^2)-((4*E)*x))^0.5))/(2*E)))

res＝(y拟合)

b.参数：

E＝酶浓度

S＝Tracer222浓度，Kd＝Tracer222 Kd

报告的所有测量结果均使用相同的单位(μM)

在结合测定中对示例性化合物进行测试。测得的Ki值列于表B1中。

表B1

实例B3：人T细胞IL2诱导测定

测定原理：

抗CD3和抗CD28激活原代人泛T细胞中的TCR信号传导

导致IL-2启动子诱导。使用针对IL-2的捕获抗体和标记有SULFO标记的抗IL-2抗体，通过电化学发光检测细胞培养上清液中的分泌IL-2。

文献：

参见www.mesoscale.com以了解有关更多化学发光技术的信息。

测定程序：

在加湿培养箱中，在37℃和5％CO₂下，将原代人泛T细胞用不同浓度的供试化合物孵育30分钟。将细胞转移至预先涂有固定浓度的抗人CD3(分别确定各个供体批次)的板上，并加入可溶性抗人CD28(最终浓度＝1μg/mL)中。在加湿培养箱中，在37℃和5％CO₂刺激细胞4小时。将25μL上清液转移至预先涂有抗人IL-2抗体的MSD单点板。在轻轻振摇的条件下，将MSD平板在4℃下孵育过夜。用洗涤缓冲液将MSD板洗涤4次。加入以1:50稀释的SULFO标记的检测抗体，并且在室温下振摇孵育2小时。用洗涤缓冲液将MSD板洗涤4次，并且加入150μL2X MSD读取缓冲液。在MSD仪器上读数。将数据归一化至刺激/未处理的对照，以计算各种浓度的化合物的％活性。

材料：

冷冻原代人泛T细胞(StemCell Technologies#70024)

抗人CD3(OKT3克隆)(eBioscience#16-0037-81)

抗人CD28(CD28.2克隆)(BD#555725)

96孔人IL-2组织培养试剂盒(MSD#K151AHB-4)

仪器：

用于液体处理的Biomek FX(Beckman Coulter)

MSD SECTOR S 600(Meso Scale Discovery)

在人T细胞IL-2诱导测定中测试示例性式(I)化合物。表B2中提供了某些化合物相对于未经处理的细胞、经供试化合物处理的细胞中IL-2的增加百分比。

表B2

应当指出，术语“一”或“一种”实体是指该实体中的一个或多个；例如，“一种多肽”应理解为表示一种或多种多肽。因此，术语“一个”(或“一种”)，“一个或多个”和“至少一个”在本文中可以互换使用。

本文所用的所有技术和科学术语具有相同的意义。已经努力确保所用的数字(例如，数量、温度等)的准确性，但是应该考虑一些实验误差和偏差。

在整个说明书和权利要求书中，除非上下文另外要求，否则以非排他性的意义使用词语“包括”、“包含”和“含”。应当理解，本文所述的实施例包括“由……组成”和/或“基本上由……组成”实施例。

如本文所用，当提及值时，术语“约”意指涵盖指定量的以下变化：在一些实施例中±50％，在一些实施例中±20％，在一些实施例中±10％，在一些实施例中±5％，在一些实施例中±1％，在一些实施例中±0.5％，并且在一些实施例中±0.1％，因为此类变化适用于执行本发明所公开的方法或采用本发明所公开的组合物。

在提供数值范围的情况下，除非上下文另外明确规定，否则应理解为，介于该范围上限与下限之间的每个中间值的每十分之一以及所指定范围内的任何其他指定值或中间值，为本发明所涵盖。这些小范围的上限和下限可独立地包括在该较小范围内，并且也为本发明所涵盖，以所指定范围内任何明确排除的限制为准。在规定范围包括一个或两个限制的情况下，本发明还包括排除那些包括的限制中的一个或两个的范围。

受益于前文描述及相关附图中所呈现的教导内容，与这些发明有关的本领域的技术人员将想到本发明的许多修改形式和其他实施例。因此，应当理解，本发明不限于所公开的具体实施例，并且修改形式和其他实施例旨在涵盖于所附权利要求书的范围内。尽管本文采用了特定的术语，但这些术语仅在通用和描述性的意义上使用，而非出于限制的目的。

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