一种独一味提取物纳米制剂的制备方法
阅读说明：本技术 一种独一味提取物纳米制剂的制备方法 (Preparation method of lamiophlomis rotata extract nanometer preparation ) 是由 胡志文 于 2021-08-05 设计创作，主要内容包括：本发明的目的在于提供一种独一味提取物纳米制剂及其制备方法,本发明独一味提取物纳米制剂,按重量份数组分包括以下物质：独一味提取物1份～5份、卵磷脂6份～10份、甘油酯5份～8份、聚山梨酯80 1份-3份、聚环氧乙烷-聚环氧丙烷-聚环氧乙烷三嵌段共聚物1份～3份、冻干保护剂1份～3份,通过本发明制备方法得到的纳米制剂具备缓解缓解慢性疼痛的功效。(The invention aims to provide a lamiophlomis rotata extract nanometer preparation and a preparation method thereof, and the lamiophlomis rotata extract nanometer preparation comprises the following substances in parts by weight: 1-5 parts of lamiophlomis rotata extract, 6-10 parts of lecithin, 5-8 parts of glyceride, 801-3 parts of polysorbate, 1-3 parts of polyethylene oxide-polypropylene oxide-polyethylene oxide triblock copolymer and 1-3 parts of freeze-drying protective agent.)
技术领域
本发明属于中药领域，具体地，涉及一种独一味提取物纳米制剂的制备方法。
背景技术
疼痛为主观的感受，是一种复杂的生理心理活动，疼痛分为急性疼痛和慢性疼痛，其中慢性疼痛不仅仅在于疼痛本身，在慢性疼痛的过程中，长期的疼痛刺激会促进中枢神经，导致中枢神经系统发生病理性重构，导致病情加重。
针对于慢性疼痛可以分为伤害感受性疼痛以及神经源性疼痛，伤害感受性疼痛是完整的伤害感受器感受到有害刺激引起的反应；而神经源性疼痛一半当神经纤维受损或神经系统发生异常改变时会发生自发冲动，将痛感投射到神经起源部分。
治疗慢性疼痛为当前的一大难题，现有的用于治疗慢性疼痛的药物一般为阿片类和非甾体抗炎药物，但是阿片剂会引起患者恶心、便秘、意识错乱，还存在成瘾性的问题，而非甾体类抗炎药物阵痛效果不佳，并且对肠胃有一定副作用；并且市面上多数产品并不针对于慢性疼痛，对患者只能适度缓解疼痛甚至可能无效。
独一味为唇形科独一味属植物的干燥全草，主要分布于中国青海、甘肃、四川等省，为藏族和蒙古族等民间传统常用草药，味苦、性微寒、入肝经，具有活血、行淤、消肿、止血、镇痛的作用，主要成分含有环烯醚萜苷类、苯乙醇苷及黄酮苷等成分。目前，对于独一味现有专利技术中已公开多种剂型包括颗粒剂、胶囊剂、分散片、泡腾片、软胶囊的制备工艺，然而以上所有剂型都集中利用了独一味的苷类物质药理作用。对于具有很好的止血、促凝血、镇痛作用的如环烯醚萜类的山栀苷甲酯、8-O-乙酰山栀苷甲酯等脂溶性成分，虽然在医学领域展现出了良好的临床应用前景，但因为其水溶性差，口服吸收差，生物利用度也较低，限制了其进一步临床开发的可能。
发明内容
鉴于现有技术中存在的问题，本发明的目的在于提供一种独一味提取物纳米制剂及其制备方法，本发明得到的独一味提取物纳米制剂可够大幅缓解慢性疼痛。
为了实现上述目的，本发明提供以下技术方案
一种独一味提取物纳米制剂，按重量份数组分包括以下物质：独一味提取物1份～5份、卵磷脂6份～10份、甘油酯5份～8份、聚山梨酯80 1份-3份、聚环氧乙烷-聚环氧丙烷-聚环氧乙烷三嵌段共聚物1份～3份、冻干保护剂1份～3份。
优选地，所述卵磷脂为大豆卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂或磷脂酰胆碱中的任意一种。
优选地，所述甘油酯为单硬脂酸甘油酯、双硬脂酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯或月桂酸甘油酯中的任意一种。
优选地，所述冻干保护剂为甘露醇、海藻糖和葡萄糖中的任意一种。
一种制备独一味提取物纳米制剂的制备方法，包括以下步骤：
S1、制备独一味粉末：取独一味，粉碎，过筛得到独一味粉末；
S2、制备独一味提取物：以乙酸乙酯作为溶剂对独一味粉末进行亚临界萃取，独一味粉末与乙酸乙酯按投料比为1g:1mL～1g:3mL，亚临界提取温度为25℃～35℃，提取时间为60min～80min，提取压力为18MPa～22MPa，减压浓缩去除乙酸乙酯，得独一味提取物；
S3、制备独一味提取物纳米混悬液：将甘油酯和卵磷脂加入到乙酸乙酯中，待全部溶解后，加入独一味提取物，超声使其溶解均匀，得独一味提取物油相，将独一味提取物油相加入到含聚环氧乙烷-聚环氧丙烷-聚环氧乙烷三嵌段共聚物及聚山梨酯80的水相中，在温度60℃～80℃水浴条件下磁力搅拌1h～2h，再用超声细胞粉碎仪探头超声30min～50min，去除乙酸乙酯，冷却后，过滤，得独一味提取物纳米混悬液；
S4、制备纳米干混悬剂：独一味提取物纳米混悬液加入冻干保护剂，冷冻干燥，得独一味提取物纳米干混悬剂。
先制备独一味粉末，得到的独一味粉末不仅方便于后续的制备，还可以进行水提制成干膏后与其他辅料配合制成独一味颗粒或独一味片；
对独一味粉末进行亚临界萃取可得到独一味提取物，在独一味提取物中包含有高浓度的环烯醚萜类的山栀苷甲酯、8-O-乙酰山栀苷甲酯及黄酮类的木犀草素、芹菜素和槲皮素，对缓解慢性疼痛起到关键作用；
使用卵磷脂、甘油酯、聚山梨酯80及聚环氧乙烷-聚环氧丙烷-聚环氧乙烷三嵌段共聚物制备纳米悬浮液，再在特定的温度下磁力搅拌，再通过超声细胞粉碎，有效减小纳米粒粒径，使其分散均匀；
之后，利用冻干技术将纳米混悬液冻干，可以增加纳米混悬液化学和物理稳定性，因冻干保护剂的加入可以降低水的渗透活性、结晶作用，纳米粉的聚集和获得产品干燥后更好的再分散性，延长了药物保存的稳定性。
优选地、所述S1、制备独一味粉末具体为：取独一味粉碎，过筛40目筛，得到独一味粉末；
所述S2、制备独一味提取物具体为：对独一味粉末进行回流提取，采用的溶剂为乙醇，收集经过回流提取后得到的独一味沉淀及独一味提取液；
以乙酸乙酯作为溶剂对沉淀进行亚临界萃取，独一味粉末与乙酸乙酯按投料比为1g:1mL～1g:3mL，亚临界提取温度为25℃～35℃，提取时间为60min～80min，提取压力为18MPa～22MPa，减压浓缩去除乙酸乙酯，与独一味提取液混合，得到独一味提取物。
独一味粉末过40目筛可以保证后续得到独一味提取液中有效成分的浓度；
对独一味粉末进行回流提取，其得到的独一味提取液中包含大量有效成分，在通过对沉淀进行亚临界萃取尽可能得到独一味粉末中的有效成分，最终得到独一味提取物。
优选地，所述对独一味粉末进行回流提取具体为：将独一味粉末在pH为9的氢氧化钙溶液配置的50％乙醇溶液中浸泡不小于12h；
浸泡后进行回流提取，提取次数为三次。
限定在pH为9的氢氧化钙溶液配置的50％乙醇溶液中浸泡不小于12h，保证独一味总黄酮在独一味提取物液中，方便后续处理。
优选地，收集经过回流提取后得到的独一味沉淀及独一味提取液后，所述方法包括以下步骤：
S21、取独一味提取液，蒸去乙醇，得到独一味浓缩物，将独一味浓缩物用等体积的石油醚萃取，搅拌2-5min、静止5-10min，重复搅拌-静置5次，分层后分离醚相及水相，将得到的水相重复上述萃取工序，重复3-4次，将得到的醚相混合蒸去石油醚，得到去总黄酮独一味提取物；
S22、将S21中最终得到的水相使用树脂吸附，得到独一味总黄酮；
S23、以乙酸乙酯作为溶剂对沉淀进行亚临界萃取，沉淀与乙酸乙酯按投料比为1g:1mL～1g:3mL，亚临界提取温度为25℃～35℃，提取时间为60min～80min，提取压力为18MPa～22MPa，减压浓缩去除乙酸乙酯，与去总黄酮独一味提取物混合得到独一味提取物。
通过去除总黄酮，是的最终得到的独一味提取物中对于缓解疼痛的有效成分浓度更高。
有益效果：
1)本发明所用到的纳米粒载药基质，均为生理相容性的可生物降解的材料，安全、无刺激性。方中所用到的基质，卵磷脂起到稳定粒子作用；
乳化剂甘油酯具有增溶作用，可提高独一味脂溶性成分在油相中的溶解度，又使油相与水相有一定的互溶性，能够在纳米粒表面形成一层乳化膜，将独一味脂溶性成分包裹其中，延缓药物的泄露，促进吸收；
表面活性剂聚环氧乙烷-聚环氧丙烷-聚环氧乙烷三嵌段共聚物吸附于脂质纳米粒表面，以使脂质纳米粒达到缓释的目的，再通过独一味的有效成分最终实现缓解慢性疼痛的功效。
2)本发明提供的制备方法，先制备独一味粉末，得到的独一味粉末不仅方便于后续的制备，还可以水提制备成干膏后与其他辅料配合制成独一味颗粒或独一味片；
对独一味粉末进行亚临界萃取可得到独一味提取物，在独一味提取物中包含有高浓度的环烯醚萜类的山栀苷甲酯、8-O-乙酰山栀苷甲酯及黄酮类的木犀草素、芹菜素和槲皮素，对缓解慢性疼痛起到关键作用；
使用卵磷脂、甘油酯、聚山梨酯80及聚环氧乙烷-聚环氧丙烷-聚环氧乙烷三嵌段共聚物制备纳米悬浮液，再在特定的温度下磁力搅拌，再通过超声细胞粉碎，有效减小纳米粒粒径，使其分散均匀；
之后，利用冻干技术将纳米混悬液冻干，可以增加纳米混悬液化学和物理稳定性，因冻干保护剂的加入可以降低水的渗透活性、结晶作用，纳米粉的聚集和获得产品干燥后更好的再分散性，延长了药物保存的稳定性。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案及优点更加清楚，下面将结及本发明实施例中，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
一种独一味纳米制剂，按重量份数由以下物质组成：独一味提取物1份、卵磷脂6份、甘油酯5份、聚山梨酯80 1份、聚环氧乙烷-聚环氧丙烷-聚环氧乙烷三嵌段共聚物3份、冻干保护剂3份；
独一味纳米制剂的制备方法步骤为：
S1、制备独一味粉末：取独一味，粉碎，过筛40目筛得到独一味粉末；
S2、制备独一味提取物：以乙酸乙酯作为溶剂对独一味粉末进行亚临界萃取，独一味与乙酸乙酯按投料比为1g:1mL，亚临界提取温度为25℃，提取时间为60min，提取压力为18MPa，减压浓缩去除乙酸乙酯，得独一味提取物；
S3、制备独一味提取物纳米混悬液：将甘油酯和卵磷脂加入到乙酸乙酯中，待全部溶解后，加入独一味提取物，超声使其溶解均匀，得独一味提取物油相，将独一味提取物油相加入到含聚环氧乙烷-聚环氧丙烷-聚环氧乙烷三嵌段共聚物及聚山梨酯80的水相中，在温度60℃水浴条件下磁力搅拌1，再用超声细胞粉碎仪探头超声30min，去除乙酸乙酯，冷却后，过滤，得独一味提取物纳米混悬液；
S4、制备纳米干混悬剂：独一味提取物纳米混悬液加入冻干保护剂，冷冻干燥，得独一味提取物纳米干混悬剂。
所述冻干保护剂为甘露醇。
所述卵磷脂为氢化大豆卵磷脂。
所述甘油酯为单硬脂酸甘油酯。
实施例2
一种独一味纳米制剂，按重量份数由以下物质组成：独一味提取物5份、卵磷脂10份、甘油酯8份、聚山梨酯80 3份、聚环氧乙烷-聚环氧丙烷-聚环氧乙烷三嵌段共聚物3份、冻干保护剂3份；
制备方法与制备条件与实施例1一致。
所述冻干保护剂为海藻糖。
所述卵磷脂为磷脂酰胆碱。
所述甘油酯为双硬脂酸甘油酯。
实施例3
一种独一味纳米制剂，按重量份数由以下物质组成：独一味提取物1份～5份、卵磷脂8、甘油酯5份、聚山梨酯80 2份、聚环氧乙烷-聚环氧丙烷-聚环氧乙烷三嵌段共聚物2份、冻干保护剂3份；
制备方法与制备条件与实施例1一致。
所述卵磷脂为大豆卵磷脂。
所述甘油酯为月桂酸甘油酯。
所述冻干保护剂为葡萄糖。
实施例4
一种独一味纳米制剂组成物质与实施例3一致。
独一味纳米制剂的制备方法步骤为：
S1、制备独一味粉末具体为：取独一味粉碎，过筛40目筛，得到独一味粉末；
S2、制备独一味提取物具体为：对独一味粉末进行回流提取，采用的溶剂为乙醇，将独一味粉末在pH为9的氢氧化钙溶液配置的50％乙醇溶液中浸泡不小于12h，浸泡后进行回流提取，提取次数为三次，收集经过回流提取后得到的独一味沉淀及独一味提取液；
以乙酸乙酯作为溶剂对沉淀进行亚临界萃取，独一味与乙酸乙酯按投料比为1g:2mL，亚临界提取温度为30℃，提取时间为70min，提取压力为20MPa，减压浓缩去除乙酸乙酯，与独一味提取物液混合，得到独一味提取物；
S3、制备独一味提取物纳米混悬液：将甘油酯和卵磷脂加入到乙酸乙酯中，待全部溶解后，加入独一味提取物，超声使其溶解均匀，得独一味提取物油相，将独一味提取物油相加入到含聚环氧乙烷-聚环氧丙烷-聚环氧乙烷三嵌段共聚物及聚山梨酯80的水相中，在温度60℃水浴条件下磁力搅拌1，再用超声细胞粉碎仪探头超声30min，去除乙酸乙酯，冷却后，过滤，得独一味提取物纳米混悬液；
S4、制备纳米干混悬剂：独一味提取物纳米混悬液加入冻干保护剂，冷冻干燥，得独一味提取物纳米干混悬剂。
实施例5
一种独一味纳米制剂组成物质与实施例3一致。
独一味纳米制剂的制备方法步骤为：
S1、制备独一味粉末具体为：取独一味粉碎，过筛40目筛得到独一味粉末；
S20、对独一味粉末进行回流提取，采用的溶剂为乙醇，收集经过回流提取后得到的独一味沉淀及独一味提取液；
S21、取独一味提取液，蒸去乙醇，得到独一味浓缩物，将独一味浓缩物用等体积的石油醚萃取，搅拌2min、静止5min，重复搅拌-静置5次，分层后分离醚相及水相，将得到的水相重复上述萃取工序，重复4次，将得到的醚相混合蒸去石油醚，得到去总黄酮独一味提取物；
S22、将S21中最终得到的水相使用树脂吸附，得到独一味总黄酮，其具体操作为以下步骤：
S221、树脂预处理：将新的大孔树脂使用95乙醇浸泡24h，湿法装柱，然后再使用95乙醇缓慢洗脱2-4体积直至洗出液中加蒸馏水无白色浑浊现象，保持液面高于树脂，浸泡过夜，然后再使用蒸馏水洗脱至洗脱液无醇味；
S222、使用预处理后的大孔树脂对S21中最终得到的水相进行吸附；
S23、以乙酸乙酯作为溶剂对沉淀进行亚临界萃取，沉淀与乙酸乙酯按投料比为1g:2mL，亚临界提取温度为30℃，提取时间为70min，提取压力为20MPa，减压浓缩去除乙酸乙酯，与去总黄酮独一味提取物，得到独一味提取物；
S3、制备独一味提取物纳米混悬液：将甘油酯和卵磷脂加入到乙酸乙酯中，待全部溶解后，加入独一味提取物，超声使其溶解均匀，得独一味提取物油相，将独一味提取物油相加入到含聚环氧乙烷-聚环氧丙烷-聚环氧乙烷三嵌段共聚物及聚山梨酯80的水相中，在温度60℃水浴条件下磁力搅拌1，再用超声细胞粉碎仪探头超声30min，去除乙酸乙酯，冷却后，过滤，得独一味提取物纳米混悬液；
S4、制备纳米干混悬剂：独一味提取物纳米混悬液加入冻干保护剂，冷冻干燥，得独一味提取物纳米干混悬剂。
对比例1
对比例1与实施例5的区别仅在于未添加聚山梨酯，其他制备方法与制备条件与实施例5一致。
对比例2
对比例2与实施例5的区别仅在于未添加聚环氧乙烷-聚环氧丙烷-聚环氧乙烷三嵌段共聚物，其他制备方法与制备条件与实施例5一致。
对比例3
对比例3与实施例5的区别仅在于，在步骤S23具体为：以乙酸乙酯作为溶剂对沉淀进行亚临界萃取，沉淀与乙酸乙酯按投料比为1g:2mL，亚临界提取温度为30℃，提取时间为70min，提取压力为20MPa，减压浓缩去除乙酸乙酯，得到独一味提取物。
对比例4
对比例4与实施例5的区别仅在于，在步骤S23具体为：将独一味总黄酮作为独一味提取物。
动物药效考察
福尔马林疼痛检测
取合格大鼠110只，随机分成11组，即空白(赋型剂)对照组、独一味对照组、实施例1-5组，对比例1-4组，采用注入方法为灌胃，给药量为0.1g/kg。
将空白(赋型剂)对照组大鼠，适应环境3天，实验前禁食12h，放置于透明观察笼中适应环境15min，待静息后，于大鼠右后足背皮下注射5％福尔马林溶液10μl，随后立即放回观察笼中观察，每10min观察一次，记录每10分钟内大鼠侧足自发性缩足或抖足次数，共记录60min；
将实施例1-5及对比例1-4组大鼠及独一味对照组大鼠，适应环境3天，实验前禁食12h，福尔马林致痛前30min，实施例1-5及对比例1-4组大鼠分别灌胃给予生理盐水以及对应的独一味纳米制剂，独一味对照组大鼠给予生理盐水以及实施例5中得到的独一味提取物，放置于透明观察笼中适应环境15min，待静息后，于大鼠右后足背皮下注射5％福尔马林溶液10μl，随后立即放回观察笼中观察，每10min观察一次，记录每10分钟内大鼠侧足自发性缩足或抖足次数，共记录60min。
实验结果见下表1
表1
见表1，由实施例1-5与空白对照对比可见，在给福尔马林20min后，均对疼痛有明显缓解；
其中实施例1-3在1-20min无明显缓解疼痛效果，实施例4-5自1-10min开始即有明显的效果；
由实施例4与实施例3对比可见对独一味粉末进行回流提取，然后对沉淀进行亚临界萃取后与独一味提取液混合后得到的独一味提取物效果要明显好于直接将独一味粉末进行亚临界萃取，通过回流提取得到独一味提取液中包含纯度更高的有效物质，而得到沉淀再一次进行亚临界萃取能够得到回流提取无法提取的有效物质，尽可能的利用独一味；
由实施例5与实施例4对比可见，在对独一味提取液进一步处理，去除掉总黄酮后，在1-20min之内的缓解疼痛效果更为明显，而分离出的独一味总黄酮在止血等其他领域具有很好的功效，实施例5中的方案不仅提高了缓解疼痛的起效时间，其副产物总黄酮同样可以应用于其他药物的配置；
由对比例1-2与实施例5对比可见，如果未使用聚山梨酯或聚环氧乙烷-聚环氧丙烷-聚环氧乙烷三嵌段共聚物(P123)其缓解疼痛效果起效慢，且缓解程度远不及实施例5，由此可见聚山梨酯与聚环氧乙烷-聚环氧丙烷-聚环氧乙烷三嵌段共聚物对独一味有效组分的释放起到关键作用；
由对比例3与实施例5对比可见，对比例3中1-30min基本无缓解疼痛效果，30min后起效，但是缓解疼痛效果远远低于实施例5，由此可见沉淀存在一定量的有效成分，但是缓解疼痛效果很有限；
由对比例4与实施例5对比可见，对比例4基本无缓解疼痛效果，即独一味总黄酮对于缓解疼痛基本无效，再参考实施例5与实施例4的对比结果实施例5中独一味提取物含缓解疼痛相关的成分最高。
由实施例5与独一味对照组对比可见，直接灌入独一味提取物在1-30min无明显效果，并在50min后效果开始失效，可见通过实施例5的独一味缓解疼痛快速，高效、持久。
最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神及范围。
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