含有抗氧化剂丁基羟基茴香醚的片剂稳定性无损检测方法
阅读说明：本技术 含有抗氧化剂丁基羟基茴香醚的片剂稳定性无损检测方法 (Nondestructive testing method for stability of tablet containing antioxidant butyl hydroxy anisole ) 是由 王欣雨 周新波 裘雅渔 胡秀荣 俞卡茜 方伟杰 高建青 于 2020-11-05 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种含有抗氧化剂丁基羟基茴香醚的片剂稳定性无损检测方法,(1)将含有抗氧化剂丁基羟基茴香醚的片剂成药样品整片放入EPR样品管并称重；(2)将装有片剂成药的EPR样品管放入EPR谐振腔,并保证样品处于谐振腔中心；(3)调谐后对片剂成药进行检测；(4)将所得谱图二次积分,将所得二次积分面积采用样品质量校正,得样品稳定性参数,根据样品稳定性参数即可进行判断。本发明首次将EPR技术应用于对含有抗氧化剂丁基羟基茴香醚的片剂成药的稳定性检测,拓展了EPR技术的应用范围；步骤简单,实现了对含有抗氧化剂丁基羟基茴香醚的片剂成药稳定性的无损、高效检测,且灵敏度高。(The invention discloses a nondestructive testing method for the stability of a tablet containing an antioxidant butylated hydroxyanisole, which comprises the following steps of (1) putting a tablet forming sample whole tablet containing the antioxidant butylated hydroxyanisole into an EPR sample tube and weighing the sample whole tablet; (2) putting an EPR sample tube filled with the tablet finished medicine into an EPR resonant cavity, and ensuring that the sample is positioned in the center of the resonant cavity; (3) detecting the tablet after tuning; (4) and (4) performing secondary integration on the obtained spectrogram, correcting the obtained secondary integration area by adopting the sample quality to obtain a sample stability parameter, and judging according to the sample stability parameter. The invention applies the EPR technology to the stability detection of the tablet finished medicine containing the antioxidant butyl hydroxy anisole for the first time, and expands the application range of the EPR technology; the method has simple steps, realizes the nondestructive and efficient detection of the stability of the tablet finished product containing the antioxidant butyl hydroxy anisole, and has high sensitivity.)
技术领域
本发明涉及药物稳定性检测技术领域，尤其是涉及含有抗氧化剂丁基羟基茴香醚的片剂稳定性无损检测方法。
背景技术
药物的开发面临诸多技术挑战，尤其对于结构不稳定的药物，容易发生光、湿、热等诱导降解。药物的稳定性不仅会影响其药效，还可能产生安全性问题。影响药物稳定性的因素包括药物自身结构、药物分子之间相互作用以及其物理型态。通过原料药和药物制剂的工艺优化以保持其稳定性是药物成功研发的关键。因此，药物研发机构投入了大量的人力、财力、物力来研究药物原料、制剂在生产和贮存过程中的稳定性。
现在药物稳定性的常用分析方法是高效液相色谱等色谱方法，但是色谱条件对检测结果影响很大，例如药物被氧化失去一个H原子变为自由基，并且脱H原子的位点不单一，对其直接分离分析相当困难，每种药品都需要摸索不同的溶剂配比和检测参数，做定量标准曲线等一系列工作，因此采用色谱法分离鉴定药物稳定性难度大、耗时长、难拓展，如何简便、快速判断药物的稳定性现在还是一个难题。另外，现有的色谱法需要对成药样品进行研磨、溶解等一系列操作，可能导致样品二次降解。因此开发一种无损、高效的新型药物稳定性研究方法，非常具有实用价值。
电子顺磁共振波谱（EPR）是唯一一种能够直接检测自由基信号的技术，通过对EPR谱线的研究，可以获得有关自由基的状态及含量等方面的信息，因此EPR技术在物理和化学等领域都有广泛应用。但是药物降解产生的自由基非常活泼，难以利用EPR检测，因此迄今为止，还并未见将EPR技术应用在药物稳定性研究中的相关报道。
发明内容
本发明的发明目的是提供了一种含有抗氧化剂丁基羟基茴香醚的片剂稳定性无损检测方法，将EPR检测技术应用于含有抗氧化剂丁基羟基茴香醚的片剂成药稳定性检测，具有步骤简单，检测灵敏度高、快速定量检测、无损检测等优点。
为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：含有抗氧化剂丁基羟基茴香醚的片剂稳定性无损检测方法，包括以下步骤：
（1）将含有抗氧化剂丁基羟基茴香醚的片剂成药样品整片放入EPR样品管并称重，重量记为m，单位以g计。目前对片剂成药进行稳定性检测时都要将片剂成药研磨成粉，研磨成粉极易造成样品降解变质，影响检测结果，同时研磨又浪费时间；而又因为药物降解产生的自由基非常活泼，难以利用EPR检测，因此没有将EPR技术应用在药物稳定性测定中的相关报道；而本发明的发明人在无意中发现，可以利用EPR技术对含有抗氧化剂丁基羟基茴香醚的片剂成药的稳定性进行快速、定量、无损化检测，直接对片剂成药进行检测，无需进行研磨粉碎，大大提高了检测效率；究其原因，可能是抗氧化剂丁基羟基茴香醚能提供有效氢离子，供自由基接受形成稳定的自由基，从而能被EPR检测到（利用EPR检测抗氧化剂丁基羟基茴香醚与变质的自由基反应以后的这个更稳定的自由基来判断其稳定性）。
（2）将装有片剂成药的EPR样品管放入EPR谐振腔，并保证样品处于谐振腔中心。
（3）调谐后对片剂成药进行检测，检测参数设定为：检测功率为2~20mW，中心磁场为2000~4000G，扫场宽度为400~4000G，微波调频为100kHz，微波调幅为1~2G，时间常数为40.96~163.84msec，转换时间20~80msec，扫描点数1000~4000个，增益102~105，扫描次数1~20次。
（4）将所得谱图二次积分，二次积分面积记为s，检测功率记为p，增益记为r，扫描次数记为n，样品质量记为m，将所得二次积分面积采用样品质量校正，得样品稳定性参数，计算公式为：样品稳定性参数=s/（n×p×r×m×104）。样品稳定性参数越低，说明含有抗氧化剂丁基羟基茴香醚的片剂成药稳定性越好；样品稳定性参数越高，说明含有抗氧化剂丁基羟基茴香醚的片剂成药稳定性越差。
作为优选，步骤（1）中，含有抗氧化剂丁基羟基茴香醚的片剂成药样品为辛伐他汀片、洛伐他汀片或恩杂鲁胺片。
作为优选，步骤（1）中，所述EPR样品管为石英材质制成的圆底管或者平底管，EPR样品管的直径为10mm。本发明对EPR样品管的材质要求很高，额外的背景信号会影响检测结果，EPR样品管为石英材质制成，不会带来额外的背景信号，对检测结果无影响；直径为10mm，能放下片剂成药，且能放入EPR谐振腔内。
作为优选，步骤（1）中，片剂成药样品在EPR样品管中的堆放高度为5±0.2cm。片剂成药样品在EPR样品管中的堆放高度为5±0.2cm，以保证样品在EPR谐振腔的各个高度都有分布，保证吸收效率一致，检测结果也更为精确；过高或过低，样品吸收能量不一致，检测得到的结果准确率极低。
作为优选，步骤（3）中，检测功率为20mW。常规EPR检测的功率为2mW，提高测试功率可以增强信号强度，但是功率过高信号容易出现饱和，经过尝试，20mW是较好的功率，EPR测试中，调幅越高，信号越强，但是分辨率越差，由于本发明只需定性检测并确定样品稳定性参数，因此可以适当地提高调幅，同时配合延长扫描时间常数以及信号叠加，从而达到提高测试灵敏度及信号强度的效果，使得药物样品中自由基杂质含量极低，也能得到清晰易分析的谱图。
作为优选，步骤（3）中，中心磁场为3000G，扫场宽度为2000G。
作为优选，步骤（3）中，微波调幅为2G。
作为优选，步骤（3）中，时间常数为80.96msec，转换时间40msec，扫描点数2000个，扫描次数16次。
因此，本发明具有如下有益效果：首次将EPR技术应用于对含有抗氧化剂丁基羟基茴香醚的片剂成药的稳定性检测，拓展了EPR技术的应用范围；只要在固定装样高度后称重，根据样品质量和EPR谱图的二次积分面积即可计算得到样品的稳定性参数，通过稳定性参数大小即可判断含有抗氧化剂丁基羟基茴香醚的片剂成药的稳定性，步骤简单，实现了对含有抗氧化剂丁基羟基茴香醚的片剂成药稳定性的无损、高效检测，且灵敏度高。
附图说明
图1是对照例1中的EPR检测谱图。
图2 是对照例2中的EPR检测谱图。
图3是实施例1中的EPR检测谱图。
图4是对比例1中的EPR检测谱图。
图5是实施例2中的EPR检测谱图。
图6是实施例3中的EPR检测谱图。
图7是实施例4中的EPR检测谱图。
图8是实施例5中的EPR检测谱图。
图9是实施例6中的EPR检测谱图。
图10是实施例7中的EPR检测谱图。
图11是实施例8中的EPR检测谱图。
图12是实施例9中的EPR检测谱图。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施方式对本发明做进一步的描述。本发明以下实施例中市购的药品均含有抗氧剂BHA（能在FDA检索到）。
对照例1
（1）采用自制的辛伐他汀片片剂（不添加任何抗氧剂），配方（重量份计，辛伐他汀150份，抗坏血酸2份、柠檬酸2份、羟丙纤维素30份、羟丙甲纤维素10份、氧化铁5份、乳糖200份、硬脂酸镁5份、微晶纤维素400份、淀粉200份、滑石粉5份和二氧化钛3份），在50℃鼓风加热5h后，整片放入EPR样品管并称重，EPR样品管为石英材质制成的平底管，EPR样品管的直径为10mm；辛伐他汀片样品在EPR样品管中的堆放高度为4.8cm，称得重量为3.2g。
（2）将装有片剂成药的EPR样品管放入EPR谐振腔，并保证样品处于谐振腔中心。
（3）调谐后对片剂成药进行检测，检测参数设定为：检测功率为20mW，中心磁场为3000G，扫场宽度为2000G，微波调频为100kHz，微波调幅为2G，时间常数为80.96msec，转换时间40msec，扫描点数2000个，增益2×104，扫描次数16次；得到的谱图如图1所示。
从图1可以看出，检测得到的自由基信号强度微弱（信噪比低，线很不平滑），说明辛伐他汀变质产物难以利用EPR直接检测。
对照例2
对照例2与对照例1相比，区别在于，配方中添加了0.1份抗氧化剂丁基羟基茴香醚，重量为3.2 g，样品50℃鼓风加热5h后装入EPR样品管中，其余与对照例1完全相同。得到的谱图如图2所示。
从图2可以看出，谱图中有明显的自由基信号产生，说明添加丁基羟基茴香醚后，能用EPR技术检测辛伐他汀的变质程度。
实施例1
实施例1与对照例1不同之处在于，选择市购的辛伐他汀片，（品牌：ZOCOR；生产厂家：Merck & Co., Inc.，规格0.2g /片，生产日期为2019年12月），堆放高度为4.8cm，重量为3.2g，其余与对照例1完全相同。得到的谱图如图3所示。
从图3可以看出，谱图中为背景信号，几乎没有自由基信号，说明稳定性较好。
对比例1
对比例1与实施例1相比，区别在于，将市购的辛伐他汀片磨成粉后装入EPR样品管中，其余与实施例1完全相同。得到的谱图如4所示。
从图4中可以看出，有非常明显的自由基信号产生，说明研磨会影响辛伐他汀片的检测结果。
实施例2
本实施例与实施例1相比，不同之处在于，辛伐他汀片生产日期为16年7月，增益2×103，其余与实施例1完全相同。得到的谱图如图5所示。
将所得谱图二次积分，二次积分面积为（1.52×1012），将所得二次积分面积采用样品质量校正，计算得到的样品稳定性参数为74.22。
实施例3
本实施例与实施例1相比，不同之处在于，辛伐他汀片生产日期为18年12月，其余与实施例1完全相同。得到的谱图如图6所示。
将所得谱图二次积分，二次积分面积为（4.64×1011），将所得二次积分面积采用样品质量校正，计算得到的样品稳定性参数为2.27。
实施例4
本实施例与对照例1相比，不同之处在于，采用生产日期为18年12月的恩杂鲁胺片（品牌：XTANDI ；生产厂家：Astellas Pharma Inc.，规格0.25g /片），堆放高度为5.2cm，重量为0.33g，其余与实施例1完全相同。得到的谱图如图7所示。
将所得谱图二次积分，二次积分面积为（6.67×1012），将所得二次积分面积采用样品质量校正，计算得到的样品稳定性参数为31.58。
实施例5
本实施例与实施例4相比，不同之处在于，采用生产日期为17年9月的恩杂鲁胺片，重量为0.33g，其余与实施例3完全相同。得到的谱图如图8所示。
将所得谱图二次积分，二次积分面积为（8.78×1012），将所得二次积分面积采用样品质量校正，计算得到的样品稳定性参数为41.57。
实施例6
本实施例与实施例4相比，不同之处在于，采用生产日期为17年3月的恩杂鲁胺片，重量为0.33g，其余与实施例3完全相同。得到的谱图如图9所示。
将所得谱图二次积分，二次积分面积为（1.232×1013），将所得二次积分面积采用样品质量校正，计算得到的样品稳定性参数为58.33。
实施例7
（1）将市购的洛伐他汀片（品牌：MEVACOR；生产厂家：Merck & Co., Inc.，规格0.2g /片，生产日期为2019年8月）整片放入EPR样品管并称重，EPR样品管为石英材质制成的平底管，EPR样品管的直径为10mm；洛伐他汀片样品在EPR样品管中的堆放高度为5.1cm，称得重量为3.4g。
（2）将装有片剂成药的EPR样品管放入EPR谐振腔，并保证样品处于谐振腔中心。
（3）调谐后对片剂成药进行检测，检测参数设定为：检测功率为20mW，中心磁场为3000G，扫场宽度为4000G，微波调频为100kHz，微波调幅为2G，时间常数为81.92msec，转换时间40msec，扫描点数2000个，增益2×104，扫描次数16次；得到的谱图如图10所示。
将所得谱图二次积分，二次积分面积为1.69×1010，将所得二次积分面积采用样品质量校正，计算得到的样品稳定性参数为0.08。
实施例8
本实施例与实施例7相比，不同之处在于，采用生产日期为2018年8月的洛伐他汀片，其余与实施例7完全相同。得到的谱图如图11所示。
将所得谱图二次积分，二次积分面积为9.86×1010，将所得二次积分面积采用样品质量校正，计算得到的样品稳定性参数为0.45。
实施例9
本实施例与实施例7相比，不同之处在于，采用生产日期为2018年3月的洛伐他汀片，其余与实施例7完全相同。得到的谱图如图12所示。
将所得谱图二次积分，二次积分面积为2.81×1011，将所得二次积分面积采用样品质量校正，计算得到的样品稳定性参数为1.29。
从图3、图5、图6中可以看出，生产日期越早的辛伐他汀片，样品稳定性参数越大，生产日期越晚的辛伐他汀片，样品稳定性参数越小，同理从图7-图9以及图10-图12可以看出，生产日期越早的恩杂鲁胺片及洛伐他汀片，样品稳定性参数越大，生产日期越晚的恩杂鲁胺片及洛伐他汀片，样品稳定性参数越小。由此可以说明，本发明可以对含有抗氧化剂丁基羟基茴香醚的片剂成药稳定性进行无损、高效检测，且灵敏度高。
以上所述的实施例只是本发明的一种较佳的方案，并非对本发明作任何形式上的限制，在不超出权利要求所记载的技术方案的前提下还有其它的变体及改型。
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