具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

下面结合附图对本发明做进一步的详细描述：

一种植物抑菌组合物，主要由以下植物提取物组成：藏红花提取物、厚朴提取物、红豆杉提取物和胡萝卜籽提取物。

其中，藏红花提取物具有抑制单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)和肠炎沙门氏菌(Salmonella enterica)的生长的作用；厚朴提取物具有抑制金黄色葡萄球菌生长的作用；红豆杉提取物具有具有抗炎、抗氧化、抗过敏、抗菌、抗病毒等作用；胡萝卜籽提取物具有抑制真菌的作用；经实验证明，本发明的植物抑菌组合物，具有良好的抑细菌和真菌的作用，同时具有温和安全不刺激的特点，可用于护肤品的绿色防腐剂。

在具体实施中，藏红花提取物的提取部位为花，厚朴提取物的提取部位为皮，红豆杉提取物的提取部位为叶子，胡萝卜籽提取物的提取部位为种子。

如图1所示，所述植物提取物的制备方法包括：

步骤101：将植物提取部位进行粉碎，得到粉末。可以将粉末粉碎到100目以上。

步骤102：在所述粉末中加入水和乙醇，搅拌均匀并超声震荡，获得混合物。本发明通过水和乙醇的混合液提取植物提取部位的有效成分，但不限于此。

步骤103：将混合物在70-80℃的温度下减压回流6-10小时，经过滤获得提取液。

步骤104：将提取液浓缩干燥后，获得植物提取物固体。浓缩干燥以去除溶剂。

步骤105：植物提取物固体在使用前，用甲基丙二醇、去离子水溶解均匀，低温2-8℃静置后过滤，取滤出液，获得植物提取物。将滤出液作为植物提取物。

植物提取物的制备方法适用于藏红花提取物、厚朴提取物、红豆杉提取物和胡萝卜籽提取物。

其中，植物提取物的检测方法：以西红花苷-I作为标定物检测藏红花提取物，在一个具体的实施例中，其含量域值为≥0.5％；以厚朴酚作为标定物检测厚朴提取物，其含量域值为≥0.5％；以槲皮素为作为标定物检测红豆杉提取物，其含量域值为≥0.1％；以胡萝卜醇作为标定物检测藏红花提取物，其含量域值为≥0.1％。通过一种主要成分检测植物提取物，对植物提取物的提取质量进行管理，含量域值可以根据提取工艺和提取部位的情况进行设定，含量域值用于判断植物提取物的提取质量。

其中，西红花苷-I、厚朴酚、槲皮素和胡萝卜醇可以通过高效液相色谱(HPLC)的方法进行检测。例如：图2是西红花苷-I的HPLC出峰图，西红花苷-I的出峰时间为18.5分钟；图3是厚朴酚的HPLC出峰图，厚朴酚的出峰时间为9.2分钟。可以通过标定物出峰面积的比例检测标定物的含量；槲皮素和胡萝卜醇可以采用相同或相似的HPLC检测方法。

藏红花提取物、厚朴提取物、红豆杉提取物和胡萝卜籽提取物的质量比为3-5:2-4:0.5-2:1-3，优选4:3:1:2。

实施例1

取3g藏红花提取物,2g厚朴提取物,2g红豆杉提取物,1g胡萝卜籽提取物，混合均匀得到组合物A。

实施例2

取4g藏红花提取物,3g厚朴提取物,1g红豆杉提取物,2g胡萝卜籽提取物，混合均匀得到组合物B。

实施例3

取5g藏红花提取物,4g厚朴提取物,0.5g红豆杉提取物,3g胡萝卜籽提取物，混合均匀得到组合物C。

实施例4

取3.5g藏红花提取物,3g厚朴提取物,1.5g红豆杉提取物,2.5g胡萝卜籽提取物，混合均匀得到组合物D。

分别实施例1-4中的得到的组合物进行金黄色葡萄球菌的抑制实验：9.6*10⁶cfu/g的金黄色葡萄球菌悬液中加入1％的组合物。其中组合物B的14天抵制率高，检出的菌数小于10cfu/g。

挑战试验：

取组合物B进行28天微生物挑战性试验，该试验方法是参照美国药典上微生物挑战性试验评价防腐效果的方法：细菌培养14天后数量降低到原来的0.1％以下，后续测试不再增加为通过测试；真菌经过14天培养后维持再原先水平以下，后续测试不再增加为通过测试。

具体的评分标准为：

初始接种量细菌10⁶cfu/g～10⁷cfu/g，霉菌10⁵cfu/g～10⁶cfu/g；①第28天时，样品中含细菌或真菌＞10³cfu/g，该样品不能通过防腐抑菌挑战试验，表明样品不能有效地起到抑制微生物生长的作用，产品在生产、贮藏和使用中很容易受到微生物的污染；②第28天时，样品中含细菌或霉菌在10²cfu/g～10³cfu/g，该样品有条件地通过挑战试验，即当产品中蛋白质或其他动植物材料成分不是特别高，同时生产的卫生环境符合要求，包装物不易发生二次污染时，该抑菌组合符合要求，可以使用，否则不能；③第28天时，样品中含细菌或霉菌无法检出，表明该样品的防腐抑菌能力突出，对微生物有较强的抑制效果，通过挑战试验，产品在生产、贮藏和使用时不容易受到微生物污染。

具体的检测方法：

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus，ATCC 6538)，大肠埃希氏菌(Escherichiacoli，ATCC 8739)和铜绿假单胞菌(Pseudomonas.aeruginosa，ATCC 9027)分别于36±1℃培养36～48小时；

分别挑取适量菌落，并与无菌生理盐水混和均匀，制备成混合细菌悬液，混合细菌悬液总浓度约为1.0×10⁸cfu/ml；

黑曲霉(Aspergillus niger,ATCC 16404)于27±1℃培养120小时，白假丝酵母(Candida albicans,ATCC 10231)于27±1℃培养24小时；

分别挑取适量黑曲霉和白假丝酵母的菌落，并与无菌生理盐水混和均匀，制备成混合真菌悬液，混合真菌悬液总浓度约为1.0×10⁷cfu/ml；

取护肤品，共设置6组样品，组合物B的添加量分别为0.3％、0.5％、0.8％、1.2％、1.5％、2.0％，形成6个浓度梯度的样品；所述样品分别加入最终含菌量为1.0×10⁶～5.0×10⁶CFU/g的混合细菌悬液、最终含菌量为1.0×10⁵～5.0×10⁵CFU/g的混合真菌悬液，并充分混合均匀，6组样品分别在36±1℃中培养；

在接种第0天、第3天、第7天、第14天、第21天和第28天取样进行菌量分析。检测数据如下表所示：

如上表所示：

(1)第28天时，各个样品中细菌、真菌的数量均小于10³cfu/g，说明植物抑菌组合物不同浓度均对微生物有不同程度的抑杀效果，根据评分标准，3#、4#、5#、6#样品通过挑战试验，在生产、贮藏和使用时不容易受到微生物污染；

(2)3#、4#、5#、6#样品，随着植物抑菌组合物浓度的提高，在第14天时细菌菌落总数均无检出(＜10cfu/g)，真菌只有3#样品含有较低数据量，说明14天后抑菌效果明显，在组合物B浓度超过0.8％时可以达到抑制微生物的良好效果，产品在生产、贮藏和使用时不容易受到微生物污染；

(3)4#、5#、6#样品，在第14天起，细菌和霉菌均无检出，表现了优异的抑菌和防腐功能。

因此，上述实验证明：3#、4#、5#、6#样品防腐抑菌测试均通过挑战试验，植物抑菌组合物的添加量越高，防腐效能越好，组合物B浓度在0.8％以上时，防腐效果优异，产品在生产、贮藏和使用时不容易受到微生物污染。本发明的植物抑菌组合物可以用于抑制以下一种微生物或它们组合的生长和繁殖：金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌、黑曲霉和白假丝酵母。

所述护肤品含有：0.8-2.0％植物抑菌组合物、螯合剂0.01％～0.2％、多元醇0.50％～10.00％wt、增稠剂0.05％～1.0％wt、乳化剂0.50％～5.0％wt、油脂5.0％～35.0％wt、皮肤调理剂0.1％～10.0％wt和去离子水39.00％～88.00％wt。

所述护肤品的制备方法包括：

将螯合剂、多元醇、增稠剂加入去离子水中，获得水相；

将水相充分搅拌均匀并加热至75-90℃；

将乳化剂和油脂混合后获得油相；

将油相充分搅拌并加热至75-90℃；

将加热后的油相和水相混合，并保温搅拌20-30分钟后，冷却降温；

降温至40-50℃期间加入皮肤调理剂和植物抑菌组合物；

继续搅拌降温，获得护肤品。

但本发明的植物抑菌组合物的适用范围不限于此，还可以用于其它种类的护肤品。

安全性测试

采用行业标准SN/T 2329-2009进行安全性测试,即化妆品眼刺激性/腐蚀性的鸡胚绒毛尿囊膜试验(Cosmetics ocular irritant and corrosive HET-CAM test,HET-CAM)。

取组合物B溶于生理盐水，制备5％wt的试验样品，鸡胚采用莱杭品系，日龄为9天，试验条件为：37.5℃、相对湿度：50％-70％，作用时间：180s，同时以生理盐水为阴性对照、1％SLS作阳性对照，根据终点评估法，检测结果为ES＝6，结果评价：无/轻刺激性。即组合物B在低于5％wt的使用情况下，温和安全不刺激。因此可以得出质量百分比为0.8％-5.0％的植物抑菌组合物为合理使用剂量。

以上仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。