免疫调节剂及其组合物和制备方法
阅读说明：本技术 免疫调节剂及其组合物和制备方法 (Immunomodulator, composition and preparation method thereof ) 是由 张垚 王义乾 付邦 陈洁 王家炳 丁列明 于 2019-07-19 设计创作，主要内容包括：本发明涉及式Ⅰ化合物,使用该化合物作为免疫调节剂的方法,包括该化合物的药用组合物。该化合物可用于治疗,预防或改善疾病或病症,例如癌症或感染。(The present invention relates to compounds of formula (I), methods of using the compounds as immunomodulators, pharmaceutical compositions comprising the compounds. The compounds are useful for treating, preventing or ameliorating a disease or disorder, such as cancer or infection.)
技术领域
本发明涉及药物活性化合物。本发明提供了该化合物及其组合物和应用方法。该化合物可调节PD-1/PD-L1蛋白质/蛋白质相互作用，并且可用于治疗包括传染病和癌症在内的各种疾病。
背景技术
免疫系统在控制和消除癌症等疾病中起着重要作用。但是，癌细胞通常会通过一些策略逃逸或抑制免疫系统，从而促进其生长。其中一种机制是改变免疫细胞上共刺激和共抑制分子的表达(Postowetal，J.Clinical Oncology 2015，1-9)。事实证明，阻断PD-1等抑制性免疫检查点的信号是一种有希望的，有效的治疗方式。
PD-1和PD-L1之间的相互作用导致肿瘤浸润淋巴细胞的减少，T细胞受体介导的细胞增殖的减少以及癌细胞的免疫逃逸(Dong et al，J.Mol Med.，81:281-287(2003)；Blanket al，Cancer Immunol Immunother.，54:307-314(2005)；Konishi et al，Clin.CancerRes..10:5094-5100(2004))。可以通过阻断PD-1与PD-L1的局部相互作用来逆转这种免疫抑制作用，并且当PD-1与PD-L2的相互作用被阻断时效果更加明显(Iwai et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，99:12293-12297(2002)；Brown et al，J.Immunol，170:1257-1266(2003))。
程序性死亡受体1，也被称作CD279，是在活性T细胞，自然杀伤细胞，B细胞和巨噬细胞上表达的细胞表面受体(Greenwald et al，Annu.Rev.Immunol 2005，23:515-548；Okazaki and Honjo，Trends Immunol 2006，(4):195-201)。具有负反馈调节系统的功能，可以阻止T细胞的活化来降低自身免疫性同时增强自我耐受性。另外，还已知PD-1在诸如癌症和病毒感染的疾病中在抑制抗原特异性T细胞应答中起关键作用。(Sharpe et al，NatImmunol 2007 8，239-245；Postow et al，J.Clinical Oncol 2015，1-9)。
PD-1由细胞外免疫球蛋白可变样结构域，跨膜区和细胞内结构域组成(Parry etal，Mol Cell Biol 2005，9543-9553)。细胞内结构域包含位于基于免疫受体酪氨酸的抑制基序和基于免疫受体酪氨酸的开关基序中的两个磷酸化位点，这表明PD-1负调节T细胞受体介导的信号。PD-1具有两个配体PD-L1和PD-L2(Parry等，Mol Cell Biol 2005，9543-9553；Latchman等，Nat Immunol 2001，2，261-268)，它们的表达方式不同。在脂多糖和GM-CSF处理后，PD-L1蛋白在巨噬细胞和树突状细胞上表达上调，并在T细胞受体和B细胞受体信号传导后在T细胞和B细胞上调。PD-L1几乎在所有肿瘤细胞中高度表达，并且在IFN-γ处理后表达进一步增加(Iwai等，PNAS2002，99(19)：12293-7；Blank等，Cancer Res 2004，64(3)：1140-5)。实际上，已经证明肿瘤PD-L1表达状态在多种肿瘤类型中是预后的(Wang等人，Eur J Surg Oncol 2015；Huang等人，Oncol Rep 2015；Sabatier等人，Oncotarget2015，6(7)：5449-5464)。相反地，PD-L2的表达更受限制并且主要由树突细胞表达(Nakae等人，J Immunol 2006，177：566-73)。PD-1及其配体PD-L1和PD-L2在T细胞上的连接可产生相关信号来抑制IL-2和IFN-γ的产生以及T细胞受体激活后诱导的细胞增殖(Carter等，EurJ Immunol 2002，32(3)：634-43；Freeman等，J Exp Med 2000，192(7)：1027-34)。该机制涉及募集SHP-2或SHP-1磷酸酶以抑制T细胞受体信号转导例如Syk和Lck的磷酸化(Sharpe etal，Nat Immunol 2007，8，239-245)。PD-1信号轴的激活还减弱了PKC-θ激活环的磷酸化，这对于NF-κΒ和API途径的激活以及IL-2，IFN-γ和TNF等细胞因子的产生是必不可少的(Sharpe等人，Nat Immunol 2007，8，239-245；Carter等，Eur J Immunol 2002，32(3)：634-43；Freeman等，J Exp Med 2000，192(7)：1027-134)。
临床前动物研究的一些证据表明，PD-1及其配体会对免疫反应产生负调节作用。PD-1敲除小鼠会发展出狼疮样肾小球肾炎和扩张性心肌病(Nishimura等，Immunity 1999，11：41-151；Nishimura等，Science 2001，291：319-322)。在慢性LCMV病毒感染模型中，已显示PD-1/PD-L1相互作用可抑制病毒特异性CD8 T细胞的效应子功能的激活，扩展和获得(Barber等，自然2006，439，682-7))。
这些数据支持我们开发一种通过阻断PD-1介导的抑制性信号传导级联反应来增强或“拯救”T细胞反应的治疗方法。目前在免疫疗法中批准的大多数药物都是单克隆抗体。但是，直接靶向PD-1或PD-L1的小分子抑制剂仍未被批准，只有CA170进行了临床评估。
因此仍然强烈需要针对PD-1和PD-L1蛋白/蛋白相互作用的更有效更易于施用的治疗药物。在本发明中，申请人发现了一种有效的小分子可以作为PD-L1与PD-1的相互作用的抑制剂，因此可用于治疗性给药以增强针对癌症和/或传染病的免疫力。这些小分子有望成为具有良好稳定性，溶解性，生物利用度，治疗指数和毒性值的药物，这对于成为促进人类健康的有效药物至关重要。
发明内容
本发明涉及用作PD-L1和PD-1相互作用的抑制剂的化合物。PD-1和PD-L1相互作用的抑制剂可以用于治疗癌症和其他感染病。
本发明化合物具有如式Ⅰ所示的一般结构。一种式Ⅰ所示的化合物，或其立体异构体，互变异构体，药学上可接受的盐，前药，螯合物，非共价复合物或溶剂化物，
其中，
环A和环B分别独立地选自5-至6-元杂环；所述杂环任选地包含1，2或3个独立选自N，S或O的杂原子；
代表单键或双键包括顺反异构体；
如果代表双键，X和Y分别独立地选自-(CH)n-；如果代表单键，X和Y分别独立地选自不存在，-(CH2)n-，-S-，-O-，-NR8-，-CO-，-CONR9-，或-NR10CO-，-SO2-，其中-(CH2)n-，-NR8-，-CONR9-，或-NR10CO-任选地被C1-8烷基，-OC1-8烷基所取代；
R1，R2和R3分别独立地选自H，卤素，CN，C1-8烷基，-C1-8卤代烷基，或-OC1-8烷基或
R1和X和与它们连接的原子组成5-至6-元杂环；所述杂环任选地包含1，2或3个独立选自N，S，或O的杂原子；所述杂环可任选地被C1-8烷基，-C0-4烷基-COOH，或-C0-4烷基-OH所取代；或
R3和Y和与它们连接的原子组成5-至6-元杂环；所述杂环任选地包含1，2或3个独立选自N，S，或O的杂原子；所述杂环可任选地被C1-8烷基，-C0-4烷基-COOH，或-C0-4烷基-OH所取代；
R4和R5分别独立地选自H，-CONH2，-C1-8烷基，-C1-8烯基，-C1-8卤代烷基，-C1-8杂烷基，C3-10环烷基，-C1-4烷基-C5-6芳基，-CO-C1-4烷基，-SO2-C1-4烷基，-C1-4烷基-COOH，-C1-4烷基-OH；或
R4和R5和与它们连接的原子组成5-至6-元杂环；所述杂环任选地包含1，2或3个独立选自N，S，或O的杂原子；所述杂环可任选地被C1-8烷基，-C0-4烷基-COOH，或-C0-4烷基-OH所取代；
R6和R7分别独立地选自H，-C1-8烷基，-C1-8杂烷基，或C3-10环烷基，其中-C1-8烷基，-C1-8杂烷基，或C3-10环烷基任选地被-COOH或-OH所取代；或
R6和R7和与它们连接的原子组成4-至6-元杂环；所述杂环任选地包含1，2或3个独立选自N，S，或O的杂原子；所述杂环可任选地被-C0-4烷基-COOH，或-C0-4烷基-OH所取代；
R8，R9，R10分别独立地选自H，-C1-4烷基，-C1-4卤代烷基，-C1-8杂烷基，-C1-4烷基-COOH，或-C1-4烷基-OH；
R11和R22分别独立地选自H，卤素，CN，或C1-8烷基；或
R11和R22和与它们连接的原子组成3-至4-元碳环；
n为1，2或3。
在式Ⅰ的一些实施例中，环A为包含1，2或3个独立选自N，或S的杂原子的6-元杂环；
在式Ⅰ的一些实施例中，环B为包含1，2或3个独立选自N，或S的杂原子的6-元杂环；
在式Ⅰ的一些实施例中，是
在式Ⅰ的一些实施例中，R1和R2分别独立地选自H，F，Cl，CN，或甲基。
在式Ⅰ的一些实施例中，R3为H，F，Cl，CH3或CF3。
在式Ⅰ的一些实施例中，R4和R5和与它们连接的原子组成5-至6-元杂环。优选地，5-至6-元杂环为其中5-至6-元杂环可任选地被-COOH或-CH3所取代。
在式Ⅰ的另一些实施例中，R4和R5分别独立地选自H，C1-4烷基，-CO-C1-4烷基，-SO2-C1-4烷基，-C1-4烷基-COOH，-C1-4烷基-OH。
在式Ⅰ的一些实施例中，R6和R7和与它们连接的原子组成6-元杂环。优选地，杂环可任选地被-COOH所取代。
在式Ⅰ的另一些实施例中，R6和R7分别独立地选自H，-C1-8烷基，-C1-8杂烷基，或C3-10环烷基，其中-C1-8烷基，-C1-8杂环基，或C3-10环烷基任选地被-COOH或–OH所取代。
在式Ⅰ的一些实施例中，R8，R9，R10分别独立地选自H或甲基。
在式Ⅰ的一些实施例中，R11和R22分别独立地选自H或甲基。
在式Ⅰ的另一些实施例中，R11和R22和与它们连接的原子组成3-至4-元碳环。
在式Ⅰ的一些实施例中，n为1。
关于式Ⅰ的化合物，本发明进一步提供了一些优选的技术方案，其中该化合物为：
1)((8-((2,2'-二甲基-3'-(3-吗啉代丙氧基)-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)甘氨酸；
2)((8-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)甘氨酸；
3)((8-((2,2'-二甲基-3'-(3-吗啉代丙氧基)-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)脯氨酸；
4)((8-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)脯氨酸；
5)1-((8-((2,2'-二甲基-3'-(3-吗啉代丙氧基)-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-2-基)甲基)哌啶-2-乙酸；
6)1-((8-((2,2'-二甲基-3'-(3-吗啉代丙氧基)-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)-4-羟基吡咯烷-2-乙酸；
7)3-(((8-((2,2'-二甲基-3'-(3-吗啉代丙氧基)-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)氨基)丙酸；
8)4-(((8-((2,2'-二甲基-3'-(3-吗啉代丙氧基)-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)氨基)丁酸；
9)1-((8-((2,2'-二甲基-3'-(3-吗啉代丙氧基)-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)吡咯烷-3-乙酸；
10)((8-((2,2'-二甲基-3'-(3-吗啉代丙氧基)-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)丝氨酸；
11)N-((8-((2,2'-二甲基-3'-(3-吗啉代丙氧基)-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)-N-甲基甘氨酸；
12)1-((8-((2,2'-二甲基-3'-(3-吗啉代丙氧基)-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)-4,4-二氟吡咯烷-2-乙酸；
13)2-(((8-((2,2'-二甲基-3'-(3-吗啉代丙氧基)-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)氨基)-3-羟基-2-甲基丙酸；
14)N-((8-((2,2'-二甲基-3'-(3-吗啉代丙氧基)-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)-N-乙基甘氨酸；
15)1-((8-((2,2'-二甲基-3'-(3-吗啉代丙氧基)-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)氮杂环丁烷-3-乙酸；
16)1-((8-((2,2'-二甲基-3'-(3-(哌啶-1-基)丙氧基)-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)哌啶-2-乙酸；
17)1-((8-((2,2'-二甲基-3'-(3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙氧基)-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)哌啶-2-乙酸；
18)1-((8-((2,2'-二甲基-3'-(3-(吡咯烷-1-基)丙氧基)-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)哌啶-2-乙酸；
19)1-((8-((3'-(3-(3-羟基吡咯烷-1-基)丙氧基)-2,2'-二甲基-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)哌啶-2-乙酸；
20)1-((8-((2-甲基-3-(1-(3-吗啉代丙基)吲哚啉-4-基)苯基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)哌啶-2-乙酸；
21)1-((8-((3'-(3-(二乙氨基)丙氧基)-2,2'-二甲基-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)哌啶-2-乙酸；
22)1-((8-((3'-(3-(苄基(甲基)氨基)丙氧基)-2,2'-二甲基-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)哌啶-2-乙酸；
23)1-((8-((3'-(3-(乙基氨基)丙氧基)-2,2'-二甲基-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)哌啶-2-乙酸；
24)1-((8-((3'-(3-乙酰氨基丙氧基)-2,2'-二甲基-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)哌啶-2-乙酸；
25)1-((8-((2,2'-二甲基-3'-(3-脲基丙氧基)-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)哌啶-2-乙酸；
26)1-((8-((3'-(3-胍基丙氧基)-2,2'-二甲基-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)哌啶-2-乙酸；
27)1-((8-((2,2'-二甲基-3'-(3-(甲基磺酰胺基)丙氧基)-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)哌啶-2-乙酸；
28)1-((8-((3'-(3-((羧甲基)氨基)丙氧基)-2,2'-二甲基-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)哌啶-2-乙酸；
29)1-((8-((3'-(3-(2-羧基吡咯烷-1-基)丙氧基)-2,2'-二甲基-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)哌啶-2-乙酸；
30)1-((8-((3'-(3-(4-羧基哌啶-1-基)丙氧基)-2,2'-二甲基-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)哌啶-2-乙酸；
31)1-((8-((2,2'-二甲基-3'-(2-吗啉代乙氧基)-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)哌啶-2-乙酸；
32)1-((8-((2-甲基-3-(7-(2-吗啉代乙氧基)萘-2-基)苯基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)哌啶-2-乙酸；
33)1-((8-((2-甲基-3'-(3-(氧杂环丁基-3-基氨基)丙氧基)-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)哌啶-2-乙酸；
34)1-((8-((2-甲基-3-(1-(3-吗啉代丙基)-1H-吲哚-4-基)苯基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)哌啶-2-乙酸；
35)1-((8-((2-甲基-3-(2-(2-吗啉代乙基)-1H-吲哚-6-基)苯基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)哌啶-2-乙酸；
36)1-((8-((2-甲基-3'-(3-吗啉代丙氧基)-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)哌啶-2-乙酸；
37)1-((8-((2'-氟-2-甲基-3'-(3-吗啉代丙氧基)-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)哌啶-2-乙酸；
38)1-((8-((2'-氯-2-甲基-3'-(3-吗啉代丙氧基)-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)哌啶-2-乙酸；
39)1-((8-((2'-氰基-2-甲基-3'-(3-吗啉代丙氧基)-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)哌啶-2-乙酸；
40)1-((8-((4'-氟-2-甲基-3'-(3-吗啉代丙氧基)-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)哌啶-2-乙酸；
41)1-((8-((2,2',4'-三甲基-3'-(3-吗啉代丙氧基)-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)哌啶-2-乙酸；
42)1-((8-((2,4'-二甲基-3'-(3-吗啉代丙氧基)-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)哌啶-2-乙酸；
43)1-((8-((4'-氯-2-甲基-3'-(3-吗啉代丙氧基)-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)哌啶-2-乙酸；
44)((8-((4'-氯-2-甲基-3'-(3-吗啉代丙氧基)-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)甘氨酸；
45)((8-((2'-氯-2-甲基-3'-(3-吗啉代丙氧基)-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)甘氨酸；
46)((8-((2-甲基-3-(4-甲基-5-(3-吗啉代丙氧基)吡啶-3-基)苯基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)甘氨酸；
47)1-((8-((2,2'-二甲基-3'-((2-吗啉代乙氧基)甲基)-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)哌啶-2-乙酸；
48)1-((8-((2,2'-二甲基-3'-((3-吗啉代丙基)氨基)-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)哌啶-2-乙酸；
49)1-((8-((2,2'-二甲基-3'-(3-吗啉丙酰胺)-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)哌啶-2-乙酸；
50)1-((8-((2,2'-二甲基-3'-(N-甲基-3-吗啉丙酰胺)-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)哌啶-2-乙酸；
51)1-((8-((3'-(3-(2-((2-羟基乙基)氨基)乙基)尿素)-2,2'-二甲基-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)哌啶-2-乙酸；
52)1-((8-((2,2'-二甲基-3'-(甲基(3-吗啉代丙基)氨基)-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)哌啶-2-乙酸；
53)1-((8-((2,2'-二甲基-3'-(3-(2-吗啉代乙基)尿素)-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)哌啶-2-乙酸；
54)1-((8-((2,2'-二甲基-3'-((1-(吗啉代甲基)环丙基)甲氧基)-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)哌啶-2-乙酸；
55)1-((8-((2,2'-二甲基-3'-((4-吗林代丁烷-2-基)氧基)-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)哌啶-2-乙酸；
56)1-((8-((2-甲基-3-(1-(2-吗啉代乙氧基)-2,3-二氢-1H-茚满-4-基)苯基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)哌啶-2-乙酸；
57)(E)-1-((8-((2,2'-二甲基-3'-(4-吗啉代丁基-1-烯-1-基)-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)哌啶-2-乙酸；
58)1-((8-((2,2'-二甲基-3'-(4-吗啉代乙基)-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)哌啶-2-乙酸；
59)1-((8-((4'-甲氧基-2-甲基-3'-(3-吗啉代丙氧基)-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)哌啶-2-乙酸；
60)1-((8-((2-甲基-3'-(3-吗啉代丙氧基)-4'-(三氟甲基)-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)哌啶-2-乙酸.
本发明还提供了一种包括本发明中任一化合物和一种药学上可接受的载体例如羟丙基甲基纤维素的药用组合物。在该组合物中，所述化合物与所述辅料的重量比约为0.0001至10。
本发明另外提供了含有式I的药物组合物在制备用于治疗受试者疾病的药物中的用途。
关于上述用途，本发明还提供了一些优选的技术方案。
在一些实施方案中，制备的药物可用于治疗，预防或推迟癌症，癌转移，免疫系统相关疾病的发作或进展。所述癌症包括结肠癌，胃癌，甲状腺癌，肺癌，白血病，胰腺癌，黑素瘤，多发性黑素瘤，脑癌，肾癌，前列腺癌，卵巢癌或乳腺癌。
本发明提供了抑制PD-1/PD-L1相互作用的方法，所述方法包括向患者施用本发明的化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体。
本发明提供了一种治疗与抑制PD-1/PD-L1相互作用有关的疾病的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的本发明的化合物，或药学上可接受的盐，立体异构体。其中所述疾病是结肠癌，胃癌，甲状腺癌，肺癌，白血病，胰腺癌，黑素瘤，多发性黑素瘤，脑癌，肾癌，前列腺癌，卵巢癌或乳腺癌。
本发明提供了一种增强，刺激和/或增加患者免疫应答的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的本发明化合物，或药学上可接受的盐或其立体异构体。
本发明还提供了本发明化合物或其药物组合物在制备药物中的用途。
在一些实施方案中，所述药物用于治疗或预防癌症。
在一些实施方案中，所述癌症为结肠癌，胃癌，甲状腺癌，肺癌，白血病，胰腺癌，黑素瘤，多发性黑素瘤，脑癌，肾癌，前列腺癌，卵巢癌或乳腺癌。
在一些实施方案中，所述药物可用作PD-1/PD-L1相互作用抑制剂。
上式中使用的一般化学术语具有其通常的含义。例如，除非另有说明，否则本文所用的术语“卤素”是指氟，氯，溴或碘。优选的卤素基团包括F，Cl和Br。
除非另有说明，否则本文所用的术语“烷基”包括具有直链，支链或环状部分的饱和一价烃基。例如，烷基包括甲基，乙基，丙基，异丙基，环丙基，正丁基，异丁基，仲丁基，叔丁基，环丁基，正戊基，3-(2-甲基)丁基，2-戊基，2-甲基丁基，新戊基，环戊基，正己基，2-己基，2-甲基戊基和环己基。类似地，如在C1-8烷基中，定义C1-8以鉴定该基团具有1、2、3、4、5、6、7或8个线性或支链排列的碳原子。
烯基和炔基基团包括直链，支链或环状的烯烃和炔烃。同样，“C2-8烯基”和“C2-8炔基”是指具有2、3、4、5、6、7或8个碳原子的线性或分支排列的烯基或炔基。
烷氧基是由前述直链，支链或环状烷基形成的氧醚。
除非另有说明，否则本文所用的术语“芳基”是指含有碳环原子的未取代或取代的单环或多环系统。优选的芳基是单环或双环的6-10元芳族环系统。苯基和萘基是优选的芳基。最优选的芳基是苯基。
除非另有说明，否则本文所用的术语“杂环基”表示未取代或取代的稳定的三至八元单环饱和环系统，其由碳原子和选自N，O或S的1-3个杂原子组成，并且其中氮或硫杂原子可任选地被氧化，并且氮杂原子可任选地被季铵化。杂环基可以连接在任何杂原子或碳原子上，这导致形成稳定的结构。此类杂环基的实例包括但不限于氮杂环丁烷基，吡咯烷基，哌啶基，哌嗪基，氧代哌嗪基，氧代哌啶基，氧杂庚基，庚基，四氢呋喃基，二氧戊环基，四氢咪唑基，四氢噻唑基，四氢恶唑基，四氢吡喃基，吗啉基，硫代吗啉基，噻吗啉基亚砜，噻吗啉基砜和恶二唑基。
除非另有说明，否则本文所用的术语“杂芳基”表示未取代或取代的稳定的五元或六元单环芳族环系统或未取代或取代的九元或十元苯并稠合的杂芳族环系统或双环杂芳族环系统，其由碳原子和选自N，O或S的1-4个杂原子组成，其中氮或硫杂原子可任选地被氧化，而氮杂原子可任选地被季铵化。杂芳基基团可以连接在任何杂原子或碳原子上，从而形成稳定的结构。杂芳基的举例包括但不限于噻吩基，呋喃基，咪唑基，异恶唑基，恶唑基，吡唑基，吡咯基，噻唑基，噻二唑基，三唑基，吡啶基，哒嗪基，吲哚基，氮杂吲哚基，吲唑基，苯并咪唑基，苯并呋喃基，苯并噻吩基，苯并异唑基，苯并恶唑基，苯并吡唑基，苯并噻唑基，苯并噻二唑基，苯并三唑基喹啉基亚苄基。
术语“烯氧基”是指基团-O-烯基，其中烯基如上定义。
术语“烷氧基”是指基团-O-烷基，其中烯基如上定义。
术语“环烷基”是指具有3至12个碳原子的环状饱和烷基链，例如环丙基，环丁基，环丁基，环丁基。
术语“取代”指的是基团中的一个或多个H原子分别独立地被相同或者不同的取代基所取代。常见的取代基包括但不限于，卤素(F，Cl，Br或I)，C1-8烷基，C3-12环烷基，-OR1，SR1，＝O，＝S，-C(O)R1，-C(S)R1，＝NR1，-C(O)OR1，-C(S)OR1，-NR1R2，-C(O)NR1R2，氰基，硝基，-S(O)2R1，-OS(O2)OR1，-OS(O)2R1，-OP(O)(OR1)(OR2)；其中R1和R2分别独立地选自-H,低级烷基，低级卤代烷基。在一些实施例中，取代基可独立地选自-F，-Cl，-Br，-I，-OH，三氟甲氧基，乙氧基，丙氧基，异丙氧基，正丁氧基，异丁氧基，叔丁氧基，-SCH3，-SC2H5，甲醛基，-C(OCH3)，氰基，硝基，CF3-OCF3，氨基，二甲基氨基，甲硫基，磺酰基和乙酰基。
本文使用的术语“组合物”指的是含有指定含量的指定成分的产品，以及直接或间接地由指定含量的指定成分的组合组成的产品。因此含有本发明的化合物作为活性成分的药用组合物，以及制备本发明化合物的方法都属于本发明范围内。另外地，本发明还包括该化合物可能以多晶型形态存在的晶型。并且，一些化合物可与水(水合物)或者常见有机溶剂形成溶剂化物，这些溶剂化物也在本发明的保护范围之内。
取代的烷基的实例包括但不限于2-氨基乙基，2-羟乙基，五氯乙基，三氟甲基，甲氧基甲基，五氟乙基和哌嗪基甲基。
取代的烷氧基的实例包括但不限于取代氨基甲氧基，三氟甲氧基，2-二甲苯氨基乙氧基，2-乙氧基羰基乙氧基，3-羟基丙氧基。
本发明的化合物也可以药学上可接受的盐的形式存在。在药学用途中，本发明中的该化合物的盐指的是无毒的药学上可接受的盐。药学上可接受的盐包括药学上可接受的酸性/阴离子盐和碱性/阳离子盐。药学上可接受的酸性/阴离子盐通常采用碱性氮被无机或有机酸质子化的形式。代表性的有机或无机酸包括盐酸，氢溴酸，氢氟酸，高氯酸，硫酸，硝酸，磷酸，乙酸，丙酸，乙醇酸，乳酸，琥珀酸，马来酸，富马酸，苹果酸，酒石酸，柠檬酸，苯甲酸，扁桃酸，甲磺酸，羟基乙磺酸，苯磺酸，草酸，帕莫酸，2-萘磺酸，对甲苯磺酸，环己烷氨基磺酸，水杨酸，糖精或三氟乙酸。药学上可接受的碱性/阳离子盐包括但不限于铝，钙，氯普鲁卡因，胆碱，二乙醇胺，乙二胺，锂，镁，钾，钠和锌。
本发明在其范围内包括本发明化合物的前药。通常，此类前药是化合物的功能性衍生物，其易于在体内转化为所需化合物。因此，在本发明的治疗方法中，术语“施用”应包括应用具体公开的化合物或可能未具体公开但转化为特定化合物的化合物治疗所述的各种疾病。选择和制备合适的前药衍生物的常规方法描述于例如“Design of Prodrugs”，ed.Ed.Chem.Soc。，Vol.5，pp.2，pp.3。H.Bundgaard，爱思唯尔，1985年。
分子的特定位置处的任何取代基或变量的定义独立于该分子中其他位置的定义。应当理解的是本发明化合物的取代基和取代方式可以由本领域普通技术人员选择，以提供化学上稳定的化合物，并且可以通过本领域已知的技术和那些方法容易地合成。
本发明包括的化合物由于可以含有一个或多个不对称中心，因此会产生非对映异构体和旋光异构体。本发明包括所有这些可能的非对映异构体及其外消旋混合物，及其基本上纯的拆分的对映异构体，所有可能的几何异构体及其药学上可接受的盐。
上述式Ⅰ所示的化合物在特定位置不含有确定的立体化学。本发明包括了式Ⅰ化合物的所有立体异构体及其药学上可接受的盐。并且，也包括了立体异构体的混合物及其分离特定异构体。在用于制备此类化合物的合成程序过程中，或在使用本领域技术人员已知的外消旋或差向异构程序的过程中，此类程序的产物可以是立体异构体的混合物。
当式Ⅰ化合物的互变异构体存在时，除非另有特别说明，本发明包括任何可能的互变异构体及其药学上可接受的盐及其混合物。
当式Ⅰ化合物及其药学上可接受的盐以溶剂化物或多晶型形式存在时，本发明包括任何可能的溶剂化物和多晶型形式。形成溶剂化物的溶剂的类型没有特别限制，只要该溶剂是药理学上可接受的即可。例如，可以使用水，乙醇，丙醇，丙酮等。
术语“药学上可接受的盐”是指由药学上可接受的无毒碱或酸制备的盐。当本发明的化合物为酸性时，其相应的盐可以方便地由药学上可接受的无毒碱，包括无机碱和有机碱制备。衍生自此类无机碱的盐包括铝，铵，钙，铜(一价和二价)，铁，亚铁，锂，镁，锰(一价和二价)，钾，钠，锌等盐。特别优选的是铵，钙，镁，钾和钠盐。衍生自药学上可接受的有机无毒碱的盐包括伯胺，仲胺和叔胺的盐，以及环胺和取代胺，例如天然存在的和合成的取代胺。可以形成盐的其他药学上可接受的有机无毒碱包括离子交换树脂，例如精氨酸，甜菜碱，咖啡因，胆碱，N',N'-二苄基乙二胺，二乙胺，2-二乙基氨基乙醇，2-二甲基氨基乙醇，乙醇胺，乙二胺，N-乙基吗啉，N-乙基哌啶，葡糖胺，葡糖胺，组氨酸，肼苯胺，异丙胺，赖氨酸，甲基葡糖胺，吗啉，哌嗪，哌啶，聚胺树脂，普鲁卡因，嘌呤，可可碱，三乙胺，三甲胺，三丙胺，丙胺等。
当本发明的化合物为碱性时，其相应的盐可以方便地由药学上可接受的无毒酸，包括无机酸和有机酸制备。这样的酸包括例如乙酸，苯磺酸，苯甲酸，樟脑磺酸，柠檬酸，乙磺酸，甲酸，富马酸，葡萄糖酸，谷氨酸，氢溴酸，盐酸，等离子，乳酸，马来酸，苹果酸，扁桃酸，甲磺酸，粘液酸，硝酸，帕莫酸，泛酸，磷酸，琥珀酸，硫酸，酒石酸，对甲苯磺酸等。优选的是柠檬酸，氢溴酸，甲酸，盐酸，马来酸，磷酸，硫酸和酒石酸，特别优选的是甲酸和盐酸。由于式I化合物旨在用于药物用途，因此它们优选以基本上纯的形式提供，例如至少60％的纯度，更合适地至少75％的纯度，尤其是至少98％的纯度(％为重量计)基础)。
本发明的药物组合物包括式I所示化合物(或其药学上可接受的盐)作为活性成分，药学上可接受的载体和其他任选的治疗性成分或佐剂。该组合物包括适合于口服，直肠，局部和肠胃外(包括皮下，肌内和静脉内)给药的组合物，尽管在任何给定情况下最合适活性成分给药途径取决于具体的宿主，疾病的性质和严重程度。药物组合物可以方便地以单位剂型存在，并且可以通过药学领域公知的任何方法制备。
在实践中，本发明的由式I表示的化合物或其前药，或其代谢物或药学上可接受的盐可以作为活性成分与药物载体按照常规药物混合技术紧密混合。载体可以采取多种形式，这取决于给药所需要的形式，例如口服或者肠胃外给药(包括静脉给药)。因此，本发明的药用组合物可以单独的计量单位存在用于口服给药，例如为含有指定含量活性成分的胶囊，扁囊剂，或片剂。除此之外，该组合物还可以粉末，颗粒，溶液，在水性溶液中的混悬液形式，或者在非水性溶液中以水包油或油包水的形式存在。而且，除了上述的各种剂型外，式Ⅰ所示的化合物或其药学上可接受的盐，也可以控释给药或者递送装置给药。该组合物可通过药学上的任一方法制备。通常，这些方法包括将活性成分与一种或多种所需成分组成的药物载体混合的步骤。通常，通过将活性成分与液体载体或细分的固体载体均匀紧密地结合来制备该组合物。并且该产品易加工成所需要的形式。
因此，本发明的药用组合物可能会包括一种药学上可接受的载体和式Ⅰ所示的化合物或其药学上可接受的盐。式Ⅰ所示的化合物或其药学上可接受的盐也可包括在与其他一种或多种治疗效果的活性成分的组合物中。
所需的药用载体可为固体，液体或气体。固体载体包括乳糖，白土，蔗糖，滑石粉，明胶，琼脂，果胶，阿拉伯胶，硬脂酸镁和硬脂酸。液体载体包括糖浆，花生油，橄榄油和水。气体载体包括二氧化碳和氮气。在制备该组合物的口服剂型时，可以使用任何常用的药物介质。例如，水，二醇，油，醇，调味剂，防腐剂，着色剂等可用于形成口服液体制剂，比如说混悬剂，酊剂和溶液；载体如淀粉，糖，微晶纤维素，稀释剂，制粒剂，润滑剂，粘合剂，崩解剂等可用于形成口服固体制剂，如粉剂，胶囊剂和片剂。使用固体药物载体的片剂和胶囊剂是优选的口服剂量单位。任选地，片剂可以通过标准的水性或非水性技术进行包衣。
含有该组合物的片剂可以通过任选地与一种或多种成分或者佐剂一起压制或者模制来制备。可以在合适的模具中进行片剂的压制，活性成分任选地与粘合剂，润滑剂，稀释剂，表面活性剂或其他分散剂一起混合形成流动性良好的粉末或者颗粒。模制的片剂在合适的机器中制备，粉末的混合物可以被惰性液体润湿剂润湿。每一片剂含活性成分大约0.05mg至5g，其中适宜且方便的载体占总重量的大约5％至95％。单位剂量的药物大约含有1mg至2mg的活性成分，通常为25mg,50mg,l00mg,200mg,300mg,400mg,500mg,600mg,800mg,或l000mg。
适用于肠胃外给药的本发明药物组合物可以制备成活性化合物在水中的溶液或悬浮液。可以包括合适的表面活性剂，例如羟丙基纤维素。分散剂也可以在甘油，液体聚乙二醇及其在油中的混合物中制备。此外，还可以包含防腐剂以防止微生物的有害生长。
适用于注射给药的本发明化合物包括无菌水溶液和分散液。并且，该组合物可以以可制备成无菌注射液或混悬液的无菌粉末形式存在。在所有情况下，最终的注射形式必须是无菌的并且是易于注射的液体。药物组合物必须在生产和储存的条件下保持稳定。因此，保存环境做好能够做到防止微生物例如细菌和真菌的污染。可作为载体的溶剂或者分散剂可以为水，乙醇，多元醇(例如甘油，丙二醇和液态聚乙二醇)，植物油及其合适的混合物。
适用于局部给药的本发明化合物通常可为气雾剂，霜剂，软膏，洗剂，除尘粉等。并且该组合物同样适用于透皮机械给药。这些包含式Ⅰ化合物或其药学上可接受的盐的制剂可以通过简便的方法来制备。例如，可以通过将亲水性材料，水和大约5％至10％的该化合物混合来制备所需稠度的乳剂或软膏剂。
本发明组合物以直肠给药的形式存在时其载体为固体。优选的是，将混合物制备成为单位剂量的栓剂。合适的载体包括可可脂或其他本领域内常用的载体。通过首先将组合物与软化或熔融的载体混合，然后在模具中冷却和成形，可以方便地形成栓剂。
除了前面提到的载体之外，前文所述的药物制剂可能还会包括其他一种或多种载体成分，例如稀释剂，缓冲液，助流剂，粘合剂，表面活性剂，增稠剂，润滑剂，防腐剂(包括抗氧剂)等。除此之外，还包括可以使得药物与预期接受者血液等渗的其他佐剂。含有式Ⅰ所示化合物或其药学上可接受的盐的组合物也可制备成粉末后者液体的浓缩形式。
通常，在上述情况下通常为每天的0.01mg/kg到150mg/kg的剂量水平，或者每位患者每天0.5mg至7g。例如，结肠癌，直肠癌，套细胞淋巴瘤，多发性骨髓瘤，乳腺癌，前列腺癌，胶质母细胞瘤，鳞状细胞食管癌，脂肪肉瘤，T细胞淋巴瘤黑素瘤，胰腺癌，胶质母细胞瘤或肺癌可通过以下药物有效治疗，每公斤体重每天约0.01至50mg化合物，或每位患者每天约0.5mg至约3.5g化合物。
不过应该理解的是，最低或者最高剂量可能会超出前文描述的范围。对任何一位患者的具体的剂量和治疗方案取决于很多因素，包括具体化合物的活性，年龄，体重，总体健康状况，性别，饮食，给药时间，给药途径，清除率，药物联用，接受治疗的特定疾病的严重程度和病程，以及患者的治疗方式和医师的治疗方案。
这些和其他方面将从本发明的以下书面描述中变得显而易见。
提供下述实例来更好地解释本发明。除非另有明确说明，所有份数和百分比均以重量计，所有温度均为摄氏度。
将会通过具体的实施例来描述本发明更具体的细节。提供下述实施例以解释说明为目的，并不会以任何形式限制本发明。本领域技术人员将容易地认识到可以改变或修改以产生基本相同结果的各种非关键参数。根据本文所述的至少一种测定法，发现实施例的化合物抑制PD-1/PD-L1蛋白/蛋白相互作用的活性。
具体实施方式
制备本发明化合物的实验步骤如下所述。利用开放获取制备型LCMS在Waters质量导向分馏系统上纯化了一些制备的化合物。用于这些系统操作的基本设备设置，协议和控制软件已在文献中进行了详细描述。参见，例如，Blom，“用于制备型LC-MS的两泵在柱稀释配置中”，K.Blom，J.Combi.Chem，2002，4，295-301；Blom等人，“优化用于平行合成纯化的制备型LC-MS配置和方法”，J.Combi.Chem，2003，5，670-83；和Blom等人，“制备型LC-MS纯化：改进的化合物特异性方法优化”，J.Combi.Chem，2004，6，874-883
实施例中使用了下列缩略语：
Boc：t-叔丁氧羰基；
BSA：牛血清白蛋白；
DCM：二氯甲烷；
DIEA：二异丙基乙胺；
DMF：N，N-二甲基甲酰胺；
DMSO：二甲基亚砜；
Et2O：乙醚；
EtOAc：乙酸乙酯；
h或hrs：小时；
HATU：o-(7-偶氮苯并三氮唑)-N，N，N'，N'-四甲基脲六氟磷酸酯；
HTRF：均相时间分辨荧光；
MeCN：甲基氰；
min：分钟；
Pd(dppf)Cl.CH2Cl2：1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁-二氯化钯(II)二氯甲烷配合物；
rt or r.t.：室温；
TFA：三氟乙酸；
THF：四氢呋喃。
方案一 化合物1和2的一般合成路线
实施例1化合物1的合成
((8-((2,2'-二甲基-3'-(3-吗啉代丙氧基)-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)甘氨酸
步骤1：8-氯-3-乙烯基-1,7-萘啶(M1)的制备
向含有3-溴-8-氯-1,7-萘啶(2.43g)的甲苯(30mL)，EtOH(10mL)，10％Na2CO3溶液(10mL)的溶液中加入Pd(dppf)Cl2.DCM(420mg)。在氮气保护下逐滴加入4,4,5,5-四甲基-2-乙烯基-1,3,2-二氧杂硼烷(3.1g)。混合物在100℃下搅拌16小时。用水(50mL)来淬灭反应并用EtOAc萃取3次。合并有机相并用盐水洗涤。所得溶液浓缩后用硅胶柱纯化(用己烷-EtOAc从8:1到5:1的梯度)洗脱，得到褐色固体状的8-氯-3-乙烯基-1,7-萘啶(1.1g)88％)。
步骤2：8-氯-1,7-萘啶-3-甲醛(M2)的制备
向含有8-氯-3-乙烯基-1,7-萘啶(380mg)的1,4-二氧六环(20mL)和水(20mL)的溶液中加入K2OsO4(4.0mg)，然后室温下搅拌30分钟。同样温度下分批少量加入NaIO4(1.0g)。搅拌3小时后，反应以饱和Na2S2O3溶液淬灭。混合物用DCM(40mL)萃取3次。合并有机相并用Na2SO4干燥。浓缩所得溶液后得到8-氯-1,7-萘啶-3-甲醛的粗产物，可以直接用于下一步反应。
步骤3：((8-氯-1,7-萘啶-3-基)甲基)甘氨酸甲酯(M3)的制备
将上述醛类化合物溶解于DCM(20mL)。一次性加入甘氨酸甲酯盐酸盐(375mg)。室温下搅拌所得混合物1小时后，同样温度下一次性加入STAB(420mg)。室温下搅拌过夜。所得溶液以饱和Na2C2O3溶液淬灭，并用DCM(20mL)萃取3次，有机相使用Na2SO4干燥。所得溶液浓缩后通过硅胶柱纯化(以4:1至2:1的梯度用己烷-EtOAc洗脱)得到((甲基8-氯-1,7-萘啶-3-基)甲基)甘氨酸甲酯(280mg)为白色固体。
步骤4：((8-((3-溴-2-甲基苯基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)甘氨酸甲酯(M4)的制备
向微波反应瓶中加入3-溴-2-甲基苯胺(1.1g)，((8-氯-1,7-萘啶-3-基)甲基)甘氨酸甲酯(0.9g)和t-BuOH(15.0mL)。室温下充分搅拌所得混合物。逐滴加入4M HCL的1,4-二氧六环(3.0mL)溶液。盖好瓶盖后105℃下加热反应2小时。饱和Na2C2O3溶液(30mL)稀释后用DCM(50mL*2)萃取。合并的有机相用盐水洗涤后，通过MgSO4干燥并进行真空浓缩。残留物通过己烷∶EtOAc＝8∶1重结晶纯化，得到((8-((3-溴-2-甲基苯基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)甘氨酸甲酯(668mg)为黄色固体。
步骤5：4-(3-(3-溴-2-甲基苯氧基)丙基)吗啉(M6)的制备
向含有3-溴-2-甲基苯基(1.88g)的ACN(30mL)溶液中加入K2CO3(4.0g)。室温下搅拌混合物30分钟。逐滴加入4-(3-氯丙基)吗啉(3.0g)。所得溶液继续在室温下反应过夜。用水淬灭反应后，混合物用EtOAc(100mL)萃取3次，合并有机相并通过Na2SO4干燥。浓缩所得溶液后经过硅胶柱纯化(己烷-EtOAc以8:1至5:1的梯度洗脱)得到4-(3-(3-溴-2-甲基苯氧基)丙基)吗啉(2.5g)为无色的油。
步骤6：4-(3-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯氧基)丙基)吗啉(M7)的制备
向微波反应瓶中加入4-(3-(3-溴-2-甲基苯氧基)丙基)吗啉(0.93g)，双联频哪醇基二硼(1.54g)，Pd(dppf)Cl2.DCM(120mg)，KOAC(1.0g)和1,4-二氧六环(2.0mL)。盖好瓶盖后，100℃下加热反应2小时。用50mL水稀释后再用DCM(60mL*2)萃取2次。合并的有机萃取液用盐水洗涤后，通过MgSO4干燥并进行真空浓缩。残留物通过硅胶柱纯化(用己烷-EtOAc以10:1至2:1的梯度洗脱)得到4-(3-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯氧基)丙基)吗啉(580mg)为棕色油。
步骤7((8-(((2,2'-二甲基-3'-(3-吗啉代丙氧基)-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)甘氨酸甲酯(M5)的制备
向含有((8-(3-溴-2-甲基苯基氨基)1,7萘啶-3-基)甲基)甘氨酸甲酯(233mg)，4-(3-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯氧基)丙基)吗啉(400mg)的甲苯(6mL)溶液中，在氮气保护下加入EtOH(2mL)，10％Na2C2O3溶液(2mL),Pd(dppf)Cl2.DCM(18mg)。混合物在100℃下搅拌过夜。用水(20mL)来淬灭反应后用DCM萃取3次。合并有机相并用盐水洗涤。浓缩所得溶液后经过硅胶柱纯化(用己烷-EtOAc以2:1至1:2的梯度洗脱)得到((8-((2,2'-二甲基-3'-(3-吗啉代丙氧基)-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)甘氨酸甲酯(180mg)为棕色半固体。
步骤8：((8-((2,2'-二甲基-3'-(3-吗啉代丙氧基)-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)甘氨酸(化合物1)的制备
向含有((8-((2,2'-二甲基-3'-(3-吗啉代丙氧基)-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)甘氨酸盐(180mg)的THF/水为1:1(20mL)的溶液中加入NaOH(40mg)。室温下所得混合物搅拌24小时。以2M HCI淬灭反应后调节pH至4-5。蒸发去除THF和水。所得固体经过RP柱纯化(流动相为MeCN：水(0.1％HCl)以10:90至30:70的梯度)得到((8-((2,2'-二甲基-3'-(3-吗啉代丙氧基)-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)甘氨酸(88mg)为白色固体。
实施例2化合物2的合成
((8-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)甘氨酸
步骤1：((8-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)甘氨酸甲酯的制备
使用与实施例1中M5中所述类似的方法制备该化合物，其中以苯硼酸代替M7。所得化合物通过制备-TLC(EtOC:正己烷＝1:1)纯化得到((8-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基]氨基]-1,7-萘啶-3-基)甲基)甘氨酸甲酯(150mg)为黄色固体。
步骤2：((8-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)甘氨酸(化合物3)
使用与化合物1中所述类似的方法制备该化合物。所得化合物通过RP柱纯化(流动相：MeCN：水(0.1％HCl)以40:60至50:50的梯度)得到((8-((2-甲基-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)甘氨酸为白色固体(98mg)。
方案2化合物5的合成路线
实施例3化合物5的合成
1-((8-((2,2'-二甲基-3'-(3-吗啉代丙氧基)-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)哌啶-2-乙酸
步骤1：(8-氯-1,7-萘啶-3-基)甲醇(M11)的制备
将上述醛(620mg)溶解在MeOH中。一次性加入NaBH4(400mg)。室温下搅拌混合物2小时后用水(30mL)淬灭反应。混合物用DCM(20mL)萃取3次后有机相通过Na2SO4干燥。所得溶液浓缩后通过硅胶柱纯化(正己烷-EtOAc以2:1至1:1的梯度进行洗脱)得到(8-氯-1,7-萘啶-3-基)甲醇(500mg)为棕色固体。
步骤2：(8-((3-溴-2-甲基苯基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲醇(M12)的制备
向微波反应小瓶中加入3-溴-2-甲基苯胺(370mg)，(8-氯-1,7-萘啶-3-基)甲醇(98mg)，LiHMDS(1.0M在THF中,4.0mL)和THF(3.5mL)。盖好瓶盖后，加热至60℃反应4小时。用20mL水稀释后用DCM(20mL*2)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，通过MgSO4干燥并进行真空浓缩。残留物通过RP柱纯化(流动相：MeCN:水＝30:70)得到(8-((3-溴-2-甲基苯基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲醇(73mg)为棕色固体。
步骤3：(8-((2,2'-二甲基-3'-(3-吗啉代丙氧基)-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲醇(M13)的制备
使用与实施例1中M5中所述类似的方法制备该化合物，其中以M12代替M4。所得混合物通过制备-TLC纯化(EtOAc:正己烷＝1:1)得到8-((2,2'-二甲基-3'-(3-吗啉代丙氧基)-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲醇为黄色固体。
步骤4：1-8-((2,2'-二甲基-3'-(3-吗啉代丙氧基)-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)哌啶-2-乙酸甲酯(M14)的制备
向含有8-((2,2'-二甲基-3'-(3-吗啉代丙氧基)-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲醇(82mg),TEA(100mg)的DCM(5.0mL)溶液中，在0℃下逐滴加入MsCl(80mg)。室温下搅拌反应90分钟。真空条件下浓缩该混合物后用THF(3mL)溶解。加入甲基哌啶-2-乙酸盐(50mg)和KI(1mg)后，室温下继续搅拌该反应2小时直至甲磺酸盐被用尽。浓缩残留物并通过RP-柱纯化(流动相：MeCN:水＝10:90和0.1％HCl)得到1-8-((2,2'-二甲基-3'-(3-吗啉代丙氧基)-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)哌啶-2-乙酸甲酯(44mg)为类白色固体。
步骤5：1-((8-((2,2'-二甲基-3'-(3-吗啉代丙氧基)-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)哌啶-2-乙酸(化合物7)的制备
使用与化合物1中所述类似的方法制备该化合物。所得混合物通过RP-柱纯化(流动相：MeCN:水(0.1％HCl)以30:70至40：60)得到1-((8-((2,2'-二甲基-3'-(3-吗啉代丙氧基)-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1,7-萘啶-3-基)甲基)哌啶-2-乙酸为白色固体(20mg)。
方案3化合物19的合成路线
实施例4化合物19的合成
1-((8-((3'-(3-(3-羟基吡咯烷-1-基)丙氧基)-2,2'-二甲基-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1，7-萘啶-3-基)甲基)哌啶-2-乙酸
步骤1：1-溴-3-(3-溴丙氧基)-2-甲基苯(M21)的制备
向含有3-溴-2-甲基苯酚(1.88g)的DMF(30mL)溶液中加入K2CO3(4.0g)。室温下搅拌混合物30分钟。逐滴加入1,3-二溴丙烷(5.0g)。所得溶液继续在室温下反应过夜。用水淬灭反应后用EtOAc(100mL)萃取3次。合并有机相并通过Na2SO4干燥。浓缩所得溶液后使用硅胶柱纯化(用正己烷-EtOAc以20:1至10:1的梯度洗脱)得到1-溴-3-(3-溴丙氧基)-2-甲基苯(2.1g，粗品)。
步骤2：1-(3-(3-溴-2-甲基苯氧基)丙基吡咯烷-3-醇(M22)的制备
向含有1-溴-3-(3-溴丙氧基)-2-甲基苯(2.2g)的ACN溶液(40mL)中加入K2CO3(4.0g)和吡咯烷-3-醇(3.2g)。所得溶液继续在45℃下反应过夜。用水淬灭反应。混合物用EtOAc(100mL)萃取3次。合并有机相并通过Na2SO4干燥。所得溶液浓缩后通过硅胶柱纯化(用正己烷-EtOAc以4:1的梯度洗脱)得到1-(3-(3-溴-2-甲基苯氧基)丙基)吡咯烷-3-醇(1.8g)为无色油。
步骤3：1-(3-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯氧基)-丙基)吡咯烷-3-醇(M23)的制备
使用与实施例1中M7中所述类似的方法制备该化合物，用M22代替M6。所得混合物经硅胶柱纯化(用正己烷-EtOAc以2:1的比例洗脱)得到1-(3-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯氧基)-丙基)吡咯烷-3-醇为棕色油。
步骤4：1-((8-((3'-(3-(3-羟基吡咯烷-1-基)丙氧基)-2,2'-二甲基-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1，7-萘啶-3-基)甲基)哌啶-2-乙酸甲酯(M24)
使用与实施例1中M5中所述类似的方法制备该化合物，其中用M23代替M4。所得混合物经过制备-TLC(EtOAc)纯化后得到1-((8-((3'-(3-(3-羟基吡咯烷-1-基)丙氧基)-2,2'-二甲基-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1，7-萘啶-3-基)甲基)哌啶-2-乙酸甲酯为黄色半固体。
步骤5：1-((8-((3'-(3-(3-羟基吡咯烷-1-基)丙氧基)-2,2'-二甲基-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1，7-萘啶-3-基)甲基)哌啶-2-乙酸(化合物21)
使用与化合物1中所述类似的方法制备该化合物。所得混合物用RP柱纯化(流动相：MeCN:水(0.1％HCl)以30:70至40:60的梯度)得到1-((8-((3'-(3-(3-羟基吡咯烷-1-基)丙氧基)-2,2'-二甲基-[1,1'-联苯]-3-基)氨基)-1，7-萘啶-3-基)甲基)哌啶-2-乙酸(58mg)。
使用相应的起始物料，基本上按照实施例1，2，3或4的方法制备以下实施例(表1所示)。
表1
均相时间分辨荧光(HTRF)结合试验
测试在标准黑色384孔聚苯乙烯平板中进行，最终体积为20μL。首先在DMSO中连续稀释抑制剂，然后在添加其他反应组分之前将其添加到板孔中。测定DMSO的最终浓度为1％。该测定是在25℃，含0.05％吐温-20和0.1％BSA的PBS缓冲液(pH 7.4)中进行的。C端带有His-标签的重组人PD-L1蛋白(19-238)购自AcroBiosy stems(PD1-H5229)。C末端带有Fc标签的重组人PD-1蛋白(25-167)同样购自AcroBiosy stems(PD1-H5257)。在测定缓冲液中稀释PD-L1和PD-1蛋白，并向板孔中加入10μL。将板离心，并将蛋白质与抑制剂预孵育40分钟。孵育后，添加10μL HTRF检测缓冲液，该缓冲液中补充了对Fc有特异性的加密标记的抗人IgG(PerkinElmer-AD0212)和与-别藻蓝蛋白(Allophycocyanin)(APC，PerkinElmer-AD0059H)偶联的抗His抗体。离心后，将孔板在25℃下孵育60分钟。在PHERAstar FS读板器(665nm/620nm比率)上阅读之前。测定中的最终浓度为-3nM PD1、10nMPD-L1、1nM抗人IgG和20nM抗His-别藻蓝蛋白。使用GraphPad Prism 5.0软件拟合控制活性百分比与抑制剂浓度对数的曲线来进行IC50测定。
如实施例中所例示的，本发明的化合物的IC50值在以下范围内：“*”代表“IC50≤2nM”；“**”代表“2nM<IC50≤10nM”；“***”代表“10nM<IC50≤150nM”；“****”代表“IC50＞150nM”.
表1提供了使用PD-1/PD-L1均相时间分辨荧光(HTRF)结合方法测定获得的实施例A中所述化合物的数据。
为了方便说明，通式结构如下所示。意外的是，我们发现“R”对生物活性具有很大的影响。如表1所示，我们可以从上述实施例化合物中看出(实施例化合物中的R包括吗啉基团)，例如化合物1，化合物3或化合物5具有更好的活性。
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