具体实施方式

以下通过具体较佳实施例结合效果试验例，对本发明作进一步详细说明，但本发明并不仅限于以下的实施例。

按重量百分比计，本发明的抗敏修护屏障组合物包含：寡肽-1 0.1～20％；积雪草提取物0.1～50％；凤凰单丛茶茶叶挥发油0.1～30％；反式-4-叔丁基环己醇0.1～20％；神经酰胺2脂质体0.1～20％；低分子量透明质酸钠0.1～10％；高分子量透明质酸钠0.1～10％；尿素0.1～10％；去离子水余量。

上述的原料组分分别介绍如下：

①寡肽-1：

甘氨酸、组氨酸和赖氨酸组成的多肽聚合物，能够促进细胞增殖分化，使皮肤光滑细嫩，强化皮肤屏障，加快皮肤修复过程，增加细胞间质，保持皮肤水分，减少皮肤水分流失；

②积雪草提取物：

伞形科雷公根属植物积雪草全草提取物，含有积雪草甙、参枯尼甙、异参枯尼甙、羟基积雪草甙等多种物质及胡萝卜烃类、叶绿素、槲皮素和葡萄糖的黄酮甙。可促进体内胶原合成和心血管生成，刺激肉芽生长等功效，故能促进伤口愈合，促进新陈代谢作用。

③凤凰单丛茶茶叶挥发油：

产自广东潮州凤凰山上的凤凰单枞茶，取其新鲜茶叶进行植物挥发油提取，经试验有抗炎活性。

④反式-4-叔丁基环己醇：

人工合成，能抑制香草酸亚型瞬时受体电位1通道蛋白(Transient receptorpotential vanilloid 1,TRPV-1)过表达，降低神经敏感度，达到舒缓镇静的效果。

⑤神经酰胺2脂质体：

神经酰胺是细胞间基质的主要部分，在保持角质层水分的平衡中起着重要作用，神经酰胺具有很强缔合水分子能力，它通过在角质层中形成网状结构维持皮肤水分。

⑥透明质酸钠(高分子量、小分子量)：

天然保湿因子；大分子量(150～180万道尔顿)的透明质酸钠保湿效果更好；小分子量(1000～2000道尔顿)的透明质酸钠可渗入皮肤表皮层，促进皮肤营养的供给和废物的排泄，从而防止皮肤老化，起到美容和养颜作用；

⑦尿素：保湿剂。

其中，积雪草提取物的制备工艺可表述如下：

1)粉碎过筛：将干积雪草用破壁机粉碎，过50～200目筛；

2)提取：取积雪草50g，加入10～30倍体积水，在温度60～80℃下提取1～2H，重复提取3次，合并提取液；

3)浓缩过滤：对提取液过滤除去滤渣，并进行浓缩处理；

4)吸附洗脱：将浓缩液用D101B大孔树脂进行吸附，用50％乙醇进行洗脱1～3次，合并解脱液，进行减压浓缩将乙醇分离，得积雪草浸膏。

其中，凤凰单丛茶茶叶挥发油制备工艺可表述如下：

1)水蒸气蒸馏：将凤凰单丛茶茶叶置于水蒸气蒸馏发生器内，进行茶叶挥发油的蒸馏提取；

2)分离：将制得的茶叶挥发油和水的混合物进行分离，得凤凰单丛茶茶叶挥发油。

实施例1-3

一种抗敏修护屏障组合物，其原料组份如下表1所示。

表1抗敏修护屏障组合物的配方组份(重量百分比％)

上述实施例1-3的抗敏修护屏障组合物的制备工艺如下：

将寡肽-1、积雪草提取物、凤凰单丛茶茶叶挥发油、反式-4-叔丁基环己醇、神经酰胺2脂质体、低分子量透明质酸钠、高分子量透明质酸钠、尿素、去离子水按照比例混合，搅拌均匀。

以下实施例4-6为含有实施例1抗敏修护屏障组合物的外用护肤制品

实施例4(含抗敏修护屏障组合物的护肤凝胶)

一种含实施例1的抗敏修护屏障组合物的护肤凝胶，其配方原料如下表2所示。

表2含实施例1的抗敏修护屏障组合物的护肤凝胶的配方(重量百分比％)

上述实施例4的含抗敏修护屏障组合物的护肤凝胶的制备工艺如下：

1)先在去离子水中溶解增稠剂；

2)皮肤调理剂、防腐剂、去离子水溶解；

3)将两者混合搅拌；脱气；

4)加入pH调节剂、活性成分、香精、增溶剂等，在搅拌混合，脱气，出料。

实施例5(含抗敏修护屏障组合物的护肤水)

一种含实施例1的抗敏修护屏障组合物的护肤水，其配方原料如下表3所示。

表3含实施例1的抗敏修护屏障组合物的护肤水的配方(重量百分比％)

上述实施例5的含抗敏修护屏障组合物的护肤水的制备工艺如下：

将所有成分加入去离子水中，搅拌混合，出料。

实施例6(含抗敏修护屏障组合物的护肤霜)

一种含实施例1的抗敏修护屏障组合物的护肤霜，其配方原料如下表4所示。

表4含实施例1的抗敏修护屏障组合物的护肤霜的配方(重量百分比％)

上述实施例6的含抗敏修护屏障组合物的护肤霜的制备工艺如下：

1)先加热到60℃在去离子水中溶解皮肤调理剂、增溶剂；

2)冷却至40℃以下加入活性成分、防腐剂、pH调节剂、增稠剂、防腐剂，混合搅拌，均质10min；

3)冷却出料。

以下为效果试验例的内容。

效果试验例

对比例1：

与实施例1相比，除了不含寡肽-1、积雪草提取物之外，包含凤凰单枞茶茶叶挥发油20％，反式-4-叔丁基环己醇5％，神经酰胺2脂质体5％，低分子量透明质酸钠6％，高分子量透明质酸钠6％，尿素6％，具体制备过程与实施例1相同；

对比例2：

与实施例1相比，除了不含寡肽-1之外，包含积雪草提取物20％，凤凰单枞茶茶叶挥发油25％，反式-4-叔丁基环己醇5％，神经酰胺2脂质体5％，低分子量透明质酸钠6％，高分子量透明质酸钠6％，尿素6％，具体制备过程与实施例1相同；

对比例3：

与实施例1相比，除了不含积雪草提取物之外，包含寡肽-1 10％，凤凰单枞茶茶叶挥发油10％，反式-4-叔丁基环己醇3％，神经酰胺2脂质体3％，低分子量透明质酸钠7％，高分子量透明质酸钠3％，尿素5％，具体制备过程与实施例1相同；

对比例4：

含寡肽-1 10％；

对比例5：

含积雪草提取物20％；

对比例6：

与实施例1相比，除了不含凤凰单枞茶茶叶挥发油之外，包含寡肽-1 10％，积雪草提取物10％，反式-4-叔丁基环己醇5％，神经酰胺2脂质体5％，低分子量透明质酸钠6％，高分子量透明质酸钠6％，尿素6％，具体制备过程与实施例1相同；

对比例7：

与实施例1相比，除了不含反式-4-叔丁基环己醇之外，包含寡肽-1 15％，雪草提取物15％，凤凰单枞茶茶叶挥发油10％，神经酰胺2脂质体5％，低分子量透明质酸钠6％，高分子量透明质酸钠6％，尿素6％，具体制备过程与实施例1相同；

对比例8：

与实施例1相比，除了不含神经酰胺2脂质体、低分子量透明质酸钠，高分子量透明质酸钠，尿素之外，包含寡肽-1 10％，积雪草提取物10％，反式-4-叔丁基环己醇6％，具体制备过程与实施例1相同；

对比例9：

与实施例1相比，除了不含神经酰胺2脂质体之外，包含寡肽-1 10％，积雪草提取物10％，反式-4-叔丁基环己醇6％，低分子量透明质酸钠10％，高分子量透明质酸钠10％，尿素10％，具体制备过程与实施例1相同；

对比例10：

与实施例1相比，除了不含低分子量透明质酸钠之外，包含寡肽-1 10％，积雪草提取物10％，反式-4-叔丁基环己醇6％，神经酰胺2脂质体10％，高分子量透明质酸钠10％，尿素10％，具体制备过程与实施例1相同；

对比例11：

与实施例1相比，除了不含高分子量透明质酸钠之外，包含寡肽-1 10％，积雪草提取物10％，反式-4-叔丁基环己醇6％，神经酰胺2脂质体10％，低分子量透明质酸钠10％，尿素10％，具体制备过程与实施例1相同；

对比例12：

与实施例1相比，除了不含尿素之外，包含寡肽-1 10％，积雪草提取物10％，反式-4-叔丁基环己醇6％，神经酰胺2脂质体10％，低分子量透明质酸钠10％，高分子量透明质酸钠10％，具体制备过程与实施例1相同。

效果评价1：HaCat-MTT抑制细胞毒性试验

MTT检测法原理：

活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒，而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒，用酶标仪在490nm波长处测定其光吸收值，在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。根据测得的吸光度值(OD值)，来判断活细胞数量，OD值越大，细胞活性越强。

实验选用HaCat(永生化处理人角质形成细胞)细胞悬液浓度为3*10⁵cell/ml，100μL/孔于96孔板内，于37℃，5％CO₂进行培养。加入100μL/孔样品溶液PBS溶液(阴性对照)培养24H后，在加入60μg/mLSDS溶液培养24H(60μg/mLSDS存在下细胞活率为60％)，后加入20μL/孔5mg/ml MTT溶液，置于培养箱反应4H后去除上清液，加入DMSO 150μL/孔，摇床震荡10min后，用酶联免疫检测仪测量490nm处吸光度。

在此实验中，吸光度值越大，证明样品使细胞免受SDS损伤的能力越强，表明样品修护能力越强。如下表5所示。

表5不同样品的浓度与OD值

由表5可得出以下结论：

1)对比例1、4～5和阴性对照相比可知：不含寡肽-1、积雪草提取物的对比例1的OD值与阴性对照接近；只含寡肽-1和只含积雪草提取物的对比例4～5的OD值明显高于阴性对照，说明寡肽-1、积雪草提取物具备使细胞免于SDS损伤的能力，具有修护受损细胞，达到修护皮肤屏障的效果；

2)实施例1～3对比例2～3对比可知，寡肽-1和积雪草提取物复配组合后，OD值明显增大，表明组合物修护细胞受损能力增强；且当含寡肽-1 10％、积雪草提取物20％时，修护能力最强，证明该比例为最佳比例。

效果评价2：抗炎试验和修护细胞屏障能力试验

抑制炎症因子(白介素IL-6)表达和促进血管内皮生长因子(VEGF)的表达。

炎症因子白介素IL-6可引起细胞内炎症产生。

血管内皮生长因子VEGF适当浓度下可促进HaCat的增殖，修护皮肤屏障。

选用HaCat细胞悬液浓度为3*10⁵cell/ml，100μL/孔于6孔板内，于37℃，5％CO₂进行培养至贴壁。加入3mL/孔样品溶液和SDS溶液的混合溶液，SDS溶液(阳性对照)，PBS溶液(阴性对照)置于培养箱继续培养48H，取出后离心，去除沉淀。

用多重液相蛋白定量技术，采用具有特定荧光信号的微球链接特定的捕获抗体，再用于捕捉溶液中的不同的待检测物，根据荧光信号强度，对待检测物进行定量检测。表6所示为抑制炎症因子(白介素IL-6)的定量检测。

表6抑制炎症因子(白介素IL-6)的定量检测

由表6可以得出以下结论：

1)实施例1～3和对比例1～6可知，在凤凰单丛茶茶叶挥发油存在的测试样品IL-6含量较阳性对照低，证明凤凰单丛茶茶叶挥发油有抑制炎症因子产生的能力，具备有良好的抗炎效果；

2)实施例1～3和对比例1～3可知，缺少寡肽-1和积雪草提取物其中之一的样品IL-6含量较阴性对照高，但较阳性对照低，证明寡肽-1、积雪草提取物和凤凰单丛茶茶叶挥发油复配的情况下，可以发挥更优的抗炎效果。且当寡肽-1 10％，积雪草提取物20％，凤凰单丛茶茶叶挥发油20％时，效果最佳。

表7促进血管内皮生长因子(VEGF)的定量检测

由表7可得出以下结论：

1)实施例1～3和对比例1～11可知，缺少任一组分的样品VEGF的含量明显较阴性对照低，实施例1～3VEGF的含量明显高于阴性对照，证明抗敏修护屏障组合物有促进血管内皮生长因子(VEGF)的表达能力，具备良好的修护细胞屏障能力；

2)实施例1的VEGF含量明显高于实施例2～3，证明了屏障修护组合物配伍的合理性。

效果试验例3(人体保湿测试)

选取年龄在18～60周岁之间符合要求的受试者30名；用电容法皮肤水分测定仪预检，前臂测试区域基础值在15-45(Corneometer Unit,C.U.)之间。

测试过程中受试者需要恒温恒湿(温度：20℃-22℃，湿度：40％-60％)环境中，先用干净纸巾擦拭手臂内侧标记受试部位，静坐30min，测试空白值，按照(2.0±0.1mg)/cm²的量涂抹样品。

等待1h，2h，4h，8h后进行皮肤水分值测试。如图1和下表8所示。

表8人体保湿测试水分值(C.U)结果

由图1和表8的结果可知：

受试者在用了含屏障修护组合物的实施例4后，水分值明显比市售竞品和空白高，且与空白和市售产品相比均存在显著性差异，证明含有屏障修护组合物的实施例4具有保湿效果且保湿效果优于市售竞品，保湿效果较佳。

效果试验例4(人体抗敏测试)

样品为：实施例2和市面上口碑佳的保湿凝胶。

表9实施例2和市面上口碑佳的保湿凝胶的使用前后对比

由图2和表9的结果可知：

在使用样品1个月后，受试者红色区降低了46％，脸部皮肤敏感度下降。

以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，故凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰,均仍属于本发明技术方案的范围内。