嘌呤核苷类化合物及其用途
阅读说明：本技术 嘌呤核苷类化合物及其用途 (Purine nucleoside compound and application thereof ) 是由 谢元超 沈敬山 于 2019-09-27 设计创作，主要内容包括：本公开提供了一种通式(I)所示嘌呤核苷类化合物或其药学上可接受的盐、结晶水合物或溶剂合物,包含该化合物的药物组合物及其在制备抗病毒药物中的用途。本发明提供的治疗有效量的通式(I)化合物、或其药学上可接受的盐、结晶水合物及溶剂合物或者药物组合物可单独使用,或者与其他一种或多种抗病毒药物结合,用于减轻或治疗病毒感染。本发明提供的抗病毒核苷具有显著的抗HBV活性,结构新颖,有望开发为新型核苷类乙肝的治疗药物。(The present disclosure provides a purine of formula (I)Nucleoside compounds or pharmaceutically acceptable salts, crystalline hydrates or solvates thereof, pharmaceutical compositions containing the compounds and the use thereof in the preparation of antiviral medicaments. The therapeutically effective amount of the compound of formula (I), or pharmaceutically acceptable salts, crystalline hydrates and solvates thereof or pharmaceutical compositions provided by the invention can be used alone or in combination with one or more other antiviral drugs for the reduction or treatment of viral infections. The antiviral nucleoside provided by the invention has obvious anti-HBV activity and novel structure, and is expected to be developed into a novel nucleoside hepatitis B treatment drug.)
技术领域
本公开涉及一种药物化合物。具体而言，本公开涉及一种嘌呤核苷类化合物及其用途。
背景技术
病毒是最小、也是传播最广的病原微生物，它依赖宿主细胞的代谢系统进行增殖。目前，已发现几百种可感染人类的病毒，其中很多病毒对人类生命和健康构成了严重的威胁，例如人类免疫缺陷病毒(HIV)、流感病毒(influenza virus)、乙肝病毒(HBV)、丙肝病毒(HCV)、登革热病毒、埃博拉病毒(Ebola virus)、呼吸合胞病毒(RSV)、中东呼吸综合征病毒、SARS病毒、寨卡病毒等。
病毒拥有极强的复制能力以及极高的突变率，很多病毒性感染难以通过接种疫苗的方式进行预防，因此在很多情况下，抗病毒药物是病毒感染防治的最主要手段。
病毒遗传物质的复制需要以核苷或脱氧核苷三磷酸为底物。核苷类药物在生物体内可转化为相应的三磷酸形式，在病毒复制阶段，该三磷酸能“伪装”成底物掺入到病毒的DNA或RNA链中，从而抑制遗传物质的复制，发挥抗病毒作用。长期以来，核苷类药物在抗病毒感染的临床治疗中一直发挥着重要作用，但对于一些高致死率的病毒，如Ebola病毒，Marburg病毒，冠状病毒(MERS)，呼吸合胞病毒(RSV)等，临床上还缺乏特异性药物。同时，在对影响范围较广的HBV、HIV和HCV的治疗中，耐药病毒的出现和病毒耐药率的不断攀升使得患者对新一代药物的需求更加迫切。
据WHO统计，全球HBV感染者超过2.5亿，乙肝仍是最严重的流行病之一。核苷类药物作为抗HBV的主要治疗手段，单独或与干扰素联用能够使部分乙肝患者达到功能性治愈目的。艾滋病是另一个威胁极大的传染病，其病原体为专门破坏人体免疫系统的HIV。世界范围内，艾滋病患者超过三千五百万，并且新增感染者持续增多，艾滋病的防控形势不容乐观。
核苷类药物是乙肝和艾滋病治疗方案的核心，虽然已有许多该类药物上市，但其中大部分为老药，临床上已经出现了一些问题，如药物毒副作用大，病毒出现耐药性等。目前为止，在临床研究阶段尚未发现可完全清除乙肝或艾滋病患者体内病毒的新疗法，因此近期来看，强效、低毒、耐药屏障高的抗HBV、HIV核苷药物仍具有广阔的应用前景。
核苷类似物本身极性大、口服生物利用度低，而且需在体内转化为核苷三磷酸形式才能发挥生物活性，因此药用剂量往往较高，长期使用，药物毒副作用比较明显。近年来，磷酸酯前药策略的应用突破了核苷药物开发瓶颈。氨基磷酸酯前药(ProTide)可改善核苷药物的脂溶性，在体内，能够绕开单磷酸化限速步骤，高效率转化为核苷三磷酸活性形式，不但提高药效，而且显著降低毒副作用。
发明内容
本发明的一个目的是提供由通式(I)表示的嘌呤核苷类化合物，其药学上可接受的盐、结晶水合物及溶剂合物。
本发明的另一个目的是提供上述通式(I)化合物、其药学上可接受的盐、结晶水合物及溶剂合物在制备抗病毒药物中的应用。
本发明的再一个目的是提供一种药物组合物，其包含治疗有效量的通式(I)化合物、其药学上可接受的无机或有机盐、结晶水合物及溶剂合物中的一种或几种的混合物。
本发明的技术方案如下：
根据本发明的一方面，本发明提供了一种由以下通式(I)所示的化合物，其药学上可接受的盐、结晶水合物及溶剂合物：
其中：
A为O，-C＝CH2，或CX1X2，
当A为O时，R1选自C1-6烷基、卤代C1-6烷基、叠氮C1-6烷基、氰基C1-6烷基、羟基C1-6烷基、甲氧基C1-6烷基、C2-6烯基、卤代C2-6烯基、C2-6炔基、卤代C2-6炔基、C3-6环烷基C2-6炔基、C3-6环烷基、卤代C3-6环烷基、C1-3烷基C3-6环烷基、C3-6环烷基C1-3烷基、叠氮基、氰基、卤素、-CHR4CH(CH2CH2)；
R2选自羟基、氟；
R3选自氢、氨基、卤素、R5OCONH-；
Y1选自氢、
Y2选自氢、
或者Y1和Y2彼此连接，以形成
R4选自羟基、卤素、氰基、叠氮；
R5选自C1-18烷基、C3-6环烷基、芳基、杂芳基；
R6选自C1-18烷基、C3-6环烷基；
R7选自C1-6烷基、C3-6环烷基、C6-20芳基、C5-20杂芳基；
R8选自C1-6烷基、C3-6环烷基、C6-20芳基、C5-20杂芳基；
R9选自C1-18烷基、C3-6环烷基、C6-20芳基、C5-20杂芳基；
当A为-C＝CH2时，R1选自氢、羟基、氨基、C1-6烷基氨基、C1-6烷基酰胺基、C3-6环烷基酰胺基、C6-20芳基酰胺基、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、叠氮C1-6烷基、氰基C1-6烷基、羟基C1-6烷基、甲氧基C1-6烷基、C2-6烯基、卤代C2-6烯基、C2-6炔基、卤代C2-6炔基、C3-6环烷基C2-6炔基、C3-6环烷基、卤代C3-6环烷基、C1-3烷基C3-6环烷基、C3-6环烷基C1-3烷基、叠氮基、氰基、卤素、-CHR4CH(CH2CH2)；
R2选自氢、羟基、氟；
R3、Y1、Y2、R4、R5、R6、R7、R8、R9定义与其在A为O时的定义相同；
当A为CX1X2时，X1和X2各自独立地选自氢、羟基、卤素、叠氮基、氨基、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷氨基、C1-6烷基甲酰胺基、C2-6环烷基甲酰胺基、C6-20芳基甲酰胺基、C5-20芳杂基甲酰胺基、叠氮C1-6烷基、羟基C1-6烷基、氰基C1-6烷基、甲氧基C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基，且X1和X2不同时为氢，或者X1和X2彼此连接，以形成-(CH2)n-，或卤素取代的-(CH2)n-，其中，n为2至5的整数，从而包含A的5元环与X1和X2一起形成螺环；
R1选自氢、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、叠氮C1-6烷基、氰基C1-6烷基、羟基C1-6烷基、甲氧基C1-6烷基、C2-6烯基、卤代C2-6烯基、C2-6炔基、卤代C2-6炔基、C3-6环烷基C2-6炔基、C3-6环烷基、卤代C3-6环烷基、C1-3烷基C3-6环烷基、C3-6环烷基C1-3烷基、叠氮、氰基、卤素、-CHR4CH(CH2CH2)；
R2选自氢、羟基、氟；
R3、Y1、Y2、R4、R5、R6、R7、R8、R9定义与其在A为O时的定义相同。
根据本发明的一方面，通式(I)所示的化合物中，
当A为O时，R1选自甲基、乙基、异丙基、氯甲基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、2-氟乙基、1-氟乙基、2,2-二氟乙基、2,2,2-三氟乙基、甲氧基甲基、甲氧基乙基、叠氮基甲基、2-叠氮基乙基、1-叠氮基乙基、羟甲基、2-羟基乙基、1-羟基乙基、氰基甲基、2-氰基乙基、1-氰基乙基、乙烯基、2-氟乙烯基、2,2-二氟乙烯基、1-甲基乙烯基、2,2-二甲基乙烯基、乙炔基、2-氟乙炔基、2-甲基乙炔基、2-环丙基乙炔基、乙烯基甲基、3-氟乙烯基甲基、3,3-二氟乙烯基甲基、乙炔基甲基、环丙基、2,2-二氟环丙基、1-甲基环丙基、环丙基甲基、1-环丙基-1-羟基甲基、1-环丙基-1-氟甲基、叠氮基、氟、氰基；R2选自羟基、氟；
R3选自氢、氨基、卤素；
Y1选自氢、乙酰基、丙酰基、异丁酰基、特戊酰基、
Y2选自氢、乙酰基、丙酰基、异丁酰基、特戊酰基、
或者Y1和Y2彼此连接，以形成
R7选自C6-10芳基、C5-10杂芳基；
R8选自C6-10芳基、C5-10杂芳基；
R9选自C2-6烷基、C3-6环烷基、C6-10芳基、C5-10杂芳基；
当A为-C＝CH2时，R1选自氢、羟基、氟、叠氮、氨基、甲基、乙基、异丙基、氯甲基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、2-氟乙基、1-氟乙基、2,2-二氟乙基、2,2,2-三氟乙基、甲氧甲基、甲氧乙基、甲胺基、乙酰氨基、环丙酰胺基、苯甲酰胺基、叠氮甲基、2-叠氮乙基、1-叠氮乙基、羟甲基、2-羟基乙基、1-羟基乙基、氰基甲基、2-氰基乙基、1-氰基乙基、乙烯基、2-氟乙烯基、2,2-二氟乙烯基、1-甲基乙烯基、2,2-二甲基乙烯基、乙炔基、2-氟乙炔基、2-甲基乙炔基、2-环丙基乙炔基、乙烯基甲基、3-氟乙烯基甲基、3,3-二氟乙烯基甲基、乙炔基甲基、环丙基、2,2-二氟环丙基、1-甲基环丙基、环丙基甲基、1-环丙基-1-羟基甲基、1-环丙基-1-氟甲基、叠氮基、氟、氰基；
R2选自氢、羟基、氟；
R3选自氢、氨基、卤素；
Y1选自氢、乙酰基、丙酰基、异丁酰基、特戊酰基、
Y2选自氢、乙酰基、丙酰基、异丁酰基、特戊酰基、
或者Y1和Y2彼此连接，以形成
R7选自C6-10芳基、C5-10杂芳基；
R8选自C6-10芳基、C5-10杂芳基；
R9选自C2-6烷基、C3-6环烷基、C6-10芳基、C5-10杂芳基；
当A为CX1X2时，X1和X2各自独立地选自氢、羟基、氟、叠氮基、氨基、甲基、乙基、异丙基、氯甲基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、2-氟乙基、1-氟乙基、2,2-二氟乙基、2,2,2-三氟乙基、甲氧基、乙氧基、甲胺基、乙酰氨基、环丙酰胺基、苯甲酰胺基、叠氮甲基、2-叠氮乙基、1-叠氮乙基、羟甲基、2-羟基乙基、1-羟基乙基、氰基甲基、2-氰基乙基、1-氰基乙基、甲氧甲基、甲氧乙基、乙烯基、1-甲基乙烯基、2,2-二甲基乙烯基、乙炔基、2-甲基乙炔基，但不同时为氢，或者X1和X2彼此连接，以形成-CH2CH2-，-CF2CH2-或-CH2CH2CH2-，从而包含A的5元环与X1和X2一起形成螺环；
R1选自氢、羟基、氟、叠氮、氨基、甲基、乙基、异丙基、氯甲基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、2-氟乙基、1-氟乙基、2,2-二氟乙基、2,2,2-三氟乙基、甲氧甲基、甲氧乙基、甲胺基、乙酰氨基、环丙酰胺基、苯甲酰胺基、叠氮甲基、2-叠氮乙基、1-叠氮乙基、羟甲基、2-羟基乙基、1-羟基乙基、氰基甲基、2-氰基乙基、1-氰基乙基、乙烯基、乙烯基甲基、3-氟乙烯基甲基、3,3-二氟乙烯基甲基、1-甲基乙烯基、2,2-二甲基乙烯基、乙炔基、2-氟乙炔基、2-甲基乙炔基、2-环丙基乙炔基、乙烯基甲基、3-氟乙烯基甲基、3,3-二氟乙烯基甲基、炔基甲基、环丙基、2,2-二氟环丙基、1-甲基环丙基、环丙基甲基、1-环丙基-1-羟基甲基、1-环丙基-1-氟甲基、叠氮基、氟、氰基；
R2选自氢、羟基、氟；
R3选自氢、氨基、卤素；
Y1选自氢、乙酰基、丙酰基、异丁酰基、特戊酰基、
Y2选自氢、乙酰基、丙酰基、异丁酰基、特戊酰基、
或者Y1和Y2彼此连接，以形成
R7选自C6-10芳基、C5-10杂芳基；
R8选自C6-10芳基、C5-10杂芳基；
R9选自C2-6烷基、C3-6环烷基、C6-10芳基、C5-10杂芳基。
根据本发明的另一方面，在通式I的化合物中，
A为O。
根据本发明的另一方面，在通式I的化合物中，
A为-C＝CH2。
根据本发明的另一方面，在通式I的化合物中，
A为-CX1X2。
进一步优选地，式I中的化合物具有如下结构：
在本发明中，各术语定义如下：
卤代C1-6烷基是指含有1-6个碳原子的直链或支链的饱和烃基的氢原子被1个或多个相同或不同的卤素原子取代，如-CH2F、-CHF2、-CF3、-CH2Cl、-CH2CH2F、-CHFCH3、-CH2Br、-CH2CH2Cl、-CH2CF3；
叠氮基C1-6烷基指叠氮基与含有1-6个碳原子的直链或支链烷基的一个碳原子连接，如-CH2N3、-CH3CH2N3、-CH(CH3)N3等；
氰基C1-6烷基指氰基与含有1-6个碳原子的直链或支链烷基的一个碳原子连接，如-CH2CN、-CH3CH2CN、-CH(CH3)CN等；
羟基C1-6烷基指羟基与含有1-6个碳原子的直链或支链烷基的一个碳原子连接，如-CH2OH、-CH3CH2OH、-CH(CH3)OH等；
甲氧基C1-6烷基指甲氧基与含有1-6个碳原子的直链或支链烷基的一个碳原子连接，如-CH2OCH3、-CH3CH2OCH3、-CH(CH3)OCH3等；
C2-6烯基是指含有2-6个碳原子和一个双键的直链或支链烯基，如-CH＝CH2、-CH2-CH＝CH2、-CH＝CHCH3、-C(CH3)＝CH2、-CH＝CHCH(CH3)2、-CH2CH2CH＝C(CH3)2等；
C2-6炔基是指含有2-6个碳原子和一个三键的直链或支链炔基，如-C≡CH、-CH2-C≡CH、-C≡CCH3、-C≡CCH(CH3)2、-CH2CH2-C≡CCH3等；
卤代C2-6烯基是指含有2-6个碳原子的直链或支链的烯基的氢原子被1个或多个相同或不同的卤素原子取代，如-CH＝CHF、-CF2-CH＝CH2、-CH＝CF2、-CH＝CHCH2Cl、-CH＝CHCF3、-CH2-CH＝CHF、-CH2-CH＝CF2等；
卤代C2-6炔基是指含有2-6个碳原子的直链或支链的炔基的氢原子被1个或多个相同或不同的卤素原子取代，如-C≡CF、-CF2-C≡CH、-C≡CCH2Cl、-C≡CCF3、-CH2CH2-C≡CF等；
C3-6环烷基C2-6炔基是指含有2-6个碳原子的直链或支链的炔基的1个氢原子被1个C3-6环烷基取代，如-C≡CCH(CH2CH2)、-C≡CCH2CH(CH2CH2)等；
卤代C3-6环烷基是指含有3-6个碳原子的环状饱和烃基的氢原子被1个或多个相同或不同的卤原子取代，如-CH(CH2CF2)、-CH(CH2CHF)、-CH(CH2CCl2)等；
C1-3烷基C3-6环烷基是指含有3-6个碳原子的环烷基的1个氢原子被1个C1-3烷基取代，如-C(CH3)(CH2CH2)、-C(CH2CH3)(CH2CH2)、-CH(CH2CH(CH3))等；
C3-6环烷基C1-3烷基是指含有1-3个碳原子的直链或支链烷基的1个氢原子被1个C3-6环烷基取代，如-CH2CH(CH2CH2)、-CH2CH2CH(CH2CH2)、-CH(CH3)CH(CH2CH2)等。
根据本发明的又一方面，本发明还提供根据本发明的通式(I)所示的化合物以及其药学上可接受的盐、结晶水合物及溶剂合物在制备抗病毒的药物中的用途。优选地，所述病毒为乙肝病毒、人免疫缺陷病毒、流感病毒；更优选地，所述病毒为乙肝病毒、人免疫缺陷病毒。
根据本发明的再一方面，本发明还提供了一种药物组合物，其包含治疗有效量的通式(I)化合物、其药学上可接受的无机或有机盐、结晶水合物及溶剂合物中的一种或几种，该组合物可以任选包含药学上可接受的载体或赋形剂。
有益效果
本发明提供的治疗有效量的通式(I)化合物、或其药学上可接受的盐、结晶水合物及溶剂合物或者药物组合物可单独使用，或者与其他一种或多种抗病毒药物结合，用于减轻或治疗病毒感染。本发明提供的抗病毒核苷具有显著的抗HBV活性，结构新颖，有望开发为新型核苷类乙肝的治疗药物。
具体实施方式
下面结合实例对本发明做进一步的说明，但不限于此。
实施例1
中间体1-1合成：参考文献报道方法(Nucleosides,Nucleotides Nucleic Acids2001,20(8):1583-1598；Nucleosides,nucleotides&nucleic acids 2009,28(5):657-677)合成该中间体。所得到产物1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.09-8.16(m,4H),7.64(t,J＝7.8Hz,1H),7.57(t,J＝7.8Hz,1H),7.51(t,J＝7.8Hz,2H),7.44(t,J＝7.8Hz,2H),5.95(dd,J＝17.2,7.4Hz,1H),5.27(ddd,J＝52.6,7.4,4.5Hz,1H),5.06(d,J＝4.5Hz,1H),4.60(d,J＝11.5Hz,1H),4.50(d,J＝11.5Hz,1H),3.46(s,3H),1.37(s,3H).
中间体1-2合成：中间体1-1(500mg，1.3mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，加入醋酸(618mg，10.2mmmol)和醋酐(783mg，7.7mmol)，冰浴下搅拌，再加入浓硫酸(256mg,2.6mmol)，10min后，恢复至室温搅拌。反应完毕后，向反应液中加入二氯甲烷和水，静置分层，水层用二氯甲烷萃取一次，合并二氯甲烷层。萃取液用饱和碳酸氢钠和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩后直接用于下一步。
中间体1-3合成：将上步得到的产物溶于二氯甲烷(10mL)中，冰浴，加入HBr/AcOH溶液(1.3mL，33％)，25℃度下搅拌过夜，次日TLC显示原料基本反应完全。向反应液中加入二氯甲烷和水，分出有机层，水层用二氯甲烷萃取一次，合并有机相，有机相依次用饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得到淡黄色油状物(445mg)。
中间体1-4的合成：将叔丁醇钾(400mg，3.5mmol)加入到叔丁醇和乙腈的混合溶液(15mL，1:1)中，随后，加入6-氯-2-氨基嘌呤(340mg，2.0mmol)，搅拌30min后，加入中间体1-3(436mg，1.0mmol)，60℃下反应，直至反应完全。向反应液中加入饱和氯化铵溶液，乙酸乙酯萃取，分出有机层，有机层用饱和食盐水洗涤、无水硫酸钠干燥，浓缩后，柱层析得产物(273mg)。所得到产物ESI-MS m/z:526.2[M+H]+。
中间体1-5的合成:将2-4(210mg，0.4mmol)溶于氨甲醇溶液(15mL)中，室温搅拌1h，TLC显示原料反应完全。加入醋酸使反应液为中性，蒸除溶剂，柱层析得白色固体(100mg)。所得到产物1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.33(d,J＝1.7Hz,1H),7.04(s,2H),6.27(dd,J＝10.7,5.2Hz,1H),5.96(d,J＝5.1Hz,1H),5.33(dt,J＝53.2,5.2Hz,1H),5.25(t,J＝5.6Hz,1H),4.50(dt,J＝20.0,5.2Hz,1H),3.53–3.42(m,2H),1.15(s,3H)。ESI-MS m/z:318.3[M+H]+。
化合物1的合成：中间体1-5(30mg，0.09mmol)溶于甲醇(10mL)中，加入10％钯碳(8mg)和三乙胺(27mg，0.27mmol)，通入氢气，反应过夜。反应液过滤，滤液浓缩，制备板分离，得到白色固体(16mg)。所得到产物1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.61(s,1H),8.25(s,1H),6.63(s,2H),6.31(dd,J＝11.4,5.2Hz,1H),5.97(d,J＝5.0Hz,1H),5.45-5.13(m,2H),4.51(dt,J＝20.1,5.2Hz,1H),3.13–2.95(m,3H),1.15(s,3H)。ESI-MS m/z:284.2[M+H]+。
实施例2
中间体2-3合成：将17g，24.6mmol中间体2-1(参考文献US20150366888A1合成)溶于乙腈(50mL)中，加入IBX(8.2g，29.3mmol)，加热回流，TLC监测，4h后原料消失。滤掉不溶物，滤渣用乙腈冲洗，合并滤液，浓缩，得到黄色泡沫状固体。该固体不经纯化，加入到1,4-二氧六环(50mL)中，随后加入甲醛溶液(37％，9.8mL)，冰浴下，滴加NaOH(2N，18mL)水溶液。加毕，缓慢升至室温，6h后，向反应液中加入乙醇(15mL)，冰浴下，再加入NaBH4(3.2g，84.6mmol)。TLC监测反应，产物不再增加后，停止搅拌。向反应液中加入饱和NH4Cl水溶液，乙酸乙酯萃取，有机相干燥，浓缩，柱层析，得到5.2g泡沫状固体，收率29％。所得到产物ESI-MS m/z:720.3[M+H]+。
中间体2-4合成：中间体2-3(5.2g，6.0mmol)溶于二氯甲烷(20mL)中，氮气保护，加入吡啶(0.87mL，10.8mmol)，-60℃下，滴加对氯苯甲酰氯(1.38g，7.92mmol)，TLC监测，2h后剩余少量原料。向反应液中加入饱和NaHCO3水溶液，二氯甲烷萃取，分出有机层，萃取液依次用稀盐酸、饱和食盐水洗涤，干燥后浓缩，柱层析分离得到3.4g油状物，产率66％。所得到产物ESI-MS m/z:858.4[M+H]+。
中间体2-5合成：中间体2-4(3.4g，3.97mmol)溶于DMF(20mL)中，加入咪唑(1.3g，19.1mmol)，冰浴，滴加TBDPSCl(2.1g，7.6mmol)，室温反应过夜。反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取，有机层干燥、浓缩后，柱层析分离得到3.1g油状物，产率71％。所得到产物ESI-MS m/z:1096.5[M+H]+。
中间体2-6合成：中间体2-5(3.1g，2.83mmol)溶于甲醇(20mL)中，加入催化量K2CO3(100mg，0.72mmol)，TLC监测，4h后反应完全。向反应液中加入饱和氯化铵水溶液，蒸除大部分溶剂，乙酸乙酯萃取，有机相干燥、浓缩后，柱层析分离，得到2g白色泡沫状固体，产率74％。所得到产物ESI-MS m/z:958.4[M+H]+。
中间体2-8合成：中间体2-6(100mg，0.1mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，氮气保护，加入吡啶(60μL，0.7mmol)，冰盐浴下，滴加Tf2O(42mg，0.15mmol)的二氯甲烷溶液(3mL)，TLC监测直至原料反应完全。向反应液中加入冰水，二氯甲烷萃取，有机相依次用稀盐酸、饱和食盐水洗涤，干燥后浓缩，得到油状物。该油状物溶于DMF(5mL)中，加入LiCl(22.7mg，0.5mmol)，30℃反应过夜。TLC显示原料消失，向反应液中加入水和乙酸乙酯，分出有机相，有机相干燥后浓缩，柱层析纯化得到80mg泡沫状固体，收率80％。所得到产物ESI-MS m/z:976.7[M+H]+。
中间体2-9合成：中间体2-8(150mg，0.15mmol)溶于THF(2mL)中，加入TBAF的四氢呋喃溶液(0.15mL，0.15mmol，1M)，室温反应，TLC监测，至原料消失。向反应液中加入水，乙酸乙酯萃取，有机相干燥后浓缩，得到的油状物再溶于THF(1mL)中，加入80％醋酸水溶液(2mL)，室温反应过夜。蒸干溶剂，柱层析分离得到30mg白色固体，收率57％。所得到产物ESI-MS m/z:352.1[M+H]+。
化合物2合成：中间体2-9(15mg，0.042mmol)溶于甲醇(2mL)中，加入10％钯碳(5mg)和三乙胺(13mg,0.13mmol)，通入氢气，反应过夜。反应液过滤，浓缩后，制备板分离，得到白色固体(8mg)。所得到产物ESI-MS m/z:318.2[M+H]+。
实施例3
中间体3-1合成：参考文献报道方法(Nucleosides,Nucleotides Nucleic Acids2001,20(8):1583-1598；Nucleosides,nucleotides&nucleic acids 2009,28(5):657-677；Journal of medicinal chemistry 2015,58(4):1862-1878)合成3-1。所得到产物1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.15–7.96(m,4H),7.62(t,J＝7.4Hz,1H),7.54(t,J＝7.4Hz,1H),7.48(t,J＝7.7Hz,2H),7.38(t,J＝7.8Hz,2H),6.09(dd,J＝17.4,7.9Hz,1H),5.40(dd,J＝7.7,4.6Hz,0.5H),5.26(dd,J＝7.4,5.1Hz,0.5H),5.11(d,J＝4.6Hz,1H),4.67–4.46(m,4H),3.50(s,3H).
中间体3-2合成：3-1(40mg，0.1mmol)溶于二氯甲烷(2mL)中，依次加入醋酸(48mg，0.8mmol)和醋酸酐(66mg，0.6mmol)，冰浴下搅拌，加入浓硫酸(20mg,0.2mmol)，搅拌10min后，恢复至室温反应。约2h后，TLC显示原料消失，向反应液中加入二氯甲烷和水，静置分层，水层用二氯甲烷萃取一次，合并二氯甲烷层，萃取液用饱和碳酸氢钠和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩直接用于下一步。
中间体3-3合成：将上步得到的产物溶于二氯甲烷(5mL)中，冰浴，加入HBr/AcOH溶液(0.18mL，33％)，25℃度搅拌过夜，次日TLC显示原料基本反应完全。向反应液中加入二氯甲烷和水，分出有机层，水层用二氯甲烷萃取一次，合并有机相，有机相依次用饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，柱层析得油状物(23mg)。
中间体3-4的合成：将叔丁醇钾(16mg，0.15mmol)加入叔丁醇和乙腈的混合溶液(4mL，1:1)中，随后，加入6-氯-2-氨基嘌呤(30mg，0.15mmol)，搅拌30min后，加入中间体3-3(23mg，0.05mmol)。10min后，升温至60℃，1h左右，TLC显示原料基本反应完全。向反应液中加入饱和氯化铵溶液，乙酸乙酯萃取，分出有机层，饱和食盐水洗涤、无水硫酸钠干燥，浓缩后柱层析得白色固体(18mg)。所得到产物1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.06–7.94(m,5H),7.67(t,J＝7.5Hz,1H),7.56-7.48(m,3H),7.37(t,J＝7.8Hz,2H),6.60(dd,J＝19.4,4.0Hz,1H),6.54(dd,J＝12.1,4.8Hz,1H),5.68-5.62(m,0.5H),5.54-5.50(m,0.5H),5.42-5.33(m,2H),5.05(dd,J＝11.7,2.3Hz,1H),4.97(d,J＝10.1Hz,0.5H),4.84(dd,J＝10.0,7.2Hz,1H),4.72(d,J＝10.1Hz,0.5H),4.64(d,J＝11.8Hz,1H)。
中间体3-5的合成：将3-4(15mg，0.03mmol)溶于氨甲醇溶液(8mL)中，室温搅拌1h，TLC显示原料基本反应完全，加入醋酸，使反应液pH为中性，蒸干溶剂，柱层析分离，得白色固体(7mg)。所得到产物1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.25(d,J＝1.9Hz,1H),7.06(s,2H),6.37(dd,J＝11.8,5.2Hz,1H),6.25(d,J＝5.1Hz,1H),5.38–5.15(m,2H),4.77–4.39(m,3H),3.65(dd,J＝11.5,5.2Hz,1H),3.56(dd,J＝11.5,5.4Hz,1H)。
化合物3的合成：中间体3-5(10mg，0.03mmol)溶于甲醇(8mL)中，加入10％钯碳(3mg)和三乙胺(9mg，0.09mmol)，通入氢气，反应过夜。反应液过滤，浓缩后，制备板分离，得到白色固体(5mg)。所得到产物1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.62(s,1H),8.18(d,J＝2.2Hz,1H),6.63(s,2H),6.42(dd,J＝12.4,5.2Hz,1H),6.22(d,J＝5.1Hz,1H),5.36-5.32(m,0.5H),5.29(t,J＝5.7Hz,1H),5.24–5.18(m,0.5H),4.76–4.65(m,1.5H),4.64–4.56(m,1H),4.51–4.44(m,0.5H),3.69–3.62(m,1H),3.61–3.53(m,1H)，ESI-MS m/z:302.3[M+H]+。
实施例4
中间体4-2合成：中间体2-3(720mg，1.0mmol)溶于四氢呋喃(20mL)，室温下，滴加TBAF的四氢呋喃溶液(1.5mL，1.5mmol，1M)，5h后反应完全。蒸除溶剂，加入乙酸乙酯和水，分出有机相，干燥后，蒸干，得无色泡沫状固体。将所得固体加入到80％醋酸水溶液(10mL)中，室温搅拌，10h左右反应完全。减压蒸除溶剂，柱层析分离，得273mg白色固体，收率82％。所得产物1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.31(s,1H),7.03(s,2H),6.44(t,J＝6.2Hz,1H),5.94(d,J＝5.2Hz,1H),5.46(dt,J＝56.8,6.1Hz,1H),5.18(t,J＝5.4Hz,1H),5.00(t,J＝5.4Hz,1H),4.60(dt,J＝26.3,5.8Hz,1H),3.63(dd,J＝11.4,5.6Hz,1H),3.51(d,J＝5.3Hz,2H),3.38(dd,J＝11.6,5.1Hz,1H)。ESI-MS m/z:334.2[M+H]+。
化合物4合成：中间体4-2(40mg，0.12mmol)、氢氧化钯(10mg)和三乙胺(36mg，0.36mmol)加入到甲醇(6mL)中，通入氢气，室温搅拌。10h左右反应完全，过滤后蒸干溶剂，制备板分离，得20mg白色固体，收率56％。所得产物1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.61(s,1H),8.24(d,J＝1.1Hz,1H),6.60(s,2H),6.48(t,J＝6.5Hz,1H),5.92(d,J＝5.3Hz,1H),5.45(dt,J＝56.8,6.1Hz,1H),5.16(t,J＝5.6Hz,1H),4.98(t,J＝5.4Hz,1H),4.62(dt,J＝26.1,5.8Hz,1H),3.64(dd,J＝11.5,5.6Hz,1H),3.50(d,J＝5.4Hz,2H),3.39(dd,J＝11.5,3.9Hz,1H)。ESI-MS m/z:300.3[M+H]+。
实施例5
中间体5-2合成：化合物2-6(0.15g，0.15mmol)加入到乙腈(10mL)中，加入IBX(0.06g，0.22mmol)，80℃回流反应3-4h，TLC监测反应完全。降至室温，过滤除去白色不溶物，滤液蒸干，得到油状物，该油状物溶于THF(5mL)中，备用。甲基三苯基溴化磷(0.16g，0.45mmol)加入到THF(5mL)，-78℃下，滴加正丁基锂的正己烷溶液(0.2mL，0.5mmol，2.5M)，滴毕，升温至0℃。一次性加入上步得到的醛的THF溶液，0℃搅拌2-3h，TLC监测直至反应完全。向反应液中加入饱和氯化铵，乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，蒸干得到黄色油状物，柱层析得到泡沫状固体(0.04g)。所得到产物ESI-MS m/z:954.6[M+H]+。
中间体5-3合成：中间体5-2(0.04g，0.04mmol)加入到乙醇(5ml)中，依次加入10％钯碳(0.01g)和三乙胺(0.04g，0.4mmol)，通入氢气，室温搅拌过夜，TLC显示反应完全。过滤，反应液蒸干，得32mg白色固体。所得到产物ESI-MS m/z:922.7[M+H]+。
化合物5合成：将5-3(32mg，0.035mmol)加入到THF(5mL)中，加入TBAF的THF溶液(0.2mL，0.2mmol，1M)，室温搅拌1-2h后，TLC监测反应完全，蒸干溶剂，随后加入80％醋酸溶液(5mL)，室温搅拌过夜。TLC监测反应完全，蒸干反应液，制备板分离纯化，得到白色固体(3mg)。所得到产物1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.60(s,1H),8.35(s,1H),6.48(dd,J＝12.8,4.9Hz,1H),5.25(dt,J＝53.4,4.7Hz,1H),4.72(dd,J＝20.3,4.5Hz,1H),3.75(dd,J＝11.8,1.8Hz,1H),3.66(d,J＝11.8Hz,1H),1.86–1.64(m,2H),1.03(t,J＝7.5Hz,3H)。ESI-MS m/z:298.30[M+H]+。
实施例6
中间体6-1合成：参照文献报道方法合成6-1(Nucleosides,Nucleotides NucleicAcids 2001,20(8):1583-1598；Nucleosides,nucleotides&nucleic acids2009,28(5):657-677；WO2013095275A1)。所得到产物1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.02(dd,J＝18.3,8.0Hz,4H),7.69(dt,J＝24.9,7.0Hz,2H),7.58(t,J＝7.6Hz,2H),7.50(t,J＝7.5Hz,2H),5.92(dd,J＝18.0,7.9Hz,1H),5.55–5.24(m,1H),5.04(d,J＝4.3Hz,1H),4.48(d,J＝11.5Hz,1H),4.35(d,J＝11.5Hz,1H),3.29(s,3H),0.96(d,J＝8.4Hz,1H),0.59–0.31(m,4H)。
中间体6-2合成：将6-1(170mg,0.41mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，依次加入醋酸酐(251mg，2.46mmol)和醋酸(197mg，3.28mmol)，冰浴下搅拌，加入浓硫酸(82mg，0.82mmol)，维持此温度搅拌10min后，恢复至室温反应，约1h后TLC显示反应完全。向反应液中加入冰水，乙酸乙酯萃取2次，合并乙酸乙酯层，依次用饱和碳酸氢钠和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩后得油状物。
中间体6-3合成：将上步得到的油状物溶于二氯甲烷(5mL)中，冰浴下加入HBr/AcOH溶液(0.82mL，33％)加完后，恢复至室温反应，约4小时后TLC显示原料基本反应完全。向反应液中加入冰水，乙酸乙酯萃取2次，合并乙酸乙酯层，依次用饱和碳酸氢钠和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩后得油状物。
中间体6-4合成:将叔丁醇钾(138mg，1.23mmol)和6-氯-2-氨基嘌呤(237mg，1.25mmol)加入乙腈和叔丁醇的混合溶液中(10mL，1:1)，搅拌10min后，加入上步得到的油状物，加完后升温至60℃，反应1h，TLC显示反应完全。将反应液浓缩，加入水和乙酸乙酯，分出分层，水层用乙酸乙酯洗涤1次，合并有机层，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析得白色固体(35mg)。所得到产物1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.20(s,1H),8.09(d,J＝7.9Hz,2H),7.98(d,J＝7.9Hz,2H),7.76(t,J＝7.5Hz,1H),7.69–7.58(m,3H),7.48(t,J＝7.7Hz,2H),7.08(s,2H),6.45(dd,J＝15.7,4.3Hz,1H),6.29(dd,J＝16.9,3.0Hz,1H),5.80(d,J＝50.6Hz,1H),4.77(d,J＝11.8Hz,1H),4.60(d,J＝11.4Hz,1H),1.26(d,J＝8.2Hz,1H),0.72–0.41(m,4H)。ESI-MS m/z:552.3[M+H]+。
中间体6-5合成：中间体6-4(40mg,0.07mmol)加入到氨甲醇溶液(15mL)中，室温搅拌过夜，次日TLC显示原料基本反应完全，将反应液浓缩，柱层析得产物18mg。所得到产物1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.42(s,1H),7.03(s,2H),6.24–6.20(m,1H),6.05(d,J＝5.2Hz,1H),5.50–5.45(m,.0.5H),5.41(t,J＝5.2Hz,1H),5.36–5.31(m,0.5H),4.82–4.72(m,1H),3.55–3.46(m,2H),1.06–1.01(m,1H),0.47–0.24(m,4H)。ESI-MS m/z:344.1[M+H]+。
化合物6-6合成：将中间体7-5(51mg，0.15mmol)溶于乙醇(5mL)中，加入水合肼(45mg，0.76mmol，85％)，40℃反应约12h，TLC显示反应完全。反应液冷却后过滤，滤饼用乙醇洗涤，得白色固体(40mg)。
化合物6合成：将上步产物溶于NaOMe(1.0mmol)的甲醇溶液(8mL)中，加热回流反应约6h，TLC显示反应完全，反应液为深紫色。冰浴条件下，向反应液中加入醋酸，调节反应液pH至7-8。反应液浓缩，柱层析分离，得白色固体(18mg)。所得到产物1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.59(s,1H),8.33(s,1H),6.57(s,2H),6.30–6.21(m,1H),6.00(d,J＝4.93Hz,1H),5.49–5.27(m,2H),4.78(dt,J＝21.37,6.41Hz,1H),3.60–3.43(m,2H),1.11-0.98(m,1H),0.50-0.17(m,4H)。ESI-MS m/z:310.3[M+H]+。
实施例7
中间体7-1合成：中间体2-6(200mg，0.21mmol)溶于二氯甲烷(15mL)中，室温下，加入Dess-Martin(400mg，0.94mmol)，4h后，反应完全。向反应液中加入二氯甲烷(20mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)和硫代硫酸钠溶液(5mL，10％)，搅拌10min后，分出二氯甲烷层，干燥后，蒸干得泡沫状固体，溶于无水四氢呋喃(5mL)中备用。溴甲基三苯基溴化膦(180mg，0.41mmol)加入到无水四氢呋喃(10mL)中，零下78℃下，加入叔丁醇钾(70mg，0.60mmol)，搅拌5min后，加入上步醛的四氢呋喃溶液。在该温度下反应，TLC检测，直至反应完全。向反应液中加入饱和氯化铵水溶液和乙酸乙酯，分出有机层，干燥后，浓缩，柱层析纯化，得150mg泡沫状固体，收率69％。
中间体7-2合成：中间体7-1(420mg，0.41mmol)溶于无水四氢呋喃(10mL)中，零下78℃下，加入叔丁醇钾(182mg，1.62mmol)，缓慢升至室温，30min后反应完全。向反应液中加入饱和氯化铵水溶液和乙酸乙酯，分出有机层，干燥后，浓缩，柱层析纯化，得180mg泡沫状固体，收率46％。
中间体7-3：中间体7-2(160mg，0.17mmol)溶于四氢呋喃(6mL)中，加入TBAF的四氢呋喃溶液(0.42mL，0.42mmol，1M)，室温搅拌，5h后反应完全。蒸除溶剂，柱层析分离，得到70mg白色固体，收率69％。
中间体7-4合成：上步产物7-2(70mg，0.12mmol)加入到80％醋酸溶液(5mL)中，搅拌过夜。减压蒸除溶剂，制备板分离，得到32mg白色固体，收率84％。所得到产物1H NMR(400MHz,CD3OD):δ8.28(d,J＝1.8Hz,1H),6.53(dd,J＝9.5,5.7Hz,1H),5.35(dt,J＝53.9,5.7Hz,1H),4.78(dd,J＝22.5,5.7Hz,1H),3.89(dd,J＝12.4,1.7Hz,1H),3.80(d,J＝12.4Hz,1H),3.24(s,1H)。ESI-MS m/z:328.2[M+H]+。
中间体7-5合成：将中间体7-4(98mg，0.3mmol)溶于乙醇(5mL)中，加入水合肼(90mg，1.5mmol，85％)，40℃反应约12h，TLC显示原料反应完全。反应液冷却后过滤，滤饼用乙醇洗涤，得白色固体(110mg)。
化合物7合成：将上步产物溶于NaOMe(2.1mmol)的甲醇溶液(10mL)中，加热回流反应约6h，TLC显示反应完全，反应液为深紫色。冰浴条件下，向反应液中加入醋酸，调节反应液pH至7-8。反应液浓缩，柱层析分离，得淡黄色固体(30mg)。所得到产物1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.63(s,1H),8.15(d,J＝3.4Hz,1H),6.73(s,2H),5.91(dd,J＝24.7,2.4Hz,1H),5.32(dd,J＝49.2,2.5Hz,1H),5.22-5.12(m,2H),5.00(d,J＝13.0Hz,1H),3.78(dd,J＝11.8,5.6Hz,1H),3.69(dd,J＝11.8,7.2Hz,1H),3.17(d,J＝5.2Hz,1H)。ESI-MS m/z:294.2[M+H]+。
实施例8
中间体8-2合成：化合物8-1参考文献合成(Nucleosides,Nucleotides NucleicAcids 2001,20(8):1583-1598；Nucleosides,nucleotides&nucleic acids2009,28(5):657-677；Organic Letters,2015,17(4),828-831；Organic&Biomolecular Chemistry,2010,8(22),5159-5165)。将8-1(80mg，0.19mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，依次加入醋酸酐(122mg，1.2mmol)和醋酸(96mg,1.6mmol)，冰浴下搅拌，加入浓硫酸(0.4mmol)，加完后维持此温度搅拌10min，然后后恢复至室温，约3h后TLC显示原料反应完全。向反应液中加入二氯甲烷和水，静置分层，水层用二氯甲烷萃取，合并有机相。有机相依次用饱和碳酸氢钠和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得油状物(87mg)，直接用于下步反应。
中间体8-3合成：将上步得到的产物溶于二氯甲烷(3mL)中，冰浴加入HBr/AcOH溶液(0.4mL，33％)加完后恢复至室温反应，约3小时后，TLC显示原料反应完全。向反应液中加入二氯甲烷和水，静置分层，水层用二氯甲烷萃取，合并有机相。有机相依次用饱和碳酸氢钠和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得油状物，直接用于下步反应。
中间体8-4合成：将叔丁醇钾(64mg，0.57mmol)和6-氯-2-氨基嘌呤(112mg，0.59mmol)加入到乙腈和叔丁醇的混合溶液(4mL，1:1)中，搅拌10min后，加入上步产物，加完后，85℃下反应3h，TLC显示反应完全。将反应液浓缩，加入水和乙酸乙酯，萃取分层，水层用乙酸乙酯洗涤1次，合并有机相。有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析得白色固体(15mg)。所得到产物1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.16(d,J＝3.1Hz,1H),8.12–8.06(m,2H),8.01–7.94(m,2H),7.76(t,J＝7.4Hz,1H),7.65(dt,J＝15.4,7.5Hz,3H),7.50(t,J＝7.8Hz,2H),7.13(s,2H),6.52(dd,J＝17.4,4.4Hz,1H),6.11(dd,J＝20.4,3.0Hz,1H),5.97–5.92(m,0.5H),5.84–5.80(m,0.5H),4.82(d,J＝11.6Hz,1H),4.70(d,J＝11.5Hz,1H),1.81(s,3H)。ESI-MS m/z:550.2[M+1]。
中间体8-5合成：将8-4(15mg)溶于氨甲醇溶液(5mL)中，室温搅拌过夜，次日TLC显示原料反应完全，浓缩，柱层析分离，得白色固体(8mg)。所得到产物1H NMR(400MHz,CD3OD):δ8.27(d,J＝1.8Hz,1H),6.49(dd,J＝9.3,5.7Hz,1H),5.33(dt,J＝54.2Hz,5.8Hz,1H),4.72(dd,J＝22.9,5.8Hz,1H),3.84(dd,J＝12.4,1.7Hz,1H),3.75(d,J＝12.3Hz,1H),1.94(s,3H)。ESI-MS m/z:342.3[M+H]+。
化合物8合成：参考化合物7的合成方法，得到白色固体。所得到产物ESI-MS m/z:308.3[M+1]+。
实施例9
中间体9-1合成：中间体2-6(100mg，0.11mmol)、氢氧化钯(10mg)和三乙胺(32mg，3eq)加入到甲醇(6mL)中，通入氢气，室温搅拌。10h左右反应完全，过滤后蒸干溶剂，制备板分离，得白色固体(85mg)，收率88％。
中间体9-3合成：将上步产物(85mg，0.092mmol)和吡啶(60mg，0.76mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，冰浴下，缓慢滴加三氟甲磺酸酐(78mg，0.28mmol)的二氯甲烷溶液(1mL)，加毕，TLC监测，直至反应完全。加入二氯甲烷和水，分出有机相，有机相依次用饱和碳酸氢钠水溶液和10％柠檬酸水溶液洗涤，干燥后蒸干，得到的油状物溶于DMF(5mL)中，随后加入叠氮化钠(18mg，0.37mmol)，45℃下反应。4h左右反应完全，向反应液中加入乙酸乙酯和水，分出有机相，有机相干燥后，蒸干，得到油状物。
化合物9合成：将上步得到的产物9-3溶于四氢呋喃(5mL)中，加入TBAF(0.2mL，0.2mmol，1M)，室温搅拌，4h反应完全。蒸干反应液，制备板分离，得到泡沫状固体。该固体加入到80％醋酸溶液(5mL)中，室温搅拌过夜，蒸干溶剂，制备板分离，得8mg白色固体，三步反应收率27％。所得到产物1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.59(s,1H),8.29(s,1H),6.60(dd,J＝11.9,5.1Hz,1H),5.38(dt,J＝53.7,4.8Hz,1H),4.79(dd,J＝20.7,4.5Hz,1H),3.80–3.66(m,3H),3.50(d,J＝12.8Hz,1H)。ESI-MS m/z:325.3[M+H]+。
实施例10
中间体10-2合成：10-1参照文献方法合成(Nucleosides,Nucleotides NucleicAcids 2001,20(8):1583-1598；Nucleosides,nucleotides&nucleic acids2009,28(5):657-677；Chemistry-A European Journal,2005,11(6),1861-1870)。将10-1(826mg，2.0mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，依次加入醋酸酐(1.22g，12.0mmol)和醋酸(960mg，16.0mmol)，冰浴下，加入浓硫酸(400mg，4.0mmol)，加完后，维持此温度搅拌10min，然后恢复至室温反应，约1h后TLC显示原料反应完全。向反应液中加入冰水，乙酸乙酯萃取2次，合并有机相，有机相依次用饱和碳酸氢钠和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得油状物，该油状物不经纯化直接用于下步反应。
中间体10-3合成：将上步得到的产物溶于二氯甲烷(10mL)中，冰浴下加入HBr/AcOH溶液(4.0mL，33％)，加完后，恢复至室温反应，约4h后TLC显示原料反应完全。向反应液中加入冰水，乙酸乙酯萃取2次，合并有机相，有机相依次用饱和碳酸氢钠和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得油状物。
中间体10-4合成：将叔丁醇钾(673mg，6.0mmol)和6-氯-2-氨基嘌呤(1.18g，6.2mmol)加入到乙腈和叔丁醇的混合溶液中(20mL，1:1)，搅拌10min后，加入上步产物，然后于60℃反应，1h后，TLC显示原料反应完全。将反应液浓缩，加入水和乙酸乙酯，分出有机层，水层用乙酸乙酯萃取1次，合并有机相，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析得白色固体(300mg)。
中间体10-5合成：中间体(310mg，0.56mmol)加入到氨甲醇溶液(15mL)中，室温搅拌过夜，次日TLC显示原料反应完全，将反应液浓缩，柱层析得白色固体(104mg)。所得到产物1H NMR(500MHz,DMSO)δ8.42(s,1H),7.06(s,2H),6.06(dd,J＝14.2,5.6Hz,1H),6.02(d,J＝5.4Hz,1H),5.68(dt,J＝55.1,5.9Hz,1H),4.98(s,1H),4.52(dt,J＝20.9,5.8Hz,1H),3.68(d,J＝11.6Hz,1H),3.48–3.41(m,2H),3.38–3.29(m,4H)。所得到产物ESI-MS m/z:348.3[M+H]+。
化合物10合成：中间体10-5(20mg，0.058mmol)、10％钯碳(5mg)和三乙胺(18mg，0.18mmol)加入到甲醇(6mL)中，通入氢气，室温搅拌。10h左右反应完全，过滤后蒸干溶剂，制备板分离，得12mg白色固体，收率66％。所得到产物ESI-MS m/z:314.3[M+H]+。
实施例11
中间体11-1合成：原料11-1参考文献方法合成(Nucleosides,NucleotidesNucleic Acids 2001,20(8):1583-1598；Nucleosides,nucleotides&nucleic acids2009,28(5):657-677；WO2014209979A1)，其为一对非对应异构体11-2a(极性偏小)和11-2b(极性偏大)，中间体11-2a 1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.08–7.97(m,4H),7.66–7.58(m,1H),7.56–7.43(m,3H),7.38–7.29(m,2H),6.23(dd,J＝18.6,8.2Hz,1H),5.40(ddd,J＝54.3,8.2,4.6Hz,1H),5.22(q,J＝6.5Hz,1H),5.13(dd,J＝4.6,1.5Hz,1H),4.57(d,J＝11.6Hz,1H),4.51(d,J＝11.6Hz,1H),3.49(s,3H),2.05(s,3H),1.38(d,J＝6.5Hz,3H)。中间体11-2b 1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.13–8.03(m,4H),7.70–7.61(m,1H),7.60–7.46(m,3H),7.41(t,J＝7.8Hz,2H),6.32(dd,J＝17.7,8.0Hz,1H),5.36(dd,J＝8.0,4.6Hz,0.5H),5.29–5.17(m,1.5H),5.11(dd,J＝4.6,1.1Hz,1H),4.72-4.63(m,2H),3.47(s,3H),1.75(s,3H),1.43(d,J＝6.5Hz,3H)。
中间体11-2合成：将中间体11-1(250mg，0.54mmol)溶于二氯甲烷(15mL)中，依次加入醋酸酐(331mg，3.24mmol)和醋酸(261mg，4.34mmol)，冰浴下，加入浓硫酸(108mg，1.08mmol)，加完后，维持此温度搅拌10min，然后恢复至室温反应，约1h后TLC显示原料反应完全。向反应液中加入二氯甲烷和水，静置分层，分出有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩得油状物，该油状物不经纯化直接用于下步反应。
中间体11-3合成：将上步得到的产物溶于二氯甲烷(5mL)中，冰浴加入HBr/AcOH溶液(0.8mL，33％)加完后恢复至室温反应。5h后，向反应液中加入二氯甲烷和水，静置分层，水层用二氯甲烷萃取，合并有机相。有机相依次用饱和碳酸氢钠和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得油状物，直接用于下步反应。
中间体11-4合成：将叔丁醇钾(105.0mg，0.94mmol)和6-氯-2-氨基嘌呤(127mg，0.75mmol)加入到乙腈和叔丁醇的混合溶液(4mL，1:1)中，搅拌10min后，加入上步产物，随后在85℃下反应，TLC监测，直至反应完全。将反应液浓缩，加入水和乙酸乙酯，萃取分层，水层用乙酸乙酯洗涤1次，合并有机相。有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离，得两个白色固体，分别为60mg和40mg。第一个产物1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.25(d,J＝2.2Hz,1H),8.07–8.00(m,2H),7.96–7.87(m,2H),7.76(t,J＝7.5Hz,1H),7.63(dt,J＝15.3,7.5Hz,3H),7.46(t,J＝7.7Hz,2H),7.07(s,2H),6.68(dd,J＝14.7,5.0Hz,1H),6.48(dd,J＝18.9,3.8Hz,1H),5.94(dt,J＝51.3,4.4Hz,1H),5.39(q,J＝6.5Hz,1H),4.91(d,J＝11.8Hz,1H),4.81(d,J＝11.7Hz,1H),1.85(s,3H),1.43(d,J＝6.5Hz,3H).第二个产物1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.37(d,J＝1.9Hz,1H),7.93(d,J＝7.0Hz,2H),7.80–7.65(m,3H),7.62–7.50(m,3H),7.19(t,J＝7.9Hz,2H),7.10(s,2H),6.76(t,J＝7.0Hz,1H),6.69(dd,J＝24.9,5.6Hz,1H),5.95(dt,J＝54.1,6.1Hz,1H),5.41(q,J＝6.3Hz,1H),5.01(d,J＝11.1Hz,1H),4.48(d,J＝11.0Hz,1H),2.27(s,3H),1.31(d,J＝6.4Hz,3H)。
中间体11-5合成：将上步得到的两个非对应异构体分别溶于氨甲醇溶液(10mL)中，室温搅拌过夜，次日TLC显示原料反应完全，浓缩，柱层析分离，得白色固体，分别为25mg和18mg。第一个产物1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.31(d,J＝1.6Hz,1H),7.02(s,2H),6.44(dd,J＝7.6,6.0Hz,1H),5.97(d,J＝5.5Hz,1H),5.50(dt,J＝56.3,6.0Hz,1H),5.14(t,J＝5.5Hz,1H),4.95(d,J＝5.6Hz,1H),4.69(dt,J＝26.1,5.8Hz,1H),3.93–3.83(m,1H),3.71–3.60(m,2H),1.24(d,J＝6.6Hz,3H)。第二个产物1H NMR(400MHz,CD3OD):δ8.39(d,J＝1.4Hz,1H),6.60(t,J＝6.4Hz,1H),5.57(dt,J＝57.2,6.0Hz,1H),4.97(dd,J＝28.1,5.9Hz,1H),4.07(q,J＝6.5Hz,2H),3.69(dd,J＝11.9,1.7Hz,2H),3.54(d,J＝11.9Hz,1H),1.20(d,J＝6.5Hz,3H)。
化合物11合成：中间体11-5(15mg，0.043mmol)、氢氧化钯(5mg)和三乙胺(13.1mg，0.13mmol)加入到甲醇(6mL)中，通入氢气，室温搅拌。6h左右反应完全，过滤后蒸干溶剂，制备板分离，得到白色固体。第一个产物1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.60(s,1H),8.24(d,J＝1.7Hz,1H),6.61(s,2H),6.47(dd,J＝8.1,5.9Hz,1H),5.99(d,J＝5.6Hz,1H),5.49(dt,J＝56.3,5.9Hz,1H),5.15(t,J＝5.5Hz,1H),4.96(d,J＝5.7Hz,1H),4.70(dt,J＝26.0,5.7Hz,1H),3.91–3.83(m,1H),3.69–3.60(m,2H),1.25(d,J＝6.5Hz,3H)。ESI-MS m/z:314.3[M+1]+。第二个产物1H NMR(400MHz,CD3OD):δ8.58(s,1H),8.37(s,1H),6.63(t,J＝6.5Hz,1H),5.57(dt,J＝57.2,6.0Hz,1H),4.99(dd,J＝28.1,5.8Hz,1H),4.08(q,J＝6.5Hz,1H),3.70(dd,J＝11.9,1.8Hz,1H),3.55(d,J＝11.9Hz,1H),1.20(d,J＝6.5Hz,3H)。ESI-MS m/z:314.3[M+1]+。
实施例12
中间体12-2的合成：中间体12-1参考文献报道方法合成(Nucleosides,Nucleotides Nucleic Acids 2001,20(8):1583-1598；Nucleosides,nucleotides&nucleic acids 2009,28(5):657-677；Organic&Biomolecular Chemistry,2012,10(28),5452-5455)。将中间体12-1(713mg，1.37mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，依次加入醋酸(658mg，10.96mmol)和醋酐(838mg，8.22mmol)，冰浴下，加入浓硫酸(274mg，2.74mmol)的二氯甲烷(0.5mL)溶液。搅拌10min后，升温至室温，继续搅拌3h，TLC显示原料反应完全。向反应液中加入二氯甲烷和水，分出有机相，有机相再分别用饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，直接用于下一步。
中间体12-3的合成：将上步得到的产物溶于二氯甲烷(10mL)中，冰浴，加入HBr/HOAc(2.74mL，33％)溶液，加完后恢复至室温反应。3h后，TLC显示原料已经反应完全。向反应液中加入二氯甲烷和水，分出有机相，有机相再分别用饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，直接用于下步反应。
中间体12-4的合成：将叔丁醇钾(461mg，4.11mmol)、6-氯-2-氨基嘌呤(806mg，4.25mmol)和上步产物加入到叔丁醇/乙腈(10mL,1:1)的混合溶液中，加完后升温至60℃反应，1h后，TLC显示原料已经反应完全。将反应液浓缩，加入乙酸乙酯，依次用饱和氯化铵和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，柱层析得白色固体(361mg)。所得到产物1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.25(d,J＝2.6Hz,1H),8.12–8.04(m,2H),7.92–7.80(m,4H),7.75(t,J＝7.4Hz,1H),7.66–7.52(m,4H),7.44–7.31(m,4H),7.06(s,2H),6.60(dd,J＝16.6,4.5Hz,1H),6.21(dd,J＝18.4,3.3Hz,1H),5.84(dt,J＝51.1,3.5Hz,1H),4.83(d,J＝11.8Hz,1H),4.69(d,J＝11.4Hz,1H),4.64–4.57(m,1H),4.56–4.46(m,1H),2.61–2.53(m,1H),2.47–2.40(m,1H)。ESI-MS m/z:660.3[M+H]+。
中间体12-5的合成：将上步产物加入到氨/甲醇溶液(20mL)中，室温搅拌过夜，TLC显示原料反应完全，蒸除溶剂，柱层析分离，得白色固体。所得到产物1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.30(d,J＝1.7Hz,1H),7.03(s,2H),6.29(dd,J＝11.8,5.0Hz,1H),5.96(d,J＝5.2Hz,1H),5.36(t,J＝5.0Hz,0.5H),5.26–5.18(m,1.5H),4.65–4.50(m,2H),3.63–3.52(m,3H),3.47(dd,J＝11.7,5.8Hz,1H),1.87–1.68(m,7.4Hz,2H)。ESI-MS m/z:348.2[M+H]+。
化合物12合成：中间体13-5(50mg，0.14mmol)、10％钯碳(20mg)和三乙胺(101mg，1.0mmol)加入到甲醇(10mL)中，通入氢气，室温搅拌过夜。TLC显示原料反应完全，反应液过滤，滤液蒸干，柱层析分离，得到白色固体(20mg)。所得到产物1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.60(s,1H),8.21(d,J＝1.9Hz,1H),6.62(s,2H),6.31(dd,J＝12.5,5.0Hz,1H),5.95(d,J＝5.2Hz,1H),5.33(t,J＝4.9Hz,0.5H),5.23–5.16(m,1.5H),4.62(t,J＝4.9Hz,1H),4.56(dt,J＝20.2,4.9Hz,1H),3.63–3.51(m,3H),3.45(dd,J＝11.8,5.6Hz,1H),1.88–1.67(m,2H)。ESI-MS m/z:314.3[M+H]+。
实施例13
中间体13-1的合成：参考文献方法合成该中间体(Nucleosides,NucleotidesNucleic Acids 2001,20(8):1583-1598；Nucleosides,nucleotides&nucleic acids2009,28(5):657-677；Organic&Biomolecular Chemistry,2012,10(28),5452-5455；Tetrahedron Lett 2015,56(29):4345-4348)，所得到产物1H NMR(400MHz,DMSO):δ8.05(d,J＝7.3Hz,2H),7.97(d,J＝7.4Hz,2H),7.74(t,J＝7.4Hz,1H),7.66(t,J＝7.4Hz,1H),7.60(t,J＝7.7Hz,2H),7.48(t,J＝7.7Hz,2H),5.96(dd,J＝17.4,7.8Hz,1H),5.53(ddd,J＝52.1,7.7,4.5Hz,1H),5.14(d,J＝4.5Hz,1H),4.81–4.73(m,1H),4.69–4.61(m,1H),4.49(d,J＝11.7Hz,1H),4.33(d,J＝11.6Hz,1H),3.32(s,3H),2.25–2.08(m,1H)。
中间体13-2的合成：将13-1(202mg，0.5mmol)溶于二氯甲烷(6mL)中，依次加入醋酸(240mg，4.0mmol)和醋酐(306mg，3.0mmol)，冰浴下，加入浓硫酸(100mg，1.0mmol)的二氯甲烷(0.5mL)溶液。搅拌10min后，升温至室温，继续搅拌3h，TLC显示原料反应完全。向反应液中加入二氯甲烷和水，分出有机相，有机相再分别用饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，直接用于下一步。
中间体13-3的合成：将上步得到的产物溶于二氯甲烷(5mL)中，冰浴，加入HBr/HOAc(1mL，33％)溶液，加完后恢复至室温反应。3h后，TLC显示原料反应完全。向反应液中加入二氯甲烷和水，分出有机相，有机相再分别用饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，直接用于下步反应。
中间体13-4的合成：将叔丁醇钾(168mg，1.50mmol)、6-氯-2-氨基嘌呤(294mg，1.55mmol)和上步产物加入到叔丁醇/乙腈(10mL，1:1)的混合溶液中，加完后升温至60℃反应。1h后，TLC显示原料反应完全反应液浓缩，加入乙酸乙酯，分别用饱和氯化铵和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，柱层析得白色固体(130mg)。所得到产物1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.24(d,J＝2.6Hz,1H),8.11–8.05(m,2H),7.96–7.89(m,2H),7.78–7.57(m,4H),7.43(t,J＝7.8Hz,2H),7.06(s,2H),6.57(dd,J＝15.8,4.6Hz,1H),6.21(dd,J＝18.8,3.4Hz,1H),5.82(dt,J＝51.3,4.0Hz,1H),4.88–4.57(m,4H),2.45–2.29(m,2H)。ESI-MS m/z:558.4[M+H]+。
中间体13-5的合成：将上步产物加入到氨/甲醇溶液(15mL)中，室温搅拌过夜，TLC显示原料反应完全，蒸除溶剂，柱层析分离，得白色固体。所得产物1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.29(d,J＝1.8Hz,1H),7.04(s,2H),6.29(dd,J＝11.8,5.0Hz,1H),6.11(d,J＝5.0Hz,1H),5.37(t,J＝5.0Hz,0.5H),5.31(t,J＝5.5Hz,1H),5.24(t,J＝5.0Hz,0.5H),4.73–4.49(m,4H),3.58(dd,J＝11.9,5.1Hz,1H),3.52–3.46(m,1H),2.14–1.88(m,2H)。ESI-MS m/z:350.3[M+H]+。
化合物13合成：中间体13-5(18mg，0.052mmol)、钯碳(5mg)和三乙胺(13.1mg，0.13mmol)加入到甲醇(6mL)中，通入氢气，室温搅拌过夜。TLC显示原料反应完全，反应液过滤，滤液蒸干，制备板分离，得到白色固体。所得到产物1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.62(s,1H),8.22(d,J＝2.0Hz,1H),6.63(s,2H),6.34(dd,J＝12.6,5.0Hz,1H),6.12(d,J＝5.0Hz,1H),5.37(t,J＝4.9Hz,0.5H),5.30(t,J＝5.5Hz,1H),5.23(t,J＝4.9Hz,0.5H),4.75–4.49(m,3H),3.58(dd,J＝11.5,4.7Hz,1H),3.53–3.46(m,1H),2.15-1.90(m,2H)。ESI-MS m/z:316.2[M+H]+。
实施例14
中间体14-1合成：参考实施例5中的第一步反应，中间体2-6(600mg，0.625mmol)用IBX氧化。反应完全后，反应液过滤，滤液蒸干，得泡沫状固体。该固体溶液无水四氢呋喃(10mL)中，在零下60℃下搅拌，缓慢滴加甲基锂乙醚溶液(1.0mL，1.6mmol，1.6M)，加毕，在该温度下继续反应2-3h。向反应液中加入饱和氯化铵溶液，乙酸乙酯萃取，干燥，浓缩，柱层析分离，得泡沫状固体350mg，收率57％。ESI-MS m/z:972.7[M+1]+。
中间体14-2合成：将上步产物加入到乙腈(10mL)中，加入IBX(131.6mg，0.47mmol)，在75℃下搅拌。5h后，TLC显示反应完全。反应液冷却，过滤，滤液蒸干后得泡沫状固体，直接进行下一步反应。
中间体14-3合成：甲基三苯基溴化膦(1.29g，3.6mmol)加入到无水四氢呋喃(10mL)中，零下78℃下，加入正丁基锂的正己烷溶液(1.3mL，2.5M)，搅拌10min后，升温至0℃，在该温度下继续搅拌1h，随后加入上步产物的四氢呋喃溶液(2mL)，35℃下反应过夜。TLC检测反应完全，向反应液中加入饱和氯化铵水溶液，乙酸乙酯萃取，干燥，浓缩，柱层析分离，得泡沫状固体200mg，两步收率57％。ESI-MS m/z:968.7[M+1]+。
中间体14-5合成：中间体14-3(97mg，0.1mmol)加入到四氢呋喃(5mL)中，加入TBAF的四氢呋喃溶液(0.3mL，0.3mmol，1M)，室温搅拌，4h后反应完全。蒸除溶剂，柱层析分离，得白色固体。随后将得到的固体加入到80％醋酸水溶液(10mL)中，30℃搅拌过夜。蒸除溶剂，制备板分离，得到白色固体20mg，两步收率58％。所得到产物1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.38(d,J＝1.9Hz,1H),6.53(dd,J＝15.1,4.3Hz,1H),5.27(d,J＝1.6Hz,1H),5.21(t,J＝4.1Hz,0.5H),5.12–5.05(m,1.5H),4.63(dd,J＝15.9,3.9Hz,1H),3.92(dd,J＝12.1,1.3Hz,1H),3.83(dd,J＝12.1,1.7Hz,1H),1.91(s,3H)。ESI-MS m/z:344.3[M+1]+。
化合物14合成：中间体14-5(20mg，0.058mmol)加入到乙醇(3mL)中，加入水合肼(17.1mg，0.29mmol，85％)，40℃反应过夜，TLC显示原料反应完全。蒸干溶剂，加入含NaOMe(0.5mmol)的甲醇溶液(8mL)，加热回流反应约8h，TLC显示反应完全。反应液冷却后，加入醋酸，调节反应液pH至7-8。反应液浓缩，制备板分离，得类白色固体(8mg)。所得到产物1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.60(s,1H),8.37(d,J＝1.9Hz,1H),6.57(dd,J＝15.4,4.2Hz,1H),5.27(s,1H),5.15(dt,J＝53.0,4.1Hz,1H),5.10(s,1H),4.64(dd,J＝15.9,3.9Hz,1H),3.92(dd,J＝12.1,1.3Hz,1H),3.84(dd,J＝12.1,1.7Hz,1H),1.92(s,3H)。ESI-MS m/z:310.3[M+1]+。
实施例15
中间体15-1合成：中间体5-2(476.7mg，0.5mmol)加入到四氢呋喃(10mL)中，室温下，加入TBAF的四氢呋喃溶液(1.5mL，1.5mmol，1M)，4h后反应完毕。蒸除溶剂，加入水，乙酸乙酯萃取，有机相干燥后浓缩，得油状物，该油状物不经纯化直接进行下一步反应。
中间体15-2合成：将上步油状物加入到80％醋酸水溶液(15mL)中，室温搅拌过夜。蒸除溶剂，柱层析分离，得99mg白色固体，两步收率60％。所得产物ESI-MS m/z:330.2[M+1]+。
化合物15合成：中间体15-2(40mg，0.12mmol)加入到乙醇(3mL)中，加入水合肼(35.3mg，0.6mmol，85％)，40℃反应过夜，TLC显示原料反应完全。蒸干溶剂，加入含NaOMe(1.0mmol)的甲醇溶液(8mL)，加热回流反应约8h，TLC显示反应完全。反应液冷却后，加入醋酸，调节反应液pH至7-8。反应液浓缩，制备板分离，得类白色固体(18mg)。所得产物ESI-MSm/z:296.3[M+1]+。
实施例16
中间体16-2合成：16-1参考文献报道方法合成(Journal of MedicinalChemistry,2000,43(23),4516-4525)。将16-1(1.7g，4.32mmol)溶于乙酸乙酯(20mL)中，加入醋酸酐(2.2g，13.0mmol)，冰浴下，缓慢加入浓硫酸(86mg，0.86mmol)，加完后，恢复至室温搅拌过夜，次日TLC显示原料反应完全。向反应液中加入饱和碳酸氢钠溶液，静置分层，水层用乙酸乙酯萃取两次，合并有机相，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得黄色油状物(1.7g)。
中间体16-3合成：将2-氨基-6氯嘌呤(52mg，0.2mmol)加入到乙腈(10mL)中，然后加入BSA(165mg，0.81mmol)，70℃下搅拌1h，反应液由混浊液变澄清。反应液冷却，于冰浴条件下，加入中间体16-2(79mg，0.18mmol)的乙腈溶液，搅拌10min后，加入TMSOTf(140mg，0.63mmol)，搅拌10min，再于60℃下反应过夜，次日TLC显示原料反应完全。将反应液浓缩，加入水和乙酸乙酯，分出有机层，水层用乙酸乙酯萃取1次，合并有机相，有机相依次用饱和碳酸氢钠和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，制备板分离，得白色固体(45mg)。所得到产物1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.30(s,1H),7.42–7.23(m,10H),7.10(s,2H),6.17(d,J＝4.8Hz,1H),5.85–5.79(m,1H),4.80–4.70(m,2H),4.63–4.48(m,3H),3.79–3.65(m,3H),2.03(s,3H)。
中间体16-4合成：将中间体16-3(984mg，1.80mmol)溶于1,4-二氧六环(30mL)中，然后加入一水合氢氧化锂(151mg，3.60mmol)的水溶液(10mL)，约3h后TLC显示原料反应完全。反应液用稀盐酸调pH至6-7，将反应液浓缩至小体积，乙酸乙酯萃取，水层再用乙酸乙酯萃取1次，合并乙酸乙酯层，干燥，浓缩，柱层析得泡沫状固体(850mg)。
中间体16-5合成：将16-4(906mg，1.80mmol)溶于二氯甲烷(40mL)中，冰浴下，依次加入DMAP(1.32g，6mmol)、吡啶(2.56g，32.4mmol)和三氟甲磺酸酐(1.52g，5.4mmol)，加完后，恢复至室温反应，约1h后TLC显示原料反应完全。反应液用二氯甲烷稀释，然后依次用稀盐酸、饱和碳酸氢钠和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥、浓缩后，得油状物(1.07g)。
中间体16-6合成：将上步得到的油状物溶于DMF(25mL)中，冰浴下，加入四丁基醋酸铵(1.0g，3.34mmol)室温反应过夜，次日TLC显示原料基本反应完全。向反应液加入水中，乙酸乙酯萃取，有机层干燥、浓缩后，得油状物。所得到产物1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.10(s,1H),7.41–7.24(m,10H),7.08(s,2H),6.41(d,J＝6.3Hz,1H),5.41(t,J＝6.6Hz,1H),4.80–4.65(m,3H),4.59(s,2H),3.89–3.77(m,3H),1.72(s,3H)。
中间体16-7合成：将中间体11-6(160mg，0.30mmol)溶于1,4-二氧六环(10mL)中，然后加入一水合氢氧化锂(25mg，0.60mmol)的水溶液(10mL)，约3h后TLC显示原料反应完全。反应液用稀盐酸调pH至6-7，将反应液浓缩至小体积，乙酸乙酯萃取，水层再用乙酸乙酯萃取1次，有机相合并，干燥、浓缩、柱层析分离得泡沫状固体(110mg)。所得到产物1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.06(s,1H),7.42–7.25(m,10H),7.02(s,2H),6.21(d,J＝6.1Hz,1H),6.04(d,J＝5.4Hz,1H),4.74(s,2H),4.61–4.51(m,3H),4.37(d,J＝6.4Hz,1H),3.81–3.70(m,3H)。
中间体16-8合成：将11-7(100mg，0.2mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，冷却至-78℃，然后加入BCl3的二氯甲烷溶液(2mL，2mmol，1M)，加完后，维持此温度搅拌1h，然后在-15℃搅拌2h，TLC显示原料反应完全。将反应液降温至-25℃，加入甲醇和二氯甲烷混合物溶液(20mL，1:1)，然后升温至-5℃，用氨水溶液将反应液pH调至7-8左右，搅拌2h后，将反应液浓缩，制备板分离，得白色固体(50mg)。所得到产物1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.13(s,1H),6.98(s,2H),6.16(d,J＝6.4Hz,1H),5.85(d,J＝5.4Hz,1H),5.76(d,J＝5.5Hz,1H),5.43(t,J＝5.9Hz,1H),4.36(dd,J＝12.6,6.8Hz,1H),4.24(dd,J＝7.4,5.4Hz,1H),3.70–3.55(m,3H)。
化合物16合成：中间体16-8(20mg，0.061mmol)、氢氧化钯(5mg)和三乙胺(18mg，0.18mmol)加入到甲醇(6mL)中，通入氢气，室温搅拌。10h左右反应完全，过滤后蒸干溶剂，制备板分离，得10mg白色固体，收率56％。所得到产物ESI-MS m/z:292.3[M+H]+。
实施例17
中间体17-2合成：原料17-1参考文献报道方法合成(WO2013052523A1)。17-1(3.5g，8.75mmol)溶于DMF(30mL)中，冰浴下，加入NaH(700mg，17.5mmol，60％)，搅拌30min后，加入CH3I(2.4g，16.9mmol)，室温搅拌，TLC监测至反应完全。向反应液中加入饱和氯化铵溶液，乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，干燥后浓缩，柱层析分离，得到3g无色油状物，产率83％。
中间体17-3合成：中间体17-2(2.9g，7mmol)溶于乙酸乙酯(20mL)中，冰浴，加入醋酐(1.9mL)，再滴入浓H2SO4(87μL)的乙酸乙酯溶液(1mL)，室温反应，5h后TLC显示原料基本消失。向反应液中加入饱和NaHCO3水溶液，乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，干燥、浓缩，柱层析分离，得到2.6g无色油状物，产率78.3％。
中间体17-4合成：2-氨基-6-氯嘌呤(1.3g，7.7mmol)溶于乙腈(30mL)中，加入BSA(3.9g，19.2mmol)，70℃加热2h。冷却至室温，加入17-3(2.2g，4.8mmol)的乙腈溶液(40mL)，然后滴加TMSOTf(3.7g，16.8mmol)，加毕，搅拌20min后，60℃加热，5h后TLC显示反应完全。向反应液中加入饱和NaHCO3水溶液，乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，干燥、浓缩，柱层析分离，得到2.2g白色泡沫状固体，产率74.0％。
中间体17-5合成：中间体17-4(2g，3.5mmol)溶于1,4-二氧六环(40mL)中，然后加入一水合氢氧化锂(0.3g，7.0mmol)的水溶液(20mL)，约3h后TLC显示原料反应完全。反应液用稀盐酸调pH至6-7，将反应液浓缩至小体积，乙酸乙酯萃取，水层再用乙酸乙酯萃取1次，有机相合并，干燥、浓缩、柱层析分离得1.7g泡沫状固体，收率92.5％。
中间体17-6合成：将17-5(564mg，1.07mmol)溶于二氯甲烷(15mL)中，冰浴下，依次加入DMAP(784mg，6.42mmol)、吡啶(1.52g，19.26mmol)和三氟甲磺酸酐(906mg，3.21mmol)，加完后恢复至室温反应，约1h后TLC显示原料反应完全。加入二氯甲烷，反应液依次用稀盐酸、饱和碳酸氢钠和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩直接用于下步反应。
中间体17-7合成：将上步产物溶于DMF(25mL)中，冰浴下，加入四丁基醋酸铵(615mg，2.04mmol)，室温反应过夜，次日TLC显示原料基本反应完全。将反应液加入水中，乙酸乙酯萃取，有机层干燥，浓缩直接用于下步反应。
中间体17-8合成：将上步得到的产物溶于1,4-二氧六环(5mL)中，加入一水合氢氧化锂(13mg，0.30mmol)的水溶液(10mL)，约3h后TLC显示原料反应完全。用稀盐酸将反应液pH调至6-7，浓缩至小体积，乙酸乙酯萃取，水层用乙酸乙酯洗涤1次，合并乙酸乙酯层，干燥，浓缩，柱层析得白色固体(47mg)。
中间体17-9合成:将17-8(47mg，0.09mmol)加入到二氯甲烷(5mL)中，冷却至-78℃，然后加入BCl3的二氯甲烷溶液(0.9mL,0.9mmol，1M)，加毕，在此温度下搅拌1h，然后升温至-15℃，继续搅拌2h，TLC显示原料反应完全。将反应液降温至-25℃，加入甲醇和二氯甲烷的混合溶液(20mL，1:1)，然后于-5℃下加入氨水，使反应液pH至7-8，再在0℃下搅拌2h，反应液浓缩，制备板分离，得到白色固体(28mg)。所得产物1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.15(s,1H),6.93(s,2H),6.15(d,J＝5.9Hz,1H),5.57(d,J＝5.5Hz,1H),5.51(d,J＝5.1Hz,1H),5.07(t,J＝5.5Hz,1H),4.40–4.33(m,1H),4.27–4.20(m,1H),3.57–3.46(m,3H),3.38–3.32(m,4H)。
化合物17合成：中间体17-9(20mg，0.058mmol)、氢氧化钯(5mg)和三乙胺(18mg，0.17mmol)加入到甲醇(6mL)中，通入氢气，室温搅拌。10h左右反应完全，过滤后蒸干溶剂，制备板分离，得12mg白色固体，收率66％。ESI-MS m/z:312.4[M+H]+。
实施例18
中间体188-2合成：恩替卡韦一水合物(购买于台州市博纳化工有限公司)(295mg，1.0mmol)，三乙胺(1.01g，10mmol)，DMAP(24mg，0.2mmol)加入到乙腈(10mL)中，随后加入醋酐(357.3mg，3.5mmol)，室温搅拌。反应液由浑浊逐渐变澄清，随后又逐渐析出不溶物。反应过夜后，过滤，乙腈洗涤，得到白色固体320mg，收率88％。所得产物1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.60(s,1H),7.74(s,1H),6.43(s,2H),5.35(t,J＝9.6Hz,1H),5.26–5.12(m,2H),4.71–4.59(m,1H),4.35–4.16(m,2H),3.01–2.88(m,1H),2.69–2.56(m 1H),2.31–2.20(m 1H),2.07(s,3H),2.04(s,3H)。
中间体18-3合成：中间体18-2(180mg，0.5mmol)，苄基三乙基氯化铵(228mg，1.0mmol)加入到乙腈(10mL)，冰浴下，依次加入N,N-二甲苯胺(30mg，0.25mmol)和三氯氧磷(385mg，2.5mmol)，加毕，70℃加热反应。1h左右，反应完全，蒸干反应液，柱层析分离，得到150mg白色固体，收率79％。ESI-MS m/z:380.3[M+H]+。
中间体18-4合成：中间体18-3(76mg，0.2mmol)加入到胺甲醇溶液(8mL)中，室温搅拌，5h左右反应完全。蒸干溶剂，柱层析分离，得到白色固体40mg，收率67％。ESI-MS m/z:296.3[M+H]+。
化合物18合成：将中间体18-4(40mg，0.14mmol)和锌粉(0.16g)加入到氨水(7mL)中，55℃下加热反应，TLC检测，直至反应完全。蒸干反应液，柱层析分离，得到24mg白色固体，收率67％。所得产物1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.58(s,1H),8.07(s,1H),6.52(s,2H),5.51(t,J＝9.4Hz,1H),5.12(s,1H),4.93(d,J＝3.1Hz,1H),4.88(t,J＝5.4Hz,1H),4.55(s,1H),4.29–4.23(m,1H),3.62–3.52(m,2H),2.60-2.53(m,1H),2.38–2.23(m,1H),2.13–2.02(m,1H)。ESI-MS m/z:262.3[M+H]+。
实施例19
中间体19-2合成：中间体19-1(200mg，0.54mmol)(购买于上海瑞泰医药科技有限公司)溶于的乙醚(10mL)中，氮气保护，冰浴条件下加入的Et2Zn/环己烷溶液(1.62mL，1.0M)和CH2I2(608mg，3.24mmol)，常温搅拌30min后，加热回流反应。约6h后，TLC显示原料反应完全。冷却至室温，加入饱和氯化铵水溶液，乙醚萃取两次，饱和食盐水洗涤有机相，无水硫酸钠干燥后柱层析分离，得180mg蜡状类白色固体，收率80％。所得到产物1H NMR(400MHz,CDCl3):δ4.35-4.28(m,1H),3.50-3.45(m,1H),3.42(dd,J＝10.3,5.8Hz,1H),3.26(dd,J＝10.3,7.5Hz,1H),2.48(br,1H),2.14-2.02(m,2H),1.84(dd,J＝13.6,1.8Hz,1H),1.02-0.94(m,1H),0.89(s,9H),0.88(s,9H),0.77-0.68(m,1H),0.55–0.45(m,1H),0.43-0.35(m,1H),0.09(m,3H),0.08(m,3H),0.02(s,6H)。
中间体19-3合成：中间体19-2(108mg，0.28mmol)、PPh3(210mg，0.8mmol)、6-氯-2-氨基嘌呤(50mg，0.29mmol)加入到无水THF(5mL)中，冰浴下，缓慢加入DIAD(160mg，0.8mmol)，升至室温，搅拌4h后，反应液浓缩，柱层析纯化，得白色固体20mg。
中间体19-4合成：中间体19-3(65mg,0.12mmol)，溶于THF(5mL)中，加入TBAF的THF溶液(0.24mL，0.24mmol，1M)，室温搅拌约3h后，TLC显示原料消失。反应液浓缩，柱层析分离得30mg白色固体，产率约80％。所得到产物1H NMR(400MHz,CD3OD):δ8.41(s,1H),4.49(q,J＝5.8Hz,1H),3.73(dd,J＝11.2,4.5Hz,1H),3.61(dd,J＝11.2,4.8Hz,1H),2.53–2.46(m,1H),2.33–2.26(m,1H),1.96(q,J＝5.0Hz,1H),0.94–0.85(m,2H),0.80–0.73(m,1H),0.05–-0.04(m,1H).13C NMR(125MHz,CD3OD):δ161.4,155.2,151.4,144.3,124.7,73.9,61.6,61.2,55.5,41.6,26.6,16.8,8.7。ESI+-MS m/z:310.7[M+1]。
化合物19合成：中间体19-4(20mg，0.065mmol)、氢氧化钯(5mg)和三乙胺(20mg，0.2mmol)加入到甲醇(6mL)中，通入氢气，室温搅拌。10h左右反应完全，过滤后蒸干溶剂，制备板分离，得13mg白色固体，收率73％。ESI-MS m/z:276.3[M+H]+。
实施例20
中间体20-1合成：中间体19-1(372mg，1.0mmol)加入到无水THF(2mL)中，加入硼烷THF溶液(2.5mL，2.5mmol，1M)，rt搅拌过夜。加入NaOH(120mg)的水溶液(1mL)和双氧水(30％，1.0mL)，1h后，乙酸乙酯萃取，有机相干燥、浓缩，柱层析分离，得到20-1a(135mg，小极性产物)和20-1b(200mg，大极性产物)，收率84％。所得到产物20-1a 1H NMR(400MHz,CDCl3):δ4.38–4.28(m,1H),4.21–4.14(m,1H),3.91–3.80(m,2H),3.51(d,J＝6.1Hz,2H),3.24(d,J＝9.8Hz,1H),2.98(t,J＝6.0Hz,1H),2.14–2.03(m,1H),1.91-1.77(m,3H),0.89(s,9H),0.88(s,9H),0.11-0.06(m,6H),0.05(s,6H)。所得到产物20-1b 1H NMR(400MHz,CDCl3):δ4.08–3.95(m,2H),3.80–3.61(m,4H),3.22(t,J＝6.2Hz,1H),2.40–2.16(m,3H),2.14–2.04(m,1H),0.90(s,9H),0.88(s,9H),0.11-0.02(m,12H)。
中间体20-2合成：中间体20-1(135mg，0.34mmoL)加入到吡啶(1mL)中，加入MMTrCl(209mg，0.068mmol)，2h左右反应完全。反应液浓缩，柱层析分离得210mg泡沫状固体，收率90％。
中间体20-3合成：中间体20-2(210mg，0.32mmol)，2-氨基-6-氯嘌呤(94.3mg，0.56mmol)和PPh3(168mg，0.64mmol)加入到无水THF(2mL)中，缓慢加入DIAD(129mg，0.64mmol)，室温反应3h后，柱层析分离，得240mg白色固体。
中间体20-4合成：中间体20-3(240mg，0.3mmol)加入到THF(2mL)，加入TBAF的THF溶液(0.9mL，1M)，rt反应过夜。蒸除溶剂，加入水，有不溶物析出，过滤后的固体加入到水(2mL)中，室温搅拌2h后，过滤，烘干得白色固体。所得产物ESI-MS m/z:586.2[M+H]+。
化合物20合成：中间体20-4(100mg，0.17mmol)加入到80％醋酸水溶液(10mL)中，室温搅拌过夜。蒸除溶剂，柱层析纯化，得50mg白色固体。该固体加入到甲醇(10mL)中，加入氢氧化钯(10mg)和三乙胺(48mg，0.47mmol)，通入氢气，室温搅拌。过夜后反应完全，过滤后蒸干溶剂，制备板分离，得29mg白色固体。所得产物ESI-MS m/z:280.3[M+H]+。
实施例21
中间体21-1合成：中间体19-1(400mg，1.7mmol)溶于甲醇(10mL)中，加入二氧化铂(10mg)，通入氢气，室温反应过夜。反应液过滤，滤液浓缩后柱层析分离，得一对非对应异构体21-a(170mg，极性小)和21-b(170mg，极性大)。所得产物21-1a 1H NMR(400MHz,CDCl3):δ4.26–4.19(m,1H),4.08–3.98(m,1H),3.66(dd,J＝10.1,4.4Hz,1H),3.42(dd,J＝10.1,6.1Hz,1H),1.84–1.73(m,2H),1.72–1.52(m,2H),1.14(d,J＝6.9Hz,3H),0.91(s,9H),0.90(s,9H),0.08(s,6H),0.07–0.04(m,6H)。。所得产物21-1b 1H NMR(400MHz,CDCl3):δ4.23-4.15(m,1H),3.86-3.75(m,1H),3.63(dd,J＝10.2,5.6Hz,1H),3.51(dd,J＝10.2,6.0Hz,1H),2.35–2.06(m,4H),0.99(d,J＝7.3Hz,3H),0.91(s,9H),0.90(s,9H),0.09–0.03(m,12H)。
中间体21-2合成：中间体21-1(68mg，0.18mmol)、2-氨基-6-氯嘌呤(47mg，0.28mmol)、PPh3(98mg，0.37mmol)加入到无水THF(10mL)中，滴加DIAD(75mg，0.37mmol)，室温反应，TLC监测，3h后原料消失。蒸除溶剂，柱层析分离得到70mg油状物，收率74％。
中间体21-3合成：中间体21-2(64mg，0.12mmol)加入到THF(2mL)，加入TBAF的THF溶液(0.36mL，1M)，rt反应过夜。蒸除溶剂，柱层析分离，得28mg白色固体，收率80％。
化合物21合成：中间体21-3(28mg，0.09mmol)加入到甲醇(5mL)中，加入氢氧化钯(8mg)和三乙胺(28mg，0.28mmol)，通入氢气，室温搅拌。过夜后反应完全，过滤后蒸干溶剂，制备板分离，得15mg白色固体。ESI-MS m/z:264.2[M+H]+。
实施例22
中间体22-1合成：中间体20-1(150mg，0.38mmol)、TEMPO(0.5mg)以及含有溴化钾(3.6mg)/四丁基溴化铵(4.9mg)的饱和碳酸氢钠溶液(0.5mL)加入到二氯甲烷(6mL)中，冰浴下，依次加入次氯酸钠(0.38mL)溶液和饱和碳酸氢钠溶液(0.35mL)，继续反应1h。加入二氯甲烷和水，分出有机相，干燥后浓缩，不经纯化进行下一步反应。
中间体22-2合成：甲基三苯基溴化膦(236mg，0.66mmol)加入到无水四氢呋喃(10mL)中，-78℃下，加入正丁基锂溶液(0.22mL，0.55mmol，2.5M)，加毕，升至冰浴下搅拌。30min后，加入上一步醛的四氢呋喃溶液，随后室温搅拌，3h左右，反应完全。加入氯化铵饱和溶液，乙酸乙酯萃取，干燥，浓缩，柱层析纯化，得40mg油状物。
中间体22-3合成：将中间体22-2(40mg，0.10mmol)、2-氨基-6-氯嘌呤(34mg，0.20mmol)、PPh3(52.5mg，0.20mmol)加入到无水THF(8mL)中，滴加DIAD(44.5mg，0.22mmol)，室温反应，TLC监测，2h后原料消失。蒸除溶剂，柱层析分离得到36mg泡沫状固体，收率67％。
中间体22-4合成：将中间体22-2(36mg，0.067mmol)加入到THF(2mL)中，加入TBAF的THF溶液(0.20mL，1M)，rt反应过夜。蒸除溶剂，柱层析分离，得17mg白色固体，收率81％。
化合物22合成：将上步产物22-4(17mg，0.055mmol)加入到乙醇(3mL)中，加入水合肼(17.1mg，0.29mmol，85％)，40℃反应过夜。蒸干溶剂，加入含NaOMe(0.5mmol)的甲醇溶液(8mL)，加热回流反应约8h，TLC显示反应完全。反应液冷却至室温，加入醋酸，调节反应液pH至7-8。反应液浓缩，制备板分离，得白色固体(8mg)。所得产物ESI-MS m/z:276.2[M+H]+。
实施例23
中间体23-2合成：中间体23-1(164.6mg，0.2mmol)(购买于上海明粲生物科技有限公司)加入到无水THF(10mL)中，冰浴下，加入NaH(12mg,0.3mmol，60％)，10min后，加入碘甲烷(57mg，0.4mmol)，TLC检测，直至反应完全。加入饱和氯化铵水溶液，乙酸乙酯萃取，干燥后浓缩，得油状物。
中间体23-3合成：将上步得到的油状物加入到乙腈(10mL)中，加入2M盐酸溶液(2mL)，45℃下搅拌，TLC检测直至反应完全。加入水，乙酸乙酯萃取，有机相干燥，浓缩，柱层析纯化，得62mg白色固体，收率65％。
中间体23-4合成：中间体23-3(62mg，0.13mmol)、苄基三乙基氯化铵(59mg，0.26mmol)到乙腈(5mL)，冰浴下，依次加入N,N-二甲苯胺(8.5mg，0.07mmol)和三氯氧磷(100mg，0.65mmol)，加毕，70℃加热反应。1h左右，反应完全，蒸干反应液，柱层析分离，得到44mg白色固体，收率68％。所得产物ESI-MS m/z:494.3[M+H]+。
中间体23-5合成：中间体23-3(44mg，0.089mmol)加入到二氯甲烷(5mL)中，冷却至-78℃，加入BCl3的二氯甲烷溶液(0.9mL,0.9mmol，1M)，加毕，升温至-20℃，继续搅拌直至TLC显示原料反应完全。向反应液中加入异丙醇(0.5mL)，反应液浓缩，制备板分离，得20mg白色固体，收率70％。
化合物23合成：将中间体23-5(20mg，0.064mmol)加入到甲醇(5mL)中，加入钯碳(8mg)和三乙胺(19.2mg，0.19mmol)，通入氢气，室温搅拌。过夜后反应完全，过滤后蒸干溶剂，制备板分离，得12mg白色固体。ESI-MS m/z:280.3[M+H]+。
以标准药理学检验规程评价本发明的化合物。
下面是本发明的化合物的药理试验及结果。
体外抗HBV活性
应用HepG2.2.15细胞评价化合物的体外抗HBV活性。HepG2.2.15细胞接种到96孔板，孵育一天后，加入测化合物，五天后更换新的含化合物的培养液，培养三天，收集上清。提取上清中DNA，用定量PCR检测上清中HBV DNA的含量。计算化合物对HBV DNA的抑制百分比，应用GraphPad Prism软件计算化合物的半数有效浓度(EC50)，同时测定化合物的对测试细胞的半数有毒浓度(CC50)。
A代表0.5nM<EC50<10nM；B代表10nM<EC50<100nM；C代表100nM<EC50
结果表明，本发明的化合物在体外对乙肝病毒复制具有显著抑制作用。本发明的化合物可以用于制备预防和治疗乙肝病毒引起的感染性疾病的药物。
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