一种化合物、中药益生菌发酵产物及其在制备具有降血脂作用的药物或保健品中的应用
阅读说明：本技术 一种化合物、中药益生菌发酵产物及其在制备具有降血脂作用的药物或保健品中的应用 (Compound, traditional Chinese medicine probiotic fermentation product and application of compound and traditional Chinese medicine probiotic fermentation product in preparation of medicine or health-c) 是由 刘志刚 刘杰 刘晓宇 于 2019-11-25 设计创作，主要内容包括：本发明涉及生物医学技术领域,具体公开了一种化合物、中药益生菌发酵产物及其在制备具有降血脂作用的药物或保健品中的应用。所述的化合物具有式(Ⅰ)所示的结构。所述的中药益生菌发酵产物,包含式(Ⅰ)化合物；其制备方法包含如下步骤：(1)取中药原料用益生菌进行发酵,得发酵液；(2)将发酵液进行干燥后即得所述的中药益生菌发酵产物。本发明所述的式(Ⅰ)化合物以及中药益生菌发酵产物具有优异的降血脂作用,可以用于制备药物和保健品。(The invention relates to the technical field of biomedicine, and particularly discloses a compound, a traditional Chinese medicine probiotic fermentation product and application of the compound and the traditional Chinese medicine probiotic fermentation product in preparation of a medicine or a health-care product with a blood fat reducing effect. The compound has a structure shown in a formula (I). The traditional Chinese medicine probiotic fermentation product comprises a compound shown in a formula (I); the preparation method comprises the following steps: (1) taking the traditional Chinese medicine raw materials, and fermenting with probiotics to obtain fermentation liquor; (2) drying the fermentation liquor to obtain the traditional Chinese medicine probiotic fermentation product. The compound shown in the formula (I) and the traditional Chinese medicine probiotic fermentation product have excellent blood fat reducing effect, and can be used for preparing medicines and health-care products.)
技术领域
本发明涉及生物医学技术领域，具体涉及一种化合物、中药益生菌发酵产物及其在制备具有降血脂作用的药物或保健品中的应用。
背景技术
心血管疾病(CVD)是以心脏和血管功能异常为主的循环系统疾病，包括冠心病、心肌病、动脉粥样硬化、高血压及各种原因导致的心功能不全等，一直以来都是发达国家的第一死因。主要治疗方法包括药物治疗、介入治疗和手术治疗等。我国流行病学调查研究资料表明：血脂异常是冠心病发病的危险因素，其作用强度与西方人群相同；我国人群血清总胆固醇水平增高不仅增加冠心病发病风险，也增加缺血性男卒中发病危险。2013年美国心脏学会/美国心脏病学学会(AHC/ACC)联合发布了4项心血管相关疾病预防指南，这4项新的指南分别为《2013AHC/ACC心血管风险评估指南》、《2013AHC/ACC降低心血管风险只生活方式管理指南》、《2013AHC/ACC降低成人动脉粥样硬化性心血管疾病风险只血胆固醇治疗指南》和《2013AHC/ACC成人超重和肥胖管理指南》。为此，对血脂异常的防治必须及早给与重视。
在实验研究和临床应用中，复方中药降血脂应用十分广泛，处方一般都采用功能因子互补的方法，而且其降血脂的作用途径可能同时遵循多种机制，从而达到快速降脂的目的。中药降血脂的作用机制可从以下几个方面考虑：减少或抑制TC在肠道的吸收；抑制TC和TG的合成；影响血脂的分布、转移与清除；增加胆汁酸的排出，促进TC的排泄等。很多复方中药发生作用的机制则可能是上述几种作用综合的结果。
目前主要的益生菌包括乳杆菌、链球菌和双歧杆菌，这些益生菌是人体和动物肠道内微生物的正常组成，并且对健康具有多种促进作用。酸奶和发酵乳作为培养益生菌的载体备受关注，有报道称益生菌发酵乳制品如牛奶、酸乳、和乳酪在体内模型中具有显著的降血脂功能。临床实验证明，多种菌株如鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、副干酪乳杆菌、长双歧杆菌、双歧杆菌、粪肠球菌、罗伊氏乳杆菌、加氏乳杆菌、短双歧杆菌和食淀粉乳杆菌能够有效地调节血清中脂质。迄今为止，国内外已经有大量的文献报道了不同益生菌降血脂的效果。但目前将中药用益生菌进行发酵来开发降血脂药物的报道并不多见，有待进一步研究。
发明内容
鉴于此，本发明首先提供一种新化合物，经进一步研究表明，该新化合物具有降血脂以及抗炎作用。
此外，本发明还提供一种中药益生菌发酵产物，该中药益生菌发酵产物同样具有降血脂以及抗炎作用。
另外，本发明还提供了一种上述新化合物和中药益生菌发酵产物的制备方法以及应用。
本发明的详细技术方案如下：
一种式(Ⅰ)化合物或其可药用盐；
式(Ⅰ)化合物命名为：
3,4,5-trimethoxy-N-(3-(2-(4-methoxybenzamido)-3-phenylpropanamido)propyl)benzamide
优选地，所述可药用盐为可药用酸加成盐，其中所述酸选自：柠檬酸、酒石酸、乳酸、乙酸、琥珀酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、丙酮酸、富马酸、马来酸、盐酸、氢溴酸、硝酸、磷酸和硫酸。
本发明还提供一种式(Ⅰ)化合物的制备方法，其包含如下步骤：
(1)取中药原料用益生菌进行发酵，得发酵液；
(2)将发酵液进行干燥后得粗产物；
(3)将粗产物用色谱技术进行分离，即得式(Ⅰ)化合物；
步骤(1)中所述的中药原料为包含蜂蜜、山楂、黄芪、丹参、五味子、银杏叶和葛根的中药原料；或为包含蜂蜜、山楂提取物、黄芪提取物、丹参提取物、五味子提取物、银杏叶提取物和葛根提取物的中药原料；
步骤(1)中所述的益生菌选自嗜酸乳杆菌、婴儿双歧杆菌、短双歧杆菌中的一种或二种以上的混合。
本发明中涉及的提取物均是常规的医药原料，可以通过购买得到。也可以采用乙醇通过常规的方法(如加热回流提取、超声提取或浸提等方法)提取得到。
优选地，步骤(1)中所述的中药原料中蜂蜜、山楂、黄芪、丹参、五味子、银杏叶和葛根的重量用量比为1～5：1～5：1～5：1～5：1～5：1～5：1～5。
最优选地，步骤(1)中所述的中药原料中蜂蜜、山楂、黄芪、丹参、五味子、银杏叶和葛根的重量用量比为1：1：1：1：1：1：1。
优选地，步骤(1)中所述的中药原料中蜂蜜、山楂提取物、黄芪提取物、丹参提取物、五味子提取物、银杏叶提取物和葛根提取物的重量用量比为1～5：1～5：1～5：1～5：1～5：1～5：1～5。
最优选地，步骤(1)中所述的中药原料中蜂蜜、山楂提取物、黄芪提取物、丹参提取物、五味子提取物、银杏叶提取物和葛根提取物的重量用量比为1：1：1：1：1：1：1。
优选地，步骤(1)中所述的益生菌为益生菌干粉，其中嗜酸乳杆菌干粉、婴儿双歧杆菌干粉以及短双歧杆菌干粉的重量用量比为1～5：1～5：1～5。
最优选地，步骤(1)中所述的益生菌为益生菌干粉，其中嗜酸乳杆菌干粉、婴儿双歧杆菌干粉以及短双歧杆菌干粉的重量用量比为1：1：1。
优选地，步骤(1)的具体方法为：取中药原料、益生菌干粉以及水混合后，在温度为20～30℃、pH为5～6的条件下发酵16～30h，得发酵液；
所述中药原料、益生菌干粉以及水的重量用量比为：20～40：8～15：40～60。
最优选地，步骤(1)的具体方法为：取中药原料、益生菌干粉以及水混合后，在温度为25℃、pH为5.5的条件下发酵24h，得发酵液；
所述中药原料、益生菌干粉以及水的重量用量比为：30：10：50。
优选地，步骤(3)中所述的色谱技术为制备型HPLC技术；所述的制备型HPLC技术的具体条件为：采用反相色谱柱；选用紫外检测器，检测波长为220～230nm；以0.05～0.2体积％的三氟乙酸水溶液为流动相A，以0.05～0.2体积％的三氟乙酸乙腈溶液为流动相B，流动相A：流动相B＝75:25；收集9.3～9.9min色谱峰对应的部位，浓缩干燥后即得式(Ⅰ)化合物。
最优选地，所述的制备型HPLC技术的具体条件为：采用ODS反相色谱柱；选用紫外检测器，检测波长为220nm；以0.1体积％的三氟乙酸水溶液为流动相A，以0.1体积％的三氟乙酸乙腈溶液为流动相B，流动相A：流动相B＝75:25；收集9.3～9.9min色谱峰对应的部位，浓缩干燥后即得式(Ⅰ)化合物。
本发明还提供一种中药益生菌发酵产物，其包含式(Ⅰ)化合物。
本发明还提供一种中药益生菌发酵产物的制备方法，其包含如下步骤：
(1)取中药原料用益生菌进行发酵，得发酵液；
(2)将发酵液进行干燥后得所述的中药益生菌发酵产物；
步骤(1)中所述的中药原料为包含蜂蜜、山楂、黄芪、丹参、五味子、银杏叶和葛根的中药原料；或为包含蜂蜜、山楂提取物、黄芪提取物、丹参提取物、五味子提取物、银杏叶提取物和葛根提取物的中药原料；
步骤(1)中所述的益生菌选自嗜酸乳杆菌、婴儿双歧杆菌、短双歧杆菌中的一种或二种以上的混合。
优选地，步骤(1)中所述的中药原料中蜂蜜、山楂、黄芪、丹参、五味子、银杏叶和葛根的重量用量比为1～5：1～5：1～5：1～5：1～5：1～5：1～5。
最优选地，步骤(1)中所述的中药原料中蜂蜜、山楂、黄芪、丹参、五味子、银杏叶和葛根的重量用量比为1：1：1：1：1：1：1。
优选地，步骤(1)中所述的中药原料中蜂蜜、山楂提取物、黄芪提取物、丹参提取物、五味子提取物、银杏叶提取物和葛根提取物的重量用量比为1～5：1～5：1～5：1～5：1～5：1～5：1～5。
最优选地，步骤(1)中所述的中药原料中蜂蜜、山楂提取物、黄芪提取物、丹参提取物、五味子提取物、银杏叶提取物和葛根提取物的重量用量比为1：1：1：1：1：1：1。
优选地，步骤(1)中所述的益生菌为益生菌干粉，其中嗜酸乳杆菌干粉、婴儿双歧杆菌干粉以及短双歧杆菌干粉的重量用量比为1～5：1～5：1～5。
最优选地，步骤(1)中所述的益生菌为益生菌干粉，其中嗜酸乳杆菌干粉、婴儿双歧杆菌干粉以及短双歧杆菌干粉的重量用量比为1：1：1。
优选地，步骤(1)的具体方法为：取中药原料、益生菌干粉以及水混合后，在温度为20～30℃、pH为5～6的条件下发酵16～30h，得发酵液；
所述中药原料、益生菌干粉以及水的重量用量比为：20～40：8～15：40～60。
最优选地，步骤(1)的具体方法为：取中药原料、益生菌干粉以及水混合后，在温度为25℃、pH为5.5的条件下发酵24h，得发酵液；
所述中药原料、益生菌干粉以及水的重量用量比为：30：10：50。
本发明还提供一种式(Ⅰ)化合物或其可药用盐或上述中药益生菌发酵产物在制备药物或保健品中的应用。
优选地，所述的药物为具有降血脂作用的药物、或具有抗炎作用的药物、或减轻高脂血症引起的血清代谢物的积累的药物、或减轻血管内皮细胞的形态学和功能损伤的药物；所述的保健品为具有降血脂作用的保健品、或减轻高脂血症引起的血清代谢物的积累的保健品或减轻血管内皮细胞的形态学和功能损伤的保健品。
优选地，所述的药物或保健品含有式(Ⅰ)化合物或其可药用盐或中药益生菌发酵产物和载体；所述式(Ⅰ)化合物或其可药用盐或中药益生菌发酵产物的质量分数为5％～95％。
进一步优选地，所述载体包括溶剂、聚合物和脂质体中的至少一种。更进一步优选地，所述溶剂包括但不限于水、生理盐水，以及其他非水性溶剂。更进一步优选地，所述聚合物包括但不限于为聚赖氨酸、聚乙烯亚胺及其改性物、壳聚糖、聚乳酸、明胶。更进一步优选地，所述脂质体可以但不限于为胆固醇、豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂。
更进一步优选地，所述载体还包括稀释剂和赋形剂中的一种或多种。具体地，所述稀释剂包括淀粉类、糖类、纤维素类和无机盐中的一种或多种。具体地，所述赋形剂包括片剂中的黏合剂、填充剂、润滑剂，半固体制剂软膏剂、霜剂中的基质部分，液体制剂中的防腐剂、抗氧剂、矫味剂、芳香剂、助溶剂、乳化剂、着色剂中的一种或多种。
进一步优选地，所述式(Ⅰ)化合物或其可药用盐或中药益生菌发酵产物的质量分数为10％～90％、15％～85％或30％～80％。
进一步优选地，所述药物或保健品还可以包括第二活性成分。所述第二活性成分根据所述药物或保健品的用途进行选择，在此不作限定。具体的，可以但不限于，当所述组合物用于降血脂时，所述第二活性成分具有降血脂作用，可选的，所述第二活性成分包括维生素C、维生素E、辅酶Q、谷胱甘肽、胡萝卜素和甜菜碱中的一种或多种；当所述组合物用于降血脂以及抗炎时，所述第二活性成分至少具有抗炎活性。
进一步优选地，所述组合物中所述第二活性成分的质量分数为1％～70％。
优选地，所述保健品或药物的形式包括片剂、胶囊、粉剂、颗粒剂、丸剂、糖浆剂、溶液剂、混悬剂或气雾剂。
优选地，所述保健品的形式还包括、凝胶状或水剂状。
进一步优选地，所述保健品还包括辅料基质，所述辅料基质包括单糖、寡糖、多糖、氨基酸、防腐剂、pH调节剂、降血脂助剂。
有益效果：(1)本发明提供了一种全新的式(Ⅰ)化合物、中药益生菌发酵产物及其制备方法；所述的式(Ⅰ)化合物、中药益生菌发酵产物具有优异的降血脂作用以及抗炎作用，可以用于制备药物和保健品。(2)实验结果显示，在体内，中药益生菌发酵产物及式(Ⅰ)结构的单体化合物能显著减轻高脂血症引起的血清代谢物的积累，有助于减轻血管内皮细胞的形态学和功能损伤。此外，中药益生菌发酵产物及式(Ⅰ)结构的单体化合物可改善胸廓血管中Foxo1/PGC-1α和线粒体复合物的表达。体外实验结果表明，中药益生菌发酵产物及式(Ⅰ)结构的单体化合物主要通过增强Foxo1的表达激活了线粒体的PGC-1α。此外，中药益生菌发酵产物及式(Ⅰ)结构的单体化合物的抗炎作用主要通过p38 MAPK途径介导。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例的附图，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是本发明式(Ⅰ)化合物的质谱图；其中1a为正离子模式质谱图；1b为负离子模式质谱图。
图2是本发明式(Ⅰ)化合物的核磁共振氢谱图。
图3是本发明式(Ⅰ)化合物的核磁共振碳谱图。
图4是本发明中药益生菌发酵产物及式(Ⅰ)结构的单体化合物对高脂血症小鼠的治疗效果图。
图5是本发明中药益生菌发酵产物及式(Ⅰ)结构的单体化合物对线粒体功能改善的效果图。
图6是本发明中药益生菌发酵产物及式(Ⅰ)结构的单体化合物对mtDNA的拷贝数以及PGC-1α和FoxO1的表达的影响实验图。
图7是本发明中药益生菌发酵产物及式(Ⅰ)结构的单体化合物对由PA破坏的内皮细胞的线粒体功能影响实验图。
图8是发明中药益生菌发酵产物及式(Ⅰ)结构的单体化合物的抗炎保护作用机理实验图。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1式(Ⅰ)化合物的制备
(1)取中药原料30g、益生菌干粉10g于三维混合机中混合至色泽均匀一致，然后加入水50g，在温度为25℃、pH为5.5的条件下发酵24h，得发酵液；
(2)将发酵液于8000r/min离心30min，除去沉淀并保留上清液，对上清液进行冷冻干燥，得粗产物；
(3)将粗产物用色谱技术进行分离，即得式(Ⅰ)化合物；
步骤(1)中所述的中药原料由蜂蜜、山楂提取物、黄芪提取物、丹参提取物、五味子提取物、银杏叶提取物和葛根提取物按重量比1：1：1：1：1：1：1组成；所述的益生菌干粉由嗜酸乳杆菌干粉、婴儿双歧杆菌干粉以及短双歧杆菌干粉按重量比1：1：1组成；
步骤(3)中所述的色谱技术为制备型HPLC技术；所述的制备型HPLC技术的具体条件为：采用ODS反相色谱柱；选用紫外检测器，检测波长为220nm；以0.1体积％的三氟乙酸水溶液为流动相A，以0.1体积％的三氟乙酸的乙腈溶液为流动相B，流动相A：流动相B＝75:25；收集9.3～9.9min色谱峰对应的部位，浓缩干燥后即得式(Ⅰ)化合物。
式(Ⅰ)化合物的质谱、氢谱及碳谱数据如下(具体图谱见图1～3)：质谱数据显示化合物572.3[M+Na]+,548.3[M-H]-,确定其分子式为C30H35N3O7。1H NMR(600MHz,DMSO)δ:8.42(m,2H),7.80(m,2H),7.32(dd,2H),7.24(t,2H),7.16(d,2H),6.96(dd,2H),4.60(m,1H),3.81(s,9H),3.71(s,3H),3.25(m,4H),1.68(m,2H)；13H NMR(150MHz,DMSO)δ:171.48,165.75,165.64,161.61,152.56,139.84,138.55,129.78,129.30,129.13,128.05,126.28,126.19,113.34,104.70,60.07,55.98,55.33,55.11,45.90,45.78,39.92,37.35,37.02,36.55,29.34,29.04。
经质谱、氢谱及碳谱解析，可以确定上述方法制备得到了式(Ⅰ)化合物3,4,5-trimethoxy-N-(3-(2-(4-methoxybenzamido)-3-phenylpropanamido)propyl)benzamide。
实施例2式(Ⅰ)化合物的制备
(1)取中药原料400g、益生菌干粉100g于三维混合机中混合至色泽均匀一致，然后加入水600g，超声提取60min；接着在温度为25℃、pH为5.5的条件下发酵30h，得发酵液；
(2)将发酵液于8000r/min离心30min，除去沉淀并保留上清液，对上清液进行冷冻干燥，得粗产物；
(3)将粗产物用色谱技术进行分离，即得式(Ⅰ)化合物；
步骤(1)中所述的中药原料由蜂蜜、山楂、黄芪、丹参、五味子、银杏叶和葛根按重量比1：1：1：1：1：1：1组成；所述的益生菌干粉由嗜酸乳杆菌干粉、婴儿双歧杆菌干粉以及短双歧杆菌干粉按重量比1：1：1组成；
步骤(3)中所述的色谱技术为制备型HPLC技术；所述的制备型HPLC技术的具体条件为：采用ODS反相色谱柱；选用紫外检测器，检测波长为220nm；以0.1体积％的三氟乙酸水溶液为流动相A，以0.1体积％的三氟乙酸乙腈溶液为流动相B，流动相A：流动相B＝75:25；收集9.3～9.9min色谱峰对应的部位，浓缩干燥后即得式(Ⅰ)化合物(质谱、氢谱及碳谱数据与实施例1一致)。
实施例3中药益生菌发酵产物的制备
(1)取中药原料30g、益生菌干粉10g于三维混合机中混合至色泽均匀一致，然后加入水50g，在温度为25℃、pH为5.5的条件下发酵24h，得发酵液；
(2)将发酵液于8000r/min离心30min，除去沉淀并保留上清液，对上清液进行冷冻干燥，得中药益生菌发酵产物；
步骤(1)中所述的中药原料由蜂蜜、山楂提取物、黄芪提取物、丹参提取物、五味子提取物、银杏叶提取物和葛根提取物按重量比1：1：1：1：1：1：1组成；所述的益生菌干粉由嗜酸乳杆菌干粉、婴儿双歧杆菌干粉以及短双歧杆菌干粉按重量比1：1：1组成。
实施例4中药益生菌发酵产物的制备
(1)取中药原料400g、益生菌干粉100g于三维混合机中混合至色泽均匀一致，然后加入水600g，超声提取60min；接着在温度为25℃、pH为5.5的条件下发酵30h，得发酵液；
(2)将发酵液于8000r/min离心30min，除去沉淀并保留上清液，对上清液进行冷冻干燥，得中药益生菌发酵产物。
步骤(1)中所述的中药原料由蜂蜜、山楂、黄芪、丹参、五味子、银杏叶和葛根按重量比1：1：1：1：1：1：1组成；所述的益生菌干粉由嗜酸乳杆菌干粉、婴儿双歧杆菌干粉以及短双歧杆菌干粉按重量比1：1：1组成。
实验例1
为了评估本发明上述方法制备得到的中药益生菌发酵产物及式(Ⅰ)结构的单体化合物的效果，进行如下效果实验。
动物实验设计：6-8周龄C57BL6雄性小鼠置于恒温(22-28℃)和湿度(60％)的动物室内，在12小时的光/暗循环条件下，自由进食和饮水。将上述小鼠随机分为4组：对照组(Control)(同体积无菌水灌胃9d)、高脂血症组(p407)(同体积无菌水灌胃9d)、实施例3制备得到的中药益生菌发酵产物治疗组(简写为TCMFJ)(200mg/kg/d，每天灌胃一次，灌胃9天)。式(Ⅰ)结构的单体化合物治疗组(简写为TCMDT)(200mg/kg/d，每天灌胃一次，灌胃9天)(n≥6)。p-407是由聚氧乙烯和聚氧丙烯单元组成的亲水性三嵌段共聚物，用于腹腔注射诱导高脂血症模型。灌胃9天后，对照组注射无菌生理盐水，其它3组腹腔注射p407(0.5g/kg)24h(第10天)诱发小鼠急性高脂血症。采集小鼠血液样本，4℃条件下4500rpm离心12min，血清在-80℃冷冻并进行后续分析。
胸主动脉准备及等长张力测量：在Krebs溶液中分离胸动脉。然后，在解剖显微镜下将胸动脉切成2-3mm长的环。用于Western blotting实验的胸动脉要在-80℃冷冻并作进一步分析。胸主动脉张力测量参考现有文献方法进行。血管反应性研究：通过测量胸动脉对乙酰胆碱的舒张反应，测定内皮依赖性舒张作用。活性氧种类的测定：采用ELISA ROS试剂盒测定细胞内活性氧的含量。
实验结果如下：
(1)由图4所示，给小鼠注射p407后，血清中甘油三酯、胆固醇和非酯化脂肪酸的含量以及胸主动脉中ROS的含量显著上升，说明急性高脂血症小鼠模型建模成功。在200mg/kg/天剂量中药益生菌发酵产物和式(Ⅰ)结构的单体化合物治疗下，高脂血症引起的血清代谢变化等部分恢复正常。同样，200mg/kg/天中药益生菌发酵产物以及式(Ⅰ)结构的单体化合物治疗有效减少胸主动脉活性氧的增加。这说明中药益生菌发酵产物以及式(Ⅰ)结构的单体化合物具有优异的降血脂作用以及能减轻高脂血症引起的血清代谢物的积累。
(2)由图5所示，越来越多的证据表明线粒体功能障碍是内皮功能障碍的重要原因，FoxO1/PGC-1α在介导线粒体生物发生中起着关键作用。分析实验结果表明，p407高脂血症小鼠胸动脉线粒体功能受损是通过降低PGC-1α,FoxO1,、Complex V等的表达实现的。200mg/kg/天剂量中药益生菌发酵产物以及式(Ⅰ)结构的单体化合物治疗在很大程度上增强了FoxO1/PGC-1α的表达(图5a)。同时，200mg/kg/天剂量中药益生菌发酵产物以及式(Ⅰ)结构的单体化合物治疗显著提高了胸动脉线粒体complex I、complex II、complexⅢ及complex V的蛋白水平(图5b)，表明中药益生菌发酵产物以及式(Ⅰ)结构的单体化合物可改善线粒体的功能。
(3)如图6所示，细胞水平进一步研究表明中药益生菌发酵产物以及式(Ⅰ)结构的单体化合物可通过激活FoxO1来增强PGC-1α，从而促进线粒体的生物合成。中药益生菌发酵产物以及式(Ⅰ)结构的单体化合物可增加mtDNA的拷贝数以及PGC-1α和FoxO1的表达发挥治疗作用(图6a，b)。
(4)如图7所示，进一步研究表明中药益生菌发酵产物以及式(Ⅰ)结构的单体化合物可减轻PA对HAECs线粒体功能损害，增强线粒体complex I,complex II及complex III的表达。中药益生菌发酵产物以及式(Ⅰ)结构的单体化合物可促进作为线粒体融合的关键调节因子MFN1、MFN2和OPA1的表达。表明，中药益生菌发酵产物以及式(Ⅰ)结构的单体化合物可使由PA破坏的内皮细胞的线粒体功能正常化。中药益生菌发酵产物以及式(Ⅰ)结构的单体化合物显著抑制PA诱发的ROS产生，这可能是内皮保护的关键潜在机制。炎症反应是内皮细胞产生ROS的一个主要特征。
(5)由图8所示，中药益生菌发酵产物以及式(Ⅰ)结构的单体化合物抑制PA诱发的炎性因子白细胞介素6(IL-6)和基质金属蛋白酶1(MMP-1)的表达。此外，中药益生菌发酵产物以及式(Ⅰ)结构的单体化合物显著降低了PA诱导的p-p38、p-JNK表达。这些结果表明p38MAPK信号通路在中药益生菌发酵产物以及式(Ⅰ)结构的单体化合物的抗炎保护作用中起关键作用。
以上所揭露的仅为本发明较佳实施例而已，当然不能以此来限定本发明之权利范围，本领域普通技术人员可以理解实现上述实施例的全部或部分流程，并依本发明权利要求所作的等同变化，仍属于发明所涵盖的范围。
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