阅读说明：本技术 一种包括用于递送药物的超声响应性微泡的脂质体的制备方法以及使用该方法的脂质体 (Method for preparing liposome comprising ultrasound-responsive microbubbles for delivering drugs and liposome using the same ) 是由 金哲右 朴东熙 元钟浩 于 2019-03-20 设计创作，主要内容包括：本发明提供一种包括用于递送药物的超声响应性微泡的脂质体的制备方法以及使用该方法的脂质体,其中,所述方法包括：(a)在产生内部包括惰性气体并在外面形成有第一壳体的超声响应F性微泡之后,通过挤出机均匀地形成所述超声响应性微泡的尺寸分布；以及(b)在产生包括内部尺寸分布均匀的所述超声响应性微泡和药物并在外面形成有第二壳体的脂质体后,通过挤出机均匀地形成所述脂质体的尺寸分布。(The present invention provides a method for preparing a liposome comprising ultrasound-responsive microbubbles for delivering a drug, and a liposome using the same, wherein the method comprises: (a) uniformly forming a size distribution of the ultrasound-responsive microbubbles by an extruder after generating the ultrasound-responsive F-type microbubbles including an inert gas inside and formed with a first shell outside; and (b) after liposomes comprising the ultrasound-responsive microbubbles and the drug having a uniform internal size distribution and formed with the second shell on the outside are produced, uniformly forming the size distribution of the liposomes by an extruder.)

一种包括用于递送药物的超声响应性微泡的脂质体的制备方 法以及使用该方法的脂质体

技术领域

本发明涉及一种包括用于递送药物的超声响应性微泡和药物的脂质体的制备方法以及使用该方法的脂质体。

更具体地，本发明涉及一种包括用于递送药物的超声响应性微泡的脂质体的制备方法以及使用该方法的脂质体，其中，所述方法包括：(a)在产生内部包括惰性气体并在外面形成有第一壳体的超声响应性微泡之后，通过挤出机均匀地形成所述超声响应性微泡的尺寸分布；以及(b)在产生包括内部尺寸分布均匀的所述超声响应性微泡和药物并在外面形成有第二壳体的脂质体后，通过挤出机均匀地形成所述脂质体的尺寸分布。

背景技术

药物递送系统(DDS：Drug Delivery System)可以是指一种剂型(dosageformulation)，其通过最小化现有药物的副作用并优化药物的功效和效果，可以有效地递送治疗疾病所需量的药物。

根据药物递送途径，这些药物递送系统包括经皮、口服或经血管的方法等。另外，将微型胶囊引入血管以治疗患处的药物递送系统作为下一代治疗技术备受关注。

此外，在药物递送系统的技术中，可以说要素技术为一种用于将药物准确地靶向到目标患处的技术和用于控制患处中的药物释放的技术。因此，使用超声波和超声响应性微泡的目标药物递送系统作为可以解决这些问题的技术，近来引起更多关注。

尤其，根据研究结果，用作超声造影剂的微泡具有由超声能量引起的空化效应(cavitation)，并该效应增强药物向皮肤或细胞内部的递送效果，所以本领域技术人员试图了通过将所需的药物或受体(receptor)配体结合(ligand binding)至微泡的膜来将药物递送至人体。

然而，由于该方法将药物结合到膜表面，因此存在局限性，即，在微泡移动至目标位置的过程中可以发生药物的损失，从而不能完全发挥药物递送体的作用。另外，还存在不能装载大量药物的限制。

为了改善这一点，近来已经出现一种同时装载微泡和药物以增加超声能和响应性的脂质体的制备技术。

然而，将包括惰性气体的微泡和药物同时装载于脂质体壳(shell)之间的空间的方法具有难以形成多层结构并不能有效地装载药物的缺点。

即，根据在脂质体的内部捕获的微泡的尺寸和药物的特性，所装载的药物量会有所不同，甚至严重时，无法将药物或微泡装载到脂质体中。

发明内容

技术问题

本发明的目的在于解决所有上述问题。

另外，本发明的另一目的在于将药物胶囊化在脂质体内部以保护药物免受外部环境的影响。

另外，本发明的另一目的在于阻止在正常组织中产生药物作用并显示出对超声能的高响应性，从而可以通过仅在照射超声能的目标区域中反应来递送药物。

另外，本发明的另一目的在于可以通过形成一定尺寸的微泡和脂质体来量化脂质体内部的药物装载量。

此外，本发明的另一目的在于可以装载一定量以上的药物以表现出显着的药物作用。

技术方案

用于实现上述目的的本发明的代表性构造如下。

本发明提供一种包括用于递送药物的超声响应性微泡的脂质体的制备方法，其中，所述方法包括：(a)在产生内部包括惰性气体并在外面形成有第一壳体的超声响应性微泡之后，通过挤出机均匀地形成所述超声响应性微泡的尺寸分布；以及(b)在产生包括内部尺寸分布均匀的所述超声响应性微泡和药物并在外面形成有第二壳体的脂质体后，通过挤出机均匀地形成所述脂质体的尺寸分布。

另外，根据本发明的一实施例，在一种包括用于递送药物的超声响应性微泡的脂质体的制备方法中，进一步提供一种包括用于递送药物的超声响应性微泡的脂质体，其包括：超声响应性微泡，其中，在产生内部包括惰性气体并在外面形成有第一壳体的超声响应性微泡之后，通过挤出机均匀地形成所述超声响应性微泡的尺寸分布；以及脂质体，其中，在产生包括内部尺寸分布均匀的所述超声响应性微泡和药物并在外面形成有第二壳体的脂质体后，通过挤出机均匀地形成所述脂质体的尺寸分布。

有益效果

根据本发明的效果如下：

本发明通过将药物胶囊化在脂质体内部来保护药物免受外部环境的影响。

另外，本发明阻止在正常组织中产生药物作用并显示出对超声能的高响应性，从而可以通过仅在照射超声能的目标区域中反应来递送药物。

另外，本发明可以通过形成一定尺寸的微泡和脂质体来量化脂质体内部的药物装载量。

此外，本发明可以装载一定量以上的药物以表现出显着的药物作用。

附图说明

图1为根据本发明一实施例的包括用于递送药物的超声响应性微泡和药物的脂质体的示意图。

图2为根据本发明一实施例的调节微泡尺寸的状态图。

图3为根据本发明一实施例的微泡的共聚焦显微镜图像的示意图。

图4a至图4c为根据本发明一实施例通过强度(intensity)、体积(volume)和数量(number)分布来分析微泡粒度的结果图。

图5为根据本发明一实施例的调节脂质体尺寸的状态图。

图6为根据本发明一实施例的脂质体的共聚焦显微镜分析图像。

图7为根据本发明一实施例的脂质体与由现有方法制备的脂质体的共聚焦显微镜分析图像的比较结果。

图8为根据本发明一实施例的使用脂质体进行金纳米颗粒捕获实验的状态图。

具体实施方式

对于后述的本发明的详细描述，将参考附图，该附图以示例的方式示出了可以实践本发明的特定实施例。对这些实施例进行了足够详细的描述，以使本领域技术人员能够实施本发明。应当理解，本发明的各个实施例不同，但不必相互排斥。例如，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，可以在其他实施例中实现在一实施例中描述的特定形状、结构和特性。另外，应当理解，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，可以改变每个公开的实施例中的各个组件的位置或布置。因此，下面的详细描述并非旨在进行限制，并且如果适当地描述，本发明的范围仅由所附权利要求以及等同于所要求保护的范围的所有范围限制。在所有多个方面中，附图中相似的附图标记指代相同或相似的功能。

下面将参考附图详细描述本发明的优选实施例，以使本领域技术人员能够容易地实现本发明。

图1为根据本发明一实施例的包括用于递送药物的超声响应性微泡11的脂质体的示意图。

参照图1，在脂质体中，在内部形成有微泡11并在外面形成有第二壳体22。并且药物可以装载于微泡11和第二壳体22之间的区域21。另外，第一壳体12可以形成在微泡11的外面上。

这种结构的脂质体通过以下过程制成：首先产生根据本发明一实施例的尺寸分布均匀的微泡11，然后产生内部包括微泡和药物并在外面形成有第二壳体的脂质体，并通过挤出机均匀地形成脂质体的尺寸分布。

下面将详细描述超声响应性微泡11的产生过程。

首先，准备用于制备微泡11的第一壳体材料的溶液。

为此，可以将包括第一脂质的第一混合物粉末溶解于第一溶剂以产生第一壳体材料的溶液。其中，包括第一脂质的第一混合物粉末可以进一步包括白蛋白、聚合物、PEG、表面活性剂、蛋白质、生物可降解高分子等，并可以添加胆固醇(cholesterol)以增加超声响应性微泡的耐久性。

另外，第一脂质可以包括DPPC(1,2-二棕榈酰-sn-甘油-3-磷酰胆碱)、HSPC(磷脂酰胆碱)、DDPC(1,2-二癸酰基-sn-甘油-3-磷酰胆碱)、DEPC(1,2-二(顺式-13-二芥酰)-sn-甘油-3-磷酰胆碱)、DOPC(1,2-二油酰-sn-甘油-3-磷酰胆碱)、DMPC(1,2-二肉豆蔻酰-sn-甘油-3-磷酰胆碱)、DLPC(1,2-二棕榈酰-sn-甘油-3-磷酰胆碱)、DEPC(1,2-二月桂酰-sn-甘油-3-磷酰胆碱)、DSPC(1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酰胆碱)、MPPC(1-肉豆蔻酰-2-棕榈酰-sn-甘油-3-磷酰胆碱)、MSPC(1-肉豆蔻酰-2-硬脂酰-sn-甘油-3-磷酰胆碱)、egg PC(磷酰胆碱)、DPPA(叠氮磷酸二苯酯)、DMPA-Na(1,2-二肉豆蔻酰-sn-甘油-3-磷酸酯)、DPPA-Na(1,2-二棕榈酰-sn-甘油-3-磷酸酯)、DOPA-Na(1,2-二油酰-sn-甘油-3-磷酸酯)、DSPE(二硬脂酰磷脂酰乙醇胺)、DMPE(二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺)、DOPE(二油酰磷脂酰乙醇胺)、DPPE(二棕榈酰磷脂酰乙醇胺)、DOPE-戊二酰-(Na)2(1,2-二油酰-sn-甘油-3-磷酰乙醇胺)、egg PE(磷脂酰乙醇胺)、DSPG(二硬脂酰磷脂酰甘油)、DMPG-Na(1,2-二肉豆蔻酰-sn-甘油-3-磷酸甘油)、DPPG-Na(1,2-二棕榈酰-sn-甘油-3-磷酸甘油)、DOPG-Na(1,2-二油酰-sn-甘油-3-磷酸甘油)、DOPS(二油酰磷脂酰丝氨酸)、DMPS(二肉豆蔻酰磷脂酰丝氨酸)、DMPS-Na(1,2-二肉豆蔻酰-sn-甘油-3-磷酸丝氨酸)、DPPS-Na(1,2-二棕榈酰-sn-甘油-3-磷酸丝氨酸)、DOPS-Na(1,2-二油酰-sn-甘油-3-磷酸丝氨酸)、DSPS(二硬脂酰磷脂酰丝氨酸)、DSPE-mPEG(1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酰乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)-2000])、DSPE-mPEG-2000-Na(1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酰乙醇胺)、DSPE-mPEG-5000-Na、DSPE-马来酰亚胺PEG-2000-Na、表面活性剂：Tween 80、Span 80、甘草酸二钾中的至少一个。

另外，白蛋白可以包括血清白蛋白(serum albumin)、卵清蛋白(ovalbumin)等。

另外，聚合物可以包括PBLA(聚(β-苄基-L-天冬氨酸))、PDLA(聚-DL-乳酸)等。

另外，表面活性剂可以包括脂肪酸钠、单烷基硫酸盐、烷基聚氧乙稀硫酸盐、烷基苯磺酸盐、单烷基磷酸盐、二烷基二甲基铵盐、烷基苄基甲基铵盐、烷基磺基甜菜碱、烷基羧基甜菜碱、聚氧乙烯烷基醚、脂肪酸山梨糖醇酯、脂肪酸二乙醇胺、烷基单甘油醚、苯扎氯铵(benzalkonium chloride)、苄索氯铵(benzethonium chloride)等。

另外，蛋白质可以包括白蛋白、球蛋白、胶原蛋白等。

另外，生物可降解高分子可以包括PHB基塑料、多糖基塑料、聚己内酯(PCL)、聚乳酸(PLA)、聚丙烯乙醇酸(PG)、聚羟基丁酸酯-共-戊酸酯(PHBV)、聚乙烯醇(PVA)、聚丁二酸丁二醇酯(PBS)、壳多糖基塑料、油基塑料等。

另外，第一溶剂可以包括盐溶液和/或三重蒸馏水、甘油和丙二醇中的至少一个。

作为一例，在将组成粉末状壳体的脂质(lipid)、白蛋白(albumin)、聚合物(polymer)、胆固醇(cholesterol)和PEG(polyethylene glycol)等的材料与包括盐溶液和/或三重蒸馏水(40％至60％)、甘油(2％至10％)、丙二醇(40％至60％)中的至少一个的溶剂混合后，可以通过在60℃至100℃之间的温度下溶解1小时至6小时来产生第一壳体材料的溶液。

作为一例，专门用于药物递送的超声波的胶束(micelle)使用DPPC(二棕榈酰-磷脂酰-胆碱)和DPPA(二苯基-磷酰-叠氮)作为壳体材料的主要成分，以捕获惰性气体并增加气泡的稳定性，并可以将生理盐水、甘油和丙二醇一起添加。

并且，当作为主要成分的DPPC和DPPA组成壳体时，可以添加胆固醇(cholesterol)以增加胶束的耐久性。

接下来，可以将第一壳体材料的溶液和惰性气体混合以增加对超声能的响应性。

此时，惰性气体可以为基于全氟化碳的气体，并作为基于全氟化碳的惰性气体，可以使用全氟甲烷(perfluoromethane)、全氟乙烷(perfluoroethane)、全氟丙烷(perfluoropropane)、全氟丁烷(perfluorobutane)、全氟正戊烷(perfluoro-n-pentane)、全氟正己烷(perfluoro-n-hexane)、全氟甲基环戊烷(perfluoromethylcyclopentane)、全氟-1,3-二甲基环己烷(perfluoro-1,3-dimethylcyclohexane)、全氟萘烷(perfluorodecalin)、全氟甲基萘烷(perfluoromethyldecalin)、全氟全氢化苄基四氢化萘(perfluoroperhydrobenzyltetralin)等。

作为一例，将第一壳体材料的溶液与惰性气体以1：1至20：1的混合比(v/v)分配于小瓶并密封，然后将外壳材料和惰性气体可以通过小瓶混合器进行机械混合。

此时，可以将机械混合速度调节至1000rpm至5000rpm，以适当地控制超声响应性微泡11的尺寸和粒度分布。

如此，通过机械混合，将基于全氟化碳的惰性气体细碎成纳米级至微米级的油/水乳液，并惰性气体可以通过自组装(self-assembling)与两亲性磷脂的疏水性尾部自然地结合以保持稳定的状态，从而如图1所示，内部形成具有惰性气体作为核的微泡11。具体而言，对应于磷脂中尾部的脂肪酸链为疏水性，并作为头部的磷酸和碱基部分具有亲水性的两亲性。这些同时具有亲水特性和疏水特性的两亲性(amphipathic)磷脂在组成壳体中起重要作用。另外，微泡11可以为超声响应性气泡。

接下来，如图2所示，可以通过使用具有一定孔径，例如30nm至1um中的任一孔径的过滤器和挤出机来过滤以各种尺寸制备的超声响应性微泡11，以使超声响应性微泡的尺寸分布均匀。此时，过滤器可以为膜过滤器，并膜过滤器可以由多碳酸盐形成。

另外，用于过滤超声响应性微泡11的温度可以从室温到各材料的相变温度范围进行各种调节，并过滤次数可以进行至少5次至其以上。

随后，用离心机将包括通过过滤均匀地形成尺寸分布的超声响应性微泡11的混合物离心分离以沉降形成良好的胶束，然后除去存在于上层的上清液并用去离子水(deionized water)洗涤，从而可以获得调节至所需尺寸的超声响应性微泡。

实施例1制备超声响应性微泡

1、准备脂质壳体材料

将DPPC+DPPA粉末添加于混合有生理盐水(Normal saline)+甘油(Glycerol)+丙二醇(Propylene glycol)的溶剂，使用热板(hot plate)加热溶液3小时，此时注意不要使溶液沸腾和溢出。此时，作为溶解脂质的溶剂，通过以20：1：21的比例混合盐水(Saline)、甘油(glycerol)和丙二醇(propylene glycol)来制成总量为100ml的混合物，并以DPPC(0.1g)和DPPA(0.01g)的比例添加脂质粉末。此时，可以进一步混合DSPE-mPEG(0.127g)。另外，微波可用于加热。

2、准备胆固醇壳体材料

将生理盐水(Normal saline)+丙二醇(Propylene glycol)(+甘油(Glycerol)，可省略)放入玻璃烧杯中，并向总共100ml的混合物添加胆固醇(0.127g)，然后使用热板将溶液温度保持在80℃并加热3小时。

3、制备超声响应性微泡

在添加准备的DPPC+DPPA混合液(1.5ml)与胆固醇(Cholesterol)混合物(0.5ml)后，将全氟丁烷(0.1ml)与壳体材料的溶液和核心气体以20：1至2ml的混合比(v/v)混合并分配到2ml小瓶中，在密封后，机械混合45秒钟。此时，进行混合时，设定频率以使振动发生每分钟4530±100次。

即，在实施例1中，作为制备超声响应性微泡11的例子，将DPPC(0.1g)+DPPA(0.01g)+胆固醇(0.127g)分别溶解于溶剂以进行混合，并对全氟丁烷而言，在液化状态(-80℃至-20℃)下注入的气体量为10ul至100ul。(质量计为17.5mg至175mg)。

4、调节超声响应性微泡的尺寸和分离

使用聚碳酸酯膜过滤器和挤出机过滤以各种尺寸制备的超声响应性微泡11，并使用离心机分离以沉降形成良好的胶束，然后除去存在于上层的上清液并用去离子水(deionized water)洗涤，从而完成超声响应性微泡11。

5、分析共聚焦显微镜

为了通过使用根据与实施例1相同的方法由NBD PC制成的胶束来确认胶束的形成与否、形态分析以及荧光脂质位置与物理气泡之间的关系，获得了如图3所示的共聚焦显微镜图像。

在图3中，(a)为荧光显微镜图像，(b)为光学显微镜图像，(c)为荧光显微镜图像和光学显微镜图像的(合并)图像。

从图3的(a)和(b)可见，显示荧光信号的脂质以壳的形式形成胶束边界，并中间核心部分由空的空间或气体组成而不由地质组成。

另外，从图3的(c)可见，一般的气泡与胶束可以使用不由荧光脂质组成的气泡与由荧光脂质组成的气泡来区分，并在大多数情况下，壳体由荧光脂质组成。

6、分析粒度

分析粒度的原理为通过使用激光穿过样品时产生的衍射和散射光来测量颗粒的尺寸，用于分析胶束粒度的设备规格如下。

A、型号名称：ELS-2000ZS

B、粒度分析：DLS(动态光散射)

C、Zeta电位：ELS(电泳光散射)

D、测量分散于所有溶剂的颗粒的粒度分布和Zeta电位

E、可以测量平面样品的表面Zeta电位

F、可以控制温度并测量经时变化

G、可以测量微量样品

H、可对应于尺寸：0.1nm至10000nm/Zeta电位：1nm至50000nm

I、可对应于试料浓度：0.001％至40％

图4a和4b以强度分布(Intensity distribution)、体积分布(Volumedistribution)和数量分布(Number distribution)示出了胶束的粒度分析结果。

结果，最终结果显示为强度分布：308nm、体积分布：184nm、数量分布：139nm。

并且，图4c示出了根据实施例1制备的胶束的直径和分散度和扩散常数、测量环境等的进程。此时，作为用于测量气泡的尺寸分布的环境，在25℃的水中测量，并设定粘度为0.8878(cP)、分散强度为25762(cps)和衰减器为0.72(％)。

根据测量结果，实施例1中制备的胶束的平均直径为257.1nm，并扩散常数为1.913e-8(cm2/sec)。

接下来，将描述使用根据上述方法制备的尺寸分布均匀的超声响应性微泡11来制备一种包括超声响应性微泡11和药物的脂质体的制备方法。

首先，准备用于制备脂质体的第二壳体材料的溶液。

为此，在将包括第二脂质的第二混合物粉末溶解于有机溶剂后，可以执行去除有机溶剂以获得脂质膜的过程。其中，包括第二脂质的第二混合物粉末可以进一步包括白蛋白(albumin)、聚合物(polymer)和PEG(polyethylene glycol)中的至少一个，并可以添加胆固醇以增加脂质体的耐久性。

另外，第二脂质可以包括DPPC(1,2-二棕榈酰-sn-甘油-3-磷酰胆碱)、HSPC(磷脂酰胆碱)、DDPC(1,2-二癸酰基-sn-甘油-3-磷酰胆碱)、DEPC(1,2-二(顺式-13-二芥酰)-sn-甘油-3-磷酰胆碱)、DOPC(1,2-二油酰-sn-甘油-3-磷酰胆碱)、DMPC(1,2-二肉豆蔻酰-sn-甘油-3-磷酰胆碱)、DLPC(1,2-二棕榈酰-sn-甘油-3-磷酰胆碱)、DEPC(1,2-二月桂酰-sn-甘油-3-磷酰胆碱)、DSPC(1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酰胆碱)、MPPC(1-肉豆蔻酰-2-棕榈酰-sn-甘油-3-磷酰胆碱)、MSPC(1-肉豆蔻酰-2-硬脂酰-sn-甘油-3-磷酰胆碱)、egg PC(磷酰胆碱)、DPPA(叠氮磷酸二苯酯)、DMPA-Na(1,2-二肉豆蔻酰-sn-甘油-3-磷酸酯)、DPPA-Na(1,2-二棕榈酰-sn-甘油-3-磷酸酯)、DOPA-Na(1,2-二油酰-sn-甘油-3-磷酸酯)、DSPE(二硬脂酰磷脂酰乙醇胺)、DMPE(二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺)、DOPE(二油酰磷脂酰乙醇胺)、DPPE(二棕榈酰磷脂酰乙醇胺)、DOPE-戊二酰-(Na)2(1,2-二油酰-sn-甘油-3-磷酰乙醇胺)、egg PE(磷脂酰乙醇胺)、DSPG(二硬脂酰磷脂酰甘油)、DMPG-Na(1,2-二肉豆蔻酰-sn-甘油-3-磷酸甘油)、DPPG-Na(1,2-二棕榈酰-sn-甘油-3-磷酸甘油)、DOPG-Na(1,2-二油酰-sn-甘油-3-磷酸甘油)、DOPS(二油酰磷脂酰丝氨酸)、DMPS(二肉豆蔻酰磷脂酰丝氨酸)、DMPS-Na(1,2-二肉豆蔻酰-sn-甘油-3-磷酸丝氨酸)、DPPS-Na(1,2-二棕榈酰-sn-甘油-3-磷酸丝氨酸)、DOPS-Na(1,2-二油酰-sn-甘油-3-磷酸丝氨酸)、DSPS(二硬脂酰磷脂酰丝氨酸)、DSPE-mPEG(1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酰乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)-2000])、DSPE-mPEG-2000-Na(1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酰乙醇胺)、DSPE-mPEG-5000-Na、DSPE-马来酰亚胺PEG-2000-Na、表面活性剂：Tween 80、Span 80、甘草酸二钾中的至少一个。

作为一例，用于捕获药物或基因的胶束使用DPPC(二棕榈酰-磷脂酰-胆碱)和DPPA(二苯基-磷酰-叠氮)作为壳体材料的主要成分，以收集药物或基因并增加胶束的稳定性。此时，可以将DPPC、DPPA和胆固醇以60％至85％：2％至10％：10％至30％的比例混合。另外，可以添加DSPE-mPEG作为壳体材料。

尤其，DPPA、DMPA-Na、DPPA-Na、DSPG、DSPS等为带负电荷或正电荷的磷脂，可用于使脂质体带电荷。

另外，白蛋白可以包括血清白蛋白(serum albumin)、卵清蛋白(ovalbumin)等。

另外，聚合物可以包括PBLA(聚(β-苄基-L-天冬氨酸))、PDLA(聚-DL-乳酸)等。

其中，有机溶剂可以包括氯仿和甲醇的混合溶剂，并氯仿和甲醇可以1：1至3：1的混合比混合。

另外，可以使用磁力搅拌器(magnetic stirrer)搅拌第二混合物粉末以溶解于有机溶剂，并搅拌器的温度为约40℃至60℃，可搅拌10分钟至30分钟。

另外，可以通过旋转蒸发来除去溶解有壳体材料的有机溶剂。

作为一例，使用旋转蒸发仪(rotary evaporator)在20℃至40℃的温度下将有机溶剂蒸发10分钟至30分钟，并将其放入真空室中以完全除去残留的有机溶剂，然后在减压下干燥。此时，优选在真空室中减压干燥至少6小时，更优选进行24小时。

此时，在有机溶剂的氯仿和甲醇等蒸发之后，可以在烧瓶底部以多层形式形成脂质膜，并可以在烧瓶底部以将旋转应用于脂质材料的形式浑浊地形成膜饼(film cake)。

接下来，通过将适当量的第二溶剂，例如PBS(Phosphate-buffered saline)添加于脂质膜并进行水合来产生第二壳体材料的溶液，然后使用超声波发生器进行粉碎。此时，根据药物的条件和胶束的特性，可以将尺寸分布均匀的超声响应性微泡11与药物和/或基因一起放入以进行超声分解，但本发明不限于此，可以在粉碎脂质膜之后放入超声响应性微泡11与药物和/或基因。

此时，通过自组装(self-assembling)机制将由超声波发生器粉碎的脂质膜与尺寸分布均匀的超声响应性微泡11和药物和/或基因制成包括超声响应性微泡11和药物和/或基因的脂质体的形式。

接下来，如图5所示，通过使用过滤器和挤出机过滤以各种尺寸制备的脂质体来调节尺寸。即，具有比过滤器的孔隙大的直径的脂质体不通过孔隙而被破坏，并位于被破坏的脂质体内部的超声响应性微泡11、药物和脂质膜重新结合。

随后，用离心机将包括通过过滤均匀地形成尺寸分布的脂质体的混合物离心分离以沉降形成良好的胶束，然后除去存在于上层的上清液并用去离子水(deionized water)洗涤，从而可以获得调节至所需尺寸的脂质体。

实施例2制备脂质体

1、准备壳体材料

将DPPC+DPPA+胆固醇分别以75：5：20的比例混合以产生脂质材料，并将所得的脂质材料溶解于氯仿/甲醇(2：1，v/v)的有机溶剂。

并且，使用旋转搅拌器在30℃下将有机溶剂蒸发20分钟。

然后，将其放入真空室中，并在减压下干燥24小时以产生脂质膜。

2、制备脂质体

将2ml的PBS添加于脂质膜以进行水合，然后在室温下以100W的能源进行超声分解1分钟。此时，可以将实施例1中制备的尺寸受控的微泡11与药物和/或基因一起放入并进行超声分解以产生具有各种尺寸的脂质体。

3、调节脂质体的尺寸和重新结合

使用聚碳酸酯膜过滤器和挤出机过滤以各种尺寸制备的超声响应性微泡11，并使用离心机沉降形成良好的脂质体，然后除去存在于上层的上清液并用去离子水(deionizedwater)洗涤，从而完成用于药物递送的脂质体。

4、分析共聚焦显微镜

通过共聚焦显微镜观察与所述实施例2相同的方法捕获药物的脂质体，结果如图6所示，可以看出在内部存在气体空间的微泡11的捕获以及在胶束外部捕获亲水性荧光物质(MW：4k的葡聚糖)的脂质体。

另外，从图7中可见，与不调节超声响应性微泡11和脂质体的尺寸的状态(a)相比，在根据本发明的实施例制备的状态(b)中，每个脂质体都有效地捕获了药物。

5、金纳米颗粒捕获实验

这用于使用TEM图像分析含有超声响应性微泡11和亲水性药物的脂质体，如图8的(a)所示，将含有根据本发明一实施例制备的超声响应性微泡11和药物的脂质体放置于金纳米颗粒所在的区域。

并且，根据使用TEM图像确认状态的结果，如图8的(b)所示，可以看出金纳米颗粒被捕获在含有超声响应性微泡11和药物的脂质体中，由此可确认在含有超声响应性微泡11和药物的脂质体中装载了用于表现出显着的药物作用的一定量以上的药物。

当包括以上制备的用于药物递送的超声响应性微泡11和药物的脂质体在特定区域接收超声能时，产生空化作用，使得脂质体中包括的药物可以在相应的位置释放。

另外，根据本发明一实施例的包括用于药物递送的超声响应性微泡11和药物的脂质体可以通过将靶向配体(targeting ligand)与脂质体表面结合来提高靶标递送效率，其中，所述靶向配体例如为用于与靶标分子反应的抗体或肽，所述靶标分子例如为在特定细胞表面表达的蛋白质等，例如癌细胞。

即，根据本发明一实施例的脂质体可以同时带来被动靶向和主动靶向的靶向效果，其中，所述被动靶向通过使用所捕获的药物的聚焦超声来实现，所述主动靶向通过特定配体来实现。

此时，通过针对靶向病原体进行配体文库筛选来确认诸如抗体、蛋白质、肽和受体等的靶标对象，并将所确认的靶标对象结合于至脂质体表面。如此，可以将结合至脂质体表面的靶标对象诱导至病原体。

另外，就将靶标对象结合至脂质体表面的方法而言，例如，通过所述实施例1和实施例2制备结合有PEG-COOH的脂质体(无脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶的水)。

然后，添加EDC(1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)-碳二亚胺)和N-羟基琥珀酰亚胺(N-hydroxysuccinimide)，并在室温下搅拌15分钟以活化羧基(COOH)。

接下来，向N-羟基琥珀酰亚胺活化的脂质体中加入结合有氨基(NH2)的靶标对象，并使羧基和胺反应形成酰胺并结合。

在上文中，已经通过诸如具体组件等的特定事项以及受限制的实施例和附图描述了本发明，但这些内容仅用于帮助更全面地理解本发明，因此本发明不限于上述实施例，并且本发明所属领域的技术人员可以根据这些描述进行各种修改和变化。

因此，本发明的精神不限于上述实施例，并且所附权利要求以及对该权利要求的所有等同或等效修改都属于本发明的保护范围。