阅读说明：本技术 一种氟苯尼考纳米晶及其制备方法 (Florfenicol nanocrystal and preparation method thereof ) 是由 李引乾 陈胡羚 辛怡霖 王虹雅 侯佳琪 于 2020-07-17 设计创作，主要内容包括：本发明属于药物制剂技术领域,涉及一种氟苯尼考纳米晶及其制备方法。其将氟苯尼考与纳米技术结合,以解决氟苯尼考溶解度低、生物利用度低及使用不便等问题,丰富氟苯尼考的使用剂型,为兽医临床使用氟苯尼考提供新方法。本发明采用的制备方法为1)氟苯尼考纳米乳的制备；2)旋转蒸发除去有机溶剂；3)冷冻干燥。(The invention belongs to the technical field of pharmaceutical preparations, and relates to florfenicol nanocrystal and a preparation method thereof. The florfenicol is combined with the nanotechnology so as to solve the problems of low solubility, low bioavailability, inconvenience in use and the like of the florfenicol, enrich the use dosage forms of the florfenicol and provide a new method for clinical use of the florfenicol by veterinarians. The preparation method adopted by the invention is 1) preparation of florfenicol nanoemulsion; 2) removing the organic solvent by rotary evaporation; 3) and (5) freeze drying.)

一种氟苯尼考纳米晶及其制备方法

技术领域

本发明属于药物制剂技术领域，涉及一种氟苯尼考纳米晶及其制备方法。

背景技术

氟苯尼考作为动物专用广谱类抗生素，自20世纪90年代陆续在各国上市以来，目前主要应用于治疗敏感细菌所致猪、牛、羊、鸡肠道感染及支原体引起的慢性呼吸道病，鸡大肠杆菌病及鸭浆膜炎及鱼的杀鲑产生单胞菌、鳗弧菌等，在畜禽类细菌性疾病治疗中起着重要作用。

氟苯尼考属于低溶解性/高渗透性药物，极微溶于水，为了改善氟苯尼考在水中的溶解度，目前已有将其制成水溶性前体药物、制成磷脂复合物、添加助溶剂和增溶剂、制成乳剂、制成包合物、制成固体分散体、制成脂质体以及采用超微粉碎技术及微晶技术等物理化学方法。但实际生产中往往存在生产成本高、投喂困难等缺陷，限制了氟苯尼考在临床上的应用。

纳米晶体作为一种药物新剂型，具有很大的优势。将药物制成纳米晶，除了可以改善难溶性药物的溶解性，增加药物的生物利用度外，还能提高药物疗效，减少使用剂量，降低不良反应等优势。纳米晶体药物是极具开发潜力和价值的新型药物制剂，具有广泛的医学前景。

发明内容

有鉴于此，本发明提供一种氟苯尼考纳米晶及其制备方法，其将氟苯尼考与纳米技术结合，以解决氟苯尼考溶解度低、生物利用度低及使用不便等问题，丰富氟苯尼考的使用剂型，为兽医临床使用氟苯尼考提供新方法。

为解决现有技术存在的问题，本发明的技术方案是：一种氟苯尼考纳米晶的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括以下步骤：

1)氟苯尼考纳米乳的制备；

2)旋转蒸发除去有机溶剂；

3)冷冻干燥。

进一步，步骤1)的具体方法为：

1-1)将8-10g氟苯尼考原粉溶解于100ml乙酸乙酯，滴几滴N,N-二甲基乙酰胺助溶，制得饱和溶液，用0.45μm微孔滤膜除杂备用制得有机相备用；

1-2)将1g的泊洛沙姆188溶解于200ml乙醇中，制得混合表面活性剂；

1-3)将有机相和混合表面活性剂以质量比为1:2的比例混合均匀，边搅拌边同时缓慢滴加蒸馏水制得初乳；

1-4)用高速匀浆机对初乳进行高速搅拌后，再对其进行高压匀质，得半透明呈现淡白色乳光的均一体系，即氟苯尼考纳米乳；

所述步骤2)的具体方法为：

采用旋转蒸发仪将有机溶剂去除，得到氟苯尼考纳米混悬液，将其置于-80℃冰箱冻存；

所述步骤3)的具体方法为：

采用冷冻干燥机将冻存好的氟苯尼考纳米混悬液进行干燥，得氟苯尼考纳米晶。

进一步，步骤1-3)中有机相与水相体积比为1:2。

进一步，步骤1-4)中的搅拌转速为7000rpm，匀浆时间5min；匀质压力为300bar,匀质3次。

一种氟苯尼考纳米晶的制备方法制备所得的氟苯尼考纳米晶平均粒径大小为215.6±7.7nm。

与现有技术相比，本发明的优点如下：

1)目前，氟苯尼考的临床使用以可溶性粉、混悬剂为主，市场上无氟苯尼考纳米晶制剂，本发明使氟苯尼考以纳米晶的形式发挥药效，改善了其在水中的溶解度及其他物理性能，提高了其生物利用度，使其在临床上发挥出更好的治疗效果；

2)本发明制备的氟苯尼考纳米晶稳定性良好，粒径达纳米药物标准，药物长时间放置粉末状态良好，不易吸湿，不易结块，易于储存且使用方便；

3)本发明的制备工艺简单可行，生产成本低，便于大规模工业化生产，有利于市场推广；

4)本发明为氟苯尼考的增溶研究工作提供新思路，丰富氟苯尼考的使用剂型，为兽医临床使用氟苯尼考提供新方法。

附图说明

图1有机相与水相体积比对氟苯尼考纳米晶平均粒径大小的影响；

图2泊洛沙姆188的浓度对氟苯尼考纳米晶平均粒径的影响；

图3匀浆速度对氟苯尼考纳米晶平均粒径的影响；

图4匀浆时间对氟苯尼考纳米晶平均粒径的影响；

图5匀质压力对氟苯尼考纳米晶平均粒径的影响；

图6匀质次数对氟苯尼考纳米晶平均粒径的影响；

具体实施方式

为了使本发明专利的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图和实施例，对本发明专利进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明专利，并不用于限定本发明专利。

本发明制备所得的氟苯尼考纳米晶纳米晶平均粒径大小为215.6±7.7nm。

实施例1

一种氟苯尼考纳米晶的制备方法：

有机相与水相体积比对纳米晶平均粒径大小的影响：

步骤1：将8g氟苯尼考原粉溶解于100mL乙酸乙酯，滴几滴N,N-二甲基乙酰胺助溶，制得饱和溶液，用0.45μm微孔滤膜除杂制得有机相备用，将1g泊洛沙姆188溶解于200mL乙醇中，制备成5‰的混合表面活性剂，分八组试验，分别将有机相和混合表面活性剂以质量比1:2混合均匀，边搅拌边同时缓慢滴加蒸馏水(有机相与水相之比分别为1:1,1:1.5,1:2,1:2.5,1:3,1:3.5,1:4,1:5)制得初乳，用高速匀浆7000rpm，5min后，再对其采用300bar压力进行高压匀质3次，得半透明呈现淡白色乳光的均一体系，即氟苯尼考纳米乳；

步骤2：采用旋转蒸发仪将有机溶剂(乙酸乙酯、乙醇)去除，得到氟苯尼考纳米混悬液，将其置于-80℃冰箱冻存；

步骤3：采用冷冻干燥机将冻存好的氟苯尼考纳米混悬液进行干燥，得氟苯尼考纳米晶；

步骤4：利用纳米激光粒度仪，对制备的氟苯尼考纳米晶样品进行粒径测定。将氟苯尼考纳米晶溶解于去离子水中，轻摇使其均匀分散后吸取1mL置于比色皿中检测，重复测定3次，取平均值。

试验结果表明(图1)，在有机相与水相比范围为1:1～1:3时，氟苯尼考纳米晶的平均粒径在259.3～703.2nm之间；而当有机相与水相比例超过1:3.5时，氟苯尼考纳米晶的平均粒径在1000nm之上。在有机相与水相体积比为1:2时，形成的氟苯尼考纳米乳稳定均一，且能得到氟苯尼考纳米晶的最小粒径，因此选择有机相与水相的体积比为1:2来制备氟苯尼考纳米晶。

实施例2

一种氟苯尼考纳米晶的制备方法：

泊洛沙姆188的浓度对氟苯尼考纳米晶平均粒径的影响：

步骤1：将9g氟苯尼考原粉溶解于100mL乙酸乙酯，滴几滴N,N-二甲基乙酰胺助溶，制得饱和溶液，用0.45μm微孔滤膜除杂制得有机相备用。分五组试验，分别将0.2,0.3,0.4,0.5,0.6g泊洛沙姆188溶解于100mL乙醇中，制备成2‰,3‰,4‰,5‰,6‰的混合表面活性剂。分别将有机相和混合表面活性剂以质量比1:2混合均匀，边搅拌边同时缓慢滴加蒸馏水(有机相与水相之比为1:2)制得初乳。用高速匀浆7000rpm，5min后，再对其采用300bar压力进行高压匀质3次，得半透明呈现淡白色乳光的均一体系，即氟苯尼考纳米乳；

步骤2：同实施例1中步骤2；

步骤3：同实施例1中步骤3；

步骤4：同实施例1中步骤4。

结果显示(图2)，泊洛沙姆188的浓度过高或过低时，形成的氟苯尼考纳米晶的平均粒径相对较大。当泊洛沙姆188的浓度在3‰～6‰之间时，氟苯尼考纳米晶的平均粒径在251.9～642.3nm之间。综合结果确定，泊洛沙姆188浓度为5‰时，效果最佳。

实施例3

一种氟苯尼考纳米晶的制备方法：

匀浆速度对氟苯尼考纳米晶平均粒径的影响：

步骤1：将8g氟苯尼考原粉溶解于100mL乙酸乙酯，滴几滴N,N-二甲基乙酰胺助溶，制得饱和溶液，用0.45μm微孔滤膜除杂制得有机相备用。将1g泊洛沙姆188溶解于200mL乙醇中，制备成5‰的混合表面活性剂。将有机相和混合表面活性剂以质量比1:2混合均匀，边搅拌边同时缓慢滴加蒸馏水(有机相与水相之比为1:2)制得初乳。分五组试验，分别采用转速为1000,3000,5000,7000,9000rpm对其高速匀浆5min，再对其采用300bar压力进行高压匀质3次，得半透明呈现淡白色乳光的均一体系，即氟苯尼考纳米乳；

步骤2：同实施例1中步骤2；

步骤3：同实施例1中步骤3；

步骤4：同实施例1中步骤4。

结果显示(图3)，在考察的1000～9000rpm范围内，氟苯尼考纳米晶的平均粒径在242.6～365.0nm之间。综合结果发现，在匀浆速度7000rpm时，纳米晶平均粒径最小。因此，确定氟苯尼考纳米晶制备的最佳匀浆速度为7000rpm。

实施例4

一种氟苯尼考纳米晶的制备方法：

匀浆时间对氟苯尼考纳米晶平均粒径的影响：

步骤1：将8g氟苯尼考原粉溶解于100mL乙酸乙酯，滴几滴N,N-二甲基乙酰胺助溶，制得饱和溶液，用0.45μm微孔滤膜除杂制得有机相备用。将1g泊洛沙姆188溶解于200mL乙醇中，制备成5‰的混合表面活性剂。将有机相和混合表面活性剂以质量比1:2混合均匀，边搅拌边同时缓慢滴加蒸馏水(有机相与水相之比为1:2)制得初乳。分六组试验，采用转速为7000rpm分别对其进行1,3,5,7,9,11min高速匀浆，再对其采用300bar压力进行高压匀质3次，得半透明呈现淡白色乳光的均一体系，即氟苯尼考纳米乳；

步骤2：同实施例1中步骤2；

步骤3：同实施例1中步骤3；

步骤4：同实施例1中步骤4。

结果表明(图4)，在3～11min范围内，平均粒径大小在230.3～264.2nm之间，说明在此范围内匀浆时间对氟苯尼考纳米晶的平均粒径大小影响不大，在5min时，平均粒径最小。因此，选择最佳匀浆时间为5min。

实施例5

一种氟苯尼考纳米晶的制备方法：

匀质压力对氟苯尼考纳米晶平均粒径的影响：

步骤1：将10g氟苯尼考原粉溶解于100mL乙酸乙酯，滴几滴N,N-二甲基乙酰胺助溶，制得饱和溶液，用0.45μm微孔滤膜除杂制得有机相备用。将1g泊洛沙姆188溶解于200mL乙醇中，制备成5‰的混合表面活性剂。将有机相和混合表面活性剂以质量比1:2混合均匀，边搅拌边同时缓慢滴加蒸馏水(有机相与水相之比为1:2)制得初乳，对其以7000rpm高速匀浆5min，再分六组进行试验，分别以100,300,500,700,900,1100bar的压力进行高压匀质3次，得半透明呈现淡白色乳光的均一体系，即氟苯尼考纳米乳；

步骤2：同实施例1中步骤2；

步骤3：同实施例1中步骤3；

步骤4：同实施例1中步骤4。

如图5所示，当压力由100bar升至300bar时，平均粒径由365.0nm降至216.7nm；而当压力继续加大，在300～1100bar范围内时，发现平均粒径呈增大趋势，这说明压力过大，纳米乳滴遭到破坏。所以，选择300bar为最佳匀质压力大小。

实施例6

一种氟苯尼考纳米晶的制备方法：

匀质次数对氟苯尼考纳米晶平均粒径的影响：

步骤1：将9g氟苯尼考原粉溶解于100mL乙酸乙酯，滴几滴N,N-二甲基乙酰胺助溶，制得饱和溶液，用0.45μm微孔滤膜除杂制得有机相备用。将1g泊洛沙姆188溶解于200mL乙醇中，制备成5‰的混合表面活性剂。将有机相和混合表面活性剂以质量比1:2混合均匀，边搅拌边同时缓慢滴加蒸馏水(有机相与水相之比为1:2)制得初乳。对其以7000rpm高速匀浆5min，再分五组试验，分别以300bar的压力进行高压匀质1,3,5,7,9次，得半透明呈现淡白色乳光的均一体系，即氟苯尼考纳米乳；

步骤2：同实施例1中步骤2；

步骤3：同实施例1中步骤3；

步骤4：同实施例1中步骤4。

如图6所示，在匀质次数为0～9次范围内，平均粒径大小在219.6～322.5nm之间；当匀质次数为3次时，平均粒径最小。因此，确定3次为制备氟苯尼考纳米晶的最佳匀质次数。

实施例7

一种氟苯尼考纳米晶的制备方法如下：

步骤1：将8g氟苯尼考原粉溶解于100mL乙酸乙酯，滴几滴N,N-二甲基乙酰胺助溶，制得饱和溶液，用0.45μm微孔滤膜除杂制得有机相备用。将1g泊洛沙姆188溶解于200mL乙醇中，制备成5‰的混合表面活性剂。将有机相和混合表面活性剂以质量比1:2混合均匀，边搅拌边同时缓慢滴加蒸馏水(有机相与水相之比为1:2)制得初乳。对其以7000rpm高速匀浆5min，再以300bar的压力高压匀质3次，得半透明呈现淡白色乳光的均一体系，即氟苯尼考纳米乳；

步骤2：同实施例1中步骤2；

步骤3：同实施例1中步骤3；

步骤4：同实施例1中步骤4。

试验结果表明，利用以上最佳条件制备得到的氟苯尼考纳米晶平均粒径为215.6±7.7nm。

溶解度测定

溶解度测定方法：分别将0.5g氟苯尼考原粉、氟苯尼考与泊洛沙姆188的物理混合物(以下简称物理混合物)、实施例7中制备的氟苯尼考纳米晶置于含100mL蒸馏水的烧杯中，置于恒温振荡器中25±0.5℃条件下振摇一天，使溶液达饱和，使用0.45μm滤膜过滤除去固体颗粒后，分别在266nm处测定紫外吸光光度值，结果带入标准曲线回归方程，计算出溶解度。平行3次试验。

结果显示，绘制的标准曲线回归方程为y＝0.0025x+0.0043(R²＝0.9995)，在25±0.5℃条件下，氟苯尼考原粉的溶解度为1.125mg/mL，物理混合物的溶解度为1.203mg/mL，氟苯尼考纳米晶的溶解度为1.926mg/mL，试验结果表明，本方法制备的氟苯尼考纳米晶的溶解度得到改善。

稳定性试验

对实施例7所制得的氟苯尼考纳米晶进行室温下留样观察试验、光照加速试验和加温加湿试验，以考察本研究所制备的氟苯尼考纳米的稳定性。

1、室温下留样观察试验

取实施例7所制得的氟苯尼考纳米晶置于室温下观察，分别在制备后第0，30，60，120和180天测定氟苯尼考的含量。结果表明，本研究制备的氟苯尼考纳米晶长时间放置粉末状态良好，无变色及结块现象，且含量未见明显变化，说明氟苯尼考纳米晶在室温下稳定性良好。

2、光照加速试验

称取实施例7所制得的氟苯尼考纳米晶3g，平铺于培养皿中，于25℃、光照强度为4500±500lx条件下，分别于第0、5和10天观察其性状变化，并测定其含量。结果显示，本研究制备的氟苯尼考纳米晶性状及含量均无明显变化，表明此纳米晶对光具有稳定性。

3、高温试验

称取实施例7所制得的氟苯尼考纳米晶3g，平铺于培养皿中，置于60℃恒温箱中，分别于第0、5和10天观察其性状变化，并测量其吸湿增重和含量变化。结果显示，本研究制备的氟苯尼考纳米晶性状及含量均无明显变化，表明此纳米晶对在高温条件下稳定性良好。

4、高湿试验

称取实施例7所制得的氟苯尼考纳米晶3g，平铺于培养皿中，将各样品置于25℃，相对湿度分别为60％±5％的隔水式电热恒温培养箱中(培养箱中放置NaNO2饱和溶液)，分别于第0、5和10天观察其性状变化，并测量其吸湿增重和含量变化。结果显示，在60％相对湿度的实验条件下，第5天和第10天吸湿增重分别为12.32％，28.19％，表明此纳米晶具有一定的吸湿性。

根据试验结果，确定氟苯尼考纳米晶制备的最佳条件为：水相与有机相体积比为2:1，表面活性剂(泊洛沙姆188)的浓度为5‰，匀浆速度为7000rpm，匀浆时间为5min，匀质压力为300bar，匀质次数为3次。利用最佳条件制备得到的氟苯尼考纳米晶平均粒径为215.6±7.7nm。

采用单因素试验分析方法，以氟苯尼考纳米混悬液的粒径大小作为筛选最优条件的主要参数，对水相和有机相的体积比，表面活性剂(泊洛沙姆188)的浓度，匀浆的速度和时间以及匀质的压力和次数六个影响因素进行考察，确定氟苯尼考纳米晶的最佳制备工艺。