本发明公开了具有通式(I)的谷氨酰胺荧光探针及其制备方法和用途。该类探针的结构模块包括：谷氨酰胺、连接链和荧光报告基团。本发明的谷氨酰胺荧光探针可作为工具分子,对细胞内谷氨酰胺通量进行实时监测。更优地,此类结构的荧光探针可显示动物肿瘤模型病灶部位对谷氨酰胺的摄取情况,反映体内肿瘤的分布以及大小,丰富小动物活体成像及人类癌症筛查中对肿瘤的检测手段。