本发明公开了一种生物活性四肽及其制备方法、应用,属于活性肽技术领域,一种生物活性四肽,生物活性四肽的氨基酸序列为YVLL。一种生物活性四肽制备方法,包括以下步骤:S0:固定化ACE凝胶亲和吸附柱的制备,S1:肽组分的制备,S2:肽组分的亲和吸附和洗脱,S3:肽的序列鉴定,S4:验证合成生物活性四肽的ACE抑制活性。本发明公开了一种生物活性四肽及其制备方法、应用,制备的固定化ACE凝胶亲和吸附柱用于生物活性四肽的筛选具有筛选快速高效、操作简便易行的特点,可用于生物活性四肽的快速规模化筛选,采用河鲀鱼皮作为原料,获得生物活性四肽氨基酸序列,制备的生物活性四肽具有ACE抑制活性和DPP-Ⅳ抑制活性。