本发明公开了一种用于构建small RNA文库的接头、试剂盒及small RNA文库的构建方法。其中,该接头包括3’端接头,3’端接头为SEQ ID NO：1所示的随机末端接头,其中,N表示随机碱基；3’端接头的5’末端连接一个rApp,3’末端连接一个封闭基团,5’末端的第二位碱基修饰有MP。进一步地,接头还包括5’端接头,5’端接头为SEQ ID NO：2所示的末端接头,5’端接头的3’末端具有2’OMe修饰。应用本发明的技术方案,3’端接头的MP修饰和5’端接头的2’OMe修饰,能够有效的防止3’端接头和5’端接头连接,提高接头连接效率,降低建库的起始量。