阅读说明：本技术 中药川乌的炮制方法 (Processing method of traditional Chinese medicine radix aconiti ) 是由 钟凌云 杨明 龚千锋 叶协涛 祝婧 叶喜德 黄艺 于欢 王芳 范晖 于 2020-08-10 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一种一种中药川乌的炮制方法,其包括如下步骤：S1:取净川乌,在水中浸泡至内无干心；S2:取出晾干后,加入生姜汁拌匀,闷润至润透；S3:加水淹没川乌,隔水蒸至内无白心,口尝带麻舌感；S4:取出,晾干切薄片,干燥。与现有常规炮制方法相比,本发明的中药川乌的炮制方法,具有更加确切的工艺参数,更定量化的控制条件,便于指导实际生产,以获得质量、药效性能稳定的制川乌熟品。经本发明的工艺炮制川乌后,双酯型乌头碱(毒性成分)含量为0.00774%,为生品含量的8.1%。单酯型乌头碱(药效成分)含量为0.08452%,约为生品含量1.9倍。醇胺型乌头碱含量为0.05806%,约为生品含量的1.2倍；与传统炮制川乌相比还部分保留了川乌中的抗炎药效成分准葛尔乌头胺的含量。(The invention relates to a processing method of traditional Chinese medicine radix aconiti, which comprises the following steps: s1, soaking the cleaned radix Aconiti in water until there is no dry core; s2, taking out, air drying, adding ginger juice, stirring, and moistening; s3, adding water to submerge the radix aconiti, steaming the radix aconiti over water until no white heart exists, and tasting the radix aconiti with a numb tongue feeling; s4, taking out, airing, slicing and drying. Compared with the conventional processing method, the processing method of the traditional Chinese medicine radix aconiti has more exact process parameters and more quantitative control conditions, is convenient for guiding actual production, and obtains the prepared radix aconiti preparata with stable quality and pharmacodynamic performance. After the monkshood is processed by the process, the content of diester aconitine (toxic component) is 0.00774 percent, which is 8.1 percent of the content of the product. The content of monoester aconitine (effective component) is 0.08452%, which is about 1.9 times of the content of raw product. The content of the hydramine type aconitine is 0.05806 percent and is about 1.2 times of the content of the raw product; compared with the traditional processed radix aconiti, the content of the anti-inflammatory drug effect component pseudo-puerariae aconitine in the radix aconiti is partially reserved.)

中药川乌的炮制方法

技术领域

本发明属于中药炮制技术领域，具体涉及中药川乌的炮制方法。

背景技术

川乌为毛茛科植物乌头Aconitum carmichaelii的干燥母根、性热、味辛、苦，属温里药，具有祛风除湿、散寒止痛、温经化瘀的药理作用。自古以来，川乌因其治疗寒疝攻注、胸胁满痛、血气虚弱等疗效显著而备受医家的推崇。但川乌生品有毒，临床应用往往需要炮制后入药。

2015年版《中国药典》记载的川乌炮制方法为：取川乌，大小个分开，用水浸泡至内无干心，取出，蒸6-8小时至取大个及实心者切开内无白心，口尝微有麻舌感，取出，晾至六成干，切片，干燥。

早在汉代医方书《五十二病方》就载有川乌炮制方法。在药典炮制方法中，浸泡时间和蒸制时间均无确切参数规定，都是凭经验判断，这样容易出现煮制不完全或煮制过度的情况。同时，现代大多数的川乌炮制方法均参考药典记载方法，并无在炮制过程中加入辅料的情况。

现代研究表明生姜可以增加川乌中药效成分的溶出，提高药效。但目前相关研究资料所记载的炮制方法，有大量含混模糊之处，并不适用于实际生产。

发明内容

(一)要解决的技术问题

鉴于现有技术的上述缺点，本发明提供一种中药川乌的炮制方法，用于标准化中药川乌的炮制工艺，其解决了现有川乌炮制方法过程模糊、随意性太强、标准化程度低等问题。

本发明在炮制川乌的过程中加入生姜汁，显著提高了制川乌(炮制完的川乌)中药效成分单酯型乌头碱、醇胺型乌头碱的含量，显著降低了毒性成分双酯型乌头碱的含量，同时还保留了川乌中的抗炎药效成分准葛尔乌头胺，提高制川乌的药效价值。

(二)技术方案

为了达到上述目的，本发明采用的主要技术方案包括：

第一方面，本发明实施例提供一种中药川乌的炮制方法，其包括：

S1:取净川乌，在水中浸泡至内无干心；

S2:取出晾干后，加入生姜汁拌匀，闷润至润透；

S3:加水淹没川乌，隔水蒸至内无白心，口尝带麻舌感；

S4:取出，晾干切薄片，干燥。

根据本发明的较佳实施例，S1中，川乌浸泡40-60h，每隔10-12h换一次水，浸泡至无干心。在浸泡满48h时，可用剪刀剪开或手掰开川乌，查看是否存在干心，若还有干心，继续加长浸泡的时间，但浸泡不超过60h。

根据本发明的较佳实施例，S2中，加入生姜汁的量为：每100g川乌，用新鲜生姜25g制作生姜汁；

生姜汁的制作方法为：取生姜洗净切片，加生姜质量15-20％的水反复压榨4次，每次加入再加入10％-15％的水，过滤，低温旋转浓缩，定容至浓度为1.0-2g/mL。

若取新鲜生姜X g，加生姜质量15-20％的水反复压榨4次，每次加入再加入10％-15％的水，过滤，低温旋转浓缩，定容至V ml,V:X＝1:1～2；可达每ml水中含1-2g生姜。

根据本发明的较佳实施例，S3中，蒸7-8h至口尝有微麻舌感。

根据本发明的较佳实施例，S4中，晾至减重40-60％，切薄片，干燥。

另一方面，本发明还提供生姜在川乌炮制过程中降低川乌毒性提高药效中的应用；其中，所述炮制方法为：

S1:取净川乌，在水中浸泡至内无干心；

S2:取出晾干后，加入生姜汁拌匀，闷润至润透；

S3:加水淹没川乌，隔水蒸至内无白心，口尝带麻舌感；

S4:取出，晾干切薄片，干燥；

通过上述炮制方法，使川乌中的药效成分单酯型乌头碱为生品含量的1.9倍，醇胺型乌头碱为生品含量的1.2倍，毒性成分双酯型乌头碱的含量为生品含量的8.1％；且所述川乌中还含有抗炎药效成分准葛尔乌头胺。

根据本发明的较佳实施例，S1中，川乌浸泡40-60h，每隔10-12h换一次水，浸泡至无干心。在浸泡满48h时，可用剪刀剪开或手掰开川乌，查看是否存在干心，若还有干心，继续加长浸泡的时间，但浸泡不超过60h。

根据本发明的较佳实施例，S2中，加入生姜汁的量为：每100g川乌，用新鲜生姜25g制作生姜汁；

生姜汁的制作方法为：取生姜洗净切片，加生姜质量15-20％的水反复压榨4次，每次加入再加入10％-15％的水，过滤，低温旋转浓缩，定容至浓度为1.0-2g/mL。

根据本发明的较佳实施例，S3中，蒸7-8h至口尝有微麻舌感。

根据本发明的较佳实施例，S4中，晾至减重40-60％，切薄片，干燥。

在一方面，本发明提供一种制川乌，其中，双酯型乌头碱含量为0.00771～0.00778％；单酯型乌头碱含量为0.08450-0.08455％；醇胺型乌头碱含量为0.05802-0.05810％；准葛尔乌头胺的含量大于0。

(三)有益效果

与现有常规炮制方法相比，本发明的中药川乌的炮制方法，具有更加确切的工艺参数，更定量化的控制条件，便于指导实际生产，以获得质量、药效性能稳定的制川乌熟品。

经本发明的工艺炮制川乌后，双酯型乌头碱(毒性成分)含量为0.00774％，为生品含量的8.1％。单酯型乌头碱(药效成分)含量为0.08452％，其约为生品含量1.9倍。醇胺型乌头碱(药效成分)含量为0.05806％，其约为生品含量的1.2倍。同时，本发明炮制川乌与传统炮制川乌相比，还能够部分保留川乌中准葛尔乌头胺(Songoramine，一种抗炎药效成分)的含量。

附图说明

图1为正离子模式下生品(A1)、实施例1制川乌(A2)、实施例2制川乌(A3)炮制品总离子流图；

图2为.负离子模式下生品(B1)、实施例1制川乌(B2)、实施例2制川乌(B3)炮制品总离子流图；

图3为利用Autodock软件将准葛尔乌头胺和炎症蛋白MAPK14、MMP9、PTGS2晶体结构加氢的计算机模拟结构示意图。(A)Songoramine和MAPK14；(B)Songoramine和PTGS2；(C)Songoramine和MMP9(氢键用虚线虚线表示，距离以埃为单位。)

具体实施方式

为了更好的解释本发明，以便于理解，下面结合附图，通过具体实施方式，对本发明作详细描述。

实施例1

本实施例涉及一种炮制川乌的方法：取净川乌，在水中浸泡2天至内无干心，每天换水2次，取出晾干后，加入生姜汁拌匀，闷润0.5h,取出，加水没药，隔水蒸7h至内无白心，口尝微有麻舌感，取出，晾至6成干切薄片，干燥。(每100g川乌，用生姜25g，加生姜质量15％的水反复压榨4次，每次加入再加入15％的水，过滤，低温旋转浓缩至25ml，定容至生姜汁浓度为1.0g/mL。)

对比例1

本对比例涉及一种炮制川乌的方法：取净川乌，在水中浸泡2天至内无干心，每天换水2次，取出，加水蒸7h至内无白心，口尝微有麻舌感，取出，70℃干燥箱干燥6成干切薄片，再放干燥箱干燥。

实施例2

针对实施例1和对比例1制得的川乌，取川乌粉末过三号筛约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加氨试液3ml，精密加入异丙醇-乙酸乙酯(1:1)混合溶液50ml，称定重量，超声处理30min，放冷，在称定重量，用异丙醇-乙酸乙酯(1:1)混合溶液补足失重，摇匀，滤过，精密量取滤液25ml，40℃以下减压回收至干，残渣精密加入5ml乙腈溶解，过0.22μm微孔滤膜，制得供试品。

精密称取苯甲酰新乌头原碱3.03mg、苯甲酰乌头原碱2.04mg、苯甲酰次乌头原碱2.24mg、新乌头碱1.98mg、乌头碱1.93mg、次乌头碱2.06mg分别溶于3ml乙腈，摇匀，即得各对照品溶液。

Waters Acquity UPLC BEH C18色谱柱(2.1mm×100mm，1.7m)，流动相为0.07％三乙胺溶液(A)-乙腈(B)，梯度洗脱程序0-2min(25％A)，2-8min(25％-27％A)，8-12min(12％-29％A)，27-29min(29％-60％A)，进样量4μL，流速0.3ml/min，检测波长235nm。

表1：炮制对川乌双酯型乌头碱含量的影响

	实施例1	对比例1	生品
				新乌头碱含量％	0	0	0.04075
乌头碱含量％	0.00429	0.00412	0.01353
				次乌头碱含量％	0.00345	0.00311	0.04038
3种双酯型生物碱总量	0.00774	0.00723	0.09466

表2：炮制对川乌单酯型乌头碱含量的影响

	实施例1	对比例1	生品
				苯甲酰新乌头碱含量％	0.06502	0.06636	0.02882
苯甲酰乌头碱含量％	0.00667	0.00919	0.00300
				苯甲酰次乌头碱含量％	0.01283	0.01553	0.01156
3种单酯型生物碱总量	0.08452	0.09108	0.04338

由表1、2可以看出，经过本发明炮制后双酯型乌头碱(毒性成分)含量为0.00774％，为生品含量的8.1％，毒性显著下降。单酯型乌头碱(药效成分)含量为0.08452％，约为生品含量1.9倍，药效显著增加。

实施例3

针对实施例1和对比例1制得的川乌，取川乌粉末过三号筛约3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入0.05mol/mL盐酸水溶液50ml，称定重量，超声处理30min，放冷，在称定重量，用0.05mol/mL盐酸水溶液混合溶液补足失重，摇匀，滤过，精密量取滤液25ml，40℃以下减压回收至干，残渣精密加入4ml0.05 mol/mL盐酸水溶液混合溶液溶解，过0.22μm微孔滤膜，制得供试品。

精密称取新乌头原碱3.45mg、乌头原碱1.92mg、次乌头原碱1.89mg分别溶于3ml0.05 mol/mL盐酸水溶液，摇匀，即得各对照品溶液。

Waters Acquity UPLC BEH C18色谱柱(2.1mm×100mm，1.7m)，流动相为0.07％三乙胺溶液(A)-乙腈(B)，梯度洗脱程序0-15min(5-30％A)，15-20min(30％-60％A)，20-20.5min(60％-5％A)，20.5-25min(5％A)，进样量10μL，流速0.3ml/min，增益200，漂移管90℃，喷雾器采用加热模式，气体压力40psi。

表3：炮制对川乌醇胺型乌头碱含量的影响

	实施例1	对比例1	生品
				新乌头原碱含量％	0.03370	0.03475	0.02776
乌头原碱含量％	0.01403	0.01504	0.01138
				次乌头原碱含量％	0.01033	0.01067	0.00854
3种单酯型生物碱总量	0.05806	0.06046	0.04769

由表3可以看出，经过本发明炮制后醇胺型乌头碱含量为0.05806％，约为生品含量的1.2倍，药效增加。

实施例4

针对实施例1和对比例1制得的川乌，取川乌粉末过三号筛约1g，精密称定，加入色谱级甲醇30mL，超声提取20min，放冷，补足失重，滤过，滤液稀释3倍，过0.22μm微孔滤膜，制得供试品。

Waters Acquity UPLC BEH C18色谱柱(2.1mm×100mm，1.7m)，流动相为0.1％甲酸水溶液(A)-乙腈(B)，梯度洗脱，0.01-5min，5-10％B；5-12min，10-35％B；12-20min，35-80％B；20-30min,80-85％B；30-35min,85-95％B；35-37.1min,95-5％B.流速0.25ml/min，进样量2μL。

电喷雾离子源(ESI),正、负离子模式扫描。正负离子喷雾电压分别为5500V/-4500V。去溶剂温度(TEM)500℃；去簇电压(DP)分别为100V/-100V；碰撞电压(CE)分别是40eV/-40eV；雾化气(gas1)50kPa；辅助加热气(gas2)50kPa；气帘气(CUR)40kPa；扫描范围m/z 50-1000；碰撞活化扫描15eV。

如图1所示为正离子模式下川乌及其炮制品总离子流图。其中A1对应生品的检测结果，A2对应实施例1的检测结果，A3对应对比例1的检测结果。

如图2所示为负离子模式下川乌及其炮制品总离子流图。其中B1对应生品的检测结果，B2对应实施例1的检测结果，B3对应对比例1的检测结果。

下表为正离子模式下川乌中化合物保留时间、质谱信息及成分类型：

表4

注：+表示有该成分；-表示没有该成分；S1川乌生品；S2实施例1制川乌；对比例1制川乌；A、B、C、D、E分别为C₁₈、C₁₉、C₂₀类生物碱、非萜类生物碱、非生物碱类成分。

实施例5

针对实施例4中，探究本发明保留的准葛尔乌头胺(Songoramine)对川乌抗炎作用的可能性。从PubChenm数据库下载准葛尔乌头胺的3D格式，从PDB蛋白数据库下载炎症蛋白MAPK14、MMP9、PTGS2晶体结构。利用Autodock软件将准葛尔乌头胺和MAPK14、MMP9、PTGS2晶体结构加氢、计算电荷(如图3所示为结构示意图，下表为计算结果)。设置盒子，进行对接炎症，对接结合能小于-5kcal·mol^-1表明具有良好的作用可能。

由以上实施例可知，经过本发明的方法炮制后，川乌中双酯型生物碱显著降低，并且药效成分含量增加，同时与传统炮制相比，本发明的方法能保留了准葛尔乌头胺(Songoramine)成分，具有抗炎功效，使综合药效增强。

最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。