阅读说明：本技术 一种三异丙基硅乙炔修饰的脱氧胞苷亚磷酰胺单体及其制备方法与应用 (Tri-isopropyl silaacetylene modified deoxycytidine phosphoramidite monomer and preparation method and application thereof ) 是由 *** 董田田 于 2020-06-30 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种三异丙基硅乙炔修饰的脱氧胞苷亚磷酰胺单体及其制备方法与应用。本发明三异丙基硅乙炔修饰的脱氧胞苷亚磷酰胺单体的化学结构式为：<Image he="661" wi="408" file="DDA0002562166010000011.GIF" imgContent="drawing" imgFormat="GIF" orientation="portrait" inline="no"></Image>式Ⅰ中,DMTr-为4,4’-二甲氧基三苯甲基,N(i-Pr)<Sub>2</Sub>-为N,N-二异丙基胺基。其制备方法是将5-I-脱氧胞苷中5’端基保护,然后对其氨基进行保护,再将碱基5号位引入三异丙基硅乙炔进行修饰,然后将其脱氧胞苷引入亚磷酰胺得到三异丙基硅乙炔修饰的脱氧胞苷亚磷酰胺单体。本发明所述式Ⅰ所示的三异丙基硅乙炔修饰的脱氧胞苷亚磷酰胺单体应用于制备寡核苷酸中。本发明一种寡核苷酸可由包括上述式Ⅰ所示的三异丙基硅乙炔修饰的脱氧胞苷亚磷酰胺单体通过DNA固相合成法制成。本发明制备方法简单,能用于制备稳态与瞬态红外光谱结构探针。(The invention discloses a triisopropyl silaacetylene modified deoxycytidine phosphoramidite monomer and a preparation method and application thereof. The chemical structural formula of the deoxycytidine phosphoramidite monomer modified by triisopropyl-silacetylene is as follows: in the formula I, DMTr-is 4, 4' -dimethoxytrityl, N (i-Pr) 2 -is N, N-diisopropylamino. The preparation method comprises the steps of protecting the 5' end group in the 5-I-deoxycytidine, then protecting the amino group, introducing triisopropylsilacetylene into the 5 th position of the basic group for modification, and then introducing the deoxycytidine into phosphoramidite to obtain triisopropylsilacetylene modified deoxycytidine phosphoramidite monomer. The invention relates to application of a triisopropylsilacetylene modified deoxycytidine phosphoramidite monomer shown in formula I in preparation of oligonucleotides. The oligonucleotide can be prepared from the triisopropylsilacetylene modified deoxycytidine phosphoramidite monomer shown in the formula I by a DNA solid phase synthesis method. The preparation method is simple and can be used for preparing probes with stable and transient infrared spectrum structures.)

一种三异丙基硅乙炔修饰的脱氧胞苷亚磷酰胺单体及其制备 方法与应用

技术领域

本发明涉及一种三异丙基硅乙炔修饰的脱氧胞苷亚磷酰胺单体及其制备方法与应用，属于核苷酸的化学合成技术领域。

背景技术

近年来，随着核苷酸化学合成技术的发展，学术界和产业界报道了一系列化学修饰的核苷酸单体和寡核苷酸衍生物。核酸化学修饰主要包括对核酸的磷酸基团、碱基和糖环的修饰以及非天然单体对天然单体的替换等，主要包括通过将核苷酸单体衍生物引入寡核苷酸片段和对寡核酸片段直接化学修饰的方法；所引入的修饰基可作为各种光谱探针，对生物遗传物质结构和功能的研究有非常重要的作用。然而，已经报导的可作为核酸的红外光谱探针的修饰基团的种类不多，特别是那些具有与核酸的红外吸收峰不发生重叠的修饰基团(典型如炔键基团)，而且这方面的研究极少，将之与稳态和瞬态红外光谱方法相结合的应用，迄今尚未报道。

另一方面，随着“点击化学”的发展，对于核酸的“点击化学”研究成为一个重要领域。常见的点击化学反应有叠氮与末端炔烃反应生成三氮唑，反应产物单一、稳定、无化学毒性，且三氮唑产物具有很强的荧光效应。叠氮与末端炔烃的“点击化学”对核酸修饰可用于寡核苷酸的标记、固定、金属化、交联、人工合成等方面，功能强大。因此，高效快速获取炔基修饰的寡核苷酸具有重要意义。此外，在DNA固相合成过程中，碱基上的乙炔基易水解，这也增加了寡核苷酸片段的分离难度。

发明内容

本发明的目的是提供一种三异丙基硅乙炔修饰的脱氧胞苷亚磷酰胺单体及其制备方法与应用。本发明是将三异丙基硅乙炔对核酸单体的碱基进行修饰，用于将亚磷酰胺单体引入到寡核苷酸片段中，使特定的寡核苷酸片段包含三异丙基硅基修饰后的炔基基团，成为一种具有明显红外活性的红外光谱探针，为利用稳态和瞬态红外光谱手段研究DNA特殊位点的结构动力学提供了具有特征红外吸收峰的外源光谱探针。

本发明提供的一种三异丙基硅乙炔修饰的脱氧胞苷亚磷酰胺单体，其化学结构式为：

式Ⅰ中，DMTr-为4,4’-二甲氧基三苯甲基，N(i-Pr)₂-为N,N-二异丙基胺基。

本发明还提供了上述式Ⅰ所示的三异丙基硅乙炔修饰的脱氧胞苷亚磷酰胺单体的制备方法，包括以下步骤：

(1)无水、无氧环境，惰性气体保护和催化剂a存在时，在有机溶剂中5-碘-2’-脱氧胞苷与4,4’-二甲氧基三苯甲基氯进行反应，得到式Ⅱ所示的5’端基保护的5-碘代脱氧胞苷；

(2)所述式Ⅱ所示的5’端基保护的5-碘代脱氧胞苷与乙酸酐进行酰胺化反应，得到式Ⅲ所示的氨基保护的5-I-脱氧胞苷；

(3)所述式Ⅲ所示的氨基保护的5-I-脱氧胞苷与三异丙基硅乙炔进行Sonogashira偶联反应，得到式Ⅳ所示的碱基5号位三异丙基硅乙炔修饰的脱氧胞苷；

(4)无水、无氧环境，所述惰性气体保护和催化剂b存在时，所述式Ⅳ所示的碱基5号位三异丙基硅乙炔修饰的脱氧胞苷经亚磷酰胺化反应，即得到式Ⅰ所示的三异丙基硅乙炔修饰的脱氧胞苷亚磷酰胺单体。

上述的制备方法中，步骤(1)中，所述催化剂a为4-二甲氨基吡啶；

所述反应中还加入缚酸剂，所述缚酸剂为三乙胺；用来中和所述反应过程中所生成的HCl；加入所述4-二甲氨基吡啶时移到冰水浴中；

345-碘-2'-脱氧胞苷、三乙胺、4-二甲氨基吡啶与所述4,4’-二甲氧基三苯甲基氯的摩尔比可为1:1.5～2.5:0.2～0.5:1.5～2.5，具体可为1:2:0.25:2、1:1.5～2:0.2～0.25:1.5～2、1:2～2.5:0.25～0.5:2～2.5；

所述反应在溶剂中进行，所述溶剂为吡啶；

所述反应的温度为室温，时间可为3～6h，具体可为4h、3～4h、4～6h或3.5～5h；

所述惰性气体包括氮气、氩气和氦气中的至少一种。

上述的制备方法中，步骤(2)中，所述式Ⅱ所示的5’端基保护的5-碘代脱氧胞苷与乙酸酐的摩尔比可为1:2～3，具体可为1:2.5、1:2～2.5、1:2.5～3或1:2.25～2.75；

所述酰胺化反应的温度为室温，反应时间可为20～30h，具体可为24h、20～24h、24～30h或22～27h；

所述酰胺化反应在有机溶剂存在下进行，所述有机溶剂包括N’N-二甲基甲酰胺和/或吡啶。

上述的制备方法中，步骤(3)中，所述式Ⅲ所示的氨基保护的5-I-脱氧胞苷与三异丙基硅乙炔摩尔比为1:2～4，具体可为1:2.5、1:2.5～4、1:2～2.5或1:2.5～3；

所述Sonogashira偶联反应的温度为室温，反应时间可为24～36h，具体可为24h、24～27h或24～30h，适当延长反应时间，以提高产率；

所述Sonogashira偶联反应在催化剂c存在下进行，所述催化剂c包括碘化亚铜和四-(三苯基膦)-钯；

所述Sonogashira偶联反应中还加入缚酸剂，所述缚酸剂为三乙胺，用来中和反应过程中所生成的碘化氢HI。

上述的制备方法中，步骤(3)中，所述Sonogashira偶联反应在有机溶剂存在下进行，所述有机溶剂包括N’N-二甲基甲酰胺；

所述式Ⅲ所示的氨基保护的5-I-脱氧胞苷、碘化亚铜、四-(三苯基膦)-钯、三乙胺与三异丙基硅乙炔摩尔比可为1:0.1～0.3:0.1～0.25:2～4:2～4，具体可为1:0.2:0.15:3:2.5。

上述的制备方法中，步骤(4)中，采用2-氰乙基N,N-二异丙基氯代亚磷酰胺进行所述亚磷酰胺化反应；

所述催化剂b包括N,N-二异丙基乙胺；

所述式Ⅳ所示的碱基5号位三异丙基硅乙炔修饰的脱氧胞苷、N,N-二异丙基乙胺与所述2-氰乙基N,N-二异丙基氯代亚磷酰胺的摩尔比可为1:2～3:1.7～2，具体可为冰水浴中反应，具体可为1:2:1.7；

所述亚磷酰胺化反应的温度可为-15～10℃，具体在冰水浴中进行，时间可为3～5h，具体可为3h、3～4h；

所述亚磷酰胺化反应在有机溶剂存在时进行，所述有机溶剂包括二氯甲烷。

上述的制备方法中，步骤(1)中，所述反应的后处理如下：经乙酸乙酯和碳酸氢钠水溶液反复洗涤、抽滤，干燥；

步骤(2)中，所述酰胺化反应的后处理如下：饱和食盐水洗、抽滤，以除去有机溶剂；

步骤(3)中，所述Sonogashira偶联反应的后处理如下：饱和食盐水和乙酸乙酯萃取，然后除去溶剂；

步骤(4)中，所述亚磷酰胺化反应的后处理如下：采用硅胶层析柱进行柱层析分离所述式Ⅰ所示的三异丙基硅乙炔修饰的脱氧胞苷亚磷酰胺单体，并且对所述硅胶层析柱进行碱淋洗和冷藏，以快速分离得到目标产物。

本发明所述式Ⅰ所示的三异丙基硅乙炔修饰的脱氧胞苷亚磷酰胺单体应用于制备寡核苷酸中。

本发明为进一步合成一种新型的寡核苷酸提供了原料，可由包括上述式Ⅰ所示的三异丙基硅乙炔修饰的脱氧胞苷亚磷酰胺单体通过DNA固相合成法制成所述寡核苷酸。

本发明中，所述寡核苷酸为含有三异丙基硅乙炔修饰的脱氧胞苷的寡核苷酸。其中所含的炔基C≡C可作为DNA特定位点的结构和动力学的红外光谱探针。特别需要说明的是，C≡C伸缩振动，尽管其吸收频率不与核酸的特征峰重叠，但由于其通常只具有弱红外活性，振动吸收强度低，在传统红外光谱学中是不被用来作为光谱探针的。而在本发明中，作为炔基的端基修饰基团的三异丙基硅基的引入，使C≡C伸缩振动强度得到很大增强，并使其振动频率和峰宽具有了对化学结构与溶剂的敏感性，这就使其得以成为可行的稳态与瞬态红外光谱结构探针，为研究DNA特殊位点的结构动力学提供了在化学键层次、利用红外振动光谱手段进行描述的可能性。

上述的寡核苷酸中，所述寡核苷酸中由所述式Ⅰ所示的三异丙基硅乙炔修饰的脱氧胞苷亚磷酰胺单体形成的三异丙基硅乙炔修饰的脱氧胞苷的数量为1个或多个；

所述三异丙基硅乙炔修饰的脱氧胞苷在所述寡核苷酸中的任意位置。

本发明所述的寡核苷酸应用于制备稳态与瞬态红外光谱结构探针中。

为证明本发明所述式Ⅰ所示的三异丙基硅乙炔修饰的脱氧胞苷亚磷酰胺单体中炔键可作为红外光谱结构探针，进一步提供了一种式Ⅰ所示的三异丙基硅乙炔修饰的脱氧胞苷亚磷酰胺单体中不带保护基的碱基5号位三异丙基硅乙炔修饰的脱氧胞苷单体，其化学结构式为：

本发明还提供了上述式Ⅴ所示的三异丙基硅乙炔修饰的脱氧胞苷的制备方法，包括以下步骤：

所述5-碘-2’-脱氧胞苷与所述三异丙基硅乙炔进行Sonogashira偶联反应，即得到式Ⅴ所示的碱基5号位三异丙基硅乙炔修饰的脱氧胞苷。

上述的制备方法中，所述5-碘-2’-脱氧胞苷与所述三异丙基硅乙炔摩尔比为1:2～4，具体可为1:2.5、1:2.5～4、1:2～2.5或1:2.5～3；

所述Sonogashira偶联反应的温度为室温，反应时间可为24～36h，具体可为24h、24～27h或24～30h，适当延长反应时间，以提高产率。

上述的制备方法中，所述Sonogashira偶联反应在催化剂存在下进行，所述催化剂包括碘化亚铜和四-(三苯基膦)-钯；

所述Sonogashira偶联反应中还加入缚酸剂，所述缚酸剂为三乙胺，用来中和反应过程中所生成的碘化氢HI。

上述的制备方法中，所述Sonogashira偶联反应在有机溶剂存在下进行，所述有机溶剂包括N’N-二甲基甲酰胺；

所述5-碘-2’-脱氧胞苷、碘化亚铜、四-(三苯基膦)-钯、三乙胺与三异丙基硅乙炔摩尔比可为1:0.1～0.3:0.1～0.25:2～4:2～4，具体可为1:0.2:0.15:3:2.5。

本发明具有以下优点：

1、5-三异丙基硅乙炔-脱氧胞苷亚磷酰胺单体作为DNA固相合成的原料，可以方便地在寡核苷酸片段任意位置引入一个或多个5-三异丙基硅乙炔-脱氧胞苷亚磷酰胺单体或5-乙炔-脱氧胞苷亚磷酰胺单体，合成新型的寡核苷酸序列及其探针。

2、该合成方法条件温和，后处理简单，操作简便，适合工业化生产。

3、本发明的起始重要原料为5-I-脱氧胞苷(5-碘-2'-脱氧胞苷)，原料易得，成本低廉。

附图说明

图1为本发明三异丙基硅乙炔修饰的脱氧胞苷亚磷酰胺单体的合成方法的反应方程式流程图。

图2为本发明碱基5号位三异丙基硅乙炔修饰的脱氧胞苷和5-乙炔-脱氧胞苷的红外吸收光谱(FTIR光谱)。

具体实施方式

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例1、

5’端基保护的5-碘代脱氧胞苷(又称5’-DMT-5-I-脱氧胞苷，简称5’-DMT-5-I-dC)的合成

在250mL三颈瓶中，加入5g 5-I-脱氧胞苷(即5-碘-2’-脱氧胞苷，简称5-I-dC)，抽冲三次，进行氮气保护。然后用注射器加入80ml超干吡啶，鼓泡30min，除去溶剂中残余氧气。移到冰水浴，加入0.425g 4-二甲氨基吡啶，加入9.6g 4,4’-二甲氧基三苯甲基氯，加入3.94mL Et₃N，搅拌15min，移到室温(25℃)下，TLC板监测反应，反应4h接近完全。加入30mL甲醇，进行终止反应，反应体系由棕褐色浑浊状态变为澄清。真空旋蒸除去溶剂，加入少量乙酸乙酯溶解，析出白色固体，抽滤；滤饼经乙酸乙酯和5％NaHCO₃水溶液反复洗涤、抽滤，除去杂质，恒温干燥，得到白色固体产物7.02g，产率75.7％。白色固体可直接投入下一步反应。

¹H-NMR(DMSO-d6,300MHz)δ:2.04-2.22(m,2H,2’),3.13-3.23(m,2H,5’),3.74(s,6H,OMe),3.87-3.93(m,1H,4’),4.15-4.22(m,1H,3’),5.28(d,J＝4.29Hz,1H,3’-OH),6.10(t,J＝6.66Hz,1H,H-1’),6.63(bs,1H,-NH),6.91(d,4H,aromatic),7.20-7.40(m,9H,aromatic),7.87(bs,1H,NH),7.96(s,1H,H-6).MS(ESI-MALDI),理论值[M]655.12,C₃₀H₃₀IN₄O；测量值[M+Na]⁺678.10737。

实施例2、

氨基保护的5-I-脱氧胞苷(又称5’-DMT-4-NHAc-5-I-脱氧胞苷，简称5’-DMT-4-NHAc-5-I-dC)的合成

在250mL单口瓶中，投入4g 5’-DMT-5-I-脱氧胞苷，加入30mL超干DMF(N’N-二甲基甲酰胺)，搅拌溶解，加入1.45mL乙酸酐，TLC板监测反应，室温下反应24h，反应接近完全。停止反应，加入120mL饱和食盐水，析出黄色固体，抽滤；加入30mL乙酸乙酯溶解，10mL饱和食盐水萃取，保留有机层，加入无水硫酸钠干燥，抽滤，真空旋蒸除去溶剂，得到粗产物。经二氯甲烷/丙酮(梯度，v:v，12:1～8:1～6:1～4:1)硅胶柱层析分离，得到白色泡沫状固体产物。加入少量丙酮溶解，搅拌下缓慢滴加石油醚，析出白色固体，抽滤，干燥，得到产物3.02g，产率71.1％。

¹H-NMR(DMSO-d6,300MHz)δ:2.13-2.20(m,1H,H_α-2’),2.24(s,3H,CH₃),2.34-2.37(m,1H,H_β-2’),3.18-3.26(m,2H,H-5’),3.74(s,6H,2×OCH₃),3.96-4.01(m,1H,H-4’),4.16-4.23(m,1H,H-3’),5.34(d,J＝3.27Hz,1H,3’-OH),6.05(t,J＝4.86Hz,1H,H-1’),6.88-6.91(m,4H,Ar-H),7.21-7.40(m,9H,Ar-H),8.30(s,1H,H-C6),9.44(s,1H,NH).MS(ESI),理论值[M]697.13,C₃₂H₃₂IN₃O₇；测量值[M+Na]⁺720.9。

实施例3、

碱基5号位三异丙基硅乙炔修饰的脱氧胞苷(又称5’-DMT-4-NHAc-5-三异丙基硅乙炔-脱氧胞苷，简称5’-DMT-4-NHAc-5-TIPSE-dC)的合成

在100ml三口瓶中，投入1.5g 5’-DMT-4-NHAc-5-I-脱氧胞苷，加入0.083g CuI，加入0.374g[Pd(pph₃)₄]，抽冲三次，抽气时间约30min，进行氮气保护；加入30ml超干DMF，鼓泡30min，除去溶剂中残余氧气。用注射器加入0.8ml Et₃N和1.205ml三异丙基硅乙炔，室温(25℃)下反应。TLC板监测反应，24h反应接近完全。停止反应，加入120ml饱和食盐水，用乙酸乙酯萃取，保留有机层，加入无水硫酸钠干燥，抽滤，真空旋蒸去除溶剂，得到粗产物。经二氯甲烷/丙酮(梯度，v:v，25:1～20:1～15:1～14:1)硅胶柱层析分离得到浅黄色泡沫状固体，干燥，得到产物0.97g，产率59.8％。

¹H-NMR(DMSO-d6,300MHz)δ:0.91-0.98(m,21H,6×CH₃,3×CH),2.11-2.18(m,1H,H_α-2’),2.31-2.39(m,4H,CH3,H_β-2’),3.07-3.12(m,2H,H-5’),3.71(s,6H,2×OCH₃),4.00-4.04(m,1H,H-4’)4.10-4.18(m,1H,H-3’),5.34(d,J＝4.29Hz,1H,3’-OH),6.03(t,J＝6.39Hz,1H,H-1’),6.85-6.88(m,4H,Ar-H),7.17-7.40(m,9H,Ar-H),8.22(s,1H,H-6),9.13(s,1H,NH).MS(ESI-MALDI),理论值[M]751.37,C₄₃H₅₃N₃O₇Si；测量值[M+H]⁺752.37236。

实施例4、

三异丙基硅乙炔修饰的脱氧胞苷亚磷酰胺单体(又称5’-DMT-4-NHAc-5-三异丙基硅乙炔-脱氧胞苷亚磷酰胺单体，简称5’-DMT-4-NHAc-5-TIPSE-dC phosphoramidite)合成

将本发明实施例3的产物进行真空干燥24h。在50mL三口瓶中投入0.2g5’-DMT-4-NHAc-5-三异丙基硅乙炔-脱氧胞苷，抽冲三次，抽气30min，进行氮气保护。加入10mL超干二氯甲烷，冰水浴(-15～10℃)下快速依次加入100μL DIPEA(N,N-二异丙基乙胺)和100μLCEP-Cl(2-氰乙基N,N-二异丙基氯代亚磷酰胺)；即碱基5号位三异丙基硅乙炔修饰的脱氧胞苷、N,N-二异丙基乙胺与2-氰乙基N,N-二异丙基氯代亚磷酰胺的摩尔比具体为1:2:1.7。TLC板监测反应，反应时长最佳为3h，反应接近完全。反应时间过长，反而会降低产率。后处理：加入10mL二氯甲烷，用10mL5％NaHCO₃水溶液快速洗涤3次，10mL饱和食盐水快速洗涤2次，低温真空旋蒸去除溶剂，得到粗产物，抽冲三次，氮气保护，冷藏3-5h(具体可为3h)。硅胶柱预处理：柱子3.5cm×6cm，先用石油醚淋洗硅胶柱，然后用含0.02％Et₃N的石油醚淋洗硅胶柱，再用石油醚淋洗硅胶柱，密封，冷藏7-8h(具体为7h)。将预先冷藏的粗产物拌硅胶上样。由于产物易氧化、易分解变质，所以对洗脱剂的梯度要求更严格。洗脱剂：石油醚冲柱；石油醚+0.05％Et₃N冲柱，灯光照射硅胶柱，可观测白色固体硅胶层；然后用石油醚：三氯甲烷＝1:1含0.05％Et₃N冲柱，白色固体硅胶层向下移动；最后用三氯甲烷+0.05％Et₃N冲产物。低温真空旋蒸去除溶剂，得到白色泡沫状固体产物0.12g，产率47.4％。产物经质谱和核磁表征得到证实。这样的反应条件和快速过柱分离法得到亚磷酰胺单体可作为DNA固相合成的原料。³¹P NMR(CDCl₃,400MHz)δ:148.18,148.91；MS(ESI-MALDI),理论值[M]951.47,C₅₂H₇₀N₅O₈PSi；测量值[M+Na]⁺974.48201。

实施例5、

为证明本发明三异丙基硅乙炔修饰的脱氧胞苷亚磷酰胺单体中炔基的端基修饰基团三异丙基硅基的引入使C≡C伸缩振动强度得到很大增强且炔基可作为红外光谱结构探针，以5-三异丙基硅乙炔-脱氧胞苷(简称5-TIPSE-dC)和5-乙炔-脱氧胞苷(简称5-E-dC)为例，同实验条件下采集两种化合物的红外吸收光谱。因为在寡核苷酸片段采用三异丙基硅乙炔修饰的脱氧胞苷亚磷酰胺单体通过本领域公知方法合成时，三异丙基硅乙炔修饰的脱氧胞苷亚磷酰胺单体的5’端基保护基、3’端基保护基和氨基保护基是被去除的，所以这里以不带保护基的5-TIPSE-dC和5-E-dC为例，采集其红外吸收光谱。以下为5-TIPSE-dC和5-E-dC两种分子的结构式。

其中，5-三异丙基硅乙炔-脱氧胞苷(简称5-TIPSE-dC)的合成如下：

在100ml三口瓶中，投入0.5g 5-I-脱氧胞苷，加入0.055g CuI，加入0.246g[Pd(pph₃)₄]，抽冲三次，抽气时间约30min，进行氮气保护；加入20ml超干DMF，鼓泡30min，除去溶剂中残余氧气。用注射器加入0.531ml Et₃N和0.794ml三异丙基硅乙炔，室温(25℃)下反应。TLC板监测反应，24h反应接近完全。停止反应，真空旋蒸去除溶剂，得到粗产物。经二氯甲烷/甲醇(梯度，v:v，40:1～30:1～25:1～20:1)硅胶柱层析分离得到浅黄色泡沫状固体，干燥，得到产物0.35g，产率61.1％。

¹H-NMR(DMSO-d6,300MHz)δ:1.08(m,18H,6×CH₃),1.24(m,3H,3×CH),2.01-2.21(m,2H,2’),3.53-3.64(m,2H,H-5’),3.78-3.79(m,1H.H-4’),4.20-4.21(m,1H,H-3’),5.03-5.05(t,J＝3.00Hz,1H,H-1’),5.21-5.22(d,J＝3.00Hz,3’-OH),6.08(m,1H,5’-OH),7.91(bs,1H,NH),8.29(s,1H,H-6).MS(ESI-MALDI),理论值[M]407.22,C₂₀H₃₃N₃O₄Si；测量值[M+Na]⁺430.21294。

如图2所示是上述两种化合物在C≡C伸缩振动区域的FTIR光谱，图2中5-TIPSE-dC的C≡C伸缩振动强度约为5-E-dC的C≡C伸缩振动强度的10倍，说明三异丙基硅基的引入使C≡C伸缩振动强度得到很大增强，且5-TIPSE-dC的C≡C键在稳态红外光谱中有很好的响应信号，因此，说明本发明三异丙基硅乙炔修饰的脱氧胞苷亚磷酰胺单体的C≡C键可作为稳态与瞬态红外光谱结构探针。