阅读说明：本技术 一种中药蝉蜕微生态冻干粉的制备方法与应用 (Preparation method and application of traditional Chinese medicine cicada slough micro-ecological freeze-dried powder ) 是由 陈红专 张静 于 2020-07-20 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种中药蝉蜕微生态冻干粉的制备方法与应用,属于家禽养殖技术领域。本方法是首先将蝉蜕洗净、烘干,粉碎成粗粉,微波灭菌后加纯水超声波提取得蝉蜕提取液；在蛭弧菌液体培养基中,将鸡源性J4蛭弧菌菌种进行接种并培养得蛭弧菌液；然后将蛭弧菌液和蝉蜕提取液进行缓慢搅拌,混合均匀得混合液；再将混合液通入无菌空气保温发酵得发酵液；之后发酵液低温浓缩；再之后采用400目不锈钢筛网过滤,除去沉淀物；最后超滤后冷冻干燥,得冻干粉。本发明作为添加剂加入饮用水或鸡饲料中进行投喂,应用于家禽腺胃炎、肌胃炎和肠炎的预防和治疗,具有良好效果,可迅速促进肠绒毛的生长,缓解饲料便症状,修复溃疡,肿胀、开胃增食。(The invention discloses a preparation method and application of traditional Chinese medicine periostracum cicadae micro-ecological freeze-dried powder, and belongs to the technical field of poultry breeding. The method comprises the steps of firstly, cleaning and drying the cicada slough, crushing the cicada slough into coarse powder, sterilizing the coarse powder by microwave, adding pure water, and performing ultrasonic extraction to obtain a cicada slough extracting solution; inoculating and culturing a chicken-derived J4 bdellovibrio bacteriovorus strain in a bdellovibrio bacteriovorus liquid culture medium to obtain a bdellovibrio bacteriovorus liquid; then slowly stirring the bdellovibrio bacteriovorus liquid and the cicada slough extracting solution, and uniformly mixing to obtain a mixed solution; then introducing sterile air into the mixed solution, and fermenting under heat preservation to obtain fermentation liquor; then the fermentation liquor is concentrated at low temperature; then filtering by adopting a 400-mesh stainless steel screen to remove precipitates; finally, freeze drying is carried out after ultrafiltration to obtain freeze-dried powder. The invention is used as an additive to be added into drinking water or chicken feed for feeding, is applied to the prevention and treatment of proventriculitis, myogastritis and enteritis of poultry, has good effect, can quickly promote the growth of intestinal villus, relieve the symptoms of feed stool, repair ulcer, swell, open stomach and increase appetite.)

一种中药蝉蜕微生态冻干粉的制备方法与应用

技术领域

本发明属于家禽养殖技术领域，具体的说，涉及一种中药蝉蜕微生态冻干粉的制备方法与应用。

背景技术

随着规模化禽类饲养业的大发展，禽类以消化系统机能紊乱、代谢异常、生长严重受阻，同群个体体重差异高达80％，呈现“多代同堂”的现象，无均匀度可言，患病群体与标准日龄值体重相差较大的慢性消耗性疾病—腺胃炎、肌胃炎和肠炎呈现暴发和大流行趋势，给生产效益造成了极大的影响。

家禽患腺胃炎、肌胃炎和肠炎的临床特点表现为：羽毛凌乱、消瘦、呆立、呆滞不动、萎靡不振、喜靠墙、不合群、采食饮水不积极，***消化不完全的饲料样变(有完整的玉米粒或玉米粉碎的粒状物)兼有长细条样变。通过禽畜医学研究表明，腺、肌胃炎发生的原因主要包括一下几个方面：

1、禽类无牙齿。口腔、食道、嗉囊、肌胃、腺胃、十二指肠及空、回肠、盲肠、泄殖腔构成禽的整个消化系统。

小鸡入舍后，食用饲料，其中的坚硬粒状物，如玉米粒在进入口腔、食道、嗉囊对其所接触的黏膜面易造成损伤(刺伤或划伤)也叫物理性损伤、机械性损伤。这些部位易造成各种感染，使感染部位出现糜烂和损伤！

2、饲料中的致霉因素，如黄曲霉菌素、烟曲霉菌素等各种真菌在损伤处聚集、繁衍，进而使损伤扩大化。

3、肠毒综合征：

(1)急性损伤：对禽类寄生虫病一般客户都不太注意或根本意识不到，网床平养或笼养的肉鸡、蛋鸡，粪便与鸡群隔离，则普遍认为，球虫病不会发生。粪便出现的白色石灰样、土黄色、灰色、酱油色，甚至出现胡萝卜样或西红柿样变还不自知，直到出现拉鲜血色变，同群中个体肥大的鸡出现死亡时才认为发了球虫病，这时才想起治疗，常常引起球虫病的暴发，而盲肠球虫造成的一般都是暴发性球虫病，且易造成重大损失。

(2)慢性损伤：慢性损伤则是隐性和不易察觉的！慢性小肠球虫是比较隐蔽的，感染了小肠球虫，虫卵在肠粘膜呈快速增殖和繁衍，耗费大量的氧，导致小肠黏膜细胞产生大量的乳液，使肠道PH值降低，肠道PH值的改变使肠道有益菌大量减少，有害菌大量繁殖，球虫与有害菌相互协同，使肠粘膜细胞损伤凋落进而死亡。死亡细胞碎片滋生大量有害菌使损伤更为严重，肠炎和肠溃疡发生，肠道综合征加剧，胰腺分泌胰液能力下降，各种消化功能减少或钝化，致消化能力下降，饲料营养在小肠中的吸收不良。

4、病毒与细菌感染：

(1)病毒感染：

因四时节气，气温变化大，舍温调整不合理。特别是秋末冬初、冬末春初这些季节交替的时段，畜禽易发生病毒性感染，许多病毒的感染都可能成为肠毒综合征及肌、腺胃炎发生的诱因之一，其中以正黏、副黏、冠状病毒、星状病毒、轮状病毒为代表最常见，由于病毒引起损害消化道吸收功能，感染的幼禽典型症状为发育不良，生长停滞及腹泻等，病毒性感染时一般不易造成重大损失，但当合并为继发感染时，易造成较大或重大损失(如禽流感)。

(2)细菌感染：

细菌能引起动物的肠毒，它是肠毒综合征的病因之一，一些细菌性疾病也是消化道或呼吸道中的常在菌，如鼻炎杆菌、大肠杆菌、副嗜血杆菌、链球菌等。常见的致病菌以梭菌为主，而不同的亚型也会引起不同的临床症状，其中鹑梭菌引起溃疡性肠炎，A型或C型魏氏梭菌引起坏死性肠炎，腐败梭菌引起坏疽性皮炎，而肉毒梭菌则引起全身麻痹性毒素中毒症状，如瘫痪不起。细菌通过刺激肠道黏膜，使肠道蠕动加快加强，消化液分泌***增多，饲料通过消化道停留的时间缩短，导致消化不良，营养物质吸收差。

目前，针对未患腺胃炎、肌胃炎和肠炎的家禽，通常以预防为主，实施切实可行的饲养管理及消毒制度，减少各种应激因素，如温度不均匀，密度、湿度过大，突然减料、增料等。水槽、料槽、饮水器应定期清洗消毒，防止病从口入。饲料做好防潮、防霉、防鼠咬等，减少对肠道黏膜的损害刺激。给予足量的维生素A、维生素D3、维生素E和微量元素硒，可以维护上皮黏膜细胞的完整性和对损伤细胞的及时修复。

对于患病家禽，常通过家禽食入的饲料、饮水中添加高山粤威龙散、免增粤威龙散抗应激、抗过敏、提高畜禽免疫力。但当家禽患病时，并不能及时对患病家禽进行有效治疗，及时止损，影响家禽的正常生长，对养殖企业常造成极大的经济损失。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种中药蝉蜕微生态冻干粉的制备方法，基于腺胃炎、肌胃炎和肠炎患病家禽病理、病因的研究与分析，制备后的中药蝉蜕微生态冻干粉作为添加剂加入饮用水或者鸡饲料中，用于治疗患腺胃炎、肌胃炎和肠炎的家禽，可迅速促进家禽肠绒毛的生长，缓解饲料便症状，修复溃疡，肿胀、开胃增食，使得患腺胃炎、肌胃炎和肠炎的家禽得到及时有效的治疗。

为实现上述目的，本发明所采用的技术方案如下：

一种中药蝉蜕微生态冻干粉的制备方法，包括以下步骤：

步骤一 将蝉蜕洗净、烘干，粉碎成粗粉，微波灭菌后加5～30倍纯水超声波提取，滤液pH值调至5.7～6.5，得蝉蜕提取液；

步骤二 在蛭弧菌液体培养基中，将鸡源性J4蛭弧菌菌种进行接种并培养，得蛭弧菌液；

步骤三 将蛭弧菌液和蝉蜕提取液进行缓慢搅拌，混合均匀，得混合液；

步骤四 将混合液通入无菌空气5分钟，然后保温发酵，完成发酵过程，得发酵液；

步骤五 发酵液低温浓缩，将其进行低温浓缩至相对密度为1.05～1.10之间；

步骤六 过滤，采用400目不锈钢筛网过滤，除去沉淀物；

步骤七 超滤后冷冻干燥，得冻干粉。

进一步的，步骤一中超声波提取条件为：超声功率60～80W/L，超声频率35～40KHz：超声温度25～40℃，超声时间25～35min。

进一步的，步骤二中培养条件为：前期120转/分钟震荡培养24小时，后期恒温32℃培养48小时。

进一步的，步骤三中蛭弧菌液与蝉蜕提取液混合的重量比为0.005～0.01：1。

进一步的，步骤四中保温发酵条件为：在32～35℃环境中保温发酵24小时。

进一步的，步骤五中低温浓缩条件为：采用低温膜浓缩方法，浓缩时温度小于40℃。

本发明还公开了一种中药蝉蜕微生态冻干粉的应用，用于家禽腺胃炎、肌胃炎和肠炎的预防和治疗。

进一步的，其用法用量为：作为添加剂加入饮用水或者鸡饲料中搅拌均匀，每100g兑水100L或拌料100kg，连用5天。

本发明由于采用了上述的方法和工艺参数，其与现有技术相比，所取得的技术进步在于：中药蝉蜕主要成分含角蛋白、24种氨基酸和大量的甲壳质、壳聚糖。通过超声提取后进行蛭弧菌接种，一方面，蛭弧菌在蝉蜕提取液中得到营养能迅速生长繁殖，另一方面，蛭弧菌能有效分解蝉蜕蛋白质与糖，得到多种易吸收的氨基酸，菌体蛋白，脂肪酸及维生素等，能促进动物的生长发育和新陈代谢，促进伤口愈合，加速血红蛋白的合成。中药蝉蜕经过微生物发酵处理后，产生新的作用与功效，喂食家禽后不仅能增强免疫力，而且治疗鸡腺肌胃炎、肠炎等方面有独特的效果。

中药蝉蜕具有解热、镇静、镇痛、抗惊厥等作用；蛭弧菌菌种是由南京农业大学提供鸡源性J4蛭弧菌(有效活菌数≥5.0×10⁵cfu/g)。经中药蝉蜕微生物发酵后所得中药蝉蜕微生态冻干粉中有效活菌数总数≥1.0×10⁴cfu/g,氨基酸含量≥12.0％。蛭弧菌寄生于其他细菌(也可无寄主而生存)并能导致其裂解的一类细菌，对伤寒杆菌、副伤寒杆菌、痢疾杆菌等病菌有很强的裂解作用。两者通过一定条件下发酵增殖后，能提高蛭弧菌浓度与中药疗效，在治疗鸡腺肌胃炎、肠炎等方面有良好效果，临床试验结果表明总有效率达97.3％。

综上，制备后的中药蝉蜕微生态冻干粉作为添加剂加入饮用水或者鸡饲料中搅拌均匀，用于治疗患腺胃炎、肌胃炎和肠炎的家禽，可迅速促进家禽肠绒毛的生长，缓解饲料便症状，修复溃疡，肿胀、开胃增食，使得患腺胃炎、肌胃炎和肠炎的家禽得到及时有效的治疗，适用于家禽养殖技术领域。

具体实施方式

以下实施例详细说明了本发明。本发明所使用的各种原料及各项设备均为常规市售产品，均能够通过市场购买直接获得。

在以下实施例的描述中，为了说明而不是为了限定，提出了诸如特定工艺参数之类的具体细节，以便透彻理解本申请实施例。然而，本领域的技术人员应当清楚，在没有这些具体细节的其它实施例中也可以实现本申请。在其它情况中，省略对众所周知的参数选择以及加工方法的详细说明，以免不必要的细节妨碍本申请的描述。

应当理解，当在本申请说明书和所附权利要求书中使用时，术语“包括”指示所描述特征、整体、步骤、操作、元素和/或组件的存在，但并不排除一个或多个其它特征、整体、步骤、操作、元素和/或其集合的存在或添加。

还应当理解，在本申请说明书和所附权利要求书中使用的术语“和/或”是指相关联列出的项中的一个或多个的任何组合以及所有可能组合，并且包括这些组合。

如在本申请说明书和所附权利要求书中所使用的那样，术语“如果”可以依据上下文被解释为“当...时”或“一旦”或“响应于确定”或“响应于检测到”。类似地，短语“如果确定”或“如果检测到[所描述条件或事件]”可以依据上下文被解释为意指“一旦确定”或“响应于确定”或“一旦检测到[所描述条件或事件]”或“响应于检测到[所描述条件或事件]”。

另外，在本申请说明书和所附权利要求书的描述中，术语“第一”、“第二”、“第三”等仅用于区分描述，而不能理解为指示或暗示相对重要性。

在本申请说明书中描述的参考“一个实施例”或“一些实施例”等意味着在本申请的一个或多个实施例中包括结合该实施例描述的特定特征或特点。由此，在本说明书中的不同之处出现的语句“在一个实施例中”、“在一些实施例中”、“在其他一些实施例中”、“在另外一些实施例中”等不是必然都参考相同的实施例，而是意味着“一个或多个但不是所有的实施例”，除非是以其他方式另外特别强调。术语“包括”、“包含”、“具有”及它们的变形都意味着“包括但不限于”，除非是以其他方式另外特别强调。

实施例1

一种中药蝉蜕微生态冻干粉的制备方法，包括以下步骤：

步骤一 将蝉蜕洗净、烘干，粉碎成粗粉，微波灭菌后加5～30倍纯水超声波提取，滤液pH值调至5.7～6.5，步骤一中超声波提取条件为：超声功率60～80W/L，超声频率35～40KHz，超声温度25～40℃，超声时间25～35min，得蝉蜕提取液；

步骤二 在蛭弧菌液体培养基中，将鸡源性J4蛭弧菌菌种进行接种并培养，前期120转/分钟震荡培养24小时，后期恒温32℃培养48小时，得蛭弧菌液；

步骤三 将蛭弧菌液和蝉蜕提取液进行缓慢搅拌，蛭弧菌液与蝉蜕提取液混合的重量比为0.005～0.01：1，混合均匀，得混合液；

步骤四 将混合液通入无菌空气5分钟，然后保温发酵，在32～35℃环境中保温发酵24小时，完成发酵过程，得发酵液；

步骤五 发酵液低温浓缩，采用低温膜浓缩方法，浓缩时温度小于40℃，将其进行低温浓缩至相对密度为1.05～1.10之间；

步骤六 过滤，采用400目不锈钢筛网过滤，除去沉淀物；

步骤七 超滤后冷冻干燥，得冻干粉。

实施例2

一种中药蝉蜕微生态冻干粉的应用，将实施例1中制备的一种中药蝉蜕微生态冻干粉作为添加剂加入饮用水或者鸡饲料中搅拌均匀，用于家禽腺胃炎、肌胃炎和肠炎的预防和治疗。其用法用量为：每100g兑水100L或拌料100kg，连用5天。

实施例3安全性试验

取90只健康的小白鼠分为3组，每组30只，一组作为空白组，除正常喂食外，喂养普通饮用水；一组作为试验组1，除正常喂食外，还喂养添加了蛭弧菌液和蝉蜕提取液的未发酵的混合液的饮用水，按实施例2配比应用；另一组作为试验组2，除正常喂食外，喂养添加了实施例1中制得的中药蝉蜕微生态冻干粉的饮用水，按实施例2配比应用；喂养天数为5天，连续观察5天，并记录每组小白鼠的健康状况、病毒反应及死亡数量，并对各组小白鼠血清生化指标的测定数据进行分析，血液谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)检测结果见表1：

表1：小白鼠血清生化指标的测定结果对照表：

试验结果表明，试验组1与空白组小白鼠比较无异常状况发生，无死亡，其全身状况正常，活跃度无变化，饮食量无区别，粪便消化无区别；试验组2相对空白组小白鼠更加活跃，无死亡，饮食量加大，且粪便消化良好，体重有所增长，毛色更加鲜亮，无中毒迹象。临床试验表明，蛭弧菌液和蝉蜕提取液的搅拌均匀但未曾保温发酵的混合液无毒副作用；实施例1中制得的药蝉蜕微生态冻干粉无毒副作用，与对照组相比，实验组1小白鼠血清中ALT、AST、Cr、BUN基本无变化，实验组2小白鼠血清中ALT、AST、Cr、BUN略有增高，但差异都不显著(P＞0.05)，用药安全。

实施例4对比试验

取饮食正常、身体健康的蛋鸡300只分为三组，每组100只，一组作为空白组，除正常喂食外，喂养普通饮用水；一组作为试验组1，除正常喂食外，还喂养添加了蛭弧菌液和蝉蜕提取液的搅拌均匀但未曾保温发酵的混合液的饮用水，按实施例2配比应用；另一组作为试验组2，除正常喂食外，喂养添加了实施例1中制备的中药蝉蜕微生态冻干粉的饮用水，按实施例2配比应用；喂养天数为5天，连续观察5天，并记录每组蛋鸡的健康状况及死亡数量如下表2，测定各组蛋鸡血清免疫球蛋白，记录情况如下表3：

表2：对比试验中蛋鸡健康状及死亡数量对照表：

试验结果表明：试验组1与空白组蛋鸡比较，其全身状况正常，活跃度无变化，饮食及体重无变化，粪便消化无异常，毛色无异常变化；试验组2相对空白组蛋鸡比较，其全身状况有明显改善，更加活跃，饮食量加大，且粪便消化良好，毛色更加鲜亮。临床试验表明蛭弧菌液和蝉蜕提取液的搅拌均匀但未曾保温发酵的混合液对蛋鸡无毒副作用，亦无身体状况方面的促进作用；实施例1中制得的中药蝉蜕微生态冻干粉无毒副作用，用药安全，且对有蛋鸡的健康状况有促进作用。

表3：蛋鸡血清免疫球蛋白测定结果对照表：

由表3数据可知，相对于空白组，试验组1的IgG、IgA和IgM浓度基本无变化，试验组2的IgG、IgA和IgM浓度均有所提高，提高幅度分别为11.5％、11.0％和8.3％。综合以上各项指标，能显著增强肉鸡的免疫功能。

实施例5防治效果试验

取患腺胃炎、肌胃炎和肠炎的蛋鸡300只分为三组，每组100只，一组作为空白组，除正常喂食外，喂养普通饮用水；一组作为试验组1，除正常喂食外，还喂养添加了蛭弧菌液和蝉蜕提取液的搅拌均匀但未曾保温发酵的混合液的饮用水，按实施例2配比应用；另一组作为试验组2，除正常喂食外，喂养添加了实施例1中制备的中药蝉蜕微生态冻干粉的饮用水，按实施例2配比应用；喂养天数为5天，连续观察5天，并记录每组蛋鸡的健康状况及死亡数量，具体记录情况如下表1：

表4：防治效果试验中蛋鸡健康状及死亡数量对照表：

实验结果表明，试验组1与空白组患病蛋鸡比较，其全身状况正常，活跃度无变化，饮食量无明显改善，体型消瘦无改善，粪便消化不良情况无明显改善，羽毛凌乱无明显改善；试验组2相对空白组患病蛋鸡相比较，更加活跃，饮食量加大，且粪便消化良好，体重有所增长，体型逐渐恢复，毛色更加鲜亮，随之而来的产蛋率也相应提高，身体状况得到良好改善。临床试验表明蛭弧菌液和蝉蜕提取液的搅拌均匀但未曾保温发酵的混合液对患病蛋鸡无毒副作用，亦无身体健康状况方面明显的促进作用，不能对患腺胃炎、肌胃炎和肠炎起到治疗作用；实施例1中制得的中药蝉蜕微生态冻干粉无毒副作用，用药安全，经过保温发酵后，对有患病蛋鸡的健康状况有明显的促进作用，有意想不到的良好效果，其精神状态得到明显改善，饮食和体型得到明显改善，五日后的粪便中已经无消化不良的带鸡饲料的粪便，羽毛鲜亮，死亡率明显降低，且产蛋率随之提高，后逐渐恢复正常水平，对三组蛋鸡进行解剖检查，试验组2中蛋鸡的肌胃溃疡面积及其溃烂情况明显少于对照组和试验组1，并趋与正常，本发明的中药蝉蜕微生态冻干粉对患腺胃炎、肌胃炎和肠炎的蛋鸡有良好的治疗效果。

实施例6

东北辽宁养殖户养白羽肉鸡2万只，上鸡时发现雏鸡均匀度不整齐，弱雏很多，经兽医判定，为初期的腺肌胃炎症状，于第二天开始饮本品，每天集中饮水2～4小时，连用了6天，用完后反馈信息是均匀度调理的很整齐，采食量和饲料转化率高。

实施例7

河北保定养殖户养黄羽肉鸡6万只，在养殖第15天发现肉鸡每天死亡超过100只，而且生长不良、消瘦、整齐度差，粪便过料等外观症状以及腺胃肿大如球状，腺胃粘膜溃疡、脱落、肌胃角质层和肌胃粘膜溃疡、糜烂，十二指肠较细、浆膜面有出血点等解剖症状，经兽医诊断为腺肌胃炎与肠炎混合感染，开始饮用本品，每天集中饮水4-6小时，连用了5天。病情得以控制，每天死亡在个位数，采食量明显增加，无过料现象，体重增加明显，解剖腺肌胃角质层增厚，无溃疡症状，肠壁增厚。

综上所述：通过实施例4-7表明，本发明制备后的中药蝉蜕微生态冻干粉作为添加剂加入饮用水或者鸡饲料中搅拌均匀，用于治疗患腺胃炎、肌胃炎和肠炎的家禽有良好的效果，可迅速促进家禽肠绒毛的生长，缓解饲料便症状，修复溃疡，肿胀、开胃增食，使得患腺胃炎、肌胃炎和肠炎的家禽得到及时有效的治疗，适用于家禽养殖技术领域。

最后应说明的是：以上所述实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围，均应包含在本发明的保护范围之内。