阅读说明：本技术 一种创面敷料及其制备的方法 (Wound dressing and preparation method thereof ) 是由 不公告发明人 于 2020-06-10 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种创面敷料及其制备的方法,其创面敷料,包括如下重量份数的原料,珍珠贝外套膜酶解物10-15份、羧甲基纤维素钠0.5-2份、藻酸盐2-5份、丙三醇3-8份、异戊二醇0.3-1.5份、水40-60份,其创面敷料的制备方法,包括以下步骤,S1,首先制备珍珠贝外套膜酶解物,以珍珠贝外套膜为原料。本发明利用珍珠贝外套膜酶解物敷料,具有良好生物相容性,形成特异性和稳定性的生物蛋白仿生黏膜,提供创面愈合营养物质,敷料提供适度湿润环境,促进生长因子释放,刺激细胞增殖,提高表皮细胞的再生能力和细胞移动,促进创面愈合和腔道创面组织修复,适用于人体自然腔道和皮肤的创面修复。(The invention discloses a wound dressing and a preparation method thereof, wherein the wound dressing comprises the following raw materials, by weight, 10-15 parts of pearl oyster mantle zymolyte, 0.5-2 parts of sodium carboxymethylcellulose, 2-5 parts of alginate, 3-8 parts of glycerol, 0.3-1.5 parts of isoprene glycol and 40-60 parts of water. The pearl oyster mantle zymolyte dressing has good biocompatibility, forms specific and stable biological protein bionic mucous membrane, provides wound healing nutrient substances, provides a moderate humid environment, promotes the release of growth factors, stimulates the proliferation of cells, improves the regeneration capacity and cell movement of epidermal cells, promotes the healing of wounds and the repair of wound tissues of cavitary tracts, and is suitable for the repair of the wounds of natural cavitary tracts and skin of a human body.)

一种创面敷料及其制备的方法

技术领域

本发明涉及医用生物材料技术领域，尤其涉及一种创面敷料及其制备的方法。

背景技术

创面修复是指由于致伤因子的作用造成组织缺失后，局部组织通过再生、修复、重建，进行修补的一系列病理生理过程。机体对各种有害因素作用所致的组织细胞损伤的固有防御性适应性反应。

当创面浅表、组织细胞丢失轻微，则可由同种组织细胞***增生来补充，使之具有同样的结构和功能，形成完全性病理性再生。但当组织细胞缺失较多时，则机体修复时常由异体材料替代组织，使之失去原有组织的结构和功能，形成不完全性病理性再生。在目前创面修复过程，临床上多数是这种类型的再生。

替代组织再生时，需要提供创面修复的良好环境。由创面敷料潜在的亲水性能，吸水保湿性用于吸收创面渗出液或向创面排出水分，为伤口提供湿润的愈合环境，保护促进肉芽组织生长和促进上皮细胞爬行。敷料成膜性，在创面表面形成保护层，起物理屏障作用。因此创面修复创面敷料，成为目前临床使用中的优先选择材料。现有创面敷料产品，主要由胶原、壳聚糖、透明质酸、藻酸盐类等材料制备，具有止血促凝作用，部分诱导多种细胞增殖分化，缺点在于稳定性较差和生物活性物质能力不强等。

通过查询国家医疗器械产品数据库，暂未有海洋贝类源提取物的活性创面敷料产品，可促进创面愈合性能，与受伤的组织有更好的相容性，并可溶于皮肤纤维母细胞的细胞培养介质，利于促进伤口的愈合。

采用沿海地区培育珍珠的主要海洋贝种，通过插核珍珠，由外套膜的细胞增殖形成珍珠囊，分泌珍珠质而形成，珍珠贝外套膜在珍珠形成中起着重要的作用。目前珍珠贝肉经采珠后多被废弃，经济附加值不高。珍珠贝外套膜主要营养成分为多蛋白质(多为胶原蛋白)，因此开发利用珍珠贝外套膜功能非常必要。

发明内容

基于背景技术存在的技术问题，本发明提出了一种创面敷料及其制备的方法。

本发明提出的一种创面敷料，所述创面敷料包括如下重量份数的原料：珍珠贝外套膜酶解物10-15份、羧甲基纤维素钠0.5-2份、藻酸盐2-5份、丙三醇3-8份、异戊二醇0.3-1.5份、水40-60份。

优选地，按照重量份数，包括以下组分，珍珠贝外套膜酶解物15份、羧甲基纤维素钠2份、藻酸盐5份、丙三醇8份、异戊二醇1.5份。

优选地，按照重量份数，包括以下组分，珍珠贝外套膜酶解物12份、羧甲基纤维素钠2份、藻酸盐2份、丙三醇3份、异戊二醇1.5份。

优选地，按照重量份数，包括以下组分，珍珠贝外套膜酶解物10份、羧甲基纤维素钠0.5份、藻酸盐5份、丙三醇8份、异戊二醇0.3份。

优选地，一种创面敷料的制备方法是按照以下步骤进行的：

S1：首先制备珍珠贝外套膜酶解物，以珍珠贝外套膜为原料，按1:4加水，调节到酶最适pH，加酶量按3500-5800U/g蛋白添加，在42-50℃下进行酶解反应，200r/min搅拌转速，酶解2-4h；

S2：取S1中搅拌液的上层清液，加入一定量的NaCl静置过滤，置于透析袋MD34(1000)透析除盐，纯化12h；

S3：将S2中纯化的珍珠贝外套膜酶解物，真空冷冻干燥备用；

S4：将称量的羧甲基纤维素钠，藻酸盐、丙三醇、异戊二醇先后加入水中，搅拌分散均匀，再加入三乙醇胺作为调节剂调节pH至5.0-7.0形成基底溶液；

S5：将S4基底溶液升温液体至45℃，加入S1-S3所制备的珍珠贝外套膜酶解物溶解即得创面敷料。

所述S1-S3所制备珍珠贝外套膜酶解物的水解度为15.2％-19.6％，所述S1-S3所制备珍珠贝外套膜酶解物的蛋白含量为0.576-0.683g/g，所述S2中纯化的NaCl溶液为0.1-0.3mol/l。

本发明中的有益效果为：

1.本发明中，获得的珍珠贝外套膜酶解物敷料，采用酶法制备珍珠贝外套膜酶解产物，具有高活性、特异性和稳定性的生物活性肽，珍珠贝外套膜主要由蛋白质组成，且其胶原蛋白所占比例最高，类型是与鱼皮、陆源胶原蛋白所不同类的V型，具有不同的功能活性，作为海洋贝类源的分子仿生材料制备，为创面愈合提供营养物质；

2.本发明中，由于藻酸盐的亲水性能，与受伤的组织有更好的相容性，并可溶于皮肤纤维母细胞的细胞培养介质，利于促进伤口的愈合，丙三醇具有吸水保湿性，用于吸收创面渗出液或向创面排出水分，为伤口提供湿润的愈合环境，保护促进肉芽组织生长和促进上皮细胞爬行，羧甲基纤维素钠的成膜性，在创面表面形成保护层，起物理屏障作用；

3.本发明中，珍珠贝外套膜酶解产物可抑制疤痕瘤纤维母细胞I型骨胶原的分泌，从而降低瘢痕瘤纤维母细胞中I型和III型骨胶原的比例，而对正常的皮肤纤维母细胞中I型和III型骨胶原的分泌无影响，具有促进伤口愈合和减少疤痕的优异性能。

附图说明

图1为本发明提出的一种创面敷料及其制备的方法的细胞毒性试样表格图；

图2为本发明提出的一种创面敷料及其制备的方法的细胞毒性测试结果表格图；

图3为本发明提出的一种创面敷料及其制备的方法的生殖道腔道创面刺激试验结果表格图；

图4为本发明提出的一种创面敷料及其制备的方法的敷料使用效果对比图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。

实施例1

本发明提供了一种创面敷料，其按照重量份数，包括以下组分，珍珠贝外套膜酶解物15份、羧甲基纤维素钠2份、藻酸盐5份、丙三醇8份、异戊二醇1.5份。

本发明还提供了一种创面敷料的制备方法，创面敷料的制备方法是按照以下步骤进行的：先制备制备珍珠贝外套膜酶解物，以珠母贝外套膜为原料，按1:4加水，调节到酶最适pH，加酶量按3500U/g蛋白添加，在42℃下进行酶解反应，搅拌器的转速设为200r/min酶解2h；取上层清液，加入0.3mol/l NaCl静置过滤，置于透析袋MD34(1000)透析除盐，纯化12h，将纯化后的水解度为15.2％，蛋白含量为0.576g/g的酶解物进行真空冷冻干燥备用。

将称量的羧甲基纤维素钠2份，藻酸盐5份、丙三醇8份、异戊二醇1.5份先后加入水中，搅拌分散均匀，再加入三乙醇胺调节剂调节pH至5.0，升温至45℃，加入所制备的珍珠贝外套膜酶解物15份，溶解即得创面敷料A1。

实施例2

本发明提供了一种创面敷料，其按照重量份数，包括以下组分，珍珠贝外套膜酶解物12份、羧甲基纤维素钠2份、藻酸盐2份、丙三醇3份、异戊二醇1.5份。

本发明还提供了一种创面敷料的制备方法，创面敷料的制备方法是按照以下步骤进行的：先制备制备珍珠贝外套膜酶解物，以珠母贝外套膜为原料，按1:4加水，调节到酶最适pH，加酶量按4000U/g蛋白添加，在48℃下进行酶解反应，搅拌器的转速设为200r/min酶解3h；取上层清液，加入0.2mol/l NaCl静置过滤，置于透析袋MD34(1000)透析除盐，纯化12h，纯化后的水解度为16.4％，蛋白含量为0.623g/g酶解物进行真空冷冻干燥备用。

将称量的羧甲基纤维素钠2份，藻酸盐2份、丙三醇3份、异戊二醇1.5份先后加入水中，搅拌分散均匀，再加入三乙醇胺调节剂调节pH至5.0。升温至45℃，加入所制备的珍珠贝外套膜酶解物12份，溶解即得创面敷料A2。

实施例3

本发明提供了一种创面敷料，其按照重量份数，包括以下组分，珍珠贝外套膜酶解物10份、羧甲基纤维素钠0.5份、藻酸盐5份、丙三醇8份、异戊二醇0.3份。

本发明还提供了一种创面敷料的制备方法，创面敷料的制备方法是按照以下步骤进行的：先制备制备珍珠贝外套膜酶解物，以珠母贝外套膜为原料，按1:4加水，调节到酶最适pH，加酶量按5800U/g蛋白添加，在50℃下进行酶解反应，搅拌器的转速设为200r/min酶解4h；取上层清液，加入0.1mol/l NaCl静置过滤，置于透析袋MD34(1000)透析除盐，纯化12h，纯化后的水解度为19.6％，蛋白含量为0.683g/g的酶解物进行真空冷冻干燥备用。

将称量的羧甲基纤维素钠0.5份，藻酸盐5份、丙三醇8份、异戊二醇0.3份先后加入水中，搅拌分散均匀，再加入三乙醇胺调节剂调节pH至5.0，升温至45℃，加入所制备的珍珠贝外套膜酶解物10份，溶解即得创面敷料A3。

相关测试

选取实施例1、2、3制备的珍珠贝外套膜酶解物创面敷料A1、A2、A3，进行以下试验。

(一)细胞毒性测试

将敷料试样A1、A2、A3，按照GB/T 16886.12的要求，每试样按体积1：1加生理盐水浸提。将材料置入浸提容器，浸提温度为37±1℃，浸提时间为48h。将浸提液用筛目为0.22μm的过滤器过滤除菌后，进行MTT法测试细胞毒性。

参照图1，得出细胞毒性试样，细胞相对空白的存活率均大于70％，表明三种创面敷料均不具有潜在的细胞毒性。试验样品50％与100％浸提液存活率均较高，不需重复试验。

敷料浸提液培养的成纤维细胞，细胞形态正常，贴壁生长良好，基本无圆缩、悬浮和死亡，细胞密度无明显减少，细胞生长也无受到抑制，各组细胞均表现出良好的生长状态。试样均无细胞毒性，符合国标对医用材料的细胞毒性要求。

(二)细胞毒性测试

取创面敷料试样A1、A2、A3，根据GB/T 16886.11《医疗器械生物学评价第11部分：全身毒性试验》标准中推荐的急性全身毒性试验要求开展敷料生物相容性评价。将20只小鼠，随机分成样品组和阴性对照组，每组5只。样品组和阴性对照组按50ml/kg的注射剂量自腹腔分别注入被测样品浸提液和阴性对照液，之后将动物返回各自的笼子里饲养。注射完毕后，观察小鼠即刻以及4h、24h、48h和72h观察试验组和对照组中动物的一般状态、毒性表现和死亡动物数，并在72h观察后记录动物体重。

参照图2，得出每只动物的观察结果，在72h观察期内，试验组动物反应不大于阴性对照组，没有出现动物死亡和毒性反应，体重均有增长，与阴性对照相比无任何差异见表2，说明三种试样无全身急性毒性反应。

(三)生殖道腔道创面刺激试验

新西兰雌性大白兔6只，体重1.8-2.2kg，对试验动物分别注入2ml对照生理盐水及试样样品。24h后采用气栓法处死动物，破腹取出完整生殖道，纵向切开，肉眼观察是否充血、水肿等表现。然后放入10％***溶液进行固定24h，选取生殖道两端和中央三个部位制片，HE染色，进行组织病理学检查，按《消毒技术规范》(2002版)***黏膜刺激反应评分标准表和强度分级表，对***黏膜刺激评分、强度进行评定。

参照图3，试验结果如下，试验动物生殖道腔道黏膜刺激反应的两组平均积分之差为0，依据《消毒技术规范》(2002)***黏膜刺激强度分级表，属无刺激作用。

由此可见，创面敷料在体外无明显的细胞毒性、无刺激性、组织相容性良好，体外酶解一个月后，其残留率10％以下。因此本发明制备的珍珠贝外套膜酶解物敷料具有良好的生物相容性，可作为创面促愈敷料，适用于人体自然腔道和皮肤创面修复。

(四)动物实验

将体质量18g左右的雄性小鼠60只，随机分为阴性对照组、胶原敷料阳性对照组和试样A3珍珠贝外套膜酶解物敷料给药组。腹腔注射10％水合氯醛麻醉小鼠，在其背部脱毛，制造直径约0.8cm的全皮层创伤模型，分笼单独饲养。给药组每天涂抹30mg质量浓度试样A3，阳性对照组每天涂抹30mg胶原敷料，阴性对照组不处理。隔天对创面观察，测量伤口大小，并记录结果。

每隔2d，测量创面直径大小1次，计算伤口愈合率：伤口愈合率＝(第0天-第n天)/第0天的伤口测量值×100％；瘢痕缩小率＝(第0天-第14天)/第0天的伤口测量值×100％。

参照图4，得到各组愈合情况，各实验组动物皆已结痂，无液体渗出，创面变化明显。第8天对照组伤口开始缩痂，创面呈暗红色，阳性对照组部分掉痂。给药组创面完全掉痂，呈肉红色新生皮肤。第10天对照组伤口结痂部分脱落，阴性对照组疤痕面积变化小，阳性对照组缩痂明显。给药组创面皮肤渐趋于正常皮肤。第12天各组皆已完全掉痂，并进一步缩痂。阳性对照组二次掉痂，给药组愈合处开始长出毛发。第14天对照组的多数伤口直径小于2mm，给药组伤口直径均为0mm。对照组创面呈现肉红色新生皮肤，新生肉色组织较粗糙。给药组较对照组愈合情况良好，创面新生皮肤光滑，无瘢痕生成，与正常皮肤无异。表明给药组在掉痂及瘢痕收缩方面效果明显，有相关功能活性肽起主要作用，利于皮肤创面愈合及瘢痕缩小。

小鼠创面组织匀浆液制备，分装保藏于-80℃，按试剂盒说明书进行相关指标的测定。FGF-2对成纤维细胞的生长和分化以及血管平滑肌细胞、内皮细胞的增殖，细胞外基质代谢、生长和中胚层来源细胞的运动具有刺激作用。增加肉芽组织形成的速度和程度，并刺激愈合过程。

珍珠贝外套膜酶解物敷料与皮肤及其附属物的形成、成熟、再生和修复密切相关，并促进血管生成，促进伤口修复，在创伤修复的各个阶段发挥积极的生物学作用。涂抹珍珠贝外套膜酶解物敷料对FGF-2分泌无显著性促进作用，TGF-β帮助单核细胞转化为巨噬细胞，然后加速肉芽组织的重塑并促进创伤愈合生长因子的释放，促进细胞外基质合成和伤口收缩。由此可推测，涂抹珍珠贝外套膜酶解物敷料促进创面愈合的过程中可通过加速细胞因子TGF-β的分泌促进纤维细胞分泌胶原、增加胞外基质沉积、新血管形成。同时也通过加速细胞周期调控蛋白的表达，促进成纤维细胞等细胞周期向***期转化从而加速细胞的有丝***，实现同愈合率结果一致的创伤愈合效果。

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。