阅读说明：本技术 LPS@CuS:Gd光免疫剂的合成方法 (Method for synthesizing LPS @ CuS Gd photo-immunizing agent ) 是由 郑斌 王树超 明东 刘爽 甘霖 于 2020-03-20 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一种通过常温仿生合成成功制备出的LPS@CuS:Gd光免疫剂。包括(1)配置浓度为0.001M的CuCl<Sub>2</Sub>水溶液,0.0025M的GdCl<Sub>3</Sub>水溶液。(2)利用常温仿生合成LPS@CuS:Gd纳米颗粒。其中LPS可以利用强烈免疫激活功能来活化全身免疫系统,募集DC细胞,引起免疫应答；Gd元素引导的MRI成像可视化引导实现了肿瘤抗原的光控释放,进一步增强了ICD效应,并诱使机体产生免疫记忆功能,达到高效、彻底治疗肿瘤的目的。(The invention relates to an LPS @ CuS and Gd photo-immunizing agent successfully prepared by normal-temperature biomimetic synthesis. Comprises (1) preparing CuCl with the concentration of 0.001M 2 Aqueous solution, 0.0025M GdCl 3 An aqueous solution. (2) LPS @ CuS and Gd nanoparticles are biomimetically synthesized at normal temperature. The LPS can activate the whole body immune system by utilizing the strong immune activation function, recruit DC cells and cause immune response; gd (Gd)The element-guided MRI imaging visual guidance realizes the light-operated release of tumor antigens, further enhances the ICD effect, induces the organism to generate the immunological memory function and achieves the aim of efficiently and thoroughly treating tumors.)

[email protected]:Gd光免疫剂的合成方法

技术领域

本发明涉及光免疫制剂技术领域，具体为一种通过常温仿生合成的[email protected]:Gd光免疫剂合成方法。

背景技术

最近，肿瘤免疫治疗已经成为肿瘤治疗的重要突破方式和重要发展方向。不同于传统治疗方式，肿瘤免疫治疗主要通过激活或提高人体免疫功能来达到治疗肿瘤的目的，对人体的副作用小；同时免疫治疗具有长期抗肿瘤免疫功能，可以特异性识别肿瘤细胞，从而有效抑制肿瘤的转移和复发。LPS是一种脂质和多糖的复合物,为革兰氏阴性细菌外璧层中特有的一种化学成分，分子量大于10000。其由核心多糖、O-多糖侧链、和类脂A组成。其是TOLL样受体4(TLR4)的天然配体,可诱导DC成熟及强烈的TH1型免疫应答。因此本文拟将其作为一种免疫激发物质，来实现免疫治疗。

光热治疗(photothermaltherapy，PTT)是一种新型肿瘤治疗方法，在外部近红外光的照射下，肿瘤部位的光热剂吸收近红外光并将其转化为热，使肿瘤部位温度迅速升高到48℃以上，几分钟内可杀死癌细胞。光热治疗过程产生的副作用较小，全身系统毒性低，不会对正常组织造成损伤，具有很大的临床应用潜力。如果将光热治疗与肿瘤免疫治疗相结合，将极大地增强肿瘤治疗的效果，使肿瘤治疗更加彻底。

制备出的该药物有有以下几大优点：1)LPS可以利用强烈免疫激活功能来活化全身免疫系统，募集DC细胞，引起免疫应答；2)Gd元素引导的MRI成像可视化引导实现了肿瘤抗原的光控释放，进一步增强了ICD效应，并诱使机体产生免疫记忆功能,达到高效、彻底治疗肿瘤的目的。

发明内容

本发明目的在于克服现有技术的缺陷，提出一种通过常温仿生合成成功制备出的[email protected]:Gd光免疫剂。

本发明的[email protected]:Gd光免疫剂的合成方法；步骤如下：步骤如下：

1)称取二水合氯化铜，加入超纯水后超声溶解，得到浓度为0.001-0.004M的CuCl₂水溶液；

2)称取氯化钆六水合物，加入10mL超纯水后超声溶解，得到浓度为0.0025-0.01M的GdCl₃水溶液；

3)利用仿生矿化合成[email protected]:Gd纳米颗粒的方法如下：

(1)准确称取0.25-1mg的脂多糖加入5mL透明瓶中，加入5ml超纯水，超声溶解至粉末充分溶解，得到浓度为0.5-2mg/ml的LPS水溶液；

(2)将1ml LPS溶液的单口瓶置于37℃的水浴磁力搅拌器上，随后在搅拌条件下，用一次性滴管滴加上述配置的5ml CuCl₂和1ml GdCl₃溶液，滴加完毕继续搅拌三分钟；

(3)配置好浓度为0.01M的NaOH溶液，取0.5mL加入上述反应体系中，调节溶液pH值为 10；

(4)配置浓度为0.01-0.03mmol/mL的硫化钠九水合物)溶液，并取0.04mL加入到反应体系中；

在37℃下搅拌反应3h后，取出反应液,在10000转条件下进行离心，收集沉淀，反复加入去离子水清洗3遍，放入4℃中保存

本发明的优势在于：1)LPS可以利用强烈免疫激活功能来活化全身免疫系统，募集DC 细胞，引起免疫应答；2)Gd元素引导的MRI成像可视化引导实现了肿瘤抗原的光控释放，进一步增强了ICD效应，并诱使机体产生免疫记忆功能,达到高效、彻底治疗肿瘤的目的。

具体实施方式

以下对本发明作进一步的说明。

实施例1：

[email protected]:Gd光免疫剂的合成方法，具体步骤如下：

1)称取8.5mg的二水合氯化铜，加入50mL超纯水后超声溶解，得到浓度为0.001M的CuCl₂水溶液。

2)称取9.3mg的氯化钆六水合物，加入10mL超纯水后超声溶解，得到浓度为0.0025M 的GdCl₃水溶液。

3)利用仿生矿化合成[email protected]:Gd纳米颗粒的方法如下：

a)准确称取0.25mg的脂多糖(LPS)加入5mL透明瓶中，加入5ml超纯水，超声溶解至粉末充分溶解，得到浓度为0.5mg/ml的LPS水溶液。

b)将1ml LPS溶液的单口瓶置于37℃的水浴磁力搅拌器上，随后在搅拌条件下，用一次性滴管滴加上述配置的5ml CuCl₂和1ml GdCl₃溶液，滴加完毕继续搅拌三分钟。

c)配置好浓度为0.01M的NaOH溶液(4mg,10ml)，取0.5mL加入上述反应体系中，调节溶液pH值为10。

d)配置浓度为0.01mmol/mL的硫化钠九水合物(Na₂S·9H₂O)溶液(24.2mg,10ml)，并取0.04mL加入到反应体系中。

e)在37℃下搅拌反应3h后，取出反应液,在10000转条件下进行离心，收集沉淀，反复加入去离子水清洗3遍，放入4℃中保存。

实施例2：

[email protected]:Gd光免疫剂的合成方法，具体步骤如下：

1)称取25.5mg的二水合氯化铜，加入50mL超纯水后超声溶解，得到浓度为0.003M的 CuCl₂水溶液。

2)称取27.9mg的氯化钆六水合物，加入10mL超纯水后超声溶解，得到浓度为0.0075M 的GdCl₃水溶液。

3)利用仿生矿化合成[email protected]:Gd纳米颗粒的方法如下：

a)准确称取0.75mg的脂多糖(LPS)加入5mL透明瓶中，加入5ml超纯水，超声溶解至粉末充分溶解，得到浓度为1.5mg/ml的LPS水溶液。

b)将1ml LPS溶液的单口瓶置于37℃的水浴磁力搅拌器上，随后在搅拌条件下，用一次性滴管滴加上述配置的5ml CuCl₂和1ml GdCl₃溶液，滴加完毕继续搅拌三分钟。

c)配置好浓度为0.01M的NaOH溶液(4mg,10ml)，取0.5mL加入上述反应体系中，调节溶液pH值为10。

d)配置浓度为0.03mmol/mL的硫化钠九水合物(Na₂S·9H₂O)溶液，并取0.04mL 加入到反应体系中。

e)在37℃下搅拌反应3h后，取出反应液,在10000转条件下进行离心，收集沉淀，反复加入去离子水清洗3遍，放入4℃中保存。

实施例3：

[email protected]:Gd光免疫剂的合成方法，具体步骤如下：

1)称取34mg的二水合氯化铜，加入50mL超纯水后超声溶解，得到浓度为0.004M的CuCl2 水溶液。

2)称取37.2mg的氯化钆六水合物，加入10mL超纯水后超声溶解，得到浓度为0.01M的 GdCl3水溶液。

3)利用仿生矿化合成[email protected]:Gd纳米颗粒的方法如下：

a)准确称取1mg的脂多糖(LPS)加入5mL透明瓶中，加入5ml超纯水，超声溶解至粉末充分溶解，得到浓度为2mg/ml的LPS水溶液。

b)将1ml LPS溶液的单口瓶置于37℃的水浴磁力搅拌器上，随后在搅拌条件下，用一次性滴管滴加上述配置的5ml CuCl2和1ml GdCl3溶液，滴加完毕继续搅拌三分钟。

c)配置好浓度为0.01M的NaOH溶液(4mg,10ml)，取0.5mL加入上述反应体系中，调节溶液pH值为10。

d)配置浓度为0.04mmol/mL的硫化钠九水合物(Na₂S·9H₂O)溶液，并取0.04mL 加入到反应体系中。

e)在37℃下搅拌反应3h后，取出反应液,在10000转条件下进行离心，收集沉淀，反复加入去离子水清洗3遍，放入4℃中保存。