阅读说明：本技术 一种防治桑轮纹病的生物杀菌剂及其制备方法 (Biological bactericide for preventing and treating mulberry ring spot and preparation method thereof ) 是由 李瑞雪 汪泰初 胡飞 王钰婷 陈明 夏家凤 田善富 高新文 于 2019-02-19 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种防治桑轮纹病的生物杀菌剂及其制备方法,生物杀菌剂按重量份计,包括如下组分：苦参碱18-26份,马齿苋25-35份,樟脑叶30-45份,甘草8-13份,纤维素酶4-7份,链霉菌40-60份和地衣芽孢杆菌20-40份。本发明公开的生物杀菌剂采用天然植物材料和菌液复配而成,对环境无污染,病原菌不容易产生抗药性；且能够渗透到桑树和轮纹病斑内部,干扰病原体代谢和繁殖,具有高效防治桑轮纹病的作用。(The invention discloses a biological bactericide for preventing and treating mulberry ring spot and a preparation method thereof, wherein the biological bactericide comprises the following components in parts by weight: 18-26 parts of matrine, 25-35 parts of purslane, 30-45 parts of camphor leaves, 8-13 parts of liquorice, 4-7 parts of cellulase, 40-60 parts of streptomyces and 20-40 parts of bacillus licheniformis. The biological bactericide disclosed by the invention is prepared by compounding natural plant materials and bacterial liquid, is free from environmental pollution, and pathogenic bacteria are not easy to generate drug resistance; and the composition can permeate into mulberry and physalospora piricola to interfere the metabolism and reproduction of pathogens, and has the effect of efficiently preventing and treating the physalospora piricola.)

一种防治桑轮纹病的生物杀菌剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及病害防治技术领域，更具体的说是涉及一种防治桑轮纹病的生物杀菌剂及其制备方法。

背景技术

轮纹病初期在叶片上出现紫红色至紫褐色冻伤状斑点，扩大后呈不规则形；当部分病斑发展到叶脉时，病害突然加剧，以叶脉为顶端，呈V字形枯萎；发展过程中的病斑，叶脉部位呈红褐色，周围是暗绿色至黄绿色，内部呈褐色或暗褐色；小叶的病斑较少，不久后呈轮纹状，形成许多小粒黑点。

轮纹病发病时，还会在果树的树干上会以皮孔为中心出现扁圆形或椭圆形的红褐色病斑，在发病的第二年，病斑中央产生许多分生孢子器，病斑与健部裂缝逐渐加深，病组织翘起如马鞍状，许多病斑往往连在一起，使表皮显得很粗糙；许多刚进入结果期的果树就已经布满了轮纹病的病瘤，给果树产业造成了巨大的经济损失。

其中，桑轮纹病在我国各省蚕区均有所发生。病原(Spondylocladium moriSawada)属半知菌亚门真菌。病原菌在病也和土壤中越冬，翌年随风雨冲溅到桑叶上进行初次侵染和再侵染，隐蔽潮湿的桑园发病较重。病斑多在中下部叶片出现，叶片受病菌侵染后，产生大小不等的病斑，病斑从叶面看有淡黄色和红褐色鲜明的同心轮纹，轮纹数有1-5道；叶背病斑的同心轮纹稍欠明显，淡褐色，中心紫褐色，密生分生孢子梗和分生孢子。病斑边缘有白色菌丝。

目前，防治轮纹病的主要方法是在树上喷洒化学农药，防治效果不好，且容易让树木产生抗药性，复发率高，残留农药会污染环境。

因此，提供一种防治桑轮纹病的生物杀菌剂及其制备方法是本领域技术人员亟需解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种防治桑轮纹病的生物杀菌剂及其制备方法，本发明的生物杀菌剂采用天然植物材料，对环境无污染，且对桑轮纹病防治效果好。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种防治桑轮纹病的生物杀菌剂，按重量份计，包括如下组分：苦参碱18-26份，马齿苋25-35份，樟脑叶30-45份，甘草8-13份，纤维素酶4-7份，链霉菌40-60份和地衣芽孢杆菌20-40份。

进一步，一种防治桑轮纹病的生物杀菌剂，按重量份计，包括如下组分：苦参碱23份，马齿苋30份，樟脑叶38份，甘草11份，纤维素酶6份，链霉菌50份和地衣芽孢杆菌30份。

进一步，一种防治桑轮纹病的生物杀菌剂的制备方法，具体步骤如下：

(1)按重量份数称取各组分，备用；

(2)向步骤(1)称取的马齿苋、樟脑叶和甘草中加入100份水，在2500-3500r/min的条件下湿磨20-30min，过滤，获得滤液，备用；

(3)将步骤(2)获得的滤液与苦参碱、纤维素酶、链霉菌、地衣芽孢杆菌以及400份水充分混匀，获得生物杀菌剂。

进一步，所述生物杀菌剂中链霉菌的菌液浓度为6x10⁶-8x10⁶cfu/mL，地衣芽孢杆菌的菌液浓度为2x10⁶-4x10⁶cfu/mL。

经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明公开提供了一种防治桑轮纹病的生物杀菌剂及其制备方法，本发明的生物杀菌剂采用天然植物材料和菌液复配而成，制备方法简单，对环境无污染，病原菌不容易产生抗药性；且能够渗透到桑树和轮纹病斑内部，干扰病原体代谢和繁殖，具有高效防治桑轮纹病的作用。

具体实施方式

下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

链霉菌和地衣芽孢杆菌购买获得。

实施例1

一种防治桑轮纹病的生物杀菌剂，按重量份计，包括如下组分：苦参碱23份，马齿苋30份，樟脑叶38份，甘草11份，纤维素酶6份，链霉菌50份和地衣芽孢杆菌30份。

防治桑轮纹病的生物杀菌剂的制备方法，具体步骤如下：

(1)按重量份数称取各组分，备用；

(2)向步骤(1)称取的马齿苋、樟脑叶和甘草中加入100份水，在3000r/min的条件下湿磨25min，过滤，获得滤液，备用；

(3)将步骤(2)获得的滤液与苦参碱、纤维素酶、链霉菌、地衣芽孢杆菌以及400份水充分混匀，获得生物杀菌剂，其中链霉菌的菌液浓度为7x10⁶cfu/mL，地衣芽孢杆菌的菌液浓度为3x10⁶cfu/mL。

对比例1-1

一种防治桑轮纹病的生物杀菌剂，按重量份计，包括如下组分：苦参碱34份，马齿苋30份，樟脑叶38份，纤维素酶6份，链霉菌50份和地衣芽孢杆菌30份。

防治桑轮纹病的生物杀菌剂的制备方法，具体步骤如下：

(1)按重量份数称取各组分，备用；

(2)向步骤(1)称取的马齿苋和樟脑叶中加入100份水，在3000r/min的条件下湿磨25min，过滤，获得滤液，备用；

(3)将步骤(2)获得的滤液与苦参碱、纤维素酶、链霉菌、地衣芽孢杆菌以及400份水充分混匀，获得生物杀菌剂，其中链霉菌的菌液浓度为7x10⁶cfu/mL，地衣芽孢杆菌的菌液浓度为3x10⁶cfu/mL。

对比例1-2

一种防治桑轮纹病的生物杀菌剂，按重量份计，包括如下组分：苦参碱23份，马齿苋41份，樟脑叶38份，纤维素酶6份，链霉菌50份和地衣芽孢杆菌30份。

防治桑轮纹病的生物杀菌剂的制备方法，具体步骤如下：

(1)按重量份数称取各组分，备用；

(2)向步骤(1)称取的马齿苋和樟脑叶中加入100份水，在3000r/min的条件下湿磨25min，过滤，获得滤液，备用；

(3)将步骤(2)获得的滤液与苦参碱、纤维素酶、链霉菌、地衣芽孢杆菌以及400份水充分混匀，获得生物杀菌剂，其中链霉菌的菌液浓度为7x10⁶cfu/mL，地衣芽孢杆菌的菌液浓度为3x10⁶cfu/mL。

对比例1-3

一种防治桑轮纹病的生物杀菌剂，按重量份计，包括如下组分：苦参碱23份，马齿苋30份，樟脑叶49份，纤维素酶6份，链霉菌50份和地衣芽孢杆菌30份。

防治桑轮纹病的生物杀菌剂的制备方法，具体步骤如下：

(1)按重量份数称取各组分，备用；

(2)向步骤(1)称取的马齿苋和樟脑叶中加入100份水，在3000r/min的条件下湿磨25min，过滤，获得滤液，备用；

(3)将步骤(2)获得的滤液与苦参碱、纤维素酶、链霉菌、地衣芽孢杆菌以及400份水充分混匀，获得生物杀菌剂，其中链霉菌的菌液浓度为7x10⁶cfu/mL，地衣芽孢杆菌的菌液浓度为3x10⁶cfu/mL。

桑轮纹病防治试验采用田间试验，试验设在安徽省桑树品种资源圃(合肥)，桑树树龄10年左右，选取长势相近，轮纹病症基本一致的桑树；每个处理小区30株，每个处理(实施例1，对比例1-1，对比例1-2，对比例1-3，对照例：喷施清水，对比例：喷施多菌灵)各3个重复，采用随机区组排列，处理小区间留一行作保护行，用背负式电动喷雾器在上午露水干后进行喷药，喷施于桑树的树干、枝条、叶和树干基部周围土面，喷湿喷透，以叶面滴水为度；在三月上中旬，桑树发芽前开始喷药，每隔8d喷施一次，共喷施4次；在下一次喷施前记录每次喷施后3个重复的平均病株数，最后一次喷施后8d记录3个重复的平均病株数，以及第二年和第三年的轮纹病复发情况，结果如表1所示。

表1

由表1可知，采用本发明的生物杀菌剂，能够高效防治桑轮纹病，且防治效果明显优于不添加甘草的生物杀菌剂，以及化学农药多菌灵；且使用3年后不复发。

实施例2

一种防治桑轮纹病的生物杀菌剂，按重量份计，包括如下组分：苦参碱18份，马齿苋25份，樟脑叶30份，甘草8份，纤维素酶4份，链霉菌40份和地衣芽孢杆菌20份。

防治桑轮纹病的生物杀菌剂的制备方法，具体步骤如下：

(1)按重量份数称取各组分，备用；

(2)向步骤(1)称取的马齿苋、樟脑叶和甘草中加入100份水，在2500r/min的条件下湿磨30min，过滤，获得滤液，备用；

(3)将步骤(2)获得的滤液与苦参碱、纤维素酶、链霉菌、地衣芽孢杆菌以及400份水充分混匀，获得生物杀菌剂，其中链霉菌的菌液浓度为6x10⁶cfu/mL，地衣芽孢杆菌的菌液浓度为2x10⁶cfu/mL。

对比例2-1

一种防治桑轮纹病的生物杀菌剂，按重量份计，包括如下组分：苦参碱48份，马齿苋25份，甘草8份，纤维素酶4份，链霉菌40份和地衣芽孢杆菌20份。

防治桑轮纹病的生物杀菌剂的制备方法，具体步骤如下：

(1)按重量份数称取各组分，备用；

(2)向步骤(1)称取的马齿苋和甘草中加入100份水，在2500r/min的条件下湿磨30min，过滤，获得滤液，备用；

(3)将步骤(2)获得的滤液与苦参碱、纤维素酶、链霉菌、地衣芽孢杆菌以及400份水充分混匀，获得生物杀菌剂，其中链霉菌的菌液浓度为6x10⁶cfu/mL，地衣芽孢杆菌的菌液浓度为2x10⁶cfu/mL。

对比例2-2

一种防治桑轮纹病的生物杀菌剂，按重量份计，包括如下组分：苦参碱18份，马齿苋65份，甘草8份，纤维素酶4份，链霉菌40份和地衣芽孢杆菌20份。

防治桑轮纹病的生物杀菌剂的制备方法，具体步骤如下：

(1)按重量份数称取各组分，备用；

(2)向步骤(1)称取的马齿苋和甘草中加入100份水，在2500r/min的条件下湿磨30min，过滤，获得滤液，备用；

(3)将步骤(2)获得的滤液与苦参碱、纤维素酶、链霉菌、地衣芽孢杆菌以及400份水充分混匀，获得生物杀菌剂，其中链霉菌的菌液浓度为6x10⁶cfu/mL，地衣芽孢杆菌的菌液浓度为2x10⁶cfu/mL。

对比例2-3

一种防治桑轮纹病的生物杀菌剂，按重量份计，包括如下组分：苦参碱18份，马齿苋25份，甘草38份，纤维素酶4份，链霉菌40份和地衣芽孢杆菌20份。

防治桑轮纹病的生物杀菌剂的制备方法，具体步骤如下：

(1)按重量份数称取各组分，备用；

(2)向步骤(1)称取的马齿苋和甘草中加入100份水，在2500r/min的条件下湿磨30min，过滤，获得滤液，备用；

(3)将步骤(2)获得的滤液与苦参碱、纤维素酶、链霉菌、地衣芽孢杆菌以及400份水充分混匀，获得生物杀菌剂，其中链霉菌的菌液浓度为6x10⁶cfu/mL，地衣芽孢杆菌的菌液浓度为2x10⁶cfu/mL。

桑轮纹病防治试验采用田间试验，试验设在安徽省桑树品种资源圃(合肥)，桑树树龄10年左右，选取长势相近，轮纹病症基本一致的桑树；每个处理小区30株，每个处理(实施例2，对比例2-1，对比例2-2，对比例2-3，对照例：喷施清水，对比例：喷施多菌灵)各3个重复，采用随机区组排列，处理小区间留一行作保护行，用背负式电动喷雾器在上午露水干后进行喷药，喷施于桑树的树干、枝条、叶和树干基部周围土面，喷湿喷透，以叶面滴水为度；在三月上中旬，桑树发芽前开始喷药，每隔8d喷施一次，共喷施4次；在下一次喷施前记录每次喷施后3个重复的平均病株数，最后一次喷施后8d记录3个重复的平均病株数，以及第二年和第三年的轮纹病复发情况，结果如表2所示。

表2

由表2可知，采用本发明的生物杀菌剂，能够高效防治桑轮纹病，且防治效果明显优于不添加樟脑叶的生物杀菌剂，以及化学农药多菌灵；且使用3年后不复发。

实施例3

一种防治桑轮纹病的生物杀菌剂，按重量份计，包括如下组分：苦参碱26份，马齿苋35份，樟脑叶45份，甘草13份，纤维素酶7份，链霉菌60份和地衣芽孢杆菌40份。

防治桑轮纹病的生物杀菌剂的制备方法，具体步骤如下：

(1)按重量份数称取各组分，备用；

(2)向步骤(1)称取的马齿苋、樟脑叶和甘草中加入100份水，在3500r/min的条件下湿磨20min，过滤，获得滤液，备用；

(3)将步骤(2)获得的滤液与苦参碱、纤维素酶、链霉菌、地衣芽孢杆菌以及400份水充分混匀，获得生物杀菌剂，其中链霉菌的菌液浓度为8x10⁶cfu/mL，地衣芽孢杆菌的菌液浓度为4x10⁶cfu/mL。

对比例3-1

一种防治桑轮纹病的生物杀菌剂，按重量份计，包括如下组分：苦参碱61份，樟脑叶45份，甘草13份，纤维素酶7份，链霉菌60份和地衣芽孢杆菌40份。

防治桑轮纹病的生物杀菌剂的制备方法，具体步骤如下：

(1)按重量份数称取各组分，备用；

(2)向步骤(1)称取的樟脑叶和甘草中加入100份水，在3500r/min的条件下湿磨20min，过滤，获得滤液，备用；

(3)将步骤(2)获得的滤液与苦参碱、纤维素酶、链霉菌、地衣芽孢杆菌以及400份水充分混匀，获得生物杀菌剂，其中链霉菌的菌液浓度为8x10⁶cfu/mL，地衣芽孢杆菌的菌液浓度为4x10⁶cfu/mL。

对比例3-2

一种防治桑轮纹病的生物杀菌剂，按重量份计，包括如下组分：苦参碱26份，樟脑叶80份，甘草13份，纤维素酶7份，链霉菌60份和地衣芽孢杆菌40份。

防治桑轮纹病的生物杀菌剂的制备方法，具体步骤如下：

(1)按重量份数称取各组分，备用；

(2)向步骤(1)称取的樟脑叶和甘草中加入100份水，在3500r/min的条件下湿磨20min，过滤，获得滤液，备用；

(3)将步骤(2)获得的滤液与苦参碱、纤维素酶、链霉菌、地衣芽孢杆菌以及400份水充分混匀，获得生物杀菌剂，其中链霉菌的菌液浓度为8x10⁶cfu/mL，地衣芽孢杆菌的菌液浓度为4x10⁶cfu/mL。

对比例3-3

一种防治桑轮纹病的生物杀菌剂，按重量份计，包括如下组分：苦参碱26份，樟脑叶45份，甘草48份，纤维素酶7份，链霉菌60份和地衣芽孢杆菌40份。

防治桑轮纹病的生物杀菌剂的制备方法，具体步骤如下：

(1)按重量份数称取各组分，备用；

(2)向步骤(1)称取的樟脑叶和甘草中加入100份水，在3500r/min的条件下湿磨20min，过滤，获得滤液，备用；

(3)将步骤(2)获得的滤液与苦参碱、纤维素酶、链霉菌、地衣芽孢杆菌以及400份水充分混匀，获得生物杀菌剂，其中链霉菌的菌液浓度为8x10⁶cfu/mL，地衣芽孢杆菌的菌液浓度为4x10⁶cfu/mL。

桑轮纹病防治试验采用田间试验，试验设在安徽省桑树品种资源圃(合肥)，桑树树龄10年左右，选取长势相近，轮纹病症基本一致的桑树；每个处理小区30株，每个处理(实施例3，对比例3-1，对比例3-2，对比例3-3，对照例：喷施清水，对比例：喷施多菌灵)各3个重复，采用随机区组排列，处理小区间留一行作保护行，用背负式电动喷雾器在上午露水干后进行喷药，喷施于桑树的树干、枝条、叶和树干基部周围土面，喷湿喷透，以叶面滴水为度；在三月上中旬，桑树发芽前开始喷药，每隔8d喷施一次，共喷施4次；在下一次喷施前记录每次喷施后3个重复的平均病株数，最后一次喷施后8d记录3个重复的平均病株数，以及第二年和第三年的轮纹病复发情况，结果如表3所示。

表3

由表3可知，采用本发明的生物杀菌剂，能够高效防治桑轮纹病，且防治效果明显优于不添加马齿苋的生物杀菌剂，以及化学农药多菌灵；且使用3年后不复发。

实施例4

一种防治桑轮纹病的生物杀菌剂，按重量份计，包括如下组分：苦参碱20份，马齿苋32份，樟脑叶35份，甘草12份，纤维素酶5份，链霉菌45份和地衣芽孢杆菌35份。

防治桑轮纹病的生物杀菌剂的制备方法，具体步骤如下：

(1)按重量份数称取各组分，备用；

(2)向步骤(1)称取的马齿苋、樟脑叶和甘草中加入100份水，在2500-3500r/min的条件下湿磨20-30min，过滤，获得滤液，备用；

(3)将步骤(2)获得的滤液与苦参碱、纤维素酶、链霉菌、地衣芽孢杆菌以及400份水充分混匀，获得生物杀菌剂。

进一步，所述生物杀菌剂中链霉菌的菌液浓度为6x10⁶cfu/mL，地衣芽孢杆菌的菌液浓度为3x10⁶cfu/mL。

对比例4-1

一种防治桑轮纹病的生物杀菌剂，按重量份计，包括如下组分：马齿苋52份，樟脑叶35份，甘草12份，纤维素酶5份，链霉菌45份和地衣芽孢杆菌35份。

防治桑轮纹病的生物杀菌剂的制备方法，具体步骤如下：

(1)按重量份数称取各组分，备用；

(2)向步骤(1)称取的马齿苋、樟脑叶和甘草中加入100份水，在2500-3500r/min的条件下湿磨20-30min，过滤，获得滤液，备用；

(3)将步骤(2)获得的滤液与纤维素酶、链霉菌、地衣芽孢杆菌以及400份水充分混匀，获得生物杀菌剂。

进一步，所述生物杀菌剂中链霉菌的菌液浓度为6x10⁶cfu/mL，地衣芽孢杆菌的菌液浓度为3x10⁶cfu/mL。

对比例4-2

一种防治桑轮纹病的生物杀菌剂，按重量份计，包括如下组分：马齿苋32份，樟脑叶55份，甘草12份，纤维素酶5份，链霉菌45份和地衣芽孢杆菌35份。

防治桑轮纹病的生物杀菌剂的制备方法，具体步骤如下：

(1)按重量份数称取各组分，备用；

(2)向步骤(1)称取的马齿苋、樟脑叶和甘草中加入100份水，在2500-3500r/min的条件下湿磨20-30min，过滤，获得滤液，备用；

(3)将步骤(2)获得的滤液与纤维素酶、链霉菌、地衣芽孢杆菌以及400份水充分混匀，获得生物杀菌剂。

进一步，所述生物杀菌剂中链霉菌的菌液浓度为6x10⁶cfu/mL，地衣芽孢杆菌的菌液浓度为3x10⁶cfu/mL。

对比例4-3

一种防治桑轮纹病的生物杀菌剂，按重量份计，包括如下组分：马齿苋32份，樟脑叶35份，甘草32份，纤维素酶5份，链霉菌45份和地衣芽孢杆菌35份。

防治桑轮纹病的生物杀菌剂的制备方法，具体步骤如下：

(1)按重量份数称取各组分，备用；

(2)向步骤(1)称取的马齿苋、樟脑叶和甘草中加入100份水，在2500-3500r/min的条件下湿磨20-30min，过滤，获得滤液，备用；

(3)将步骤(2)获得的滤液与纤维素酶、链霉菌、地衣芽孢杆菌以及400份水充分混匀，获得生物杀菌剂。

进一步，所述生物杀菌剂中链霉菌的菌液浓度为6x10⁶cfu/mL，地衣芽孢杆菌的菌液浓度为3x10⁶cfu/mL。

桑轮纹病防治试验采用田间试验，试验设在安徽省桑树品种资源圃(合肥)，桑树树龄10年左右，选取长势相近，轮纹病症基本一致的桑树；每个处理小区30株，每个处理(实施例4，对比例4-1，对比例4-2，对比例4-3，对照例：喷施清水，对比例：喷施多菌灵)各3个重复，采用随机区组排列，处理小区间留一行作保护行，用背负式电动喷雾器在上午露水干后进行喷药，喷施于桑树的树干、枝条、叶和树干基部周围土面，喷湿喷透，以叶面滴水为度；在三月上中旬，桑树发芽前开始喷药，每隔8d喷施一次，共喷施4次；在下一次喷施前记录每次喷施后3个重复的平均病株数，最后一次喷施后8d记录3个重复的平均病株数，以及第二年和第三年的轮纹病复发情况，结果如表4所示。

表4

由表4可知，采用本发明的生物杀菌剂，能够高效防治桑轮纹病，且防治效果明显优于不添加苦参碱的生物杀菌剂，以及化学农药多菌灵；且使用3年后不复发。

对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。