4-苄基氨基苯磺酰胺类衍生物、及其制备和用途
阅读说明：本技术 4-苄基氨基苯磺酰胺类衍生物、及其制备和用途 (4-benzyl amino benzene sulfonamide derivative, preparation and application thereof ) 是由 李红良 张晓晶 于 2019-02-03 设计创作，主要内容包括：本发明提供了一种式(I)<Image he="340" wi="700" file="DDA0001967232590000011.GIF" imgContent="drawing" imgFormat="GIF" orientation="portrait" inline="no"></Image>表示的4-苄基氨基苯磺酰胺类衍生物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或代谢产物,式(I)中的R<Sub>1</Sub>、R<Sub>2</Sub>、R<Sub>3</Sub>、R<Sub>4</Sub>、R<Sub>5</Sub>和R<Sub>6</Sub>各个基团如说明书所定义。还提供用于治疗和/或预防缺血再灌注损伤及相关疾病、病理性心肌肥厚及相关疾病、脂肪性肝病及相关疾病、和/或代谢性疾病。(The invention provides a compound of formula (I) A 4-benzylaminophenylsulfonamide derivative represented by the formula (I) or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, or metabolite thereof, R 1 、R 2 、R 3 、R 4 、R 5 And R 6 Each group is as defined in the specification. Also provided are methods for treating and/or preventing ischemia-reperfusion injury and related diseases, pathological myocardial hypertrophy and related diseases, fatty liver disease and related diseases, and/or metabolic diseases.)
技术领域
本发明属于医药化学技术领域，尤其是涉及4-苄基氨基苯磺酰胺 类衍生物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或代谢产物，其制备方法 及用途。
背景技术
肝脏在机体脂肪代谢中占有重要地位，其参与脂质代谢过程中的 多个重要环节，包括脂肪酸的摄取与合成，脂质的加工、贮存、氧化 分解及输出。当肝脏获得脂肪酸的量超过其处理能力，造成脂质以甘 油三酯的形式沉积于肝细胞内，导致肝细胞脂肪变性，成为单纯性肝 脏脂肪变性、进而发展成为非酒精性脂肪性肝炎，部分患者可进展为 肝纤维化、肝硬化、甚至肝癌(路然等，脂质代谢紊乱导致非酒精性 脂肪性肝病的发病机制，临床肝胆病杂志，2015年第31卷第7期， 1050-1054)。同时，非酒精性脂肪性肝病也与心血管疾病、Ⅱ型糖尿 病、肥胖、代谢综合征的发生存在密切联系，严重威胁着人们的健康。 因此，非酒精性脂肪肝病的治疗越来越受到重视。
缺血再灌注损伤(Ischemia-Reperfusion Injury，IRI)是1960年 Jennings首先提出的概念，是指组织器官缺血后血液再灌注，不仅不 能使组织器官功能恢复，反而加重组织器官的功能障碍和结构损伤。 缺血再灌注损伤在许多重要器官包括心、肝、肺、肾、胃肠道等均可 发生。研究表明，炎症爆发和细胞死亡是导致缺血再灌注所导致的脏 器损伤的主要病理机制。如何减轻和消除缺血再灌注损伤以及阐明这 种损伤的机制，有重要的临床实用价值。目前认为有多个机制参与了 器官的缺血再灌注损伤：如致炎性细胞因子、氧自由基、钙超载、微 循环障碍、能量代谢紊乱等，还受缺血的时间、组织对氧的需求、侧 枝循环的建立及电解质浓度等因素影响。
肝脏缺血再灌注损伤(Hepatic Ischemia Reperfusion Injury，HIRI) 是肝脏外科手术中常见的病理过程，多见于休克、需要阻断肝脏血流 的肝外科手术以及肝移植术等病理生理过程中。近年来，随着临床治 疗技术的发展，肝移植、溶栓治疗以及肝门阻断术等手术的开展越来 越多，尽管肝脏保护、外科技巧及术中监护不断改进，但缺血再灌注 所致肝损伤依然是引起术后脏器无功能，移植失败甚至患者死亡的主 要原因。肝脏经历缺血再灌注后，肝脏组织细胞发生一系列代谢、结 构和功能的损伤，易诱发肝功能衰竭，是影响疾病预后、手术成功率 和病人存活率的主要原因之一。因此寻找能有效抑制肝脏缺血再灌注损伤的药物具有重要的临床意义。
急性冠状动脉梗阻性疾病是目前心脑血管疾病的主要致死原因之 一。尽管心脏搭桥术、介入及溶栓等治疗有了很大的进步，但急性心 梗患者的死亡率依然较高，其中一个很重要的原因就是尚无有效办法 抑制缺血心肌恢复血流时所引起的缺血再灌注损伤。心肌缺血一定时 间后，重新恢复血供，会造成机体内炎症因子及氧自由基等大量释放， 心肌细胞凋亡率增加，恶性心律失常如室颤、室速等发生增加，心肌 能量代谢及结构上出现损伤。
心肌肥厚是心脏为适应各种刺激而产生的心肌细胞体积增大、重 量增加。其病理变化包括心肌细胞肥大、心肌间质细胞增殖以及心脏 细胞外基质改建等多方面的改变，即心肌重构。临床上造成心肌肥厚 的疾病有许多，如原发性或继发性高血压、心肌梗死、瓣膜病、先天 性心脏病等。虽然早期心肌肥厚有利于维持正常的心功能，但由于心 肌肥厚本身也可增加心肌耗氧量，降低心肌顺应性，故长时间会导致 心力衰竭，增加猝死发生率。近年来，全世界众多学者对心肌肥厚的 发生发展机制开展了大量研究，发现了一些参与心肌肥厚病理生理过 程的关键基因及重要信号传导通路，并且对其中的可干预因素进行了 深入研究。然而，心肌肥厚的发生发展机制至今仍未完全明确，现有 的研究及发现在临床实践中仍具有一定的局限性，尚不能形成真正有 效的针对心肌肥厚的防治措施。
发明内容
本发明提供了一种4-苄基氨基苯磺酰胺类衍生物或其药学上可接 受的盐、溶剂化物、或代谢产物，能够用于治疗和/或预防脂肪性肝病 及相关代谢性疾病、肥胖及相关代谢性疾病、糖尿病及相关疾病、缺 血再灌注损伤及相关疾病、和/或病理性心肌肥厚及相关疾病。
根据本发明的一个方面，本发明提供一种式(I)表示的4-苄基氨基 苯磺酰胺类衍生物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或代谢产物。
其中，R1和R2各自独立地选自H、烷基、烷氧基、烯基、炔基、 卤素、氨基、芳基、杂芳基，上述基团各自任选被一个或多个选自如 下基团所取代：C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、卤素、羟基、C1-6烷 氧基；
R3选自芳基、杂芳基，上述基团任选被一个或多个选自如下基团 被取代：C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、卤素、氨基、羟基、C1-6烷 氧基、C1-6烷氧基羰基、环烷基、芳基、哌嗪基、哌啶基、吡啶基、 吗啉基、吡咯烷基、吡唑烷基、咪唑烷基和硫代吗啉基；上述基团C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、环烷基、芳基、哌嗪基、哌 啶基、吡啶基、吗啉基、吡咯烷基、吡唑烷基、咪唑烷基、硫代吗啉 基还可以被一个或多个C1-6烷基、C1-6烷氧基、或C1-6烷氧基羰基所 取代；
R4选自羟基、烷基、烷氧基、烯基、炔基、卤素、氨基、巯基、 芳基、杂芳基、糖类、糖醛酸类；上述基团各自任选被一个或多个选 自如下基团所取代：烷基、烯基、炔基、卤素、羟基、烷氧基、氨基、 巯基、芳基、杂芳基等；
R5和R6独立地选自烷基、烷氧基、烷氧基烷基、烯基、炔基、 卤素、氨基、巯基、芳基、杂芳基；上述基团各自任选被一个或多个 选自如下基团所取代：烷基、烯基、炔基、卤素、羟基、烷氧基、氨 基、巯基、芳基、杂芳基等；
且排除化合物IMA-1
附图的简单说明
图1：原代肝细胞给予20μM不同药物处理，PA/OA刺激18小 时后，油红O检测图。
图2：原代肝细胞给予20μM不同药物处理，PA/OA刺激18小 时后，细胞中脂质合成相关基因Acc1、Fasn和Scd1的mRNA表达 水平(*代表与对照组比较P<0.05)。
图3：原代肝细胞给予20μM不同药物处理，PA/OA刺激4小时 后，细胞中炎症相关基因mRNA表达水平(*代表与对照组比较 P<0.05)。
图4：小鼠原代肝细胞给予PA/OA和5μM不同药物处理后，油 红O染色结果图和细胞中Acc1以及Il6的mRNA表达水平(*代表与 对照组比较P<0.05)。
图5：大鼠原代心肌细胞给予5μM不同药物处理，PE刺激48小 时后，细胞中Anp,Bnp和Myh7基因的mRNA表达水平(*代表与对 照组比较P<0.05)。
图6：大鼠原代心肌细胞给予5μM不同药物处理，PE刺激48小 时后，细胞α-辅肌动蛋白染色结果(*代表与对照组比较P<0.05)。
图7：大鼠原代心肌细胞给予20μM不同药物处理，缺氧复氧刺 激后，细胞CCK8检测细胞活力结果(*代表与对照组比较P<0.05)。
图8：大鼠原代心肌细胞给予20μM不同药物处理，缺氧复氧刺 激后，细胞中Bax基因的mRNA表达水平(*代表与对照组比较 P<0.05)。
图9：小鼠原代肝细胞给予20μM不同药物处理，缺氧复氧刺激 后，细胞中炎症相关基因的mRNA表达水平(*代表与对照组比较 P<0.05)。
具体实施方式
本发明涉及新4-苄基氨基苯磺酰胺类衍生物或其药学上可接受的 盐、溶剂化物、或代谢产物。
通过参考以下本发明的示例性实施方案及其中所包括的实施例的 详细说明，可以更容易地理解本发明。应当理解，本发明不限于特定 的合成方法，其当然可以变化。
将本文提及的所有专利、专利申请及参考文献的全部内容通过援 引并入本文。
本发明的其他特征和优点将根据本说明书和描述本发明的附加的 权利要求是显而易见的。本发明的许多特征并非必须完整地由权利要 求所体现。然而，应当理解，所有这样的新主题都是本发明的一部分。
定义
除非本文另有规定，否则关于本发明使用的科学和技术术语具有 本领域普通技术人员普遍理解的含义。除非上下文另有明确的规定， 否则如本说明书和附加权利要求中使用的单数形式“一个”、“一种”和 “所述”包括复数指示物。
本文所用术语“药学上可接受的盐”是指药物活性化合物的衍生物， 其中通过制备其酸式盐或碱式盐来修饰母体化合物。药学上可接受的 盐的实例包括但不限于，碱性残基(如胺类)的无机酸盐或有机酸盐， 酸性残基(如羧酸)的碱性盐或有机盐等。药学上可接受的盐包括由 诸如无毒性的无机或有机酸形成的母体化合物的常规无毒性的盐或季 铵盐。例如，这些常规的无毒性盐包括那些源自无机酸的盐，如盐酸、 氢溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等；以及由有机酸制备的盐， 如，乙酸、丙酸、琥珀酸、羟基乙酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬 酸、延胡索酸、甲磺酸、甲苯磺酸、水杨酸、对氨基苯磺酸等。
术语“烷基”指直链或支链的饱和烃部分，其仅由碳原子和氢原子 组成，包括具有1至20个原子的那些。在某些实施方案中，烷基将包 括C1-C12、C1-C10、C1-C8、C1-C6或C1-C4烷基基团。这类取代基的非 限制性实例包括甲基、乙基、丙基、1-甲基乙基、丁基、1-甲基丙基、 2-甲基丙基、1,1-二甲基乙基、戊基、1-甲基丁基、2-甲基丁基、3-甲 基丁基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、己基、1,1-二甲基丙基、1,2- 二甲基丙基、1-甲基戊基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、1,1- 二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、2,3- 二甲基丁基、3,3-二甲基丁基、1-乙基丁基、2-乙基丁基、1,1,2-三甲 基丙基、1,2,2-三甲基丙基、1-乙基-1-甲基丙基、1-乙基-2-甲基丙基、 庚基、辛基、2-乙基己基、壬基和癸基及其异构体。C1-C4-烷基指例 如甲基、乙基、丙基、1-甲基乙基、丁基、1-甲基丙基、2-甲基丙基或 1,1-二甲基乙基。
术语”烯基”指具有至少一个碳-碳双键的直链和支链碳链。在某些 实施方案中，烯基基团可以包括C2-C20烯基基团。在其它实施方案中， 烯基包括C2-C12、C2-C10、C2-C8、C2-C6或C2-C4烯基基团。实例包括， 但不限于乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-甲基-乙烯基、1-丁烯基、 2-丁烯基、3-丁烯基、1-甲基-1-丙烯基、2-甲基-1-丙烯基、1-甲基-2- 丙烯基、2-甲基-2-丙烯基；1-戊烯基、2-戊烯基、3-戊烯基、4-戊烯基、 1-甲基-1-丁烯基、2-甲基-1-丁烯基、3-甲基-1-丁烯基、1-甲基-2-丁烯 基、2-甲基-2-丁烯基、3-甲基-2-丁烯基、1-甲基-3-丁烯基、2-甲基-3- 丁烯基、3-甲基-3-丁烯基、1,1-二甲基-2-丙烯基、1,2-二甲基-1-丙烯基、 1,2-二甲基-2-丙烯基、1-乙基-1-丙烯基、1-乙基-2-丙烯基、1-己烯基、 2-己烯基、3-己烯基、4-己烯基、5-己烯基、1-甲基-1-戊烯基、2-甲基 -1-戊烯基、3-甲基-1-戊烯基、4-甲基-1-戊烯基、1-甲基-2-戊烯基、2- 甲基-2-戊烯基、3-甲基-2-戊烯基、4-甲基-2-戊烯基、1-甲基-3-戊烯基、 2-甲基-3-戊烯基、3-甲基-3-戊烯基、4-甲基-3-戊烯基、1-甲基-4-戊烯 基、2-甲基-4-戊烯基、3-甲基-4-戊烯基、4-甲基-4-戊烯基、1,1-二甲 基-2-丁烯基、1,1-二甲基-3-丁烯基、1,2-二甲基-1-丁烯基、1,2-二甲基 -2-丁烯基、1,2-二甲基-3-丁烯基、1,3-二甲基-1-丁烯基、1,3-二甲基 -2-丁烯基、1,3-二甲基-3-丁烯基、2,2-二甲基-3-丁烯基、2,3-二甲基-1- 丁烯基、2,3-二甲基-2-丁烯基、2,3-二甲基-3-丁烯基、3,3-二甲基-1- 丁烯基、3,3-二甲基-2-丁烯基、1-乙基-1-丁烯基、1-乙基-2-丁烯基、 1-乙基-3-丁烯基、2-乙基-1-丁烯基、2-乙基-2-丁烯基、2-乙基-3-丁烯 基、1,1,2-三甲基-2-丙烯基、1-乙基-1-甲基-2-丙烯基、1-乙基-2-甲基 -1-丙烯基和1-乙基-2-甲基-2-丙烯基。
“炔基”指具有至少一个碳-碳三键的直链和支链碳链。在某些实施 方案中，炔基基团包括C2-C20个炔基基团。在其它实施方案中，炔基 基团可以包括C2-C12、C2-C10、C2-C8、C2-C6或C2-C4炔基基团。例 如，如本文使用的术语”C2-C10-炔基”指具有2至10个碳原子且包含 至少一个三键的直链或支链不饱和烃基，比如乙炔基、丙-1-炔-1-基、 丙-2-炔-1-基、正-丁-1-炔-1-基、正-丁-1-炔-3-基、正-丁-1-炔-4-基、正 -丁-2-炔-1-基、正-戊-1-炔-1-基、正-戊-1-炔-3-基、正-戊-1-炔-4-基、 正-戊-1-炔-5-基、正-戊-2-炔-1-基、正-戊-2-炔-4-基、正-戊-2-炔-5-基、 3-甲基丁-1-炔-3-基、3-甲基丁-1-炔-4-基、正-己-1-炔-1-基、正-己-1- 炔-3-基、正-己-1-炔-4-基、正-己-1-炔-5-基、正-己-1-炔-6-基、正-己-2- 炔-1-基、正-己-2-炔-4-基、正-己-2-炔-5-基、正-己-2-炔-6-基、正-己-3- 炔-1-基、正-己-3-炔-2-基、3-甲基戊-1-炔-1-基、3-甲基戊-1-炔-3-基、 3-甲基戊-1-炔-4-基、3-甲基戊-1-炔-5-基、4-甲基戊-1-炔-1-基、4-甲基 戊-2-炔-4-基或4-甲基戊-2-炔-5-基等。
术语“卤代烷基”或“卤素取代的烷基”指如本文定义的烷基，其被 一个或多个卤素原子取代。例如C1-C4-卤代烷基包括，但不限于氯甲 基、溴乙基、二氯甲基、三氯甲基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、 氯氟甲基、二氯氟甲基、氯二氟甲基、1-氯乙基、1-溴甲基、1-氟乙基、 2-氟乙基、2,2-二氟乙基、2,2,2-三氟乙基、2-氯-2-氟乙基、2-氯-2,2- 二氟乙基、2,2-二氯-2-氟乙基、2,2,2-三氯乙基、五氟乙基等。
术语“卤代烯基”或“卤素取代的烯基”指如本文定义的烯基基团， 其被一个或多个卤素原子取代。
术语“卤代炔基”或“卤素取代的炔基”指如本文定义的炔基基团， 其被一个或多个卤素原子取代。
术语“烷氧基”指式-OR的部分，其中R为通过氧原子键合的如本 文定义的直链饱和烷基或支链饱和烷基。所述烷氧基可任选地如本文 定义的被取代。这样的烷氧基的非限制性实例为甲氧基、乙氧基、丙 氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、戊氧基等。
类似地，术语“烯氧基”、“炔氧基”、“卤代烷氧基”、“卤代烯氧基”、 “卤代炔氧基”、“环烷氧基”、“环烯氧基”、“卤代环烷氧基”和“卤代环 烯氧基”分别指基团烯基-O-、炔基-O-、卤代烷基-O-、卤代烯基-O-、 卤代炔基-O-、环烷基-O-、环烯基-O-、卤代环烷基-O-和卤代环烯基 -O-，其中烯基、炔基、卤代烷基、卤代烯基、卤代炔基、环烷基、环 烯基、卤代环烷基和卤代环烯基为如上定义的。C1-C6-烷氧基的实例 包括，但不限于甲氧基、乙氧基、C2H5-CH2O-、(CH3)2CHO-、正-丁 氧基、C2H5-CH(CH3)O-、(CH3)2CH-CH2O-、(CH3)3CO-、正-戊氧基、 1-甲基丁氧基、2-甲基丁氧基、3-甲基丁氧基、1,1-二甲基丙氧基、1,2- 二甲基丙氧基、2,2-二甲基丙氧基、1-乙基丙氧基、正-己氧基、1-甲 基戊氧基、2-甲基戊氧基、3-甲基戊氧基、4-甲基戊氧基、1,1-二甲基 丁氧基、1,2-二甲基丁氧基、1,3-二甲基丁氧基、2,2-二甲基丁氧基、 2,3-二甲基丁氧基、3,3-二甲基丁氧基、1-乙基丁氧基、2-乙基丁氧基、 1,1,2-三甲基丙氧基、1,2,2-三甲基丙氧基、1-乙基-1-甲基丙氧基、1- 乙基-2-甲基丙氧基等。
术语“芳基”指含有1或2个环的碳环芳香族系统，其中这样的环 可以是稠合的。如果所述环是稠合的，则所述环中的一个必须为完全 不饱和的，且稠合环可以为完全饱和的、部分不饱和的或完全不饱和 的。术语“芳基”涵盖芳香族基团，比如苯基、萘基、四氢萘基、茚满 基、联苯基、苯并[b][1,4]嗪-3(4H)-酮基、2,3-二氢-1H-茚基和1,2,3,4- 四氢萘基。根据需要，芳基可以任选地被1至5个如本文定义的合适 的取代基取代，所述取代基为比如C1-C4烷基、氧代、OH、CH2OH、 卤素、C1-C4烷氧基、氰基或C(O)NH2，其中所述烷基和烷氧基任选 地被下述基团取代：OH、卤素、C(O)NH2、C(O)NHCH3、C(O)N(CH3)2、 -S(C1-C4烷基)或C3-C5环烷基等。
术语“杂芳基”指1至15个碳原子、优选地1至10个碳原子，在 环内具有一个或多个氧、氮和硫杂原子，优选地1至4个杂原子，或 1至3个杂原子的单价芳族基团。氮和硫杂原子可以任选地被氧化。 这样的杂芳基基团可以具有单个环(例如，吡啶基或呋喃基)或多个稠环，条件是连接点是通过杂芳基环原子。优选的杂芳基包括吡啶基、 哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基、吡咯基、吲哚基、喹啉基、异喹 啉基、喹唑啉基、喹喔啉基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、咪唑基、唑基、异唑基、异噻唑基、吡唑基、苯并噻唑基、苯并呋喃基、二 氢苯并呋喃基、苯并咪唑基、和苯并噻吩基。杂芳基环可以是未取代 的或被一个或多个如对于上述芳基所述的部分取代。
杂芳基取代基的实例包括6元环取代基，比如吡啶基、吡嗪基、 嘧啶基和哒嗪基；和5元环取代基，比如三唑基、咪唑基、呋喃基、 噻吩基、吡唑基、唑基、异唑基、噻唑基、1,2,3-、1,2,4-、1,2,5- 或1,3,4-二唑基和异噻唑基。在具有杂芳基取代基的基团中，键合 所述基团的杂芳基取代基的环原子可以为杂原子之一，或者其可以为 环碳原子。类似地，如果所述杂芳基取代基反而被基团或取代基取代， 则所述基团或取代基可以与所述杂原子中的一个键合，或其可以与环 碳原子键合。
术语“杂芳基”还包括吡啶基N-氧化物和含有吡啶N-氧化物环的 基团。进一步的实例包括呋喃基、噻吩基、唑基、噻唑基、咪唑基、 吡唑基、三唑基、四唑基、异唑基、异噻唑基、二唑基、噻二唑 基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、吡啶-2(1H)-酮基、哒嗪-2(1H)- 酮基、嘧啶-2(1H)-酮基、吡嗪-2(1H)-酮基、咪唑并[1,2-a]吡啶基。根 据需要，杂芳基可以任选地被1至5个如本文定义的合适的取代基取 代，所述取代基为比如C1-C4烷基、氧代、OH、CH2OH、卤素、C1-C4烷氧基、氰基或C(O)NH2，其中所述烷基和烷氧基任选地被下述基团 取代：OH、卤素、C(O)NH2、C(O)NHCH3、C(O)N(CH3)2、-S(C1-C4烷基)或C3-C5环烷基等。
如本文使用的术语“卤素原子”指F、Cl、Br和I。卤代烷基的实 例包括但不限于氟甲基、二氯乙基、三氟甲基、三氯甲基、五氟乙基 和五氯乙基基团。
如本文使用的术语“羟基”指-OH基团。
本发明的化合物还包括本发明的化合物的异构体，例如光学异构 体、几何学异构体和互变异构、水合物、溶剂化物、络合物、晶型物、 同位素标记的衍生物、代谢产物和前药。
本文公开的化合物的“代谢产物”为当所述化合物被代谢时形成的 化合物的衍生物。代谢指生物体通过其改变具体物质的过程总和(包括 水解反应和酶催化反应，比如氧化反应)。因此，酶可以生产化合物的 特定结构变化。例如，细胞色素P450催化多种氧化和还原反应，而 尿苷二磷酸葡糖醛酸转移酶催化活化的葡糖醛酸分子转移到芳香族的 醇、脂肪族醇、羧酸、胺、和游离巯基。关于代谢的其它信息可以从 The PharmacologicalBasis of Therapeutics，第9版，McGraw-Hill (1996)获得，将其通过援引并入本文。在某些实施方案中，化合物代 谢为药理学活性代谢产物。
本发明的化合物可以以非溶剂化的和溶剂化的形式存在。如本文 使用的术语“溶剂化物”指化合物与一种或多种溶剂分子(有机或无机 分子，包括水(“水合物”))的物理缔合。
本发明的化合物
本发明涉及式I的化合物表示的4-苄基氨基苯磺酰胺类衍生物或 其药学上可接受的盐、溶剂化物、或代谢产物，
其中，R1和R2各自独立地选自H、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6炔基、卤素、氨基、芳基、杂芳基，上述基团各自任选被 一个或多个选自如下基团所取代：C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、卤 素、羟基、C1-6烷氧基；
R3选自芳基、杂芳基，上述基团任选被一个或多个选自如下基团 被取代：C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、卤素、氨基、羟基、C1-6烷 氧基、C1-6烷氧基羰基、环烷基、芳基、哌嗪基、哌啶基、吡啶基、 吗啉基、吡咯烷基、吡唑烷基、咪唑烷基和硫代吗啉基；上述基团C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、环烷基、芳基、哌嗪基、哌 啶基、吡啶基、吗啉基、吡咯烷基、吡唑烷基、咪唑烷基、硫代吗啉 基还可以被一个或多个C1-6烷基、C1-6烷氧基、或C1-6烷氧基羰基所 取代；
R4选自羟基、烷基、烷氧基、烯基、炔基、卤素、氨基、巯基、 芳基、杂芳基、糖类、糖醛酸类；上述基团各自任选被一个或多个选 自如下基团所取代：烷基、烯基、炔基、卤素、羟基、烷氧基、氨基、 巯基、芳基、杂芳基等；
R5和R6独立地选自烷基、烷氧基、烷氧基烷基、烯基、炔基、 卤素、氨基、巯基、芳基、杂芳基；上述基团各自任选被一个或多个 选自如下基团所取代：烷基、烯基、炔基、卤素、羟基、烷氧基、氨 基、巯基、芳基、杂芳基等；
且排除化合物IMA-1
在本发明的一个实施方式中，R1和R2各自独立地选自H、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6炔基、卤素(包括F、Cl、Br、I)、 氨基，上述基团各自任选被一个或多个选自如下基团所取代：C1-6烷 基、C2-6烯基、C2-6炔基、卤素、羟基、和C1-6烷氧基。
在本发明的另一个实施方式中，R1和R2各自独立地选自H、C1-6烷基和C1-6烷氧基。
在本发明的其他实施方式中，R1选自H或C1-6烷基。
在本发明的其他实施方式中，R2选自H或C1-6烷氧基，例如甲氧 基，乙氧基，丙氧基，丁氧基，戊氧基，和己氧基。
在本发明的其他实施方式中，R2选自甲氧基。
在本发明的一个实施方式中，R3选自芳基、杂芳基，例如苯基， 苯并噻唑基，上述基团任选被一个或多个选自如下基团被取代：C1-6烷基、卤素、氨基、羟基、和C1-6烷氧基。
在本发明的另一个实施方式中，R3选自苯基或苯并噻唑基。
在本发明的另一个实施方式中，R3选自苯并噻唑基。
在本发明的一个实施方式中R4选自羟基、烷基、烷氧基、烯基、 炔基、卤素、氨基、巯基、芳基、杂芳基、糖类、糖醛酸类；上述基 团各自任选被一个或多个选自如下基团所取代：烷基、卤素、羟基、 烷氧基、和芳基。
在本发明的一个实施方式中R4选自C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、 C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、氨基、苄基硫基、苯基、吡啶基、 和糖类；上述基团各自任选被一个或多个选自如下基团所取代：烷基、 卤素、羟基和烷氧基。
在本发明的一个实施方式中，R4选自葡萄糖基、甲基、乙基、 丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、乙烯基、丙烯基、乙炔基、 丙炔基、卤素、氨基、苄基硫基、苯基、和吡啶基取代；上述基团各 自任选被一个或多个选自如下基团所取代：烷基、卤素、羟基和烷氧基。
在本发明的一个优选的实施方式中，R4选自羟基、葡萄糖基、 果糖基、半乳糖基、乳糖基、葡萄糖醛酸基、甲基、乙基、丙基、甲 氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、乙烯基、丙烯基、乙炔基、丙炔基、 氟、氯、溴、碘、氨基、苄基硫基、苯基、和吡啶基。
在本发明的另一个优选的实施方式中，R4选自羟基、葡萄糖基、 果糖基、半乳糖基、乳糖基、葡萄糖醛酸基、甲基、甲氧基、乙烯基、 乙炔基、氯、氨基、苄基硫基、苯基、和吡啶基。
在本发明的一个实施方式中，R5选自烷基、烷氧基、烷氧基烷基、 烯基、炔基、卤素、氨基。
在本发明的优选的实施方式中，R5选自甲基、丙氧基甲基、丙烯 基、和丙炔基。
在本发明的一个实施方式中，R6选自烷基、烷氧基、烷氧基烷基、 烯基、炔基、卤素、烷基氨基、胺基、苯基、和吡啶基。
在本发明的优选的实施方式中，R6选自甲基、乙氧基甲基、丙烯 基、丙炔基、乙基氨基、苯基、和吡啶基。
更具体地，本发明涉及如下系列的化合物：
系列1化合物(IMA-2～IMA-11)
系列2化合物(IMA-12～IMA-15)
系列3化合物(IMA-16～IMA-23)
根据本发明的另一个方面，本发明提供一种药物组合物，其特征 在于，所述药物组合物包含4-苄基氨基苯磺酰胺类衍生物或其药学上 可接受的盐、溶剂化物、或代谢产物。
根据本发明，优选所述药物组合物进一步包含药学上可接受的辅 料。
所述药学上可接受的辅料是制药领域中常用或已知的各种辅料， 包括但不限于：稀释剂、粘合剂、抗氧化剂、pH调节剂、防腐剂、 润滑剂、崩解剂等。
所述稀释剂例如：乳糖、淀粉、纤维素衍生物、无机钙盐、山梨 醇等。所述粘合剂例如：淀粉、明胶、羧甲基纤维素钠、聚乙烯吡咯 烷酮等。所述抗氧化剂例如：维生素E、亚硫酸氢钠、亚硫酸钠、丁 羟基茴香醚等。所述pH调节剂例如：盐酸、氢氧化钠、柠檬酸、酒 石酸、Tris、乙酸、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠等。所述防腐剂例如： 对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、间甲酚、苯扎氯铵等。所述 润滑剂例如：硬脂酸镁、微粉硅胶、滑石粉等。所述崩解剂例如：淀 粉、甲基纤维素、黄原胶、交联羧甲基纤维素钠等。
本发明药物的剂型可以是口服剂的形式，例如片剂、胶囊、丸剂、 粉剂、颗粒剂、悬浮剂、糖浆剂等；也可以是注射给药的剂型，例如 注射液、粉针剂等，通过静脉内、腹膜内、皮下或肌肉内的途径；也 可以是口腔给药的形式，例如口崩片、含片、口颊片；还可以是局部 给药的剂型，例如阴道、直肠、皮肤、鼻内等。所有使用的剂型形式 都是药学领域普通技术人员所熟知的。
根据本发明的另一个方面，本发明提供4-苄基氨基苯磺酰胺类衍 生物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或代谢产物在制备治疗和/ 或预防脂肪性肝病及相关代谢性疾病、肥胖及相关代谢性疾病、糖尿 病及相关疾病、缺血再灌注损伤及相关疾病、和/或病理性心肌肥厚及 相关疾病的药物中的用途。
根据本发明，所述脂肪性肝病及相关疾病包括但不限于：单纯性 脂肪变性、非酒精性脂肪肝炎、酒精性脂肪肝病、肝纤维化、肝硬化、 肝癌等。
根据本发明，所述肥胖及相关疾病包括但不限于：肥胖、体重超 标、高脂血症、脂肪肝、冠心病、高血压、睡眠呼吸暂停综合征、心 脑血管疾病、癌症等。
根据本发明，所述糖尿病及相关疾病包括但不限于：高血糖、胰 岛素抵抗、I型糖尿病、II型糖尿病、糖代谢异常、糖尿病肾病、糖 尿病足、肢端肥大症、库欣综合征、甲亢、嗜铬细胞瘤、胰升糖素瘤 等。
根据本发明，所述缺血再灌注损伤及相关疾病优选为肝脏缺血再 灌注损伤及相关疾病、心脏缺血再灌注损伤及相关疾病、肾脏缺血再 灌注损伤及相关疾病、和/或脑缺血再灌注损伤及相关疾病；更优选为 肝脏缺血再灌注损伤及相关疾病和心脏缺血再灌注损伤及相关疾病。 所述缺血再灌注损伤可以是由器官移植、组织部分或全部切除、血管 栓塞导致组织缺血后再通等多种原因引发的。
肝脏缺血再灌注损伤及相关疾病包括但不限于：肝脏囊肿、肝脏 移植、溶栓治疗、肝门阻断术、肝昏迷、肝衰竭、肝脏炎性疾病等。
心脏缺血再灌注损伤及相关疾病包括但不限于：心肌梗塞、心梗 再通损伤、心脏移植、冠状动脉溶栓术、经皮冠状动脉成形术，冠状 动脉内扩张术，冠状动脉旁路术。
肾脏缺血再灌注损伤及相关疾病包括但不限于：肾脏移植、肾脏 囊肿、肾脏血管手术。
脑缺血再灌注损伤及相关疾病包括但不限于：脑卒中、脑血管手 术等。
根据本发明，所述病理性心肌肥厚及相关疾病包括但不限于：心 脏重构例如心室重构、心肌梗塞、心力衰竭、心律失常、高血压、冠 心病、动脉栓塞、心绞痛、心脏传导阻滞等。
本发明的药物可施用于会患有或已经患有上述疾病的任何动物。 这些动物包括人类和非人类的动物，例如宠物或牲畜等。
本发明的药物可以本领域已知的途径施用于受试者，包括但不限 于口服，胃肠外，皮下，肌内，静脉内，腹腔内，肝内，心肌内，肾 内，阴道，直肠，颊，舌下，鼻内，透皮方式等。
施用的剂量将取决于接受者的年龄、健康和体重，联用药物的种 类，治疗频率，给药途径等。药物可以单一日剂量施用，或者总日剂 量以每天两次，三次或四次的分开剂量施用。药物可以手术前、手术 中、手术后施用。剂量可以施用一次或多次，施药时间可以单日至几 个月或更长时间。药物的单次剂量可以在每个患者每天约0.0001至约10000mg的宽范围内变化。该范围可以更特别地为成人(约60kg)每 天约0.001mg/kg至100mg/kg体重/天。
根据本发明，所述药物还可以与其他的治疗上述疾病的药物联用 给药。
一般合成方案
本发明的化合物可以下述反应流程，由市售可获得的起始物质、 文献中已知的化合物或容易制备的中间体，通过使用本领域技术人员 已知的标准合成方法和过程制备。应当理解，当给出典型的或优选的 工艺条件(即，反应温度、时间、反应物的摩尔比例、溶剂、压力等) 时；除非另有说明，否则也可以使用其它制备条件。反应条件可以随 使用的特定反应物或溶剂变化。本领域技术人员应当认识到提供的合 成步骤的性质和顺序可以用于最佳化本文所述化合物的形成目的而变 化。
根据本领域已知的任何合适方法鉴定所制备的化合物。例如，可 以通过核磁共振光谱(例如1H或13C)、红外光谱、分光光度法、质谱， 或通过色谱比如高效液相色谱(HPLC)、气相色谱(GC)、凝胶-渗透色 谱(GPC)或薄层色谱(TLC)监测产物形成。
下述路线，包括在实施例和制备中提及的那些，阐述了式(I)的 化合物的合成方法。本领域技术人员应当理解可以通过不同于本文特 别地描述的那些方法制备本发明的化合物及其中间体。因此，本领域 技术人员可通过本领域已知的合成方法改变本文所述的方法。
当给出溶剂比例时，该比例是以体积计。
本领域技术人员应当理解在随后的方案中列出的实验条件说明了 用于实现所显示的转化的适合条件，并且可能必须或期望改变用于制 备式(I)的化合物所采用的精确条件。
系列1化合物合成流程
系列3化合物合成流程
本发明的药学上可接受的盐可以通过常规的化学方法从含有碱性 或酸性部分的母体化合物合成。通常，这种盐可以通过使这些化合物 的游离酸或碱形式与化学计量的适当的碱或酸在水或有机溶剂或二者 的混合物中反应制备。
实施例
下述举例说明了本发明的各种化合物的合成。这些化合物的合成 仅仅是示例性的，并非限制本发明的范围。在本发明范围之内的另外 的化合物可以是使用在这些实施例中举例说明的方法单独或与本领域 通常已知的技术组合制备。
缩写
在下述列出的实施例和制备和前述方案中，可提及下述缩写词或 其英文表述，也使用本领域常见的其它缩写。使用标准IUPAC命名 法。
DMAP：4-二甲氨基吡啶；
Pyr:吡啶；
TLC：薄层色谱法；
prep-TLC:制备性薄层色谱法；
AcOH:乙酸；
AC2O:乙酸酐；
Ag2O：氧化银；
Dioane:二氧六环；
DIPEA：N,N-二异丙基乙胺；
Pd2(dba)3：三(二亚苄基丙酮)二钯；
Xantphos:4,5-双(二苯基膦)-9,9-二甲基氧杂蒽；
BH3：硼烷；
Me2S:二甲硫醚；
K3PO4：磷酸钾；
Dppf：1,1'-双(二苯基膦)二茂铁；
Pd(OAc)2：醋酸钯；
Pd(PPh3)4:四三苯基磷钯；
K2CO3：碳酸钾；
(HCHO)n：多聚甲醛；
Lindlar catalyst:林德拉催化剂；
MeI：碘甲烷；
Tol.:甲苯；
CuI:氯化亚铜；
TEA:三乙胺
Boc为叔丁氧基羰基；
Boc2O：二碳酸二叔丁酯；
Br：宽的；
tBu：叔丁基；
tBuOH：叔丁醇；
n-BuLi：正丁基锂；
℃为摄氏度；
CDCl3：氘代氯仿；
δ：化学位移；
d：双重峰；
DBU：1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯
DMF：N,N-二甲基甲酰胺；
DMSO：二甲亚砜；
Et2O：乙醚；
EtOAc：乙酸乙酯；
EtOH：乙醇；
Et3N：三乙胺；
g：克；
HCl：盐酸；
H2O：水；
Hr：小时，hrs：多个小时；
K2CO3：碳酸钾；
L：升；
LCMS：液相色谱质谱；
m：多重峰；
M：摩尔；
MeOH：甲醇；
MeONa：甲醇钠；
Mg：毫克；
MgSO4：硫酸镁；
MHz：兆赫；
min：分钟；
mL：毫升；
mmol：毫摩尔；
mol：摩尔；
MS m/z：质谱峰；
MsCl：甲磺酰氯；
NaCN：氰化钠；
NaBH3CN：氰基硼氢化钠；
NaBH4：硼氢化钠；
Na2CO3：碳酸钠；
NaH：氢化钠；
NaOH：氢氧化钠；
KOH：氢氧化钾；
Na2SO4：硫酸钠；
NH3：氨；
NH4Cl：氯化铵；
NH4HCO3：碳酸氢铵；
NH2OH.HCl为盐酸羟胺；
NH4OH为氢氧化铵；
NH4OAc为乙酸铵；
NMP为1-甲基2-吡咯烷酮；
NMR为核磁共振；
PCC：沙瑞特；
DCM：二氯甲烷；
Pd/C：钯碳；
Pd(dppf)Cl2：[1,1’-双(二苯膦基)二茂铁]二氯钯(II)；
Pd(OH)2：氢氧化钯；
Pd(OAc)2：乙酸钯；
pH：酸碱度；
ppm：百万分率；
q：四重峰；
quinoline：喹啉；
rt为室温；
RT为保留时间；
s为单峰；
sat.为饱和的
Tf2O：三氟甲烷磺酸酐；
THF：四氢呋喃；
μL：微升
μmol：微摩尔
TMSCHN2：三甲基硅重氮甲烷
特征化学位移(δ)以来自四甲基硅烷的低磁场(对于1H-NMR)，对 于主要峰的命名使用常规缩写：例如s,单峰；d，双重峰；t，三重峰； q，四重峰；m,多重峰；br,宽峰。下述缩写已用于常用溶剂：CDCl3， 氘代氯仿；DMSO-d6，氘代二甲亚砜；和MeOH-d4，氘代甲醇。当 适当时，可以记录互变异构体的NMR数据；并且一些可交换质子可 能不可见。
使用电喷雾电离(ESI)或大气压化学电离(APCI)记录质谱MS (m/z)。
在其中已经使用制备TLC或硅胶色谱的情况下，本领域技术人员 可以选择任何溶剂组合以纯化期望的化合物。
通常，反应接着是薄层色谱和/或液相色谱-质谱，并且当合适时 进行后处理。本领域技术人员应当认识到纯化可以在各实验之间改变； 通常，选择用于洗脱液/梯度的吸附剂、溶剂和溶剂比，以提供合适的Rf或保留时间。本领域技术人员也应当认识到，HPLC纯化可以以多 种方式进行，包括使用正向固定相、反向固定相、手性固定相和超临 界洗脱液。本领域技术人员能够认识到对色谱和HPLC纯化条件的合 适选择。
实施例1化合物0-3的制备
将化合 物0-1(34.5g,230.1mmol.)和化合物0-2(50.0g,225.6mmol)溶于吡 啶(175mL)，然后于室温下加入DMAP(2.76g,22.5mmol)，并在该 温度下搅拌12小时。TLC点板1：(石油醚/乙酸乙酯＝5/1)化合物 0-2的Rf值～0.50产品0.10，TLC点板2：(石油醚/乙酸乙酯＝1/1) 化合物0-1的Rf值～0.20产品为0.19，将反应液浓缩，然后用乙酸 乙酯打浆(100mL x 3)，最终得到黄色固体的化合物0-3(57.0g,169.9 mmol,75.3％产率,100％纯度)。
δ13.54(brs,1H),8.38-8.36(m,2H),8.11-8.09(m,2H),7.84-7.82 (d,J＝8Hz,1H),7.41-7.39(m,2H),7.39-7.28(m,1H)。
实施例2化合物1的制备
将化合物0-3(57.0g,169.9mmol)溶于醋酸(83.7g,1.40mol, 79.8mL)和甲醇(500mL)，升温至50℃再缓慢加入锌粉(45.6g,697.3 mmol)，然后于50℃下搅拌3小时。将反应液浓缩除去甲醇，然后用 乙酸乙酯打浆(200mL x 4)最终得到黄色固体的化合物1(50.0g, 109.2mmol,64.2％产率,66.7％纯度)。
δ8.25-8.23(d,J＝8Hz,2H),8.07-8.00(m,2H),7.82-7.79(m,1H), 7.70-7.68(m,1H),7.41-7.39(d,J＝8Hz,1H),7.13-7.11(d,J＝8Hz, 2H),6.33(brs,2H)。
实施例3化合物0-5的制备
将化合物0-4(10.0g,14.7mmol)溶于二氯甲烷(30mL)，再在室 温下加入溴化氢醋酸溶液(35％含量)(14.9g,64.4mmol,10mL,35％ 纯度)和醋酸酐(2.18g,21.3mmol,2.00mL)，然后室温下搅拌2个小 时。TLC点板1：(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)原料0.30，产品0.40， 将反应液倒到冰的NaHCO3(20mL)溶液中，然后用乙酸乙酯(20mL x 2)萃取，合并有机层并用无水Na2SO4干燥，浓缩，并通过柱层析法 提纯(中性三氧化二铝)(Al2O3,石油醚/乙酸乙酯＝10/1-1/1,Rf＝0.40) 最终得到白色固体的化合物0-5(10.0g,14.3mmol,97.0％产率)。
实施例4化合物0-6的制备
将化合物0-5(5.00g,7.15mmol)和化合物2(1.31g,8.58mmol) 溶于喹啉(35mL)，再在室温下加入氧化银(3.30g,14.2mmol)，然 后于室温下搅拌12个小时。点板：(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)原料0.40 产品0.30，反应液用乙酸乙酯(300mL)稀释，然后用硅藻土垫过滤， 滤液用0.5M盐酸水溶液(300mL x 10)洗涤。合并有机层并用无水 Na2SO4干燥，浓缩，再通过柱层析法提纯(硅胶石油醚/乙酸乙酯 ＝10:1～1:1)，最终得到白色固体的化合物0-6(4.50g,5.65mmol,78.9％ 产率,96.7％纯度)。
δ10.35(d,J＝0.6Hz,1H),7.44(dd,J＝1.5,7.8Hz,1H),7.26-7.20 (m,1H),7.19-7.14(m,1H),5.33-5.20(m,2H),5.19-5.12(m,1H), 5.11-5.04(m,2H),4.97-4.91(m,1H),4.53(d,J＝7.9Hz,1H),4.44- 4.32(m,2H),4.17-4.03(m,2H),3.90(s,3H),3.85(t,J＝9.3Hz,1H), 3.74-3.64(m,1H),3.59-3.50(m,1H),2.13(s,3H),2.11(s,3H),2.08 (s,3H),2.04(d,J＝6.6Hz,6H),2.00(d,J＝5.6Hz,6H)。
实施例5化合物0-7的制备
将化合物0-6(1.00g,1.30mmol)和化合物1(1.48g,3.24mmol)溶 于甲醇(10mL)和醋酸(5mL)，并于15℃下搅拌2个小时，再加入 氰基硼氢化钠(0.200g,3.18mmol)，并于15℃下搅拌12个小时。点 板：(石油醚/乙酸乙酯＝1/3)原料0.70产品0.40，反应液经过滤， 过滤的滤饼用甲醇(10mLx2)洗净，合并有机相并用饱和NaHCO3 (10mL)调节pH至9，再用乙酸乙酯(20mLx3)萃取。合并有机 层用无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品通过反相纯化(FAcondition)最终 得到黄色固体的化合物0-7(1.30g,941.8μmol,72.5％产率,76.8％纯度)。
实施例6 IMA-2的制备
将化合物0-7(0.300g,283.0μmol)溶于甲醇(6mL)，再加入甲醇 钠(0.060g,1.11mmol)，然后于25℃下搅拌2小时。将反应液浓缩， 粗品通过反相纯化(FA condition)，最终得到白色固体的IMA-2 (150.76mg,193.3μmol,68.3％产率,98.2％纯度)。
δ7.73(d,J＝7.6Hz,1H),7.51-7.48(d,J＝12.0Hz,2H),7.36-7.31 (m,1H),7.26-7.22(m,1H),7.21-7.16(m,1H),7.00-6.95(m,1H), 6.94-6.90(m,1H),6.86-6.83(brt,J＝6.3Hz,1H),6.76-6.77(dd,J＝1.3, 7.4Hz,1H),6.62-6.60(d,J＝8.9Hz,2H),5.28-5.27(d,J＝4.9Hz,1H), 5.24-5.23(d,J＝5.2Hz,1H),5.04-5.03(d,J＝4.9Hz,1H),5.01-4.99(d, J＝5.3Hz,1H),4.89-4.87(d,J＝7.6Hz,1H),4.75(d,J＝1.3Hz,1H), 4.63-4.60(t,J＝5.3Hz,1H),4.56-4.53(t,J＝5.7Hz,1H),4.52-4.45(m, 1H),4.37-4.27(m,2H),3.77(s,3H),3.75-3.67(m,2H),3.65-3.56(m, 1H),3.41(br d,J＝6.6Hz,3H),3.29(br s,3H),3.24-3.12(m,3H),3.09 -2.96(m,2H)。
实施例7化合物1-1B的制备
将化合物1-1A(7.00g,42.1mmol)溶入四氢呋喃(50mL)中，在0℃ 下滴加硼烷-二甲硫醚(10.0M,12.6mL)，反应液在70℃反应3小时。 TLC(石油醚/乙酸乙酯＝3/1)显示原料完全消失，产生一个新的主 点(Rf＝0.56)，将反应液用60mL甲醇淬灭、浓缩。过柱子纯化(石 油醚/乙酸乙酯＝50/1到1/1)得到化合物1-1B(6.00g,93.5％产率)。
实施例8化合物1-1的合成
将PCC(5.00g,23.2mmol)加到二氯甲烷(30mL)中，溶液呈浑浊 状，然后将化合物1-1B(2.00g,13.1mmol)溶入二氯甲烷(10mL)中并 滴加到反应液里，混合物室温搅拌2小时。TLC(石油醚/乙酸乙酯＝ 1/1)显示化合物1-1B完全消耗，产生了一个新的点。反应液用硅藻 土过滤，母液浓缩。过柱子纯化(石油醚/乙酸乙酯50/1出杂质，石 油醚/乙酸乙酯1/1出产物)得到化合物1-1(1.80g,91.2％产率)。
实施例9化合物IMA-3的制备
将化合物1(2.44g,7.99mmol)和化合物1-1(1.8g,11.9mmol)溶入 甲醇(50mL)中，滴加冰醋酸(5.76g,95.8mmol,5.48mL)，反应液在 80℃下搅拌8小时；再在25℃下加入氰基硼氢化钠(502mg,7.99 mmol)，反应液在25℃下继续搅拌1个小时。LCMS显示大部分化合 物1消耗完全。反应液用甲醇淬灭、浓缩。反相纯化(分离条件：0.1％ 氨水)得到白色固体的IMA-3(100mg,2.85％产率,100％纯度)，通 过HNMR和LCMS表征。
分子式：C22H21N3O3S2分子量：439.10质谱(m/z)：440.1
1H-NMR(400MHz DMSO):δ7.72(s,1H),7.52(d,J＝8.7Hz, 2H),7.36-7.31(m,1H),7.28-7.23(m,1H),7.19(s,1H),7.11-7.05(m, 1H),6.90-6.80(m,3H),6.61(d,J＝8.8Hz,2H),4.23(d,J＝5.4Hz, 2H),3.79-3.74(m,3H),2.16-2.09(m,3H)
实施例10化合物IMA-4的合成
把化合物1(154mg,336μmol)和化合物2-1(170mg,1.02mmol) 溶在4mL无水甲醇中，反应液在65℃下反应2小时，然后在0℃下 加入硼氢化钠，在25℃氮气保护下搅拌2小时。LC-MS显示9.45％ 的产物产生。反应液通过反相纯化(0.1％FA condition)得到黄色固体 的IMA-4(56.4mg,33.5％产率,90.9％纯度)，并通过质谱和核磁表征 证明。
分子式：C22H21N3O4S2分子量：455.10质谱(m/z)：456.2
1H-NMR(400MHz DMSO):δ8.14(s,1H),7.73(d,J＝7.8Hz, 1H),7.52(d,J＝8.8Hz,2H),7.37-7.16(m,3H),7.02-6.80(m,4H),6.61 (d,J＝8.9Hz,2H),4.36-4.18(m,2H),3.83-3.71(m,6H)。
实施例11化合物3的制备
化合物2(20.0g,131mmol)溶解在260mL吡啶中，在0℃下加入 N,N-二甲基吡啶(800mg,6.55mmol)和三氟甲烷磺酸酐(40.8g,144 mmol,23.8mL)，反应液在25℃下反应两个小时。TLC(石油醚/乙酸 乙酯＝8/1)显示化合物2消失。反应液用1M的稀盐酸调节pH至6，再用乙酸乙酯(150mL x 2)萃取，有机相用盐水(150mL x 2)洗涤，无 水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到白色油状的化合物3(30.6g,81.91％ 产率)，并通过1H NMR对其表征。
1H-NMR(400MHz DMSO):δ10.23(s,1H),7.52-7.50(m,1H), 7.48-7.44(m,1H),7.32-7.30(m,1H),3.96(s,3H)。
实施例12化合物3-1的制备
将化合物2(5.00g,17.5mmol)，化合物3-a(3.30g 24.6mmol)， 三乙胺(5.34g52.7mmol,7.35mL)和Pd(dppf)Cl2(643mg,879μmol)， 水(3.37g,187mmol,3.37mL)溶于60mL的异丙醇，氮气保护下80℃ 反应两个小时。LC-MS显示化合物2消失，产物生成。向反应液中加 入100mL水，用乙酸乙酯(100mL x 2)萃取，有机相用Na2SO4干燥， 过滤并浓缩。粗品过柱子(二氧化硅,石油醚/乙酸乙酯＝10/1至1/1) 纯化得到黄色固体的化合物3-1(2.40g,81.5％产率,97.0％纯度)，通 过LCMS和1H-NMR对其表征。
分子式：C10H10O2分子量：162.07质谱(m/z)：163.10
1H-NMR(400MHz CDCl3):δ:10.23(s,1H),7.54-7.52(m,1H), 7.39-7.35(m,1H),7.10-7.08(m,1H),7.05-7.01(m,1H),5.78-5.74(m, 1H),5.37-5.33(m,1H),3.89(s,3H)。
实施例13化合物IMA-5的制备
IMA-5的操作步骤与IMA-1高度类似，参见IMA-1的合成。
IMA-5(33.5mg,7.73％产率,90.8％纯度)为黄色固体，通过 LCMS和1HNMR对其表征。
分子式：C23H21N3O3S2分子量：451.10质谱(m/z)：452.10
1H-NMR(400MHz DMSO):δ:7.74(d,J＝8.0Hz,1H),7.51(d,J ＝8.0Hz,1H),7.37-7.33(m,1H),7.26-7.20(m,2H),7.17(d,J＝8.0Hz, 1H),6.93-6.91(m,3H),6.79-6.72(m,1H),5.57(d,J＝8.0Hz,2H), 5.63-5.58(m,1H),5.50-5.47(m,1H),4.29(d,J＝4.0Hz,2H),3.77(s, 3H)
实施例14化合物4-1的制备
将化合物3(3.00g,10.5mmol)和化合物b(2.18g,22.1mmol,3.07 mL)溶解在50mL的N,N-二甲基甲酰胺中，氮气保护下加入三乙胺 (6.54g,64.6mmol,9.00mL)，碘化亚铜(1.00g,5.25mmol)和二三苯 基磷二氯化钯(186mg,265μmol),氮气保护下反应液在80℃下反应 15小时。LC-MS
显示化合物2消失，产物生成。将反应液过滤，向滤液中加入300 mL的乙酸乙酯，用盐水(300mL x 5)洗涤，硫酸钠干燥，过滤，浓缩。 过柱子(二氧化硅,石油醚/乙酸乙酯＝100/1到0/1)纯化得到棕色液体 的化合物4-1(710mg,27.3％产率,94.5％纯度)，通过LCMS对其表 征。
分子式：C13H16O2Si分子量：232.09质谱(m/z)：233.20
实施例15化合物4-2的制备
将化合物4-1(710mg,2.89mmol)溶解于18mL二氯甲烷和9mL 甲醇中，然后加入氢氧化钾(263mg,4.69mmol)，反应液在25℃下反 应14个小时。TLC(石油醚/乙酸乙酯＝5/1)显示化合物4-1(Rf＝0.50) 消失，新点(Rf＝0.40)生成。向反应液中加入30mL的二氯甲烷和30mL的水，水相用二氯甲烷(10mL x 2)萃取，合并的有机相用10 mL盐水洗涤，硫酸钠干燥，过滤并浓缩。化合物4-2(260mg,47.1％ 产率,83.8％纯度)是红色固体，通过LCMS对其表征。
分子式：C10H8O2分子量：160.05质谱(m/z)：161.20
实施例16化合物IMA-6的制备
IMA-6的操作步骤和IMA-3高度类似，请参见IMA-3的合成。
IMA-6(29.86mg,5.62％产率,91.6％纯度)为浅黄色固体，LCMS 和1HNMR对其表征。
分子式：C23H19N3O3S2分子量：449.09质谱(m/z)：450.10
1H-NMR(400MHz DMSO):δ:12.89(s,1H),7.75(d,J＝7.95Hz, 1H),7.52(d,J＝8.80Hz,2H),7.33-7.39(m,1H),7.19-7.29(m,3H), 7.08(br t,J＝5.93Hz,1H),6.93(d,J＝8.19Hz,1H),6.87(d,J＝7.70 Hz,1H),6.57(d,J＝8.80Hz,2H),4.55(s,1H),4.39(d,J＝5.75Hz, 2H),3.81(s,3H)
实施例17化合物IMA-7的制备
IMA-7的操作步骤与IMA-3高度类似，请参见IMA-3的合成。
IMA-3(10.0mg,4.83％产率,97.1％纯度)为浅白色固体。LC-MS 和1HNMR对其进行表征。
分子式：C21H18ClN3O3S2分子量：459.09质谱(m/z)：460.10
1H-NMR(400MHz DMSO):δ:7.62(d,J＝8.0Hz,1H),7.50(d,J ＝8.0Hz,2H),7.24-7.20(m,3H),7.08-7.01(m,2H),6.91(d,J＝4.0Hz, 2H),6.53(d,J＝8.0Hz,2H),4.34-4.33(d,J＝4.0Hz,2H),3.84(m, 3H)
实施例18化合物6-2的制备
化合物6-2的实验操作与IMA-3高度类似，参见IMA-3的合成。
化合物6-2(150mg,24.5％产率)为棕色固体。
分子式：C21H18N4O5S2分子量：470.07质谱(m/z)：471.20
实施例19化合物IMA-8的制备
将化合物6-2(120mg,174μmol)和醋酸(84.0mg,1.40mmol,80.0 μl)溶解于5.00mL甲醇中，然后在50℃下缓慢地加入锌粉(47.0mg, 718μmol)，反应液在50℃下反应30分钟。LC-MS显示化合物6-2消 失，产物生成。将反应液过滤，滤液用反相纯化得到黄色胶状的IMA-8 (19.2mg,23.8％产率,95.2％纯度)。
分子式：C21H20N4O3S2分子量：440.10质谱(m/z)：441.20
1H-NMR(400MHz DMSO):δ:7.62(d,J＝8.0Hz,1H),7.50(d,J ＝8.0Hz,2H),7.24–7.20(m,3H),7.08-7.05(m,2H),6.91(d,J＝4.0Hz, 2H),6.53(d,J＝8.0Hz,2H),4.33(d,J＝4.0Hz,2H),3.84(s,3H)
实施例20化合物7-1的制备
将化合物3(3.00g,10.56mmol)溶解于30.0mL二氧六环中，在氮 气保护下向反应液中加入N,N-二异丙基乙胺(4.09g,31.6mmol,5.52 mL)，三(二亚苄基丙酮)二钯(966mg,1.06mmol)，4,5-双(二苯基 膦)-9,9-二甲基氧杂蒽(1.22g,2.11mmol)和化合物d(5.00g,32.4 mmol,4.50mL)。然后在氮气保护下，反应液在100℃下反应半小时。 LC-MS显示化合物3消失，产物生成。向反应液中加入35.0mL的水， 然后用乙酸乙酯(30.0mL x 2)萃取。将萃取液用盐水(15.0mL x 2)洗涤， 用Na2SO4干燥，过滤，浓缩并过柱子[(SiO2,petroleumether/ethyl acetate＝30/1至1/1).TLC(petroleum ether/ethyl acetate＝8/1,Rf＝0.55)]进行纯化得到亮黄色固体状的化合物7-1(2.30g,7.89mmol, 74.7％产率,98.9％纯度)。对化合物7-1进行表征。
分子式：C16H16O3S分子量：288.08质谱(m/z)：311.10 (M+Na+)
1H-NMR(400MHz DMSO):δ:10.23(s,1H),7.47(t,J＝8.0Hz, 1H),7.36(m,J＝8.0Hz,1H),7.27-7.25(m,1H),6.98-6.96(m,2H), 6.73-6.71(m,2H),4.01(s,2H),3.95(s,3H),3.66(s,3H)
实施例21化合物IMA-9的制备
IMA-9的操作步骤和IMA-3高度类似，参见IMA-3的合成。
IMA-9(55.7mg,4.28％产率,96.9％纯度)为白色固体，HNMR, LCMS对其进行表征。
分子式：C29H27N3O4S3分子量：577.12质谱(m/z)：578.10
1H-NMR(400MHz DMSO):δ:7.36(d,J＝8.0Hz,1H),7.40(d, J＝8.0Hz,2H),7.24-7.17(m,3H),7.07-7.05(m,1H),7.00-6.98(m,2H), 6.93(d,J＝8.0Hz,1H),6.74-6.69(m,4H),6.16(d,J＝8.0Hz,2H),4.11 (d,J＝8.0Hz,2H),3.95(s,2H),3.90(m,3H),3.67(m,3H)
实施例22化合物8-1的制备
将化合物3(4.50g,15.8mmol)，化合物b(2.12g,17.4mmol)和磷 酸钾(10.1g,47.5mmol)溶于35mL的乙二醇二甲醚，再在氮气保护 下加入dppf(1.76g,3.17mmol)和醋酸钯(355mg,1.58mmol)，反应 液在80℃下搅拌5个小时。LCMS显示化合物3完全消失。反应液用100mL的水稀释，乙酸乙酯(50mL x 5)萃取。有机相用饱和食 盐水(100mL x 2)洗涤、无水硫酸钠干燥、过滤、浓缩。prep-TLC(石 油醚/乙酸乙酯＝1/0至0/1)纯化得到浅白色固体的化合物8-1(2.00g, 75.7％纯度)，LCMS和1HNMR对其进行表征。
分子式：C14H12O2分子量：212.08质谱(m/z)：195.00 (M-H2O)
1H-NMR(400MHz CDCl3):δ:9.74(m,1H),7.65-7.62(m,1H), 7.49-7.47(m,1H),7.47-7.44(m,3H),7.35(d,J＝4.30Hz,1H),7.33(d, J＝4.0Hz,1H),7.22-7.20(m,1H),3.80(s,3H)
实施例23化合物IMA-10的制备
IMA-10的实验步骤与IMA-3高度类似，参见IMA-3的合成。
IMA-10(12.1mg,2.55％产率,92.3％纯度)为浅黄色固体。
分子式：C27H23N3O3S2分子量：501.12质谱(m/z)：502.10
1H-NMR(400MHz DMSO):δ:7.72(d,J＝8.0Hz,1H),7.46(d,J ＝8.0Hz,2H),7.41-7.38(m,2H),7.33-7.30(m,2H),7.29-7.24(m,4H), 7.20-7.18(m,1H),,6.98-6.96(m,2H),6.87-6.84(m,1H),6.42(d,J＝ 8.0Hz,2H),3.89(d,J＝8.0Hz,2H),3.64(s,3H)
实施例24化合物9-1的制备
将化合物3(3.74g,13.2mmol)，化合物c(1.94g,15.8mmol)，三 环己基膦(1.11g,3.95mmol,1.28mL)和四三苯基磷钯(4.56g,3.95 mmol)溶解于50.0mL二氧六环中，加入碳酸钾水溶液(2M,19.7mL)， 氮气保护下反应液在80℃下反应4个小时。LCMS显示化合物3完全 消失，产物生成。反应液用100mL水淬灭，乙酸乙酯(50mL x 5) 萃取。合并的有机相用饱和氯化钠(100mL x 2)洗涤，硫酸钠干燥， 过滤并浓缩得到粗品。粗品用prep-TLC(石油醚/乙酸乙酯＝1/0至 0/1)纯化得到浅黄色固体化合物9-1(1.60g,54.1％产率,95.0％纯度)，LCMS和1HNMR对其进行表征。
分子式：C13H11NO2分子量：213.08质谱(m/z)：214.00
1H-NMR(400MHz CDCl3):δ:9.78(s,1H),8.67-8.66(m,1H), 8.58-8.57(m,1H),7.68-7.65(m,2H),7.55-7.51(m,1H),7.43-7.39(m, 1H),7.25-7.22(m,1H),3.80(s,3H)
实施例25化合物IMA-11的制备
IMA-11的操作和IMA-3高度类似，参见IMA-3的合成。
IMA-11(20.5mg,4.52％产率,96.9％纯度)为浅白色固体， HNMR和LC-MS对其进行表征。
分子式：C26H22N4O3S2分子量：502.11质谱(m/z)：503.10
1H-NMR(400MHz DMSO):δ:8.50-8.49(m,1H),8.46-8.45(m, 1H),7.72-7.69(m,2H),7.46(d,J＝8.0Hz,2H),7.42-7.40(m,1H), 7.39-7.29(m,2H),7.25-7.23(m,1H),7.17-7.15(m,1H)。7.03-7.00(m, 2H),6.83-6.80(m,1H),6.43(d,J＝8.0Hz,2H),3.91(d,J＝8.0Hz, 2H),3.66(s,3H)
实施例26化合物IMA-12的制备
IMA-12的操作步骤和IMA-3高度类似，参见IMA-3的合成。
IMA-12(19.0mg,8.24％产率,89.3％纯度)为白色固体，并通过 1HNMR以及LCMS证明。
分子式：C22H21N3O4S2分子量：455.10质谱(m/z)：455.9
1H-NMR(400MHz DMSO):8.78(s,1H),7.69(d,J＝7.8Hz,1H), 7.59-7.52(m,2H),7.32-7.22(m,2H),7.13(t,J＝7.6Hz,1H),6.83(d,J ＝7.8Hz,1H),6.70-6.61(m,3H),6.45(d,J＝7.2Hz,1H),4.52(s,2H), 3.78(s,3H),3.05(s,3H)。
实施例27化合物IMA-13的制备
IMA-13的操作步骤和IMA-3高度类似，请参见IMA-3的合成。
IMA-13(11.7mg,4.59％产率,91.1％纯度)为白色固体并通过 HNMR以及LCMS证明。
分子式：C25H27N3O5S2分子量：513.14质谱(m/z)：514.0
1H-NMR(400MHz DMSO):δ8.82(s,1H),7.72(d,J＝7.8Hz, 1H),7.55(d,J＝9.0Hz,2H),7.36-7.30(m,1H),7.27-7.23(m,1H), 7.20-7.15(m,1H),6.85-6.81(m,1H),6.67-6.61(m,3H),6.42(d,J＝7.8 Hz,1H),4.48(s,2H),3.78(s,3H),3.51-3.45(m,3H),3.21(s,3H), 1.84-1.74(m,2H)。
实施例28化合物1-3的制备
化合物13-1的操作步骤和IMA-3高度类似，参见IMA-3的合成。
化合物13-1(70.0mg,28.0％产率)为灰色固体。
分子式：C27H29N3O4S2Si分子量：551.14质谱(m/z)：552.2
实施例29化合物IMA-15的制备
将化合物13-1(70.0mg,127μmol)溶解于3mL甲醇以及0.5mL 四氢呋喃溶液中，向溶液中加入氢氧化钾(10.7mg,190μmol),反应 液在20℃下搅拌1小时。LCMS显示有产物生成。将反应液用20mL 水稀释，浓缩去除甲醇和四氢呋喃，用乙酸乙酯(10mL x 3)萃取，将合并的有机相用无水硫酸钠干燥后过滤、浓缩得到粗品。粗品通过反 相纯化(0.1％的甲酸体系)得到白色固体的IMA-15(10.8mg,17.7％ 产率,99.1％纯度)，通过HNMR和LCMS对其表征。
分子式：C24H21N3O4S2分子量：479.10质谱(m/z)：480.1
1H-NMR(400MHz DMSO):δ13.10-12.78(m,1H),8.86(s,1H), 7.73(d,J＝7.9Hz,1H),7.61(d,J＝9.0Hz,2H),7.35-7.29(m,1H), 7.27-7.23(m,1H),7.18(t,J＝7.6Hz,1H),6.87-6.82(m,1H),6.77(d,J ＝9.0Hz,2H),6.69-6.63(m,1H),6.62-6.58(m,1H),4.53(s,2H),4.26 (d,J＝2.0Hz,2H),3.79(s,3H),3.20(t,J＝2.1Hz,1H)。
实施例30化合物IMA-14的制备
将化合物IMA-15(50.0mg,104μmol)溶于6mL四氢呋喃溶液 中，在氮气保护下向溶液中加入林德拉催化剂(86.1mg,20.9μmol,5％ 纯度),真空抽走反应液中的气体，并充入氢气，反复几次操作后将反 应液在20℃时氢气球保护下(15psi)下搅拌2小时。LCMS显示产物生 成。将反应液过滤后浓缩得到粗品，粗品通过反相纯化(0.1％的甲酸 体系)得到IMA-14(11.4mg,23.6μmol,22.6％产率,99.4％纯度)，通 过LCMS和1HNMR对其表征。
分子式：C24H23N3O4S2分子量：481.11质谱(m/z)：482.0
1H-NMR(400MHz DMSO):δ13.32-12.59(m,1H),8.84(s,1H), 7.72-7.66(m,1H),7.54(d,J＝8.9Hz,2H),7.32-7.22(m,2H),7.18-7.09 (m,1H),6.84(d,J＝8.1Hz,1H),6.71-6.60(m,3H),6.50(d,J＝7.2Hz, 1H),5.92-5.78(m,1H),5.13(dd,J＝1.8,13.9Hz,2H),4.47(s,2H), 4.05(d,J＝3.7Hz,2H),3.79(s,3H)。
实施例31化合物19-1的制备
向化合物1(2.00g,4.37mmol)的10mL的N,N-二甲基甲酰胺溶 液中加入碘甲烷(4.01g,28.2mmol,1.76mL)和碳酸钾K2CO3(1.21g, 8.74mmol)，反应液在25℃下搅拌2小时。LCMS原料消失，产物 生成。将反应液倒入20mL水中，用20mL乙酸乙酯萃取两次，有机 相用无水硫酸钠干燥、过滤、浓缩得到粗品。粗品通过制备纯化得到 黄色固体的化合物19-1(0.3g,21.5％产率)。
分子式：C14H23N3O2S2分子量：319.04质谱(m/z)：319.9
1H-NMR(400MHz DMSO):δ7.82-7.80(d,J＝8Hz,1H), 7.53-7.50(d,J＝12Hz,3H),7.47-7.43(t,J＝8Hz,1H),7.30-7.26(m, 1H),6.60-6.56(d,J＝16Hz,2H),5.92(s,2H),3.58(s,3H)。
实施例32化合物IMA-16的制备
IMA-16的操作步骤与IMA-3高度类似，参见IMA-3的合成。
IMA-16(51.09mg,17.8％产率,99.4％纯度)为白色固体并通过 LCMS和1HNMR表征。
分子式：C22H21N3O4S2分子量：455.10质谱(m/z)：455.9
1H-NMR(400MHz DMSO):δ8.74(s,1H),7.95-7.93(d,J＝8Hz, 1H),7.71-7.69(d,J＝8Hz,1H),7.55-7.53(d,J＝8Hz,2H),7.45-7.40 (m,1H),7.35-7.30(m,1H),7.25-7.20(m,1H),6.84-6.82(d,J＝8Hz, 1H),6.71-6.67(m,2H),6.65-6.63(d,J＝8Hz,2H),4.22-4.20(d,J＝8 Hz,2H),3.77(s,3H),3.40(s,3H)。
实施例33化合物20-1的制备
化合物20-1的操作过程与化合物19-1的操作高度类似，请参见 化合物19-1的合成。
化合物20-1(100mg,264μmol,6.06％产率)是黄色油状，并通过 HNMR表征。
分子式：C17H19N3O3S2分子量：377.09质谱(m/z)：378.2
1H-NMR(400MHz DMSO):δ7.91-7.81(m,1H),7.61-7.44(m, 4H),7.37-7.29(m,1H),6.64(d,J＝8.8Hz,2H),5.99(s,2H),4.33-4.16 (m,2H),3.31(t,J＝6.1Hz,2H),3.20-3.10(m,3H),1.89(t,J＝6.4Hz, 2H)。
实施例34化合物IMA-17的制备
IMA-17的操作过程与IMA-3的操作高度类似，参见IMA-3的合 成。
IMA-17(69.7mg,50.4％产率,98.4％纯度)为黄色固体，并通过 LCMS和1HNMR证明。
分子式：C25H27N3O5S2分子量：513.14质谱(m/z)：514.4
1H-NMR(400MHz DMSO):δ8.79(s,1H),7.95(d,J＝7.3Hz, 1H),7.71(d,J＝7.9Hz,1H),7.57(d,J＝9.0Hz,2H),7.44-7.37(m, 1H),7.34-7.25(m,2H),6.87-6.82(m,1H),6.75-6.62(m,4H),4.23(d,J ＝5.7Hz,2H),4.02(t,J＝7.2Hz,2H),3.83-3.75(m,3H),3.40-3.34(m, 5H),1.96-1.86(m,2H)。
实施例35化合物21-1的制备
化合物21-1的操作步骤和化合物19-1高度类似，请参见化合物 19-1的合成。
化合物21-1(80.0mg,21.2％产率)为黄色固体并通过LCMS表 征.
分子式：C16H15N3O2S2分子量：345.06质谱(m/z)：346.0
1H-NMR(400MHz DMSO):δ7.94-7.91(m,1H),7.69-7.67(m, 1H),7.58-7.56(m,2H),7.44-7.36(m,1H),7.31-7.21(m,1H),6.60-6.58 (m,2H),6.30(s,2H),5.98-5.77(m,2H),5.27-5.22(m,1H),5.17-5.12 (m,1H),4.62-4.61(m,2H)。
实施例36化合物IMA-18的制备
IMA-18的操作步骤和IMA-3高度类似，请参见IMA-3的合成。
IMA-18(11.08mg,9.38％产率,94.4％纯度)是黄色固体，通过 HNMR和LCMS表征。
分子式：C24H23N3O4S2分子量：481.11质谱(m/z)：482.0
1H-NMR(400MHz DMSO):δ8.75(s,1H),7.95-7.93(d,J＝8Hz, 1H),7.70-7.68(d,J＝8Hz,1H),7.60-7.58(d,J＝8Hz,2H),7.45-7.40 (m,1H),7.35-7.30(m,2H),6.84-6.83(d,J＝4Hz,1H),6.73-6.72(m, 1H),6.70-6.68(m,2H),5.94-5.87(m,1H),5.28-5.13(m,2H),4.63-4.62 (m,2H),4.23-4.22(m,2H),3.78(s,3H)。
实施例37化合物22-1的制备
化合物22-1的操作步骤和化合物19-1高度类似，请参见化合物 19-1的合成。
化合物22-1(100mg,6.06％产率)是黄色油状，通过HNMR对其 表征。
分子式：C16H13N3O2S2分子量：343.04质谱(m/z)：344.1
1H-NMR(400MHz DMSO):δ7.86(dd,J＝0.70,7.9Hz,1H), 7.58-7.48(m,4H),7.33(s,1H),6.59(d,J＝8.8Hz,2H),5.96(s,2H), 5.02(d,J＝2.4Hz,2H),3.37(t,J＝2.4Hz,1H)。
实施例39化合物IMA-19的制备
IMA-19的操作过程与IMA-3高度类似，参见IMA-3的合成。
IMA-19(23.2mg,52.0％产率,93.7％纯度)为黄色油状，通过 LCMS和1HNMR对其表征。
分子式：C24H21N3O4S2分子量：479.10质谱(m/z)：480.0
1H-NMR(400MHz DMSO):δ8.73-8.85(m,1H),7.97(d,J＝7.75 Hz,1H),7.75(d,J＝8.13Hz,1H),7.64(d,J＝9.01Hz,2H),7.39-7.46 (m,1H),7.28-7.36(m,2H),6.84(dd,J＝7.63,1.75Hz,1H),6.60-6.75 (m,4H),4.82(d,J＝2.25Hz,2H),4.23(d,J＝5.88Hz,2H),3.78(s, 3H),3.20(t,J＝2.25Hz,1H)
实施例40化合物23-2的制备
在化合物23-1(500mg,1.49mmol)甲苯溶液(3.00mL)里加入化合 物23a(834mg,1.94mmol)、氯化亚铜(15.0mg,151μmol)和三乙胺(415 μl,2.98mmol),反应液在25℃下搅拌8小时。LC-MS显示化合物 23-1完全被消耗掉，产物生成。该反应液直接过滤，收集滤饼，滤饼 在25℃下用8mL乙酸乙酯打浆30分钟，过滤得到白色固体。 LC-MS和HNMR显示白色固体即化合物23-2(460mg,74.9％产率, 100％纯度)。
分子式：C19H13N3O4S2分子量：411.03质谱(m/z)：412.1
1H-NMR(400MHz,DMSO):δ:8.37-8.35(d,J＝8.0Hz,2H), 8.05-8.00(m,3H),7.63(s,3H),7.51-7.49(d,J＝6.4Hz,2H),7.39(s, 2H),6.80-6.79(d,J＝4.4Hz,1H)
实施例41化合物23-3的制备
在50℃下，向化合物23-2的醋酸和甲醇溶液里缓慢的加入锌粉， 混合物在50℃下搅拌3小时。LC-MS显示化合物23-2消耗完全，产 物生成。反应液直接过滤，浓缩棕色的母液得到灰色固体的化合物 23-3(200mg,89.8％产率)，通过HNMR对其表征。
分子式：C19H15N3O2S2分子量：381.06质谱(m/z)：381.9
1H-NMR(400MHz,DMSO):δ:7.90-7.88(d,J＝7.2Hz,1H), 7.64-7.61(m,3H),7.44-7.33(m,4H),7.32-7.28(m,2H),6.58-6.57(d,J ＝2.0Hz,1H),6.56-6.55(d,J＝2.0Hz,2H),5.94(s,2H)
实施例42化合物IMA-20的制备
IMA-20的操作步骤和化合物IMA-3高度类似，请参见化合物 IMA-3的合成。
IMA-20(15.93mg,5.87％产率,100％纯度)为白色固体，通过 HNMR和LC-MS得到验证。
分子式：C27H23N3O4S2分子量：517.11质谱(m/z)：518.1
1H-NMR(400MHz,DMSO):δ:8.76(s,1H),7.94-7.82(m,1H), 7.68-7.56(m,3H),7.47-7.41(m,4H),7.35-7.28(m,2H),6.91(t,J＝6.0 Hz,1H),6.84(d,J＝6.6Hz,1H),6.77-6.67(m,3H),6.59(d,J＝8.8Hz, 2H),4.22(d,J＝5.7Hz,2H),3.78(s,3H)
实施例43化合物IMA-21的制备
在化合物10-1(50.0mg,113μmol)的二氧六环溶液(2.00mL)中 加入化合物24a(28.0mg,136μmol)、N,N二甲基乙二胺(10.0mg,113 μmol)，碘化亚铜(1.08mg,5.66μmol)和碳酸钾(40.0mg,289μmol)。 然后这个混合物在80℃下搅拌8个小时。LC-MS显示大约有15.5％ 的产品mass值在RT＝0.791分钟时被检测出来。该反应液直接过滤， 浓缩后的滤液通过反相柱(千分之一的三氟乙酸条件)纯化得到 IMA-21(2.08mg,3.16％产率,89.3％纯度)，冻干后性状为黄色固体。
分子式：C26H22N4O4S2分子量：518.11质谱(m/z)：519.0
1H-NMR(400MHz,CHLOROFORM-d):δ:8.41(br s,2H), 7.56-7.48(m,4H),7.34(td,J＝7.6,15.8Hz,2H),7.24-7.17(m,2H), 7.03(dd,J＝7.8,16.3Hz,2H),6.79(s,2H),6.35-6.24(m,2H), 4.48-4.39(m,2H),3.74(s,3H)
实施例44化合物25-1的制备
化合物25-1的操作过程与化合物19-1高度类似，请参见化合物 19-1的合成。
化合物25-1(130mg,12.9％产率)是黄色固体，通过HNMR表 征。
分子式：C20H24N4O4S2分子量：448.12质谱(m/z)：449.0
1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ8.04(d,J＝7.34Hz,1H),7.78(d,J ＝8.07Hz,1H),7.60(d,J＝8.80Hz,2H),7.46-7.53(m,1H),7.36-7.43 (m,1H),7.03(t,J＝5.56Hz,1H),6.68(d,J＝8.80Hz,2H),6.36-6.38 (m,1H),6.38(s,1H),4.02-4.17(m,2H),3.35(q,J＝5.66Hz,2H),1.45 (s,9H)。
实施例45化合物25-2的制备
化合物25-2的操作过程与IMA-3高度类似，参见化合物IMA-3 的合成。
化合物25-2(60.0mg,35.4％产率)是白色固体。
分子式：C28H32N4O6S2分子量：584.18质谱(m/z)：585.4
实施例46化合物IMA-22的制备
将化合物25-2(60.0mg,102μmol)溶于1.5mL乙酸乙酯，再向反应液 中加入盐酸气二氧六环(1mL)，25℃下搅拌一个小时。LC-MS显示化 合物25-2反应完全，同时产物生成。将反应液浓缩得到黄色的固体 IMA-22(59.65mg,96.3％纯度)，并通过HNMR和LCMS表征。
分子式：C23H24N4O4S2分子量：484.12质谱(m/z)：485.3 1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ8.13(s,3H),7.97-8.00(m,1H),7.72(d, J＝7.95Hz,1H),7.59(d,J＝9.17Hz,2H),7.41-7.46(m,1H),7.32-7.37 (m,1H),6.85(dd,J＝7.70,1.71Hz,1H),6.67-6.76(m,4H),4.24(s, 2H),4.20(t,J＝6.48Hz,2H),3.78(s,3H),3.12-3.18(m,2H)。
实施例47化合物26-2的制备
将化合物26-1(10.0g,25.2mmol)和化合物2(3.30g,21.7mmol) 溶于喹啉(20mL)，向溶液加入氧化银(10.0g,43.2mmol)。反应液在15℃下搅拌3小时。TLC点板(石油醚/乙酸乙酯＝3/1)显示化合物2 已消耗完，并产生一个新的主点。将反应液浓缩去除喹啉，然后用乙 酸乙酯(60mL)稀释，用硅藻土过滤。滤液用盐酸(0.5M,60mL)洗 涤5次，合并的有机相用无水硫酸钠干燥后过滤浓缩得到粗品。将其 经过柱纯化(石油醚/乙酸乙酯＝10/1～1/1)得到亮黄色固体的化合 物26-2(4.20g,41.3％产率)。
实施例48化合物26-3的制备
将化合物26-2(3.00g,6.40mmol)和化合物1(6.00g,19.7mmol) 溶于(30mL)甲醇和醋酸(40mL)，并与15℃下搅拌2小时，再将氰 基硼氢化钠(2.62g,41.6mmol)分批加入反应液中，随后反应液在15℃ 下搅拌3小时。TLC板(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)显示化合物7已消 耗完，并产生一个新的主点。将反应液浓缩去除大部分甲醇，将固体 过滤掉。滤液倒入水(100mL)中，并用碳酸氢钠固体中和至pH约为 7，最后用乙酸乙酯(100mL×3)萃取，合并的有机相用无水硫酸钠干 燥后过滤浓缩得到粗品。将其经反向柱层析分离纯化(0.1％甲酸体系) 得到亮黄色固体化合物的26-3(1.50g,29.4％产率,95.1％纯度)，并经 LCMS对其表征。
LCMS:RT＝0.944min,MS(M+1):758.5.
实施例49化合物26-4的制备
将化合物26-3(1.00g,1.32mmol)溶于甲醇(15mL)和四氢呋喃 (3mL)，在氮气保护下向反应液缓慢滴加三甲基硅重氮甲烷(2M， 6.6mL)，氮气保护下反应液在20℃搅拌2小时。LCMS显示化合物 26-3已消耗完，并有产物生成。将反应液浓缩后经反向柱层析分离纯化(0.1％甲酸体系)得到白色固体的化合物26-4(350mg,34.4％产 率)，并通过LC-MS和1HNMR对其表征。
LCMS:RT＝0.960min,RT＝1.036min,MS(M+1):772.5.
1H-NMR:400MHz DMSO
δ7.94(dd,J＝0.6,7.9Hz,1H),7.70(d,J＝8.1Hz,1H),7.52(d,J ＝9.0Hz,2H),7.42-7.28(m,3H),7.07-7.01(m,1H),6.98-6.94(m,1H), 6.72(dd,J＝1.0,7.6Hz,1H),6.59(d,J＝8.7Hz,2H),5.45(t,J＝9.7 Hz,1H),5.34(d,J＝7.9Hz,1H),5.11(dd,J＝7.8,9.8Hz,1H),5.01(t, J＝9.8Hz,1H),4.54-4.45(m,2H),4.40-4.32(m,1H),3.79(s,3H),3.45 (s,3H),3.41(s,3H),2.06-1.97(m,9H)
实施例50化合物IMA-23的制备
将化合物26-4(350mg,453μmol)和一水合氢氧化锂(95.2mg, 2.27mmol)溶于四氢呋喃(3mL)和水(1mL)，反应液在25℃搅拌1小 时。LCMS显示有产物生成。将反应液用水(10mL)稀释后浓缩去除 四氢呋喃，然后用盐酸(0.5M)调节pH至6。最后用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，合并的有机相用无水硫酸钠干燥后过滤浓缩得到白色固体 的化合物IMA-23(251.78mg,86.3％产率,98.2％纯度)，并经LCMS 和HNMR对其表征。
LCMS:RT＝0.922min,MS(M+1):632.2.
LCMS:RT＝2.161min,MS(M+1):632.0.
1HNMR:400MHz DMSO
δ7.95(d,J＝7.9Hz,1H),7.71(d,J＝7.9Hz,1H),7.54(d,J＝9.0 Hz,3H),7.43-7.36(m,1H),7.34-7.27(m,1H),7.01-6.95(m,1H), 6.95-6.91(m,1H),6.75(dd,J＝8.2,11.7Hz,3H),5.23(d,J＝4.0Hz, 1H),5.12(d,J＝4.2Hz,1H),4.88(d,J＝6.8Hz,1H),4.49-4.40(m, 1H),4.37-4.28(m,1H),3.76(s,3H),3.50(d,J＝9.3Hz,1H),3.42(s, 2H),3.44-3.39(m,1H),3.27(s,1H),3.29-3.23(m,2H)
活性实施例
实验动物：选用8-10周龄、体重在24g-27g、雄性C57BL/6品系 的野生型小鼠(购自北京华阜康生物科技股份有限公司)进行实验。
动物饲养:所有实验小鼠均饲养在武汉大学SPF级实验动物中心。 SRF级小鼠饲料购自北京华阜康生物科技股份有限公司。饲养条件： 室温在22-24℃之间，湿度在40-70％之间，明暗交替照明时间为12h， 自由饮水摄食。
在以下实施例中所采用的细胞模型和各项研究指标的检测方法：
1.小鼠原代肝细胞分离、培养：
1)麻醉小鼠，固定，消毒。
2)无菌剪刀依次剪开小鼠腹部皮肤及腹膜，用棉签轻轻拨动小鼠 肠胃，暴露出下腔静脉及门静脉。
3)在下腔静脉处打一个活结，用棉签压住下腔静脉，使下腔静脉 血管鼓起，在棉签下方插入有套管的留置针(22G)，慢慢抽出留置 针中的金属针，待血液充满整个留置针后，结扎下腔静脉，固定留置 针。
4)注入前灌流液，待肝脏微微鼓起，立即剪断门静脉，继续注入 前灌流液。
5)注入含酶的灌流液前，止血夹夹住上腔静脉。注入含酶的后灌 流液35ml-40ml，棉签压肝叶，肝叶有凹陷，且为弹起时即为消化好。
6)提起胆囊，将整个肝脏剪下，放60mm培养皿中洗一次，置另 一个60mm培养皿中，用显微镊固定住，另一把钝性弯镊轻轻扒肝脏， 可见溶液浑浊。
7)70um滤网过滤，用巴氏吸管一滴一滴过滤，用巴氏管轻轻 拨动截留的滤渣，用完全培养液洗一次。
8)将过滤得到的盖上管盖，上下轻轻颠倒混匀，500rpm(50G)， 1min，4℃离心。
9)弃去上清，加入30ml完全培养基，上下颠倒混匀，500rpm (50G)，1min，4℃离心。
10)弃上清，加完全培养基(沿管壁滴加)，颠倒混匀，接种到 包被好的培养皿或培养板。
11)2-4小时后，预温PBS洗一次，加完全培养基培养，37℃5％ 二氧化碳，静置培养。
2.小鼠原代肝细胞棕榈酸酯及油酸(PA/OA)刺激和药物处理：
1)贴壁的小鼠原代肝细胞正常DMEM完全培养基培养，药物 预处理1小时，浓度20μM.
2)弃去旧培养基，PBS洗1-2次。
3)药物组加入含有药物的PA/OA(PA 0.5mM,OA 1mM)溶液， 药物终浓度为20μM；对照组加入含有等体积对照液的PA/OA(PA 0.5mM,OA 1mM)溶液。
4)PA/OA刺激4小时样品用于检测原代肝细胞中炎症因子 mRNA表达水平；PA/OA刺激18小时样品用于检测原代肝细胞中脂 质代谢相关因子mRNA表达水平和原代肝细胞油红O染色实验。
3.细胞油红O染色：
1)原代肝细胞弃去旧培养基，PBS轻缓洗1-2次。
2)4％多聚甲醛固定1h。
3)弃去固定液，PBS洗2次。
4)60％异丙醇漂洗一次。
5)放通风橱5min，晾干，出现白点为止。
6)加新鲜配制并过滤的油红O染液，加双蒸水。油红O染液： 双蒸水＝3:2，室温放置10min过滤，0.6ml/孔，室温染色15min。
7)弃去染液，PBS洗2次。
8)苏木精复染1min，水冲洗至变蓝，观察。(注:7、8两步可 选择性省去)
9)脱色，加入60％异丙醇洗背景。
10)弃异丙醇，加PBS，4℃保存并观察拍照。
4.新生大鼠原代心肌细胞分离、培养：
1)用棉球蘸75％酒精，仔细擦拭鼠婴身体，将其放在一个干净 的纸盒中，移入超净工作台。
2)用眼科镊镊取鼠婴放入75％酒精中浸泡数秒，对其颈部以下 消毒，抓取鼠婴，用眼科剪在剑突处正中线稍偏左开胸，轻轻挤压胸 廓，让心脏跳出，迅速用显微镊取下心脏，放入盛有10ml DMEM/F12 液的玻璃平皿中。再取下一只，重复以上过程。
3)轻柔清洗心脏后转入另一个盛有6ml DMEM/F12的60mm 培养皿中，用眼科剪将心脏剪成1-2mm3的碎片。
4)将剪碎的组织转入到放有转子的血清瓶中，吸去培养基，加 入酶消化液。
5)将血清瓶置于磁力搅拌器上的烧杯中，调整位置，保证探头 在烧杯中的液面以下，设定转速为150r/min，消化15min，静止数秒 钟，吸取上清液，弃去。
6)加入酶消化液，用吸管轻轻吹打数下，继续按设定参数置于 磁力搅拌器上消化15min。静止数秒钟，吸取上清液，放入预先放好 含20％小牛血清的DMEM/F12培养基的50ml离心管中终止消化，并 置于冰箱4℃保存
7)重复步骤6。取上清时应尽量取尽，当组织块变白并明显变 小时，终止消化。
8)将收集好的心肌细胞悬液，以1500rpm转速离心8min，用 吸管轻柔吸取上清液，弃去。
9)在离心管中加入适量培养基，轻柔吹打重悬细胞，集中至1 个50ml离心管中，轻柔混匀。
10)将细胞悬液经细胞40μm过滤网过滤，以滤去细胞团块，用 2ml培养基冲洗离心管和滤膜。
11)将细胞接种在培养皿中进行差时贴壁90min。
12)用0.1％明胶包被将要接种的器皿，开启紫外灯照射15min， 并开鼓风。
13)取出一个滤网置于50ml离心管上，吸取未贴壁的细胞悬液 过滤。
14)根据细胞悬液的总量加入Brdu(终浓度0.1mM)，轻柔混 匀之后，加入到包被好明胶的器皿中。
15)37℃5％二氧化碳,孵育48小时用PBS清洗1次，更换培养 基。
5.新生大鼠原代心肌细胞缺氧复氧刺激和药物处理：
1)贴壁的心肌细胞使用预温PBS洗2次，弃去。
2)药物组细胞使用对应的药物预处理2小时，对照组细胞使用空 白对照液处理2小时后，进行缺氧复氧处理。
3)弃去旧培养基，使用无糖无血清的DMEM培养基，并放 O2/CO2细胞培养系统的培养箱内(37℃，5％CO2，1％O2)缺氧培养 相应时间后，换完全培养基复氧培养。
3)复氧培养相应的时间，到复氧培养时间后，弃去上清，用PBS洗2 次。
4)缺氧3小时，复氧2小时处理新生大鼠原代心肌细胞用于 qPCR检测；缺氧15小时，复氧6小时处理新生大鼠原代心肌细胞用 于CCK8检测。
6.细胞活力检测：
1)新生大鼠原代心肌细胞铺于96孔板，刺激完成后，每孔加入 10μl CCK-8溶液,空白对照组加入相应量的培养液和CCK8溶液
2)在细胞培养箱中继续培养1h
3)在450nm测定吸光度，同时使用630nm的波长作为参考波 长进行波长测定。
7.大鼠原代心肌细胞肾上腺素(PE)刺激和药物处理：
1)大鼠原代心肌细胞正常培养，药物组使用相应药物预处理6 小时，药物浓度为5μM，对照组使用等体积对照溶液处理。
2)将PE加入培养基中，使终浓度为10μM。
3)PE刺激48小时后，收集细胞样品用于后期qPCR检测。
8.大鼠原代心肌细胞α-辅肌动蛋白染色：
1)吸去培养皿中的培养液，PBS漂洗细胞爬片
2)将RCL-2组织固定液滴于培养皿内，室温固定10分钟
3)弃去固定液，PBS漂洗5分钟×3次
4)将0.2％Triton X-100滴于培养皿内，室温通透5分钟
5)弃去0.2％Triton X-100，PBS漂洗5分钟×3次
6)将8％羊血清滴于培养皿内，摇床上室温封闭1h
7)将anti-α-辅肌动蛋白和1％羊血清分别滴于培养皿中，每皿 加入液体50μl；封口膜盖好，4℃孵育过夜
8)将4℃孵育过夜的细胞爬片取出，去除封口膜，弃去一抗， PBS漂洗5分钟×6次
9)二抗用PBS稀释成1/200滴于培养皿中，每皿加入液体50μl； 用封口膜盖好，37℃避光孵育1h
10)去除封口膜，弃去二抗，PBS漂洗5分钟×3次
11)用小钩子将爬片取出，蒸馏水漂洗，SlowFade Gold antifade reagent withDAPI封片
12)正置荧光显微镜下观察，拍照
9.小鼠原代肝细胞缺氧复氧刺激和药物处理：
1)小鼠原代肝细胞使用预温，PBS洗2次，弃去上清。
2)药物组细胞使用相应药物预处理2小时后进行缺氧复氧刺激。 换无糖无血清的DMEM培养基，并放O2/CO2细胞培养系统的培养箱 内(37℃，5％CO2，1％O2)缺氧培养，3小时后，换完全培养基复 氧培养6小时。对照组细胞使用等体积对照溶剂平行处理。
3)培养至相应时间后，弃去上清，细胞用PBS洗2次，保存。
10.细胞qPCR检测：
1)细胞处理完毕后，加入1ml预冷的PBS清洗，加入1ml 液裂解，收集至EP管，剧烈振荡后室温静置5min；
2)向Trizol提取液加入200μl氯仿，剧烈振荡，室温静置10min；
3)12000g离心15min，小心转移上清至新的EP管；
4)每管加入500μl异丙醇，上下颠倒混匀，静置10min；
5)12000g离心10min，可在EP管的底部看到少量的白色沉淀；
6)去除上清，加入1ml预冷的75％乙醇(DEPC水配置)，振 荡；
7)7500g离心5min，尽量吸干残留乙醇，室温干燥5-10min；
8)每管加入适当体积的DEPC水，移液器吹打溶解；
9)使用分光光度法对RNA的浓度和A260/A280进行检测；
10)提前解冻dTprimer、RT-buffer、dNTP
11)将PCR反应管置于冰上加以下试剂：
总RNA xμl(2μg)
oligodT引物 1μl
随机引物 2μl
无RNase水 至13μl
混匀，70℃10min,然后立即放入冰浴至少5min；
12)冰上继续加以下试剂：
按以下程序进行反转录：
25℃ 10min
50℃ 60min
90℃ 5min
13)cDNA约4倍稀释后作为模板；
14)冰上溶解SYBR Green I Maste(2×)，计算qPCR体系，按如 下体系等比放大配制反应体系：
480SYBR Green I Maste(2×) 10.0μl
primer(10μm) 1μl
H2O 8.0μl
15)轻柔混匀后轻微离心，取96孔qPCR板，按设计好的点样 孔，每孔加入19μl；
16)按设计好的点样顺序，每孔加入1μl稀释好的模板cDNA；
17)点样完毕后贴透明膜，用刮板朝一个方向刮以封闭96孔板；
18)3000rpm离心1min，上机；
19)运行qPCR程序：
20)运行结束后，根据Melt curve排除异常值，根据Cp值计算 基因相对表达量。
所用qPCR检测非酒精性脂肪肝病相关因子mRNA含量引物信息 如下：
基因
引物
mus-β-Actin-F
TACTGCTCTGGCTCCTAGCA
mus-β-Actin-R
CGGACTCATCGTACTCCTGC
mus-Acc1-F
AATGAACGTGCAATCCGATTTG
mus-Acc1-R
ACTCCACATTTGCGTAATTGTTG
mus-Tnfα-F
GGTGATCGGTCCCCAAAGGGATGA
mus-Tnfα-R
TGGTTTGCTACGACGTGGGCT
mus-Il6-F
TCTGCAAGAGACTTCCATCCAGTTGC
mus-Il6-R
AGCCTCCGACTTGTGAAGTGGT
mus-Fasn-F
AAGTTGCCCGAGTCAGAGAA
mus-Fasn-R
CGTCGAACTTGGAGAGATCC
mus-Scd1-F2
CAAACACCCGGCTGTCAAAG
mus-Scd1-R2
TGAAGCACATCAGCAGGAGG
所用qPCR检测心肌肥厚相关因子mRNA含量引物信息如下：
基因
引物
rat-Anp-F
ATACAGTGCGGTGTCCAACA
rat-Anp-R
AGCCCTCAGTTTGCTTTTCA
rat-Myh7-F
GCTCCTAAGTAATCTGTTTGC
rat-Myh7-R
AAGTGAGGGTGCGTGGAGCG
rat-Bnp-F
CCAGAACAATCCACGATGC
rat-Bnp-R
TCGAAGTCTCTCCTGGATCC
rat-Gapdh-F
TGTGAACGGATTTGGCCGTA
rat-Gapdh-R
GATGGTGATGGGTTTCCCGT
所用qPCR检测心脏缺血再灌注损伤相关因子mRNA含量引物信 息如下：
基因
引物
rat-Bax-F
AGGACGCATCCACCAAGAAG
rat-Bax-R
CAGTTGAAGTTGCCGTCTGC
rat-Gapdh-F
TGTGAACGGATTTGGCCGTA
rat-Gapdh-R
GATGGTGATGGGTTTCCCGT
所用qPCR检测肝脏缺血再灌注损伤相关因子mRNA含量引物信 息如下：
基因
引物
mus-Actin-F
GTGACGTTGACATCCGTAAAGA
mus-Actin-R
GCCGGACTCATCGTACTCC
mus-Ccl2F
TTGGCTCAGCCAGATGCA
mus-Ccl2R
CCTACTCATTGGGATCATCTTGC
mus-Il6F
AGGATACCACTCCCAACAGACCT
mus-Il6R
CAAGTGCATCATCGTTGTTCATAC
活性实施例1. 4-苄基氨基苯磺酰胺类化合物有效抑制脂肪肝病及 相关代谢性疾病
贴壁的小鼠原代肝细胞分成不同药物处理组和对照溶液组。药物 处理组使用对应的药物(20μM)预处理，对照溶液组使用同体积1％ DMSO/PBS对照溶液预处理。1小时之后，向各组中加入棕榈酸酯(PA) 及油酸(OA)(PA 0.5mM+OA 1mM)，4小时后收集细胞进行炎症相关 因子mRNA含量检测；18h后细胞进行油红O染色及脂质合成相关 因子mRNA含量检测。
油红O染色结果如图1所示，化合物ML355,IMA-2,IMA-3, IMA-4,IMA-5,IMA-8,IMA-9,IMA-10,IMA-11,IMA-14,IMA-15, IMA-16,IMA-17,IMA-18,IMA-19,IMA-20,IMA-22,IMA-23组细胞 油红O着色程度和面积明显低于对照溶液组。
脂质合成相关因子mRNA含量检测结果如图2A、图2B、图2C 所示。图2A显示，与对照溶液组相比，化合物ML355,IMA-2,IMA-3, IMA-4,IMA-5,IMA-8,IMA-9,IMA-10,IMA-11,IMA-14,IMA-15, IMA-16,IMA-17,IMA-18,IMA-19,IMA-20,IMA-22,IMA-23组促脂 肪酸合成分子ACC1的mRNA水平显著降低。图2B显示，药物处理 组Fasn的mRNA水平明显低于对照溶剂组。图2C显示，各药物处 理组促脂肪酸合成分子SCD1的mRNA水平明显低于对照溶剂组。
炎症相关因子mRNA含量检测结果如图3A和图3B所示，与对 照溶液组比较，化合物ML355,IMA-2,IMA-3,IMA-4,IMA-5,IMA-8, IMA-9,IMA-10,IMA-11,IMA-14,IMA-15,IMA-16,IMA-17,IMA-18, IMA-19,IMA-20,IMA-22,IMA-23组中炎症因子Il6和TNFa的 mRNA水平降低。
为了进一步评价IMA系列4-苄基氨基苯磺酰胺类化合物与 ML355的效果，贴壁的原代肝细胞分别使用低浓度(5μM)ML355 和IMA-2,IMA-9,IMA-10,IMA-11,IMA-14,IMA-15,IMA-20, IMA-22预处理1小时，对照溶液组使用同体积1％DMSO/PBS对照 溶液平行预处理。随后，向各组中加入PA/OA(PA 0.5mM+OA 1mM)， 4小时后收集细胞进行炎症相关因子mRNA含量检测；18h后细胞进 行油红O染色及脂质合成相关因子mRNA含量检测。
油红O染色结果如图4A所示，ML355组油红O着色与对照溶剂 组无明显差别，IMA-2,IMA-9,IMA-10,IMA-11,IMA-14,IMA-15, IMA-20,IMA-22组油红O着色面积和程度低于对照溶液组。
图4B和图4C显示，IMA-2,IMA-9,IMA-10,IMA-11,IMA-14, IMA-15,IMA-20,IMA-22组炎症因子Il6和脂肪酸合成分子Acc1的 mRNA水平低于ML355组和对照溶剂组。
上述结果说明4-苄基氨基苯磺酰胺类化合物对脂肪肝病和相关代 谢性疾病具有显著抑制效果，IMA系列化合物效果明显优于ML355， 可应用于非酒精性脂肪肝病、肥胖、糖尿病、肝脏炎症以及相关疾病 的预防和治疗中。
活性实施例2 4-苄基氨基苯磺酰胺类化合物有效抑制病理性心肌 肥厚及相关疾病
贴壁大鼠原代心肌细胞分成不同药物处理组和空白溶剂对照组， 对照组使用相应药物预处理，浓度5μM，空白溶剂对照组使用等体积 1％DMSO/PBS溶剂平行处理。6小时后，各组加入10μM PE处理， 持续48小时。细胞中心肌肥厚相关分子mRNA水平采用qPCR方法检 测；心肌细胞肥大程度使用α-辅肌动蛋白染色评价。
如图5所示，PE刺激48小时后，IMA-2,IMA-5,IMA-9,IMA-10, IMA-14,IMA-15,IMA-16,IMA-17,IMA-18,IMA-19,IMA-21和 IMA-22组细胞中促心肌肥厚因子Anp、Bnp、Myh7的mRNA水平 明显低于空白溶液对照组。
细胞α-辅肌动蛋白染色结果如图6所示，与空白溶剂对照组比较， IMA-2,IMA-5,IMA-9,IMA-10,IMA-14,IMA-15,IMA-16,IMA-17, IMA-18,IMA-19,IMA-21和IMA-22组细胞面积明显减小。
上述结果表明，4-苄基氨基苯磺酰胺类化合物对病理性心肌肥厚 的发生发展具有明显抑制效果，可应用于病理性心肌肥厚、心脏重构、 心肌梗塞、心力衰竭、心律失常、高血压、冠心病、动脉栓塞、心绞 痛、心脏传导阻滞以及相关疾病的预防和治疗中。
活性实施例3 4-苄基氨基苯磺酰胺类化合物有效抑制心脏缺血再 灌注损伤和相关疾病
为评价4-苄基氨基苯磺酰胺类化合物对病理性心肌肥厚及相关疾 病的作用，贴壁的原代大鼠心肌细胞分为药物组和溶剂对照组。药物 组原代大鼠心肌细胞分别使用不同药物处理，药物浓度20μM，对照 组使用等体积1％DMSO/PBS处理。2小时后，细胞换无糖培养基进 行缺氧处理(37℃，5％CO2，1％O2)，之后细胞换完全培养基继续 复氧培养，期间保持药物浓度为20μM。药物对心脏缺血再灌注损伤 的效果采用CCK8检测细胞活力和qPCR方法检测细胞凋亡相关因子 Bax的水平来评价。缺氧3小时，复氧2小时处理新生大鼠原代心肌 细胞用于Bax mRNA水平检测；缺氧15小时，复氧6小时处理新生 大鼠原代心肌细胞用于CCK8检测。
如图7所示，化合物IMA-2,IMA-3,IMA-4,IMA-5,IMA-6,IMA-8, IMA-9,IMA-10,IMA-11,IMA-12,IMA-13,IMA-14,IMA-15,IMA-16, IMA-17,IMA-18,IMA-19,IMA-20,IMA-22和IMA-23组细胞活力高 于对照组。
大鼠原代心肌细胞中Bax的mRNA表达水平如图8所示，IMA-2, IMA-3,IMA-4,IMA-5,IMA-6,IMA-8,IMA-9,IMA-10,IMA-11, IMA-12,IMA-13,IMA-14,IMA-15,IMA-16,IMA-17,IMA-18, IMA-19,IMA-20,IMA-22和IMA-23处理组细胞Bax的mRNA表达 水平明显低于空白溶剂对照组。
上述结果表明，4-苄基氨基苯磺酰胺类化合物有效抑制心肌梗塞、 心梗再通损伤、心脏移植、冠状动脉溶栓术、经皮冠状动脉成形术、 冠状动脉内扩张术、冠状动脉旁路术等心脏缺血再灌注损伤和相关疾 病的预防和治疗。
活性实施例4 4-苄基氨基苯磺酰胺类化合物有效抑制肝脏缺血 再灌注损伤及相关疾病
为评价4-苄基氨基苯磺酰胺类化合物在肝脏缺血再灌注损伤中的 作用，贴壁的小鼠原代肝细胞分为药物组和空白溶剂对照组。药物组 细胞分别给予相应的药物预处理，药物浓度20μM，对照组使用等体 积1％DMSO/PBS处理。2小时后，细胞换无糖培养基进行缺氧处理 (37℃，5％CO2，1％O2)，缺氧处理3小时后，细胞换完全培养基 继续复氧培养6小时，期间保持药物浓度为20μM。细胞收集后采用 qPCR方法检测细胞中促炎因子Il6和Ccl2mRNA水平。
如图9A显示，IMA-2,IMA-3,IMA-4,IMA-5,IMA-6,IMA-8, IMA-9,IMA-10,IMA-11,IMA-12,IMA-13,IMA-14,IMA-15,IMA-16, IMA-17,IMA-18,IMA-19,IMA-20,IMA-22和IMA-23处理组Il6的 mRNA水平低于空白溶剂对照组。
如图9B显示，与空白溶剂组比较，IMA-2,IMA-3,IMA-4,IMA-5, IMA-6,IMA-8,IMA-9,IMA-10,IMA-11,IMA-12,IMA-13,IMA-14, IMA-15,IMA-16,IMA-17,IMA-18,IMA-19,IMA-20,IMA-22和 IMA-23处理组细胞中Ccl2的mRNA水平显著降低。
上述结果说明，4-苄基氨基苯磺酰胺类化合物可以有效抑制肝脏 缺血再灌注损伤，可以应用于肝脏缺血再灌注损伤、肝脏囊肿、肝脏 移植、溶栓治疗、肝门阻断术、肝昏迷、肝衰竭、肝脏炎性疾病以及 相关肝脏损伤的预防和/治疗。
以上，对本发明的实施方式进行了说明。但是，本发明不限定于 上述实施方式。凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等 同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
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