阅读说明：本技术 一种咖啡酰奎宁酸类衍生物及其制备方法和用途 (Caffeoylquinic acid derivative and preparation method and application thereof ) 是由 田瑜 许旭东 郭鹏 吴崇明 尚海 于 2019-01-10 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种咖啡酰奎宁酸类衍生物及其制备方法和用途,具有通式(Ⅰ)所示的结构。本发明以3-O-咖啡酰奎宁酸为原料,保留3-O-咖啡酰奎宁酸的结构骨架,在1位羧基上引入不同胺基取代基,4,5位羟基被缩酮取代或裸露,合成了新型的具有降脂活性的的咖啡酰奎宁酸类衍生物,合成方法简便,产物纯度高。与3-O-咖啡酰奎宁酸比较而言,本发明提供的咖啡酰奎宁酸类衍生物具有更好的降脂活性。<Image he="531" wi="648" file="DDA0001941435280000011.GIF" imgContent="drawing" imgFormat="GIF" orientation="portrait" inline="no"></Image>(The invention discloses a caffeoylquinic acid derivative, a preparation method and application thereof, and the caffeoylquinic acid derivative has a structure shown in a general formula (I). The invention takes 3-O-caffeoylquinic acid as a raw material, reserves the structural skeleton of the 3-O-caffeoylquinic acid and is positioned at 1 positionDifferent amino substituent groups are introduced into carboxyl, 4, 5-position hydroxyl groups are substituted or exposed by ketal, and the novel caffeoylquinic acid derivative with lipid-lowering activity is synthesized, the synthesis method is simple and convenient, and the product purity is high. Compared with 3-O-caffeoylquinic acid, the caffeoylquinic acid derivative provided by the invention has better lipid-lowering activity.)

一种咖啡酰奎宁酸类衍生物及其制备方法和用途

技术领域

本发明涉及药物化学和治疗学领域，特别是涉及一种咖啡酰奎宁酸类衍 生物及其制备方法和用途。

背景技术

高脂血症(hyperlipidemia，HLP)能诱发临床常见的心脑血管疾病，是威胁 人类健康的潜在因素之一。目前我国血脂异常患者达2.0亿，正常人发病率 35％～40％，中老年人群高达60％以上。随着人们膳食结构和生活方式的改 变，高脂血症的发病率逐年上升，发病年龄逐年下降，成为当前社会的常见 病和多发病。对于该病的防治是当今医学的热点与难点，使用降脂药物是较 为有效的治疗措施。

目前临床上常见的降脂药物主要有他汀类调脂药物(阿托伐他汀、洛伐他 汀)和贝特类药物(吉非贝齐、非诺贝特)、以及烟酸类药物(阿西莫司)等。不 过这些作用于单一靶点的药物，在临床应用中却出现种种不尽人意的副作 用，如目前全球卖座前十的药物HMG-CoA还原酶抑制剂阿托伐他汀(又名 立普妥)，就存在严重的肌病和横纹肌溶解症，以及肝脏毒性；甚至在2012 年12月FDA刚刚批准上市的可以治疗家族性高胆固醇血症的新药洛美他 派，也被指出具有胃肠道反应及肝脏毒性的风险。因此寻找疗效显著、安全 可靠的降脂药是医药工作者值得长期研究的课题。

不过从我国目前的实际情况来看，完全模仿西方国家由人工合成的产物 中寻找先导化合物，来创制新型、高效、低毒的降脂新药在短周期内难以获 得重大突破，而临床应用有效的传统药物中富含的天然产物，其特有的结构 多样性和多靶点作用机制，越来越受到国内外研究专家的青睐，如中药黄连 中的降脂活性主要成分小檗碱等。

中药调脂的作用机制相对于西药复杂，不良反应较少，主要是通过减少 外源性脂质在肠道的吸收，抑制内源性脂质的合成以及调节脂质代谢起到降 脂作用的。如具有调血脂作用的单味中药(葛根、人参、丹参及银杏叶等)； 降脂单一天然产物如多糖类(枸杞多糖、南瓜多糖)，黄酮类(二氢丹参酮、银 杏叶黄酮)及多酚类化合物(儿茶素)等。近年来，很多民间传统药物被发现具 有很好的调脂作用，且正在逐步被开发为药物，如北大维信生物科技有限公 司开发的血脂康胶囊(主要成分红曲)目前在美国已经完成了II期临床研究，中国医学科学院生物技术研究所蒋建东课题组发现小檗碱也具有很好的降脂 活性，且与他汀类降脂药物的作用机理完全不同，在理论上为寻找新型降血 脂药物提供了新的分子靶点。与现阶段临床上多采用的易产生不良反应的单 靶点西药不同，天然药物所具备的多靶点的特征，很可能就是其较少产生毒 副作用的原因，因而对天然药物的深入探索和研究具有时代意义。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提出一种咖啡酰奎宁酸类衍生物及其制备 方法和用途，该咖啡酰奎宁酸类衍生物具有较好的降脂作用。

基于上述目的，本发明提供的一种咖啡酰奎宁酸类衍生物，具有通式 (Ⅰ)所示的结构：

式中：R₆为H原子；

R₄和R₅为H原子；

R₂和R₃为H原子或丙叉基；

R₁选自含1-18个碳的烷基胺、含6-10个碳的芳基胺或含3-7个碳原子 的饱和或不饱和环状胺。

在本发明的一些实施例中，R₁选自含3-8个碳的烷基胺、含7-8个碳的 芳基胺或含5-6个碳原子的饱和环状胺。

在本发明的一些实施例中，R₁选自正丁胺基、异丁胺基、正辛胺基、炔 丙胺基、苄胺基、哌啶基或环己胺基。

本发明还提供给了一种上述咖啡酰奎宁酸类衍生物的制备方法，包括以 下步骤：

(1)将3-O-咖啡酰奎宁酸与2,2-二甲氧基丙烷反应生成中间体；

(2)将中间体与胺发生缩合反应生成目标化合物咖啡酰奎宁酸类衍生 物。

在本发明的一些实施例中，在步骤(2)之后还包括：

(3)：将目标化合物咖啡酰奎宁酸类衍生物进行脱保护反应。

在本发明的一些实施例中，上述咖啡酰奎宁酸类衍生物的制备方法，包 括以下步骤：

(1)以对甲苯磺酸为催化剂，3-O-咖啡酰奎宁酸和2,2-二甲氧基丙烷在 无水丙酮中反应生成如式(Ⅱ)所示的中间体；

(2)式(Ⅱ)所示的中间体在BOP和DIEA的缩合条件下，在无水乙 腈和四氢呋喃的混合溶剂中，与胺发生缩合反应生成目标化合物咖啡酰奎宁 酸类衍生物。

在本发明的一些实施例中，在步骤(2)之后还包括：

(3)：将目标化合物咖啡酰奎宁酸类衍生物在三氟乙酸、二氯甲烷和水 的混合溶液中脱去丙酮叉保护。

本发明还提供了一种药物组合物，包括上述的咖啡酰奎宁酸类衍生物和 药用载体。

本发明还提供了上述的咖啡酰奎宁酸类衍生物在制备预防和/或治疗高血 脂症药物中的用途。

本发明还提供了上述的咖啡酰奎宁酸类衍生物在制备预防和/或治疗动脉 粥样硬化药物中的用途。

从上面所述可以看出，本发明以3-O-咖啡酰奎宁酸为原料，保留3-O-咖 啡酰奎宁酸的结构骨架，在1位羧基上引入不同胺基取代基，4,5位羟基被 缩酮取代或裸露，合成了新型的具有降脂活性的的咖啡酰奎宁酸类衍生物， 合成方法简便，产物纯度高。与3-O-咖啡酰奎宁酸比较而言，本发明提供的 咖啡酰奎宁酸类衍生物具有更好的降脂活性。本发明充分利用从天然产物中 发现的药用植物资源，深入研究开发，寻找具有独特化学结构的化合物，发 现了可用于临床的降脂药物。

附图说明

图1为绿原酸和其衍生物在HepG2肝细胞中对油酸诱导的脂质积累的调 节作用；其中，A图为咖啡酰奎宁酸类衍生物3a、3b、3c、3d、3e和3f在 HepG2肝细胞中对油酸引发的脂质积累的调节作用；B图为咖啡酰奎宁酸类 衍生物4a、4b、4c、4d、4e和4f在HepG2肝细胞中对油酸引发的脂质积累 的调节作用，CA为绿原酸，S为辛伐他汀，M为油酸，K为对照，###p< 0.001为相对于对照组处理的细胞(K)差异十分显著；*p<0.05为相对于油 酸(M)处理的细胞差异显著；**p<0.01为相对于油酸(M)处理的细胞差 异显著；***p<0.001相对于油酸(M)处理的细胞差异十分显著。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，以下结合具体实施 例，对本发明进一步详细说明。

本发明提供的一种咖啡酰奎宁酸类衍生物，具有通式(Ⅰ)所示的结 构：

式中：R₆为H原子；

R₄和R₅为H原子；

R₂和R₃为H原子或丙叉基；

R₁选自含1-18个碳的烷基胺、含6-10个碳的芳基胺或含3-7个碳原子 的饱和或不饱和环状胺。

作为本发明的一个实施例，R₁选自含3-8个碳的烷基胺、含7-8个碳的 芳基胺或含5-6个碳原子的饱和环状胺。

作为本发明的一个实施例，R₁选自正丁胺基、异丁胺基、正辛胺基、炔 丙胺基、苄胺基、哌啶基或环己胺基。

作为本发明的一个实施例，当R₆为H原子；R₄和R₅为H原子；R₂和 R₃为丙叉基；此时式(Ⅰ)所示的结构为：

当R₁为正丁胺基，此时咖啡酰奎宁酸类衍生物的命名 为3a。

当R₁为异丁胺基，此时咖啡酰奎宁酸类衍生物的命名为 3b。

当R₁为正辛胺基，此时咖啡酰奎宁酸类衍生物的 命名为3c。

当R₁为炔丙胺基，此时咖啡酰奎宁酸类衍生物的命名为 3d。

当R₁为苄胺基，此时咖啡酰奎宁酸类衍生物的命名为 3e。

当R₁为哌啶基，此时咖啡酰奎宁酸类衍生物的命名为 3f。

当R₁为环己胺基，此时咖啡酰奎宁酸类衍生物的命名为 3g。

作为本发明的一个实施例，当R₆为H原子；R₄和R₅为H原子；R₂和 R₃为H原子；此时式(Ⅰ)所示的结构为：

当R₁为正丁胺基，此时咖啡酰奎宁酸类衍生物的命名 为4a。

当R₁为异丁胺基，此时咖啡酰奎宁酸类衍生物的命名为 4b。

当R₁为正辛胺基，此时咖啡酰奎宁酸类衍生物的 命名为4c。

当R₁为炔丙胺基，此时咖啡酰奎宁酸类衍生物的命名为 4d。

当R₁为苄胺基，此时咖啡酰奎宁酸类衍生物的命名为 4e。

当R₁为哌啶基，此时咖啡酰奎宁酸类衍生物的命名为 4f。

当R₁为环己胺基，此时咖啡酰奎宁酸类衍生物的命名为 4g。

本发明还提供一种上述咖啡酰奎宁酸类衍生物的制备方法，包括以下步 骤：

(1)将3-O-咖啡酰奎宁酸与2,2-二甲氧基丙烷反应生成中间体；

(2)将中间体与胺发生缩合反应生成目标化合物咖啡酰奎宁酸类衍生 物。

作为本发明的一个实施例，具体的，上述咖啡酰奎宁酸类衍生物的合成 路线如下：

(1)中间体2的合成反应

以化合物1(3-O-咖啡酰奎宁酸)为起始原料，通过对甲苯磺酸 (TsOH)催化，在无水丙酮中将3-O-咖啡酰奎宁酸的4,5位羟基与2,2-二甲 氧基丙烷(DMP)反应，得到中间体2；

其中，2,2-二甲氧基丙烷的结构式为：

(2)目标化合物的合成反应

中间体2在BOP(六氟磷酸苯并三唑-1-氧基三(二甲氨基)磷)和DIEA (N,N-二异丙基乙胺)的缩合条件下，在无水乙腈(CH₃CN)和四氢呋喃 (THF)的混合溶剂中，与胺发生缩合反应生成目标化合物咖啡酰奎宁酸类 衍生物，目标化合物咖啡酰奎宁酸类衍生物包括3a、3b、3c、3d、3e、3f和 3g。

作为本发明的一个实施例，步骤(2)的目标化合物咖啡酰奎宁酸类衍生 物进行脱保护反应，得到目标化合物咖啡酰奎宁酸类衍生物4a、4b、4c、 4d、4e、4f和4g。

具体的，合成路线为：

目标化合物咖啡酰奎宁酸类衍生物包括3a、3b、3c、3d、3e、3f和3g 在三氟乙酸(TFA)、二氯甲烷(DCM)和水的混合溶液中脱去丙酮叉保护， 分别得到目标化合物咖啡酰奎宁酸类衍生物4a、4b、4c、4d、4e、4f和4g。

本发明目标化合物咖啡酰奎宁酸类衍生物的总合成路线如下：

其中，(A)DMP,TsOH,acetone；(B)BOP,DIEA,amines；(C)TFA,DCM, H₂O(9:1:1).

可见，本发明根据3-O-咖啡酰奎宁酸的结构特性，将3-O-咖啡酰奎宁酸 的4,5位羟基与2,2-二甲氧基丙烷(DMP)反应，使将3-O-咖啡酰奎宁酸的 4,5位羟基被缩酮取代，得到中间体2；再将中间体2与各种胺反应，在1位 羧基上引入不同胺基取代基，得到咖啡酰奎宁酸类衍生物；或者在得到的咖 啡酰奎宁酸类衍生物进一步脱去丙酮叉保护，使4,5位羟基裸露。本发明提 供的咖啡酰奎宁酸类衍生物的制备方法具有合成方法简便，产物纯度高的优 点。

实施例1咖啡酰奎宁酸衍生物3a的制备

(1)制备中间体2

于250mL的圆底烧瓶中准确称取7.0g(19.8mmol)3-O-咖啡酰奎宁酸 (化合物1)，加入60mL无水丙酮和40mL DMP(2,2-二甲氧基丙烷)，搅 拌反应呈悬浊液。向反应液中加入催化量50mg TsOH(对甲苯磺酸)，搅拌 反应至反应液澄清，于室温下反应，TLC监测反应结束后，用无水Na₂CO₃中和至pH为5～6，抽滤，减压蒸除溶剂，残余物通过硅胶柱色谱纯化，得到 中间体2，收率为87％。

(2)制备咖啡酰奎宁酸衍生物3a

于250mL圆底烧瓶中，准确称取中间体2 1.2g(3mmol)和BOP 1.5g (3mmol)，在氩气保护的条件下，加入70mL无水混合溶剂THF/CH₃CN (v/v＝3:2)搅拌至溶解。加入0.8g(6mmol)的DIEA后，向反应液中滴 加正丁胺3mmol，直到TLC监测反应结束。减压蒸除溶剂，残余物通过硅 胶柱色谱纯化，得到咖啡酰奎宁酸衍生物3a，淡黄色粉末，收率为81％。

¹H-NMR(600MHz,DMSO)δ:9.58(s,1H,Ph-OH),9.14(s,1H,Ph-OH),7.71 (t,J＝6.0Hz,1H,NH),7.48(d,J＝15.8Hz,1H,H-7′),7.05(d,J＝1.7Hz,1H,H- 2′),7.00(dd,J＝8.3Hz,1.7Hz,1H,H-6’),6.77(d,J＝8.2Hz,1H,H-5’),6.24(d, J＝15.9Hz,1H,H-8′),5.41(s,1H,H-1),5.37-5.32(m,1H,H-3),4.43-4.41(m, 1H,H-4),4.13-4.11(m,1H,H-5),3.11-3.01(m,2H,NH-CH₂),2.26-2.22(m,1H, H-2),1.99-1.94(m,1H,H-2),1.80-1.73(m,2H,H-6),1.42(s,3H,CH₃-C-O), 1.39-1.36(m,2H,NH-CH₂-CH₂),1.26-1.22(m,5H,CH₃-C-O,CH₂-CH₃),0.84(t, J＝7.3Hz,3H,CH₂-CH₃)；¹³C-NMR(150MHz,DMSO)δ:175.0,165.9,148.4,145.6,145.3,125.6,121.4,115.8,114.9,114.1,108.0,76.9,74.1,73.5,70.9,38.2,37.0,34.5,31.2,28.0,25.9,19.4,13.7；HRMS(ESI):Calcd for[M+Na]⁺ C₂₃H₃₁NNaO₈:472.1947,found 472.1948。

实施例2咖啡酰奎宁酸衍生物4a的制备

(3)制备咖啡酰奎宁酸衍生物4a

于50mL圆底烧瓶中，分别准确称取2mmol咖啡酰奎宁酸衍生物3a， 加入TFA/DCM/H₂O的混合溶液(v/v＝9:1:1)20mL，室温下搅拌反应0.5 h，至TLC监测反应结束。减压蒸除溶剂，残余物通过硅胶柱色谱纯化，得 到咖啡酰奎宁酸衍生物4a，淡黄色粉末，收率为78％。

¹H-NMR(600MHz,MeOD)δ:7.58(d,J＝15.9Hz,1H,H-7′),7.05(d,J＝1.9 Hz,1H,H-2′),6.95(dd,J＝8.2Hz,1.9Hz,1H,H-6’),6.78(d,J＝8.1Hz,1H,H- 5’),6.29(d,J＝15.9Hz,1H,H-8′),5.42-5.38(m,1H,H-3),4.24-4.23(m,1H,H- 4),3.72-3.70(m,1H,H-5),3.21-3.19(m,2H,NH-CH₂),2.12-2.07(m,2H,H-2), 2.02-2.00(m,1H,H-6),1.95-1.91(m,1H,H-6),1.52-1.47(m,2H,NH-CH₂-CH₂), 1.36-1.32(m,2H,CH₂-CH₃),0.93(t,J＝7.4Hz,3H,CH₂-CH₃)；¹³C-NMR(150 MHz,MeOD)δ:176.6,169.0,149.6,147.0,146.8,127.8,122.9,116.5,115.4, 115.2,77.8,74.4,72.7,71.9,40.0,39.9,38.7,32.6,21.0,14.1；HRMS(ESI):Calcd for[M+Na]⁺C₂₀H₂₇NNaO₈:432.1634,found 432.1636。

实施例3咖啡酰奎宁酸衍生物3b的制备

(1)制备中间体2

于250mL的圆底烧瓶中准确称取7.0g(19.8mmol)3-O-咖啡酰奎宁酸 (化合物1)，加入60mL无水丙酮和40mL DMP(2,2-二甲氧基丙烷)，搅 拌反应呈悬浊液。向反应液中加入催化量50mg TsOH(对甲苯磺酸)，搅拌 反应至反应液澄清，于室温下反应，TLC监测反应结束后，用无水Na₂CO₃中和至pH为5～6，抽滤，减压蒸除溶剂，残余物通过硅胶柱色谱纯化，得到 中间体2，收率为87％。

(2)制备咖啡酰奎宁酸衍生物3b

于250mL圆底烧瓶中，准确称取中间体2 1.2g(3mmol)和BOP 1.5g (3mmol)，在氩气保护的条件下，加入70mL无水混合溶剂THF/CH₃CN (v/v＝3:2)搅拌至溶解。加入0.8g(6mmol)的DIEA后，向反应液中滴 加异丁胺3mmol，直到TLC监测反应结束。减压蒸除溶剂，残余物通过硅 胶柱色谱纯化，得到咖啡酰奎宁酸衍生物3b，淡黄色粉末，收率为77％。

¹H-NMR(600MHz,DMSO)δ:7.70(t,J＝6.1Hz,1H,NH),7.47(d,J＝15.8 Hz,1H,H-7′),7.04(d,J＝2.0Hz,1H,H-2′),7.00(dd,J＝8.2Hz,2.0Hz,1H,H- 6’),6.76(d,J＝8.2Hz,1H,H-5’),6.24(d,J＝15.9Hz,1H,H-8′),5.47(br,1H,H- 1),5.37-5.33(m,1H,H-3),4.43-4.41(m,1H,H-4),4.14-4.11(m,1H,H-5), 2.94-2.86(m,2H,NH-CH₂),2.26-2.22(m,1H,H-2),1.99-1.96(m,1H,H-2), 1.80-1.75(m,2H,H-6),1.74-1.69(m,1H,NH-CH₂-CH),1.42(s,3H,CH₃-C-O), 1.26(s,3H,CH₃-C-O),0.82-0.80(m,6H,2×CH₃)；13C-NMR(150MHz,DMSO) δ:175.1,165.9,148.5,145.6,145.4,125.6,121.4,115.8,114.9,114.1,108.0,76.9, 74.2,73.6,70.9,45.9,37.1,34.4,28.1,26.0,20.0；HRMS(ESI):Calcd for[M+ Na]+C₂₃H₃₁NNaO₈:472.1947,found 472.1946。

实施例4咖啡酰奎宁酸衍生物4b的制备

(3)制备咖啡酰奎宁酸衍生物4b

于50mL圆底烧瓶中，分别准确称取2mmol咖啡酰奎宁酸衍生物3b， 加入TFA/DCM/H₂O的混合溶液(v/v＝9:1:1)20mL，室温下搅拌反应0.5 h，至TLC监测反应结束。减压蒸除溶剂，残余物通过硅胶柱色谱纯化，得 到咖啡酰奎宁酸衍生物4b，淡黄色粉末，收率为85％。

¹H-NMR(600MHz,MeOD)δ:7.57(d,J＝15.7Hz,1H,H-7′),7.05(s,1H,H- 2′),6.99-6.89(m,1H,H-6’),6.78(d,J＝7.7Hz,1H,H-5’),6.29(d,J＝15.7Hz, 1H,H-8′),5.46-5.37(m,1H,H-3),4.30-4.18(m,1H,H-4),3.78-3.66(m,1H,H- 5),3.09-2.95(m,2H,NH-CH2),2.11-1.94(m,1H,H-2,6),1.85-1.73(m,1H, NH-CH₂-CH),0.94-0.84(m,6H,2×CH₃)；¹³C-NMR(150MHz,MeOD)δ:176.7, 169.0,149.5,147.0,146.7,127.7,122.9,116.5,115.3,115.2,77.8,74.3,72.6,71.9, 47.6,40.0,38.7,29.6,20.3；HRMS(ESI):Calcd for[M+Na]⁺C₂₀H₂₇NNaO₈: 432.1634,found 432.1638.

实施例5咖啡酰奎宁酸衍生物3c的制备

(1)制备中间体2

于250mL的圆底烧瓶中准确称取7.0g(19.8mmol)3-O-咖啡酰奎宁酸 (化合物1)，加入60mL无水丙酮和40mL DMP(2,2-二甲氧基丙烷)，搅 拌反应呈悬浊液。向反应液中加入催化量50mg TsOH(对甲苯磺酸)，搅拌 反应至反应液澄清，于室温下反应，TLC监测反应结束后，用无水Na₂CO₃中和至pH为5～6，抽滤，减压蒸除溶剂，残余物通过硅胶柱色谱纯化，得到 中间体2，收率为87％。

(2)制备咖啡酰奎宁酸衍生物3c

于250mL圆底烧瓶中，准确称取中间体2 1.2g(3mmol)和BOP 1.5g (3mmol)，在氩气保护的条件下，加入70mL无水混合溶剂THF/CH₃CN (v/v＝3:2)搅拌至溶解。加入0.8g(6mmol)的DIEA后，向反应液中滴 加正辛胺3mmol，直到TLC监测反应结束。减压蒸除溶剂，残余物通过硅 胶柱色谱纯化，得到咖啡酰奎宁酸衍生物3c，淡黄色粉末，收率为82％。

¹H-NMR(600MHz,DMSO)δ:7.74(t,J＝5.9Hz,1H,NH),7.47(d,J＝15.8 Hz,1H,H-7′),7.04(d,J＝2.0Hz,1H,H-2′),7.00(dd,J＝8.2Hz,2.0Hz,1H, H-6’),6.76(d,J＝8.2Hz,1H,H-5’),6.24(d,J＝15.9Hz,1H,H-8′),5.44(br,1H, H-1),5.36-5.31(m,1H,H-3),4.43-4.40(m,1H,H-4),4.13-4.11(m,1H,H-5), 3.10-2.98(m,2H,NH-CH₂),2.25-2.22(m,1H,H-2),1.97-1.94(m,1H,H-2), 1.75-1.74(m,2H,H-6),1.41(s,3H,CH3-C-O),1.40-1.37(m,2H,NH-CH₂-CH₂), 1.25(s,3H,CH₃-C-O),1.25-1.19(m,10H,(CH2)₅-CH₃),0.83(t,J＝7.1Hz,3H, (CH₂)₅-CH₃)；¹³C-NMR(150MHz,DMSO)δ:174.9,165.8,148.4,145.5,145.2,125.5,121.3,115.7,114.8,114.0,107.9,76.8,73.9,73.4,70.8,38.4,37.0,34.5, 31.1,28.9,28.6,28.5,27.9,26.1,25.8,22.0,13.8；HRMS(ESI):Calcd for[M+ Na]⁺C₂₇H₃₉NNaO₈:528.2573,found 528.2578。

实施例6咖啡酰奎宁酸衍生物4c的制备

(3)制备咖啡酰奎宁酸衍生物4c

于50mL圆底烧瓶中，分别准确称取2mmol咖啡酰奎宁酸衍生物3c， 加入TFA/DCM/H₂O的混合溶液(v/v＝9:1:1)20mL，室温下搅拌反应0.5 h，至TLC监测反应结束。减压蒸除溶剂，残余物通过硅胶柱色谱纯化，得 到咖啡酰奎宁酸衍生物4c，淡黄色粉末，收率为76％。

¹H-NMR(400MHz,MeOD)δ:7.58(d,J＝15.9Hz,1H,H-7′),7.05(d,J＝1.9 Hz,1H,H-2′),6.95(dd,J＝8.2Hz,1.9Hz,1H,H-6’),6.78(d,J＝8.2Hz,1H,H- 5’),6.29(d,J＝15.9Hz,1H,H-8′),5.43-5.37(m,1H,H-3),4.24-4.23(m,1H,H- 4),3.72-3.69(m,1H,H-5),3.20-3.17(m,2H,NH-CH₂),2.13-1.90(m,1H,H-2, 6),1.52-1.49(m,2H,NH-CH₂-CH₂),1.34-1.26(m,10H,(CH₂)₅-CH₃),0.87(t,J ＝7.1Hz,3H,-CH₃)；¹³C-NMR(100MHz,MeOD)δ:176.6,169.0,149.6,147.0, 146.8,127.8,123.0,116.5,115.3,115.1,77.7,74.4,72.7,72.0,40.2,40.0,38.7, 33.0,30.5,30.4,27.9,23.7,14.4；HRMS(ESI):Calcd for[M+Na]⁺C₂₄H₃₅NNaO₈:488.2260,found 488.2252。

实施例7咖啡酰奎宁酸衍生物3d的制备

(1)制备中间体2

于250mL的圆底烧瓶中准确称取7.0g(19.8mmol)3-O-咖啡酰奎宁酸 (化合物1)，加入60mL无水丙酮和40mL DMP(2,2-二甲氧基丙烷)，搅 拌反应呈悬浊液。向反应液中加入催化量50mg TsOH(对甲苯磺酸)，搅拌 反应至反应液澄清，于室温下反应，TLC监测反应结束后，用无水Na₂CO₃中和至pH为5～6，抽滤，减压蒸除溶剂，残余物通过硅胶柱色谱纯化，得到 中间体2，收率为87％。

(2)制备咖啡酰奎宁酸衍生物3d

于250mL圆底烧瓶中，准确称取中间体2 1.2g(3mmol)和BOP 1.5g (3mmol)，在氩气保护的条件下，加入70mL无水混合溶剂THF/CH₃CN (v/v＝3:2)搅拌至溶解。加入0.8g(6mmol)的DIEA后，向反应液中滴 加炔丙胺3mmol，直到TLC监测反应结束。减压蒸除溶剂，残余物通过硅 胶柱色谱纯化，得到咖啡酰奎宁酸衍生物3d，淡黄色粉末，收率为75％。

¹H-NMR(600MHz,DMSO)δ:8.16(t,J＝5.8Hz,1H,NH),7.47(d,J＝15.8 Hz,1H,H-7′),7.04(d,J＝2.0Hz,1H,H-2′),7.00(dd,J＝8.2Hz,2.0Hz,1H,H- 6’),6.76(d,J＝8.2Hz,1H,H-5’),6.24(d,J＝15.8Hz,1H,H-8′),5.50(s,1H,H-1), 5.35-5.31(m,1H,H-3),4.43-4.41(m,1H,H-4),4.14-4.12(m,1H,H-5),3.84(dd, J＝5.8Hz,2.5Hz,2H,NH-CH₂),3.03(t,J＝2.5Hz,1H,CCH),2.25-2.22(m,1H, H-2),2.00-1.95(m,1H,H-2),1.79-1.70(m,2H,H-6),1.42(s,3H,CH₃-C-O), 1.26(s,3H,CH₃-C-O)；¹³C-NMR(150MHz,DMSO)δ:175.3,166.0,148.5,145.7, 145.5,125.7,121.5,115.9,114.9,114.2,108.2,81.2,76.9,74.2,73.6,72.6,70.9, 37.0,34.3,28.4,28.1,26.0；HRMS(ESI):Calcd for[M+Na]⁺C₂₂H₂₅NNaO₈:454.1478,found 454.1480。

实施例8咖啡酰奎宁酸衍生物4d的制备

(3)制备咖啡酰奎宁酸衍生物4d

于50mL圆底烧瓶中，分别准确称取2mmol咖啡酰奎宁酸衍生物3d， 加入TFA/DCM/H₂O的混合溶液(v/v＝9:1:1)20mL，室温下搅拌反应0.5 h，至TLC监测反应结束。减压蒸除溶剂，残余物通过硅胶柱色谱纯化，得 到咖啡酰奎宁酸衍生物4d，淡黄色粉末，收率为69％。

¹H-NMR(400MHz,MeOD)δ:7.57(d,J＝15.9Hz,1H,H-7′),7.11-7.00(m, 1H,H-2′),6.99-6.89(m,1H,H-6’),6.78(d,J＝8.0Hz,1H,H-5’),6.29(d,J＝15.9 Hz,1H,H-8′),5.43-5.37(m,1H,H-3),4.29-4.19(m,1H,H-4),4.03-4.92(m,2H, NH-CH₂),3.74-3.71(m,1H,H-5),2.61-2.49(m,1H,CCH),2.15-1.95(m,4H,H- 2,6)；¹³C-NMR(100MHz,MeOD)δ:176.5,169.0,149.5,147.0,146.7,127.7, 123.0,116.5,115.3,115.1,80.5,77.8,74.3,72.5,72.1,71.8,39.8,38.5,29.4； HRMS(ESI):Calcd for[M+Na]⁺C₁₉H₂₁NNaO₈:414.1165,found 414.1667。

实施例9咖啡酰奎宁酸衍生物3e的制备

(1)制备中间体2

于250mL的圆底烧瓶中准确称取7.0g(19.8mmol)3-O-咖啡酰奎宁酸 (化合物1)，加入60mL无水丙酮和40mL DMP(2,2-二甲氧基丙烷)，搅 拌反应呈悬浊液。向反应液中加入催化量50mg TsOH(对甲苯磺酸)，搅拌 反应至反应液澄清，于室温下反应，TLC监测反应结束后，用无水Na₂CO₃中和至pH为5～6，抽滤，减压蒸除溶剂，残余物通过硅胶柱色谱纯化，得到 中间体2，收率为87％。

(2)制备咖啡酰奎宁酸衍生物3e

于250mL圆底烧瓶中，准确称取中间体2 1.2g(3mmol)和BOP 1.5g (3mmol)，在氩气保护的条件下，加入70mL无水混合溶剂THF/CH₃CN (v/v＝3:2)搅拌至溶解。加入0.8g(6mmol)的DIEA后，向反应液中滴 加苄胺3mmol，直到TLC监测反应结束。减压蒸除溶剂，残余物通过硅胶 柱色谱纯化，得到咖啡酰奎宁酸衍生物3e，淡黄色粉末，收率为79％。

¹H-NMR(600MHz,DMSO)δ:8.32(t,J＝6.2Hz,1H,NH),7.48(d,J＝15.8 Hz,1H,H-7′),7.31-7.28(m,2H,Ph-H),7.24-7.20(m,3H,Ph-H),7.05(d,J＝2.0 Hz,1H,H-2′),7.01(dd,J＝8.2Hz,2.0Hz,1H,H-6’),6.77(d,J＝8.2Hz,1H,H- 5’),6.25(d,J＝15.9Hz,1H,H-8′),5.55(br,1H,H-1),5.39-5.35(m,1H,H-3), 4.45-4.42(m,1H,H-4),4.32-4.25(m,2H,NH-CH₂),4.15-4.13(m,1H,H-5), 2.29-2.25(m,1H,H-2),2.04-2.01(m,1H,H-2),1.84-1.76(m,2H,H-6),1.43(s, 3H,CH3-C-O),1.26(s,3H,CH3-C-O)；¹³C-NMR(150MHz,DMSO)δ:175.2, 165.8,148.4,145.5,145.3,139.5,128.1,126.9,126.7,125.5,121.3,115.7,114.8, 114.0,108.0,76.8,74.1,73.4,70.8,42.0,37.0,34.5,27.9,25.8；HRMS(ESI):Calcd for[M+Na]⁺C₂₆H₂₉NNaO₈:506.1791,found 506.1790。

实施例10咖啡酰奎宁酸衍生物4e的制备

(3)制备咖啡酰奎宁酸衍生物4e

于50mL圆底烧瓶中，分别准确称取2mmol咖啡酰奎宁酸衍生物3e， 加入TFA/DCM/H₂O的混合溶液(v/v＝9:1:1)20mL，室温下搅拌反应0.5 h，至TLC监测反应结束。减压蒸除溶剂，残余物通过硅胶柱色谱纯化，得 到咖啡酰奎宁酸衍生物4e，淡黄色粉末，收率为73％。

¹H-NMR(600MHz,MeOD)δ:7.58(d,J＝15.9Hz,1H,H-7′),7.32-7.22(m, 5H,Ph-H),7.05(s,1H,H-2′),6.96-6.94(m,1H,H-6’),6.78(d,J＝8.1Hz,1H,H- 5’),6.29(d,J＝15.8Hz,1H,H-8′),5.45-5.39(m,1H,H-3),4.39(m,2H,NH-CH₂), 4.26-4.25(m,1H,H-4),3.73-3.69(m,1H,H-5),2.17-1.97(m,4H,H-2,6)；¹³C- NMR(150MHz,MeOD)δ:176.8,169.0,149.5,147.0,146.8,139.9,129.5,128.2, 128.2,128.0,122.9,116.5,115.4,115.2,77.9,74.4,72.7,71.9,43.8,40.0,38.8； HRMS(ESI):Calcd for[M+Na]⁺C₂₃H₂₅NNaO₈:466.1448,found 466.1484。

实施例11咖啡酰奎宁酸衍生物3f的制备

(1)制备中间体2

于250mL的圆底烧瓶中准确称取7.0g(19.8mmol)3-O-咖啡酰奎宁酸 (化合物1)，加入60mL无水丙酮和40mL DMP(2,2-二甲氧基丙烷)，搅 拌反应呈悬浊液。向反应液中加入催化量50mg TsOH(对甲苯磺酸)，搅拌 反应至反应液澄清，于室温下反应，TLC监测反应结束后，用无水Na₂CO₃中和至pH为5～6，抽滤，减压蒸除溶剂，残余物通过硅胶柱色谱纯化，得到 中间体2，收率为87％。

(2)制备咖啡酰奎宁酸衍生物3f

于250mL圆底烧瓶中，准确称取中间体2 1.2g(3mmol)和BOP 1.5g (3mmol)，在氩气保护的条件下，加入70mL无水混合溶剂THF/CH₃CN (v/v＝3:2)搅拌至溶解。加入0.8g(6mmol)的DIEA后，向反应液中滴 加哌啶3mmol，直到TLC监测反应结束。减压蒸除溶剂，残余物通过硅胶 柱色谱纯化，得到咖啡酰奎宁酸衍生物3f，淡黄色粉末，收率为64％。

¹H-NMR(600MHz,DMSO)δ:9.59(s,1H,Ph-OH),9.15(s,1H,Ph-OH),7.48 (d,J＝15.8Hz,1H,H-7′),7.04(d,J＝1.5Hz,1H,H-2′),7.00(dd,J＝8.1Hz,1.5 Hz,1H,H-6’),6.77(d,J＝8.0Hz,1H,H-5’),6.22(d,J＝15.9Hz,1H,H-8′),5.62 (s,1H,H-1),5.32-5.29(m,1H,H-3),4.45-4.42(m,1H,H-4),4.08-4.06(m,1H, H-5),3.97-3.59(m,2H,NH-CH₂),3.55-3.43(m,1H,NH-CH),3.35-3.17(m,1H, NH-CH),2.33-2.30(m,1H,H-2),2.01-1.98(m,1H,H-2),1.90-1.86(m,2H,H-6), 1.58-1.50(m,2H,CH₂),1.49-1.37(m,2H,CH3-C-O,(CH₂)₂),1.25(m,3H,CH₃- C-O)；¹³C-NMR(150MHz,DMSO)δ:171.5,165.8,148.5,145.6,145.4,125.5, 121.3,115.8,114.8,114.0,108.0,76.1,74.8,73.2,70.6,37.0,36.8,34.5,29.0,27.9, 25.8,25.5,24.2；HRMS(ESI):Calcd for[M+Na]⁺C₂₄H₃₁NNaO₈:484.1947,found 484.1949。

实施例12咖啡酰奎宁酸衍生物4f的制备

(3)制备咖啡酰奎宁酸衍生物4f

于50mL圆底烧瓶中，分别准确称取2mmol咖啡酰奎宁酸衍生物3f， 加入TFA/DCM/H₂O的混合溶液(v/v＝9:1:1)20mL，室温下搅拌反应0.5 h，至TLC监测反应结束。减压蒸除溶剂，残余物通过硅胶柱色谱纯化，得 到咖啡酰奎宁酸衍生物4f，淡黄色粉末，收率为61％。

¹H-NMR(600MHz,MeOD)δ:7.57(d,J＝15.9Hz,1H,H-7′),7.05(d,J＝1.9 Hz,1H,H-2′),6.95(dd,J＝8.2Hz,2.0Hz,1H,H-6’),6.78(d,J＝8.2Hz,1H,H- 5’),6.26(d,J＝15.9Hz,1H,H-8′),5.36-5.33(m,1H,H-3),4.28-4.27(m,1H,H- 4),4.06-3.79(m,2H,NH-CH₂),3.73-3.71(m,1H,H-5),3.63-3.38(m,2H,NH- CH₂),2.33-2.01(m,4H,H-2,6),1.68-1.61(m,2H,CH₂),1.60-1.48(m,4H, (CH₂)₂),1.90-1.86(m,2H,H-6),1.58-1.50(m,2H,CH₂),1.49-1.37(m,2H, CH3-C-O,(CH₂)₂)；¹³C-NMR(150MHz,MeOD)δ:173.2,168.8,149.6,147.2, 146.8,127.8,123.0,116.5,115.3,115.2,78.6,73.3,72.4,71.6,40.0,39.2,38.7, 30.7,25.6；HRMS(ESI):Calcd for[M+Na]⁺C₂₁H₂₇NNaO₈:444.1634,found 444.1637。

实施例13咖啡酰奎宁酸衍生物3g的制备

(1)制备中间体2

于250mL的圆底烧瓶中准确称取7.0g(19.8mmol)3-O-咖啡酰奎宁酸 (化合物1)，加入60mL无水丙酮和40mL DMP(2,2-二甲氧基丙烷)，搅 拌反应呈悬浊液。向反应液中加入催化量50mg TsOH(对甲苯磺酸)，搅拌 反应至反应液澄清，于室温下反应，TLC监测反应结束后，用无水Na₂CO₃中和至pH为5～6，抽滤，减压蒸除溶剂，残余物通过硅胶柱色谱纯化，得到 中间体2，收率为87％。

(2)制备咖啡酰奎宁酸衍生物3g

于250mL圆底烧瓶中，准确称取中间体2 1.2g(3mmol)和BOP 1.5g (3mmol)，在氩气保护的条件下，加入70mL无水混合溶剂THF/CH₃CN (v/v＝3:2)搅拌至溶解。加入0.8g(6mmol)的DIEA后，向反应液中滴 加环己胺3mmol，直到TLC监测反应结束。减压蒸除溶剂，残余物通过硅 胶柱色谱纯化，得到咖啡酰奎宁酸衍生物3g，淡黄色粉末，收率为71％。

¹H-NMR(400MHz,DMSO)δ:7.47(d,J＝15.8Hz,1H,H-7′),7.38(d,J＝8.2 Hz,1H,NH),7.04-6.99(m,2H,H-2′,6’),6.76(d,J＝8.1Hz,1H,H-5’),6.24(d,J ＝15.8Hz,1H,H-8′),5.44(br,1H,H-1),5.37-5.30(m,1H,H-3),4.42-4.41(m,1H, H-4),4.14-4.11(m,1H,H-5),3.51-3.49(m,1H,NH-CH),2.25-2.20(m,1H,H-2), 1.97-1.91(m,1H,H-2),1.77-1.75(m,2H,H-6),1.67-1.65(m,4H,CH(CH2)2), 1.41(s,3H,CH3-C-O),1.26-1.10(m,9H,CH3-C-O,(CH₂)₃)；¹³C-NMR(100 MHz,DMSO)δ:174.1,165.8,148.4,145.5,145.3,125.5,121.3,115.7,114.8, 114.0,108.0,76.8,74.0,73.5,70.9,47.4,37.0,34.4,32.1,28.0,25.9,25.1,24.4； HRMS(ESI):Calcd for[M+Na]⁺C₂₅H₃₃NNaO₈:498.2104,found 498.2106。

实施例14咖啡酰奎宁酸衍生物4g的制备

(3)制备咖啡酰奎宁酸衍生物4g

于50mL圆底烧瓶中，分别准确称取2mmol咖啡酰奎宁酸衍生物3g， 加入TFA/DCM/H₂O的混合溶液(v/v＝9:1:1)20mL，室温下搅拌反应0.5 h，至TLC监测反应结束。减压蒸除溶剂，残余物通过硅胶柱色谱纯化，得 到咖啡酰奎宁酸衍生物4g，淡黄色粉末，收率为64％。

¹H-NMR(600MHz,MeOD)δ:7.57(d,J＝15.9Hz,1H,H-7′),7.05(d,J＝2.0 Hz,1H,H-2′),6.95(dd,J＝8.2Hz,2.0Hz,1H,H-6’),6.78(d,J＝8.2Hz,1H,H- 5’),6.29(d,J＝16.0Hz,1H,H-8′),5.42-5.36(m,1H,H-3),4.24-4.22(m,1H,H- 4),3.72-3.69(m,1H,H-5),3.65-3.58(m,1H,NH-CH),2.12-1.89(m,4H,H-2,6), 1.84-1.82(m,2H,CH₂),1.77-1.73(m,2H,CH₂),1.65-1.58(m,2H,CH₂), 1.40-1.34(m,2H,CH₂),1.26-1.23(m,2H,CH₂)；¹³C-NMR(150MHz,MeOD)δ: 175.7,169.0,149.6,147.0,146.8,127.8,122.9,116.5,115.4,115.2,77.6,74.4, 72.7,72.0,49.6,40.0,38.7,33.6,30.7,26.5,26.1；HRMS(ESI):Calcd for[M+ Na]+C₂₂H₂₉NNaO₈:458.1791,found 458.1795。

试验例1咖啡酰奎宁酸衍生物的生物活性测试

1.1细胞学实验方法

人肝HepG2细胞系采用含10％胎牛血清和青霉素/链霉素(100μg/mL) 的DMEM培养基，于37℃，5％CO₂的培养箱中培养。细胞长至培养皿 70～80％时，使用100μmol/L油酸(M)和棕榈酸混合液刺激细胞12h，制 成脂质堆积模型；随后给予不同的咖啡酰奎宁酸衍生物(10μmol/L)以及同 等浓度的绿原酸(即为3-O-咖啡酰奎宁酸)(CA)和辛伐他汀(S)阳性对照，外加一个空白组(K)对照，均孵育24h。实验结束后使用油红O染 色，通过分光分度仪在358nm下测定吸光度(A)值，观察咖啡酰奎宁酸类 化合物中具有抑制脂质堆积的有效化合物。每个实验均重复3次，根据三个 独立试验，数据表示为值。

1.2降脂活性结果

使用油红O染色试验检测绿原酸及其衍生物对HepG2肝细胞中油酸诱导 的脂质积累的降脂作用。油红O染色结果表明，一些衍生物对HepG2肝细胞 中油酸诱导的脂质积累具有中等至良好的调节作用。如图1所示，在10 μmol/L下的初步测试显示咖啡酰奎宁酸衍生物3d，3f，3g，4a和4c更好地 缓和了HepG2细胞的降脂作用。用咖啡酰奎宁酸衍生物3d，3g，4a和4c处 理HepG2肝细胞比绿原酸(CA)具有更好的调节作用。在分别用图1A中的 10μmol/L咖啡酰奎宁酸衍生物3d，3f和3g处理后，吸光度从0.261(单独 用油酸处理)降低到0.249,0.255和0.249。在图1B中，分别在处理10 μmol/L衍生物4a，4c，4d，4e，4f和4g后，吸光度从0.282(单独的油酸) 降低至0.271,0.267,0.270,0.273,0.271和0.272。其中，咖啡酰奎宁酸衍生物 3d，3g，4c和4d在处理24小时后表现出比其他衍生物更强的调节作用，这 表明3d，3g，4c和4d作为调节油酸引起HepG2肝细胞中的脂质积累的潜在 调节血脂化合物值得深入研究。

1.3构效关系分析

初步的构效关系(SARs)分析表明，与辛伐他汀(S)和绿原酸(CA) 阳性对照组相比，具有被缩酮取代的4,5位羟基的绿原酸的酰胺衍生物的活 性稍弱于4,5位羟基裸露的衍生物。除此之外，含有炔丙胺基，哌啶基和环 己胺基团的衍生物3d，4d，3f，4f，3g和4g可以更好地调节油酸处理后的 脂质积累，表明炔丙胺基，哌啶基和环己胺基的引入可以改善脂质积累作 用。其中，与其他化合物相比，衍生物3d和4d表现出更强的降脂作用，这 意味着炔丙胺基是调节HepG2肝细胞中脂质积累的有利取代基。然而，衍生 物3b和4b(包括异丁胺基)活性较弱，表明异丁胺基的引入不利于衍生物 发挥降脂活性。此外，上述衍生物在图1中显示出降脂作用，说明绿原酸的 1位羧基和4,5位羟基不是调节脂质效应的必需基团，并且1位羧基上的不 同胺基取代基对降脂活性的影响较为明显。

所属领域的普通技术人员应当理解：以上任何实施例的讨论仅为示例性 的，并非旨在暗示本公开的范围(包括权利要求)被限于这些例子；在本发 明的思路下，以上实施例或者不同实施例中的技术特征之间也可以进行组 合，并存在如上所述的本发明的不同方面的许多其它变化，为了简明它们没 有在细节中提供。因此，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何省略、 修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。