阅读说明：本技术 一种增强羊抗氧化能力的发酵颗粒饲料及其制备方法 (Fermented pellet feed for enhancing oxidation resistance of sheep and preparation method thereof ) 是由 侯启瑞 赵卫国 吴萍 沈曼曼 于 2020-04-30 设计创作，主要内容包括：本发明公开一种增强羊抗氧化能力的发酵颗粒饲料及其制备方法,其原料包括抗氧化青绿饲料、麸皮、谷朊粉、膨化豆粕、黏合剂、食盐、复合添加剂和混合菌液,抗氧化青绿饲料中含有发酵桑叶粉、西红柿、红薯藤、柑橘渣、羊草等成分,混合饲料时采用特定的发酵工艺,显著增强羊的抗氧化能力,同时保持羊肉的品质。(The invention discloses a fermented pellet feed for enhancing oxidation resistance of sheep and a preparation method thereof, wherein the raw materials comprise antioxidant green feed, bran, wheat gluten, puffed soybean meal, adhesive, salt, compound additive and mixed bacterial liquid, the antioxidant green feed contains fermented mulberry leaf powder, tomatoes, sweet potato vines, citrus residues, Chinese wildrye and other components, and a specific fermentation process is adopted during mixed feed, so that the oxidation resistance of sheep is remarkably enhanced, and the quality of mutton is maintained.)

一种增强羊抗氧化能力的发酵颗粒饲料及其制备方法

技术领域

本发明涉及畜牧饲料领域，具体地说涉及一种增强羊抗氧化能力的发酵颗粒饲料及其制备方法。

背景技术

羊是我国重要的畜种，其与牛一样都属于反刍动物，具有胃肠容积大、消化能力强、耐粗饲的消化特点。畜牧业中常规使用的反刍动物配合饲料主要是以玉米、高粱、小麦、农副产品为代表的能量饲料，以豆粕、菜籽粕、棉籽粕、鱼粉为代表的蛋白质饲料，通过与预混料添加剂混合制成。

羊在养殖过程易发生应激反应，环境变化、噪声、过度挤压、高温、饲料能量过高或营养构成比例不当等都会对羊造成应激，无法消除多余的氧自由基，对羊各种组织代谢产生影响，降低羊肉pH值和系水能力，增加蒸煮损失，影响羊肉口感和感官品质。

另一方面，现有研究表明，在新鲜蔬果中存在较多的黄酮类物质，具有较好的抗氧化效果。将这些新鲜蔬果直接加入饲料中并不能有效提高饲料的抗自由基效果，如何优化饲料各个组分及其制备工艺需要本领域技术人员寻求技术突破。

发明内容

发明目的：本发明的目的是提供一种能量充足、营养丰富、有效增强羊抗氧化能力的发酵颗粒饲料，促进羊生长的同时，可保持羊肉品质；本发明还有一个目的是提供前述发酵颗粒饲料的制备方法。

技术方案：为了实现上述发明目的，本发明的一种增强羊抗氧化能力的发酵颗粒饲料，其原料按质量份数计包括：

抗氧化青绿饲料 45-60份，

麸皮 13-18份，

谷朊粉 5-10份，

发酵豆粕 30-40份，

黏合剂 3-5份，

食盐 0-1份，

复合添加剂 0.1-3份，

混合菌液 10-15份；

其中，所述抗氧化青绿饲料至少包括40 wt%的发酵桑叶粉。

上述的发酵豆粕、麸皮为能量饲料组分；谷朊粉和发酵豆粕作为蛋白质饲料原料提供饲料的主要必需氨基酸来源；发酵豆粕是以优质豆粕为主要原料，接种微生物进行固体发酵获得，通过微生物的发酵最大限度地消除豆粕中的抗营养因子，有利于提高羊对蛋白质的消化；复合添加剂中包含适用于羊的必要的维生素和矿物质。本发明饲料的主要成分为抗氧化青绿饲料，其至少包含40 wt%的发酵桑叶粉。

进一步地，所述抗氧化青绿饲料包括43-59 wt%的发酵桑叶粉、15-25 wt%的羊草、其余包括至少一种茎叶类植物、以及至少一种浆果类植物；所述茎叶类植物选自包括但不限于红薯藤、南瓜藤、银杏叶的任意一种或多种的组合，所述浆果类植物选自包括但不限于西红柿、葡萄渣、柑橘渣任意一种或多种的组合。本发明将发酵桑叶粉与新鲜蔬果、羊草混合，提供了丰富的营养组合效应，显著提高了饲料中抗氧化成分的含量，并有利于降低应激反应。优选在投喂饲料前5-10天混合上述组分，经发酵、造粒、烘干备用，可极大程度地保证饲料的新鲜。其中，羊草是我国北方地区广泛种植的优良牧草，叶片含量丰富，营养价值高，可全年为畜牧养殖提供较多的青饲料，是牛羊喜食的纤维源饲料；添加少量食盐可以增加饲料的适口性。

进一步地，为了提供优选的配方比例，所述抗氧化青绿饲料由45-55 wt%的发酵桑叶粉、18-22 wt %的羊草、9-17 wt%的西红柿、10-19 wt%的红薯藤、以及1-7%的柑橘渣组成。

本发明所述发酵桑叶粉是将切碎的新鲜桑叶与解淀粉芽孢杆菌混合后，常温密封发酵5-10天，然后烘干粉碎获得的；每100g新鲜桑叶中加入解淀粉芽孢杆菌10ml，解淀粉芽孢杆菌的菌液浓度为10⁶-10⁸CFU/mL。

所述黏合剂含有蛋清、以及包括但不限于玉米蛋白粉、糯米粉的任意一种或多种的组合。优选采用玉米蛋白粉、糯米粉、蛋清按一定比例混合配制而成。

所述混合菌液包括但不限于乳酸菌、枯草芽孢杆菌、双歧杆菌、酵母菌、沼泽红假单孢菌、芽孢杆菌的任意一种或多种的组合。优选利用酵母菌、枯草芽孢杆菌为主，辅以乳酸菌混合而成。

所述复合添加剂包括矿物质和维生素，所述矿物质选自包括但不限于Mn、Se、Cu、Fe、I、Zn、Co、F、Cd、Cr、Mo的任意一种或多种的组合，所述维生素选自包括但不限于维生素A、维生素B1、维生素B2、泛酸、维生素B6、维生素B12、维生素C、维生素D2、维生素E、维生素D3、维生素K3、叶酸的任意一种或多种的组合。复合添加剂可适当加入小麦粉作为载体。

如前述增强羊抗氧化能力的发酵颗粒饲料发酵颗粒饲料的制备方法，该方法是将发酵桑叶粉与羊草、至少一种茎叶类植物、以及至少一种浆果类植物混合获得抗氧化青绿饲料，然后与麸皮、谷朊粉、发酵豆粕、黏合剂、食盐、复合添加剂按比例混合均匀获得一次料；再将混合菌液均匀喷洒到一次料中，置于30-35℃恒温发酵5-6天，取出，造粒，烘干。其中，黏合剂是将玉米蛋白粉、糯米粉、蛋清混合搅拌均匀制备而成，黏合剂在混合前12h内制备。

所述发酵桑叶粉是将切碎的新鲜桑叶经发酵获得，优选加入解淀粉芽孢杆菌，混合后装入发酵桶压实，加盖密封发酵，再经烘干粉碎获得；每100g新鲜桑叶中加入解淀粉芽孢杆菌10ml，解淀粉芽孢杆菌的菌液浓度为10⁶-10⁸CFU/mL。

更优选地，将所述发酵桑叶粉与羊草、至少一种茎叶类植物、以及至少一种浆果类植物混合搅拌均匀后，在20-25℃放置20-30h，获得抗氧化青绿饲料。

本发明选用发酵桑叶粉、羊草和新鲜蔬果混合以获得抗氧化青绿饲料，并进一步与其他组分混合、发酵，有利于提高饲料中酚类、黄酮物质的富集，适当提高了饲料的酸度，其作为羊饲料获得了意想不到的效果：不仅提高了饲料的适口性，使羊的采食量显著提高，且抗氧化青绿饲料带来的多酚物质（以没食子酸为主）和总黄酮（以芦丁为主）含量显著提高。经体内试验发现，该饲料显著提高了羊的抗氧化能力，减少了肝脏活性氧ROS的含量，羊体重增长加快，而肉品质不变。

本饲料在制备时使用了发酵桑叶和发酵豆粕。由于桑叶和豆粕中含多种抗营养因子，发酵后抗营养因子含量明显降低，且蛋白含量有所提高。制备抗氧化青绿饲料时先与发酵桑叶混合，利用桑叶粉中残留的菌及其酶产物自然发酵，使青绿饲料中的养分析出，有利于消化吸收，且生物活性物质含量提高，抗氧化能力增强。混合菌液含有可消化碳水化合物、蛋白质、糖、淀粉、纤维素酶、蛋白酶、果胶酶、淀粉酶等多种消化酶的菌，能降解饲料中多种难消化的成分，有利于保护羊的肠道健康，维持肠道菌群平衡。

附图说明

图1为试验例1的没食子酸标准曲线；

图2为试验例1的芦丁标准曲线。

具体实施方式

为了使本领域的普通技术人员能更好的理解本发明的技术方案，下面结合附图和实施例对本发明的技术方案做进一步的描述。

实施例1

一种增强羊抗氧化能力的发酵颗粒饲料，其原料按重量份包括：抗氧化青绿饲料45份，麸皮18份，谷朊粉5份，发酵豆粕40份，黏合剂5份，食盐0.5份，复合添加剂1份，混合菌液10份。

抗氧化青绿饲料的制备方法为：发酵桑叶粉40份、西红柿13份、红薯藤10份、柑橘渣5份、羊草15份混合搅拌均匀，20℃放置24h。

混合菌液为乳酸菌10⁴ CFU/mL、枯草芽孢杆菌10⁷ CFU/ mL、酵母菌10⁶ CFU/ mL。

在投喂前，将抗氧化青绿饲料与麸皮、谷朊粉、发酵豆粕、黏合剂、食盐、复合添加剂按比例混合均匀获得一次料；再将混合菌液均匀喷洒到一次料中，置30℃恒温发酵箱内发酵6天，取出，造粒，烘干。

实施例2

一种增强羊抗氧化能力的发酵颗粒饲料，其原料按重量份包括：抗氧化青绿饲料60份，麸皮13份，谷朊粉10份，发酵豆粕30份，黏合剂5份，食盐0.5份，复合添加剂1份，混合菌液15份。

抗氧化青绿饲料的制备方法为：发酵桑叶粉50份、西红柿9份、红薯藤10份、柑橘渣1份、羊草20份混合搅拌均匀，25℃放置24h。

混合菌液包含乳酸菌10⁵ CFU/mL、枯草芽孢杆菌10⁶ CFU/ mL、酵母菌10⁷ CFU/ mL。

在投喂前，将抗氧化青绿饲料与麸皮、谷朊粉、发酵豆粕、黏合剂、食盐、复合添加剂按比例混合均匀获得一次料；再将混合菌液均匀喷洒到一次料中，置35℃恒温发酵箱内发酵5天，取出，造粒，烘干。

实施例3

一种增强羊抗氧化能力的发酵颗粒饲料，其原料按重量份包括：抗氧化青绿饲料50份，麸皮15份，谷朊粉7份，发酵豆粕35份，黏合剂4份，食盐0.5份，复合添加剂1份，混合菌液12份。

抗氧化青绿饲料的制备方法为：发酵桑叶粉45份、西红柿10份、红薯藤12份、柑橘渣3份、羊草18份混合搅拌均匀，25℃放置24h。

混合菌液包含乳酸菌10⁵ CFU/mL、枯草芽孢杆菌10⁶ CFU/ mL、酵母菌10⁶ CFU/ mL。

在投喂前，将抗氧化青绿饲料与麸皮、谷朊粉、发酵豆粕、黏合剂、食盐、复合添加剂按比例混合均匀获得一次料；再将混合菌液均匀喷洒到一次料中，置30℃恒温发酵箱内发酵5.5天，取出，造粒，烘干。

以上实施例1至实施例3的复合添加剂为市售添加剂，由矿物质、微量元素、维生素组成，其组成为：Mn 40mg/g、Se 0.15mg/g、Cu 7mg/kg、Fe 35mg/kg、I 0.3mg/kg、Zn 55mg/kg、Co 0.2mg/kg、有效VA 1410-2350IU、VD3 420-700IU、VE 20-24IU，载体为小麦粉。黏合剂制备方法为：在混合前12h内，将玉米蛋白粉3份、糯米粉3份、蛋清3份，混合搅拌均匀。

实施例1至实施例3中所述发酵桑叶粉的制备方法为：将鲜桑叶切碎，按每100g桑叶加入10mL解淀粉芽孢杆菌，菌浓度为10⁷CFU/mL，混合均匀，装入发酵桶压实，加盖密封后25℃发酵7d，烘干粉碎。

对比例1

一种增强羊抗氧化能力的发酵颗粒饲料，其原料按重量份包括：羊草45份，麸皮18份，谷朊粉5份，发酵豆粕40份，黏合剂5份，食盐0.5份，复合添加剂1份，混合菌液10份。

在投喂前，将羊草与麸皮、谷朊粉、发酵豆粕、黏合剂、食盐、复合添加剂按比例混合均匀获得一次料；再将混合菌液均匀喷洒到一次料中，置30℃恒温发酵箱内发酵6天，取出，造粒，烘干。混合菌液包含乳酸菌10⁴ CFU/mL、枯草芽孢杆菌10⁷ CFU/ mL、酵母菌10⁶ CFU/ mL。

对比例2

本对比例与实施例1基本相同，其区别在于：将抗氧化青绿饲料中的发酵桑叶粉替换为新鲜桑叶切碎烘干获得的普通桑叶粉。

对比例3

一种普通羊配合饲料，包括：羊草40.0份、玉米40.5份、小麦粉4.5份、豆粕14.5份、食盐0.5份、复合添加剂1.0份。

试验例1 饲料中黄酮和多酚含量测定

多酚是植物中的酚类次生代谢产物，黄酮类化合物主要包括芦丁、槲皮素和异槲皮苷等成分，是优良的天然抗氧化活性物质，能清除自由基，增强动物抗应激能力。本试验通过对比前文各个实施例和对比例的多酚和总黄酮含量，证明本发明的技术效果。

1. 材料与方法

1.1 试验材料

实施例1、2、3；对比例1、2、3。

1.2 试验方法

1.2.1 多酚物质的测定

称取3.00 g样品，用20 mL 80%甲醇研磨搅拌，在4℃下浸提12 h以上，于8 000 r/min离心 20 min，过滤，洗渣，定容至25 mL，即为样品提取液。

标准曲线的绘制：准确称取1.000g没食子酸，用去离子水定容至100mL，配制成质量浓度为10 mg/mL没食子酸标准溶液，依次稀释成50μg/mL、100μg/mL、150μg/mL、200μg/mL、300μg/mL、400μg/mL标准工作液。分别取0.5 mL标准工作液于25 mL比色管中，加入1 mL福林-酚显色剂，混匀静置30 s后加入18 mL 4%的Na₂CO₃溶液并用去离子水定容至刻度，40℃水浴反应20 min后，以去离子水作为参比，于波长736 nm处测定吸光度值，以没食子酸质量浓度（x）为横坐标，吸光度值（y）为纵坐标，绘制没食子酸标准曲线，如图1所示。

采用福林-酚比色法检测样品提取液中多酚物质的含量。具体方法为：准确吸取1mL样品提取液6份于6支25 mL的具塞比色管中，加入1 mL福林-酚显色剂，混匀静置30 s后加入18 mL 4%的Na₂CO₃溶液并用去离子水定容至刻度，40℃水浴反应20min后，以去离子水作为参比，于波长736nm处测定吸光度值，由标准曲线计算样品提取液中多酚含量，再折算出样品中多酚物质的含量。

1.2.2 总黄酮的测定

称取样品5.00 g，加体积分数70%乙醇40 mL研磨搅拌，在4℃下浸提12 h以上，于8000r/min离心 20 min，过滤，洗渣，定容至25 mL，即为样品提取液。

标准曲线的绘制：准确称取芦丁标准品10.40 mg，用50%乙醇溶解、定容至50 mL，配制成芦丁标准溶液。分别准确吸取芦丁标准溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，置于10 mL容量瓶中，分别加入5%的NaNO₂溶液0.5 mL摇匀，放置5 min后加入10% Al(NO₃)₃溶液0.5mL，再过5 min后再加入4 mL 4% NaOH溶液，混匀，用50%乙醇稀释至刻度。放置15 min，在510 nm下测定吸光度，以第一管溶液作为空白。以芦丁浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线，如图2所示。

准确吸取待测样品液1mL，放入10 mL容量瓶中，分别加入5%的NaNO₂溶液0.5 mL摇匀，放置5 min后加入10%Al(NO₃)₃溶液0.5 mL，再过5 min后再加入4 mL的4%NaOH溶液，混匀，用50%乙醇稀释至刻度。放置15 min，在510 nm下测定吸光度。根据标准曲线计算总黄酮含量。

2. 结果与分析

试验组与对照组中黄酮和多酚含量如表1所示：

经过检测，本发明的3个实施例中的多酚含量＞0.37 g/100g，总黄酮含量＞2.13 g/100g，显著高于普通羊饲料（对比例3）的多酚和总黄酮含量。对比例1不含抗氧化青绿饲料，样品中的多酚和总黄酮含量明显降低，可见抗氧化青绿饲料的添加可显著提高饲料中的抗氧化成分。对比例2与实施例1基本相同，其区别在于将抗氧化青绿饲料中的发酵桑叶粉替换为普通桑叶粉，二者组成成分无较大区别，总黄酮和多酚含量相近。

试验例2 饲料对羊生长性能、机体抗氧化性能和肉品质的影响

动物机体的抗氧化水平，一定程度上反映了机体的健康状况。氧自由基 (ROS) 是机体代谢过程中排出外源物质和抗应激反应时的产物，包括超氧离子自由基、羟自由基和过氧化氢。当机体内的抗氧化酶系统不能及时清除过量的 ROS，就会造成氧化损伤。因此，可以通过血清和肝脏抗氧化酶活性的变化来评估动物的健康状况。动物机体健康，则生长性能会得到提高，肉品质也会得到改善。

1. 材料与方法

1.1 试验材料

实施例1、2、3；对比例1、2、3。

1.2 试验方法

采取完全随机试验设计。选取48只6月龄体重相近、健康状况良好的湖羊公羊，随机分为6组，每组8个重复，每个重复1只，单栏饲养。舍饲前对羊舍彻底清理，消毒，统一驱虫和免疫。饲粮分别选用实施例1、2、3和对比例1、2、3。试验期间每日饲喂2次（07:00和17:00），自由饮水，自然光照。预试期10d，正试期55d。正式试验开始和结束时称量试验羊空腹体重，每日记录饲料量和剩余料量。计算平均日增重、日采食量和料重比。

第65天晨饲前颈静脉采血5 mL，置于无抗凝剂采血管中。将采好的血静置40 min，自然凝固，血清析出之后，800g离心10 min。用干燥EP管收集血清，即刻使用或-20 ℃保存待用。

试验期结束之后，每组根据日采食量、平均日增重等条件相近原则选取3只羊进行屠宰，采集背最长肌，剔除表面筋膜和脂肪，4℃冷藏备用。采集0.1~0.2 g肝组织，通过预冷的生理盐水进行清洗，除去表面血液及残留物，滤纸拭干，准确称重，置于5 mL冻存管中备用。使用时研磨，用匀浆介质制成10%的肝匀浆。

测定血清、肝脏总抗氧化能力（T-AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）、氧化氢酶（CAT）活力及丙二醛（MDA）含量。试验具体步骤及计算方法严格按照南京建成生物工程研究所提供的T-AOC、SOD、CAT、MDA测试盒的说明操作。测定组织抗氧化指标时，必须先测定组织内的蛋白质含量，之后按照测试盒的说明进行测定。组织蛋白质含量测定及计算方法按照南京建成生物工程研究所提供的蛋白质定量测试盒进行操作。

采用便携式pH计，将探针插入宰后45 min背最长肌样品中心部位，待数值稳定后记录，同一个样品测定3次，取平均值；肉色用标准比色板打分（1～6分）；用WW -2A 型应变式无侧限压力仪测定系水力；用C-LM 型嫩度仪测定背最长肌肉样的剪切力；取30 g 左右背最长肌放于铝蒸锅中，用2000 W 的电炉将肉样蒸煮45 min，然后再取出肉样冷却0.5 h后称重，煮后肉样重占煮前生肉重的百分比为熟肉率。粗蛋白含量采用FOSS定氮仪（Kjeltec-2300，瑞典）测定。肌内脂肪含量用ANKOM脂肪仪（XT-15，美国）测定。

2. 结果与分析

2.1 生长性能

分别饲喂实施1、2、3和对比例1、2、3一段时间，各组羊生长性能结果如表2所示。实施例饲料与普通饲料（对比例3）相比，显著提高了羊的采食量和体增重，降低了料重比（P<0.05），说明饲喂本发明的饲料能显著提高羊的生长性能，优于饲喂普通饲料。对比例1不含抗氧化青绿饲料，羊的采食量和体增重与普通饲料组（对比例3）相近，低于实施例组（P<0.05），说明抗氧化青绿饲料组分在本发明中具有重要作用，能显著提高羊的采食量和体增重。对比例2用新鲜桑叶代替发酵桑叶，与实施例相比，羊的采食量没有发生较大变化，日增重略有下降，但未达到显著水平（P＞0.05），然而料重比显著高于实施例组（P<0.05），说明鲜桑叶的饲喂效果不及发酵桑叶，可能桑叶中的某些成分在发酵后更有利于羊对营养物质的消化利用。

2.2 血清和肝脏抗氧化指标

由表3和表4可以看出，实施例组羊血清和肝脏T-AOC活性显著高于对比例1和3组（P＜0.05），血清SOD活性显著高于对比例1和3组（P＜0.05），肝脏SOD活性略高于对比例1和3组（P＞0.05），血清和肝脏CAT活性组间无显著变化（P＞0.05），而脂质代谢过氧化产物MDA显著低于对比例1和3组（P＜0.05），说明实施例饲料相对于未添加抗氧化青绿饲料组分的饲料和普通饲料，能显著增强羊的抗氧化能力，减少脂质过氧化伤害。对比例2以新鲜桑叶代替发酵桑叶，多酚和总黄酮含量与实施例相当，也能提高羊的抗氧化性能。

2.3肉品质

各组羊肉品质检测结果见表5。从表中可以看出，实施例组羊肉剪切力显著小于对比例1和对比例3，熟肉率显著大于对比例1和对比例3，说明本发明的羊饲料能提高羊肉的嫩度，减少蒸煮损失。对比例1和3饲料中不含抗氧化青绿饲料组分，本发明饲料在提高羊肉品质方面的优势可能正是抗氧化青绿饲料所起的作用。在肌肉成分方面，实施例组的羊肉脂肪含量略高于对比例组，可见本发明的羊饲料具有一定的育肥效果。