阅读说明：本技术 一种消炎杀菌的精油组合物、其制备方法及应用 (Anti-inflammatory and bactericidal essential oil composition, and preparation method and application thereof ) 是由 汪垠明 符春丽 田伟兰 祝荣荣 汪羿典 汪翔 卢正美 于 2019-12-04 设计创作，主要内容包括：本发明提供一种消炎杀菌的精油组合物,所述组合物通过茶树精油、薰衣草精油、艾叶精油、薄荷精油、迷迭香精油和百里香精油共同作用,协同达到提高消炎抗菌,延长挥发时间,提升精油持久性的功效。本发明提供的精油组合物一方面通过各组分中的酚类物质进入到微生物的细胞膜或细胞壁内,使细胞膜功能受到影响,促使细胞内容物外泄,破坏细胞结构,导致微生物的死亡；另一方面通过各组分中的萜类物质,对微生物代谢、还原型辅酶及其他酶的活性有抑制作用,导致微生物新陈代谢紊乱,达到抑菌的功效。本发明提供精油组合物通过各组分相互作用,协同增效,从而有效提高对细菌的抑制及杀灭效率,同时能够延长精油作用的时间,使得消炎抗菌效果持久。(The invention provides an anti-inflammatory and antibacterial essential oil composition which synergistically achieves the effects of improving anti-inflammatory and antibacterial effects, prolonging volatilization time and improving persistence of essential oil through combined action of tea tree essential oil, lavender essential oil, folium artemisiae argyi essential oil, mint essential oil, rosemary essential oil and thyme essential oil. On one hand, the essential oil composition provided by the invention has the advantages that phenolic substances in all components enter cell membranes or cell walls of microorganisms, so that the functions of the cell membranes are influenced, the contents of the cells are promoted to leak, the cell structures are damaged, and the microorganisms are killed; on the other hand, terpenoids in the components have the effect of inhibiting the metabolism of microorganisms, the activity of reduced coenzyme and other enzymes, so that the metabolism of the microorganisms is disordered, and the bacteriostatic effect is achieved. The essential oil composition provided by the invention has the advantages that the components interact with each other to realize synergistic interaction, so that the inhibition and killing efficiency on bacteria is effectively improved, the acting time of the essential oil can be prolonged, and the anti-inflammatory and antibacterial effects are durable.)

一种消炎杀菌的精油组合物、其制备方法及应用

技术领域

本发明属于精油技术领域，具体涉及一种消炎杀菌的精油组合物、其制备方法及应用。

背景技术

植物精油又称香精油或者芳香油，是具有一定香味的挥发性油状液体的总称。为植物体内产生的次生代谢产物，属脂肪族、芳香族、萜类化合物及含硫化合物。植物精油可存在于植物的不同组织中。植物精油作为一种新型抗抑菌剂，具有多种优势，如抑菌效果好、对人体刺激性小、毒副作用少、对环境污染较小。现有技术研究表明薰衣草精油直接接触对链格孢霉的抑菌率可分别高达90.36％和90.18％；丁香精油抑制细菌、肉桂精油抑制真菌的能力较强，复配精油对大肠杆菌、黑曲霉的抑菌效果明显；竹叶精油对枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和酿酒酵母均有抑制作用，对大肠杆菌是抑制效果最好。但是现有技术中研究的多为单方精油的抑菌效果，单方精油通常仅仅对单一的或者是某几种细菌具有抑制作用，并且抑菌作用有效，此外大多数单方精油容易挥发，抑菌的时效较短，而针对复方精油的消炎杀菌作用的研究较少。

发明内容

为了解决以上的技术问题，本发明提供一种消炎杀菌的精油组合物，所述组合物通过多种精油共同作用，协同达到良好的抗菌消炎的功效。

本发明的目的是提供一种消炎杀菌的精油组合物。

本发明的另一目的是提供一种上述消炎杀菌的精油组合物的制备方法。

本发明的再一目的是提供上述消炎杀菌的精油组合物的应用。

根据本发明的目的，本发明提供的消炎杀菌的精油组合物，包括以下重量份的组分：

茶树精油15-60份；

薰衣草精油15-60份；

艾叶精油15-60份；

薄荷精油10-30份；

迷迭香精油5-35份；

百里香精油10-30份。

本发明提供的精油组合物通过茶树精油、薰衣草精油、艾叶精油、薄荷精油、迷迭香精油和百里香精油共同作用，协同达到提高消炎抗菌效果，延长挥发时间，提升精油持久性，改善单一精油气味的功效。本发明提供的精油组合物一方面通过酚类物质进入到微生物的细胞膜或者细胞壁内，导致细胞膜功能受到影响，促使细胞内容物外泄，破坏细胞结构，从而导致微生物的死亡；另一方面通过萜类物质，对微生物初生能量代谢、还原型辅酶及其他酶的活性有抑制作用，从而导致微生物新陈代谢紊乱，从而达到抑菌的功效。本发明提供精油组合物通过各组分相互作用，协同增效，从而有效提高对细菌的抑制及杀灭效率，同时能够延长精油作用的时间，使得消炎抗菌效果持久。

本发明通过茶树精油、薰衣草精油、艾叶精油、薄荷精油、迷迭香精油和百里香精油共同作用，这些组分单独使用均具有一定杀菌作用，但是，一方面它们杀菌的种类有效，功效有限，另一方面，单独使用易挥发，香味单一。本发明通过上述组分以特定的重量比配合，协同增强杀菌的功效，同时能够延长作用时间，提升杀菌的时效。本发明对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌均有良好的抑菌效果。

为了对本发明的技术方案做更好的解释，以下提供各组分的功效。

茶树精油，最主要的化学成分为乙烯(terpinene)、松油精(pinene)、柠檬油精(limonene)、桉油酚(cineole)、香油脑(terpineol)、茴香素(cumene)等。茶树精油中的有效成分能够帮助免疫系统抵抗传染性疾病，策动白血球形成防护线，为强效的抗菌精油。茶树精油对滴虫、念珠菌、霉菌等真菌感染有很好的疗效。但是茶树精油易挥发，通常在24h内会挥发完全。

薰衣草精油可以清热解毒，清洁皮肤，控制油分，祛斑美白，祛皱嫩肤，促进受损组织再生等功能。薰衣草精油分子通过刺激嗅觉神经，从而刺激大脑中枢，使得大脑产生兴奋，调节神经活动；通过亲和作用个，进入到皮下，改善内环境；通过亲和作用进入到皮下，促进血行和淋巴循环，加快人体新陈代谢；薰衣草精油能够直接杀灭病菌及微生物，达到灭菌功效。

艾叶精油的主要成分为艾草素、4-羟基-8-乙酰氧基-8-乙酰氧基-1、12-内酯、洋艾内酯、洋艾内酯、洋艾素、艾草宁等。艾草精油的主治功效，理气血，温经脉，祛寒湿，止痛，抗菌，消炎，激励消化腺，镇咳化痰，促循环，补气，提升免疫力。

薄荷精油中含有薄荷醇、桉树醇、领苯二甲酸二丁酯、1,3-二氧六环-5-醇、α-萜品醇等活性物质，薄菏精油具有洁肤、镇静舒缓、消炎镇痛、安抚提神的功效。

迷迭香精油中的主要成分为单萜、倍半萜等萜类，迷迭香精油具有明显的抑菌、抗氧化、消炎镇痛的功效，迷迭香精油能够促进血液循环，刺激毛发再生；减轻皮肤充血、浮肿；具有抗氧化、延缓衰老，减肥降脂，消炎，杀菌的功效。

百里香精油中的主要成分为对-聚伞花素、百里香酚、γ-松油烯、桉油精、香芹酚甲醚、β-甜没药烯、冰片和水合桧烯等，百里香精油能够从皮肤快速渗透到毛孔和毛囊中，百里香精油具可强化神经、活化细胞，提高记忆力和注意力，具有很强的杀菌作用。

上述的消炎杀菌的精油组合物，优选地，包括以下重量份的组分：

茶树精油20份；

薰衣草精油20份；

艾叶精油20份；

薄荷精油15份；

迷迭香精油10份；

百里香精油15份。

上述的消炎杀菌的精油组合物，优选地，包括以下重量份的组分：

茶树精油15份；

薰衣草精油15份；

艾叶精油15份；

薄荷精油15份；

迷迭香精油15份；

百里香精油15份。

本发明提供上述消炎杀菌的精油组合物的制备方法，包括以下步骤：

(1)制备茶树精油：取互叶白千层茶树茎叶，冷冻干燥，粉碎，过筛，得到茶树粉，然后将所述茶树粉加入到乙醇水溶液中，浸泡，然后进行微波提取，然后采用超临界CO₂萃取，蒸馏，分离，得到所述茶树精油；

(2)制备薰衣草精油：取薰衣草，冷冻干燥，粉碎，过筛，得到薰衣草粉末，然后将薰衣草粉末将入到乙醇水溶液中，浸泡，超声处理，蒸馏，分离，得到所述薰衣草精油；

(3)制备艾叶精油：取艾叶，粉碎，加入到蒸馏水中，浸泡，然后加入艾叶重量0.5-0.8％的复合酶，酶解，然后蒸馏提取，静置分离，得到所述艾叶精油；

(4)制备薄荷精油：取薄荷，在60-65℃干燥，粉碎，得到薄荷粉，将薄荷粉加入到水中，浸泡，加热，收集蒸馏液，将蒸馏液加入到无水***中，萃取，得到萃取液，加入无水硫酸钠进行干燥，得到所述薄荷精油；

(5)制备迷迭香精油：取迷迭香，粉碎，加入到水中浸泡，调节pH至3-3.5,然后加入迷迭香重量0.2-0.3％的纤维素酶，酶解，得到酶解液，然后进行蒸馏，分离，得到所述迷迭香精油；

(6)制备百里香精油：取百里香，粉碎，过筛，加入到体积分数为90-95％的乙醇溶液中，然后利用超临界CO₂萃取，萃取的温度为35-40℃，萃取的压力为20-25MPa，CO₂的流量为20-25L/min，萃取之后得到百里香粗提物，然后进行分离，得到所述百里香精油；

(7)将茶树精油、薰衣草精油、艾叶精油、薄荷精油、迷迭香精油和百里香精油混合均匀，得到所述消炎杀菌的精油组合物。

本发明提供的精油组合物的制备方法，通过冷冻干燥保留茶树茎叶中的有效物质，通过微波辅助超临界CO₂萃取的方法，提取茶树中有效物质，从而保证茶树精油得率尽可能保留茶树精油中的活性物质；通过冷冻干燥，超声处理，蒸馏的方式，促进薰衣草中的有效物质的馏出；通过酶解之后，水蒸气蒸馏的方式，促进艾叶精油提取；通过水蒸气蒸馏，配合萃取的方式，提起薄荷精油，保证得到的薄荷精油中最大程度保留活性物质；通过酶解配合蒸馏的方式，提取迷迭香精油，通过超临界CO₂萃取的方式提取百里香精油；然后将各组分精油进行均匀混合，得到精油组合物。本发明提供的精油组合物的制备方法，根据各精油的特点，通过合理的方式，一方面保证精油中活性物质得到有效保留，另一方面提高精油的得率。

优选地，步骤(1)中，所述乙醇水溶液的体积分数为70-80％。

优选地，步骤(1)中，所述超临界CO₂萃取的温度为30-35℃，萃取的压力为20-25MPa，流体流量为750-760L/h，萃取时间为3.5-4.5h。

优选地，步骤(3)中，所述复合酶为纤维素酶和果胶酶，所述纤维素酶与果胶酶的重量比为2-3:1。

优选地，步骤(3)中，所述酶解的温度为35-40℃，酶解时间为25-35min。

优选地，步骤(5)中，所述酶解的温度为25-35℃，酶解的时间为1.5-2.5h。

本发明提供酶解条件，根据各原料的特点，使得薄荷和迷迭香得到充分的酶解，为提取精油做充分的准备，有效提高精油的得率。

本发明提供的精油组合物能够应用于制备治疗妇女疾病药物中。优选地，所述精油组合物在药物中的浓度在100μL/L以上。本发明提供的精油组合物通过各组分之间协同作用，共同发挥消炎抗菌的功效，对引起妇科疾病的病菌如滴虫有良好的杀灭作用。

本发明的有益效果为：

1.本发明提供一种消炎杀菌的精油组合物，所述组合物通过茶树精油、薰衣草精油、艾叶精油、薄荷精油、迷迭香精油和百里香精油共同作用，协同达到提高消炎抗菌，延长挥发时间，提升精油持久性，改善单一精油气味的功效。本发明提供的精油组合物一方面通过各组分中的酚类物质进入到微生物的细胞膜或者细胞壁内，导致细胞膜功能受到影响，促使细胞内容物外泄，破坏细胞结构，从而导致微生物的死亡；另一方面通过各组分中的萜类物质，对微生物初生能量代谢、还原型辅酶及其他酶的活性有抑制作用，从而导致微生物新陈代谢紊乱，从而达到抑菌的功效。本发明提供精油组合物通过各组分相互作用，协同增效，从而有效提高对细菌的抑制及杀灭效率，同时能够延长精油作用的时间，使得消炎抗菌效果持久。

2.本发明通过上述组分以特定的重量比配合，协同增强杀菌的功效，同时能够延长作用时间，提升杀菌的时效。本发明对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌均有良好的抑菌效果。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明的技术方案进行详细的描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所得到的所有其它实施方式，都属于本发明所保护的范围。

本发明实施例中每一重量份为1g。

实施例1

消炎杀菌的精油组合物，包括以下重量份的组分：

茶树精油15份；

薰衣草精油15份；

艾叶精油15份；

薄荷精油10份；

迷迭香精油5份；

百里香精油10份。

上述消炎杀菌的精油组合物的制备方法，包括以下步骤：

(1)制备茶树精油：取互叶白千层茶树茎叶，冷冻干燥，粉碎，过筛，得到茶树粉，然后将所述茶树粉加入到体积分数为70％的乙醇水溶液中，浸泡1h，然后进行微波提取，然后采用超临界CO₂萃取，所述超临界CO₂萃取的温度为30℃，萃取的压力为20MPa，流体流量为750L/h，萃取时间为3.5h，蒸馏，分离，得到所述茶树精油；

(2)制备薰衣草精油：取薰衣草，冷冻干燥，粉碎，过筛，得到薰衣草粉末，然后将薰衣草粉末将入到乙醇水溶液中，浸泡，超声处理，蒸馏，分离，得到所述薰衣草精油；

(3)制备艾叶精油：取艾叶，粉碎，加入到蒸馏水中，浸泡，然后加入艾叶重量0.5％的复合酶，所述复合酶为纤维素酶和果胶酶，所述纤维素酶与果胶酶的重量比为2:1，酶解，所述酶解的温度为40℃，酶解时间为25min，然后蒸馏提取，静置分离，得到所述艾叶精油；

(4)制备薄荷精油：取薄荷，在60℃干燥，粉碎，得到薄荷粉，将薄荷粉加入到水中，浸泡，加热，收集蒸馏液，将蒸馏液加入到无水***中，萃取，得到萃取液，加入无水硫酸钠进行干燥，得到所述薄荷精油；

(5)制备迷迭香精油：取迷迭香，粉碎，加入到水中浸泡，调节pH至3,然后加入迷迭香重量0.2％的纤维素酶，酶解，所述酶解的温度为25℃，酶解的时间为2.5h，得到酶解液，然后进行蒸馏，分离，得到所述迷迭香精油；

(6)制备百里香精油：取百里香，粉碎，过筛，加入到体积分数为90％的乙醇溶液中，然后利用超临界CO₂萃取，萃取的温度为35℃，萃取的压力为25MPa，CO₂的流量为20L/min，萃取之后得到百里香粗提物，然后进行分离，得到所述百里香精油；

(7)将茶树精油、薰衣草精油、艾叶精油、薄荷精油、迷迭香精油和百里香精油混合均匀，得到所述消炎杀菌的精油组合物。

实施例2

消炎杀菌的精油组合物，包括以下重量份的组分：

茶树精油60份；

薰衣草精油60份；

艾叶精油60份；

薄荷精油30份；

迷迭香精油35份；

百里香精油30份。

上述消炎杀菌的精油组合物的制备方法，包括以下步骤：

(1)制备茶树精油：取互叶白千层茶树茎叶，冷冻干燥，粉碎，过筛，得到茶树粉，然后将所述茶树粉加入到体积分数为80％的乙醇水溶液中，浸泡，然后进行微波提取，然后采用超临界CO₂萃取，所述超临界CO₂萃取的温度为35℃，萃取的压力为25MPa，流体流量为750L/h，萃取时间为4.5h，蒸馏，分离，得到所述茶树精油；

(2)制备薰衣草精油：取薰衣草，冷冻干燥，粉碎，过筛，得到薰衣草粉末，然后将薰衣草粉末将入到乙醇水溶液中，浸泡，超声处理，蒸馏，分离，得到所述薰衣草精油；

(3)制备艾叶精油：取艾叶，粉碎，加入到蒸馏水中，浸泡，然后加入艾叶重量0.8％的复合酶，所述复合酶为纤维素酶和果胶酶，所述纤维素酶与果胶酶的重量比为3:1，酶解，所述酶解的温度为40℃，酶解时间为25min，然后蒸馏提取，静置分离，得到所述艾叶精油；

(4)制备薄荷精油：取薄荷，在65℃干燥，粉碎，得到薄荷粉，将薄荷粉加入到水中，浸泡，加热，收集蒸馏液，将蒸馏液加入到无水***中，萃取，得到萃取液，加入无水硫酸钠进行干燥，得到所述薄荷精油；

(5)制备迷迭香精油：取迷迭香，粉碎，加入到水中浸泡，调节pH至3.5,然后加入迷迭香重量0.3％的纤维素酶，酶解，所述酶解的温度为35℃，酶解的时间为1.5h，得到酶解液，然后进行蒸馏，分离，得到所述迷迭香精油；

(6)制备百里香精油：取百里香，粉碎，过筛，加入到体积分数为95％的乙醇溶液中，然后利用超临界CO₂萃取，萃取的温度为40℃，萃取的压力为25MPa，CO₂的流量为25L/min，萃取之后得到百里香粗提物，然后进行分离，得到所述百里香精油；

(7)将茶树精油、薰衣草精油、艾叶精油、薄荷精油、迷迭香精油和百里香精油混合均匀，得到所述消炎杀菌的精油组合物。

实施例3

消炎杀菌的精油组合物，包括以下重量份的组分：

茶树精油20份；

薰衣草精油20份；

艾叶精油20份；

薄荷精油15份；

迷迭香精油10份；

百里香精油15份。

上述消炎杀菌的精油组合物的制备方法，包括以下步骤：

(1)制备茶树精油：取互叶白千层茶树茎叶，冷冻干燥，粉碎，过筛，得到茶树粉，然后将所述茶树粉加入到体积分数为75％的乙醇水溶液中，浸泡，然后进行微波提取，然后采用超临界CO₂萃取，所述超临界CO₂萃取的温度为30℃，萃取的压力为25MPa，流体流量为760L/h，萃取时间为4h，蒸馏，分离，得到所述茶树精油；

(2)制备薰衣草精油：取薰衣草，冷冻干燥，粉碎，过筛，得到薰衣草粉末，然后将薰衣草粉末将入到乙醇水溶液中，浸泡，超声处理，蒸馏，分离，得到所述薰衣草精油；

(3)制备艾叶精油：取艾叶，粉碎，加入到蒸馏水中，浸泡，然后加入艾叶重量0.6％的复合酶，所述复合酶为纤维素酶和果胶酶，所述纤维素酶与果胶酶的重量比为2.5:1，酶解，所述酶解的温度为37℃，酶解时间为30min，然后蒸馏提取，静置分离，得到所述艾叶精油；

(4)制备薄荷精油：取薄荷，在60℃干燥，粉碎，得到薄荷粉，将薄荷粉加入到水中，浸泡，加热，收集蒸馏液，将蒸馏液加入到无水***中，萃取，得到萃取液，加入无水硫酸钠进行干燥，得到所述薄荷精油；

(5)制备迷迭香精油：取迷迭香，粉碎，加入到水中浸泡，调节pH至3,然后加入迷迭香重量0.25％的纤维素酶，酶解，所述酶解的温度为30℃，酶解的时间为2h，得到酶解液，然后进行蒸馏，分离，得到所述迷迭香精油；

(6)制备百里香精油：取百里香，粉碎，过筛，加入到体积分数为95％的乙醇溶液中，然后利用超临界CO₂萃取，萃取的温度为37℃，萃取的压力为20MPa，CO₂的流量为20L/min，萃取之后得到百里香粗提物，然后进行分离，得到所述百里香精油；

(7)将茶树精油、薰衣草精油、艾叶精油、薄荷精油、迷迭香精油和百里香精油混合均匀，得到所述消炎杀菌的精油组合物。

实施例4

消炎杀菌的精油组合物，包括以下重量份的组分：

茶树精油15份；

薰衣草精油15份；

艾叶精油15份；

薄荷精油15份；

迷迭香精油15份；

百里香精油15份。

上述消炎杀菌的精油组合物的制备方法，包括以下步骤：

(1)制备茶树精油：取互叶白千层茶树茎叶，冷冻干燥，粉碎，过筛，得到茶树粉，然后将所述茶树粉加入到体积分数为75％的乙醇水溶液中，浸泡，然后进行微波提取，然后采用超临界CO₂萃取，所述超临界CO₂萃取的温度为30℃，萃取的压力为25MPa，流体流量为760L/h，萃取时间为4h，蒸馏，分离，得到所述茶树精油；

(2)制备薰衣草精油：取薰衣草，冷冻干燥，粉碎，过筛，得到薰衣草粉末，然后将薰衣草粉末将入到乙醇水溶液中，浸泡，超声处理，蒸馏，分离，得到所述薰衣草精油；

(3)制备艾叶精油：取艾叶，粉碎，加入到蒸馏水中，浸泡，然后加入艾叶重量0.6％的复合酶，所述复合酶为纤维素酶和果胶酶，所述纤维素酶与果胶酶的重量比为2.5:1，酶解，所述酶解的温度为37℃，酶解时间为30min，然后蒸馏提取，静置分离，得到所述艾叶精油；

(4)制备薄荷精油：取薄荷，在60℃干燥，粉碎，得到薄荷粉，将薄荷粉加入到水中，浸泡，加热，收集蒸馏液，将蒸馏液加入到无水***中，萃取，得到萃取液，加入无水硫酸钠进行干燥，得到所述薄荷精油；

(5)制备迷迭香精油：取迷迭香，粉碎，加入到水中浸泡，调节pH至3,然后加入迷迭香重量0.25％的纤维素酶，酶解，所述酶解的温度为30℃，酶解的时间为2h，得到酶解液，然后进行蒸馏，分离，得到所述迷迭香精油；

(6)制备百里香精油：取百里香，粉碎，过筛，加入到体积分数为95％的乙醇溶液中，然后利用超临界CO₂萃取，萃取的温度为37℃，萃取的压力为20MPa，CO₂的流量为20L/min，萃取之后得到百里香粗提物，然后进行分离，得到所述百里香精油；

(7)将茶树精油、薰衣草精油、艾叶精油、薄荷精油、迷迭香精油和百里香精油混合均匀，得到所述消炎杀菌的精油组合物。

试验例

1材料与方法

1.1材料

1.1.1试验菌株

大肠杆菌(Escherichiacoli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、白色念珠菌(Candidaalbicans)，所有供试菌种均湖北中医药大学微生物实验室提供。

1.1.2试验材料

试验用植物精油以茶树、薰衣草、艾叶、薄荷油、迷迭香油、百里香经提炼出的精油作为主要原料的黄色液体，于低温4℃避光保存，其中试验组十的茶树精油、薰衣草精油、艾叶精油、薄荷精油、迷迭香精油、百里香精油由本发明提供的方法制备得到，其他组的精油由渭南花芝保玫瑰产业有限公司提供。

纯种扩展青霉菌(微生物试验室提供)。

无水乙醇，为分析纯。

1.1.3培养基

营养琼脂培养基(用于培养金黄色葡萄球菌、大肠杆菌)、沙氏培养基(用于培养白色念珠菌)，均购自北京陆桥技术股份有限公司。

1.2仪器

生化培养箱(SPX-150BSH-II型，上海新苗医疗器械制造有限公司)、高温灭菌锅(LDZX-50KBS型，上海申安医疗器械厂)、超净工作台(VS-1300U型，上海苏净实业有限公司)、紫外分光光度计(EU-2600R，上海昂拉仪器有限公司)、显微镜、磁力搅拌器(德国IKA公司)、电子天平(JA5003，上海上天精密仪器、BHDM型电子式液体密度计、WZS-1型阿贝折光仪、7890-5973GC-MS联用色谱仪等。

1.3实验方法

1.3.1抗菌性能试验

1.3.1.1悬菌液的制定

从经过活化2-3次的菌体斜面上挑取一环菌体接种于相应的液体培养基中，放入恒温振荡培养箱中培养，大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的培养条件是37℃、120r/min；白色念珠菌的培养条件是28℃、150r/min。待菌长至对数生长期，使用平板计数法调整细菌浓度为106-107cfu/mL，真菌浓度为105-106cfu/mL，备用。

1.3.1.2抑菌圈的测定

通过测定植物精油和青霉素对供试菌的抑菌圈来分析抗菌敏感性。先将高压灭菌的琼脂培养基的温度降至45℃左右，在干燥灭菌的直径9cm培养皿内加入15mL培养基，待冷却凝固后，再吸取100μL的菌悬液，并用无菌涂布棒均匀涂布于相对应琼脂平皿，备用。

抗生素组：采用WHO推荐的K-B琼脂扩散纸片法。用无菌镊子夹取青霉素药敏纸片(d＝5mm)贴在含菌平皿上，呈正三角形放置3片在琼脂平板中央周围，其中2片为青霉素药敏片和1片为等大小的已灭菌滤纸做空白对照，每个纸片轻轻压一下以保证与琼脂表面完全接触(放置时切勿拖动)，为青霉素对照组。

植物精油组：采用琼脂孔注入法。用无菌金属打孔器(d＝5mm)在含菌平板上等距离地打三个小孔，用无菌镊子剔去孔内琼脂，吸取10μL不同的纯植物精油相互结合且加入其中两个孔内，并用等量的无菌水加入第三个孔内做空白对照；分别为茶树精油为试验组一，薰衣草精油为试验组二，艾叶精油为试验组三，薄荷精油为试验组四，迷迭香精油为试验组五，百里香精油为试验组六，茶树精油、薰衣草精油、艾叶精油和薄荷精油为试验组七，茶树精油、薰衣草精油、艾叶精油和迷迭香油为试验组八，茶树精油、薰衣草精油、艾叶精油和百里香精油为试验组九，茶树精油、薰衣草精油、艾叶精油、薄荷精油、迷迭香精油和百里香精油为试验组十。等量的无菌水为空白对照组。

将平皿盖上后平置于恒温培养箱中培养于恒温培养箱中培养，大肠杆菌和金色葡萄球菌37℃培养24h，白色念珠菌28℃培养72h。试验重复三次，交叉法测量抑菌圈的直径3次，取平均值，分析其抑菌活性。

1.3.1.3最低抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)的测定

采用直接接触法。在5mL相应的液体培养基中加入100μL菌悬液，将供试精油用无水乙醇稀释配制成10％精油溶液，然后分别吸取不同量的10％精油溶液加入装有等量液体培养基的试管中，使精油浓度为31.25μL/L-3000μL/L，且用无水乙醇做空白对照，置于196r/min恒温振荡器中进行培养，观察生长情况。然后取0.2mL培养液于相应的平板中进行涂布，倒放置于培养箱中培养(大肠杆菌属和金黄色葡萄球菌属37℃有氧培养24h，白色念球菌属28℃有氧培养72h)，观察生长情况。若不长菌的最小精油浓度为该精油的最小抑菌浓度(MIC)，继续培养3d以上，若仍不长菌的即为最低精油浓度为最小杀菌浓度(MBC)。其中每个处理设3次重复，本实验中精油浓度3000μL/L仍不能抑制细菌视为该精油对其没有作用。

1.3.1.4数据统计分析

每个实验分别进行三次平行，并且数据以平均值(mean)±标准差(sd)表示，方差分析(ANOVA)是用于两个及以上样本均数差异的显著性检验，p≤0.05时说明具有统计学的意义。

1.3.2气相色谱-质谱测试

采用以下条件测试实施例3得到的消炎杀菌的精油组合物中成分。测试条件为：载气为He，柱流量1mL/min，HP-5毛细管柱(30m×250μm×0.25μm)。程序升温条件：初始温度为50℃，保持3min，以3℃/min升温至240℃，保持2min，以10℃/min升温至280℃。进样量1μL，进样口温度280℃，分流比为30∶1，溶剂延迟时间3min。电离方式为EI，电子能量70eV，离子源温度230℃，四级杆温度为150℃，质量扫描模式全扫描，扫描范围:m/z40-450，质谱数据运用NIST2002数据库进行图谱检索。

2结果与讨论

2.1植物精油抑菌活性的测定

不同的植物精油和青霉素对微生物的体外抑菌效果测定结果见表1和表2。按照美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)颁布的《抗微生物药物敏感性试验执行标准》判断对药物的敏感性，抑菌圈试验的判定标准为：抑菌圈直径>20mm为最敏感，10mm-20mm为中度敏感，5mm-10mm为低度敏感，无抑制作用者(≤5mm)为不敏感。抑菌效果如表1。

表1青霉素和植物精油的体外抑菌效果

注：实验结果表示为:抑菌圈直径平均值±标准偏差(3次实验)，孔径直径(5mm)包含在测量结果中，p≤0.05。

从表1的结果可以看出，在对抑制大肠杆菌的所有组中，从最敏感到不敏感的排序为：试验十>试验九>试验八>试验七>试验六>试验二>试验五>青霉素对照组>试验一>试验四>试验三>试验六空白对照组。从中可以看出，最敏感的是试验十，这说明本发明提供的精油组合物比单方精油和青霉素的抑制大肠杆菌的能力强，这说明本发明提供的精油组合物对大肠杆菌的抑制是协同作用的。

从表1的结果中可以看出，在对抑制金黄色葡萄球菌的所有组中，从最敏感到不敏感的排序为：试验十>试验七>试验九>试验八>试验六>试验一>试验二>试验五>试验四>青霉素对照组>试验三>空白对照组。从中可以看出，最敏感的是试验十，这说明本发明提供的精油组合物单方精油和青霉素的抑制金黄色葡萄球菌的能力强，这也说明了本发明提供的精油组合物对金黄色葡萄球菌的抑制是协同作用的。

从表1的结果中可以看出，在对抑制白色念球菌的所有组中，从最敏感到不敏感的排序为：试验十>试验四>试验二>试验五>试验九>试验三>试验八>试验七>试验六>试验一>青霉素对照组＝空白对照组。从中可以看出，最敏感的是试验十，抑制白色念球菌的能力最强。在相同的浓度下，本发明提供的精油组合物对白色念球菌的抑制作用最强，这充分说明本发明提供的精油组合物中各组分能够通过协同作用，提升抗菌的效果。

2.2植物精油最低抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)

为了解选用的不同的植物精油对微生物的抗菌效果，通过直接接触法测定各植物精油的最低抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)研究其抑菌效果。其中最小抑菌浓度(MIC)为减少90％微生物菌落的最低精油浓度，而最小杀菌浓度(MBC)为杀死99.9％微生物菌落的最低精油浓度。MIC和MBC的测定结果见表2。

表2不同的植物精油对微生物的体外最低抑菌浓度和最小杀菌浓度/(μL/L)

植物精油的MIC值和MBC值越低，其抑菌效果就越强。从表2的结果可以看出，在对抑制大肠杆菌的所有组中，抑菌能力大小排序为：试验十>试验九>试验八>试验七>试验一>试验二>试验五>试验四>试验三>试验六>青霉素对照组。从中可以看出，抑菌效果最强的是试验十，试验组十在较小浓度下就对大肠杆菌具有良好的抑制作用，并且其最小抑菌和最小杀菌浓度远低于其他组，这说明本发明提供的精油组合物具有协同抵抗大肠杆菌的作用。

从表2的结果可以看出，在对抑制金黄色葡萄球菌的所有组中，抑菌能力大小排序为：试验十>试验九>试验八>试验七>试验一>试验二>试验五>试验三>试验四>试验六>青霉素对照组。从中可以看出，抑菌效果最强的是试验十，试验组十在较小浓度下就对金黄色葡萄球菌具有良好的抑制作用，并且其最小抑菌和最小杀菌浓度远低于其他组，这说明本发明提供的精油组合物具有协同抵抗金黄色葡萄球菌的作用。

从表2的结果可以看出，在对抑制白色念球菌的所有组中，抑菌能力大小排序为：试验十>试验八>试验九>试验七>试验一>试验二>试验四>试验三>试验五>试验六>青霉素对照组。从中可以看出，抑菌效果最强的是试验十，试验组十在较小浓度下就对白色念球菌具有良好的抑制作用，并且其最小抑菌和最小杀菌浓度远低于其他组，这说明本发明提供的精油组合物具有协同抵抗白色念球菌的作用。

从表1和表2的结果可以看出，本发明提供的消炎灭菌的精油组合物不仅对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌生长具有良好的抑制作用，对白色念珠菌生长同样表现出明显的抑制效果。这说明本发明提供的消炎灭菌的精油组合物对细菌繁殖体和真菌均有良好的抑菌效果，性能稳定，对人体亲和性良好，无刺激，不致敏。本发明提供的精油组合物成分天然，安全性能高，抑菌效果好，不会产生药物依赖。

2.3气相色谱-质谱联用仪(GC-MS)结果

采用GC-MS对实施例3得到的消炎灭菌的精油组合物进行分析，采用峰面积归一化法确定其中组分的相对含量。对总离子流量图中的各峰质谱图进行NIST标准库检索，选取质谱匹配度高的可能物质，鉴定了其中30个化学成分，其中结果见表3。

表3实施例3中挥发性成分的主要化学成分和含量

从表3的结果可以看出，本发明实施例3得到的消炎灭菌的精油组合物中，含有多种挥发性成分，在实施例3得到的消炎灭菌的精油组合物中，1,8-桉叶素的含量最高，达到了20.88％；其次为芳樟醇，含量为10.44％；乙酸芳樟酯，含量为10.06％；薄荷醇，含量为9.8％，本发明实施例3提供的消炎灭菌的精油组合物中有效物质占挥发油的90％以上，这说明，本发明实施例3提供的消炎灭菌的精油组合物中的挥发性物质得到有效的保留，这些挥发性物质相互作用，能够相互制约，延长挥发物质的发挥时间，能够达到长效抑菌、消炎的功效。

以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。