阅读说明：本技术 一种新型复方独活吲哚美辛胶囊及其制备方法 (Novel compound pubescent angelica root and indometacin capsule and preparation method thereof ) 是由 张庆华 戴毅文 于 2019-11-15 设计创作，主要内容包括：本发明提供了一种新型复方独活吲哚美辛胶囊及其制备方法,包括以下重量份的组分：羌活30-60份,独活30-60份,牛膝30-60份,木瓜30-60份,吲哚美辛15-45份,和/或吡罗昔康5-20份；提供了两种制备新型复方独活吲哚美辛胶囊的方法：其一为先将组分羌活、独活、牛膝、木瓜称取混合之后,进行有效成分的提取,再将提取的有效成分浓缩干燥成粉,再与吲哚美辛和/或吡罗昔康于粉碎机中进行均匀混合,即得；其二是先将组分羌活、独活、牛膝、木瓜称取混合之后,进行有效成分的提取,再将提取的有效成分浓缩干燥成粉,再与吲哚美辛和/或吡罗昔康于粉碎机中进行均匀混合,即得。两种方法均能够得到高纯度的药用成分,抗炎效果更好、安全性更为可靠。(The invention provides a novel compound pubescent angelica and indometacin capsule and a preparation method thereof, wherein the capsule comprises the following components in parts by weight: 30-60 parts of notopterygium root, 30-60 parts of radix angelicae pubescentis, 30-60 parts of achyranthes root, 30-60 parts of pawpaw, 15-45 parts of indomethacin and/or 5-20 parts of piroxicam; two methods for preparing the novel compound pubescent angelica and indometacin capsule are provided: firstly, weighing and mixing components of notopterygium root, radix angelicae pubescentis, achyranthes root and pawpaw, extracting effective components, concentrating and drying the extracted effective components into powder, and uniformly mixing the powder with indometacin and/or piroxicam in a pulverizer to obtain the composition; and secondly, weighing and mixing the components of notopterygium root, radix angelicae pubescentis, achyranthes root and pawpaw, extracting effective components, concentrating and drying the extracted effective components into powder, and uniformly mixing the powder with indometacin and/or piroxicam in a pulverizer to obtain the composition. The two methods can obtain high-purity medicinal components, and have better anti-inflammatory effect and more reliable safety.)

一种新型复方独活吲哚美辛胶囊及其制备方法

技术领域

本发明涉及医药技术领域，特别是涉及一种新型复方独活吲哚美辛胶囊及其制备方法。

背景技术

风湿性疾病泛指影响骨、关节及其周围软组织，如肌肉、滑囊、肌腱、筋膜、神经等的一组疾病。其病因可以是感染性、免疫性、代谢性、内分泌性、退行性、地理环境性、遗传性、肿瘤性等，均以疼痛为主要症状。随着社会发展、卫生水平的提高及生活方式的改变，链球菌感染相关的风湿热已明显减少，而骨关节炎、痛风性关节炎的发病率呈上升趋势。风湿性疾病是我国的常见病、多发病之一，其发病率高，且有一定的致残率，危害人类健康的同时给社会和家庭带来了沉重的经济负担。

复方独活吲哚美辛胶囊以其鲜明的特点、显著的疗效而受到临床医生及广大患者的欢迎，该复方药通过“中西药多药联用”的策略，对风湿性疾病的治疗起着减毒增效的作用，然而，尚未对复方独活吲哚美辛胶囊的物质基础进行深入研究，其减毒增效的作用机制尚不明确，而且，复方独活吲哚美辛胶囊用量较大时，对胃部刺激较大，容易引起毒性反应，如恶心、呕吐、紧张性头痛、嗜睡、精神行为障碍等。因此，急需对现有复方产品独活吲哚美辛胶囊的“中西药多药联用”辨证施治策略进行进一步的升级，以获得更加高效、低毒的效果，提高用药安全性。

发明内容

本发明提供一种新型复方独活吲哚美辛胶囊，以通过“产品二次开发”的思路对复方独活吲哚美辛胶囊进行产品升级，在明确其各成分的物质作用基础之上对其进行相关研究；本发明还提供一种新型复方独活吲哚美辛胶囊的两种制备方法，并评价其抗风湿病药理活性和安全性，以获得新的更加高效、低毒的新型复方独活吲哚美辛胶囊。

为了解决上述问题，本发明公开了一种新型复方独活吲哚美辛胶囊，包括以下重量份的组分：羌活30-60份，独活30-60份，牛膝30-60份，木瓜 30-60份，吲哚美辛15-45份，和/或吡罗昔康5-20份；所述独活采用独活的根茎，所述牛膝采用牛膝的根茎，所述木瓜采用木瓜的果实、种子的一种或多种。

一种新型复方独活吲哚美辛胶囊的制备方法，包括：先分别将组分羌活、独活、牛膝、木瓜的有效成分进行提取，并对各组分的有效成分分别进行过滤，浓缩，喷雾干燥，得到干粉，再将各组分的干粉混合均匀后，再与吲哚美辛和/或吡罗昔康于粉碎机中进行均匀混合，即得。

优选地，分别将所述羌活、独活、牛膝、木瓜的有效成分进行提取的步骤如下：

S01，将羌活粉碎后过三号筛，精密称取羌活粉末至烧瓶中，自冷凝管上端加水使其充满挥发油测定器的刻度部分，并溢流入烧瓶时为止，在烧瓶中的水保持微沸的状态下，采用挥发油测定器提取羌活粉末中的挥发油，冷藏备用；

S02，称取独活，加入体积分数为75％的甲醇，浸泡20-40min后，50-65℃超声提取30-60min，放冷，滤过，滤液补足，取续滤液经0.45um微孔滤膜滤过，即得独活的有效成分；

S03，称取牛膝粉末，过四号筛后放至具塞锥形瓶中，加入体积分数为 45％的正丁醇溶液，称重，液料比为12-18：1，超声提取1-2h，滤液补足，以10000-15000r/min，在2-5℃下离心20-40min，取上清液过0.45um微孔滤膜，即得牛膝的有效成分；

S04，精密称取木瓜粗粉，按8倍量75％乙醇回流提取2次，每次1-3 小时，提取液置旋转蒸发仪中浓缩，浓缩液定量转移至量瓶中，用50％乙醇定容，即得木瓜乙醇提取液。

其中，所述步骤S01中，因羌活挥发油中比较具有代表性的物质为α- 蒎烯，使用气相色谱法测量提取的挥发油时，通过α-蒎烯含量反映挥发油的含量，其沸点为155℃。

进一步优选地，所述步骤S02中，采用色谱柱对独活的有效成分进行检测，色谱条件为：以体积比为44：56的乙腈-水为流动相，柱温30℃，检测波长316nm，流速1.0mL/min1，进样量10uL。

进一步优选地，所述步骤S03中，超声提取的功率为250W，频率为40kHz；

取经微孔滤膜的续滤液作为独活有效成分的供试品溶液，对牛膝的有效成分进行液相色谱检测，色谱条件为：以乙腈-0.1％甲酸水为流动相，柱温 30℃，流速1.0ml/min，检测波长254nm，进样量为10u1，进行梯度洗脱。

进一步优选地，所述步骤S04中，取经醇提后的木瓜的药渣，于50-65℃下干燥至恒重，精密称取10g干燥的药渣，以10-13倍量水为溶剂回流提取 1.5-3小时，即得木瓜的供试品溶液，并采用色谱柱进行检测，色谱条件为：以体积比为265：35：0.1：0.05的甲醇-水-冰乙酸-三乙胺为流动相，流速 0.6mL/min1，柱温20℃，检测波长210nm，进样量20uL。

一种新型复方独活吲哚美辛胶囊的制备方法，包括：先将组分羌活、独活、牛膝、木瓜称取混合之后，进行有效成分的提取，再将提取的有效成分浓缩干燥成粉，再与吲哚美辛和/或吡罗昔康于粉碎机中进行均匀混合，即得。

优选地，将所述羌活、独活、牛膝、木瓜混合后的有效成分进行提取的步骤如下：按配比1：1：1：1称取羌活、独活、牛膝、木瓜，加入水，浸泡1.5-3h，回流提取3次，其中，第一次以9-12倍量水提取2-4h，第二次以 6-10倍量水提取1.5-3h，第三次以5-7倍量水提取2-3h，合并提取液，过滤，浓缩，再进行喷雾干燥，得干粉。

优选地，将所述羌活、独活、牛膝、木瓜混合后的有效成分进行提取的步骤如下：按配比1：1：1：1称取羌活、独活、牛膝、木瓜，加入8-12倍量浓度分别为60％、75％、90％的乙醇溶液，加热至回流，提取1-3h，将提取液过滤，收集滤液；滤渣重新加入8-12倍量浓度分别为60％、75％、90％的乙醇溶液，加热至回流，提取1-3h，得提取液；将滤液与滤渣的提取液合并，浓缩，再进行真空干燥，得干粉。

优选地，将所述羌活、独活、牛膝、木瓜混合后的有效成分进行提取的步骤如下：按配比1：1：1：1称取羌活、独活、牛膝、木瓜，加入水，浸泡1-3h，回流提取3次，其中，第一次以9-12倍量水提取2-4h，第二次以 7-9倍量水提取1.5-3h，第三次以5-7倍量水提取2-3h，合并提取液，减压浓缩为浸膏；加入95％的乙醇至浸膏中，静置过夜沉淀，取上清液，浓缩，真空干燥，得干粉。

其中，羌活别名羌青、护羌使者、胡王使者、羌滑、退风使者、黑药。属根茎类药材，味辛；苦；性温。《药性论》中曰其“治贼风、失音不语，多痒血癞，手足不遂，口面歪邪，遍身顽痹。”《日华子本草》中曰其“治一切风并气，筋骨拳挛，四肢羸劣，头旋眼目赤疼及伏梁水气，五劳七伤，虚损冷气，骨节酸疼，通利五脏。羌活当中含有大量挥发油，其中，α-蒎烯是其主要成分之一，羌活中挥发油主要有效成分为香豆素类和挥发油，具有镇痛抗炎作用。

独活别名胡王使者、独摇草、独滑、长生草、川独活等。属根茎类药材。味辛；苦；微温。《别录》中曰其“治诸风，百节痛风无久新者。”独活与羌活是临床上常用的有效药对，药性相同。现代药理学研究表明独活均具有抗炎镇痛作用，主要活性成分为香豆素类化合物，其中以蛇床子素和异欧前胡素含量最高。

牛膝别名怀牛膝、对节菜、山苋菜、铁平膝、怀夕、红牛膝。属根茎类药材。性平；味苦、酸。牛膝含有糖类、皂苷类、植物甾酮类、黄酮类等多种化学成分。现代药理研究表明，牛膝还具有抗炎、镇痛、调节免疫、降血压、抗肿瘤、延缓衰老等药理作用。现代临床上常用来治疗膝关节炎、心血管疾病、哮喘等。

木瓜别名楙、木瓜实、铁脚梨、秋木瓜、酸木瓜。属果实/种子类药材。味酸；性温。《别录》中曰其“主湿痹邪气，霍乱大吐下，转筋不止。”木瓜提取物具有抗炎镇痛、抑制肿瘤生长、保肝降酶、抗氧化和抑菌等作用，活性成分主要有三萜类、有机酸类、多酚类和多糖类化合物。

本发明中，采用羌活、独活、牛膝、木瓜、吲哚美辛、和/或吡罗昔康，其中，羌活、独活、牛膝、木瓜先进行有效成分的提取，并浓缩、喷雾干燥成干粉，再与吲哚美辛和/或吡罗昔康混合均匀，得到药用成分，再采用现有的胶囊制备技术将药用成分制备成胶囊，即得本发明所述的新型复方独活吲哚美辛胶囊。优选为，本发明中，各提取物的干粉与吲哚美辛及吡罗昔康的均匀混合过程是在粉碎机中进行的。木瓜优选为宣木瓜。

本发明优选为提供所述新型复方独活吲哚美辛胶囊的两种制备方法：其一为按配比1：1：1：1将羌活、独活、牛膝、木瓜的进行混合粉碎，然后采用抗风湿病药理模型进行基于“活性导向法”的溶剂多级提取方法，获得具有抗风湿病活性的有效成分，再将此有效成分与吲哚美辛，和/或吡罗昔康进行配比组合，得到药用成分，再采用该药用成分制备成胶囊，即得所述新型复方独活吲哚美辛胶囊。其二为分别对羌活、独活、牛膝、木瓜采用不同溶剂进行基于“活性导向法”的多级提取方法，从而分别从羌活、独活、牛膝、木瓜中获得具有抗风湿病活性的有效成分，然后按照一定比例将羌活、独活、牛膝、木瓜的有效成分与吲哚美辛和/或吡罗昔康进行配比组合，得到药用成分，再采用该药用成分制备成胶囊，即得所述新型复方独活吲哚美辛胶囊。本发明对上述两种制备方法所得的新型复方独活吲哚美辛胶囊均进行了抗风湿病药理活性和安全性的测评，结果表明，与现有的复方独活吲哚美辛胶囊相比，所述新型复方独活吲哚美辛胶囊抗炎效果更好、毒副作用更小，更为安全可靠。

与现有技术相比，本发明实施例包括以下优点：

本发明对羌活、独活、牛膝、木瓜中各个单一组分的或者多个组分的有效成分进行提取，再将提取的有效成分与吲哚美辛和/或吡罗昔康进行混合，制备而得新的复方独活吲哚美辛胶囊，多种药用成分进行协同作用，在抗风湿病药理模型上表现出比现有复方独活吲哚美辛胶囊更好的治疗效果、更小的毒副作用。且升级的复方独活吲哚美辛胶囊的制备方法所得的新型复方独活吲哚美辛胶囊有效的药用成分含量更高，安全性更强。

具体实施方式

为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。

一种新型复方独活吲哚美辛胶囊，包括如下表1所示的重量分的组分：

表1

组别

羌活

独活

牛膝

木瓜

吲哚美辛

吡罗昔康

组合物1

30份

30份

30份

30份

15份

5份

组合物2

50份

50份

50份

50份

25份

10份

组合物3

60份

60份

60份

60份

45份

20份

其中，所述羌活的药用部位为根茎；所述独活的药用部位为根茎；所述牛膝的药用部位为根茎；所述木瓜的药用部位为果实/种子，优选为宣木瓜。采用如下实施例

采用如下实施例1-12的制备方法对表1的组合物1、组合物2、组合物 3进行制备，得到新型复方独活吲哚美辛胶囊。具体制备方法如下：

实施例1

一种所述新型复方独活吲哚美辛胶囊的制备方法，包括以下步骤(采用上述表1的组合物1)：

S01，将羌活粉碎后过三号筛，精密称取上述重量份的羌活粉末，倒入烧瓶中，加入水，自冷凝管上端加水使其充满挥发油测定器的刻度部分，并溢流入烧瓶时为止，使烧瓶中的水保持微沸状态进行挥发油的提取，提取完毕后停止加热，放置片刻再打开挥发油测定器下方的活塞将水缓缓放出，在油层上端到达0刻度线上5mm处关闭活塞，放置1h以上再开启活塞让挥发油下端到达0刻度线，接收挥发油冷藏备用；

S02，称取上述重量份的独活，加入体积分数为75％的甲醇，浸泡20min 后，50℃超声提取60min，放冷，滤过，滤液补足，取续滤液经0.45um微孔滤膜滤过，即得独活的有效成分；

而后用伊力特色谱柱对独活的有效成分进行检测，色谱条件为：以体积比为44：56的乙腈-水为流动相，柱温30℃，检测波长316nm，流速1.0mL/min1，进样量10uL；

S03，取上述重量份的牛膝粉末(过四号筛)置具塞锥形瓶中，加入体积分数为45％的正丁醇溶液，称重，液料比为12：1，超声提取1h(功率 250W，频率40kHz)，冷却后用原有不同比例的正丁醇水溶液补足重量，摇匀，以10000r/min，在2℃下高速离心40min，取上清液过0.45um微孔滤膜，即得牛膝的有效成分；

取经微孔滤膜的续滤液作为独活有效成分的供试品溶液，采用高效液相色谱法对牛膝的有效成分进行检测，色谱条件为：以乙腈(A)-0.1％甲酸水 (B)为流动相，柱温30℃，流速1.0ml/min，检测波长254nm，进样量为 10u1，进行梯度洗脱；

S04，精称上述重量份的宣木瓜粗粉，置圆底烧瓶中，按8倍量75％乙醇回流提取2次，每次1小时，提取液置旋转蒸发仪中进行浓缩，并回收溶剂，浓缩液定量转移至量瓶中，用50％乙醇定容，即得宣木瓜乙醇提取液；取上述经醇提后的药渣，于50℃干燥至恒重，精密称取10g干燥的药渣，置圆底烧瓶中，以10倍量水为溶剂回流提取1.5小时，即得木瓜的供试品溶液，再采用色谱柱进行检测；色谱条件为：以体积比为265：35：0.1：0.05的甲醇-水-冰乙酸-三乙胺为流动相，流速0.6mL/min1，柱温20℃，检测波长210nm，进样量20uL；

S05，将上述各组分的有效成分收集后，分别进行过滤，浓缩，再进行喷雾干燥，得干粉；

S06，将上述各组分的干粉进行混合均匀；

S07，取上述重量份的吲哚美辛和吡罗昔康，与步骤S06所得的混合干粉在粉碎机中进行充分混合，即得A1给药组。

实施例2

本实施采用上述表1的组合物2，所述新型复方独活吲哚美辛胶囊的制备方法与实施例1基本相同，其区别在于：

所述步骤S02中，浸泡30min，60℃超声提取40min；所述步骤S03中，液料比为15：1，超声提取1.7h，滤液补足后，以12000r/min，在4℃下离心30min；所述步骤S04中，宣木瓜粗粉每次回流提取2h，经醇提后的药渣，于60℃干燥至恒重，干燥的药渣以12倍量水为溶剂回流提取2小时，以得到A2给药组。

实施例3

本实施采用上述表1的组合物3，所述新型复方独活吲哚美辛胶囊的制备方法与实施例1基本相同，其区别在于：

所述步骤S02中，浸泡40min，65℃超声提取30min；所述步骤S03中，液料比为18：1，超声提取2h，滤液补足后，以15000r/min，在5℃下离心 20min；所述步骤S04中，宣木瓜粗粉每次回流提取3h，经醇提后的药渣，于65℃干燥至恒重，干燥的药渣以10倍量水为溶剂回流提取3小时，以得到A3给药组。

实施例4

一种所述新型复方独活吲哚美辛胶囊制备方法，包括以下步骤(采用上述表1的组合物1)：

分别将羌活、独活、牛膝、木瓜按配比1：1：1：1称取，加入水，使其浸泡1.5h，回流提取3次(第一次以12倍量水提取4h，第二次以10倍量水提取3h，第三次以7倍量水提取3h)，合并提取液，然后进行过滤，浓缩，再进行喷雾干燥，得干粉；

再将获得的干粉分别与0.5倍吲哚美辛和0.2倍吡罗昔康进行混合，得到B1给药组。

实施例5

本实施采用上述表1的组合物2，所述新型复方独活吲哚美辛胶囊的制备方法与实施例4基本相同，其区别在于：

浸泡2h，回流提取3次(第一次以10倍量水提取3h，第二次以8倍量水提取2h，第三次以6倍量水提取1.5h)，以得到B2给药组。

实施例6

本实施采用上述表1的组合物3，所述新型复方独活吲哚美辛胶囊的制备方法与实施例4基本相同，其区别在于：

浸泡3h，回流提取3次(第一次以9倍量水提取2h，第二次以6倍量水提取1.5h，第三次以5倍量水提取2h)，以得到B3给药组。

实施例7

一种所述新型复方独活吲哚美辛胶囊制备方法，包括以下步骤(采用上述表1的组合物1)：

分别将羌活、独活、牛膝、木瓜按配比1：1：1：1称取，加入8倍量不同浓度的乙醇溶液(60％、75％、90％)，加热至回流，提取3h，提取结束后过滤，收集滤液；滤渣重新加入12倍量不同浓度的乙醇溶液(60％、 75％、90％)，加热至回流，提取1h，得提取液；将滤液和滤渣所得的提取液合并，浓缩，再进行真空干燥，得干粉；

再将获得的干粉分别与吲哚美辛和吡罗昔康进行混合，得到C1给药组。

实施例8

本实施采用上述表1的组合物2，所述新型复方独活吲哚美辛胶囊的制备方法与实施例7基本相同，其区别在于：

称料后，加入10倍量不同浓度的乙醇溶液(60％、75％、90％)，加热至回流，提取2h；滤渣重新加入10倍量不同浓度的乙醇溶液(60％、75％、 90％)，加热至回流，提取2h，以得到C2给药组。

实施例9

本实施采用上述表1的组合物3，所述新型复方独活吲哚美辛胶囊的制备方法与实施例7基本相同，其区别在于：

称料后，加入12倍量不同浓度的乙醇溶液(60％、75％、90％)，加热至回流，提取1h；滤渣重新加入8倍量不同浓度的乙醇溶液(60％、75％、 90％)，加热至回流，提取3h，以得到C3给药组。

实施例10

一种所述新型复方独活吲哚美辛胶囊的制备方法，包括以下步骤(采用上述表1的组合物1)：

分别将羌活、独活、牛膝、木瓜按配比1：1：1：1称取，加入水，使其浸泡1h，回流提取3次(第一次以12倍量水提取4h，第二次以9倍量水提取3h，第三次以7倍量水提取3h)，合并提取液，减压浓缩为浸膏，再加入95％乙醇，静置过夜沉淀，取上清液，浓缩，再进行真空干燥，得干粉；

再将获得的干粉分别与吲哚美辛和吡罗昔康进行混合，得到D1给药组。

实施例11

本实施采用上述表1的组合物2，所述新型复方独活吲哚美辛胶囊的制备方法与实施例10基本相同，其区别在于：

称料后，浸泡2h，回流提取3次(第一次以10倍量水提取3h，第二次以8倍量水提取2h，第三次以6倍量水提取1.5h)，以得到D2给药组。

实施例12

本实施采用上述表1的组合物3，所述新型复方独活吲哚美辛胶囊的制备方法与实施例10基本相同，其区别在于：

称料后，浸泡3h，回流提取3次(第一次以9倍量水提取2h，第二次以7倍量水提取1.5h，第三次以5倍量水提取2h)，以得到D3给药组。

对比例1

本对比例不预先对表1中组合物2的羌活、独活、牛膝、木瓜进行有效成分的提取，而是直接将组合物2的羌活、独活、牛膝、木瓜、吲哚美辛、吡罗昔康进行混合，得到对照组A。

对比例2

本对比例采用市场购得的原复方独活吲哚美辛胶囊，得到原复方对照组 B。

对比例3

本对比例采用表1中组合物2的各组分，其制备方法与实施例8基本相同，其区别在于：

省略了对滤渣进行加热回流、提取的步骤，即所得干粉是将滤液进行浓缩、真空干燥而制得的；得到对照组C。

对比例4

本对比例采用表1中组合物2的各组分，其制备方法与实施例8基本相同，其区别在于：

加入10倍量浓度为75％的乙醇溶液，以进行加热回流、提取；得到对照组D。

所述新型复方独活吲哚美辛胶囊的药效学评价：

将表1所述组合物1分别采用实施例1、4、7、10所述制备方法制得的 A1给药组、B1给药组、C1给药组、D1给药组；表1所述组合物2分别采用实施例2、5、8、11所述制备方法制得的A2给药组、B2给药组、C2给药组、D2给药组；表1所述组合物3分别采用实施例3、6、9、12所述制备方法制得的A3给药组、B3给药组、C3给药组、D3给药组；以及对比例 1-4的对照组A、原复方对照组B、对照组C、对照组D进行药效学评价：

1、动物模型的制备及分组：

选用108只健康SD(Stable Disease，病情稳定)大鼠，体重180-220g，饲养一周，无不良反应，继而继续实验。先使用10％的水合氯醛对大鼠进行麻醉，将其按仰卧姿势放置于操作台上，将头部及四肢进行固定。

使用0.1mol/L的醋酸将Ⅱ型胶原进行溶解并将其配置成2mg/mL的Ⅱ型胶原溶液，并对大鼠的背部、尾根部以及左后足跖皮内进行注射，每只大鼠注射0.25mL，注射1min后将固定绳松开，将大鼠放回笼中使其自然苏醒。

建模成功108只，随机分为正常组、模型组、A1给药组、B1给药组、 C1给药组、D1给药组、A2给药组、B2给药组、C2给药组、D2给药组、 A3给药组、B3给药组、C3给药组、D3给药组、对照组A、原复方对照组 B、对照组C、对照组D，每组各6只。建模次日用药干预。每次给药1天 1次，连续干预2周。干预过程中均正常饲养，自由饮水。

2、治疗效果指标：

(1)大鼠足跖肿胀度检测

采用足趾容积测定仪检测大鼠炎足足跖的容积，连续测量3次，取平均值，分析大鼠足跖肿胀度。

每周测量关节炎指数(Arthritis index，AI)评分：主要根据大鼠关节的红肿程度、范围以及关节肿大的情况，进行AI评分，评估的标准：无关节炎记为0分；出现红色斑点伴有轻度的肿胀记为1分；中度肿胀记为2分；严重肿胀记为3分；严重肿胀并且不能负重记为4分。统计所有大鼠扭体次数、缩足次数，分析实验数据(如表2所示)。

表2

注：*p＜0.05，表示与模型组相比，有显著差异。

由表2可知，各给药组及对照组与模型组相比，均能降低大鼠的足跖肿胀程度和AI评分，增加扭体次数，提高大鼠肢体运动能力。但是，各给药组的效果明显优于对照组，且C2给药组效果最佳。

(2)骨关节放射评分比较

关节骨破坏按照Larsen评分标准进行，连续测量3次，取平均值，分析大鼠骨关节的破坏程度。

评估的标准：0分：正常；1分：轻度的异常，具有轻微的骨质疏松、关节周围软组织肿或轻微关节间隙狭窄；2分：明确的早期异常，骨质侵蚀改变或伴有关节间隙狭窄；3分：轻度的关节破坏，关节间隙狭窄＜50％；4分：重度的关节破坏，关节间隙狭窄≥50％；5分：多个关节残毁，关节间隙消失。所得大鼠放射评分数据如表3所示：

表3

组别	例数(n)	放射评分(分)
			正常组	6	--
模型组	6	4.77±1.04
			A1给药组	6	2.86±0.48*
B1给药组	6	2.97±0.31*
			C1给药组	6	2.78±0.87*
D1给药组	6	2.95±0.94*
			A2给药组	6	2.54±0.92*
B2给药组	6	2.73±0.96*
			C2给药组	6	2.26±0.89*
D2给药组	6	2.95±0.94*
			A3给药组	6	2.78±0.45*
B3给药组	6	2.84±0.56*
			C3给药组	6	2.82±0.84*
D3给药组	6	2.99±0.89*
			对照组A	6	3.78±1.51
原复方对照组B	6	3.68±1.01
			对照组C	6	3.57±1.05
对照组D	6	3.48±1.35

注：*p＜0.05，表示与模型组相比，有显著差异。

由表3可知，各给药组和对照组与模型组相比，放射评分明显降低，说明原复方对照组和给药组使得大鼠的关节骨破坏情况得到改善。但是，各给药组的效果明显优于对照组，且C2给药组效果最好。

(3)大鼠IL-1β、TNF-α、IL-17、IL-23水平比较

酶联免疫吸附试验检测IL-1β、TNF-α、IL-17、IL-23表达水平。采用 50mm碳酸盐包被缓冲液将抗原进行溶解，浓度为10～20μg/mL，在96孔酶标板中加入100μL/孔抗原溶液，4℃过夜保存。第二天舍弃包被液，采用PBST(磷酸盐吐温缓冲液)洗涤3次，每孔中加入1％的150μL BSA(牛血清白蛋白)，在37℃环境中封闭1h。之后采用PBST洗涤3次，在每孔中加入100μL不同倍比稀释度的血清，加入对照样品，37℃孵育2h。采用PBST洗涤5次，加入100μL，稀释后的HRP(Hospital Resource Planning，医院资源规划)标记的二抗，37℃孵育1h。PBST洗涤5次，之后，使用显色剂显色20min后，在酶标仪上读取A405吸收值。所述检测数据如表4所示：

表4

注：*p＜0.05，表示与模型组相比，有显著差异。

由表4可知，各给药组及对照组与模型组相比，大鼠的IL-1β、TNF- α、IL-17、IL-23水平降低，表明原复方对照组和给药组对大鼠起到了一定的抗炎作用，具有统计学差异。但各给药组的效果明显优于对照组，并且 C2给药组效果最好。

需要说明的是，说明书中所描述的实施例均属于优选实施例，本说明书中的各个实施例均采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似的部分互相参见即可。

尽管已描述了本发明实施例的优选实施例，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念，则可对这些实施例做出另外的变更和修改。所以，所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本发明实施例范围的所有变更和修改。

最后，还需要说明的是，在本文中，术语“包括”意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括一个……”限定的要素，并不排除在包括所述要素的过程、方法中还存在另外的相同要素。

以上对本发明所提供的技术方案进行了详细介绍，本文中应用了具体个例对本发明的原理及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想；同时，对于本领域的一般技术人员，依据本发明的思想，在具体实施方式及应用范围上均会有改变之处，综上所述，本说明书内容不应理解为对本发明的限制。