阅读说明：本技术 经腹膜后入路构建大鼠肾下腹主动脉瘤模型及构建方法 (Rat infrarenal abdominal aortic aneurysm model established through retroperitoneal approach and establishment method ) 是由 朱君星 杨颖� 唐全巧 石星驰 易思怡 周灿 冯松 于 2021-07-20 设计创作，主要内容包括：本发明涉及生物及医药技术的技术领域,特别是涉及经腹膜后入路构建大鼠肾下腹主动脉瘤模型及构建方法,操作相对简单,可避免经腹腔入路所致的风险,未采用加压灌注,缩短灌注时间至20min,无下肢缺血发生,且不影响成瘤率,对血管损伤极小,灌注结束后局部压迫便可止血,显著提高了手术成功率；包括以下步骤：S1、大鼠术前12h禁食,按40～50mg/kg,予戊巴比妥钠麻醉,麻醉满意后取右侧卧位,常规备皮,消毒,取左侧腋后线肋缘下至大腿根部间连线为切口,长3～3.5cm,逐层切开皮肤、皮下组织及肌肉,见腹膜后脂肪组织,并沿着脂肪组织找到腹膜与腰背肌潜在间隙,用棉签分离此间隙直达腹主动脉,分离腹主动脉与下腔静脉。(The invention relates to the technical field of biology and medicine technology, in particular to a rat infrarenal abdominal aortic aneurysm model constructed by retroperitoneal approach and a construction method, the operation is relatively simple, the risk caused by retroperitoneal approach can be avoided, pressurized perfusion is not adopted, the perfusion time is shortened to 20min, no lower limb ischemia occurs, the tumorigenicity rate is not influenced, the damage to blood vessels is extremely small, hemostasis can be realized by local compression after the perfusion is finished, and the success rate of the operation is obviously improved; the method comprises the following steps: s1, fasting the rat before operation for 12 hours, performing pentobarbital sodium anesthesia according to the ratio of 40-50 mg/kg, taking a right lateral lying position after satisfactory anesthesia, conventionally preparing skin, sterilizing, taking a connecting line from the left axillary posterior line, the costal margin to the thigh root as an incision, cutting skin, subcutaneous tissues and muscles by layers with the length of 3-3.5 cm, finding out fat tissues behind the peritoneum, finding out potential gaps between the peritoneum and the lumbodorsal muscles along the fat tissues, separating the gaps by using a cotton swab to directly reach the abdominal aorta, and separating the abdominal aorta from the inferior vena cava.)

经腹膜后入路构建大鼠肾下腹主动脉瘤模型及构建方法

技术领域

本发明涉及生物及医药技术的技术领域，特别是涉及经腹膜后入路构建大鼠肾下腹主动脉瘤模型及构建方法。

背景技术

传统的腔内弹性蛋白酶灌注联合腔外氯化钙浸润构建大鼠腹主动脉瘤模型存在的缺点：

1.建模方式为经腹腔入路施术，操作复杂，手术难度较大，有腹腔感染风险，术中需对肠道牵拉，极易并发肠梗阻和损伤腔内脏器，并需对腹膜、后腹膜分离延长手术时间，增加了死亡风险；

2.弹性蛋白酶灌注需利用液压或微量泵注射器维持100mmHg甚至更高的灌注压，然而实际上并不能准确达到并维持相等的压力，过高的压力可致弹性蛋白酶进入循环导致大鼠死亡；

3.灌注时间长，需30分钟-2小时，过长的阻断腹主动脉时间，易形成血栓，且血液长时间集中在阻断部位以上易导致脑水肿和下肢缺血，死亡率高；

4.灌注结束后需结扎穿刺侧髂动脉或股动脉，易发生单侧肢体缺血坏死，致残率高。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供经腹膜后入路构建大鼠肾下腹主动脉瘤模型及构建方法，操作相对简单，可避免经腹腔入路所致的风险，未采用加压灌注，缩短灌注时间至20min，无下肢缺血发生，且不影响成瘤率，对血管损伤极小，灌注结束后局部压迫便可止血，显著提高了手术成功率。

本发明的经腹膜后入路构建大鼠肾下腹主动脉瘤模型的构建方法，包括以下步骤：

S1、大鼠术前12h禁食，按40～50mg/kg，予戊巴比妥钠麻醉，麻醉满意后取右侧卧位，常规备皮，消毒，取左侧腋后线肋缘下至大腿根部间连线为切口，长3～3.5cm，逐层切开皮肤、皮下组织及肌肉，见腹膜后脂肪组织，并沿着脂肪组织找到腹膜与腰背肌潜在间隙，用棉签分离此间隙直达腹主动脉，分离腹主动脉与下腔静脉，于左肾下方游离长约1cm的腹主动脉主干，用游标卡尺测量肾下腹主动脉直径，并记录；

S2、充分游离并用慕丝线结扎灌注段腹主动脉分支，用乳突撑开器充分暴露手术视野，先用显微血管夹阻断腹主动脉近端，接着用显微止血钳将灌注段血管内血液挤向远端，再用显微血管夹阻断腹主动脉远端，血管完全塌陷，表明血管密闭性好，然后用一次性胰岛素注射器抽取0.2mL含10U弹性蛋白酶,并用血管钳将注射器针头稍折弯，使其略呈“L”型后穿刺腹主动脉，穿刺成功后缓慢注入含5U的弹性蛋白酶0.1mL，使灌注段腹主动脉充分充盈，固定穿刺针，保留20min，期间若有少许弹性蛋白酶外渗及时补充，使灌注段腹主动脉始终保持充分充盈状态，术毕回抽血管内药物，拔针，明胶海绵覆盖穿刺点，棉球加压，先取远端血管夹，再取近端血管夹，观察数分钟，未见活动性出血，将浸泡在1.0mol/L无菌氯化钙中的小纱条敷在灌注段腹主动脉表面，10min后取出小纱条，清洗腹膜后间隙，检查若无出血，逐层关闭切口。

进一步地，所述步骤S1中，测量肾下腹主动脉直径时，由两人测量，取平均值。

进一步地，所述步骤S2中，两血管夹之间距离大于0.5cm。

进一步地，所述步骤S2中，一次性胰岛素注射器规格为1mL 30G。

本发明的上述一种大鼠肾下腹主动脉瘤模型的构建方法所制作的大鼠肾下腹主动脉瘤模型。

与现有技术相比本发明的有益效果为：

1、本发明采用经腹膜后入路施术，经腹膜后入路是泌尿外科常用手术方式，由于腹主动脉与肾脏解剖位置毗邻同属于腹膜外位器官，为经腹膜后入路构建大鼠肾下腹主动脉瘤模型提供可能，经该入路的优点是可直达腹主动脉，无腔内脏器干扰，操作相对简单，可避免经腹腔入路所致的风险；

2、本发明未采用加压灌注，因为人类腹主动脉瘤形成过程也没有外在机械性压力的作用。仅需将弹性蛋白酶缓慢注入灌注段腹主动脉，使其保持充盈即可，使模型更符合人类腹主动脉瘤形成过程；

3、本发明缩短灌注时间至20min，无1例下肢缺血发生，且不影响成瘤率；

4、本发明选择腹主动脉穿刺口，恢复腹主动脉原有解剖结构，所选择的穿刺针为胰岛素针(30G)，对血管损伤极小，灌注结束后局部压迫便可止血。

附图说明

图1是本发明的一种大鼠肾下腹主动脉瘤模型的构建方法的流程图；

其中：

A：手术切口图；

B:腹膜后间隙标志腹膜后脂肪图；

C:腹膜后间隙入口图；

D:结扎灌注段腹主动脉侧支图；

E:阻断灌注段腹主动脉图

F:弹性蛋白酶灌注图；

G:氯化钙浸润图。

具体实施方式

下面结合附图和实施例，对本发明的具体实施方式作进一步详细描述。以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例：

经腹膜后入路构建大鼠肾下腹主动脉瘤模型，包括以下步骤：

S1、大鼠术前12h禁食，按40～50mg/kg，予戊巴比妥钠麻醉，麻醉满意后取右侧卧位，常规备皮，消毒，取左侧腋后线肋缘下至大腿根部间连线为切口，如图1中A所示，长3～3.5cm，逐层切开皮肤、皮下组织及肌肉，见腹膜后脂肪组织，如图1中B所示，并沿着脂肪组织找到腹膜与腰背肌潜在间隙，如图1中C所示，用棉签分离此间隙直达腹主动脉，分离腹主动脉与下腔静脉，于左肾下方游离长约1cm的腹主动脉主干，用游标卡尺测量肾下腹主动脉直径，并记录；

S2、充分游离并用慕丝线结扎灌注段腹主动脉分支，如图1中D 所示，用乳突撑开器充分暴露手术视野，先用显微血管夹阻断腹主动脉近端，接着用显微止血钳将灌注段血管内血液挤向远端，再用显微血管夹阻断腹主动脉远端，血管完全塌陷，表明血管密闭性好，如图 1中E所示，然后用一次性胰岛素注射器抽取0.2mL含10U弹性蛋白酶,并用血管钳将注射器针头稍折弯，使其略呈“L”型后穿刺腹主动脉，穿刺成功后缓慢注入含5U的弹性蛋白酶0.1mL，如图1中F 所示，使灌注段腹主动脉充分充盈，固定穿刺针，保留20min，期间若有少许弹性蛋白酶外渗及时补充，使灌注段腹主动脉始终保持充分充盈状态，术毕回抽血管内药物，拔针，明胶海绵覆盖穿刺点，棉球加压，先取远端血管夹，再取近端血管夹，观察数分钟，未见活动性出血，将浸泡在1.0mol/L无菌氯化钙中的小纱条敷在灌注段腹主动脉表面，如图1中G所示，10min后取出小纱条，清洗腹膜后间隙，检查若无出血，逐层关闭切口。

作为上述实施例的优选方案，步骤S1中，测量肾下腹主动脉直径时，由两人测量，取平均值。

作为上述实施例的优选方案，步骤S2中，两血管夹之间距离大于0.5cm。

作为上述实施例的优选方案，步骤S2中，一次性胰岛素注射器规格为1mL 30G。

对比例：

弹性蛋白酶灌注联合氯化钙浸润法是目前构建大鼠腹主动脉瘤模型较为普遍的方法，它通过破坏血管细胞外基质并引发相关免疫炎症反应影响血管壁的机械张力促进腹主动脉瘤的形成，可较好模拟人腹主动脉瘤病理特征；

具体实施步骤如下：3％戊巴比妥钠0.2ml/100g腹腔内注射麻醉,仰卧定位,消毒,取腹部正中切口,长约3cm,逐层切开皮肤、肌肉, 进入腹腔,将肠管推向右侧腹腔,在腹主动脉前方切开后腹膜,以盐水棉球推开腹主动脉前壁及侧壁脂肪组织,显露腹主动脉,以显微解剖镊分离腹主动脉与下腔静脉之间间隙,游离出肾动脉水平以下腹主动脉1cm,3-0号丝线结扎游离段发出的1～2对腰动脉及肠系膜下动脉, 以动脉夹在肾动脉水平以下阻断腹主动脉；游离左侧髂总动脉约1c m，远端用3-0号丝线结扎，近端进套管针至腹主动脉阻断部位下 0.3cm处，在近腹主动脉分叉处以0号丝线活扎腹主动脉,固定套管针,以微量注射泵加压灌注猪胰弹力蛋白酶(时间30min,速度4m l/h)；同时用浸润有CaCl₂溶液的纱布包绕在腹主动脉表面10min；灌注结束后,剪断腹主动脉远端结扎线,拔除套管针,结扎左侧髂总动脉,取下腹主动脉近端动脉夹,恢复腹主动脉血流；3-0号丝线缝合后腹膜,0号丝线逐层关腹。

以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和变型，这些改进和变型也应视为本发明的保护范围。

上述对比例参考文献为：

[1]许文平,邱健,詹纯列,何柏身,马国亮,谢志泉.Wistar大鼠腹主动脉瘤模型的建立及改进[J].医学研究生学报,2009,22(04):347-349+449.

[2][武亚丽,童雪影,郑红波,周洪莲.改良大鼠腹主动脉瘤模型的建立[J].中国老年学杂志,2014,34(15):4256-4259.

[3]Albert Busch,Chernogubova Ekaterina,Jin Hong,et al. Four SurgicalModifications to the Classic Elastase Perfusion Aneurysm Model EnableHaemodynamic Alterations and Extended Elastase Perfusion[J].European Journalof Vascular and Endovascular Surgery,2018,56(1):102-109。