一种天然植物凤仙花碳点及其制备方法和应用
阅读说明：本技术 一种天然植物凤仙花碳点及其制备方法和应用 (Natural plant impatiens carbon dots and preparation method and application thereof ) 是由 高蝶 刘芍池 李祥 张开莲 于 2021-07-22 设计创作，主要内容包括：本发明涉及荧光纳米材料应用领域,具体公开了一种天然植物凤仙花碳点及其制备方法和应用,通过以低共熔溶剂与纯水混合液为溶剂,天然植物凤仙花为碳源合成了一种同时具有鉴别革兰氏阳性菌和抗菌的凤仙花碳点。其中,在荧光仪上对所述凤仙花碳点的荧光性能进行评价,结果表明其量子产率为23％,具有优异的荧光性质,能够有选择性地使革兰氏阳性菌呈像,从而对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌进行鉴别,该凤仙花碳点具有良好的水溶性和低细胞毒性,并对革兰氏阳性菌有抑菌效果。(The invention relates to the field of fluorescent nano material application, and particularly discloses a natural plant impatiens carbon dot and a preparation method and application thereof. The fluorescence performance of the carbon dots of the impatiens balsamina is evaluated on a fluorometer, and the result shows that the quantum yield of the carbon dots of the impatiens balsamina is 23%, the carbon dots have excellent fluorescence property, can selectively image gram-positive bacteria so as to identify the gram-positive bacteria and the gram-negative bacteria, and the carbon dots of the impatiens balsamina have good water solubility and low cytotoxicity and have a bacteriostatic effect on the gram-positive bacteria.)
技术领域
本发明属于荧光纳米材料应用领域，具体涉及一种天然植物凤仙花碳点及其制备方法和应用。
背景技术
细菌感染已经成为全球最主要的致死原因之一，是人类健康所面临的全球性挑战。尽管近年来随着医疗技术的发展，抗生素治疗已经被广泛使用，但由于抗生素的耐药性逐渐出现使细菌感染的数量持续增加，因此开发新型抗菌试剂用于临床治疗迫在眉睫。除此之外，在选择抗生素治疗前，区别致病菌为革兰氏阳性菌还是阴性菌对临床治疗有重要意义。不仅能够初步鉴别细菌而且革兰氏阳性菌和阴性菌作用机制不同，对不同抗生素表现出的敏感程度也不同，鉴别致病菌种类能够对治疗提供依据。传统的革兰氏染色法虽能鉴别出革兰氏阳性菌和阴性菌，但由于需要在显微镜下通过肉眼观察，容易出现误差，因此急需我们发展更加准确、便捷的方法来区分革兰氏细菌。
近年来随着高分子材料的发展，纳米材料也被认为其具有良好的抗菌性能，各种含有金属元素的纳米材料如金纳米粒、银纳米粒、二氧化钛纳米粒等，已经研制成功，并具有较高的抗菌性能，但其潜在的细胞毒性和长期的体内滞留使其临床使用仍具有一定的挑战性。碳点因其具有可调节的尺寸、表面电荷、低细胞毒性、良好的生物相容性和破坏细胞膜的特性，已经被广泛应用于传感、生物呈像，药物传递和光催化等领域。
凤仙花作为一种传统中药材，在已有研究中发现其在不同溶剂中的提取物具有良好的抗氧化和抗菌性。低共熔溶剂(DES)是一种新兴的绿色溶剂，其成本低，无毒，溶解范围广，生物相容性好。并且多项研究发现氮、硫、硼、氟、氯等杂原子参杂在碳点中能有效提高碳点的量子产率、抗氧化和抗菌性能。而DES中含有大量掺杂碳点所需要的杂原子。
发明内容
本发明的目的是提供一种天然植物凤仙花碳点，量子产率为23％，具有优异的荧光性质，能够有选择性地使革兰氏阳性菌呈像，从而对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌进行鉴别，还具有抗菌的作用。
本发明提供了一种天然植物凤仙花碳点的制备方法，包括如下步骤：
步骤1，将凤仙花粉末加入到溶剂中，超声后在水热反应釜中反应5-10h，反应温度为200-280℃；
所述溶剂为低共熔溶剂与纯水的混合液；
步骤2，待冷却至室温后，8000-10000rpm离心10-30min，600-1000Da透析袋透析24-72h，60-100℃旋蒸，-20℃真空冷冻干燥后得到纯化的凤仙花碳点。
进一步地，步骤1中，所述低共熔溶剂由氯化胆碱和乙酰胺按照摩尔比1:1-2组成，或由氯化胆碱和尿素按照摩尔比1:1-2组成，或由氯化胆碱和丙二酸按照摩尔比1:1-2组成，或由氯化胆碱和乙酸按照摩尔比1:1-2组成，或由氯化胆碱和甲酸按照摩尔比1:1-2组成，或由氯化胆碱和苹果酸按照摩尔比1:1-2组成，或由四丁基溴化铵和甘油按照摩尔比1-2:1-3组成，或由四丁基溴化铵和乙二醇按照摩尔比1:1-2组成，或由四丁基溴化铵和乙酸按照摩尔比1:1-2组成，或由四丁基溴化铵和丙二酸按照摩尔比1:1-2组成。
进一步地，所述低共熔溶剂由氯化胆碱和乙酰胺按照摩尔比为1:1组成。
进一步地，步骤1中，所述凤仙花粉末是由凤仙花花瓣干燥粉碎后过筛获得。
进一步地，步骤1中，所述超声时间为10-30min。
进一步地，步骤1中，所述凤仙花粉末和所述溶剂的质量比为1:10-30。
进一步地，步骤1中，所述所述溶剂中，纯水体积分数0-30％。
本发明还提供了上述制备方法制备获得的天然植物凤仙花碳点。
本发明还提供了上述天然植物凤仙花碳点在革兰氏阳性菌鉴别中的应用。
本发明还提供了上述天然植物凤仙花碳点在抗菌中的应用。
与现有技术相比，本发明提供的一种天然植物凤仙花碳点及其制备方法和应用，具有以下有益效果：
1、本发明中的天然植物凤仙花碳点制备过程简单，制备成本低。
2、本发明中的天然植物凤仙花碳点具有优异的荧光性能，其量子产率高，达到23％，能通过对革兰氏阳性菌的多色荧光呈像(蓝色、绿色、红色)来特异性识别革兰氏阳性细菌，而革兰氏阴性菌不能呈像，从而进行革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性菌的鉴定。
3、本发明制得的天然植物凤仙花碳点可作为抑菌试剂，能在低浓度抑制革兰氏阳性菌生长，在高浓度抑制革兰氏阴性菌生长，因此可以针对性地用于革兰氏阳性菌引起的疾病的防治。
4、本发明制备的天然植物凤仙花碳点的抑菌机制主要是产生自由基，保证了该抑菌剂对于耐药菌的应用潜力。
5、本发明制备的天然植物凤仙花碳点对细胞毒性低，对两种正常细胞(角质形成细胞、巨噬细胞)和两种癌细胞(肝癌细胞、乳腺癌细胞)的MTT结果显示，在凤仙花碳点浓度为3mg/mL下，细胞仍然有80％左右的存活率，因此该凤仙花碳点具有作为抑菌试剂在体内应用的潜力。
6、本发明用凤仙花为碳源，通过低共熔溶剂作为溶剂以及提供参杂元素，最终制备出具有优异抗菌性质的荧光碳点。本发明通过在碳点表面修饰大量氨基，改变了碳点表面电位，从而大大增加了其抗菌性能。同时，由于革兰氏阳性菌表面负电荷远多于革兰氏阴性菌，使其对革兰氏阳性菌的抑菌效果远大于革兰氏阴性菌。除此之外，该荧光碳点具有高量子产率且表面带有正电荷，使其在杀死细菌的同时还能选择性对革兰氏阳性菌呈像。因此，该发明得到的凤仙花碳点可以有效区分革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明实施例1中天然植物凤仙花碳点制备的流程示意图；
图2为本发明实施例1中制备得到的天然植物凤仙花碳点的电镜图和粒径发分析图；
其中，图a表示本发明实施例1中制备得到的天然植物凤仙花碳点(N,Cl-CDs)的透射电镜图；
图b表示本发明实施例1中制备得到的天然植物凤仙花碳点(N,Cl-CDs)的高分辨透射电镜图；
图c表示本发明实施例1中制备得到的天然植物凤仙花碳点(N,Cl-CDs)的粒径分布分析图，其中，横坐标表示直径长，纵坐标表示分布情况；
图3为本发明实施例1中制备得到的天然植物凤仙花碳点(N,Cl-CDs)的革兰氏阳性菌抑菌测试效果图；
其中，图a为不同浓度的天然植物凤仙花碳点(N,Cl-CDs)对金黄色葡萄球菌的OD值的影响；
图b为不同浓度的天然植物凤仙花碳点(N,Cl-CDs)对屎肠球菌的OD值的影响；
图c为不同浓度的天然植物凤仙花碳点(N,Cl-CDs)对枯草芽孢杆菌的OD值的影响；
图4为本发明实施例1中制备得到的天然植物凤仙花碳点(N,Cl-CDs)对对不同细胞的MTT结果；
其中，图a为不同浓度的天然植物凤仙花碳点(N,Cl-CDs)对肝癌细胞活力的影响；
图b为不同浓度的天然植物凤仙花碳点(N,Cl-CDs)对乳腺癌细胞活力的影响；
图c为不同浓度的天然植物凤仙花碳点(N,Cl-CDs)对角质形成细胞活力的影响；
图d为不同浓度的天然植物凤仙花碳点(N,Cl-CDs)对巨噬细胞活力的影响；
图5为本发明实施例1中制备得到的天然植物凤仙花碳点(N,Cl-CDs)与革兰氏阳性菌共同孵育2小时后的荧光倒置显微镜图，图中，S.aureus表示金黄色葡萄球菌，B.subtilis表示枯草芽孢杆菌，E faecium表示屎肠球菌；
图6为本发明实施例1中制备得到的天然植物凤仙花碳点(N,Cl-CDs)与革兰氏阴性菌共同孵育2小时后的荧光倒置显微镜图，图中，E coli表示大肠杆菌，P.aeruginosa表示铜绿假单胞菌，Salmonella表示沙门氏菌。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施方式对本发明进行详细说明，但应当理解本发明的保护范围并不受具体实施方式的限制。下列实施例中未注明具体条件的试验方法，通常按照常规条件操作，由于不涉及发明点，故不对其步骤进行详细描述。
当实施例给出数值范围时，应理解，除非本发明另有说明，每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本发明中使用的所有技术和科学术语与本技术领域技术人员通常理解的意义相同。除实施例中使用的具体方法、设备、材料外，根据本技术领域的技术人员对现有技术的掌握及本发明的记载，还可以使用与本发明实施例中所述的方法、设备、材料相似或等同的现有技术的任何方法、设备和材料来实现本发明。
一、天然植物凤仙花碳点的制备
实施例1
一种天然植物凤仙花碳点的制备方法，具体包括如下步骤：
步骤1，将凤仙花花瓣60℃干燥粉碎后过40目筛获得凤仙花粉末，按照质量比1：20加入溶剂中，超声30min，在水热反应釜中以240℃反应7.5小时，形成碳点溶液；
所述溶剂为低共熔溶剂，即不含纯水；
所述低共熔溶剂为以氯化胆碱为氢离子受体，乙酰胺为氢离子给体，且所述氯化胆碱和乙酰胺的摩尔比为1：1；
步骤2，待冷却至室温(25℃)后，9000rpm离心20min去除沉淀物，上清液用截留分子量为1000的透析袋在超纯水中透析24小时，透析后的溶液于80℃下旋蒸得到纯净的碳点溶液，-20℃真空冷冻干燥后得到纯化的天然植物凤仙花碳点粉末，其粒径表征结果见图2，制备流程如图1所示。
实施例2
本实施例提供一种凤仙花碳点的制备方法，其具体步骤与实施例1基本相同，区别在于：
步骤1中，凤仙花粉末与溶剂的质量比为1：10，超声时间为10min，在水热反应釜中以200℃反应10小时；
所述溶剂中纯水的体积分数为30％；
步骤2中，离心条件为10000rpm 10min，使用600Da透析袋透析72h，旋蒸温度为100℃。
实施例3
本实施例提供一种凤仙花碳点的制备方法，具体步骤与实施例1基本相同，区别在于：
步骤1中，凤仙花粉末与溶剂的质量比为1：30，超声时间为20min，在水热反应釜中以280℃反应5小时；
所述溶剂中，纯水的体积分数为10％；
步骤2中，离心条件为8000rpm 30min，使用800Da透析袋透析48h，旋蒸温度为60℃。
实施例4
本实施例提供一种凤仙花碳点的制备方法，具体步骤与实施例1基本相同，区别在于：
步骤1中，凤仙花粉末与溶剂的质量比为1：25，超声时间为25min，在水热反应釜中以250℃反应5小时；
所述溶剂中，纯水的体积分数为20％。
实施例5
本实施例提供一种凤仙花碳点的制备方法，具体步骤与实施例1基本相同，区别在于：
所述低共熔溶剂由氯化胆碱和乙酰胺按照摩尔比1:2组成。
实施例6
本实施例提供一种凤仙花碳点的制备方法，具体步骤与实施例1基本相同，区别在于：
所述低共熔溶剂由氯化胆碱和尿素按照摩尔比1:1组成。
实施例7
本实施例提供一种凤仙花碳点的制备方法，具体步骤与实施例1基本相同，区别在于：
所述低共熔溶剂由氯化胆碱和尿素按照摩尔比1:2组成。
实施例8
本实施例提供一种凤仙花碳点的制备方法，具体步骤与实施例1基本相同，区别在于：
所述低共熔溶剂由氯化胆碱和丙二酸按照摩尔比1:1组成。
实施例9
本实施例提供一种凤仙花碳点的制备方法，具体步骤与实施例1基本相同，区别在于：
所述低共熔溶剂由氯化胆碱和丙二酸按照摩尔比1:2组成。
实施例10
本实施例提供一种凤仙花碳点的制备方法，具体步骤与实施例1基本相同，区别在于：
所述低共熔溶剂由氯化胆碱和乙酸按照摩尔比1:1组成。
实施例11
本实施例提供一种凤仙花碳点的制备方法，具体步骤与实施例1基本相同，区别在于：
所述低共熔溶剂由氯化胆碱和乙酸按照摩尔比1:2组成。
实施例12
本实施例提供一种凤仙花碳点的制备方法，具体步骤与实施例1基本相同，区别在于：
所述低共熔溶剂由氯化胆碱和甲酸按照摩尔比1:1组成。
实施例13
本实施例提供一种凤仙花碳点的制备方法，具体步骤与实施例1基本相同，区别在于：
所述低共熔溶剂由氯化胆碱和甲酸按照摩尔比1:2组成。
实施例14
本实施例提供一种凤仙花碳点的制备方法，具体步骤与实施例1基本相同，区别在于：
所述低共熔溶剂由氯化胆碱和苹果酸按照摩尔比1:1组成。
实施例15
本实施例提供一种凤仙花碳点的制备方法，具体步骤与实施例1基本相同，区别在于：
所述低共熔溶剂由氯化胆碱和苹果酸按照摩尔比1:2组成。
实施例16
本实施例提供一种凤仙花碳点的制备方法，具体步骤与实施例1基本相同，区别在于：
所述低共熔溶剂由四丁基溴化铵和甘油按照摩尔比1:1组成。
实施例17
本实施例提供一种凤仙花碳点的制备方法，具体步骤与实施例1基本相同，区别在于：
所述低共熔溶剂由四丁基溴化铵和甘油按照摩尔比1:3组成。
实施例18
本实施例提供一种凤仙花碳点的制备方法，具体步骤与实施例1基本相同，区别在于：
所述低共熔溶剂由四丁基溴化铵和甘油按照摩尔比2:1组成。
实施例19
本实施例提供一种凤仙花碳点的制备方法，具体步骤与实施例1基本相同，区别在于：
所述低共熔溶剂由四丁基溴化铵和乙二醇按照摩尔比1:1组成。
实施例20
本实施例提供一种凤仙花碳点的制备方法，具体步骤与实施例1基本相同，区别在于：
所述低共熔溶剂由四丁基溴化铵和乙二醇按照摩尔比1:2组成。
实施例21
本实施例提供一种凤仙花碳点的制备方法，具体步骤与实施例1基本相同，区别在于：
所述低共熔溶剂由由四丁基溴化铵和乙酸按照摩尔比1:1组成。
实施例22
本实施例提供一种凤仙花碳点的制备方法，具体步骤与实施例1基本相同，区别在于：
所述低共熔溶剂由由四丁基溴化铵和乙酸按照摩尔比1:2组成。
实施例23
本实施例提供一种凤仙花碳点的制备方法，具体步骤与实施例1基本相同，区别在于：
所述低共熔溶剂由四丁基溴化铵和丙二酸按照摩尔比1:1组成。
实施例24
本实施例提供一种凤仙花碳点的制备方法，具体步骤与实施例1基本相同，区别在于：
所述低共熔溶剂由四丁基溴化铵和丙二酸按照摩尔比1:2组成。
本发明实施例1-实施例24制备得到的凤仙花碳点的性能相近，我们以最优实施例1为代表进行抑菌实验研究，具体如下：
二、本发明实施例1制备的得到的天然植物凤仙花碳点对革兰氏阳性菌的抑制性研究
1、实施例1制备的得到的天然植物凤仙花碳点对金黄色葡萄球菌的抑制作用，具体方法如下：
选取处于指数生长期的金黄色葡萄球菌，将其浓度调至OD600＝0.5，然后以1：100的比例用含有不同浓度的凤仙花碳点(0.00、0.02、0.04、0.06、0.08、0.10mg/mL)进行稀释。置于37℃培养箱中培养24小时，菌液没有出现明显浑浊，且在600nm的浊度没有明显增加，其加药浓度即为凤仙花碳点对金黄色葡萄球菌的MIC。
实验结果见图3a，该凤仙花碳点对金黄色葡萄球菌的MIC为0.08mg/mL。
2、实施例1制备的得到的天然植物凤仙花碳点对屎肠球菌的抑制作用，具体方法如下：
选取处于指数生长期的屎肠球菌，将其浓度调至OD600＝0.5，然后以1：100的比例用含有不同浓度的凤仙花碳点(0.00、0.05、0.10、0.15、0.20mg/mL)进行稀释。置于37℃培养箱中培养24小时，菌液没有出现明显浑浊，且在600nm的浊度没有明显增加，其加药浓度即为凤仙花碳点对屎肠球菌的MIC。实验结果见图3b，该凤仙花碳点对屎肠球菌的MIC为0.2mg/mL。
3、实施例1制备的得到的天然植物凤仙花碳点对枯草芽孢杆菌的抑制作用，具体方法如下：
选取处于指数生长期的枯草芽孢干菌，将其浓度调至OD600＝0.5，然后以1：100的比例用含有不同浓度的凤仙花碳点(0.00、0.04、0.08、0.12、0.16mg/mL)进行稀释。置于37℃培养箱中培养24小时，菌液没有出现明显浑浊，且在600nm的浊度没有明显增加，其加药浓度即为凤仙花碳点对枯草芽孢杆菌的MIC。实验结果见图3c，该凤仙花碳点对枯草芽孢杆菌的MIC为0.16mg/mL。
三、本发明实施例1制备的得到的天然植物凤仙花碳点细胞毒性研究
1、实施例1制备的得到的天然植物凤仙花碳点对肝癌细胞的细胞毒性研究，具体方法如下：
选择肝癌细胞(HepG2)，利用酶标仪采用MTT检测法分别测定浓度为0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、2.0、3.0mg/mL的碳点对HepG2的毒性(碳点加入细胞后24小时之后测定)，结果见图4a。实验结果表明凤仙花碳点浓度在远大于革兰氏阳性菌最小抑菌浓度(MIC)的浓度下，细胞的存活率仍然超过90％，说明该凤仙花碳点具有良好的生物相容性。
2、实施例1制备的得到的天然植物凤仙花碳点对乳腺癌细胞的细胞毒性研究，具体方法如下：
选择人乳腺癌细胞(MCF-7)，利用酶标仪采用MTT检测法分别测定浓度为0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、2.0、3.0mg/mL的碳点对MCF-7的毒性(碳点加入细胞后24小时之后测定)，结果见图4b。实验结果表明凤仙花碳点浓度在远大于革兰氏阳性菌最小抑菌浓度(MIC)的浓度下，细胞的存活率仍然超过90％，说明该凤仙花碳点具有良好的生物相容性。
3、实施例1制备的得到的天然植物凤仙花碳点对永生化角质形成细胞的细胞毒性研究，具体方法如下：
选择人永生化角质形成细胞(HaCaT)，利用酶标仪采用MTT检测法分别测定浓度为0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、2.0、3.0mg/mL的碳点对HaCaT的毒性(碳点加入细胞后24小时之后测定)，结果见图4c。实验结果表明凤仙花碳点浓度在远大于革兰氏阳性菌最小抑菌浓度(MIC)的浓度下，细胞的存活率仍然超过90％，说明该凤仙花碳点具有良好的生物相容性。
4、实施例1制备的得到的天然植物凤仙花碳点对巨噬细胞的细胞毒性研究，具体方法如下：
选择巨噬细胞(RAW)，利用酶标仪采用MTT检测法分别测定浓度为0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、2.0、3.0mg/mL的碳点对RAW的毒性(碳点加入细胞后24小时之后测定)，结果见图。实验结果表明凤仙花碳点浓度在元大于革兰氏阳性菌最小抑菌浓度(MIC)的浓度下，细胞的存活率仍然超过90％，说明该凤仙花碳点具有良好的生物相容性。
四、本发明实施例1制备的得到的天然植物凤仙花碳点对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的呈像效果
1、天然植物凤仙花碳点对革兰氏阳性菌的呈像效果
(1)天然植物凤仙花碳点对金黄色葡萄球菌的呈像效果，方法如下：
将处于生长指数期的金黄色葡萄球菌，稀释到在600nm的浊度为0.5左右，加入实施例1中的凤仙花碳点至最终浓度为0.5mg/mL，在37℃的培养箱中培养两小时，然后用PBS溶液，洗涤3次，取10μL滴至玻片上在荧光倒置显微镜下观察。
结果如图5所示，表明该凤仙花碳点能对金黄色葡萄球菌呈像。
(2)天然植物凤仙花碳点对屎肠球菌的呈像效果，方法如下：
将处于生长指数期的屎肠球菌，稀释到在600nm的浊度为0.5左右，加入实施例1中的凤仙花碳点至最终浓度为0.5mg/mL，在37℃的培养箱中培养两小时，然后用PBS溶液，洗涤3次，取10μL滴至玻片上在荧光倒置显微镜下观察。
结果如图5所示，表明该凤仙花碳点能对屎肠球菌呈像。
(3)天然植物凤仙花碳点对枯草芽孢杆菌的呈像效果，方法如下：
将处于生长指数期的枯草芽孢杆菌，稀释到在600nm的浊度为0.5左右，加入实施例1中的凤仙花碳点至最终浓度为0.5mg/mL，在37℃的培养箱中培养两小时，然后用PBS溶液，洗涤3次，取10μL滴至玻片上在荧光倒置显微镜下观察。
结果见图5，表明改凤仙花碳点能对枯草芽孢杆菌呈像。
2、天然植物凤仙花碳点对革兰氏阴性菌的呈像效果
(1)天然植物凤仙花碳点对大肠杆菌的呈像效果，方法如下：
将处于生长指数期的大肠杆菌，稀释到在600nm的浊度为0.5左右，加入实施例1中的凤仙花碳点至最终浓度为0.5mg/mL，在37℃的培养箱中培养两小时，然后用PBS溶液，洗涤3次，取10μL滴至玻片上在荧光倒置显微镜下观察。
结果见图6，表明改凤仙花碳点不能对大肠杆菌呈像。
(2)天然植物凤仙花碳点对沙门杆菌的呈像效果，方法如下：
将处于生长指数期的沙门杆菌，稀释到在600nm的浊度为0.5左右，加入实施例1中的凤仙花碳点至最终浓度为0.5mg/mL，在37℃的培养箱中培养两小时，然后用PBS溶液，洗涤3次，取10μL滴至玻片上在荧光倒置显微镜下观察。
结果见图6，表明改凤仙花碳点不能对沙门杆菌呈像。
(3)天然植物凤仙花碳点对铜绿假单胞菌的呈像效果，方法如下：
将处于生长指数期的铜绿假单胞菌，稀释到在600nm的浊度为0.5左右，加入实施例1中的凤仙花碳点至最终浓度为0.5mg/mL，在37℃的培养箱中培养两小时，然后用PBS溶液，洗涤3次，取10μL滴至玻片上在荧光倒置显微镜下观察。
结果见图6，表明改凤仙花碳点不能对大铜绿假单胞菌呈像。
尽管已描述了本发明的优选实施例，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念，则可对这些实施例作出另外的变更和修改。所以，所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本发明范围的所有变更和修改。
显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。