2-芳酰胺基取代的噻吩酰亚胺酯类化合物及其制备方法和用途
阅读说明：本技术 2-芳酰胺基取代的噻吩酰亚胺酯类化合物及其制备方法和用途 (2-aryl amido substituted thiophene imide ester compound and preparation method and application thereof ) 是由 黄海洪 李刚 王鹏旭 于 2018-07-27 设计创作，主要内容包括：本发明公开了2-芳酰胺基取代的噻吩酰亚胺酯类化合物及其制备方法和用途、其合成方法及其作为抗菌剂在由细菌引起的感染性疾病,特别是由分枝杆菌引起的肺结核(Tuberculosis,TB)中的应用。具体地说,本发明涉及式(I)的化合物,其药学可接受的盐以及包含本发明化合物的药物组合物,其中R<Sub>1</Sub>,R<Sub>2</Sub>,R<Sub>3</Sub>,R<Sub>4</Sub>,R<Sub>5</Sub>及Y如说明书所述。本发明旨在制备具有抗分枝杆菌活性的新化合物,其作为潜在的新药物,可用于由细菌引起的感染性疾病,特别是由结核分枝杆菌引起的肺结核(TB)疾病的治疗或预防性治疗,同时可用于克服与耐药性有关的问题。<Image he="449" wi="594" file="DDA0001747060520000011.GIF" imgContent="drawing" imgFormat="GIF" orientation="portrait" inline="no"></Image>(The invention discloses a 2-aryl amido substituted thiophene imide ester compound, a preparation method and application thereof, a synthetic method thereof and application thereof as an antibacterial agent in infectious diseases caused by bacteria, in particular Tuberculosis (TB) caused by mycobacteria. In particular, the present invention relates to compounds of formula (I), pharmaceutically acceptable salts thereof and pharmaceutical compositions comprising the compounds of the present invention, wherein R 1 ,R 2 ,R 3 ,R 4 ,R 5 And Y is as described in the specification. The present invention aims to prepare novel compounds having antimycobacterial activity, which are potentially useful as novel drugs for the therapeutic or prophylactic treatment of infectious diseases caused by bacteria, in particular Tuberculosis (TB) diseases caused by mycobacterium tuberculosis, while overcoming problems associated with drug resistance.)
技术领域
本发明属于医药技术领域。特别涉及通式(I)所示的2-芳酰胺基取代的噻吩酰亚胺酯类化合物，其制备方法，以该化合物为活性成分的药物组合物，以及它们在治疗和/或预防由结核分枝杆菌引起的感染性疾病中的应用。
背景技术
结核病(tuberculosis，TB)是由结核分枝杆菌引起的一种慢性致死性疾病，是危害人类健康和导致人类死亡的重大传染性疾病，结核病与艾滋病一样，成为全世界主要死亡原因之一。据世界卫生组织(WHO)估计(Global tuberculosis report 2017)，2016年全世界新发结核病数量约为1040万例，其中90％为成年人，65％为男性，10％新发结核病例为艾滋病毒感染者。据估计有130万人死于结核病，还有37.4万艾滋病毒感染者死于结核病。
化学治疗是结核病治疗的主要手段。1944年链霉素的使用，开创了抗结核药物治疗的新时代，随着异烟肼、利福平、吡嗪酰胺的相继出现，使得治疗结核病疗程缩短到6个月，进入了“短程化疗时代”。尽管如此，长期药物联合治疗，使患者产生不良反应，难以坚持规律用药，加之所用药物多诞生于上世纪五六十年代，长期、广泛及不规范使用使得耐药菌发展日趋严重，出现多药耐药结核 (MDR-TB)、广泛耐药结核(XDR-TB)与全部耐药结核(TDR-TB)。面对耐药结核，需使用价格昂贵且毒性较大的二线甚至三线抗结核药物。因此，研发具有新型骨架、新颖作用机制的抗结核药物以治疗与控制结核病，尤其是耐药结核尤为迫切。抗结核新药需要具有高效力、低毒性以及能够缩短治疗时间等特点。
结核分枝杆菌特有的细胞壁具有多层次的结构，这些独特成分的生物合成途径是潜在药物靶标的丰富来源，例如一线药物异烟肼和乙胺丁醇分别作用于霉菌酸和***聚糖层的合成，干扰结核分枝杆菌细胞壁的形成。结核分枝杆菌细胞壁外膜的***半乳聚糖层及***甘露聚糖层的主要组成部分是一种以DPA (decaprenylphosphorylarabinose)为重要前体的***糖，研究表明，DPA主要是由 DPR(decaprenylphosphorylribose)在DprE1(decaprenylphosphoryl-β-D-ribose 2′-epimerase)和DprE2(decaprenylphosphoryl-D-2-ketoerythropentose reductase)的共同作用下差向异构化得到，因此抑制DprE1的活性可阻碍细胞壁的合成最终达到杀灭结核杆菌的目的(Decaprenylphosphoryl arabinofuranose,the donor of the D-arabinofuranosylresidues of mycobacterial arabinan,is formed via a two-step epimerization ofdecaprenylphosphoryl ribose.Journal of bacteriology 2005,187(23), 8020-8025)。
此外，DprE1仅存在于原核生物中，在人体内并不存在，表明DprE1抑制剂对人的毒副作用可能较小，对于需要长期用药治疗的耐药菌感染患者尤其重要。因此，DprE1已成为开发新型抗结核药物非常有前景的靶标，开展靶向DprE1的抗结核新药研究具有重要的应用前景。
目前，DprE1抑制剂还没有药物上市，其中共价结合型化合物PBTZ169已进入 II期临床的研究，非共价结合型化合物TBA-7371处于I期临床研究阶段。非共价结合型DprE1抑制剂避免了共价结合类抑制剂中硝基可能导致的遗传毒性风险，因而备受关注。TCA1是通过高通量筛选得到的非共价结合型DprE1抑制剂(Identification of a small moleculewith activity against drug-resistant and persistent tuberculosis. PNAS 2013,110(27),E2510-E2517)，具有较强的体内外抗结核活性，在联合用药中也体现出良好的协同作用，但是该化合物存在代谢不稳定性及对肝药酶的较强抑制作用等缺陷，因此进一步研发抗结核活性强、毒性低、药代性质改善的抗结核新药具有重要的应用价值。
鉴于以上情况，本领域仍需研究开发结构新颖、抗结核活性更强，毒副作用更低的非共价结合型DprE1抑制剂作为抗结核药物。
The Journal of Antibiotics杂志于2014年第67卷671–676页公开了化合物297F，该化合物通过作用于FtsZ达到抗结核分枝杆菌的作用。WO2014/190199 A1 2014年11月27日公开了式(IV)所示化合物，用于治疗抗药性和持续性结核病，但该专利未显示式(IV)所示化合物的相关合成方法。
对比文件(The Journal of Antibiotics,2014,67,671–676)中公布了297F针对结核分枝杆菌H37Rv的MIC为4.4μM。对比文件(WO2014/190199 A1)并未公布化合物(IV) 具体的针对结核分枝杆菌的活性结果。
本发明参照文献方法(CN 105473578A)，合成了化合物TCA1，并且按照本专利设计的合成路线分别合成了化合物297F和化合物IV，并进行了抗结核活性、细胞毒性的测试，以便于作为阳性对照化合物与本发明化合物进行比较。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种结构新颖并具有较强抗结核分枝杆菌活性的2-芳酰胺基取代的噻吩酰亚胺酯类化合物。本发明发现，2-芳酰胺基取代的噻吩酰亚胺酯类化合物具有强的抗结核分枝杆菌作用，同时具有低细胞毒作用和低心脏毒性风险，可用于由细菌引起的感染性疾病，特别是由结核分枝杆菌引起的肺结核(TB)疾病的治疗或预防性治疗，同时可用于克服与耐药性有关的问题。本发明基于以上发现而得以完成。
发明概述
为此，本发明第一方面提供通式(I)表示的化合物及其药学可接受的盐，
其中，
R1选自取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的C3-C8环烷基；
R2、R3独立地选自H、取代或未取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷胺基、F、Cl、Br、CN、OH、NO2、NH2、三氟甲基、三氟甲氧基；
R4、R5独立地选自H、C1-C6烷基、卤代C1-C6烷基、取代或未取代的C3-C10环烷基、取代或未取代的C3-C9杂环基、或和共同连接的碳原子一起表示取代或未取代的C3-C10环烷基或取代或未取代的C3-C9杂环基；
Y选自C＝O、O＝S＝O；
所述的C3-C9杂环基至少含有一个选自N、O、S中的杂原子；
所述R1、R4或R5中C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C3-C10环烷基、C3-C9杂环基的取代基可任选自以下基团：F、Cl、Br、羟基、氨基、硝基、氰基、三氟甲基、三氟甲氧基、C1-C3烷基、卤代C1-C3烷基、C1-C3烷氧基或C1-C3烷胺基；
上述C1-C6烷基优选C1-C4烷基，更优选C1-C3烷基；
式I所示结构化合物不包括：
在一优选例中，所述的化合物由通式(II)所示：
其中，R1,R2,R3,R4,R5定义同本发明第一方面所述。
在另一优选例中，所述的化合物由通式(III)所示：
其中，R1,R2,R3,R4,R5定义同本发明第一方面所述，
式III所示结构化合物不包括：
在式(II)方案中，
R1选自取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的C3-C6环烷基；
R2选自H、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、F、Cl、Br；
R3选自H、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、F、Cl、Br、CN、OH、NO2、NH2、三氟甲基、三氟甲氧基；
R4、R5独立地选自H、C1-C3烷基、卤代C1-C3烷基、
或和共同连接的碳原子一起表示为
所述Rx选自F、Cl、Br、羟基、氨基、硝基、氰基、三氟甲基、三氟甲氧基、 C1-C3烷基、卤代C1-C3烷基、C1-C3烷氧基或C1-C3烷胺基；
所述R1中C1-C6烷基、C3-C6环烷基的取代基可任选自以下基团：F、Cl、Br、羟基、氨基、硝基、氰基、三氟甲基、三氟甲氧基、C1-C3烷基、卤代C1-C3烷基、 C1-C3烷氧基或C1-C3烷胺基。
在式(III)方案中，
R1选自取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的C3-C6环烷基；
R2选自H、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、F、Cl、Br；
R3选自H、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、F、Cl、Br、CN、OH、NO2、NH2、三氟甲基、三氟甲氧基；
R4、R5独立地选自H、C1-C3烷基、卤代C1-C3烷基、
或和共同连接的碳原子一起表示为
Rx选自F、Cl、Br、羟基、氨基、硝基、氰基、三氟甲基、三氟甲氧基、C1-C3烷基、卤代C1-C3烷基、C1-C3烷氧基或C1-C3烷胺基；
所述R1中C1-C6烷基、C3-C6环烷基的取代基可任选自以下基团：F、Cl、Br、羟基、氨基、硝基、氰基、三氟甲基、三氟甲氧基、C1-C3烷基、卤代C1-C3烷基、 C1-C3烷氧基或C1-C3烷胺基；
式III所示结构化合物不包括：
根据本发明第一方面任一项的化合物，其为实施例制备的本发明目标化合物 (以结构式表示的或以系统命名描述的)及其药学可接受的盐。
根据本发明第一方面任一项化合物，其为选自下列的化合物：
本发明第二方面提供了制备本发明第一方面任一项所述化合物的方法，其包括以下步骤：
化合物B在合适的溶剂(例如DMF、二氯甲烷、四氢呋喃、乙腈，优选DMF) 中，与胺类化合物A，在缩合试剂(例如CDI、DCC、EDCI\HOBT、HATU，优选HATU)和碱(例如Et3N,K2CO3，DIPEA，优选Et3N)的作用下，在空气或惰性气体(Ar或N2)保护下，置于-10℃-50℃反应1-24小时，其中优选室温反应8-15 小时，得到式I所示化合物；
其中，R1,R2,R3,R4,R5及Y定义同本发明第一方面所述。
本发明中的化合物A参考现有出版物中已知的方法即可容易制得，例如(CN105473578A)。
本发明第三方面提供了一种药物组合物，其包括治疗和/或预防有效量的本发明第一方面任一项所述的化合物及其药学上可接受的盐，以及任选的一种或多种药学上可接受的载体、赋形剂、稀释剂、辅料和媒介物。
本发明第四方面提供了本发明第一方面任一项所述化合物及其药学可接受的盐，或者本发明第三方面任一项所述药物组合物在制备治疗和/或预防由结核分枝杆菌引起的感染性疾病的药物中的应用。
前面所述内容只概述了本发明的某些方面，但并不限于这方面。这些方面及其他的方面内容将在下面做更加具体完整的描述。
发明详述
下面对本发明的各个方面和特点作进一步的描述。
本发明所引述的所有文献，它们的全部内容通过引用并入本文，并且如果这些文献所表达的含义与本发明不一致时，以本发明的表述为准。此外，本发明使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义，即便如此，本发明仍然希望在此对这些术语和短语作更详尽的说明和解释，提及的术语和短语如有与公知含义不一致的，以本发明所表述的含义为准。下面是本发明所用多种术语的定义，这些定义适用于本申请整个说明书中所用的术语，除非在具体情况中另作说明。
一般而言，术语“取代或未取代的”表示所给结构中的一个或多个氢原子被具体取代基所取代。除非其他方面表明，一个任选的取代基团可以在基团各个可取代的位置进行取代。当所给出的结构始终不只有一个位置能被选自具体基团得一个或多个取代基所取代，那么取代基可以相同或不同地在各个位置取代。
Ci-Cj表示具有整数“i”(包含i)至整数“j”(包含j)个碳原子的部分。因此，例如C1-C3烷基指具有1至3个(包含1和3)碳原子的烷基。例如C2-C9杂芳基指具有2至9个(包含2和9)碳原子的杂芳基，包含四氮唑基、三氮唑基、噻吩基、吡啶基、嘧啶基、喹啉基。
如本文所述的，术语“烷基”是指具有指定数目碳原子数的烷基，其为直链或支链的烷基，并且其可包括其子基团，例如提及“C1-C3烷基”时，其还可以包括C1-C2烷基表示的子范围的基团，以及具体基团例如甲基、乙基、正丙基、异丙基。
如本文所述的，术语“烷氧基”和“烷胺基”属于惯用表达，是指分别通过一个氧原子或胺基连接到分子的其余部分的烷基基团，其中的烷基如本发明所述。
如本文所述的，术语“卤代烷基”表示烷基基团上的氢被一个或多个卤素原子所取代，这样的实例包含，但并不限于，单氟甲基、单氟甲氧基等。
如本文所述的，术语“环烷基”是指具有指定数目环碳原子数的环状烷基，并且其可包括其子基团，例如提及“C3-C6环烷基”时，其还可以包括C3-C5环烷基、C4-C6环烷基等表示的子范围的基团，以及具体基团例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基。
如本文所述的，术语“C3-C9杂环烷基”，除另有说明或限定外，是指包含3-9 个环碳原子的饱和或部分不饱和的单环、双环或三环体系，其中至少一个环原子选自氮、硫和氧原子。除非另外说明，杂环基可以是碳基或氮基，且-CH2-基团可以任选地被羰基替代。环的硫原子可以任选地被氧化成S-氧化物。杂环基包括但不限于氧杂环丁烷基、氮杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢吡咯基、四氢噻唑基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉、高哌嗪基等。
如本文所述的，术语“环”表示被取代或未被取代的环烷基、被取代或未被取代的杂环基、被取代或未被取代的芳基或被取代或未被取代的杂芳基。所谓的环包括稠环。环上原子的数目通常被定义为环的元数，例如“C3-C6环”是指环绕排列3-6个原子。
如本文所述的，术语“杂原子”是指O、S、N，包括N、S的任何氧化态的形式；伯、仲、叔胺和季铵盐的形式；或者杂环中氮原子上的氢被取代的形式。
如本文所述的，术语“卤素”、“卤代”等表示氟(F)、氯(Cl)或溴(Br)。
本发明中“室温”指的是温度由10℃到40℃。在一些实施例中，“室温”指的是温度由20℃到30℃；在另一些实施例中，室温指的是25℃。
如本文所述的，术语“有效量”是指可在受试者中实现所期望的治疗本发明所述疾病或病症的药物用量。
如本文所述的，术语“药学可接受的”例如在描述“药学可接受的盐”时，表示该盐不但是受试者生理学上可接受，而且还可指在药学上有使用价值的合成物质。
如本文所述的，术语“药物组合物”，其还可以是指“组合物”，其可用于在受试者特别是哺乳动物中实现治疗本发明所述疾病或病症。
疾病的“治疗”包括：
(1)预防该疾病，即，使暴露至或易感染该疾病但未经历或显示该疾病症状的哺乳动物不发生该疾病的临床症状，
(2)抑制该疾病，即，阻止或减少该疾病或其临床症状的进展，
(3)减轻该疾病，即，引起该疾病或其临床症状的复原。
“治疗有效量”指为了治疗疾病向哺乳动物施用时足以实现对该疾病的治疗的化合物的量。治疗有效量将根据化合物、待治疗的疾病及其严重性以及哺乳动物的年龄、体重、性别等因素而变化。治疗有效量还可指足以实现所需的有益效果的化合物的任何量，该有益效果包括如以上(1)-(3)所述的预防疾病、抑制疾病或减轻疾病。例如化合物的量可以介于0.1-250mg/kg，或优选地，0.5-100mg/kg，或更优选地，1-50mg/kg，或甚至更优选地，2-20mg/kg。优选地，所述量的化合物每天两次向哺乳动物施用。更优选地，所述量的化合物每天一次向哺乳动物施用。
如本文所述的，术语“疾病和/或病症”是指所述受试者的一种身体状态，该身体状态与本发明所述疾病和/或病症有关。例如，本发明所述疾病和/或病症指结核杆菌感染性疾病。
如本文所述的，术语“受试者”可以指患者或者其它接受本发明式I化合物或其药物组合物以治疗本发明所述疾病或病症的动物，特别是哺乳动物，例如人、狗、猴、牛、马等。
本发明再一方面还涉及以本发明中的化合物作为活性成份的药物组合物。该药物组合物可根据本领域公知的方法制备。可通过将本发明化合物与一种或多种药学上可接受的固体或液体赋形剂和/或辅剂结合，制成适于人或动物使用的任何剂型。
本发明中的化合物或含有它的药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、静脉注射、肌肉注射、皮下注射、鼻腔、口腔粘膜、眼、肺和呼吸道、皮肤、***、直肠等。
给药剂型可以是液体剂型、固体剂型或半固体剂型。液体剂型可以是溶液剂 (包括真溶液和胶体溶液)、乳剂(包括o/w型、w/o型和复乳)、混悬剂、注射剂 (包括水针剂、粉针剂和输液)、滴眼剂、滴鼻剂、洗剂和搽剂等；固体剂型可以是片剂(包括普通片、肠溶片、含片、分散片、咀嚼片、泡腾片、口腔崩解片)、胶囊剂(包括硬胶囊、软胶囊、肠溶胶囊)、颗粒剂、散剂、微丸、滴丸、栓剂、膜剂、贴片、气(粉)雾剂、喷雾剂等；半固体剂型可以是软膏剂、凝胶剂、糊剂等。
本发明化合物可以制成普通制剂、也可以制成缓释制剂、控释制剂、靶向制剂及各种微粒给药系统。
为了将本发明化合物制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种赋形剂，包括稀释剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、润滑剂、助溶剂。稀释剂可以是淀粉、糊精、蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纤维素、硫酸钙、磷酸氢钙、碳酸钙等；湿润剂可以是水、乙醇、异丙醇等；粘合剂可以是淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、微晶纤维素、***胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、丙烯酸树脂、卡波姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇等；崩解剂可以是干淀粉、微晶纤维素、低取代羟丙基纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、碳酸氢钠与枸橼酸、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠等；润滑剂和助溶剂可以是滑石粉、二氧化硅、硬脂酸盐、酒石酸、液体石蜡、聚乙二醇等。
还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。
为了将给药单元制成胶囊剂，可以将有效成分本发明化合物与稀释剂、助溶剂混合，将混合物直接置于硬胶囊或软胶囊中。也可将有效成分本发明化合物先与稀释剂、黏合剂、崩解剂制成颗粒或微丸，再置于硬胶囊或软胶囊中。用于制备本发明化合物片剂的各稀释剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、助溶剂品种也可用于制备本发明化合物的胶囊剂。
为将本发明化合物制成注射剂，可以用水、乙醇、异丙醇、丙二醇或它们的混合物作溶剂并加入适量本领域常用的增溶剂、助溶剂、pH调节剂、渗透压调节剂。增溶剂或助溶剂可以是泊洛沙姆、卵磷脂、羟丙基-β-环糊精等；pH调节剂可以是磷酸盐、醋酸盐、盐酸、氢氧化钠等；渗透压调节剂可以是氯化钠、甘露醇、葡萄糖、磷酸盐、醋酸盐等。如制备冻干粉针剂，还可加入甘露醇、葡萄糖等作为支撑剂。
此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂或其它添加剂。
为达到用药目的，增强治疗效果，本发明的药物或药物组合物可用任何公知的给药方法给药。
本发明的化合物或组合物可单独服用，或与其他治疗药物或对症药物合并使用。当本发明的化合物与其它治疗药物存在协同作用时，应根据实际情况调整它的剂量。
有益技术效果
本发明人通过MABA(Microplate alamar blue assay)法以M.tuberculosis H37Rv为测试菌株对合成的化合物进行了最低抑菌浓度MIC(Minimum inhibitoryconcentration)测定，结果显示化合物普遍具有较强的抗结核分枝杆菌活性，在式 (II)对应的化合物中有16个MIC<0.5μg/mL，与抗结核阳性对照药TCA1相当， 6个化合物的MIC达到10-8g/mL，抗结核活性显著强于TCA1。此外，式(II)对应的化合物对Vero细胞毒性低(IC50大于64μg/mL)，显示出较TCA1具有更高的安全性。在式(III)对应的化合物中获得MIC<0.5μg/mL的化合物10个，与抗结核阳性对照药TCA1相当，7个化合物的MIC达到10-8g/mL，显著强于TCA1、已知化合物297F及化合物IV。此外，式(III)对应的部分化合物在Vero细胞毒性方面，表现出了较阳性对照化合物TCA1、297F以及化合物IV更高的安全性。小鼠体内药效学结果显示，化合物18显示较强的体内抗结核活性，优于已知化合物297F。 hERG钾离子通道抑制活性结果显示化合物10和18的心脏毒性风险显著低于297F。本发明提供了一类结构新颖、体内外抗结核活性强，细胞毒性低，心脏毒性风险小的新化合物，可用于由细菌引起的感染性疾病，特别是由结核分枝杆菌引起的结核病的治疗或预防性治疗，同时也可用于克服与耐药性有关的问题。
具体实施方式
通过下面的实施例可以对本发明进行详细描述，但并不意味着对本发明任何不利限制。本文已经详细地描述了本发明，其中也公开了其具体实施例，对本领域的技术人员而言，在不脱离本发明精神和范围的情况下针对本发明具体实施方式进行各种变化和改进是显而易见的。
对于以下全部实施例，可使用本领域技术人员已知的标准操作和纯化方法。除非另有说明，所有温度以℃(摄氏度)表示。化合物的结构是通过核磁共振谱(NMR)和/或质谱(MS)来确定的。熔点(Mp)是以℃给出的熔点，温度未加校正。
制备实施例部分
化合物的结构是通过核磁共振氢谱(1H NMR)来确定的。核磁共振氢谱及碳谱位移(δ)以百万分之一(ppm)的单位给出。耦合常数(J)以赫兹(Hz)为单位。核磁共振谱用Mercury-400或Brucker-500型核磁共振仪测定，氘代氯仿(CDCl3) 或氘代二甲基亚砜(DMSO-d6)作溶剂，四甲基硅烷(TMS)为内标。
熔点采用日本Yanaco M.P-500D型熔点测定仪测定，温度未校正。
高分辨质谱采用Agilent 1100series LC/MSD trap mass spectrometer液质联用仪测定。
电子天平采用日本Yanaco LY-300型电子天平。
柱层析一般使用200～300目硅胶为载体。
无水溶剂均通过标准方法处理。其它试剂均为市售分析纯。
本发明采用下述缩略词：
DAST试剂为二乙胺基三氟化硫。
DCE为1,2-二氯乙烷。
DCM为二氯甲烷。
DMF为N,N-二甲基甲酰胺。
DMSO为二甲基亚砜。
EA为乙酸乙酯。
Et3N为三乙胺。
HATU为2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯。
PE为石油醚。
制备例
制备例1
(2-氨基噻吩-3-羰基)氨基甲酸甲酯(中间体A-1)的制备
第一步：(2-氰基乙酰基)氨基甲酸甲酯2a的制备
在Ar保护下，依次将化合物1a(15.0g,176.35mmol)、90mL甲苯、氨基甲酸甲酯(13.24g,176.35mmol)、5.4mL DMF置于250mL圆底烧瓶中，于0℃缓慢滴加POCl3(8.22mL,88.18mmol)，加完后将反应温度升至80℃下反应3h，TLC 检测反应完全，倾出反应液，剩余棕褐色固体，加入500mL水，打浆，抽滤，红外灯干燥，得到中间体2a，白色固体14.64g，收率58.6％。1H NMR(400MHz, DMSO-d6)δ:11.04(br s,1H),4.11(s,2H),3.67(s,3H).
第二步：2-(2-氨基噻吩-3-羰基)氨基甲酸甲酯A-1的制备
Ar保护下，于0℃依次将化合物2a(14.5g,102.3mmol)、150mL甲醇、1,4- 二噻烷-2,5-二醇(7.77g,51.0mmol)、Et3N(15.6mL,112.3mmol)置于250mL圆底烧瓶中，加完后将反应温度升至50℃下反应2.5h，TLC检测至反应结束，减压浓缩，得到黑色固体，加入100mLDCM，打浆，抽滤，依次用饱和NH4Cl水溶液、水溶液淋洗，得到A-1，淡黄色固体12g，收率58.5％。1H NMR(400MHz, DMSO-d6)δ:10.07(br s,1H),7.65(br s,2H),7.23(d,J＝6.0Hz,1H),6.23(d,J＝6.0 Hz,1H),3.67(s,3H).MS(ESI):m/z 201.03(M+H)+.
制备例2
(2-氨基噻吩-3-羰基)氨基甲酸乙酯(中间体A-2)的制备
第一步：(2-氰基乙酰基)氨基甲酸乙酯3a的制备
以1a(15g,176.35mmol)为原料，采用制备例1中第一步相似操作步骤，得到中间体3a，浅黄色固体17.4g，收率63.2％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.98 (br s,1H),4.15-4.10(m,2H),4.09(s,2H),1.21(t,J＝6.8Hz,3H).
第二步：2-(2-氨基噻吩-3-羰基)氨基甲酸甲酯A-2的制备
以3a(16.3g,104.4mmol)为原料，采用制备例1中第二步相似操作步骤，得到中间体A-2，浅黄色固体17.5g，收率78.3％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ: 10.02(br s,1H),7.65(br s,2H),7.25(d,J＝6.0Hz,1H),6.22(d,J＝6.0Hz,1H), 4.16-4.10(m,2H),1.23(t,J＝7.6Hz,3H).MS(ESI):m/z 215.05(M+H)+.
制备例3
(2-氨基噻吩-3-羰基)氨基甲酸异丙酯(中间体A-3)的制备
第一步：(2-氰基乙酰基)氨基甲酸异丙酯4a的制备
以1a(10g,117.6mmol)为原料，采用制备例1中第一步相似操作步骤，得到中间体4a，浅黄色固体9.87g，收率49.4％。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ:10.90 (br s,1H),4.87-4.85(m,1H),4.07(s,2H),1.25(d,J＝6.4Hz,6H).
第二步：2-(2-氨基噻吩-3-羰基)氨基甲酸异丙酯A-3的制备
以4a(3g,17.63mmol)为原料，采用制备例1中第二步相似操作步骤，得到中间体A-3，浅黄色固体2.14g，收率53.2％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.98(br s,1H),7.65(br s,2H),7.24(d,J＝6.0Hz,1H),6.22(d,J＝6.0Hz,1H),4.91-4.88(m, 1H),1.25(d,J＝6.4Hz,6H).MS(ESI):m/z 229.06(M+H)+.
制备例4
(2-氨基噻吩-3-羰基)氨基甲酸丙酯(中间体A-4)的制备
第一步：(2-氰基乙酰基)氨基甲酸丙酯6a的制备
在Ar保护下，于0℃依次将化合物5a(2.0g,23.79mmol)、20mL 1,2-二氯甲烷、草酰氯(3.4mL,40.44mmol)置于100mL圆底烧瓶中，将反应温度升至90℃下反应4h。减压浓缩得到黄色油状物，用30mL无水乙腈溶解，于0℃下缓慢滴加30mL丙醇-无水乙腈混合溶液(丙醇10mL,无水乙腈20mL)，将反应体系转移至室温条件下反应3h，TLC检测反应完全，减压浓缩至反应液为20mL，于0℃下缓慢滴加100mL水，析出白色固体，抽滤，红外灯干燥，得到中间体6a，白色固体1g，收率24.7％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.98(br s,1H),4.09(s,2H),4.04(t,J＝6.8Hz,2H),1.65-1.56(m,2H),0.90(t,J＝7.6Hz,3H).
第二步：2-(2-氨基噻吩-3-羰基)氨基甲酸丙酯A-4的制备
以6a(0.96g,5.64mmol)为原料，采用制备例1中第二步相似操作步骤，得到中间体A-4，浅黄色固体620mg，收率50.0％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ: 10.02(br s,1H),7.64(brs,2H),7.24(d,J＝6.0Hz,1H),6.23(d,J＝6.0Hz,1H),4.04 (d,J＝6.8Hz,2H),1.66-1.60(m,2H),0.93(t,J＝7.6Hz,3H).MS(ESI):m/z 229.06 (M+H)+.
实施例
实施例1
2-(4-(吖丁啶-1-羰基)苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸乙酯(化合物1)
合成路线：
第一步：4-(吖丁啶-1-羰基)苯甲酸甲酯2b的制备
在Ar保护下，依次将氮杂环丁烷盐酸盐(2.12g,22.7mmol)、100mL二氯甲烷、Et3N(10.5mL,75.55mmol)置于250mL圆底烧瓶中，于0℃缓慢滴加化合物 1b(3.0g,15.11mmol)的100mL二氯甲烷溶液，滴加完后将反应体系转移至室温条件下反应3h，TLC检测反应完全，有机相依次经1mol/L的盐酸水溶液、饱和 NaHCO3水溶液、饱和食盐水洗，无水Na2SO4干燥。减压浓缩，得到中间体2b，白色固体3.1g，收率93.9％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.07(d,J＝8.8Hz,2H), 7.68(d,J＝8.8Hz,2H),4.31-4.22(m,4H),3.94(s,3H),2.40-2.33(m,2H).
第二步：4-(吖丁啶-1-羰基)苯甲酸B-1的制备
将化合物2b(3g,13.68mmol)溶于100mL甲醇中，置于250mL圆底烧瓶中，缓慢加入LiOH(1.13g,27.36mmol)的50mL水溶液，室温条件下反应3h，TLC 检测反应完全，旋干甲醇，将水相置于0℃下，缓慢滴加6mol/L盐酸水溶液，析出白色固体，抽滤，红外灯干燥，得到中间体B-1，白色固体2.2g，收率78.3％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.19(br s,1H),7.90(d,J＝8.4Hz,2H),7.10(d,J ＝8.4Hz,2H),4.27(t,J＝7.6Hz,2H),4.05(t,J＝7.6Hz,2H),2.29-2.21(m,2H).MS (ESI):m/z 204.07(M-H)-.
第三步：2-(4-(吖丁啶-1-羰基)苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸乙酯(化合物1)的制备
依次加入化合物B-1(248mg,1.21mmol)、4mL DMF、HATU(707mg,1.86 mmol)、化合物A-2(200mg,0.93mmol)、Et3N(0.38mL,2.79mmol)，室温反应过夜，次日TLC检测反应完全，于0℃下缓慢滴加80mL水，析出黄色固体，抽滤，得到的粗品经柱分离纯化(1％CH3OH-DCM)。减压浓缩，得到无色油状物，加入 10mL***，打浆，抽滤，红外灯干燥，得到化合物1，白色固体150mg，收率 40.2％。Mp:182-183℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:12.66(br s,1H),10.82(br s,1H),8.01(d,J＝8.0Hz,2H),7.85(d,J＝8.0Hz,2H),7.74(d,J＝6.0Hz,1H),7.10(d,J＝6.0Hz,1H),4.33(t,J＝7.6Hz,2H).4.24-4.19(m,2H),4.08(t,J＝7.6Hz,2H),2.32-2.24(m,2H),1.29(t,J＝7.6Hz,3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ:167.8, 164.2,162.4,151.2,149.1,137.2,133.6,128.6,127.4,123.4,116.9,115.3,61.4,53.0, 48.7,15.6,14.3.HR-MS(ESI):m/z[M+H]+C19H20N3O5S：计算值402.11182,实测值 402.10968.
实施例2
2-(4-(四氢吡咯-1-羰基)苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸乙酯(化合物2)
合成路线：
第一步：4-(四氢吡咯-1-羰基)苯甲酸甲酯3b的制备
以1b(3g,15.11mmol)为原料，采用实施例1中第一步相似操作步骤，得到中间体3b，白色固体3.34g，收率94.8％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.07(d,J＝ 8.4Hz,2H),7.57(d,J＝8.4Hz,2H),3.94(s,3H),3.64(br s,2H),3.40(br s,2H)1.93 (br s,4H).
第二步：4-(四氢吡咯-1-羰基)苯甲酸B-2的制备
以3b(3.34g,14.32mmol)为原料，采用实施例1中第二步相似操作步骤，得到中间体B-2，白色固体2.80g，收率89.2％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:7.98 (d,J＝8.4Hz,2H),7.60(d,J＝8.4Hz,2H),3.47(t,J＝6.8Hz,2H),3.33(t,J＝6.4Hz, 2H),1.88-1.79(m,4H).MS(ESI):m/z 218.08(M-H)-.
第三步：2-(4-(四氢吡咯-1-羰基)苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸乙酯(化合物2) 的制备
以B-2(266mg,1.21mmol)和A-2(200mg,0.93mmol)为原料，采用实施例1 中第三步相似操作步骤，得到化合物2，白色固体30mg，收率7.8％。Mp: 172-173℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:12.66(br s,1H),10.83(br s,1H),8.00 (d,J＝8.0Hz,2H),7.77-7.73(m,3H),7.10(d,J＝5.6Hz,1H),4.24-4.19(m,2H),3.50 (t,J＝6.4Hz,2H),3.38(t,J＝6.4Hz,2H),1.90-1.81(m,4H),1.29(t,J＝7.2Hz,3H). HR-MS(ESI):m/z[M+H]+C20H22N3O5S：计算值416.12747,实测值416.12555.
实施例3
2-(4-(哌啶-1-羰基)苯甲酰氨基)噻吩-3-羰基氨基甲酸乙酯(化合物3)
合成路线：
第一步：4-(哌啶-1-羰基)苯甲酸甲酯4b的制备
以1b(5g,25.2mmol)为原料，采用实施例1中第一步相似操作步骤，得到中间体4b，白色固体5.7g，收率91.5％。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:8.07(d,J＝8.0 Hz,2H),7.45(d,J＝8.0Hz,2H),3.93(s,3H),3.72(br s,2H),3.29(br s,2H),1.69(br s,4H),1.52(br s,2H).
第二步：4-(哌啶-1-羰基)苯甲酸B-3的制备
以4b(5.0g,20.22mmol)为原料，采用实施例1中第二步相似操作步骤，得到中间体B-3，白色固体4.18g，收率88.6％。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ:13.1 (br s,1H),7.98(d,J＝8.0Hz,2H),7.47(d,J＝8.0Hz,2H),3.59(br s,2H),3.21(br s, 2H),1.60-1.56(m,4H),1.44(br s,2H).MS(ESI):m/z 232.10(M-H)-.
第三步：2-(4-(哌啶-1-羰基)苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸乙酯(化合物3)的制备
以B-3(1.83g,7.85mmol)和A-2(1.4g,6.54mmol)为原料，采用实施例1中第三步相似操作步骤，得到化合物3，白色固体930mg，收率33.2％。Mp:177-178℃. 1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:12.64(br s,1H),10.82(br s,1H),8.00(d,J＝8.0Hz, 2H),7.74(d,J＝6.0Hz,1H),7.62(d,J＝8.0Hz,2H),7.10(d,J＝6.0Hz,1H), 4.24-4.19(m,2H),3.61(br s,2H),3.25(br s,2H),1.62(br s,4H),1.47(br s,2H),1.29 (t,J＝6.8Hz,3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ:167.8,164.2,162.5,151.2, 149.1,140.8,132.4,127.6,127.5,123.4,116.9,115.3,61.4,48.0,42.4,26.0,25.3,24.1, 14.3.HR-MS(ESI):m/z[M+H]+C21H24N3O5S：计算值430.14312,实测值430.14349.
实施例4
2-(4-(吖庚因-1-羰基)苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸乙酯(化合物4)
合成路线：
第一步：4-(吖庚因-1-羰基)苯甲酸甲酯5b的制备
以1b(3g,15.11mmol)为原料，采用实施例1中第一步相似操作步骤，得到中间体5b，黄色油状物3.9g，收率98.7％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.07(d,J＝8.4Hz,2H),7.44(d,J＝8.4Hz,2H),3.93(s,3H),3.69(t,J＝6.0Hz,2H),3.32(br s, 2H),1.85(br s,2H),1.65(br s,2H),1.60(br s,4H).
第二步：4-(吖庚因-1-羰基)苯甲酸B-4的制备
以5b(3.9g,14.92mmol)为原料，采用实施例1中第二步相似操作步骤，得到中间体B-4，白色固体3.4g，收率92.1％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.1(br s,1H),7.97(d,J＝8.0Hz,2H),7.46(d,J＝8.0Hz,2H),3.56(t,J＝6.0Hz,2H),3.25 (t,J＝5.6Hz,2H),1.73-1.70(m,2H),1.58-1.55(m,2H),1.64-1.48(m,4H).MS(ESI): m/z 246.11(M-H)-.
第三步：2-(4-(吖庚因-1-羰基)苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸乙酯(化合物4)的制备
以B-4(277mg,1.21mmol)和A-2(200mg,0.93mmol)为原料，采用实施例1 中第三步相似操作步骤，得到化合物3，白色固体140mg，收率34.0％。Mp: 148-149℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:12.65(br s,1H),10.82(br s,1H),8.00 (d,J＝8.4Hz,2H),7.74(d,J＝6.0Hz,1H),7.62(d,J＝8.4Hz,2H),7.10(d,J＝6.0 Hz,1H),4.24-4.19(m,2H),3.59(t,J＝6.0Hz,2H),3.31-3.28(m,2H),1.74-1.72(m, 2H),1.62-1.48(m,6H),1.29(t,J＝6.8Hz,3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ: 169.3,164.2,162.6,151.2,149.2,141.6,132.1,127.5,127.2,123.4,116.9,115.3,61.4, 49.1,45.5,28.8,27.2,26.8,25.9,14.3.HR-MS(ESI):m/z[M+H]+C22H26N3O5S：计算值444.15877,实测值444.15631.
实施例5
2-(4-(吗啉-1-羰基)苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸乙酯(化合物5)
合成路线：
第一步：4-(吗啉-1-羰基)苯甲酸甲酯6b的制备
以1b(3g,15.11mmol)为原料，采用实施例1中第一步相似操作步骤，得到中间体6b，黄色油状物3.7g，收率98.2％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.07(d,J＝ 8.4Hz,2H),7.46(d,J＝8.4Hz,2H),3.92(s,3H),3.77(br s,4H),3.61(br s,2H),3.38 (br s,2H).
第二步：4-(吗啉-1-羰基)苯甲酸B-5的制备
以6b(3.5g,14.04mmol)为原料，采用实施例1中第二步相似操作步骤，得到中间体B-5，白色固体2.52g，收率76.4％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.2 (br s,1H),7.99(d,J＝8.4Hz,2H),7.52(d,J＝8.4Hz,2H),3.64(br s,4H),3.54(br s, 2H),3.3(br s,2H).MS(ESI):m/z 234.08(M-H)-.
第三步：2-(4-(吗啉-1-羰基)苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸乙酯(化合物5)的制备
以B-5(285mg,1.21mmol)和A-2(200mg,0.93mmol)为原料，采用实施例1 中第三步相似操作步骤，得到化合物5，白色固体315mg，收率78.6％。Mp: 159-160℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:12.65(br s,1H),10.82(br s,1H),8.01 (d,J＝7.6Hz,2H),7.74(d,J＝4.8Hz,1H),7.67(d,J＝7.6Hz,2H),7.10(d,J＝4.8 Hz,1H),4.22-4.21(m,2H),3.66(brs,4H),3.10(br s,4H),1.29(t,J＝6.4Hz,3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ:168.1,164.2,162.5,151.2,149.1,139.8,132.7,127.9, 127.6,123.4,116.9,115.3,66.1,61.4,47.7,42.1,14.3.HR-MS(ESI):m/z[M+H]+ C20H22N3O6S：计算值432.12238,实测值432.12067.
实施例6
2-(4-(硫代吗啉-1-羰基)苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸乙酯(化合物6)
合成路线：
第一步：4-(硫代吗啉-1-羰基)苯甲酸甲酯7b的制备
以1b(2g,10.07mmol)为原料，采用实施例1中第一步相似操作步骤，得到中间体7b，白色固物2.47g，收率92.5％。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:8.09(d,J＝8.0Hz,2H),7.44(d,J＝8.0Hz,2H),4.04(br s,2H)3.94(s,3H),3.62(br s,2H),2.75 (br s,2H),2.56(br s,2H).
第二步：4-(硫代吗啉-1-羰基)苯甲酸B-6的制备
以7b(2.45g,9.23mmol)为原料，采用实施例1中第二步相似操作步骤，得到中间体B-6，白色固体1.9g，收率81.9％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.1(br s,1H),7.99(d,J＝8.4Hz,2H),7.50(d,J＝8.4Hz,2H),3.87(br s,2H),3.49(br s,2H), 2.69(br s,2H),2.59(br s,2H).MS(ESI):m/z 250.05428(M-H)-.
第三步：2-(4-(硫代吗啉-1-羰基)苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸乙酯(化合物6) 的制备
以B-6(304mg,1.21mmol)和A-2(200mg,0.93mmol)为原料，采用实施例1 中第三步相似操作步骤，得到化合物6，白色固体70mg，收率16.8％。Mp: 178-179℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:12.64(br s,1H),10.82(br s,1H),8.01 (d,J＝8.4Hz,2H),7.74(d,J＝6.0Hz,1H),7.66(d,J＝8.4Hz,2H),7.10(d,J＝6.0 Hz,1H),4.24-4.19(m,2H),3.90-3.89(m,2H),3.52(br s,2H),2.70-2.69(m,2H),2.62 (br s,2H),1.29(t,J＝7.6Hz,3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ:168.4,164.2, 162.5,151.2,149.1,140.3,132.5,127.6,127.5,123.4,116.9,115.3,61.4,49.7,44.0, 27.0,26.7,14.3.HR-MS(ESI):m/z[M+H]+C20H22N3O5S：计算值448.09954,实测值 448.09714.
实施例7
2-(4-(4-甲基哌啶-1-羰基)苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸乙酯(化合物7)
合成路线：
第一步：4-(4-甲基哌啶-1-羰基)苯甲酸甲酯8b的制备
以1b(2g,10.07mmol)为原料，采用实施例1中第一步相似操作步骤，得到中间体8b，黄色油状物2.5g，收率95.1％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.04(d,J＝ 8.4Hz,2H),7.42(d,J＝8.4Hz,2H),4.65(br s,1H),3.89(s,3H),3.57(br s,1H),2.95 (br s,1H),2.75(brs,1H),1.73(br s,1H),1.67-1.57(m,2H),1.22-1.08(m,2H),0.95(d, J＝6.4Hz,3H).
第二步：4-(4-甲基哌啶-1-羰基)苯甲酸B-7的制备
以8b(2.3g,8.8mmol)为原料，采用实施例1中第二步相似操作步骤，得到中间体B-7，白色固体2g，收率91.7％。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ:13.1(br s, 1H),7.98(d,J＝8.0Hz,2H),7.47(d,J＝8.0Hz,2H),4.44(br s,1H),3.44(br s,1H), 3.00(br s,1H),2.76(br s,1H),1.69-1.53(m,3H),1.08-1.05(m,2H),0.92(d,J＝6.0 Hz,3H).MS(ESI):m/z246.11(M-H)-.
第三步：2-(4-(4-甲基哌啶-1-羰基)苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸乙酯(化合物7) 的制备
以B-7(300mg,1.21mmol)和A-2(200mg,0.93mmol)为原料，采用实施例1 中第三步相似操作步骤，得到化合物7，白色固体195mg，收率47.3％。Mp: 79-81℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:12.64(br s,1H),10.82(br s,1H),8.00(d, J＝8.4Hz,2H),7.74(d,J＝6.0Hz,1H),7.62(d,J＝8.4Hz,2H),7.10(d,J＝6.0Hz, 1H),4.24-4.19(m,2H),3.13-3.07(m,4H),1.29(t,J＝6.0Hz,3H),1.19-1.15(m,5H), 0.93(d,J＝6.8Hz,3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ:167.9,164.2,162.6,151.3, 149.2,140.8,132.4,127.6,127.5,123.4,116.9,115.3,61.4,47.4,41.8,34.2,33.5,30.5, 21.7,14.3.HR-MS(ESI):m/z[M+H]+C22H26N3O5S：计算值444.15877,实测值 444.15768.
实施例8
2-(4-(4-甲氧基哌啶-1-羰基)苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸乙酯(化合物8)
合成路线：
第一步：4-(4-甲氧基哌啶-1-羰基)苯甲酸甲酯9b的制备
以1b(2g,10.07mmol)为原料，采用实施例1中第一步相似操作步骤，得到中间体9b，黄色油状物2.8g，收率99.6％。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:8.08(d,J＝ 8.0Hz,2H),7.45(d,J＝8.0Hz,2H),4.01(br s,1H),3.94(s,3H),3.55(br s,2H),3.49 (br s,1H),3.37(s,3H),3.18(br s,1H),1.92(br s,1H),1.78-1.72(m,2H),1.56(br s, 1H).
第二步：4-(4-甲氧基哌啶-1-羰基)苯甲酸B-8的制备
以9b(2.8g,10.1mmol)为原料，采用实施例1中第二步相似操作步骤，得到中间体B-8，白色固体1.3g，收率48.9％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.13 (br s,1H),7.98(d,J＝8.4Hz,2H),7.49(d,J＝8.4Hz,2H),3.91(br s,1H),3.45-3.42 (m,3H),3.25(s,3H),3.11(br s,1H),1.87-1.77(m,2H),1.47-1.40(m,2H).MS(ESI): m/z 262.11(M-H)-.
第三步：2-(4-(4-甲氧基哌啶-1-羰基)苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸乙酯(化合物 8)的制备
以B-8(320mg,1.21mmol)和A-2(200mg,0.93mmol)为原料，采用实施例1 中第三步相似操作步骤，得到化合物8，白色固体63mg，收率14.8％。Mp: 160-161℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:12.64(br s,1H),10.82(br s,1H),8.00 (d,J＝8.0Hz,2H),7.74(d,J＝6.0Hz,1H),7.64(d,J＝8.0Hz,2H),7.10(d,J＝6.0 Hz,1H),4.24-4.19(m,2H),3.93(br s,1H),3.45-3.41(m,2H),3.26(s,3H),3.15(br s, 2H),1.90-1.80(m,2H),1.44(br s,2H),1.29(t,J＝7.2Hz,3H).13C NMR(100MHz, DMSO-d6)δ:167.9,164.2,162.5,151.2,149.1,140.5,132.5,127.6,123.4,116.9,115.3, 74.9,61.4,55.1,44.5,30.8,30.1,14.3.HR-MS(ESI):m/z[M+H]+C22H26N3O6S：计算值460.15368,实测值460.15329.
实施例9
2-(4-(4,4-二氟哌啶-1-羰基)苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸乙酯(化合物9)合成路线：
第一步：4-(4-哌啶酮-1-羰基)苯甲酸甲酯10b的制备
以1b(5g,25.2mmol)为原料，采用实施例1中第一步相似操作步骤，得到中间体10b，白色固体6.1g，收率92.4％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.12(d,J＝ 8.4Hz,2H),7.54(d,J＝8.4Hz,2H),4.04-4.02(m,2H),3.95(s,3H),3.72-3.70(m, 2H),2.60-2.44(m,4H).
第二步：4-(4,4-二氟哌啶-1-羰基)苯甲酸甲脂11b的制备
Ar保护下，依次加入化合物10b(2g,7.65mmol)、100mLDCM、置于250mL 圆底烧瓶中，缓慢滴加DAST(4.75mL,23mmol)的50mLDCM溶液，将反应体系转移至室温反应3h，TLC检测反应完全，有机相依次用水、饱和食盐水洗，无水Na2SO4干燥。减压浓缩，得到中间体11b，白色固体2.1g，收率96.8％。1H NMR (400MHz,CDCl3)δ:8.110(d,J＝8.4Hz,2H),7.48(d,J＝8.4Hz,2H),3.95(s,3H), 3.88(br s,2H),3.51(br s,2H),2.45-2.33(m,1H),2.08-1.95(m,3H).
第三步：4-(4,4-二氟哌啶-1-羰基)苯甲酸B-9的制备
以11b(1.0g,3.53mmol)为原料，采用实施例1中第二步相似操作步骤，得到中间体B-9，白色固体0.79g，收率83.2％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:8.00 (d,J＝8.4Hz,2H),7.56(d,J＝8.4Hz,2H),3.84-3.73(m,2H),3.45-3.37(m,2H),2.03 (br s,4H).MS(ESI):m/z268.08(M-H)-.
第四步：2-(4-(4,4-二氟基哌啶-1-羰基)苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸乙酯(化合物9)的制备
以B-9(326mg,1.21mmol)和A-2(200mg,0.93mmol)为原料，采用实施例1 中第三步相似操作步骤，得到化合物9，白色固体245mg，收率56.7％。Mp: 177-178℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:12.65(br s,1H),10.82(br s,1H),8.01 (d,J＝8.4Hz,2H),7.74-7.70(m,3H),7.10(d,J＝5.6Hz,1H),4.24-4.19(m,2H), 3.87-3.76(m,2H),3.48-3.40(m,2H),2.06(br s,4H),1.29(t,J＝6.8Hz,3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ:168.2,164.2,162.5,151.2,149.1,139.9,132.8,127.7, 127.6,123.4,122.8(J＝240Hz),116.9,115.3,61.4,44.0,38.5,33.7,14.3.HR-MS (ESI):m/z[M+H]+C21H22F2N3O5S：计算值466.12427,实测值466.12195.
实施例10
2-(4-(哌啶-1-羰基)-3-氟苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸乙酯(化合物10)
合成路线：
第一步：2-氟-4-(甲氧羰基)苯甲酸13b的制备
于0℃下，将化合物12b(3.3g,18.12mmol)、氨基磺酸(1.94g,19.93mmol) 溶于50mL乙腈与20mL水的混合溶液中置于250mL圆底烧瓶中，缓慢滴加 NaClO2(3.27g,36.24mmol)的60mL水溶液，将反应体系转移至室温反应4h，TLC 检测反应完全，向反应体系中加入70mL饱和Na2SO3与140mL 1mol/L的盐酸水溶液混合溶液，EA提取3次，有机相用饱和食盐水洗，无水Na2SO4干燥。减压浓缩，得到中间体13b，黄色固体3.4g，收率94.4％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ:7.98(t,J＝8.0Hz,1H),7.84(dd,J1＝8.0Hz,J2＝1.2Hz,1H),7.75(dd,J1＝10.0 Hz,J2＝1.2Hz,1H),3.89(s,3H).
第二步：3-氟-4-(哌啶-1-羰基)苯甲酸甲酯14b的制备
向250mL圆底烧瓶中依次加入化合物13b(3.3g,16.65mmol)、15mL DMF、 HATU(12.67g,33.3mmol)、哌啶(2.5mL,24.98mmol)和Et3N(6.9mL,50mmol)，室温反应10h，TLC检测反应完全，减压浓缩。残留物用DCM溶解，有机相依次用蒸馏水、饱和食盐水洗，无水Na2SO4干燥。减压浓缩，柱分离(30％EA-PE)，减压浓缩，得到中间体14b，黄色油状物4.1g，收率93.2％。1H NMR(400MHz, CDCl3)δ:7.87(dd,J1＝8.0Hz,J2＝1.6Hz,1H),7.75(dd,J1＝9.6Hz,J2＝1.6Hz, 1H),7.43(dd,J1＝8.0Hz,J2＝2.4Hz,1H),3.94(s,3H),3.75-3.74(m,2H),3.23(br s, 2H),1.68(br s,4H),1.53(br s,2H).
第三步：3-氟-4-(哌啶-1-羰基)苯甲酸B-10的制备
以14b(4.0g,15.08mmol)为原料，采用实施例1中第二步相似操作步骤，得到中间体B-10，白色固体3.7g，收率97.6％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.38 (br s,1H),7.88(dd,J1＝7.6Hz,J2＝1.2Hz,1H),7.69(dd,J1＝9.6Hz,J2＝1.2Hz, 1H),7.47(dd,J1＝7.6Hz,J2＝2.8Hz,1H),3.59-3.56(m,2H),3.13-3.11(m,2H), 1.58-1.51(m,4H),1.42-1.37(m,2H).MS(ESI):m/z 250.09(M-H)-.
第四步：2-(4-(哌啶-1-羰基)-3-氟苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸乙酯(化合物10) 的制备
以B-10(1.13g,4.48mmol)和A-2(0.8g,3.74mmol)为原料，采用实施例1中第三步相似操作步骤，得到化合物10，类白色固体800mg，收率47.9％。Mp: 186-187℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:12.59(br s,1H),10.85(br s,1H), 7.83-7.79(m,2H),7.73(d,J＝6.0Hz,1H),7.69-7.65(m,1H),7.13(d,J＝6.0Hz,1H), 4.24-4.19(m,2H),3.65-3.62(m,2H),3.20-3.18(m,2H),1.65-1.57(m,4H),1.46(br s, 2H),1.28(t,J＝7.2Hz,3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ:164.0,162.8,161.5, 157.6(J＝246Hz),151.2,148.7,134.8(J＝13Hz),129.7,129.6,128.7(J＝9Hz), 123.6(J＝22Hz),117.1,115.7,115.1(J＝24Hz),61.4,47.6,42.1,26.1,25.3,23.9, 14.3.HR-MS(ESI):m/z[M+H]+C21H23FN3O5S：计算值448.13382,实测值 448.13370.
实施例11
2-(4-(哌啶-1-羰基)-4-氯苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸乙酯(化合物11)
合成路线：
第一步：3-氯-4-(甲氧羰基)苯甲酸16b的制备
于-10℃下，将化合物15b(1g,5.12mmol)溶于25mL浓盐酸与25mL冰醋酸混合溶液中，置于250mL三颈瓶中，缓慢滴加NaNO2(0.35g,5.12mmol)的10mL 水溶液，于-10℃下反应30min，缓慢滴加CuCl(1.01g,10.24mmol)的25mL浓盐酸溶液，滴加完毕后将反应体系转移至室温下反应5h，TLC检测反应完全。于 0℃下缓慢加入蒸馏水，EA提取，有机相经饱和食盐水洗，无水Na2SO4干燥。减压浓缩，柱分离(1％CH3OH-DCM)，减压浓缩，得到中间体16b，淡黄色固体 0.51g，收率46.8％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.44(br s,1H),8.00-7.99(m,1H),7.96-7.95(m,1H),7.91(br s,1H),3.89(s,3H).
第二步：2-氯-4-(哌啶-1-羰基)苯甲酸甲酯17b的制备
以16b(0.4g,1.86mmol)为原料，采用实施例10中第二步相似操作步骤，得到中间体17b，淡黄色油状物500mg，收率95.4％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ: 7.84(d,J＝8.0Hz,1H),7.45(d,J＝1.6Hz,1H),7.29(dd,J1＝8.0Hz,J2＝1.6Hz, 1H),3.93(s,3H),3.69-3.68(m,2H),3.28(br s,2H),1.67(br s,4H),1.50(br s,2H).
第三步：2-氯-4-(哌啶-1-羰基)苯甲酸B-11的制备
以17b(0.5g,1.77mmol)为原料，采用实施例1中第二步相似操作步骤，得到中间体B-11，白色固体0.33g，收率70.4％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.53 (br s,1H),7.83(d,J＝7.6Hz,1H),7.53(d,J＝1.6Hz,1H),7.40(dd,J1＝8.0Hz,J2＝ 1.6Hz,1H),3.57(br s,2H),3.22(br s,2H),1.60-1.56(m,4H),1.45(br s,2H).MS (ESI):m/z 266.06(M-H)-.
第四步：2-(4-(哌啶-1-羰基)-4-氯苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸乙酯(化合物11) 的制备
以B-11(150mg,0.564mmol)和A-2(100mg,0.47mmol)为原料，采用实施例1 中第三步相似操作步骤，得到化合物11，白色固体34mg，收率15.6％。Mp: 59-60℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:12.17(br s,1H),10.79(br s,1H),7.84(d, J＝7.6Hz,1H),7.70(d,J＝6.0Hz,1H),7.63(d,J＝1.2Hz,1H),7.50(dd,J1＝7.6Hz, J2＝1.2Hz,1H),7.14(d,J＝6.0Hz,1H),4.22-4.16(m,2H),3.59(br s,2H),3.27(br s, 2H),1.64-1.61(m,4H),1.49-1.48(m,2H),1.26(t,J＝7.2Hz,3H).HR-MS(ESI):m/z [M+H]+C21H23ClN3O5S：计算值464.10415,实测值464.09808.
实施例12
2-(4-(哌啶-1-羰基)-4-溴苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸乙酯(化合物12)
合成路线：
第一步：3-溴-4-(甲氧羰基)苯甲酸18b的制备
于-10℃下，将化合物15b(2g,10.25mmol)溶于50mL HBr溶液与50mL冰醋酸混合溶液中，置于500mL三颈瓶中，缓慢滴加NaNO2(0.71g,10.25mmol)的 20mL水溶液，于-10℃下反应30min，缓慢滴加CuBr(1.47g,10.25mmol)的50 mLHBr溶液，滴加完毕后将反应体系转移至60℃下反应4h，TLC检测反应完全，于0℃下缓慢加入蒸馏水，EA提取，有机相经饱和食盐水洗，无水Na2SO4干燥。减压浓缩，得到中间体18b，淡黄色固体1g，收率38.5％。1H NMR(400MHz, DMSO-d6)13.62(br s,1H),8.17(d,J＝1.6Hz,1H),8.01(dd,J1＝8.0Hz,J2＝1.6Hz, 1H),7.86(d,J＝8.0Hz,1H),3.89(s,3H).
第二步：2-溴-4-(哌啶-1-羰基)苯甲酸甲酯19b的制备
以18b(0.6g,2.32mmol)为原料，采用实施例10中第二步相似操作步骤，得到中间体19b，无油状物570mg，收率75.4％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.82 (d,J＝7.6Hz,1H),7.68(d,J＝1.6Hz,1H),7.36(dd,J1＝8.0Hz,J2＝1.6Hz,1H), 3.95(s,3H),3.73-3.70(m,2H),3.30(br s,2H),1.69(br s,4H),1.53(br s,2H).
第三步：2-溴-4-(哌啶-1-羰基)苯甲酸B-12的制备
以19b(570mg,1.75mmol)为原料，采用实施例1中第二步相似操作步骤，得到中间体B-12，白色固体0.35g，收率64.1％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ: 13.50(br s,1H),7.74(d,J＝8.0Hz,1H),7.64(d,J＝1.2Hz,1H),7.40(dd,J1＝8.0Hz, J2＝1.2Hz,1H),3.53(brs,2H),3.19(br s,2H),1.57-1.50(m,4H),1.42(br s,2H).MS (ESI):m/z 310.01(M-H)-.
第四步：2-(4-(哌啶-1-羰基)-4-溴苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸乙酯(化合物12) 的制备
以B-12(262mg,0.84mmol)和A-2(150mg,0.7mmol)为原料，采用实施例1 中第三步相似操作步骤，得到化合物12，白色固体30mg，收率8.5％。Mp: 144-145℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:12.04(br s,1H),10.79(br s,1H), 7.78-7.76(m,2H),7.69(d,J＝6.0Hz,1H),7.54(d,J＝8.0Hz,1H),7.14(d,J＝6.0Hz, 1H),4.21-4.16(m,2H),3.59(br s,2H),3.28(br s,2H),1.61(br s,4H),1.49(br s,2H), 1.26(t,J＝7.2Hz,3H).HR-MS(ESI):m/z[M+H]+C21H23BrN3O5S：计算值508.05363, 实测值508.04712.
实施例13
2-(4-(哌啶-1-羰基)苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸甲酯(化合物18)
合成路线：
2-(4-(哌啶-1-羰基)苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸甲酯(化合物18)的制备
以B-3(175mg,0.75mmol)和A-1(100mg,0.5mmol)为原料，采用实施例1中第三步相似操作步骤，得到化合物18，白色固体18mg，收率8.7％。Mp:151-152℃. 1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:12.63(br s,1H),10.85(br s,1H),8.00(d,J＝8.0Hz, 2H),7.73(d,J＝6.0Hz,1H),7.62(d,J＝8.0Hz,2H),7.10(d,J＝6.0Hz,1H),3.76(s, 3H),3.61(br s,2H),3.25(brs,2H),1.62-1.47(m,4H),1.47(br s,2H).13C NMR(100 MHz,DMSO-d6)δ:167.8,164.0,162.5,151.8,149.2,140.8,132.3,127.6,127.5,123.3, 116.9,115.2,52.5,48.0,42.4,26.0,25.3,24.1.HR-MS(ESI):m/z[M+H]+ C20H22N3O5S：计算值416.12747,实测值416.12613.
实施例14
2-(4-(哌啶-1-羰基)苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸异丙酯(化合物20)
合成路线：
2-(4-(哌啶-1-羰基)苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸异丙酯(化合物20)的制备
以B-3(307mg,1.32mmol)和A-3(200mg,0.876mmol)为原料，采用实施例1 中第三步相似操作步骤，得到化合物20，白色固体75mg，收率19.3％。Mp: 163-164℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:12.65(br s,1H),10.77(br s,1H),8.00 (d,J＝8.4Hz,2H),7.74(d,J＝6.0Hz,1H),7.62(d,J＝8.4Hz,2H),7.10(d,J＝6.0 Hz,1H),4.98-4.96(m,1H),3.61(brs,2H),3.25(br s,2H),1.62-1.58(m,4H),1.47(br s,2H),1.29(d,J＝6.4Hz,6H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ:167.8,164.3,162.5, 150.8,149.7,140.8,132.4,127.6,127.5,123.4,116.8,115.3,69.1,48.0,42.4,26.0,25.3, 24.1,21.7.HR-MS(ESI):m/z[M+H]+C22H26N3O5S：计算值444.15877,实测值 444.15726.
实施例15
2-(4-(哌啶-1-羰基)苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸正丙酯(化合物21)
合成路线：
2-(4-(哌啶-1-羰基)苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸正丙酯(化合物21)的制备
以B-3(230mg,0.99mmol)和A-4(150mg,0.66mmol)为原料，采用实施例1 中第三步相似操作步骤，得到化合物21，白色固体126mg，收率43.05％。Mp: 154-155℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:12.63(br s,1H),10.81(br s,1H),8.00 (d,J＝8.4Hz,2H),7.73(d,J＝5.6Hz,1H),7.62(d,J＝8.4Hz,2H),7.11(d,J＝5.6 Hz,1H),4.14-4.11(m,2H),3.61(brs,2H),3.25(br s,2H),1.71-1.65(m,2H), 1.64-1.58(m,4H),1.47(br s,2H),0.95(d,J＝7.2Hz,3H).
实施例16
2-(4-(二乙胺基-1-羰基)苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸乙酯(化合物22)
合成路线：
第一步：4-(二乙胺基-1-羰基)苯甲酸甲酯20b的制备
以1b(3g，15.11mmol)为原料，采用实施例1中第一步相似操作步骤，得到中间体20b，无色透明油状物3.34g，收率93.8％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.08 (d,J＝8.8Hz,2H),7.44(d,J＝8.8Hz,2H),3.94(s,3H),3.56(br s,2H),3.22(br s, 2H),1.24(brs,3H),1.10(br s,3H).
第二步：4-(二乙胺基-1-羰基)苯甲酸B-13的制备
以20b(3.15g，13.38mmol)为原料，采用实施例1中第二步相似操作步骤，得到中间体B-13，白色固体1.66g，收率56.1％。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ: 13.13(br s,1H),8.01(d,J＝8.0Hz,2H),7.48(d,J＝8.0Hz,2H),3.47(br s,2H),3.17 (br s,2H),1.18(br s,3H),1.06(br s,3H).MS(ESI):m/z 220.10(M-H)-.
第三步：2-(4-(二乙胺基-1-羰基)苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸乙酯(化合物22) 的制备
以B-13(186mg,0.84mmol)和A-2(150mg,0.7mmol)为原料，采用实施例1 中第三步相似操作步骤，得到化合物22，白色固体30mg，收率10.3％。Mp: 178-179℃.1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ:12.65(br s,1H),10.82(br s,1H),8.00 (d,J＝7.5Hz,2H),7.74(d,J＝5.0Hz,1H),7.61(d,J＝7.5Hz,2H),7.10(d,J＝5.0 Hz,1H),4.22-4.21(m,2H),3.46(brs,2H),3.17(br s,2H),1.29(t,J＝7.0Hz,3H), 1.17(br s,3H),1.06(br s,3H).HR-MS(ESI):m/z[M+H]+C20H24N3O5S：计算值 418.14312,实测值418.14108.
实施例17
2-(4-(甲基乙基胺基-1-羰基)苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸乙酯(化合物23)
合成路线：
第一步：4-(甲基乙基胺基-1-羰基)苯甲酸甲酯21b的制备
以1b(2g，10.07mmol)为原料，采用实施例1中第一步相似操作步骤，得到中间体21b，白色固体2.05g，收率91.9％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.08(d, J＝8.8Hz,2H),7.46(d,J＝8.8Hz,2H),3.94(s,3H),3.24-2.91(m,5H),1.26-1.13(m, 3H).
第二步：4-(甲基乙基胺基-1-羰基)苯甲酸B-14的制备
以21b(2g，9.04mmol)为原料，采用实施例1中第二步相似操作步骤，得到中间体B-14，白色固体0.85g，收率45.5％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.11 (br s,1H),8.00-7.97(m,2H),7.49-7.46(m,2H),3.48-3.15(m,2H),2.96-2.84(m,3H), 1.12-1.03(m,3H).MS(ESI):m/z 206.08(M-H)-.
第三步：2-(4-(甲基乙基胺基-1-羰基)苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸乙酯(化合物 23)的制备
以B-14(250mg,1.21mmol)和A-2(200mg,0.93mmol)为原料，采用实施例1 中第三步相似操作步骤，得到化合物23，白色固体215mg，收率57.3％。Mp: 161-162℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:12.65(br s,1H),10.82(br s,1H),8.00 (d,J＝8.0Hz,2H),7.74(d,J＝6.0Hz,1H),7.63-7.61(m,2H),7.10(d,J＝6.0Hz, 1H),4.24-4.19(m,2H),3.11-3.08(m,5H),1.29(t,J＝7.6Hz,3H),1.17(t,J＝7.6Hz, 3H).HR-MS(ESI):m/z[M+H]+C19H22N3O5S：计算值404.12747,实测值404.13663.
实施例18
2-(4-(丙胺基-1-羰基)苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸乙酯(化合物24)
合成路线：
第一步：4-(丙胺基-1-羰基)苯甲酸甲酯22b的制备
以1b(2g，10.07mmol)为原料，采用实施例1中第一步相似操作步骤，得到中间体22b，白色固体2.12g，收率93.0％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.09(d, J＝8.4Hz,2H),7.83-7.81(d,J＝8.4Hz,2H),3.94(s,3H),3.46-3.41(m,2H), 1.69-1.63(m,2H),1.00(t,J＝7.6Hz,3H).
第二步：4-(丙胺基-1-羰基)苯甲酸B-15的制备
以22b(1.5g,6.78mmol)为原料，采用实施例1中第二步相似操作步骤，得到中间体B-15，白色固体1.37g，收率91.3％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ: 13.18(br s,1H),8.61(brs,1H),8.00(d,J＝8.4Hz,2H),7.92(d,J＝8.4Hz,2H), 3.25-3.20(m,2H),1.58-1.49(m,2H),0.89(t,J＝7.6Hz,3H).MS(ESI):m/z 206.08 (M-H)-.
第三步：2-(4-(丙胺基-1-羰基)苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸乙酯(化合物24)的制备
以B-15(309.8mg,1.4mmol)和A-2(200mg,0.93mmol)为原料，采用实施例1 中第三步相似操作步骤，得到化合物24，白色固体132mg，收率35.2％。Mp: 219-220℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:12.64(br s,1H),10.83(br s,1H),8.67 (br s,1H),8.06-8.00(m,4H),7.74(d,J＝6.0Hz,1H),7.10(d,J＝6.0Hz,1H), 4.25-4.19(m,2H),3.26-3.24(m,2H),1.57-1.55(m,2H),1.29(t,J＝7.2Hz,3H),0.91 (t,J＝7.2Hz,3H).HR-MS(ESI):m/z[M+H]+C19H22N3O5S：计算值404.12747,实测值404.12674.
实施例19
2-(4-(金刚烷胺基-1-羰基)苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸乙酯(化合物26)
合成路线：
第一步：4-(金刚烷胺基-1-羰基)苯甲酸甲酯23b的制备
以1b(1.5g,7.55mmol)为原料，采用实施例1中第一步相似操作步骤，得到中间体23b，白色固体2.2g，收率97.8％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.07(d,J ＝8.4Hz,2H),7.74(d,J＝8.4Hz,2H),3.94(s,3H),2.13(br s,9H),1.73(br s,6H).
第二步：4-(金刚烷胺基-1-羰基)苯甲酸B-16的制备
以23b(0.9g,2.87mmol)为原料，采用实施例1中第二步相似操作步骤，得到中间体B-16白色固体0.8g，收率93.13％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:7.96(d, J＝8.4Hz,2H),7.85(d,J＝8.4Hz,2H),7.80(br s,1H),2.07(br s,9H),1.65(br s,6H). MS(ESI):m/z 298.15(M-H)-.
第三步：2-(4-(金刚烷胺基-1-羰基)苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸乙酯(化合物 26)的制备
以B-16(417mg,1.4mmol)和A-2(200mg,0.93mmol)为原料，采用实施例1 中第三步相似操作步骤，得到化合物26，白色固体18mg，收率3.9％。Mp: 157-158℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:12.65(br s,1H),10.82(br s,1H), 8.00-7.95(m,4H),7.84(br s,1H),7.74(d,J＝6.0Hz,1H),7.10(d,J＝6.0Hz,1H), 4.25-4.19(m,2H),2.09-2.07(m,10H),1.67(brs,5H),1.29(t,J＝7.2Hz,3H).HR-MS (ESI):m/z[M+H]+C26H30N3O5S：计算值496.19007,实测值496.18808.
实施例20
2-(4-(N,N-二甲胺基-1-磺酰基)苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸甲酯(化合物27)
合成路线：
第一步：4-(二甲胺基-1-磺酰基)苯甲酸乙酯25b的制备
在Ar保护下，依次将化合物24b(0.8g,3.22mmol)、100mL二氯甲烷、Et3N (1.33mL,9.66mmol)置于250mL圆底烧瓶中，于0℃缓慢滴加2mL二甲胺的THF 溶液(20mmol-100mLTHF)的50mL DCM溶液，滴加完后将反应体系转移至室温条件下反应6h，有机相依次经1mol/L的盐酸水溶液、饱和食盐水洗，无水 Na2SO4干燥。减压浓缩，得到中间体25b，淡黄色固体0.76g，收率92.6％。1H NMR (400MHz,CDCl3)δ:8.21(d,J＝8.4Hz,2H),7.85(d,J＝8.4Hz,2H),4.46-4.40(m, 2H),2.74(br s,6H)1.42(t,J＝7.6Hz,3H).
第二步：4-(二甲胺基-1-磺酰基)苯甲酸B-17的制备
将化合物25b(0.7g,2.72mmol)溶于10mL DMF中，置于100mL圆底烧瓶中，缓慢加入5mL 2mol/L的NaOH水溶液，于80℃条件下反应4h，TLC检测反应完全，减压浓缩，残留物用2mol/L的NaOH水溶液溶解，缓慢滴加6mol/L盐酸水溶液，析出白色固体，抽滤，红外灯干燥，得到中间体B-17，白色固体0.53g，收率85.1％。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ:13.49(br s,1H),8.16(d,J＝8.0Hz, 2H),7.86(d,J＝8.0Hz,2H),2.63(br s,6H).MS(ESI):m/z 228.03(M-H)-.
第三步：2-(4-(N,N-二甲胺基-1-磺酰基)苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸甲酯(化合物27)的制备
以B-17(275mg,1.2mmol)和A-1(200mg,1.0mmol)为原料，采用实施例1中第三步相似操作步骤，得到化合物27，淡黄色固体20mg，收率4.9％。Mp: 176-177℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:12.66(br s,1H),10.88(br s,1H),8.17 (d,J＝8.4Hz,2H),8.01(d,J＝8.4Hz,2H)7.74(d,J＝6.0Hz,1H),7.14(d,J＝6.0 Hz,1H),3.76(s,3H),2.67(br s,6H).HR-MS(ESI):m/z[M+H]+C16H18N3O6S2：计算值412.06315,实测值412.06296.
实施例21
2-(4-(吗啉-1-磺酰基)苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸甲酯(化合物28)
合成路线：
第一步：4-(吗啉-1-磺酰基)苯甲酸甲酯27b的制备
在Ar保护下，依次将化合物26b(0.7g,2.98mmol)、100mL二氯甲烷、吗啉 (0.31mL,3.58mmol)、Et3N(1.24mL,8.94mmol)置于250mL圆底烧瓶中，室温下反应过夜，次日TLC检测反应完全。有机相依次经1mol/L的盐酸水溶液、饱和食盐水洗，无水Na2SO4干燥。减压浓缩，得到中间体27b，白色固体0.78g，收率91.2％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.27(d,J＝8.4Hz,2H),7.88(d,J＝8.4Hz, 2H),4.03(s,3H),3.81-3.79(m,4H),3.09-3.07(m,4H).
第二步：4-(吗啉-1-磺酰基)苯甲酸B-18的制备
以27b(0.7g,2.45mmol)为原料，采用实施例20中第二步相似操作步骤，得到中间体B-18，白色固体0.62g，收率93.2％。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ:13.53 (br s,1H),8.17(d,J＝7.5Hz,2H),7.86(d,J＝7.5Hz,2H),3.63(br s,4H),2.90(br s, 4H).MS(ESI):m/z270.04(M-H)-.
第三步：2-(4-(吗啉-1-磺酰基)苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸甲酯(化合物28)的制备
以B-18(407mg,1.5mmol)和A-1(300mg,1.5mmol)为原料，采用实施例1中第三步相似操作步骤，得到化合物28，白色固体120mg，收率17.6％。Mp: 205-207℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:12.66(br s,1H),10.88(br s,1H),8.19 (d,J＝8.4Hz,2H),8.00(d,J＝8.4Hz,2H),7.74(d,J＝6.0Hz,1H),7.14(d,J＝6.0 Hz,1H),3.76(s,3H),3.65-3.63(m,4H),2.95-2.93(m,4H).HR-MS(ESI):m/z [M+H]+C18H20N3O7S2：计算值454.07372,实测值454.07516.
实施例22
2-(4-(4-甲基哌啶-1-磺酰基)苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸甲酯(化合物29)
合成路线：
第一步：4-(4-甲基哌啶-1-磺酰基)苯甲酸乙酯28b的制备
以24b(0.7g,2.8mmol)为原料，采用实施例20中第一步相似操作步骤，得到中间体28b，白色固体0.77g，收率88.5％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.19(d, J＝8.4Hz,2H),7.82(d,J＝8.4Hz,2H),4.45-4.40(m,2H),3.79-3.76(m,2H), 2.29-2.23(m,2H),1.69-1.66(m,2H),1.42(t,J＝7.6Hz,3H),1.32-1.26(m,3H),0.9(d, J＝5.6Hz,3H).
第二步：4-(4-甲基哌啶-1-磺酰基)苯甲酸B-19的制备
以28b(0.72g,2.3mmol)为原料，采用实施例20中第二步相似操作步骤，得到中间体B-19，白色固体0.56g，收率83.6％。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ:8.15 (d,J＝7.5Hz,2H),7.84(d,J＝7.5Hz,2H),3.63-3.61(m,2H),2.26-2.21(m,2H), 1.65-1.63(m,2H),1.30(brs,1H),1.15-1.11(m,2H),0.83(d,J＝6.5Hz,3H).MS (ESI):m/z 282.08(M-H)-.
第三步：2-(4-(4-甲基哌啶-1-磺酰基)苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸甲酯(化合物 29)的制备
以B-19(336.4mg,1.2mmol)和A-1(200mg,1.0mmol)为原料，采用实施例1 中第三步相似操作步骤，得到化合物29，淡黄色固体90mg，收率19.4％。Mp: 140-141℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:12.65(br s,1H),10.88(br s,1H),8.16 (d,J＝8.4Hz,2H),7.98(d,J＝8.4Hz,2H)7.74(d,J＝5.6Hz,1H),7.14(d,J＝5.6 Hz,1H),3.76(s,3H),3.66-3.62(m,2H),2.29-2.26(m,2H),1.67-1.64(m,2H), 1.17-1.12(m,3H),0.85(d,J＝5.6Hz,3H).HR-MS(ESI):m/z[M+H]+C20H24N3O6S2：计算值466.11010,实测值466.10715.
实施例23
2-(4-(4-甲氧基哌啶-1-磺酰基)苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸甲酯(化合物30)
合成路线：
第一步：4-(4-甲氧基哌啶-1-磺酰胺)苯甲酸乙酯29b的制备
以24b(2g,8.042mmol)为原料，采用实施例20中第一步相似操作步骤，得到中间体29b，白色固体2.54g，收率96.6％。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:8.19(d, J＝8.5Hz,2H),7.82(d,J＝8.5Hz,2H),4.45-4.40(m,2H),3.29(br s,1H),3.15-3.11 (m,2H),3.06-3.05(m,2H),1.89-1.85(m,2H),1.75-1.72(m,2H),1.42(t,J＝7.0Hz, 3H).
第二步：4-(4-甲氧基哌啶-1-磺酰基)苯甲酸B-20的制备
将29b(2.3g,7.03mmol)溶于100mL甲醇中，加入50mL 2mol/L的NaOH水溶液，室温反应过夜，次日TLC检测反应完全，旋干甲醇，冰浴下缓慢滴加6mol/L 的盐酸水溶液至PH＝2，抽滤，红外灯干燥，得到中间体B-20，白色固体1.9g，收率92.2％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:8.16(d,J＝8.4Hz,2H),7.85(d,J＝ 8.4Hz,2H),3.24-3.20(m,1H),3.19(s,3H),3.09-3.05(m,2H),2.86-2.8(m,2H), 1.84-1.77(m,2H),1.55-1.47(m,2H).MS(ESI):m/z298.08(M-H)-.
第三步：2-(4-(4-甲氧基哌啶-1-磺酰基)苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸甲酯(化合物30)的制备
以B-20(225mg,0.75mmol)和A-1(100mg,0.5mmol)为原料，采用实施例1 中第三步相似操作步骤，得到化合物30，淡黄色固体54mg，收率22.5％。Mp: 184-185℃.1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ:12.65(br s,1H),10.88(br s,1H),8.16 (d,J＝7.5Hz,2H),7.99(d,J＝7.5Hz,2H)7.73(d,J＝5.5Hz,1H),7.14(d,J＝5.5 Hz,1H),3.76(s,3H),3.25(br s,1H),3.14(br s,5H),2.89-2.87(m,2H),1.82(br s,2H), 1.54(br s,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ:164.0,162.0,151.8,148.8,139.3, 135.9,128.5,128.4,123.4,117.2,115.6,73.3,55.1,52.5,43.2,29.4.HR-MS(ESI):m/z [M+H]+C20H24N3O7S2：计算值482.10502,实测值482.10416.
实施例24
2-(4-(哌啶-1-磺酰基)苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸乙酯(化合物31)
合成路线：
第一步：4-(哌啶-1-磺酰基)苯甲酸甲酯30b的制备
以26b(4g,16.085mmol)为原料，采用实施例20中第一步相似操作步骤，得到中间体30b，白色固体4.3g，收率89.0％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.19(d, J＝8.4Hz,2H),7.83(d,J＝8.4Hz,2H),3.97(s,3H),3.03-3.00(m,4H),1.67-1.62(m, 4H),1.46-1.41(m,2H).
第二步：4-(哌啶-1-磺酰基)苯甲酸B-21的制备
以30b(4g,14.12mmol)为原料，采用实施例20中第二步相似操作步骤，得到中间体B-21，白色固体3.3g，收率86.8％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.49 (s,1H),8.15(d,J＝8.4Hz,2H),7.84(d,J＝8.4Hz,2H),2.93-2.90(m,4H),1.55-1.50 (m,4H),1.37-1.36(m,2H).MS(ESI):m/z 268.07(M-H)-.
第三步：2-(4-(哌啶-1-磺酰基)苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸乙酯(化合物31)的制备
以B-21(203mg,0.75mmol)和A-1(100mg,0.47mmol)为原料，采用实施例1 中第三步相似操作步骤，得到化合物31，白色固体90mg，收率41.3％。Mp: 179-180℃.1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ:12.69(br s,1H),10.87(br s,1H),8.19 (d,J＝8.0Hz,2H),8.01(d,J＝8.0Hz,2H),7.77(d,J＝6.5Hz,1H),7.16(d,J＝6.5 Hz,1H),4.27-4.23(m,2H),2.98(brs,4H),1.58(br s,4H),1.40(br s,2H),1.31(t,J＝ 7.0Hz,3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ:164.1,162.1,151.2,148.8,139.4, 135.8,128.4,128.3,123.5,117.2,115.7,61.4,46.6,24.8,22.8,14.3.HR-MS(ESI):m/z [M+H]+C20H24N3O6S2：计算值466.11010,实测值466.10873.
实施例25
2-(4-(哌啶-1-磺酰基)苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸异丙酯(化合物32)
合成路线：
2-(4-(哌啶-1-磺酰基)苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸异丙酯(化合物32)的制备
以B-21(153mg,0.57mmol)和A-3(100mg,0.438mmol)为原料，采用实施例1 中第三步相似操作步骤，得到化合物32，白色固体77mg，收率36.7％。Mp: 180-181℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:12.63(br s,1H),10.75(br s,1H),8.12 (d,J＝8.0Hz,2H),7.94(d,J＝8.0Hz,2H),7.70(d,J＝6.0Hz,1H),7.09(d,J＝6.0 Hz,1H),4.96-4.90(m,1H),2.92-2.90(m,4H),1.51(br s,4H),1.33(br s,2H),1.26(d, J＝6.0Hz,6H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ:164.2,162.1,150.7,148.7,139.4, 135.8,128.4,128.3,123.5,117.1,115.7,69.1,46.6,24.8,22.8,21.7.HR-MS(ESI):m/z [M+H]+C21H26N3O6S2：计算值480.12575,实测值480.12512.
实施例26
2-(4-(吗啉-1-磺酰基)苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸异丙酯(化合物33)
合成路线：
2-(4-(哌啶-1-磺酰基)苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸异丙酯(化合物33)的制备
以B-18(155mg,0.57mmol)和A-3(100mg,0.438mmol)为原料，采用实施例1 中第三步相似操作步骤，得到化合物33，白色固体80mg，收率38.1％。Mp: 210-211℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:12.65(br s,1H),10.75(br s,1H),8.14 (d,J＝8.4Hz,2H),7.96(d,J＝8.4Hz,2H),7.70(d,J＝5.6Hz,1H),7.09(d,J＝5.6 Hz,1H),4.95-4.92(m,1H),3.61-3.59(m,4H),2.91-2.89(m,4H),1.26(d,J＝6.4Hz, 6H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ:164.2,162.0,150.8,148.7,138.3,136.2,128.6, 128.5,123.5,117.2,115.8,69.2,65.4,46.0,21.8.HR-MS(ESI):m/z[M+H]+ C20H24N3O7S2：计算值482.10502,实测值482.10300.
实施例27
2-(4-(哌啶-1-磺酰基)苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸丙酯(化合物34)
合成路线：
2-(4-(哌啶-1-磺酰基)苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸丙酯(化合物34)的制备
以B-21(153mg,0.57mmol)和A-4(100mg,0.438mmol)为原料，采用实施例1 中第三步相似操作步骤，得到化合物34，白色固体50mg，收率23.8％。Mp: 189-190℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:12.65(br s,1H),10.83(br s,1H),8.16 (d,J＝8.4Hz,2H),7.98(d,J＝8.4Hz,2H),7.74(d,J＝6.0Hz,1H),7.13(d,J＝6.0 Hz,1H),4.13(t,J＝6.8Hz,2H),2.96-2.94(m,4H),1.69-1.67(m,2H),1.55-1.52(m, 4H),1.38-1.37(m,2H),0.95(t,J＝7.2Hz,3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ: 164.1,162.1,151.3,148.7,139.4,135.8,128.4,128.3,123.5,117.2,115.7,66.8,46.7, 24.8,22.8,21.8,10.3.HR-MS(ESI):m/z[M+H]+C21H26N3O6S2：计算值480.12575, 实测值480.12524.
实施例28
2-(4-(吗啉-1-磺酰基)苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸丙酯(化合物35)
合成路线：
2-(4-(吗啉-1-磺酰基)苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸丙酯(化合物35)的制备
以B-18(155mg,0.57mmol)和A-4(100mg,0.438mmol)为原料，采用实施例1 中第三步相似操作步骤，得到化合物35，白色固体126mg，收率60.0％。Mp: 219-220℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:12.67(br s,1H),10.84(br s,1H),8.19 (d,J＝8.4Hz,2H),7.99(d,J＝8.4Hz,2H),7.75(d,J＝6.0Hz,1H),7.14(d,J＝6.0 Hz,1H),4.13(t,J＝6.8Hz,2H),3.65-3.63(m,4H),2.95-2.93(m,4H),1.69-1.65(m, 2H),0.95(t,J＝7.2Hz,3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ:164.1,162.1,151.4, 148.7,138.3,136.2,128.6,128.5,123.5,117.2,115.8,66.8,65.4,46.0,21.7,10.3. HR-MS(ESI):m/z[M+H]+C20H24N3O7S2：计算值482.10502,实测值482.10284.
实施例29
2-(4-(环己胺基-1-磺酰基)苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸甲酯(化合物36)
合成路线：
第一步：4-(环己胺基-1-磺酰基)苯甲酸乙酯31b的制备
以24b(0.7g,2.8mmol)为原料，采用实施例20中第一步相似操作步骤，得到中间体31b，白色固体0.76g，收率87.3％。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:8.17(d, J＝8.0Hz,2H),7.96(d,J＝8.0Hz,2H),4.78(br s,1H),4.44-4.40(m,2H),3.17(br s, 1H),1.75-1.73(m,2H),1.64-1.62(m,2H),1.53-1.50(m,1H),1.44-1.41(m,3H), 1.24-1.09(m,5H).
第二步：4-(环己胺基-1-磺酰基)苯甲酸B-22的制备
以31b(0.7g,2.24mmol)为原料，采用实施例20中第二步相似操作步骤，得到中间体B-22，白色固体0.52g，收率81.8％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.40 (br s,1H),8.10(d,J＝8.0Hz,2H),7.92(d,J＝8.0Hz,2H),7.82(br s,1H),2.97-2.96 (m,1H),1.56-1.54(m,4H),1.45-1.42(m,1H),1.17-1.00(m,5H).MS(ESI):m/z 282.08(M-H)-.
第三步：2-(4-(环己胺基-1-磺酰基)苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸甲酯(化合物 36)的制备
以B-22(150mg,0.53mmol)和A-1(70.7mg,0.353mmol)为原料，采用实施例1 中第三步相似操作步骤，得到化合物36，白色固体25mg，收率15.2％。Mp: 151-152℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:12.62(br s,1H),10.87(br s,1H),8.12 (d,J＝8.4Hz,2H),8.05(d,J＝8.4Hz,2H),7.72(d,J＝6.0Hz,1H),7.12(d,J＝6.0 Hz,1H),3.76(s,3H),3.00(br s,1H),1.59-1.57(m,4H),1.45-1.43(m,1H),1.23(br s, 1H),1.16-1.11(m,4H).HR-MS(ESI):m/z[M+H]+C20H24N3O6S2：计算值466.11010, 实测值466.10944.
实施例30
2-(4-(金刚烷胺基-1-磺酰基)苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸甲酯(化合物37)
合成路线：
第一步：4-(金刚烷基-1-磺酰基)苯甲酸甲酯32b的制备
以26b(0.7g,3.0mmol)为原料，采用实施例20中第一步相似操作步骤，得到中间体32b，白色固体0.78g，收率74.3％。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:8.15(d, J＝8.0Hz,2H),7.98(d,J＝8.0Hz,2H),4.71(br s,1H),3.96(s,3H),2.01(br s,3H), 1.78(br s,6H),1.61-1.54(m,6H).
第二步：4-(金刚烷基-1-磺酰基)苯甲酸B-23的制备
以32b(0.75g,2.14mmol)为原料，采用实施例20中第二步相似操作步骤，得到中间体B-23，白色固体0.715g，收率99.4％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ: 8.09(d,J＝8.8Hz,2H),7.94(d,J＝8.8Hz,2H),7.73(br s,1H),1.69-1.67(m,15H). MS(ESI):m/z 334.11(M-H)-.
第三步：2-(4-(金刚烷基-1-磺酰基)苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸甲酯(化合物 37)的制备
以B-23(90mg,0.27mmol)和A-1(45mg,0.22mmol)为原料，采用实施例1中第三步相似操作步骤，得到化合物37，白色固体8mg，收率7.0％。Mp:183-184℃. 1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:12.62(br s,1H),10.87(br s,1H),8.12-8.06(m,4H), 7.81(br s,1H),7.72(d,J＝6.0Hz,1H),7.13(d,J＝6.0Hz,1H),3.76(s,3H),1.93(br s,3H),1.72(br s,6H),1.55-1.46(m,6H).HR-MS(ESI):m/z[M+H]+C24H28N3O6S2：计算值518.14140,实测值518.13922.
实施例31
2-(4-(吖丁啶-1-磺酰基)苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸甲酯(化合物38)
合成路线：
第一步：4-(吖丁啶-1-磺酰基)苯甲酸乙酯33b的制备
以24b(1.5g,6.03mmol)为原料，采用实施例20中第一步相似操作步骤，得到中间体33b，白色固体1.6g，收率98.6％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.24(d, J＝8.4Hz,2H),7.91(d,J＝8.4Hz,2H),4.47-4.41(m,2H),3.83-3.80(m,4H), 2.13-2.06(m,2H),1.43(t,J＝7.2Hz,3H).
第二步：4-(吖丁啶-1-磺酰基)苯甲酸B-24的制备
将33b(1.5g,5.56mmol)溶于100mL甲醇中，加入LiOH(1.06g,22.28mmol) 的50mL水溶液，室温反应2h，TLC检测反应完全，旋干甲醇，于0℃下缓慢滴加6mol/L盐酸水溶液，析出白色固体，抽滤，红外灯干燥，得到中间体B-24，白色固体1.3g，收率97.0％。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ:13.54(br s,1H),8.21 (d,J＝8.0Hz,2H),7.92(d,J＝8.0Hz,2H),3.71-3.68(m,4H),2.01-1.98(m,2H).MS (ESI):m/z 240.03(M-H)-.
第三步：2-(4-(吖丁啶-1-磺酰基)苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸甲酯(化合物38) 的制备
以B-24(362mg,1.5mmol)和A-1(200mg,1.0mmol)为原料，采用实施例1中第三步相似操作步骤，得到化合物38，白色固体190mg，收率44.9％。Mp: 190-191℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:12.68(br s,1H),10.88(br s,1H),8.22 (d,J＝8.4Hz,2H),8.06(d,J＝8.4Hz,2H)7.74(d,J＝6.0Hz,1H),7.14(d,J＝6.0 Hz,1H),3.76(s,3H),3.74-3.72(m,4H),2.05-1.98(m,2H).13C NMR(100MHz, DMSO-d6)δ:164.0,162.1,151.8,148.8,137.4,136.1,129.1,128.5,123.3,117.3,115.7, 52.5,51.1,14.9.HR-MS(ESI):m/z[M+H]+C17H18N3O6S2：计算值424.06315,实测值 424.06076.
实施例32
2-(4-(吖丁啶-1-磺酰基)苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸乙酯(化合物39)
合成路线：
2-(4-(吖丁啶-1-磺酰基)苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸乙酯(化合物39)的制备
以B-24(338mg,1.4mmol)和A-2(200mg,0.93mmol)为原料，采用实施例1 中第三步相似操作步骤，得到化合物39，白色固体130mg，收率32.0％。Mp: 189-190℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:12.69(br s,1H),10.85(br s,1H),8.22 (d,J＝8.4Hz,2H),8.06(d,J＝8.4Hz,2H),7.75(d,J＝6.0Hz,1H),7.14(d,J＝6.0 Hz,1H),4.25-4.19(m,2H),3.76-3.72(m,4H),2.05-1.98(m,2H),1.29(t,J＝7.2Hz, 3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ:164.1,162.0,151.2,148.8,137.4,136.1,129.1, 128.5,123.5,117.2,115.7,61.4,51.1,14.9,14.3.HR-MS(ESI):m/z[M+H]+ C18H20N3O6S2：计算值438.07880,实测值438.07724.
实施例33
2-(4-(四氢吡咯-1-磺酰基)苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸乙酯(化合物40)
合成路线：
第一步：4-(四氢吡咯-1-磺酰基)苯甲酸乙酯34b的制备
以24b(1.5g,6.03mmol)为原料，采用实施例20中第一步相似操作步骤，得到中间体34b，白色固体1.7g，收率99.4％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.19(d, J＝8.4Hz,2H),7.90(d,J＝8.4Hz,2H),4.45-4.40(m,2H),3.28-3.25(m,4H), 1.79-1.75(m,4H),1.42(t,J＝7.2Hz,3H).
第二步：4-(四氢吡咯-1-磺酰基)苯甲酸B-25的制备
以34b(1.7g,6.0mmol)为原料，采用实施例31中第二步相似操作步骤，得到中间体B-25，白色固体1.42g，收率94.7％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:8.11 (d,J＝8.4Hz,2H),7.88(d,J＝8.4Hz,2H),3.14-3.10(m,4H),1.62-1.59(m,4H).MS (ESI):m/z 254.05(M-H)-.
第三步：2-(4-(四氢吡咯-1-磺酰基)苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸乙酯(化合物 40)的制备
以B-25(357mg,1.4mmol)和A-2(200mg,0.94mmol)为原料，采用实施例1 中第三步相似操作步骤，得到化合物40，白色固体90mg，收率21.47％。Mp: 179-180℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:12.67(br s,1H),10.84(br s,1H),8.16 (d,J＝8.4Hz,2H),8.06(d,J＝8.4Hz,2H),7.74(d,J＝6.0Hz,1H),7.12(d,J＝6.0 Hz,1H),4.25-4.19(m,2H),3.22-3.18(m,4H),1.69-1.65(m,4H),1.29(t,J＝7.2Hz, 3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ:164.1,162.1,151.2,148.8,140.0,135.7,128.4, 128.2,123.5,117.2,115.7,61.4,48.0,24.9,14.3.HR-MS(ESI):m/z[M+H]+ C19H22N3O6S2：计算值452.09445,实测值452.09357.
实施例34
2-(4-(吖庚因-1-磺酰基)苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸甲酯(化合物41)
合成路线：
第一步：4-(吖庚因-1-磺酰基)苯甲酸乙酯35b的制备
以24b(1.5g,6.03mmol)为原料，采用实施例20中第一步相似操作步骤，得到中间体35b，白色固体1.72g，收率92.0％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.17(d, J＝8.4Hz,2H),7.86(d,J＝8.4Hz,2H),4.44-4.39(m,2H),3.30-3.27(m,4H), 1.73-1.71(m,4H),1.60-1.57(m,4H),1.42(t,J＝7.2Hz,3H).
第二步：4-(吖庚因-1-磺酰基)苯甲酸B-26的制备
以35b(1.7g,5.46mmol)为原料，采用实施例31中第二步相似操作步骤，得到中间体B-26，白色固体1.47g，收率95.5％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ: 13.47(br s,1H),8.12(d,J＝8.4Hz,2H),7.89(d,J＝8.4Hz,2H),3.24-3.21(m,4H), 1.63-1.61(m,4H),1.50-1.47(m,4H).MS(ESI):m/z 282.08(M-H)-.
第三步：2-(4-(吖庚因-1-磺酰基)苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸甲酯(化合物41) 的制备
以B-26(415mg,1.5mmol)和A-1(200mg,1.0mmol)为原料，采用实施例1中第三步相似操作步骤，得到化合物41，白色固体30mg，收率6.4％。Mp:173-174℃. 1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:12.64(br s,1H),10.87(br s,1H),8.13(d,J＝8.4Hz, 2H),8.04(d,J＝8.4Hz,2H),7.74(d,J＝5.6Hz,1H),7.13(d,J＝5.6Hz,1H),3.76(s, 3H),3.27-3.24(m,4H),1.64(br s,4H),1.52-1.50(m,4H).HR-MS(ESI):m/z[M+H]+ C20H24N3O6S2：计算值466.11010,实测值466.11035.
实施例35
2-(4-(吖庚因-1-磺酰基)苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸乙酯(化合物42)
合成路线：
2-(4-(吖庚因-1-磺酰基)苯甲酰胺基)噻吩-3-羰基氨基甲酸乙酯(化合物42)的制备
以B-26(396mg,1.4mmol)和A-2(200mg,0.93mmol)为原料，采用实施例1 中第三步相似操作步骤，得到化合物42，白色固体120mg，收率26.9％。Mp: 182-183℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:12.66(br s,1H),10.84(br s,1H),8.13 (d,J＝8.4Hz,2H),8.03(d,J＝8.4Hz,2H),7.74(d,J＝5.6Hz,1H),7.12(d,J＝5.6 Hz,1H),4.24-4.19(m,2H),3.27-3.24(m,4H),1.64(br s,4H),1.52-1.50(m,4H),1.29 (t,J＝7.2Hz,3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ:164.1,162.0,151.2,148.8, 142.7,135.4,128.4,127.6,123.4,117.1,115.6,61.4,47.9,28.6,26.4,14.3.HR-MS (ESI):m/z[M+H]+C21H26N3O6S2：计算值480.12575,实测值480.12607.
生物活性测试
1、体外抗结核活性测试
测定方法：Microplate Alamar Blue Assay(MABA)法测定体外抗结核活性。
实验原理：Alamar Blue加入培养基可作为氧化还原指示剂，颜色由蓝色向红色转变，反映所研究的微生物对氧分子的消耗。Alamar Blue的颜色改变可用光度计测定，其发射波长为590nm。
实验方法：无菌96孔板(Falcon3072；Becton Dickinson,Lincoln Park,N.J.)，实验化合物以DMSO溶解，制成浓度为5mg/mL的初溶液，最高浓度孔加入199μL 7H9 培养基，1μL化合物初溶液，混合均匀后，向其余各孔依次2倍稀释，化合物终浓度为：25、12.5、6.25、3.125、1.56、0.78、0.39、0.2、0.1、0.05、0.025μg/mL。最低化合物浓度为0.016μg/mL。选取结核分枝杆菌H37Rv(或临床分离耐药菌株) 培养2～3周的培养物制成菌悬液，接种到含0.05％吐温80、10％ADC的7H9培养基中，37℃静止培养1～2周，生长至浊度为McFarland 1(相当于107CFU/mL) 时，1：20稀释后，加入各孔100μL，菌液的终浓度为106CFU/mL。每板上均设 2个不含抗菌药的生长对照孔，96孔板于37℃孵育。7天后加入生长对照孔20μL 10×Alamar Blue和5％Tween80 50μL的混合液，37℃孵育24小时，如果颜色从蓝色变为粉色，则在各实验药物的孔内加入上述量的Alamar Blue和Tween 80混合液，37℃孵育24小时记录各孔的颜色，并应用酶标仪测定590nm荧光值，计算MIC90。
表1、本发明式(II)所示化合物的体外抗结核分枝杆菌活性
表2、本发明式(III)所示化合物的体外抗结核分枝杆菌活性
由表1及表2数据可知，本发明中的化合物具有良好的体外抗结核分枝杆菌活性。
2、细胞毒性测试
测定方法：MTT法
实验原理：细胞活性通过线粒体内脱氢酶(如琥珀酸脱氢酶)将氧化态的3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(商品名：噻唑蓝)/MTT [3-(4,5-dimethylthiazo-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide]还原为难溶的蓝色甲臜(formazan)化合物，经DMSO溶解后显色来测定，转化量与活细胞数量呈正性相关。
实验方法：1.细胞悬液的制备。将已培养至对数生长期的Vero/HepG2细胞用0.25％胰酶消化2～3min，吸弃消化液，加入适量培养液，混匀后取20μL用血球计数仪在显微镜下计数，配制成合适浓度的细胞悬液，备用。同时用PBS(phosphate bufferedsolution)配制5g/L的MTT溶液，过滤除菌，备用。2.药物配制与细胞毒性检测。将受试药物溶于DMSO中，以培养基稀释50倍，制成受试的最高浓度，然后用培养基在96孔板上按1∶3进行系列稀释，每个化合物设6个浓度，最高浓度64μg/mL，每个浓度设6个平行孔，50μL/孔。将制备好的细胞悬液接种于 96孔板内，50μL/孔，细胞浓度4×105个/mL。同时设不含药的细胞对照孔及培养基空白对照孔。培养48小时后，加入MTT 10μL/孔，继续培养4小时。取出培养板，小心弃去孔内培养基，每孔加DMSO100μL，振荡至甲臜颗粒完全溶解后，用酶联免疫检测仪在570nm波长处测定其光密度值(OD570)。3.数据处理。细胞抑制百分率(％)＝[(细胞对照OD570值－加药组OD570值)/(细胞对照OD570值－空白OD570值)]×100％。用Origin7.0软件进行剂量－反应关系曲线拟合，计算化合物对细胞抑制率50％时的浓度(IC50)。
表3、本发明部分化合物对Vero细胞的毒性考察
由表3数据可知，本发明化合物的细胞毒性低，表现出了较阳性对照化合物 TCA1，297F以及化合物IV具有更高的安全性。
3、体内抗结核活性测试
Balb/c小鼠以气溶胶方式感染结核分枝杆菌H37Rv，于感染10天后给予药物治疗(100mg/kg)，每天给药一次，每周给药5次，给药三周后，解剖，以肺部的 CFU值为主要评价指标，以临床一线用药INH和化合物297F作为阳性对照药，考察目标化合物的体内抗结核活性。
实验步骤根据文献(Antimicrobial agents and chemotherapy 2011,55(11),5185-5193.)进行。
表4、本发明部分化合物的体内抗结核活性
由表4数据可知，本发明化合物18显示出较强的体内抗结核活性，与空白对照组(CMC组)相比，可以降低2.02个Log10CFU，强于已知化合物297F(降低1.56个Log10CFU)。
4、hERG钾离子通道安全性研究
测定方法：手动膜片钳技术
实验原理：手动膜片钳技术对测试化合物作用于快速延迟整流钾离子通道(hERG)的潜在抑制效应进行了实验评估。尾电流的峰值为hERG电流的大小。5个不同梯度浓度的工作溶液被用于测定化合物对hERG钾离子通道的潜在抑制作用并用以拟合量效曲线和计算IC50。
实验方法：参照文献(Science 1995,269,92-95.)进行。
表5、本发明部分化合物对hERG钾离子通道的抑制作用
由表5数据可知，本发明化合物对hERG钾离子通道抑制作用低，引起QT间期延长的风险较小，表现出了较化合物297F具有更高的安全性。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。
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