阅读说明：本技术 一种油脂组合物 (Grease composition ) 是由 王兴国 王艳丹 王小三 金青哲 张晖 韦伟 于 2019-10-31 设计创作，主要内容包括：本发明提供了一种缓解、预防肝癌的油脂组合物,属于油脂技术领域。一种油脂组合物包括结合态或游离态的棕榈酸和中支链脂肪酸；油脂组合物脂肪酸组成上,支链脂肪酸占总脂肪酸质量的0.05％～6％,优选地,所述油脂组合物中支链脂肪酸占总脂肪酸质量的0.1％～5％。通过不同油脂之间的协同配合,使得油脂组合物中的营养更加均衡；组合物中具有多种抗氧化活性物质,这些组分按照一定的浓度组合在一起,进一步明显提高了该组合物的稳定性,使得油脂组合物中的活性成分能最大程度发挥作用；各类物质的特殊配比使得该油脂组合物易被人体消化吸收,可以通过抑制肝脏肿瘤细胞膜的流动性,从而抑制细胞迁移,对肝癌症患者有显著的缓解、治疗和/或预防功效。(The invention provides a grease composition for relieving and preventing liver cancer, and belongs to the technical field of grease. A fat composition comprises combined or free palmitic acid and medium-chain fatty acid; the fatty acid composition of the oil and fat composition comprises 0.05-6% of branched fatty acid by mass of the total fatty acid, and preferably, the branched fatty acid in the oil and fat composition comprises 0.1-5% of the total fatty acid by mass. Through the synergistic cooperation of different oils, the nutrition in the oil composition is more balanced; the composition contains a plurality of antioxidant active substances, and the components are combined together according to a certain concentration, so that the stability of the composition is further obviously improved, and the active ingredients in the grease composition can play a role to the maximum extent; the special proportion of various substances ensures that the grease composition is easy to digest and absorb by human bodies, can inhibit cell migration by inhibiting the fluidity of liver tumor cell membranes, and has obvious relieving, treating and/or preventing effects on liver cancer patients.)

一种油脂组合物

技术领域

本发明提供了一种缓解、预防肝癌的油脂组合物，属于油脂技术领域。

背景技术

恶性肿瘤是一种消耗性疾病,患者常因机体组织储存的脂肪丢失及蛋白质过度分解而引起营养不良。肝细胞癌(HCC)是全球最常见的恶性肿瘤之一，为全球第5位常见肿瘤，占肿瘤死亡第3位。在我国位居发病率及死亡率前5位。相较于非消化系统肿瘤，以肝癌为主的消化系统肿瘤对机体的影响更大，营养不良和癌性恶液质的发生率也更高。经调查，肝癌患者营养不良发生率可高达70％以上。其中5％～25％患者死于营养不良。肝癌患者常出现脂质代谢异常、消化吸收障碍、厌食以及严重的脏器功能受损等，最终造成患者死亡。

脂类作为人体三大营养素之一，具有重要的生物学作用，对人体的营养均衡能够起到重要作用。且其包含的多种生理活性物质如多不饱和脂肪酸、结构脂肪及各种类脂在恶性肿瘤病人的预防和治疗中也起着一定的作用。目前，虽然功能性脂质在肿瘤临床中的应用比较成熟，但将BCFAs与其他功能性脂质结合起来，形成协同作用，增强作用效果的产品比较缺乏，且市面上的脂肪乳或油脂相关产品，热稳定性和氧化稳定性较差。有待进一步解开发新产品。

发明内容

为了解决上述的问题，本发明提供了一种油脂组合物，所述油脂组合物包括结合态或游离态的棕榈酸和中支链脂肪酸；油脂组合物脂肪酸组成上，支链脂肪酸占总脂肪酸的 0.05％～6％，优选地，所述油脂组合物中支链脂肪酸占总脂肪酸的0.1％～5％。

优选地，所述油脂组合物脂肪酸组成上，棕榈酸占总脂肪酸质量的15％～30％。

优选地，所述油脂组合物中的物质的来源包括植物油脂、动物油脂或结构脂中的一种或多种。

优选地，所述植物油脂包括大豆油、和/或棕榈油中的一种或多种；动物油脂包括猪油、鱼油中的一种或多种；结构脂包括1，3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯OPO、中链甘油三酯MCT 和/或支链脂肪酸甘油单脂中的一种或多种。

所述中链甘油三酯MCT是指饱和辛酸甘油三酯或饱和癸酸甘油三酯或饱和辛酸-癸酸混合的甘油三酯；是指甘油、辛酸或者癸酸甲酯化产物通过水解酯化法、酰氯醇解法或酶法制备所得的一类物质。

优选地，所述支链脂肪酸包括iso-15:0，anteiso-15:0，iso-16:0，iso-17:0或anteiso-17:0 中一种或多种。

优选地，所述支链脂肪酸包括iso-15:0和anteiso-17:0，质量比例为(1～3)：(2～5)。

优选地，所述油脂组合物中支链脂肪酸为iso-15:0、iso-16:0和iso-17:0，质量比例为 (1～2)：(1～2)：(2～4)。

优选地，所述组合物中植物油脂：动物油脂：结构脂质量比为(20～60)：(5～25)：(20～50)。

优选地，所述结构脂质量占比为20％～50％，优选为30％～40％；

优选地，所述植物油脂包括大豆油、棕榈油；动物油脂包括猪油；人造结构脂包括OPO、 MCT。

优选地，所述油脂组合物的存在形式包括滴剂、固体粉末、胶囊；

本发明的另一个目的在于，提供一种油脂组合的用途，所述油脂组合物作为食品添加剂，可用于健康人群和/或肝癌病人。

优选地，所述油脂组合物与营养物质复配作为配方食品使用，所述营养物质包括碳水化物、蛋白质或其他类型油脂中的一种或多种。

优选地，所述油脂组合物在配方食品中的质量浓度为2～10％。

有益效果

本发明油脂组合物适用于健康人群和/或肝肿瘤患者。该油脂组合物通过不同组分之间的协同配合，有利于混合体系混合均匀，从而使得油脂组合物中的营养更加均衡；组合物中具有多种抗氧化活性物质，这些组分按照一定的浓度组合在一起，明显提高了该组合物的稳定性，使得油脂组合物中的活性成分能最大程度发挥作用。

此外，各类物质的特殊配比使得该油脂组合物易被人体消化吸收，可快速供能，尤其是对存在轻微消化道功能障碍的癌症患者，有利于维持、保障肿瘤疾病状态人群生理功能、身体康复；同时，组合物因为特殊的配方和组成，使得活性成分均被最大程度的保护，能够在体内发挥作用，可以通过抑制肝脏肿瘤细胞膜的流动性，从而抑制细胞迁移，对肝癌症患者有显著的缓解、治疗和/或预防功效。可用于肿瘤患者的全程治疗。

附图说明

图1不同油脂组合物过氧化值随时间变化折线图

图2不同油脂组合物茴香胺值值随时间变化折线图

图3划痕实验检测对照组和实验组的迁移能力

图4油脂组合物对细胞迁移能力的影响

具体实施方式

本组合物中的支链脂肪酸甘油单酯采用两步酶法合成。第一步以不同脂肪酸和甘油为原料进行单酸型TAG合成，底物摩尔比(甘油:棕榈酸)为1:6，10％的Lipozyme 435(w/w，相对于总反应物质量)，在70℃下反应6h。得到TAG在总酯中的含量为96.02％。第二步采用酶法催化将第一步合成的TAG醇解生成2-MAG，反应条件为无水乙醇和TAG的质量比为4(0.5g TAG，2g无水乙醇)，Lipozyme 435酶(w/w，相对于总反应物质量)的添加量为8％，在55℃下反应1h。最终得反应产物2-MAG。

本组合物中的OPO通过酶法合成，分别称取底物PPP和茶油FFA以1:5的摩尔比于具塞三角瓶中，加3mL/g(总底物)溶剂，50℃、200rpm ZH-S全温振荡器充分振荡混合20min。待底物溶解充分后，加入10％总底物重的脂肪酶于体系中反应6h后，离心除酶。即得反应产物OPO结构脂。

本组合物中的MCT通过酶法合成，按底物摩尔比8:1(椰子油/癸酸)，称取一定量椰子油和癸酸于烧瓶中，预热至46℃后，加入6％脂肪酶(以总底物质量计)和一定量去离子水，密闭反应装置中进行。反应8h后停止，离心去除酶，干燥即得MCT。

油脂组合物的制备过程：

(1)将大豆油、棕榈油、鱼油、支链脂肪酸单甘脂、OPO结构脂、MCT结构脂和食用酒精加入第一密闭反应器中，控制温度为40℃，以200r/min的转速进行搅拌，同时，采用320Hz的超声波震荡5min，形成预混物。

(2)以350r/min的转速进行搅拌，同时向预混物中按1％比例加入蛋白酶，并控制温度为40℃。然后将预混物转移至水洗罐中，搅拌加热至45℃保温，后加入质量浓度为10％的 NaOH溶液调节pH至8，搅拌30min后，缓慢加入10ml浓度为5％的盐水，反应10min后停止加热，静置沉淀。随后加入等温的水，水洗至无沉淀析出，搅拌10min得预混物。测酸价，若不达标，重复水洗操作，直至预混物的酸价达标。然后将酸价达标后的预混物加入脱色罐中搅拌10min，在真空条件下加热至110℃，随后进行脱水得到初混油。

(3)将初混油加入到脱臭罐中，真空条件下加热至150℃，开启蒸汽，加热至280℃，保温1.5h。保温结束后降温至150℃，关闭蒸汽，继续降温至70℃以下，即得到脱臭初混油，然后进行离心过滤，得到油脂组合物。

实施例1

表1不同油脂组合物成分表(g/100g)

注：大豆油、棕榈油、猪油中几乎不含结合态或游离态的支链脂肪酸，因此支链脂肪酸单甘脂是上述油脂组合物脂肪酸组成中的支链脂肪酸唯一来源。上述对照组和三种组合物中，棕榈酸含量测定结果分别为15.2％，21.3％，23.5％和24.7％。

该实施例研究了不同组成的油脂组合物(组成见表2)的氧化稳定性，采用Schaal烘箱法进行评价，将装有不同油脂组合物的样品瓶放入(62±1)℃恒温培养箱中避光保存，每隔 1d取样测定4种油脂组合物的过氧化值、和p-茴香胺值。其中过氧化值依据GB5009.227-2016中的滴定法进行测定；p-茴香胺值的测定依据国标GB/T 24304-2009，以5mL异辛烷+1mL p-茴香胺试剂(暗处放置10min)为空白，于350nm下测定避光后的油脂组合物溶液的吸光度。根据公式计算得p-茴香胺值。

实验结果

(1)过氧化值

过氧化值测定的是油脂氧化第一阶段产生的过氧化物以及氢过氧化物的浓度。由图1可知，对照组油脂组合物的过氧化值在储藏期间不断升高，在前10d的增长速度相对较低，10 d后，过氧化值增长迅速。第21d时，过氧化值达到了26.13±0.19mmol/kg，远超国家标准。组合物1～组合物3过氧化值明显低于对照组，表明组合物中的成分具有较强的抗氧化能力，也可能是成分之间协同作用，更有效地减少初级氧化产物的生成，提高了油脂组合物的氧化稳定性，延长货架期。

(2)p-茴香胺值

p-茴香胺值测定油脂中的ɑ-以及β-不饱和醛，醛类是油脂氧化过程中产生的次级氧化产物，约占油脂氧化挥发物的50％左右。不同油脂组合物储藏过程中p-茴香胺值的变化如图2 所示。对照组在储藏初始阶段茴香胺值缓慢上升，随着油脂氧化的不断进行，再呈现出迅速上升的趋势，p-茴香胺值由最初的0.78±0.05上升至最终的4.78±0.19。油脂组合物1～3显著抑制了醛类物质的产生，p-茴香胺值一直保持在较低的水平。其中，添加15g/100g支链脂肪酸的油脂组合物p-茴香胺值的产生速率相对最低，与过氧化值测定结果一致。表明油脂组合物1～3中，由于支链脂肪酸的存在，其具有较强的抗氧化作用，与组合物中其他成分复配时，提高了油脂组合物的稳定性。

实施例2

该实施例研究了不同组成的油脂组合物(表2所示)对肝癌细胞迁移能力的影响。采用高压均质的方法成功制备纳米级别的油脂组合物乳液，选取HepG2细胞为实验模型。首先制备油脂组合物乳液，其制备方法在Yi等基础上稍加修改。以WPI作为乳化剂，配置浓度为 2％(w/w)的乳化剂溶液。然后用磁力搅拌器室温下搅拌过夜，使其充分水化。将蛋白质水相溶液和油脂组合物按照9:1的质量比混合，用高速分散器在20000r/min下剪切4min，剪切半分钟停半分钟，制成初级粗乳液。最后用超高压均质机在相应均质压力100MPa下均质4次，制得沙棘果油乳液采用冰水浴降温。然后研究组合物乳液的细胞毒性和IC50，采用HepG2细胞亚甲基蓝比色测定方法，参照Wolfe等和王立峰等的方法，并作了一定的改进。取对数生长期细胞，胰蛋白酶消化后调整细胞密度为2×10⁵个/mL，每孔100μL接种于96孔板中，37℃、5％CO₂培养箱中培养24h使其完全贴壁。弃去旧的培养基，分别加入含有不同浓度的油脂组合物乳液的DMEM溶液100μL，以不加乳液样品的DMEM溶液作为对照，37℃、 5％CO₂培养箱中培养24h。然后去除上清液，用PBS清洗，再加入50μL的亚甲基蓝染液(98％ HBSS，0.67％丙二醛，0.6％亚甲基蓝)，置于37℃孵育1h。用去离子水清洗5次及以上至无浮色后，加入100μL洗脱液(含49％PBS，50％乙醇和1％乙酸)。最后将96孔板平板震荡20min后，用酶标仪测定570nm波长处的吸光值，以样品组与对照组吸光度值的百分比即为细胞存活率。根据毒性试验确定实验选用乳液的浓度后，对肝癌细胞进行迁移率测定。

实验结果

结果表明，对照组、组合物1、组合物2和组合物3四组油脂组合物乳液对细胞半数有效毒性浓度(IC50)为分别为1033μg/mL、1237μg/mL、1443μg/mL和1121μg/mL，即在该浓度处理条件下，HepG2细胞在24h后的存活率为50％。在此基础上，考察四种乳液浓度均为100μg/mL时对HepG2细胞的细胞毒性作用。结果表明，在100μg/mL浓度的乳液处理 24h后细胞存活率均能够达到92％以上，细胞毒性≤8％，可视为无细胞毒性，可作为下述细胞迁移实验的处理浓度。

根据毒性实验结果，选取100μg/mL的处理浓度对四种油脂组合物乳液的细胞迁移进行评价，采用的方法为划痕实验法。首先制备单层细胞，将细胞密度为5～10×10⁵个/mL的HepG2 细胞铺于24孔板(每孔500μL)，加入含10％胎牛血清的DMEM培养液，培养16～24h，使形成单层细胞。用10μL移液枪枪头在单层次报上呈“一”字划痕，用PBS清洗3次，然后加入100μg/mL的油脂组合物乳液的溶液。孵育24h后换成含10％胎牛血清的DMEM培养液，孵育24h。然后吸去培养液，用PBS清洗3次后，在倒置荧光显微镜下观察并拍照。

结果见图3，发现对照组随着时间的推移,细胞间的划痕逐渐愈合。24h时油脂组合物 1～3均有效抑制HepG2细胞的迁移速率,和对照组相比，油脂组合物1～3组比较差异有统计学意义(P<0.05)，如图4所示。转移的能力是肿瘤细胞典型特征之一,也是恶性肿瘤难以根治的原因，本研究发现,油脂组合物能够抑制HepG2细胞株迁移的能力，其原因可能是油脂的配方组成的设置，使得组合物的活性物质得到了最大保护，因此油脂组合物中多种物质的协同作用下对肝癌细胞膜的流动性具有抑制作用，或对癌症相关的信号通路具有抑制作用。

实施例3

该实施例研究了不同组成的油脂组合物(表2所示)在小鼠肠道内消化吸收的情况。取 40只荷瘤小鼠(雄性)，饲养于清洁级实验动物中心，温度(23±2℃)，湿度60％，自由饮水和采食。实验动物的护理和预处理都依照《实验动物管理条例》相关规定进行。均分为4组均以表2的油脂组合物食进行喂养。14d后采集小鼠粪便，测定粪便脂肪酸组成，考察不同组小鼠脂肪吸收的变化。

实验结果

表2小鼠粪便脂质分析(mg)

注：n＝10，

同一列不同字母表示显著差异，P＜0.05

小鼠粪便中未被吸收的脂质的脂肪酸组成如表3所示，对照组和喂食油脂组合物小鼠粪便***的主要脂肪酸总量分别为113.45±2.24、100.5±3.66、100.11±2.23和98.51±3.21mg，与对照组相比，喂食油脂组合物1～3小鼠粪便中游离脂肪酸含量均显著降低(P＜0.05)。分析原因，可能是由于这三组油脂组合物中的支链脂肪酸成分含量高，促进了油脂的消化和脂肪酸的吸收，使其***量降低。支链脂肪酸、MCT和OPO均可被消化道很好地吸收，这些物质混合到一起，构成了协同作用，更有利于肠道对脂质的消化吸收。该实验结果表明本发明提供的油脂组合物有助于油脂在小鼠体内的消化吸收，这对存在脂质代谢障碍，且肠道消化吸收存在问题的癌症患者是有利的现象。

最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。