阅读说明：本技术 一种香芹酚微胶囊及其制备方法 (Carvacrol microcapsule and preparation method thereof ) 是由 李才明 刘彤晖 李兆丰 顾正彪 李泽西 班宵逢 洪雁 程力 于 2019-10-31 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种香芹酚微胶囊及其制备方法,属于油脂微胶囊化技术领域。采用淀粉基复合型壁材包被香芹酚,淀粉基壁材是由CGT酶作用于淀粉或麦芽糊精而得,包括环糊精、糊精以及多种葡聚糖。本发明中香芹酚微胶囊制备方法具体包括：使用CGT酶作用于淀粉制备环糊精,先对淀粉进行液化糊化预处理,再加入CGT酶和香芹酚,反应完成后添加乳化剂,对乳状液进行剪切和均质,喷雾干燥得到香芹酚微胶囊。本发明在纯β-环糊精/香芹酚包合物的基础上进行了改进,香芹酚微胶囊在稳定性、溶解性以及负载量等都具有明显优势。本发明成本低廉、操作方便、绿色环保,生产工艺简单,适合实际生产中大规模的推广应用。(The invention discloses a carvacrol microcapsule and a preparation method thereof, belonging to the technical field of oil microencapsulation.A starch-based composite wall material is adopted to coat carvacrol, the starch-based wall material is obtained by the action of CGT enzyme on starch or maltodextrin and comprises cyclodextrin, dextrin and a plurality of glucans.)

一种香芹酚微胶囊及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种香芹酚微胶囊及其制备方法，属于油脂微胶囊化技术领域。

背景技术

香芹酚(异麝香草酚，C₁₀H₁₄O)是从牛至叶、麝香草、佛手柑等植物的精油中提炼出的一种酚类单萜化合物，具有很强的抑菌性和抗氧化性，并且由于香芹酚中游离羟基和酚类基团的存在，香芹酚比其它挥发性精油拥有更广谱的抑菌性。香芹酚以其抑菌性强、所需剂量少、绿色环保、使用安全无副作用等功能，被认为是抗生素类饲料添加剂的潜在替代品。但香芹酚不溶于水，稳定性较差易挥发和氧化，且本身气味特殊不易被接受，导致实际应用困难。

环糊精是由环糊精葡萄糖基转移酶(CGT酶)催化淀粉、糖原和葡聚糖聚合物等水解并环化形成的封闭环状分子，是由6个及6个以上D-吡喃葡萄糖经α-1,4-糖苷键连接而成。最常见并且工业上应用最广的环糊精为α、β和γ-环糊精，分别包含6、7和8个葡萄糖残基，它们耐酸、耐热、耐碱，无吸湿性，没有固定的熔点，热稳定性较好。环糊精的三维结构呈中空锥筒形，具有外部亲水、内部疏水的特性，能够与许多疏水性物质发生络合形成包合物，进而改变客体分子的理化性质。疏水性客体分子与环糊精形成包合物后，其溶解度提高，挥发性减弱，达到了缓释和掩藏气味的效果，使用性更好。

香芹酚因其广谱的抑菌性具有很好的潜在应用价值，但存在易挥发、易氧化问题，利用环糊精外亲水内疏水的特殊结构使其作用于香芹酚形成包合物，能有效地改善其易挥发性和易氧化性、掩蔽特殊气味并延长保存期。若直接采用环糊精产品作为壁材对香芹酚进行包合，存在成本高、载量低、溶解性差等缺点，而结合环糊精生产过程制备香芹酚类包合物还未见报道。

发明内容

本发明提供了一种酶法包合香芹酚的方法，即将酶法合成环糊精和环糊精包合香芹酚的过程相结合，包括CGT酶酶法制备环糊精，制备过程中加入香芹酚，反应后添加乳化剂，均质，喷雾干燥，从而降低成本。

本发明的第一个目的是提供一种香芹酚微胶囊的制备方法。

本发明中香芹酚微胶囊制备方法为：使用CGT酶作用于淀粉制备环糊精，先对淀粉进行液化糊化预处理，再加入CGT酶和香芹酚，反应完成后添加乳化剂，对乳状液进行剪切和均质，喷雾干燥得到香芹酚微胶囊。

本发明中香芹酚微胶囊的制备方法包括以下步骤：

(1)以淀粉乳或麦芽糊精溶液为原料，加CGT酶液化，同时升温糊化，制成淀粉或麦芽糊精糊化液；

(2)将CGT酶和香芹酚于搅拌下加入到步骤(1)的糊化液中，搅拌反应；

(3)将乳化剂加入到步骤(2)的反应液中，搅拌反应；

(4)将步骤(3)中的反应液进行剪切，均质，喷雾干燥，得到香芹酚微胶囊。

本发明的一种实施方式中，步骤(1)中所述淀粉为木薯淀粉、玉米淀粉、蜡质玉米淀粉、马铃薯淀粉、大米淀粉和小麦淀粉中的一种或几种，所述麦芽糊精是上述淀粉来源的DE值为5～25之间的麦芽糊精。

本发明的一种实施方式中，步骤(1)中所述液化CGT酶添加量为1～4U/(g淀粉或麦芽糊精湿基)，糊化温度为80～90℃，糊化温度下持续搅拌30～60min至糊化完全，降温至50℃。

本发明的一种实施方式中，步骤(2)中所述CGT酶添加量为2U/(g淀粉或麦芽糊精湿基)，香芹酚与淀粉或麦芽糊精的质量比为1:(4～10)。

本发明的一种实施方式中，步骤(2)中50℃连续搅拌反应时间为4～12小时。

本发明的一种实施方式中，步骤(3)中所述乳化剂为吐温、蔗糖酯、司盘、黄原胶、***胶等中的一种或几种，乳化剂与淀粉或麦芽糊精的质量比为1:20。

本发明的一种实施方式中，步骤(3)中50℃连续搅拌时间为20min。

本发明的一种实施方式中，步骤(4)中剪切速度为9000～12000rpm，剪切时间为2～5min，每30s间歇一次，间歇时间5s；均质压力为30～40MPa，均质次数为2～3次。

本发明的一种实施方式中，步骤(4)中喷雾干燥条件为：进风温度180～185℃，出风温度85～95℃，进料流量为20～22mL/min。

本发明的有益效果：

(1)本发明基于酶法合成环糊精的工艺，在制备环糊精的过程中加入香芹酚，香芹酚既能在一定程度上解除环糊精的产物抑制现象，又可以与产物环糊精发生络合形成性质更稳定的包合物，无需再使用复合有机溶剂，大大节约了成本。

(2)CGT酶作用于淀粉时，除了生成环糊精外，还生成一些糊精、葡聚糖等物质，糊精、葡聚糖等物质在微胶囊可与环糊精成分复合使用，形成复合型微胶囊，与纯环糊精/香芹酚包合物相比，溶解度和香芹酚载量均显著增加。

(3)本发明制备的香芹酚微胶囊，其壁材来自于淀粉或麦芽糊精的CGT酶酶解物，利用香芹酚与反应体系的自发耦合作用形成微胶囊结构，而不必进行分离纯化，能使成本大大降低。

(4)本发明实施方法简便，适合工业化生产，成本低廉。本发明制备的香芹酚微胶囊包埋效果好，可以较好地改善香芹酚的溶解性和不稳定性，延长贮存期，保证了产品的质量。

附图说明

图1不同液化加酶量对环糊精产量的影响。

图2不同反应时间下环糊精产量的变化情况。

具体实施方式

1、反应乳化液中α-环糊精、β-环糊精、γ-环糊精含量的测定按如下方法进行：

(1)取1～2mL的乳化液，加入约30mL已沸的10mM磷酸缓冲液(pH 6.5)中，沸水浴10min破坏香芹酚/环糊精的包合结构，用同样的磷酸缓冲液定容至50～100mL，混匀后离心(8000rpm，10min)，取上清待测。

(2)α-环糊精含量的测定：取步骤(1)中处理好的待测溶液，加入1.0mL 1.0M的盐酸溶液，再加入1.0mL由10mM磷酸缓冲液配制的0.1mM甲基橙溶液，于室温下放置20min待显色稳定，在505nm下测定吸光度。以缓冲液作为空白组，用α-环糊精标准溶液建立标准曲线，以此计算待测液中α-环糊精的浓度，乘以对应体积得到α-环糊精含量。

(3)β-环糊精含量的测定：取步骤(1)中处理好的待测溶液，加入3.5mL 30mMNaOH，再加入0.5mL由5mM Na₂CO₃溶液配制的0.02％(w/v)酚酞溶液，于室温下放置20min待显色稳定，在550nm下测定吸光度。以缓冲液作为空白组，用β-环糊精标准溶液建立标准曲线，以此计算待测液中β-环糊精的浓度，乘以对应体积得到β-环糊精含量。

(4)γ-环糊精含量的测定：取步骤(1)中处理好的待测溶液，加入50μL 1.0M的盐酸溶液，随后加入0.2M、pH 4.2的柠檬酸缓冲液2mL和5mM溴甲酚绿溶液100μL，于室温下放置20min待显色稳定，在630nm下测定吸光度。以缓冲液作为空白组，用γ-环糊精标准溶液建立标准曲线，以此计算待测液中γ-环糊精的浓度，乘以对应体积得到γ-环糊精含量。

2、乳化液或粉末产品中香芹酚含量的测定采用紫外-分光光度计法：

取0.1g样品于离心管中，加入10mL无水乙醇，振荡1min，超声处理10min，静置12h，使香芹酚被乙醇充分提取出来。于3500rpm下离心15min，取上清液1mL，稀释10-20倍后，在270nm处测定其吸光值，用香芹酚标准溶液建立标准曲线，计算香芹酚的含量。

本发明结合以下实例作进一步的说明。

实施例1香芹酚微胶囊与香芹酚/环糊精包合物比较

香芹酚微胶囊的制备过程如下进行：

(1)将玉米淀粉与水混合，质量浓度为20％，加入2U/(g淀粉湿基)CGT酶，升温至90℃并保温30min使液化和糊化完全，降温至50℃；

(2)将2U/(g淀粉湿基)CGT酶和香芹酚，于搅拌下加入到步骤(1)的糊化液中，50℃连续搅拌反应12h，香芹酚与淀粉的质量比分别为1:4、1:6、1:8、1:10；

(3)将相当于玉米淀粉质量5％的吐温80，于搅拌下缓慢加入到步骤(2)的反应液中，50℃连续搅拌20min；

(4)将步骤(3)的反应液进行剪切，剪切速度为9000～12000rpm，剪切时间为2～5min，每30s间歇一次，间歇时间5s；

(5)将步骤(4)的反应液进行均质，均质压力为30～40MPa，均质次数为2～3次；

(6)将步骤(5)的反应液进行喷雾干燥，设置进风温度180～185℃，出风温度85～95℃，进料流量为20～22mL/min，得到香芹酚微胶囊。

香芹酚/环糊精包合物的制备过程如下：

香芹酚预先用乙醇混合(香芹酚与乙醇质量比1:1)，将质量分数8％β-环糊精加热溶解后冷却至50℃，将香芹酚的乙醇溶液缓慢加入至上述溶液中，其中，香芹酚与β-环糊精质量比为1:(4～10)。充分振荡混匀，于微波处理器中50℃下反应6min。反应结束后，静置于4℃冰箱中过夜。取出后进行抽滤，得到的晶体用无水乙醇洗涤三次，放入真空干燥箱中干燥6h，得到香芹酚/环糊精包合物粉末。

对所制备的香芹酚微胶囊和香芹酚包合物进行观察，列表1，由表1可知：采用不同香芹酚、β-环糊精添加比得到的香芹酚/环糊精包合物的4个产品中，芯壁比为1:6及以上时，香芹酚包合物粉末气味较重，而且将产品于室温下溶解在水中，均出现明显的分层现象；而香芹酚微胶囊粉末均一稳定，味道明显较轻，溶解后放置一段时间未出现分层现象。因此，本发明中香芹酚微胶囊具有溶解度高、掩盖气味好的优势。

表1香芹酚微胶囊与香芹酚/环糊精包合物比较结果

¹粉末与水以1:20比例混合均匀，放置2天后观察其状态。

实施例2以不同底物制备香芹酚微胶囊

香芹酚微胶囊的制备过程如下进行：

(1)将玉米淀粉、马铃薯淀粉或麦芽糊精(DE＝10)与水混合，质量浓度为20％，加入2U/(g淀粉或麦芽糊精湿基)CGT酶，升温至90℃并保温30min使液化和糊化完全，降温至50℃；

(2)将2U/(g淀粉或麦芽糊精湿基)CGT酶和香芹酚，于搅拌下加入到步骤(1)的糊化液中，50℃连续搅拌反应12h，香芹酚与淀粉或麦芽糊精的质量比为1:8；

(3)将相当于玉米淀粉质量5％的吐温80，于搅拌下缓慢加入到步骤(2)的反应液中，50℃连续搅拌20min；

(4)将步骤(3)的反应液进行剪切，剪切速度为9000～12000rpm，剪切时间为2～5min，每30s间歇一次，间歇时间5s；

(5)将步骤(4)的反应液进行均质，均质压力为30～40MPa，均质次数为2～3次；

(6)将步骤(5)的反应液进行喷雾干燥，设置进风温度180～185℃，出风温度85～95℃，进料流量为20～22mL/min，得到香芹酚微胶囊。

对不同底物制备出的香芹酚微胶囊进行观察，列表2，由表2可知：三种微胶囊粉末的状态都具有较好的分散性和均一性，粉末气味较轻，溶解后保持两天之内稳定不分层。将粉末样品放置一个月无任何渗油现象。

表2不同底物制备出的香芹酚微胶囊比较结果

¹粉末与水以1:20比例混合均匀，放置2天后观察其状态。

实施例3以不同底物浓度制备香芹酚微胶囊

香芹酚微胶囊的制备过程如下进行：

(1)将玉米淀粉与水混合，质量浓度分别为10％、15％、20％和25％，加入2U/(g淀粉湿基)CGT酶，升温至90℃并保温30min使液化和糊化完全，降温至50℃；

(2)将2U/(g淀粉湿基)CGT酶和香芹酚，于搅拌下加入到步骤(1)的糊化液中，50℃连续搅拌反应12h，香芹酚与淀粉或麦芽糊精的质量比为1:8；

(3)将相当于玉米淀粉5％的吐温80，于搅拌下缓慢加入到步骤(2)的反应液中，50℃连续搅拌20min；

(4)将步骤(3)的反应液进行剪切，剪切速度为9000～12000rpm，剪切时间为2～5min，每30s间歇一次，间歇时间5s；

(5)将步骤(4)的反应液进行均质，均质压力为30～40MPa，均质次数为2～3次；

(6)将步骤(5)的反应液进行喷雾干燥，设置进风温度180～185℃，出风温度85～95℃，进料流量为20～22mL/min，得到香芹酚微胶囊。

对不同底物浓度下制备出的香芹酚微胶囊进行观察，列表3，由表3可知：底物浓度为10％～20％之间，微胶囊粉末的状态都具有较好的分散性和均一性，粉末气味较轻，溶解后保持两天之内稳定不分层，将粉末样品放置一个月无任何渗油现象。但底物浓度为25％时，反应液更加浓稠，剪切后无法进行均质，喷雾干燥会堵塞气压喷头，故本发明制备香芹酚微胶囊时，玉米淀粉底物浓度的范围应小于25％。

表3不同底物浓度制备出的香芹酚微胶囊比较结果¹

¹底物浓度为25％时，体系浓度过高，无法进行均质和喷雾干燥。

²粉末与水以1:20比例混合均匀，放置2天后观察其状态。

实施例4以不同液化加酶量制备香芹酚微胶囊

香芹酚微胶囊的制备过程如下进行：

(1)将玉米淀粉与水混合，质量浓度为20％，分别加入1、1.5、2、3、4U/(g淀粉湿基)CGT酶，升温至90℃并保温30min使液化和糊化完全，降温至50℃；

(2)将2U/(g淀粉湿基)CGT酶和香芹酚，于搅拌下加入到步骤(1)的糊化液中，50℃连续搅拌反应12h，香芹酚与淀粉的质量比为1:8；

(3)将相当于玉米淀粉质量5％的吐温80，于搅拌下缓慢加入到步骤(2)的反应液中，50℃连续搅拌20min；

(4)将步骤(3)的反应液进行剪切，剪切速度为9000～12000rpm，剪切时间为2～5min，每30s间歇一次，间歇时间5s；

(5)将步骤(4)的反应液进行均质，均质压力为30～40MPa，均质次数为2～3次；

(6)将步骤(5)的反应液进行喷雾干燥，设置进风温度180～185℃，出风温度85～95℃，进料流量为20～22mL/min，得到香芹酚微胶囊。

不同液化加酶量得到的反应液中三种环糊精的产量结果见图1。CGT酶作用于淀粉底物使其发生水解、歧化、耦合、环化反应，也有研究报道CGT酶有α淀粉酶的特性可用于淀粉大分子的预处理过程。图1显示，CGT酶在液化过程中添加量为1和1.5U/(g淀粉湿基)时，α、β、γ-环糊精产量明显较低；而添加量为2、3和4U/(g淀粉湿基)时，主产物β-环糊精产量分别达到11.3、11.4和11.8g/L。并且，液化加酶量≤1.5U/(g淀粉湿基)时，液化不够充分，淀粉大分子分解不完全，可能造成环化过程中因酶动力不足，环糊精产量较低。另外，液化加酶量≤1.5U/g淀粉湿基体系粘度较高，无法进行剪切和均质等操作。而加酶量为2、3和4U/(g淀粉湿基)时，体系粘度合适，易进行搅拌、剪切和均质等操作，喷雾干燥制得的香芹酚微胶囊分散性好，稳定性强，放置15天后无渗油现象。

实施例5以不同反应时间制备香芹酚微胶囊

香芹酚微胶囊的制备过程如下进行：

(1)将玉米淀粉与水混合，质量浓度为20％，分别加入2U/(g淀粉湿基)CGT酶，升温至90℃并保温30min使液化和糊化完全，降温至50℃；

(2)将2U/(g淀粉湿基)CGT酶和香芹酚，于搅拌下加入到步骤(1)的糊化液中，50℃连续搅拌反应2、4、8、12和16h，香芹酚与淀粉的质量比为1:8；

(3)将相当于玉米淀粉5％的吐温80，于搅拌下缓慢加入到步骤(2)的反应液中，50℃连续搅拌20min；

(4)将步骤(3)的反应液进行剪切，剪切速度为9000～12000rpm，剪切时间为2～5min，每30s间歇一次，间歇时间5s；

(5)将步骤(4)的反应液进行均质，均质压力为30～40MPa，均质次数为2～3次；

(6)将步骤(5)的反应液进行喷雾干燥，设置进风温度180～185℃，出风温度85～95℃，进料流量为20～22mL/min，得到香芹酚微胶囊。

不同反应时间的反应液中三种环糊精的产量变化见图2。反应时间＜12h时，α、β、γ-环糊精的产量呈增加趋势，反应还在进行；反应时间延长(＞12h)，各环糊精产量不再增加，甚至略微减少。将反应12h和16h的反应液进行剪切、均质和喷雾干燥，所得香芹酚微胶囊分散性好，稳定性强，放置15天后无渗油现象。

实施例6以不同香芹酚添加量制备香芹酚微胶囊

香芹酚微胶囊的制备过程如下进行：

(1)将玉米淀粉与水混合，质量浓度为20％，分别加入2U/(g淀粉湿基)CGT酶，升温至90℃并保温30min使液化和糊化完全，降温至50℃；

(2)将2U/(g淀粉湿基)CGT酶和香芹酚，于搅拌下加入到步骤(1)的糊化液中，50℃连续搅拌反应12h，香芹酚与淀粉的质量比分别为1:1、1:2、1:4、1:8；

(3)将相当于玉米淀粉5％的吐温80，于搅拌下缓慢加入到步骤(2)的反应液中，50℃连续搅拌20min；

(4)将步骤(3)的反应液进行剪切，剪切速度为9000～12000rpm，剪切时间为2～5min，每30s间歇一次，间歇时间5s；

(5)将步骤(4)的反应液进行均质，均质压力为30～40MPa，均质次数为2～3次；

(6)将步骤(5)的反应液进行喷雾干燥，设置进风温度180～185℃，出风温度85～95℃，进料流量为20～22mL/min，得到香芹酚微胶囊。

不同香芹酚添加量下制得的微胶囊测得的载量及状态结果见表4。香芹酚与淀粉比为1:(4～8)时，制得的乳化液稳定且微胶囊状态及溶解性均良好，且载量随着香芹酚添加量的增加而增加。但香芹酚与淀粉比为1:(1～2)时，乳化液有分层的现象，且微胶囊粉末出现油腻。主要原因可能是香芹酚添加量过多，没有充足的壁材对其进行包埋，导致大量香芹酚无法形成微胶囊结构而附着在外。同时，在喷雾干燥过程中多余香芹酚不稳定，造成大量损失。

表4不同香芹酚添加量制备出的香芹酚微胶囊比较结果

实施例7改变香芹酚微胶囊的制备过程中剪切的方式

与实施例1中香芹酚微胶囊的制备过程相比，改变对反应液的剪切方式。具体制备过程如下：

(1)将玉米淀粉与水混合，质量浓度为20％，加入2U/(g淀粉湿基)CGT酶，升温至90℃并保温30min使液化和糊化完全，降温至50℃；

(2)将2U/(g淀粉湿基)CGT酶和香芹酚，于搅拌下加入到步骤(1)的糊化液中，50℃连续搅拌反应12h，香芹酚与淀粉的质量比为1:8；

(3)将相当于玉米淀粉质量5％的吐温80，于搅拌下缓慢加入到步骤(2)的反应液中，50℃连续搅拌20min；

(4)将步骤(3)的反应液进行剪切，剪切速度为9000～12000rpm，剪切时间为2～5min；

(5)将步骤(4)的反应液进行均质，均质压力为30～40MPa，均质次数为2～3次；

(6)将步骤(5)的反应液进行喷雾干燥，设置进风温度180～185℃，出风温度85～95℃，进料流量为20～22mL/min，得到香芹酚微胶囊。

由表5可看出，连续式剪切造成了少量未被环糊精包合的香芹酚聚集析出，微胶囊粉末的载量、状态、气味都变差，说明剪切的程度也要控制在一定范围内，最好采用间歇式的操作方法。

表5剪切方式对微胶囊的影响比较

¹粉末与水以1:20比例混合均匀，放置2天后观察其状态。

对比例1改变香芹酚微胶囊的制备过程中香芹酚的加入时机

与实施例1中香芹酚微胶囊的制备过程相比，改变香芹酚的加入时机。具体制备过程如下：

(1)将玉米淀粉与水混合，质量浓度为20％，加入2U/(g淀粉湿基)CGT酶，升温至90℃并保温30min使液化和糊化完全，降温至50℃；

(2)将2U/(g淀粉湿基)CGT酶于搅拌下加入到步骤(1)的糊化液中，50℃连续搅拌反应12h，反应结束后加入香芹酚，香芹酚与淀粉的质量比分别为1:4、1:6、1:8、1:10；

(3)将相当于玉米淀粉质量5％的吐温80，于搅拌下缓慢加入到步骤(2)的反应液中，50℃连续搅拌20min；

(4)将步骤(3)的反应液进行剪切，剪切速度为9000～12000rpm，剪切时间为2～5min，每30s间歇一次，间歇时间5s；

(5)将步骤(4)的反应液进行均质，均质压力为30～40MPa，均质次数为2～3次；

(6)将步骤(5)的反应液进行喷雾干燥，设置进风温度180～185℃，出风温度85～95℃，进料流量为20～22mL/min，得到香芹酚微胶囊。

分别在环化反应前和环化反应后加入香芹酚，比较微胶囊产物的差异，发现二者具有明显的区别，如表6所示，在同一芯壁比下，环化反应后加入香芹酚时所得的微胶囊粉末的各项指标都较差。该结果表明在环化反应之后加入香芹酚，香芹酚没有被完全包合，这是因为在β-CGT酶作用淀粉或糊精生成环糊精的过程中有产物抑制现象，随着环糊精产物的增多，会抑制新的环糊精生成，导致环糊精产率较低，包合香芹酚的能力较弱。而在环化反应之前将香芹酚与β-CGT酶同时加入体系，生成的环糊精产物立刻与香芹酚发生络合形成包合物，从而解除了环糊精的产物抑制，生成更多环糊精同时也形成更多包合物。

同时考虑到在酶法体系中有未参与环化反应的糊精和葡聚糖存在，这些淀粉基成分会在喷雾干燥时对香芹酚进行二次包埋，但从表6看出这些壁材不足以包合多余的香芹酚，漂油的现象依然严重。由此证明在环化反应之前加入香芹酚较为合适。

表6香芹酚加入时机对微胶囊的影响比较

¹粉末与水以1:20比例混合均匀，放置2天后观察其状态。

虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。