阅读说明：本技术 一种中药挥发油组合物及其应用 (Traditional Chinese medicine volatile oil composition and application thereof ) 是由 陈志维 于 2019-11-04 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一种中药挥发油组合物及其应用,由以下重量配比的原料药制成：零陵香挥发油1～35份、广藿香挥发油1～15份、野菊花挥发油1～15份和冰片1～5份。该组合物以零陵香挥发油为主要原料,配合加入广藿香挥发油、野菊花挥发油以及冰片等芳香化湿药物,各组分产生协同增效作用,经体外抗病毒药效学实验证明,本发明组合物能够预防和抑制流感病毒引起的感冒。(The invention relates to a traditional Chinese medicine volatile oil composition and application thereof, wherein the traditional Chinese medicine volatile oil composition is prepared from the following raw material medicines in parts by weight: 1-35 parts of holy basil volatile oil, 1-15 parts of patchouli volatile oil, 1-15 parts of wild chrysanthemum flower volatile oil and 1-5 parts of borneol. The composition takes the volatile oil of holy basil as a main raw material, and aromatic dampness-resolving medicines such as the volatile oil of patchouli, the volatile oil of wild chrysanthemum and borneol are added, so that the components generate synergistic interaction, and the in vitro antiviral pharmacodynamics experiment proves that the composition can prevent and inhibit cold caused by influenza virus.)

一种中药挥发油组合物及其应用

技术领域

本发明属于中药技术领域，具体涉及一种中药挥发油组合物及其在预防和抑制流感病毒引起的感冒的药物中的应用。

背景技术

流行性感冒是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病，其流行特点是传播迅速，波及范围广。自1918年甲Ⅰ型流感（H1N1）在西班牙爆发后，已多次引起世界性的大流行，特别是2009 年甲Ⅰ型流感在世界范围内的流行，不仅严重威胁人类的健康也造成了极大的经济损失。近年来，由于流感病毒抗原的变异，出现高致病性的禽流感在人类的传播导致感染人数和死亡人数不断增多。在流感高发期，最有效的预防方法是防治流感病毒在空气中的传播，做好隔离及空间环境消毒，避免二次传播。常用的空气消毒方法有化学试剂法，如过氧乙酸、过氧化氢、甲醛、84消毒液等，以及紫外线照射、臭氧发生器等物理方法。这些方法虽然能够杀灭致病微生物或空气中的病毒，作用迅速，有效浓度低，但各有一定的缺陷，如毒性、刺激性、金属腐蚀性、持续效果差；许多本身又构成污染物，不同程度地影响人体健康，不适合有人环境；消毒时所有人员必须离场，操作系统要有防护措施；消毒后异味不能很快消除，长期使用会对人体有蓄积中毒的危险等。因此，有必要研究一种安全、有效的空气消毒剂具有重要意义。

经空气传播致病菌或病毒所引发的传染性疾病属中医“温病”范畴，治疗药物以清热解毒和芳香化湿两类中药为主。零陵香又名灵香草、熏草、广零陵香，为报春花科珍珠菜属植物灵香草（Lysimachia foenum-graetum Hance）的干燥地上全草，常用作香料。零陵香中含有大量挥发油、香豆素等，具有驱散风寒、辟秽功效，治时邪感冒头痛、上气腰痛、胸闷腹胀、遗精、驱蛔虫等。目前，现有技术大多是对零陵香有效成分提取方法的研究，尚未见将零陵香应用于空气消毒剂的文献报道。

发明内容

鉴于此，本发明的首要目的在于提供一种中药挥发油组合物，该组合物具有体外抑制流感病毒的作用，并且具有刺激黏膜免疫功能的作用，从而起到预防和抑制流感病毒引起的感冒的作用。

本发明实现上述目的的技术方案是：

一种中药挥发油组合物，该组合物由以下重量配比的原料药制成：零陵香挥发油1～35份、广藿香挥发油1～15份、野菊花挥发油1～15份和冰片1～5份。

作为优选，本发明各原料药的重量配比为：零陵香挥发油5～20份、广藿香挥发油3～6份、野菊花挥发油3～6和冰片1～3份，

优选地，各原料药的重量配比为：零陵香挥发油10份、广藿香挥发油5份、野菊花挥发油5份和冰片1份。

本发明所述的零陵香挥发油、广藿香挥发油和野菊花挥发油均可通过水蒸气蒸馏法、水扩散蒸气蒸馏法、溶剂提取法、二氧化碳超临界萃取等方法从相关植物中提取制备得到。

本发明组合物以零陵香挥发油为君药，具有芳香化湿避秽的功效；广藿香挥发油为臣药，具有芳香化湿的功效，与君药合用效力更佳；野菊花挥发油为佐药，具有清热解毒的作用，辅助治疗温病发热之用；冰片为使药，具有芳香通窍引药上行的作用。诸原料合用，协同增效，经体外抗病毒药效学实验及体内刺激黏膜免疫实验证明，本发明组合物能够起到预防和抑制流感病毒引起的感冒。

本发明的另一目的在于提供上述中药挥发油组合物在制备预防或治疗流感引起的感冒的药物中的应用。将上述中药挥发油组合物作为有效成分，加入药学上可接受的辅料，如防腐剂、乳化剂、保湿剂、增稠剂等，按本领域常规工艺手段制成空气消毒剂、香薰精油、无烟香薰、按摩膏或滴鼻剂等剂型。

本发明还提供了一种空气消毒剂，以上述的中药挥发油组合物为活性成分，其辅料可以加入适量的乳化剂如吐温-80，再加入适量的去离子水稀释即可，制备方法简单易行。本发明的空气消毒剂以零陵香、广藿香、野菊花、冰片四种天然植物成分为原料，不含其他化学成分，在预防和抑制流感病毒引起的感冒的基础上，不会对环境和人体的健康带来任何负面的影响。

本发明与现有技术相比，具有如下有益效果：

本发明以零陵香挥发油为主要原料，配合加入广藿香挥发油、野菊花挥发油以及冰片等芳香化湿药物，各组分产生协同增效作用，经药效学研究表明，本发明组合物一方面体外具有抑制和预防流感病毒的作用，另一方面通过滴鼻或雾化给药，体内能够有效地诱导黏膜免疫反应，产生大量的具有交叉保护作用的s-IgA抗体，引起黏膜免疫反应，具有较好的抗病毒作用，且其在对病毒的抑制效果及对提高小鼠黏膜免疫的效果方面均优于单独的零陵香挥发油和中药对照组（广藿香挥发油、野菊花挥发油和冰片组合），可应用于预防和抑制流感病毒引起的感冒。

具体实施方式

下面通过具体实施方式来进一步说明本发明，以下实施例为本发明具体的实施方式，但本发明的实施方式并不受下述实施例的限制。

零陵香挥发油的制备：取2.0kg干燥零陵香，加入10倍量水，浸泡30分钟，超声处理（70kHz）30分钟后，加热，收集水蒸气，水蒸气冷凝后得到油水分离部分。收集上层挥发油并加入无水硫酸钠进行脱水处理，得到零陵香挥发油。

广藿香挥发油的制备：取1.0kg干燥广藿香，加入8倍量水，浸泡40分钟，超声处理（60kHz）40分钟后，加热，收集水蒸气，水蒸气冷凝后得到油水分离部分。收集上层挥发油并加入无水硫酸钠进行脱水处理，得到广藿香挥发油。

野菊花挥发油的制备：取1.0kg干燥野菊花，加入9倍量水，浸泡30分钟，超声处理（80kHz）45分钟后，加热，收集水蒸气，水蒸气冷凝后得到油水分离部分。收集上层挥发油并加入无水硫酸钠进行脱水处理，得到野菊花挥发油。

实施例1：空气消毒剂

将30份零陵香挥发油、5份广藿香挥发油、5份野菊花挥发油、1份冰片混合溶解，加入适量吐温80作为乳化剂，加入去离子水稀释到1000倍，混合均匀，即得。

实施例2：香薰精油

将10份零陵香挥发油、5份广藿香挥发油、5份野菊花挥发油、1份冰片混合溶解，即可。

实施例3：无烟香薰

将20份零陵香挥发油、8份广藿香挥发油、8份野菊花挥发油、1份冰片混合溶解，加入适量异构十二烷溶解稀释到1000倍，即可。

实施例4：按摩膏

将15份零陵香挥发油、5份广藿香挥发油、5份野菊花挥发油、1份冰片混合溶解，加入适量凡士林稀释到100倍混合，即得。

实施例5：滴鼻剂

将15份零陵香挥发油、5份广藿香挥发油、5份野菊花挥发油、1份冰片混合溶解，加入适量吐温80作为乳化剂，适量苯甲酸钠作为防腐剂，加入适量去离子水稀释到100倍，混合溶解，即得。

本发明从中医药预防流感为切入点，根据药效学筛选，以零陵香挥发油为主要原料，加入广藿香挥发油、野菊花挥发油以及冰片等芳香化湿药物，协同作用，可以起到预防流感引起感冒的作用。下面将通过体外细胞抗病毒实验以及体内刺激黏膜免疫实验证明本发明具有的技术效果。

一、体外预防和抑制流感病毒作用

1 实验材料

1.1受试药

本发明中药挥发油组合物（按实施例2方法制备）；零陵香挥发油组（采用水蒸气蒸馏法进行提取）、中药对照组（广藿香挥发油∶野菊花挥发油∶冰片的质量为5∶5∶1）；阳性对照药：利巴韦林（辰欣药业股份有限公司）。

1.2毒株与细胞

甲I型流感病毒FM1鼠肺适应株（中国医学科学院医药生物技术研究所），干狗肾细胞（MDCK）传代，以细胞病变及鸡红血球血凝法来判断其滴度。

2 实验方法与结果

2.1 细胞半数毒性浓度（TC₅₀）筛选

细胞长成单层后，加入倍比稀释的8个不同浓度药物（1000、500、250、125、62.50、31.25、15.63、7.82）μg•mL^-1，每个浓度做4个复孔细胞，设正常细胞对照和阳性药物利巴韦林对照，37℃，5% CO₂培养4d后终止实验。实验中每天观察细胞形态变化，最后以噻唑蓝染色法（MTT法）检测药物的半数毒性浓度（TC₅₀），获得各组药物的TC₅₀结果。

2.2 对病毒的直接抑制作用

按上述分组方法，接种于96 孔培养板，正常对照组观察细胞病变，待病毒对照组的细胞病变达++++时，用MTT法测定OD值以确定细胞存活量，采用Reed-Muench法计算各组药物抑制病毒致50％细胞病变的浓度（IC₅₀）和抗病毒的治疗指数（TI）。TI 值是治疗药物疗效的综合判断指标，值越大说明药物的毒性越小，抑制病毒的有效浓度越低。

3 结果

测定各组药物的TC₅₀结果见表1，本发明药物组合的TC₅₀为250μg•mL^-1；零陵香组TC₅₀为500μg•mL^-1；中药对照组TC₅₀为125μg•mL^-1；阳性药物利巴韦林组TC₅₀为1000μg•mL^-1。

测定各组药物的IC₅₀结果见表1，本发明组合的半数抑制浓度IC₅₀为23.91μg•mL^-1，对应的治疗指数（TI）为10.46；零陵香组IC₅₀为55.82μg•mL^-1，TI为8.96；中药对照组的半数抑制浓度IC₅₀为35.29μg•mL^-1，TI为3.54；阳性药物利巴韦林的半数抑制浓度IC₅₀为62.44μg•mL^-1，TI为7.87。

除阳性对照组外，本发明组合物组的TI值在对FM1抑制作用中为最高，证明本发明组合物对FM1病毒的抑制效果均优于单独的零陵香挥发油组或中药对照组。结果表明，本发明药物组合对比单独的零陵香挥发油组、中药对照组（广藿香挥发油：野菊花挥发油：冰片的质量为5∶5∶1）其对细胞的毒性更小，对病毒的治疗作用更强。

表1 MTT 法测定药物对MDCK细胞的毒性作用及对FM1的抑制作用（n = 4）

二、体内刺激黏膜免疫功能的作用

1 实验材料：

本发明组合物（按实施例2方法制备）；零陵香挥发油组（采用水蒸气蒸馏法进行提取）、中药对照组（广藿香挥发油∶野菊花挥发油∶冰片的质量为5∶5∶1）；阳性对照药：利巴韦林（辰欣药业股份有限公司）。

毒株与细胞：甲I型流感病毒FM1鼠肺适应株（中国医学科学院医药生物技术研究所）。

实验动物：50只SPF 级BABL/c小鼠，雌性，质量13~15g（广东省实验动物中心）。

试剂：小鼠分泌型免疫球蛋白A（s-IgA）酶联免疫试剂盒；小鼠免疫球蛋白G（IgG）酶联免疫试剂盒。

2 实验方法与结果：

2.1 动物分组及给药

BABL/c小鼠随机分成5组，每组10只，分别为正常对照组、安慰剂组、本发明组合滴鼻组、本发明组合雾化组。提前7d预防给药，安慰剂组每日灌胃给药生理盐水1mL，本发明组合物采用超声雾化器每日雾化给药0.05mL，正常对照组正常饲养。连续给药7 d后，***轻度麻醉小鼠，以5倍半数致死量（5LD₅₀）流感病毒50μL滴鼻感染小鼠，连续观察5d，处死小鼠，采集样品。

2.2 血清IgA、IgG检测

小鼠摘除眼球采血，血液室温放置30min后2000r/min离心20min，收集血清，-20℃保存，根据试剂盒说明书方法测定血清中IgA、IgG。

2.3 肺泡灌洗液以及鼻黏膜s-IgA检测

小鼠处死后分离气管，用针管从气管上端向肺组织注射无菌生理盐水，回抽清洗液，每次2 mL，分2次冲洗，收集肺泡灌洗液。同法从气管向鼻部注射生理盐水，收集鼻黏膜冲洗液。测定肺泡灌洗液及鼻粘膜冲洗液中ρs-IgA含量。

3 结果

如表2所示，与安慰剂组比较，本发明组合物能显著提高灌洗液s-IgA、血清IgA和IgG含量，差异均有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。本发明组合物组对增加小鼠IgA、IgG、s-IgA含量作用中为最高，证明本发明组合物对提高小鼠黏膜免疫的效果均优于单独的零陵香组或中药对照组。

表2 本发明组合挥发油对IgA、IgG、s-IgA含量的影响（n = 10）

*P<0.05，**P<0.01，与安慰剂组比较。

综上结果可以看出，本发明以零陵香挥发油为主要原料，配合广藿香挥发油、野菊花挥发油和冰片，与单独的零陵香挥发油及中药对照组（广藿香挥发油、野菊花挥发油和冰片组合）相比，诸原料合用产生了协同增效作用，经体外抗病毒药效学实验及体内刺激黏膜免疫实验证明，本发明组合物能够起到预防和抑制流感病毒引起的感冒。