阅读说明：本技术 一种中药复方组合物的制备及其治疗上呼吸道感染的应用 (Preparation of traditional Chinese medicine compound composition and application thereof in treating upper respiratory tract infection ) 是由 谭余庆 刘丽 梁烽焱 张�浩 黄灿林 潘洁丽 于 2019-11-04 设计创作，主要内容包括：本发明属于中药技术领域,具体涉及一种中药复方组合物的制备及其治疗上呼吸道感染的应用。本发明的中药复方组合物,包括以下重量份的组分：挥发油包合物20～40份、中药提取物200～300份、甜味剂0.5～6份、硬脂酸镁3～10份、香精2～10份,蔗糖粉,共1000份。本发明通过优选黄芩、连翘、香薷、广藿香、忍冬藤、野菊花、青蒿和三叉苦八味中药作为制备本发明中药复方组合物的药材,对不同的中药施以不同的提取方法,得到固体粉末后与甜味剂、硬脂酸镁、香精等进行干压制粒而得。本发明提供的中药复方组合物制备得到的药物能够有效治疗上呼吸道感染中的常见病毒,具有抗病毒、解热、镇痛、抗炎等有益效果。(The invention belongs to the technical field of traditional Chinese medicines, and particularly relates to a preparation method of a traditional Chinese medicine compound composition and application of the traditional Chinese medicine compound composition in treating upper respiratory tract infection. The traditional Chinese medicine compound composition comprises the following components in parts by weight: 20-40 parts of volatile oil inclusion compound, 200-300 parts of traditional Chinese medicine extract, 0.5-6 parts of sweetening agent, 3-10 parts of magnesium stearate, 2-10 parts of essence and 1000 parts of sucrose powder. The invention selects eight traditional Chinese medicines of scutellaria baicalensis, forsythia suspensa, elsholtzia, pogostemon cablin, honeysuckle stem, wild chrysanthemum, sweet wormwood herb and thin evodia leaf as medicinal materials for preparing the traditional Chinese medicine compound composition, different traditional Chinese medicines are subjected to different extraction methods to obtain solid powder, and the solid powder, the sweetener, magnesium stearate, essence and the like are subjected to dry pressing and granulation to obtain the traditional Chinese medicine compound composition. The medicine prepared from the traditional Chinese medicine compound composition provided by the invention can effectively treat common viruses in upper respiratory tract infection, and has the beneficial effects of resisting viruses, relieving fever, easing pain, resisting inflammation and the like.)

一种中药复方组合物的制备及其治疗上呼吸道感染的应用

技术领域

本发明属于中药技术领域，具体涉及一种中药复方组合物的制备及其治疗上呼吸道感染的应用。

背景技术

上呼吸道感染是由病毒感染引起的上呼吸道的炎症。临床表现为发热，恶寒，鼻塞流涕，打喷嚏，头痛，咽痛等症状。属中医学“感冒”的范畴。感冒是临床常见病，一年四季均有发生，尤其是在冬春两季，特别是在季节交替、气候骤变时发病率比较高。患感冒的患者中轻者仅表现出鼻塞、流涕、打喷嚏等症状，重者则会出现高热不退、头疼身痛等症状，更有甚者患感冒后还会引起正气虚弱，继发引起急性支气管炎、肺炎、鼻窦炎、神经炎等疾病，危及生命，严重影响患者的工作和生活，也给患者带来痛苦。

目前西医对病毒引起的上呼吸道感染尚无特效的治疗方法，主要是采取对症或支持疗法，西医中常用抗病毒药物如利巴韦林等进行对症。抗病毒药物长期服用容易产生耐药性，特别对于一些特殊体质的人群，如儿童、孕妇和老人，抗病毒药物治疗感冒容易诱发胃肠道不适、恶心、呕吐等多种不良症状。这时，选择中医治疗上呼吸道感染则更安全，且能治标又治本。虽然现有技术中有各种不同治疗上呼吸道感染的中成药物，但与西药相比，其种类并不多，可供选择仍有限，而且存在治疗周期长、抗病毒、解热镇痛抗炎效果不佳等缺点。此外，在上呼吸道感染中，多数患者会出现发热、发炎等并发症，此时要想通过服药同时缓解发热发炎等症状，需要通过服用多种西药来解决，这些西药对人体的肝脏和肾脏都会有一定的损伤。因此，急需研发一种能够在临床上对上呼吸道症状起作用的中药药物。

发明内容

为了克服现有技术中存在的上述问题，本发明提供了一种能够有效缓解感冒等上呼吸道感染症状、抗病毒、解热镇痛抗炎效果好的中药复方组合物及其制备方法，以解决现有技术中存在的缺陷。

为了实现本发明目的，本发明提供了一种中药复方组合物，包括以下重量份的组分：挥发油包合物20～40份、中药提取物200～300份、甜味剂0.5～6份、硬脂酸镁3～10份、香精2～10份，蔗糖粉，共1000份，其中，所述挥发油包合物是用环糊精胶体磨法包合香薷和广藿香油性提取物得到的，所述中药提取物为黄芩、连翘、忍冬藤、野菊花、青蒿和三叉苦的水煎提取物。

进一步地，所述中药复方组合物包括以下重量份的组分：挥发油包合物30～35份、中药提取物250～300份、甜味剂1.2～2份、硬脂酸镁5～7份、香精4～5份，蔗糖粉，共1000份。

优选地，所述中药复方组合物包括以下重量份的组分：挥发油包合物34份、中药提取物266份、甜味剂2份、硬脂酸镁5份、香精4份和蔗糖粉689份。

进一步地，所述挥发油包合物包括挥发油和环糊精，挥发油和环糊精的重量比为1:10～20，其中挥发油的原料，以重量份数计，包括香薷400～650份，广藿香400～600份。

优选地，所述挥发油和所述环糊精的重量比为1:16。

优选地，以重量份数计，所述香薷450～550份，广藿香450～550份。

优选地，以重量份数计，所述香薷500份，广藿香500份。

进一步地，所述环糊精为β-环糊精。

进一步地，所述中药提取物中各原料的重量份为：黄芩350～600份、连翘400～600份、忍冬藤700～900份、野菊花400～650份、青蒿300～600份和三叉苦400～600份。

进一步地，所述中药提取物中各原料的重量份为：黄芩450～500份、连翘450～550份、忍冬藤750～850份、野菊花500～550份、青蒿450～520份和三叉苦450～550份。

优选地，所述中药提取物包括以下重量份的原料：黄芩500份、连翘500份、忍冬藤833.3份、野菊花500份、青蒿500份和三叉苦500份。

进一步地，所述蔗糖粉的目数为80～120目。

本发明还提供了一种中药复方组合物的制备方法，包括以下步骤：取配方量的甜味剂、硬脂酸镁、挥发油包合物、中药提取物、香精和蔗糖粉，混匀，干压制粒，即得。

进一步地，所述挥发油包合物的制备方法包括以下步骤：S1:加水，用水蒸气蒸馏法提取香薷和广藿香，得挥发油；S2:将步骤S1所述的挥发油用环糊精包合，干燥、粉碎，得挥发油包合物；

进一步地，所述中药提取物的制备方法包括以下步骤：S3:将连翘、忍冬藤、野菊花、青蒿、三叉苦和黄芩加水煎煮，得煎液，将所述煎液过滤，浓缩至50℃下相对密度为1.10～1.14的浸膏；S4:把乙醇加入步骤S3所述的浸膏中，静置，过滤，浓缩至50℃下相对密度为1.25～1.30的稠膏，干燥，粉碎，得中药提取物。

优选地，在步骤S1中，所述水的重量为所述香薷和广藿香重量的6倍。

进一步地，在步骤S1中，提取时间为3～5h。

优选地，在步骤S1中，提取时间为4h。

进一步地，在步骤S3中，加水煎煮的次数为2次，第一次煎煮加入6～10倍(重量比)的水，煎煮1～3h，第二次煎煮加入5～8倍(重量比)的水，煎煮1～3h，合并煎液，得煎液，将所述煎液过滤，浓缩至50℃下相对密度为1.10～1.14的浸膏；其中，在步骤S3中，中药的加料顺序为：先将连翘、忍冬藤、野菊花、青蒿、三叉苦五味药加水煎煮，至水提取液达85～95℃时，再加入黄芩。

优选地，在步骤S3中，加水煎煮的次数为2次，第一次煎煮加入8倍的水，煎煮1.5h，第二次煎煮加入6倍的水，煎煮1.5h，合并煎液，得煎液，将所述煎液过滤，浓缩至50℃下相对密度为1.10～1.14的浸膏；其中，在步骤S3中，中药的加料顺序为：先将连翘、忍冬藤、野菊花、青蒿、三叉苦五味药加水煎煮，至水提取液达90℃时，再加入黄芩。

进一步地，在步骤S4中，所述乙醇和所述浸膏的体积比为6～10:3。

优选地，在步骤S4中，把乙醇加入步骤S3所述的浸膏中，所述乙醇和所述浸膏的体积比为7：3，静置2h，过滤，浓缩至50℃下相对密度为1.25～1.30的稠膏，在75℃下进行真空干燥，粉碎。

本发明还提供了一种中药复方组合物在治疗上呼吸道感染药物中的用途。

进一步地，所述药物的制剂形式为液体制剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、散剂或膏剂。

黄芩：本品为唇形科、黄芩属植物；苦、寒；归肺、胆、脾、胃、大肠、小肠经；具有清热燥湿，泻火解毒，止血，安胎等功效；主治湿温、暑温胸闷呕恶，湿热痞满，泻痢，黄疸，肺热咳嗽，高热烦渴，血热吐衄，痈肿疮毒，胎动不安等症。

连翘：本品为木犀科落叶灌木植物连翘的果实；苦，微寒；归肺、心、胆经；具有清热解毒，消痈散结的功效，主治外感风热、温病发热，疮疡肿痛，瘰疬等症。

香薷：本品为唇形科香薷属植物；味辛、性微温；归肺、胃经；具有发汗解表，化湿和中，利水消肿的功效，主治暑湿表证，水肿和小便不利等症。

广藿香：本品为唇形科植物，多年生草本直立植物；辛、微温；归脾、胃、肺经；具有芳香化浊，和中止呕，发表解暑的功效；主治湿浊中阻，脘痞呕吐，暑湿表证，湿温初起，发热倦怠，胸闷不舒，寒湿闭暑，腹痛吐泻，鼻渊头痛等症。

忍冬藤：本品为茜草目忍冬科植物；甘、寒；归入心、肺经；具有清热，解毒，通络的功效；主治治温病发热，热毒血痢，传染性肝炎，痈肿疮毒，筋骨疼痛等症。

野菊花：本品为为菊科多年生草本植物；苦、辛、微寒；归肝、心经；具有清热解毒，泻火平肝的功效；主治疔疮痈肿，目赤肿痛，头痛眩晕等症。

青蒿：本品为本品为菊科植物黄花蒿Artemisia annua L的干燥地上部分；苦、辛，寒；归肝、胆经；具有清热解暑，除蒸，截疟的功效；主治暑邪发热，阴虚发热，夜热早凉，疟疾寒热，湿热黄疸等症。

三叉苦：本品为芸香科植物；味苦，性寒；归心经，具有清热解毒、祛风除湿的功效；主治咽喉肿痛、风湿骨痛、疟疾、黄疸、湿疹、皮炎、跌打损伤及虫蛇咬伤等症。

申请人在通过对八味中药的成分分析后发现，青蒿中的主要化学成分有黄酮类、香豆素、萜类、苯丙酸类、各类挥发油以及香豆素类成分东莨菪内酯等，其中，青蒿提取物中大部分的化学成分都是脂溶性的，申请人在试验过程中发现，青蒿提取物中水溶性成分对上呼吸道感染症状的作用效果要比脂溶性成分要显著。通过将八味中药进行分类，香薷和广藿香提取得到的挥发油用环糊精进行包合，可以更好地保留香薷和广藿香中作用于上呼吸道感染的有效成分。

因此，本发明的中药复方组合物与现有技术相比，具有以下有益效果：

(1)本发明的中药复方组合物对H1N1流感病毒(FM1/PR8株)和呼吸道合胞病毒具有很好的抑制作用，可明显降低病毒表达量，应用在制备治疗上呼吸道感染的药物中效果良好。

(2)本发明中药复方组合物与西药相比，还具有良好的解热、镇痛和抗炎效果。与西药相比，患者不需要服用多种药即可同时实现解热、镇痛和抗炎的功效，大大提升了用药的安全性。

具体实施方式

以下通过具体实施方式的描述对本发明作进一步说明，但这并非是对本发明的限制，本领域技术人员根据本发明的基本思想，可以作出各种修改或改进，但是只要不脱离本发明的基本思想，均在本发明的范围之内。

实施例1

实施例1的中药复方组合物由以下重量份的组分制备而成：挥发油包合物20份、中药提取物300份、三氯蔗糖0.5份、硬脂酸镁3份、苹果香精10份和蔗糖粉666.5份。

所述中药提取物由以下重量份的原料组成：黄芩350份、连翘600份、忍冬藤700份、野菊花400份、青蒿600份和三叉苦600份。

所述挥发油由以下重量份的原料组成：香薷400份，广藿香600份；所述挥发油包合物中挥发油和β-环糊精的重量比为1:10。

其中，所述挥发油包合物的制备方法为：

S1:加入香薷、广藿香，以及香薷和广藿香总重量5倍的水，用水蒸气蒸馏提取香薷和广藿香，提取时间为3h，得挥发油；

S2:将步骤S1所述的挥发油用β-环糊精胶体磨法包合，干燥、粉碎，得挥发油包合物。

所述中药提取物的制备方法为：

S3:加入连翘、忍冬藤、野菊花、青蒿、三叉苦和黄芩总重量10倍的水进行煎煮，先加入连翘、忍冬藤、野菊花、青蒿、三叉苦五味药，在连翘、忍冬藤、野菊花、青蒿、三叉苦五味药的水提取液至85℃后才加入黄芩，煎煮3h，过滤，倒出第一次煎液，备用；在剩余药渣中继续加入8倍的水煎煮3h，得到第二次煎液，合并煎液，将所述煎液过滤，浓缩至50℃下相对密度为1.10～1.14的浸膏；

S4:把乙醇加入步骤S3所述的浸膏中，乙醇与浸膏的体积比为6:3，静置2h，过滤，浓缩至50℃下相对密度为1.25～1.30的稠膏，在75℃下干燥，粉碎，得中药提取物；

实施例1的中药复方组合物的制备方法：取实施例1中药复方组合物中配方量的三氯蔗糖、硬脂酸镁、挥发油包合物、中药提取物、香精和蔗糖粉，混匀，干压制粒，即得。

实施例2

实施例2的中药复方组合物由以下重量份的组分制备而成：挥发油包合物40份、中药提取物200份、阿斯巴甜6份、硬脂酸镁10份、香蕉香精2份和蔗糖粉742份。

所述中药提取物由以下重量份的原料组成：黄芩600份、连翘400份、忍冬藤900份、野菊花650份、青蒿300份和三叉苦400份。

所述挥发油由以下重量份的原料组成：香薷650份，广藿香400份；所述挥发油包合物中挥发油和β-环糊精的重量比为1:20。

其中，所述挥发油包合物的制备方法为：

S1:加入香薷、广藿香，以及香薷和广藿香总重量8倍的水，用水蒸气蒸馏提取香薷和广藿香，提取时间为5h，得挥发油；

S2:将步骤S1所述的挥发油用β-环糊精胶体磨法包合，干燥、粉碎，得挥发油包合物。

所述中药提取物的制备方法为：

S3:加入连翘、忍冬藤、野菊花、青蒿、三叉苦和黄芩总重量6倍的水进行煎煮，先加入连翘、忍冬藤、野菊花、青蒿、三叉苦五味药，在连翘、忍冬藤、野菊花、青蒿、三叉苦五味药的水提取液至95℃后才加入黄芩，煎煮1h，倒出第一次煎液，备用；在剩余药渣中继续加入5倍的水煎煮1h，得到第二次煎液，合并煎液，将所述煎液过滤，浓缩至50℃下相对密度为1.10～1.14的浸膏；

S4:把乙醇加入步骤S3所述的浸膏中，乙醇与浸膏的体积比为10:3，静置2h，过滤，浓缩至50℃下相对密度为1.25～1.30的稠膏，在75℃下干燥，粉碎，得中药提取物；

实施例2的中药复方组合物的制备方法：取实施例2中药复方组合物中配方量的阿斯巴甜、硬脂酸镁、挥发油包合物、中药提取物、香蕉香精和蔗糖粉，混匀，干压制粒，即得。

实施例3

实施例3的中药复方组合物由以下重量份的组分制备而成：挥发油包合物34份、中药提取物266份、三氯蔗糖2份、硬脂酸镁5份、青苹果香精4份和蔗糖粉689份。

所述中药提取物由以下重量份的原料组成：黄芩500份、连翘500份、忍冬藤833.3份、野菊花500份、青蒿500份和三叉苦500份。

所述挥发油由以下重量份的原料组成：香薷500份，广藿香500份；所述挥发油包合物中挥发油和β-环糊精的重量比为1:16。

其中，所述挥发油包合物的制备方法为：

S1:加入香薷、广藿香，以及香薷和广藿香总重量6倍的水，用水蒸气蒸馏提取香薷和广藿香，提取时间为4h，得挥发油；

S2:将步骤S1所述的挥发油用β-环糊精胶体磨法包合，干燥、粉碎，得挥发油包合物，其中挥发油和β-环糊精的重量比为1:16；

所述中药提取物的制备方法为：

S3:加入连翘、忍冬藤、野菊花、青蒿、三叉苦和黄芩总重量8倍的水进行煎煮，先加入连翘、忍冬藤、野菊花、青蒿、三叉苦五味药，在连翘、忍冬藤、野菊花、青蒿、三叉苦五味药的水提取液至90℃后才加入黄芩，煎煮1.5h，倒出第一次煎液，备用；在剩余药渣中继续加入6倍的水煎煮1.5h，得到第二次煎液，合并煎液，将所述煎液过滤，浓缩至50℃下相对密度为1.10～1.14的浸膏；

S4:把乙醇加入步骤S3所述的浸膏中，乙醇与浸膏的体积比为7:3，静置2h，过滤，浓缩至50℃下相对密度为1.25～1.30的稠膏，在75℃下干燥，粉碎，得中药提取物；

实施例3的中药复方组合物的制备方法：取实施例3中药复方组合物中配方量的三氯蔗糖、硬脂酸镁、挥发油包合物、中药提取物、青苹果香精和蔗糖粉，混匀，干压制粒，即得。

实施例4

实施例4的中药复方组合物由以下重量份的组分制备而成：挥发油包合物25份、中药提取物250份、三氯蔗糖1.2份、硬脂酸镁7份、草莓香精5份和蔗糖粉711.8份。

所述中药提取物由以下重量份的原料组成：黄芩500份、连翘450份、忍冬藤800份、野菊花500份、青蒿520份和三叉苦500份。

所述挥发油由以下重量份的原料组成：香薷450份，广藿香550份；所述挥发油包合物中挥发油和β-环糊精的重量比为1:16。

其中，所述挥发油包合物的制备方法为：

S1:加入香薷、广藿香，以及香薷和广藿香总重量7倍的水，用水蒸气蒸馏提取香薷和广藿香，提取时间为3.5h，得挥发油；

S2:将步骤S1所述的挥发油用β-环糊精胶体磨法包合，干燥、粉碎，得挥发油包合物，其中挥发油和β-环糊精的重量比为1:14；

所述中药提取物的制备方法为：

S3:加入连翘、忍冬藤、野菊花、青蒿、三叉苦和黄芩总重量7倍的水进行煎煮，先加入连翘、忍冬藤、野菊花、青蒿、三叉苦五味药，在连翘、忍冬藤、野菊花、青蒿、三叉苦五味药水的提取液至90℃后才加入黄芩，煎煮2h，倒出第一次煎液，备用；在剩余药渣中继续加入6倍的水煎煮1.5h，得到第二次煎液，合并煎液，将所述煎液过滤，浓缩至50℃下相对密度为1.10～1.14的浸膏；

S4:把乙醇加入步骤S3所述的浸膏中，乙醇与浸膏的体积比为8:3，静置2h，过滤，浓缩至50℃下相对密度为1.25～1.30的稠膏，在75℃下干燥，粉碎，得中药提取物；

实施例4的中药复方组合物的制备方法：取实施例4中药复方组合物中配方量的三氯蔗糖、硬脂酸镁、挥发油包合物、中药提取物、草莓香精和蔗糖粉，混匀，干压制粒，即得。

对比例1

对比例1为阳性药物利巴韦林颗粒(利巴韦林颗粒：四川百利药业有限责任公司，国药准字：H51023508)，用药量为82.5mg/kg体重。

对比例2

对比例2为小儿速热清口服液(小儿热速清糖浆：黑龙江珍宝岛药业股份有限公司，国药准字：Z20153067)，给药量为16.5mL。

对比例3

对比例3为阿司匹林(阿司匹林泡腾片(巴米尔)：阿斯利康制药有限公司产品，批号1708164，生产日期2017.08，有效期至2019.07)，给药量为0.18g/kg体重。

对比例4

对比例4为双氯芬酸钠(双氯芬酸钠肠溶片：北京诺华制药有限公司产品，产品批号X1150，生产日期2017.08，有效期至2022.07)，给药量为0.008g/kg体重。

对比例5

除中药提取物方法不同以外，对比例5的中药复方组合物中的成分及其制备方法与实施例3相同。其中，对比例5的中药提取物的制备方法如下：

S3:青蒿用65％乙醇醇提取1.5h，得青蒿醇提取物；

S4:加入连翘、忍冬藤、野菊花、三叉苦和黄芩总重量8倍的水煎煮，在连翘、忍冬藤、野菊花、三叉苦五味药水提取液至90℃后才加入黄芩，煎煮1.5h，倒出第一次煎液，备用；在剩余药渣中继续加入6倍的水煎煮1.5h，得到第二次煎液，合并煎液，将所述煎液过滤，浓缩至50℃下相对密度为1.10～1.14的浸膏；

S5:把乙醇加入步骤S3所述的浸膏中，乙醇与浸膏的体积比为7:3，静置2h，过滤，得滤液，将步骤S2的青蒿醇提取物加到滤液中，浓缩至50℃下相对密度为1.25～1.30的稠膏，在75℃下干燥，粉碎，得中药提取物。

试验例1、本发明的中药复方组合物对FMI株感染小鼠肺指数及肺指数抑制率的影响

采用H1N1流感病毒(FM1/PR8株)感染致小鼠肺炎模型，以肺指数及其抑制率为指标，对实施例1～4、对比例1～2的样品进行有效性评价。

取体重(12±1)g的ICR小鼠90只(许可证号：SCXK(京)2016-0011)，雌雄各半，按体重等级随机分为9组，分别为正常对照组、模型对照组、实施例1～4剂量组，对比例1～2剂量组和对比例5剂量组。每组10只。其中，对比例1为阳性药物利巴韦林颗粒，人临床用量为450mg/60kg/d，换算成小鼠等效剂量为82.5mg/kg；实施例1～4和对比例5的剂量为22g生药/kg；对比例2为小儿速热清口服液，给药量为16.5mL。除正常对照组外，将小鼠用***轻度麻醉，以15个LD50流感病毒液(FMI株)滴鼻感染，每只35μl，感染当天开始给药，每次按0.2ml/10g体重灌胃，每天1次，连续4天，正常对照组和模型对照组在同等条件下用蒸馏水灌胃。在第5天称重，解剖小鼠，取肺，称肺重，计算肺指数及肺指数抑制率，并留标本用于测定肺组织中病毒载量。肺指数和肺指数抑制率分别如公式(I)和(II)所示，试验结果如表1所示：(I)肺指数＝肺湿重(g)×100/体重(g)

(II)

表1对H1N1流感病毒FM1株感染ICR小鼠肺炎模型的治疗作用

注：与正常对照组比较，^##P<0.01；与模型对照组比较，*P<0.05，**P<0.01

从表1可得，采用甲型H1N1流感病毒FM1株病毒感染小鼠后，小鼠肺指数明显增高，与正常对照组比较有显著性差异(P<0.01)；感染当天开始给予本发明的实施例1～4的中药复方组合物治疗4天后，肺指数有明显降低，与模型对照组比较均有显著性差异(P<0.05)。其中，本发明中实施例3的中药复方组合物为最优实施例，其肺指数抑制率接近于阳性药物利巴韦林颗粒，略低于利巴韦林颗粒，但大大高于对比例2的小儿速热清口服液组，说明本发明的中药复方组合物具有很好的抗H1N1流感病毒FM1株感染的效果。值得一提的是，对比例5的中药提取物的制备方法与本发明的区别在于，对比例5的青蒿是用65％的乙醇提取的，可以看出，仅仅是提取方式的改变，就会使得中药复方组合物中的抗病毒效果下降，这是因为青蒿提取物中水溶性成分对上呼吸道感染症状的作用效果要比脂溶性成分要显著的原因。

试验例2、本发明的中药复方组合物对呼吸道合胞病毒感染ICR小鼠肺炎模型的治疗作用

采用呼吸道合胞病毒感染小鼠肺炎模型，以肺指数及其抑制率为指标，取体重(12±1)g的ICR小鼠90只(许可证号：SCXK(京)2016-0011)，雌雄各半，按体重等级随机分为9组，分别为正常对照组、模型对照组、实施例1～4剂量组，对比例1～2剂量组和对比例5剂量组。每组10只。其中，对比例1为阳性药物利巴韦林颗粒，人临床用量为450mg/60kg/d，换算成小鼠等效剂量为82.5mg/kg；实施例1～4和对比例5的剂量为22g生药/kg对比例2为小儿速热清口服液，给药量为16.5mL。除正常对照组外，将小鼠用***轻度麻醉，以10000TCID₅₀呼吸道合胞病毒液滴鼻感染，每只30μl。感染当天开始给药，每次按0.2ml/10g灌胃，每天1次，连续4天，正常对照组和模型对照组在同等条件下蒸馏水灌胃。在第5天称重，解剖小鼠，取肺，称肺重，计算肺指数及肺指数抑制率，并留标本用于测定肺组织中病毒载量。结果采用组间比较t检验进行统计学处理，肺指数和肺指数抑制率分别如公式(I)和(II)所示，试验结果如表2所示：

表2对呼吸道合胞病毒感染ICR小鼠肺炎模型的治疗作用

注：与正常对照组比较，^##P<0.01；与模型对照组比较，*P<0.05，**P<0.01

从表2可得，采用呼吸道合胞病毒感染小鼠后，小鼠肺指数明显增高，与正常对照组比较有显著性差异(P<0.01)；感染当天开始给予本发明的实施例1～4剂量的中药复方组合物治疗4天后，肺指数有明显降低(P<0.05)。其中，本发明中实施例3的中药复方组合物为最优实施例，其肺指数抑制率接近于阳性药物利巴韦林颗粒，略低于阳性药物利巴韦林颗粒，大大高于对比例2的小儿速热清口服液组和对比例5。由于实施例3中药复方组合物为本发明最优实施例，因此，下面的试验均仅采用实施例3的中药复方组合物做试验，以证明其在制备治疗上呼吸道感染药物中的有益效果。

试验例3、本发明的中药复方组合物对H1N1流感病毒FM1株感染ICR小鼠肺炎模型的死亡保护作用

取体重(12±1)g的ICR小鼠80只(许可证号：SCXK(京)2016-0011)，雌雄各半，按体重等级随机分为4组，分别为模型对照组、实施例3剂量组，对比例1～2剂量组。每组20只。其中，对比例1为阳性药物利巴韦林颗粒，人临床用量为450mg/60kg/d，换算成小鼠等效剂量为82.5mg/kg；对比例2为小儿速热清口服液，给药量为16.5mL；实施例3的剂量为22g生药/kg。将小鼠用***轻度麻醉，以2个LD50流感病毒液(FMI株)滴鼻感染，每只30μl，感染当天开始给药，每次按0.2ml/10g体重灌胃，每天1次，连续5天，模型对照组在同等条件下蒸馏水灌胃。观察感染后2周内动物的死亡情况，计算死亡率、死亡保护率、平均存活天数和生命延长率。计算(Ⅲ)死亡率、(Ⅳ)死亡保护率和(Ⅴ)生命延长率，试验结果如表3所示：

(Ⅲ)

(Ⅳ)

(Ⅴ)

表3对H1N1流感病毒FM1株感染ICR小鼠肺炎模型的死亡保护作用

注：与模型对照组比较，**P<0.01，*P<0.05

如表3所示，采用甲型H1N1流感病毒FM1株病毒感染小鼠2周内，模型组动物死亡率为90％，平均存活天数仅为为7.65天；治疗性给予本发明实施例3的中药复方组合物，连续5天，小鼠死亡率明显降低，死亡保护率为38.89％，与模型对照组比较有显著性差异(P<0.05)，说明可以延长小鼠存活天数，与模型对照组比较有显著性差异(P<0.01)，生命延长率分别为41.83％、，远高于对比例2的小儿速热清口服液。

试验例4、本发明的中药复方组合物对H1N1流感病毒PR8株感染ICR小鼠肺炎模型的死亡保护作用

取体重(12±1)g的ICR小鼠80只(许可证号：SCXK(京)2016-0011)，雌雄各半，按体重等级随机分为4组，分别为模型对照组、实施例3剂量组，对比例1～2剂量组。每组20只。其中，对比例1为阳性药物利巴韦林颗粒，人临床用量为450mg/60kg/d，换算成小鼠等效剂量为82.5mg/kg；对比例2为小儿速热清口服液，给药量为16.5mL；实施例3的剂量为22g生药/kg。将小鼠用***轻度麻醉，以2个LD50流感病毒液(PR8株)滴鼻感染，每只30μl。感染当天开始给药，各组小鼠每次按0.2ml/10g灌胃，每天1次，连续5天，模型对照组在同等条件下蒸馏水灌胃。观察感染后2周内动物的死亡情况，计算死亡率、死亡保护率、平均存活天数和生命延长率。按照式(Ⅲ)、(Ⅳ)、(Ⅴ)计算死亡率、死亡保护率和生命延长率。

表4对H1N1流感病毒PR8株感染ICR小鼠肺炎模型的死亡保护作用

注：与模型对照组比较，**P<0.01，*P<0.05

如表4所示，采用甲型H1N1流感病毒PR8株病毒感染小鼠2周内，模型组动物死亡率为90％，平均存活天数仅为7.45天；治疗性给予本发明实施例3的中药复方组合物，连续5天，小鼠死亡率明显降低，可以延长小鼠存活天数，与模型对照组比较均有显著性差异(P<0.05)，生命延长率达到26.17％。

试验例5、本发明的中药复方组合物对病毒感染小鼠肺组织中病毒载量的影响

5.1取材方法：试验例1和试验例2中留下的用于测定肺组织中病毒载量的标本。

5.2引物设计与合成：

针对流感病毒(H1N1)基因序列的上下游引物分别是：

5'-CTTCTAACCGAGGTCGAAACGTA-3'和

5'-GGTGACAGGATTGGTCTTGTCTTTA-3'；

针对呼吸道合胞病毒基因序列的上下游引物分别是：

5'-GCTCCGTTATCACATCTC-3′和5'-GTCTTTATGATTCCACGATT-3′；

针对看家基因GAPDH(监控总RNA的使用量，以消除不同样本间加样导致的误差)基因序列的引物分别是：5'-GGTGAAGGTCGGTGTGAACG-3'和5'-CTCGCTCCTGGAAGATGGTG-3'。

5.3Real-time RT-PCR扩增：使用TRIzol试剂提取肺组织中的RNA后，采用一步法实时荧光RT-PCR方法，在同一体系内进行逆转录反应和PCR反应，反应体积为20μl，反应体系含有：样本RNA2μl，上下游引物各0.8μl，逆转录酶0.8μl，2倍缓冲液10μl，不含Rnase的水5.6μl。反应条件为：42℃逆转录5min，95℃预变性10sec，1个循环；95℃变性5sec，60℃退火34sec，共40个循环。反应结束后进行熔解曲线分析，以鉴定PCR产物的特异性。使用PikoReal Real-Time PCR System软件分析PCR过程各检测样本的Ct(Threshold ofcycle)值。

5.4结果计算方法及统计方法：本实验使用相对定量的方法，以GAPDH作为内对照，选择一个样品(Con)作为Calibrator，计算方法如下：

Con△Ct＝Con Ct－Con GAPDH Ct

样本△Ct＝样本Ct－样本GAPDH Ct

样本△△Ct＝样本△Ct－Con△Ct

2^-ΔΔCt是各处理组基因表达相对Calibrator的倍数改变。

相对含量的变化＝2^-ΔΔCt

按照式(Ⅵ)计算病毒载量抑制率。

(Ⅵ)

表5对H1N1流感病毒FM1株感染小鼠肺组织中病毒载量的影响

注：与模型对照组比较，^##P<0.01，**P<0.01

如表5所示，采用甲型H1N1流感病毒FM1株病毒感染小鼠后，肺组织中有明显的病毒基因表达；感染当天开始给予本发明实施例3的中药复方组合物，治疗4天后，可明显降低病毒表达量，与模型对照组比较均有显著性差异(P<0.05)，其抑制率为80.36％，远高于小儿速热清口服液，这证明了本发明的中药复方组合物具有良好的抗病毒效果，虽然其效果不及阳性药物利巴韦林颗粒，但也接近阳性药物利巴韦林颗粒，并且相比于西药阳性药物利巴韦林而言，本发明的中药复方组合物更安全。

表6对呼吸道合胞病毒感染小鼠肺组织中病毒载量的影响

注：与模型对照组比较，^##P<0.01，**P<0.01

如表6所示，采用呼吸道合胞病毒感染小鼠后，肺组织中有明显的病毒基因表达；感染当天开始给予本发明实施例3的中药复方组合物，治疗4天后，可明显降低病毒表达量，与模型对照组比较有显著性差异(P<0.05)，其抑制率为71.50％，具有良好的抗呼吸道合胞病毒的作用。

试验例6、本发明的中药复方组合物的解热、镇痛和抗炎实验

6.1、本发明中药复方组合物的解热作用实验

通过酵母致大鼠发热模型证明本发明中药复方组合物具有解热作用实验。实验过程如下：取SD大鼠74只，雌雄各半，体重50～60g(幼)，动物进行适应性饲养和适应性肛温测量。在安静环境下进行每日测量体温(肛温，温度计******内深度为2cm)一次，连续2日，试验当日测动物体温两次，以平均温度作为基础体温。之后，用15％的干酵母混悬液背部皮下注射(2ml/100g体重)致热，3.5小时后测体温，取体温升高0.8～2.0℃之间的动物用于试验。以体温升高值随机分组，共3组，每组12只，分别为模型对照组、实施例3剂量组，对比例3剂量组。其中，对比例3为阳性药物阿斯匹林，用量为0.18g/kg体重、实施例3剂量组的用量为8.16g生药/kg。每组12只，雌雄各半。灌胃给药，1ml/100g体重，模型对照组灌胃给予相同体积的实验动物饮用水。药后1、2、4小时各测体温一次，记录不同时间点所测体温值(℃)，并与基础体温比较，计算各时间点体温变化差值(△T，℃)，试验结果如表7和表8所示。同法重复实验一次，试验结果如表9和表10所示(1只雄性动物酵母后体温升高2.3℃纳入了实验，被随机分在了实施例3低剂量组)。

表7对酵母致大鼠发热体温的影响第一次实验(℃，

)

注：与模型对照组比较，*P<0.05，**P<0.01。

表8对酵母致大鼠发热体温的影响第一次实验(△T℃，)

注：与模型对照组比较，*P<0.05，**P<0.01。

如表7、表8所示，在酵母致大鼠发热模型上，与模型对照组比较，本发明实施例3的中药复方组合物在药后2小时体温值和体温变化差值均降低，差异具有统计学意义(P<0.05和P<0.01)，。

表9对酵母致大鼠发热体温的影响第二次实验(℃，

)

注：与模型对照组比较，*P<0.05，**P<0.01。

表10对酵母致大鼠发热体温的影响第二次实验(△T℃，)

注：与模型对照组比较，**P<0.01，*P<0.05。

如表9和表10所示，在酵母致大鼠发热模型上，与模型组比较，本发明实施例3的中药复方组合物的剂量组在药后1小时体温值降低，差异具有统计学意义(P<0.05)。

6.2、本发明中药复方组合物的镇痛作用实验

通过小鼠醋酸扭体法模型证明本发明中药复方组合物具有镇痛作用。实验过程如下：取ICR小鼠30只，雌雄各半，体重13～15g(幼)，按体重随机分组，共3组，分别为模型对照组、本发明实施例3的中药复方组合物剂量组以及对比例4剂量组。其中，对比例4组为双氯芬酸钠，用量为0.008g/kg；实施例3组合物剂量为10.88g生药/kg；每组10只，雌雄各半。灌胃给药，0.2ml/10g体重，模型对照组灌胃给予相同体积的实验动物饮用水，每天一次，连续3天。末次药后1小时腹腔注射0.8％醋酸，0.1ml/10g体重，观察并记录注射醋酸后20分钟内小鼠扭体次(腹部收缩内凹、躯干后肢伸展、身体扭曲)，进行组间比较。

表11对醋酸致小鼠扭体反应的影响(扭体次数)

注：与模型对照组比较，*P<0.05。

如表11所示，与模型对照组比较，实施例3的中药复方组合物剂量组扭体次数减少，差异具有统计学意义(P<0.05)，提示实施例3的中药复方组合物对醋酸致小鼠疼痛扭体反应具有镇痛作用。

6.3、本发明中药复方组合物的抗炎作用实验

6.3.1对醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增高的影响

取ICR小鼠30只，雌雄各半，体重13～15g(幼)，按体重随机分组，共3组，分别为模型对照组、本发明实施例3的中药复方组剂量组以及对比例4剂量组。其中，对比例4组为双氯芬酸钠，用量为0.008g/kg；实施例3组合物剂量为10.88g生药/kg；每组10只，雌雄各半。灌胃给药，0.2ml/10g体重，对照组灌胃给予相同体积的实验动物饮用水，每天一次，连续3天。于末次药后1小时尾静脉注射0.5％伊文思兰液，0.1ml/10g体重，10分钟后腹腔注射0.8％醋酸0.1ml/10体重g，再10分钟后腹腔注射5ml/只生理盐水，立即处死小鼠，轻揉腹部50次，剪开腹部皮肤，打开腹腔，用吸管吸取洗涤液，离心(3000rpm，15分钟)，应用多功能酶标仪在波长590nm下测光密度(OD值)，进行组间比较。

表12对醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增高的影响

注：与模型对照组比较，**P<0.01。

如表12所示，与模型对照组比较，实施例3的中药复方组合物剂量组腹腔洗涤液OD值降低，差异具有统计学意义(P<0.05)，提示实施例3的中药复方组合物对醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增高所示炎症反应具有抗炎作用。

本行业的技术人员应该了解，上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。