阅读说明：本技术 一种脱氢枞酸苯并咪唑-2-苯甲酰胺衍生物及其制备方法和应用 (Dehydroabietic acid benzimidazole-2-benzamide derivative and preparation method and application thereof ) 是由 谷文 李阿良 杨亚群 王文燕 刘青松 孙月 王石发 于 2019-11-04 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种脱氢枞酸苯并咪唑-2-苯甲酰胺衍生物及其制备方法和应用,属于有机合成和药物化学技术领域。该衍生物的结构通式如式(I)所示：<Image he="430" wi="700" file="DDA0002259644790000011.GIF" imgContent="drawing" imgFormat="GIF" orientation="portrait" inline="no"></Image>式中,R分别为：-H,-F,-Cl,-Br,-CH<Sub>3</Sub>,-OCH<Sub>3</Sub>,-NO<Sub>2</Sub>,-CN。本发明所涉及的一种脱氢枞酸苯并咪唑-2-苯甲酰胺衍生物,具有良好的抗肿瘤生物活性,药理学实验表明,这类化合物对乳腺癌细胞MCF-7有明显的抑制效果。(The invention discloses a dehydroabietic acid benzimidazole-2-benzamide derivative, and a preparation method and application thereof, and belongs to the technical field of organic synthesis and pharmaceutical chemistry. The structural general formula of the derivative is shown as the formula (I): wherein R is respectively: -H, -F, -Cl, -Br, -CH 3 ，‑OCH 3 ，‑NO 2 -CN. The dehydroabietic acid benzimidazole-2-benzamide derivative has good anti-tumor biological activity, and pharmacological experiments show that the compound can treat breast cancerThe MCF-7 cell has obvious inhibiting effect.)

一种脱氢枞酸苯并咪唑-2-苯甲酰胺衍生物及其制备方法和 应用

技术领域

本发明属于有机合成和药物化学技术领域，具体涉及一种脱氢枞酸苯并咪唑-2-苯甲酰胺衍生物及其制备方法和应用。

背景技术

肿瘤是一种严重危害着人类健康的疾病，越来越受到全世界的关注，成为医学界的一大难题，到目前为止还得不到根本的治疗。化疗是肿瘤疾病治疗的主要手段之一，抗癌药物是现在药物研发的一大重点和热点。这些药物通常作用于癌细胞的某个靶点，阻止细胞的***增殖，但同时这些制剂也会杀伤正常的增殖较快的细胞，引起感染、出血等症状。因此，开发出选择性好、安全性好、疗效高的肿瘤抑制药物是现代肿瘤疾病研究的重要方向。

脱氢枞酸是一种具有三环二萜类结构的树脂酸，是丰富的天然林业资源歧化松香的主要成分，通过脱氢枞酸结构的改性，可以引入含氮基团，比如吲哚，苯并咪唑等。脱氢枞酸氮杂环衍生物在抑菌，抗炎，抗肿瘤等生物活性方面有良好的效果，在农业、医药领域具有巨大的发展前景，受到了越来越多的关注。

苯并咪唑是一类含有两个氮原子的苯并杂环化合物，很多药物的结构都包含苯并咪唑杂环。许多文献表明，苯并咪唑类化合物具有显著的生物活性，包括抗肿瘤、抗癌症、抗病毒、抗炎症等等。因此，在脱氢枞酸分子中引入苯并咪唑单元结构，寻找具有优良抗肿瘤活性的药物先导物，对于研发新型抗肿瘤药物，深度利用我国松香资源具有很好的理论和实际意义。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种脱氢枞酸苯并咪唑-2-苯甲酰胺衍生物，具有良好的抗肿瘤生物活性。本发明要解决的另一个技术问题是提供一种脱氢枞酸苯并咪唑-2-苯甲酰胺衍生物的制备方法，利用松香资源制备抗癌症药物脱氢枞酸苯并咪唑-2-苯甲酰胺衍生物。本发明要解决的技术问题还有一个是提供一种脱氢枞酸苯并咪唑-2-苯甲酰胺衍生物在制备抗癌症药物中的应用，该衍生物在抗乳腺癌细胞中具有非常好的生物活性。

为了解决上述问题，本发明所采用的技术方案如下：

一种脱氢枞酸苯并咪唑-2-苯甲酰胺衍生物，其结构通式如式(I)所示：

式中，R分别为：-H，-F，-Cl，-Br，-CH₃，-OCH₃，-NO₂，-CN。

上述脱氢枞酸苯并咪唑-2-苯甲酰胺衍生物的制备方法，将脱氢枞酸2-氨基苯并咪唑衍生物IV与带有不同取代基的苯甲酰氯发生缩合反应，反应结束后经过后处理得到相对应取代基的脱氢枞酸-2-苯甲酰胺衍生物I；所述带有不同取代基的苯甲酰氯为苯甲酰氯、4-溴苯甲酰氯、4-氟苯甲酰氯、对氯苯甲醛、对甲基苯甲酰氯、对甲氧基苯甲酰氯、对硝基苯甲酰氯或对氰基苯甲酰氯中的任意一种；缩合反应温度为90～110℃，反应时间为7～9h；所述脱氢枞酸2-氨基苯并咪唑衍生物与带有不同取代基的苯甲酰氯的摩尔比为1∶2.5～1∶3。

所述脱氢枞酸苯并咪唑-2-苯甲酰胺衍生物的制备方法，所述带有不同取代基的苯甲酰氯为苯甲酰氯、4-溴苯甲酰氯、对硝基苯甲酰氯或对氰基苯甲酰氯中的任意一种。

所述脱氢枞酸苯并咪唑-2-苯甲酰胺衍生物的制备方法，所述脱氢枞酸2-氨基苯并咪唑衍生物与带有不同取代基的苯甲酰氯的摩尔比为1∶3。

所述脱氢枞酸苯并咪唑-2-苯甲酰胺衍生物的制备方法，缩合反应温度为100℃，反应时间为8h。

所述脱氢枞酸苯并咪唑-2-苯甲酰胺衍生物的制备方法，所述后处理包括：反应结束后加蒸馏水，用乙酸乙酯萃取2～3次，蒸馏水水洗2～3次，饱和碳酸氢钠洗1次，饱和食盐水洗1次，最后用无水硫酸钠干燥，过滤后的溶液再经过减压浓缩蒸馏，硅胶层析柱石油醚：丙酮＝100∶1～20∶1，制得粉末状固体的脱氢枞酸-2-苯甲酰胺衍生物I。

所述脱氢枞酸苯并咪唑-2-苯甲酰胺衍生物的制备方法，脱氢枞酸2-氨基苯并咪唑衍生物IV的制备方法包括以下步骤：

(1)脱氢枞酸经过甲酯化、溴代和双硝化反应，制得12-溴-13，14-二硝基脱异丙基脱氢甲酯II：

(2)12-溴-13，14-二硝基脱异丙基脱氢甲酯II经过Fe/HCl还原，制得12-溴-13，14-二氨基脱异丙基脱氢枞酸甲酯III：

(3)将12-溴-13，14-二氨基脱异丙基脱氢枞酸甲酯III与BrCN反应制得脱氢枞酸2-氨基苯并咪唑衍生物IV：

所述脱氢枞酸苯并咪唑-2-苯甲酰胺衍生物的制备方法，包括以下步骤：

(1)脱氢枞酸经过甲酯化、溴代和双硝化反应，制得12-溴-13，14-二硝基脱异丙基脱氢甲酯II：

(2)12-溴-13，14-二硝基脱异丙基脱氢甲酯II经过Fe/HCl还原，制得12-溴-13，14-二氨基脱异丙基脱氢枞酸甲酯III：

(3)将12-溴-13，14-二氨基脱异丙基脱氢枞酸甲酯III与BrCN反应制得脱氢枞酸2-氨基苯并咪唑衍生物IV：

(4)将脱氢枞酸2-氨基苯并咪唑衍生物IV与带有不同取代基的苯甲酰氯反应，反应结束后加蒸馏水，用乙酸乙酯萃取2～3次，蒸馏水水洗2～3次，饱和碳酸氢钠洗1次，饱和食盐水洗1次，最后用无水硫酸钠干燥，过滤后的溶液再经过减压浓缩蒸馏，硅胶层析柱石油醚：丙酮＝100∶1～20∶1，制得粉末状固体的脱氢枞酸-2-苯甲酰胺衍生物I：

式中，R分别为：-H，-F，-Cl，-Br，-CH₃，-OCH₃，-NO₂，-CN；所述带有不同取代基的苯甲酰氯为苯甲酰氯、4-溴苯甲酰氯、对硝基苯甲酰氯或对氰基苯甲酰氯中的任意一种；所述脱氢枞酸2-氨基苯并咪唑衍生物与带有不同取代基的苯甲酰氯的摩尔比为1∶3；反应温度为100℃，反应时间为8h。

上述脱氢枞酸-2-芳酰胺基苯并咪唑衍生物在制备抗癌症药物中的应用。

所述脱氢枞酸-2-芳酰胺基苯并咪唑衍生物在制备抗癌症药物中的应用，所述癌症为乳腺癌。

有益效果：与现有的技术相比，本发明的优点包括：

本发明中的含氮杂环化合物是一种脱氢枞酸苯并咪唑-2-苯甲酰胺衍生物，具有良好的抗肿瘤生物活性，药理学实验表明，这类化合物对乳腺癌细胞株MCF-7有明显的抑制效果，具有良好的开发前景。

具体实施方式

为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合具体实施例对本发明的具体实施方式做详细的说明。

实施例1

脱氢枞酸苯并咪唑-2-苯甲酰胺衍生物I-a的制备方法，包括以下步骤：

(1)脱氢枞酸经过甲酯化、溴代和双硝化反应，制得12-溴-13，14-二硝基脱异丙基脱氢甲酯II：

(2)12-溴-13，14-二硝基脱异丙基脱氢甲酯II经过Fe/HCl还原，制得12-溴-13，14-二氨基脱异丙基脱氢枞酸甲酯III：

(3)将12-溴-13，14-二氨基脱异丙基脱氢枞酸甲酯III与BrCN反应制得脱氢枞酸2-氨基苯并咪唑衍生物IV；

(4)在圆底烧瓶中，将0.2mmol的脱氢枞酸2-氨基苯并咪唑衍生物IV溶解在2mL的吡啶中，接着向混合液中加入苯甲酰氯0.5mmol，在100℃条件下，搅拌8h，反应结束后，向反应液中加入蒸馏水、用乙酸乙酯萃取2～3次后，依次用蒸馏水，饱和氯化钠溶液洗涤有机相，最后无水硫酸钠干燥，通过减压蒸馏，浓缩有机相，硅胶柱层析分离纯化，选用石油醚/丙酮体系，所述石油醚/丙酮的体积比为100∶1～20∶1，进行梯度洗脱，制得黄色粉末状固体0.051g，制得纯化合物I-a，得率50.10％。

Yellow powder solid；mp 113.1-117.5℃；Yield：50.1％；¹H-NMR(600MHz，CDCl₃)：δ1.21(s，3H)，1.27(s，3H)，1.45-1.80(m，7H)，2.16(d，J＝11.8Hz，1H)，2.25(d，J＝12.5Hz，1H)，2.70(m，2H)，3.66(s，3H)，7.22(s，1H)，7.28(t，J＝7.8Hz，2H)，7.43(t，J＝7.6Hz，1H)，7.75(d，J＝7.3Hz，2H)，11.20(brs，2H)；¹³C NMR(150MHz，CDCl₃)：δ16.5，18.6，20.8，24.9，25.3，36.7，37.5，38.4，45.1，47.8，52.2，100.6，122.6，128.5，128.8，129.5，130.3，133.3，133.4，133.6，144.3，149.7，171.7，179.2；ESI-MS(ESI)：m/z[M+H]⁺：calcd.for C₂₆H₂₉BrN₃O₃：510.1392；found：510.1398.

实施例2

实施例2与实施例1的区别在于：

脱氢枞酸苯并咪唑-2-苯甲酰胺衍生物I-b的合成

在步骤(4)中，在圆底烧瓶中，将0.2mmol的脱氢枞酸2-氨基苯并咪唑衍生物IV溶解在2mL的吡啶中，接着向混合液中加入对氟苯甲酰氯0.6mmol，在100℃条件下，搅拌8h，反应结束后，向反应液中加入蒸馏水、用乙酸乙酯萃取2～3次后，依次用蒸馏水，饱和氯化钠溶液洗涤有机相，最后无水硫酸钠干燥，通过减压蒸馏，浓缩有机相，硅胶柱层析分离纯化，选用石油醚/丙酮体系，所述石油醚/丙酮的体积比为100∶1～20∶1，进行梯度洗脱，制得白色粉末状固体0.063g，制得纯化合物I-b，得率57.9％。

White powder solid；mp 198.8-204.6℃；Yield：57.9％；¹HNMR(600MHz，CDCl₃)：δ1.21(s，3H)，1.27(s，3H)，1.40～1.80(m，7H)，2.20(m，1H)，2.30(d，J＝12.3Hz，1H)，2.70～3.00(m，2H)，3.67(s，3H)，6.92(t，J＝8.3Hz，2H)，7.25(s，1H)，7.86(dd，J＝8.5，5.3Hz，2H)，11.38(brs，2H)；¹³CNMR(150MHz，CDCl₃)：δ16.6，18.6，20.8，25.1，25.4，36.6，37.5，38.4，45.0，47.7，52.1，100.6，115.9(d，J＝21.9Hz)，122.2，125.8，128.9，129.3，130.8(d，J＝9.1Hz)，130.9(d，J＝3.8Hz)，145.7，148.5，164.7，167.1(d，J＝205.3Hz)，178.9；ESI-MS：m/z[M+H]⁺calcd for C₂₆H₂₈BrFN₃O₃：528.1298；found：528.1293.

实施例3

实施例3与实施例1的区别在于：

脱氢枞酸苯并咪唑-2-苯甲酰胺衍生物I-c的合成

在步骤(4)中，在圆底烧瓶中，将0.2mmol的脱氢枞酸2-氨基苯并咪唑衍生物IV溶解在2mL的吡啶中，接着向混合液中加入对氯苯甲酰氯0.6mmol，在100℃条件下，搅拌8h，反应结束后，向反应液中加入蒸馏水、用乙酸乙酯萃取2～3次后，依次用蒸馏水，饱和氯化钠溶液洗涤有机相，最后无水硫酸钠干燥，通过减压蒸馏，浓缩有机相，硅胶柱层析分离纯化，选用石油醚/丙酮体系，所述石油醚/丙酮的体积比为100∶1～20∶1，进行梯度洗脱，制得白色粉末状固体0.058g，制得纯化合物I-c，得率53.7％。

White powder solid；mp 198.8～204.6℃；Yield：53.7％；¹HNMR(600MHz，CDCl₃)：δ1.23(s，3H)，1.28(s，3H)，1.40～1.80(m，7H)，2.20(d，J＝11.0Hz，1H)，2.31(d，J＝12.2Hz，1H)，2.82(m，2H)，3.68(s，3H)，7.21(d，J＝8.1Hz，2H)，7.27(s，1H)，7.76(d，J＝8.1Hz，2H)，10.97(brs，2H)；¹³CNMR(150MHz，CDCl₃)：δ16.6，18.6，20.8，25.1，25.4，36.6，37.6，38.4，45.0，47.7，52.1，100.5，122.2，125.7，128.8，128.9，129.6，129.8，131.5，139.2，145.8，148.5，167.9，178.9；ESI-MS：m/z[M+H]⁺calcd for C₂₆H₂₈BrClN₃O₃：544.1003；found：544.1009.

实施例4

实施例4与实施例1的区别在于：

脱氢枞酸苯并咪唑-2-苯甲酰胺衍生物I-d的合成

在步骤(4)中，在圆底烧瓶中，将0.2mmol的脱氢枞酸2-氨基苯并咪唑衍生物IV溶解在2mL的吡啶中，接着向混合液中加入对溴苯甲酰氯0.6mmol，在100℃条件下，搅拌8h，反应结束后，向反应液中加入蒸馏水、用乙酸乙酯萃取2～3次后，依次用蒸馏水，饱和氯化钠溶液洗涤有机相，最后无水硫酸钠干燥，通过减压蒸馏，浓缩有机相，硅胶柱层析分离纯化，选用石油醚/丙酮体系，所述石油醚/丙酮的体积比为50∶1～20∶1，进行梯度洗脱，制得白色粉末状固体0.078g，制得纯化合物I-d，得率66.1％。

White powder solid；mp 107.8～110.8℃；Yield：66.1％；¹H NMR(600MHz，CDCl₃)：δ1.25(s，3H)，1.29(s，3H)，1.40～1.85(m，7H)，2.23(d，J＝12.0Hz，1H)，2.32(d，J＝11.9Hz，1H)，2.70-2.87(m，2H)，3.68(s，3H)，7.29(s，1H)，7.45(d，J＝8.5Hz，2H)，7.71(d，J＝8.5Hz，2H)，10.98(brs，2H)；¹³C NMR(150MHz，CDCl₃)：δ16.6，18.7，20.9，25.2，25.5，36.7，37.7，38.5，45.1，47.8，52.2，100.1，122.4，125.1，128.0，128.6，129.6，131.2，131.9，132.2，146.0，148.1，167.7，179.0；ESI-MS：m/z[M+H]⁺calcd for C₂₆H₂₈Br₂N₃O₃：588.0497；found：588.0493.

实施例5

实施例5与实施例1的区别在于：

脱氢枞酸苯并咪唑-2-苯甲酰胺衍生物I-e的合成

在步骤(4)中，在圆底烧瓶中，将0.2mmol的脱氢枞酸2-氨基苯并咪唑衍生物IV溶解在2mL的吡啶中，接着向混合液中加入对甲基苯甲酰氯0.6mmol，在100℃条件下，搅拌8h，反应结束后，向反应液中加入蒸馏水、用乙酸乙酯萃取2～3次后，依次用蒸馏水，饱和氯化钠溶液洗涤有机相，最后无水硫酸钠干燥，通过减压蒸馏，浓缩有机相，硅胶柱层析分离纯化，选用石油醚/丙酮体系，所述石油醚/丙酮的体积比为50∶1～20∶1，进行梯度洗脱，制得白色粉末状固体0.058g，制得纯化合物I-e，得率53.7％。

Yellow powder solid；mp 139～145℃；Yield：53.7％；¹H NMR(600MHz，CDCl₃)：δ1.25(s，3H)，1.29(s，3H)，1.52～1.78(m，7H)，2.31(d，J＝10.8Hz，1H)，2.36(s，3H)，2.38(d，J＝12.2Hz，1H)，2.80～3.00(m，2H)，3.67(s，3H)，7.12(d，J＝7.8Hz，2H)，7.26(s，1H)，7.76(d，J＝7.9Hz，2H)，11.35(brs，2H)；¹³C NMR(150MHz，CDCl₃)：δ16.6，18.6，20.8，21.7，25.1，25.4，36.6，37.6，38.4，45.0，47.8，52.1，100.5，122.2，128.3，125.8，128.9，129.2，130.8，131.9，140.3，145.7，148.5，164.7，178.9；ESI-MS：m/z[M+H]⁺calcd forC₂₇H₃₁BrN₃O₃：524.1549；found：524.1553.

实施例6

实施例6与实施例1的区别在于：

脱氢枞酸苯并咪唑-2-苯甲酰胺衍生物I-f的合成

在步骤(4)中，在圆底烧瓶中，将0.2mmol的脱氢枞酸2-氨基苯并咪唑衍生物IV溶解在2mL的吡啶中，接着向混合液中加入对甲氧基苯甲酰氯0.6mmol，在100℃条件下，搅拌8h，反应结束后，向反应液中加入蒸馏水、用乙酸乙酯萃取2～3次后，依次用蒸馏水，饱和氯化钠溶液洗涤有机相，最后无水硫酸钠干燥，通过减压蒸馏，浓缩有机相，硅胶柱层析分离纯化，选用石油醚/丙酮体系，所述石油醚/丙酮的体积比为50∶1～20∶1，进行梯度洗脱，制得淡黄色粉末状固体0.052g，制得纯化合物I-e，得率48.6％。

Popcorn powder solid；mp 127.4～130.7℃；Yield：48.6％；¹HNMR(600MHz，CDCl₃)：δ1.17(s，3H)，1.25(s，3H)，1.40～1.85(m，7H)，2.17(d，J＝14.2Hz，1H)，2.24(d，J＝12.8Hz，1H)，2.79(m，1H)，2.98(dd，J＝17.5，6.6Hz，1H)，3.66(s，3H)，3.80(s，3H)，6.81(d，J＝8.9Hz，2H)，7.19(s，1H)，7.79(d，J＝8.9Hz，2H)，10.03(brs，1H)，10.65(brs，1H)；¹³CNMR(150MHz，CDCl₃)：δ16.5，18.5，20.5，24.5，25.4，36.6，37.6，38.3，44.6，47.6，52.3，55.6，100.4，114.0，118.7，122.2，125.5，127.9，128.0，135.2，147.1，150.7，162.3，165.2，178.9；ESI-MS：m/z[M+H]⁺calcd for C₂₇H₃₁BrN₃O₄：540.1498；found：540.1492.

实施例7

实施例7与实施例1的区别在于：

脱氢枞酸苯并咪唑-2-苯甲酰胺衍生物I-g的合成

在步骤(4)中，在圆底烧瓶中，将0.2mmol的脱氢枞酸2-氨基苯并咪唑衍生物IV溶解在2mL的吡啶中，接着向混合液中加入对硝基苯甲酰氯0.6mmol，在100℃条件下，搅拌8h，反应结束后，向反应液中加入蒸馏水、用乙酸乙酯萃取2～3次后，依次用蒸馏水，饱和氯化钠溶液洗涤有机相，最后无水硫酸钠干燥，通过减压蒸馏，浓缩有机相，硅胶柱层析分离纯化，选用石油醚/丙酮体系，所述石油醚/丙酮的体积比为50∶1～20∶1，进行梯度洗脱，制得黄色粉末状固体0.072g，制得纯化合物I-g，得率64.9％。

Yellow powder solid；mp 75.8～76.8℃；Yield：64.9％；¹H NMR(600MHz，CDCl₃)：δ1.23(s，3H)，1.29(s，3H)，1.45～1.90(m，7H)，2.20(d，J＝12.1Hz，1H)，2.29(d，J＝12.7Hz，1H)，2.77(brs，1H)，2.91(dd，J＝16.7，6.0Hz，1H)，3.69(s，3H)，7.27(s，1H)，8.03(d，J＝8.7Hz，2H)，8.09(d，J＝8.7Hz，2H)，10.15(brs，2H)；¹³C NMR(150MHz，CDCl₃)：δ16.6，18.6，20.8，25.1，25.4，36.7，37.6，38.3，44.9，47.6，52.2，100.7，122.9，123.8，125.3，128.5，129.3，129.5，139.6，146.7，149.5，150.2，168.6，178.9；ESI-MS：m/z[M+H]⁺calcdfor C₂₆H₂₈BrN₄O₅：555.1243；found：555.1248.

实施例8

实施例8与实施例1的区别在于：

脱氢枞酸苯并咪唑-2-苯甲酰胺衍生物I-h的合成

在步骤(3)中，在圆底烧瓶中，将0.2mmol的脱氢枞酸2-氨基苯并咪唑衍生物IV溶解在2mL的吡啶中，接着向混合液中加入对氰基苯甲酰氯0.6mmol，在100℃条件下，搅拌8h，反应结束后，向反应液中加入蒸馏水、用乙酸乙酯萃取2～3次后，依次用蒸馏水，饱和氯化钠溶液洗涤有机相，最后无水硫酸钠干燥，通过减压蒸馏，浓缩有机相，硅胶柱层析分离纯化，选用石油醚/丙酮体系，所述石油醚/丙酮的体积比为50∶1～20∶1，进行梯度洗脱，制得淡黄色粉末状固体0.075g，制得纯化合物I-h，得率70.1％。

White powder solid；mp 77.4～75.8℃；Yield：70.1％；¹H NMR(600MHz，CDCl₃)：δ1.24(s，3H)，1.28(s，3H)，1.45-1.85(m，7H)，2.21(d，J＝12.2Hz，1H)，2.31(d，J＝12.1Hz，1H)，2.77(m，1H)，2.88(dd，J＝16.1，5.2Hz，1H)，3.69(s，3H)，7.28(s，1H)，7.54(d，J＝8.0Hz，2H)，7.93(d，J＝7.9Hz，2H)，10.80(brs，2H)；¹³CNMR(150MHz，CDCl₃)：δ16.6，18.6，20.8，25.1，25.5，36.7，37.6，38.4，45.0，47.7，52.2，100.4，116.0，118.0，119.0，122.8，128.9，129.0，132.2，132.4，137.8，146.5，149.2，168.5，178.9；ESI-MS：m/z[M+H]⁺calcdfor C₂₇H₂₈BrN₄O₃：535.1345；found：535.1352.

实施例9

体外抗肿瘤活性筛选

筛选细胞株为：乳腺癌细胞MCF-7，***细胞Hela。

实验方法：

取对数生长状态良好的细胞，将细胞瓶中旧的培养基倒掉，用5mL的PBS缓冲溶液润洗一下细胞瓶瓶壁，用1mL的胰蛋白酶消化1～2min，消化后的细胞转移到15mL的离心管中离心沉淀(1000rpm，5min)，然后加3mL含血清的培养基DMEM重悬，取10μL细胞悬浮液于血小球计数板中在显微镜下计数并计算，取一定量的细胞稀释成5×10⁴细胞/mL的细胞悬浮液。用移液枪将细胞吹散均匀后，移到96孔板中，每个孔100μL，注意96孔板的四周加PBS缓冲溶液100μL，置37℃、5％CO₂的恒温恒湿培养箱中培养24h。

将脱氢枞酸苯并咪唑-2-苯甲酰胺衍生物(Ia-Il)及阳性对照依托泊苷(vp-16)，用DMSO配置成50mM的母液，每个化合物用无血清的DMEM培养基稀释成5个梯度的浓度50μM、25μM、12.5μM、6.25μM、3.125μM，配成每个浓度的化合物350μL，用移液枪移掉96孔板中的旧的培养基，小心碰到贴壁的细胞，将所有的不同浓度的化合物移入到96孔板中，每个孔100μL，每个样做3个平行重复试验，96孔板中间一列每个孔只加无血清的培养基100μL作为阴性对照，一块96孔板刚好测试4个化合物。加药后的置培养箱作用72h后，每个孔加MTT溶液(5mg/mL)10μL，孵育3～4h，移掉含药的培养基，加100μL DMSO溶液，震荡5min充分溶解后，用酶标仪540nm处测各孔的吸光度(OD值)，计算细胞的增值抑制率：抑制率(％)＝(1-加药组的吸光度OD1/阴性对照组的吸光度OD₂)×100％，用SPSS16.0软件进行数据处理并计算癌细胞增殖的半数抑制浓度(IC₅₀)，化合物I-a-I-h的抗肿瘤活性结果如表1所示。

表1实施例1-8制备得到的产物抗癌活性测试结果

如表1所示，合成的脱氢枞酸苯并咪唑-2-苯甲酰胺衍生物对乳腺癌细胞MCF-7和***细胞Hela抑制效果存在差异，对于MCF-7细胞，化合物I-a、I-g和I-h表现出较强的抑制活性，其中化合物I-a的IC₅₀值达到5.39±0.79μM，接近阳性对照依托泊苷；化合物I-d也对MCF-7细胞表现出一定的抑制活性，而化合物I-b、I-c、I-e和I-f未表现出抑制作用(IC₅₀＞50μM)。而对于***细胞Hela，所有目标化合物均未表现出抑制作用。结果表明，这些化合物中，部分目标化合物对乳腺癌细胞MCF-7表现出显著的的抗肿瘤活性，具有开发抗肿瘤药物的潜在价值。

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